JP2021168668A - 微生物増殖培地およびそれを使用する方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】膜上での微生物の増殖を支援することが可能な汎用の微生物増殖培地のための組成物、および細胞集団を培養する方法を提供する。【解決手段】カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、及びＬ−シスチンを含有する組成物と、細胞集団を接触させることを含む、細胞集団を培養する方法である。【選択図】なし
Description
全体として、本発明は、微生物増殖培地およびその使用方法に関する。
多くの産業、特に、食品、飲料、医療、電子および製薬の産業では、細菌、酵母、またはカビなどの微生物による汚染の程度についてサンプルを迅速に分析することが不可欠である。具体的には、製薬会社および生物製剤会社は、微生物学的汚染物質の存在について無菌製品を検査することが求められる。米国薬局方モノグラフ＜７１＞に記載されている伝統的な検査は、２２．５℃でトリプチカーゼダイズブロス(trypticase soy broth)（ＴＳＢ）を用い、３２．５℃で液体チオグリコール酸培地(fluid thioglycollate medium)（ＦＴＭ）を用いる増殖に基づくアッセイである。ＴＳＢは、酵母、カビ、および好気性細菌を検出するために使用される汎用増殖培地である。ＦＴＭは好気層および嫌気層を有し、偏性嫌気性生物、ならびに好気性細菌を検出するために使用される。増殖条件のこの組合せの目的は、できる限り多くの生物を増殖させることである。ＦＴＭは、嫌気性生物を増殖させる能力を有するが、多くの種に対して増殖促進性が低い汎用性に乏しい培地である。加えて、ＦＴＭは、表面上の微生物の、特に、嫌気性生物の増殖を支援する能力が限られている。
他の既知増殖培地、例えば、シェドラー培地(Schaedler media)などは、特定の微生物の増殖を支援するために特化されている。例えば、シェドラー培地は、ヒト病原体の増殖を支援するように最適化されているが、無菌製品の検査には、できる限り多くの微生物の増殖を支援することが可能な包括的な培地が必要である。
好気性および嫌気性細菌の、特に、膜上での増殖を支援することが可能な包括的な増殖培地がなお必要とされている。
本発明は、嫌気性生物、カビ、損傷胞子、および一般的な好気性細菌の増殖を他の培地よりも大きく支援することができる多目的の微生物増殖培地を特徴とする。本発明は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー（例えば、リン酸カリウムバッファー）、ヘミン、およびＬ−シスチンを含有する組成物を特徴とする。
第１の態様において、前記組成物は、２２℃において、固体、例えば、粉末である。第１の態様の組成物の実施形態を表１に要約する。量は、組成物全体のキログラム数に対する個々の成分のグラム数で示し、当業者は、個々の成分のそれぞれの総量が１ｋｇを超えないことを理解するであろう。
第１の態様のいくつかの実施形態では、前記組成物はゲル化剤をさらに含有する。前記組成物がゲル化剤を含有する場合、その組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間、好ましくは、約１００ｇ／ｋｇ〜約６００ｇ／ｋｇの間、より好ましくは、約２５０ｇ／ｋｇ〜約４５０ｇ／ｋｇの間のゲル化剤（例えば、寒天）（例えば、約３５０ｇ／ｋｇのゲル化剤）を含有する。いくつかの実施形態では、前記ゲル化剤は寒天である。他の実施形態では、前記ゲル化剤はジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ポリアクリルアミド、またはエラジウム(Eladium)（登録商標）である。
第１の態様のある特定の実施形態では、前記組成物は界面活性剤をさらに含有する。第１の態様の組成物は、表１に示した組成物の、約０ｇ／ｋｇ〜約１９０ｇ／ｋｇの間、例えば、約１ｇ／ｋｇ〜約６０ｇ／ｋｇの間、約４ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間、または約２０ｇ／ｋｇの界面活性剤を含有することができる。その界面活性剤は、好ましくは、ポリソルベート（例えば、ツイーン(Tween)（登録商標）２０としても知られている、ポリソルベート２０）である。
第２の態様において、前記組成物は２２℃において液体であり、第３の態様では、前記組成物は２２℃においてゲルである。その液体またはゲルは、その液体またはゲルを形成するのに十分な水または他の水溶液または懸濁液を含むことになる。いくつかの実施形態では、その液体またはゲル組成物は、７．３±０．５のｐＨ（例えば、７．３±０．２のｐＨ）を有する。
第２または第３の態様の組成物の例を表２に示す。量は、組成物全体（存在する場合、溶媒およびゲル化剤を含む）のキログラム数に対する個々の成分のグラム数で示し、当業者は、全成分の総量が１ｋｇを超えないことを理解するであろう。
第２または第３の態様の他の実施形態では、表２に記載の組成物は、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファーをさらに含有する。さらに他の実施形態では、第２または第３の態様の組成物中に存在するリン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファーの量は、０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）、例えば、１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜５０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）、２ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜２０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）、または３ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分な量である。
第２または第３の態様の特定の実施形態では、前記組成物は、ヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液）をさらに含有する。前記組成物中のヒツジ血液の濃度は、約２００ｍＬ／ｋｇ未満、好ましくは、約１００ｍＬ／ｋｇ未満（例えば、約５０ｍＬ／ｋｇ）であり得る。特定の実施形態では、前記ヒツジ血液中の赤血球は溶解している（例えば、赤血球を溶解するために処理された溶血ヒツジ血液または脱線維素ヒツジ血液）。
第２または第３の態様の特定の実施形態では、前記組成物は、界面活性剤をさらに含有する。第２または第３の態様の組成物は、表２に示した組成物の、０ｇ／ｋｇ〜１９ｇ／ｋｇの間、例えば、約０．０５ｇ／ｋｇ〜約６ｇ／ｋｇの間、約０．１ｇ／ｋｇ〜約４ｇ／ｋｇの間、または約０．５ｇ／ｋｇの界面活性剤を含有することができる。その界面活性剤は、好ましくは、ポリソルベート（例えば、ツイーン（登録商標）２０としても知られている、ポリソルベート２０）である。
第２の態様のある特定の実施形態および第３の態様では、前記組成物はゲル化剤を含有する。液体は、ゲル化するのに不十分な量でゲル化剤を含み得ることは理解されるであろう。ゲル化剤の例としては、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ポリアクリルアミド、およびエラジウム（商標）が挙げられる。前記組成物中の寒天またはエラジウム（商標）の濃度は、例えば、約５ｇ／ｋｇ〜約２５ｇ／ｋｇの間（例えば、約１３．５ｇ／ｋｇ）であり；前記組成物中のジェランの濃度は、例えば、約１．０ｇ／ｋｇ〜約１３ｇ／ｋｇの間（例えば、約６．８ｇ／ｋｇであり；前記組成物中のキサンタンガムまたはアルギン酸ナトリウムの濃度は、例えば、約３．４ｇ／ｋｇ〜約１７ｇ／ｋｇの間（例えば、約９ｇ／ｋｇ）であり；前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は、例えば、約５０ｇ／ｋｇ〜約２００ｇ／ｋｇの間（例えば、約１５０ｇ／ｋｇ）であり；前記組成物中のグアーガムの濃度は、例えば、約１０ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間（例えば、約２１ｇ／ｋｇ）である。
第１〜第３の態様のある特定の実施形態では、前記培養培地は、例えば、感受性もしくは耐性試験のためまたは耐性細胞の選択のために、抗生物質をさらに含み得る。第１〜第３の態様の他の実施形態では、前記増殖培地は消毒剤の中和剤をさらに含む。中和すべき消毒剤の例としては、アルコール、次亜塩素酸塩、過酸化水素、酢酸、ペルオキシ酢酸、第四級アンモニウム化合物、フェノール類、ヨウ素、塩素製剤、水銀剤、ホルムアルデヒド、およびグルタルアルデヒドが挙げられる。中和剤の例としては、ヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンが挙げられる。他の中和剤としては、重亜硫酸塩、グリシン、二価陽イオン（例えば、Ｍｇ２＋またはＣａ２＋）、およびチオグリコール酸塩が挙げられる。
第４の態様では、本発明は、該細胞集団の増殖を支援する条件下で本発明の第２または第３の態様による組成物と該細胞集団を接触させることにより細胞集団を培養する方法を特徴とする。
第４の態様のいくつかの実施形態では、前記細胞集団は、透過性の膜の一方の側に配置され、その透過性の膜のもう一方の側は、本発明の第２または第３の態様による組成物と接触している。透過性の膜は、多孔性であり、そうでなければ、一方の側からもう一方の側への増殖培地の輸送を可能にすることができる。
第４の態様のある特定の実施形態では、前記細胞集団は好気性生物を含む。他の実施形態では、前記細胞集団は嫌気性生物（例えば、偏性嫌気性生物）を含む。第４の態様の特定の実施形態では、前記細胞集団は、アシネトバクター属(Acinetobacter)（例えば、アシネトバクター・ルオフィイ(Acinetobacter lwofii)）、アスペルギルス属(Aspergillus)（例えば、アスペルギルス・ブラジリエンシス(Aspergillus brasiliensis)またはアスペルギルス・フミガーテス(Aspergillus fumigates)）、バチルス属(Bacillus)（例えば、バチルス・クラウシイ(Bacillus clausii)、バチルス・イドリエンシス(Bacillus idriensis)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、またはバチルス・スブスチリス(Bacillus substilis)）、コリネバクテリウム属(Corynebacterium)（例えば、コリネバクテリウム・ツバークロステアリクム(Corynebacterium tuberculostearicum)またはゼローシス菌(Corynebacterium xerosis)）、デルマコッカス属(Dermacoccus)（例えば、デルマコッカス・ニシノミヤエンシス(Dermacoccus nishinomiyaensis)）、エシェリキア属(Escherichia)（例えば、大腸菌(Escherichia coli)）、エクセロヒルム属(Exserohilum)（例えば、エクセロヒルム・ロストラタム(Exserohilum rostratum)）、コクリア属(Kocuria)（例えば、コクリア・リゾフィラ(Kocuria rhizophila)）、メチロバクテリウム属(methylobacterium)（例えば、メチロバクテリウム・ラジオトレランス(methylobacterium radiotolerans)）、ミクロコッカス属(Micrococcus)（例えば、ミクロコッカス・ルテウス(Micrococcus luteus)）、パエニバチルス属(Paenibacillus)（例えば、パエニバチルス・グルカノリティカス(Paenibacillus glucanolyticus)）、ペニシリウム属(Penicillium)（例えば、ペニシリウム・クリソゲナム(Penicillium chrysogenum)またはペニシリウム・ノタタム(Penicillium notatum)）、プロピオニバクテリウム属(Propionibacterium)（例えば、プロピオニバクテリウム・アクネス(Propionibacterium acnes)）、シュードモナス属(Pseudomonas)（例えば、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)）、スタフィロコッカス属(Staphylococcus)（例えば、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)、またはスタフィロコッカス・ホミニス(Staphylococcus hominis)）、ストレプトコッカス属(Streptococcus)（例えば、化膿レンサ球菌(Streptococcus pyogenes)）、およびストレプトマイセス属(Streptomyces)（例えば、ストレプトマイセス・ハルステディイ(Streptomyces halstedii)）からなる群から選択される属に属する細胞を含む。いくつかの実施形態では、前記バチルス属は酸化ストレスを受けている。
第４の態様のいくつかの実施形態では、前記細胞集団はサンプル中に存在する。前記サンプルは、多細胞生物から得られた流体または組織（例えば、動物（例えば、ヒトまたは非ヒト脊椎動物）の体液または組織）を含有し得る。前記サンプルは、呼吸器、尿生殖器、消化管、または生殖管、中枢神経系、尿、皮膚、粘液、血液、血漿、血清、リンパ、脳脊髄液、唾液、創傷組織、創傷滲出液、生検組織、糞便、または固形組織、またはそれらの誘導体から得られ得る。ある特定の実施形態では、前記サンプルは、血液または尿サンプルである。前記サンプルはまた、植物または真菌由来であり得る。前記サンプルは、環境の空気、土壌、または水、環境に曝された表面、物体、または生物をサンプリングすることによって得られ得る。前記サンプルは、ヒトまたは動物における局所使用または内部使用のための医薬品、化粧品、血液製剤、または他の製品の製造における原材料、完成品、または中間製品；食品、飲料、または栄養補給剤の製造における原材料、中間製品、または完成品（例えば、ビタミン類またはハーブ抽出物）；医療用または体外診断用機器の製造における原材料、中間製品、または完成品；化学製品；工業上の表面；器具類；および機械類から得られ得る。前記サンプルは、前記接触工程の前にそれを液化しかつ／またはホモジナイズするために処理され得る。加えてまたはあるいは、前記接触工程の前に、前記サンプルは、前記細胞集団以外の物質または物体を除去するために、例えば、濾過または沈降により、処理され得る。
具体的な実施形態では、前記方法は、前記サンプルを３つの独立したアリコートの前記培養培地と接触させる無菌試験であり、１つは室温、例えば、約２２℃で好気的にインキュベートされ、１つは高温、例えば、約３２．５℃で好気的にインキュベートされ、１つは高温、例えば、約３２．５℃で嫌気的にインキュベートされる。
第５の態様では、本発明は、本発明の第２の態様による組成物を調製する方法を特徴とする。その方法は：
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含有する混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を室温に冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．２に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む。
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含有する混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を室温に冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．２に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む。
第５の態様のいくつかの実施形態では、工程ｉｖ）後に、前記方法は、工程ｖ）前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約６５℃に保つことをさらに含む（例えば、ヒツジ血液が脱線維素ヒツジ血液である場合）。溶血ヒツジ血液を使用する場合、工程ｉｖ）は４５℃以下で起こり得る。
第５の態様の特定の実施形態では、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンの成分の量は、本発明の第１の態様に記載した量である。第５の態様のある特定の実施形態では、ヒツジ血液の量は本発明の第２または第３の態様で記載した量と同じである。
第５の態様のある特定の実施形態では、工程ｉ）の前記混合物は、ゲル化剤、例えば、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ポリアクリルアミド、またはエラジウム（商標）をさらに含有する。
第５の態様のいくつかの実施形態では、工程ｉ）の前記混合物は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）をさらに含有する。あるいは、界面活性剤は工程ｉ）の後に（例えば、工程ｉｖ）またはｖ）の後に）加えることができる。
第５の態様の他の実施形態では、最終組成物は、保存容器（例えば、ボトル、ジャー、バイアル、アンプル、またはカセット（例えば、カセット、例えば、国際公開第２０１３／０７０７３０号に記載されているカセットなど））に移される。充填された滅菌保存容器は、培地を滅菌するためにγ線照射処理することができる。γ線滅菌の線量は、１０ｋＧｙより大きくてよく、例えば、１０ｋＧｙ〜５０ｋＧｙの間、１０ｋＧｙ〜４０ｋＧｙの間、１０ｋＧｙ〜３０ｋＧｙの間、または１０ｋＧｙ〜２０ｋＧｙの間（例えば、１２ｋＧｙ〜１９ｋＧｙの間）であり得る。
本発明の任意の態様のいくつかの実施形態では、前記組成物はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含有しない。本発明の任意の態様の特定の実施形態では、前記組成物は添加ナトリウムを含まない。例えば、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンのいずれもナトリウムを含まない。
本発明の任意の態様のある特定の他の実施形態では、前記リン酸バッファーは、リン酸三カリウムまたはその水和物、リン酸水素二カリウムまたはその水和物、およびリン酸二水素カリウムまたはその水和物の１つ以上を含む。特定の実施形態では、前記リン酸バッファーは、リン酸水素二カリウムまたはその水和物およびリン酸二水素カリウムまたはその水和物の１つ以上を含む。他の実施形態では、前記リン酸バッファーは、リン酸水素二カリウムまたはその水和物と、リン酸二水素カリウムまたはその水和物との混合物である。
本発明の第１の態様のいくつかの実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチンと、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第１の態様の特定の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、ゲル化剤と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第２の態様の特定の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、精製水と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第２の態様の他の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、精製水、ヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液）と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第２の態様の他の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、精製水、ヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第３の態様のある特定の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、精製水、ゲル化剤と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第３の態様の他の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、精製水、ヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液）、ゲル化剤と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。本発明の第３の態様の他の実施形態では、前記組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、精製水、ヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）、ゲル化剤と、所望により、消毒剤の中和剤とからなる。これらの実施形態のいずれにおいても、前記消毒剤の中和剤は省略し得る。これらの実施形態のいずれにおいても、前記成分の量は、表１または２で示されるものであり得る。
本発明の任意の態様の組成物はまた、色素または染色剤、特に、生細胞の染色剤、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌとしても知られている；この試薬はβ−ラクタマーゼ酵素の存在の指標である）を含み得る。この試薬は、テトラゾリウム塩（例えば、ニトロブルーテトラゾリウムまたはテトラゾリウムレッド）とともに使用し得る。本発明の任意の態様の組成物において使用し得る他の色素としては、Ｓａｌｍｏｎ−Ｇａｌ、Ｍａｇｅｎｔａ−Ｇａｌ、およびＧｒｅｅｎ−Ｇａｌが挙げられる。
本明細書において使用される「約」という用語は、列挙された値の±１０％の値を指す。
本明細書において使用される「緩衝能」という用語は、液体またはゲル組成物のｐＨを１．０だけ変更するのに必要な強一塩基性酸または強一塩基性塩基のミリモル(milimoles)数を指す。
単位「ｇ／ｋｇ」、「ｍｏｌ／ｋｇ」および「ｍＬ／ｋｇ」は、組成物の総質量に対する成分の量の比率を示す。
本明細書において使用される「精製水」という用語は、米国薬局方および国民医薬品集(the United States Pharmacopeia and National Formulary)（ＵＳＦ ３７−ＮＦ３２）、モノグラフ＜１２３１＞（２０１４年）に記載された精製水の基準を満たすかまたは超える水を指す。
「ナトリウムを実質的に含まない」組成物は、５０ｇ／ｋｇ未満、例えば、１０ｇ／ｋｇ未満または１ｇ／ｋｇ未満のナトリウムイオンを含有する。
詳細な説明
増殖培地組成
本発明は、ヒト関連生物、嫌気性生物、水生生物、環境生物、およびカビを含む多くの属の多種多様な生物の増殖を促進する改良された増殖培地を提供する。従って、その培地は、アッセイおよび細胞培養のための汎用培地として使用され得る。培地の多用途性により、無菌試験におけるトリプチカーゼダイズブロス（ＴＳＢ）および液体チオグリコール酸培地（ＦＴＭ）の代わりにそれを使用することが可能になる。本発明の増殖培地の例示的な使用分野には、全般的な細胞培養および液体、空気、土壌、表面、工業的もしくは臨床的サンプル、医薬品（無菌または非無菌）、食品、飲料製品、または栄養補給剤の微生物バイオバーデンについての検査が含まれる。その増殖培地はまた、臨床アッセイ、例えば、血液または他の感染についてのアッセイ、および抗生物質耐性についてのアッセイのような他のアッセイにも使用し得る。本発明は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含有する組成物を特徴とする。その組成物は、本発明の方法により本発明の増殖培地を調製するために、液体（例えば、水および／またはヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液））と混合し得る固体であり得る。組成物はまた、界面活性剤を含み得る。好ましくは、その組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび／または添加ナトリウムを含有しない。生物学的に誘導された成分はナトリウムを含有し得るため、その組成物はナトリウムフリーではない。本発明のこの組成物は、低ナトリウム含有量により、シェドラーブロスでの増殖と比較して、酸化ストレスを受けた枯草菌の優れた増殖を提供するため、有利である。加えて、より高いカリウム含有量、例えば、トリス(Tris)ではなくリン酸カリウムバッファーを使用することにより、シェドラーブロスでの増殖と比較して、例えば、酸化ストレスを受けた枯草菌の、優れた増殖をもたらした。
増殖培地組成
本発明は、ヒト関連生物、嫌気性生物、水生生物、環境生物、およびカビを含む多くの属の多種多様な生物の増殖を促進する改良された増殖培地を提供する。従って、その培地は、アッセイおよび細胞培養のための汎用培地として使用され得る。培地の多用途性により、無菌試験におけるトリプチカーゼダイズブロス（ＴＳＢ）および液体チオグリコール酸培地（ＦＴＭ）の代わりにそれを使用することが可能になる。本発明の増殖培地の例示的な使用分野には、全般的な細胞培養および液体、空気、土壌、表面、工業的もしくは臨床的サンプル、医薬品（無菌または非無菌）、食品、飲料製品、または栄養補給剤の微生物バイオバーデンについての検査が含まれる。その増殖培地はまた、臨床アッセイ、例えば、血液または他の感染についてのアッセイ、および抗生物質耐性についてのアッセイのような他のアッセイにも使用し得る。本発明は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含有する組成物を特徴とする。その組成物は、本発明の方法により本発明の増殖培地を調製するために、液体（例えば、水および／またはヒツジ血液（例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液））と混合し得る固体であり得る。組成物はまた、界面活性剤を含み得る。好ましくは、その組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび／または添加ナトリウムを含有しない。生物学的に誘導された成分はナトリウムを含有し得るため、その組成物はナトリウムフリーではない。本発明のこの組成物は、低ナトリウム含有量により、シェドラーブロスでの増殖と比較して、酸化ストレスを受けた枯草菌の優れた増殖を提供するため、有利である。加えて、より高いカリウム含有量、例えば、トリス(Tris)ではなくリン酸カリウムバッファーを使用することにより、シェドラーブロスでの増殖と比較して、例えば、酸化ストレスを受けた枯草菌の、優れた増殖をもたらした。
当業者は、リン酸バッファー中のリン酸カリウムまたはその水和物、リン酸水素カリウムまたはその水和物、およびリン酸二水素カリウムまたはその水和物の１つ以上の最終的な割合を、定型計算により、例えば、ヘンダーソン・ハッセルバルヒの式(the Henderson-Hasselbalch equation)での関連する共役酸についての所望のｐＨ値および水溶液のｐＫａ値を使用することによって、定めることができる。本発明の培地については、約７．３（例えば、７．３±０．５、例えば、７．３±０．２など）のｐＨが望ましい。
本発明の組成物の限定されない例を表３に示す。
本発明の固体組成物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含有する。本発明のある特定の固体組成物は、ナトリウムイオン約６０ｇ／ｋｇ未満（例えば、約５５ｇ／ｋｇ未満または約５０ｇ／ｋｇ未満）を含有する。本発明の固体組成物はまた、ゲル化剤を含有し得る。ゲル化剤を含む本発明の固体組成物は、水、ヒツジ血液、または両方と混合するとゲルを生じる。ゲル化剤の限定されない例としては、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、エラジウム（商標）（リゾビウム属種(Rhizobium sp.)（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖）、およびそれらの組合せが挙げられる。。当業者は、増殖培地としての使用に好適なゲルの調製に必要な液体（例えば、精製水および／またはヒツジ血液）の量を決定することができる。本発明の固体組成物中のゲル化剤の量は、ゲル化剤が何であるかによって異なる。例えば、本発明の乾燥固体中に存在するゲル化剤がジェランである場合、その濃度は、約５０ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間、好ましくは、約１３０ｇ／ｋｇ〜約２３０ｇ／ｋｇの間（例えば、約１８０ｇ／ｋｇ）であり得る。本発明のゲルまたは液体中に存在するゲル化剤がジェランである場合、その濃度は、約２．５ｇ／ｋｇ〜約１３ｇ／ｋｇの間（例えば、約６．８ｇ／ｋｇ）であり得る。別の例では、本発明の乾燥固体中に存在するゲル化剤がキサンタンガムまたはアルギン酸ナトリウムである場合、その濃度は、約７０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間、好ましくは、約１６０ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間（例えば、約２２０ｇ／ｋｇ）であり得る。本発明のゲル中に存在するゲル化剤がキサンタンガムまたはアルギン酸ナトリウムである場合、その濃度は、約３．４ｇ／ｋｇ〜約１３ｇ／ｋｇの間（例えば、約６．８ｇ／ｋｇ）であり得る。さらに別の例では、本発明のゲル中に存在するゲル化剤がポリアクリルアミドである場合、その濃度は、約５０ｇ／ｋｇ〜約２００ｇ／ｋｇの間（例えば、約１５０ｇ／ｋｇ）であり得る。ある特定の例では、本発明の乾燥固体中に存在するゲル化剤がグアーガムである場合、その濃度は、約４００ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間（例えば、約６５０ｇ／ｋｇ）であり得る。本発明のゲル中に存在するゲル化剤がグアーガムである場合、その濃度は、約１０ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間（例えば、約２１ｇ／ｋｇ）であり得る。
本発明の液体組成物は、精製水またはヒツジ血液または両方を含有する。液体組成物はまた、ゲルを形成するには低すぎる濃度でゲル化剤を含み得る。本発明の液体組成物中の成分の濃度は、本明細書に記載のとおりである。
本発明の組成物において使用されるカゼイン消化物は、当技術分野で公知の方法に従って、牛乳由来のカゼインタンパク質の加水分解により調製することができる。本発明の組成物において使用されるダイズ消化物は、当技術分野で公知の方法に従って、例えば、熱に不安定なプロテアーゼ阻害剤を除去するために熱処理した脱脂大豆粉の酵素消化により調製することができる。本発明の組成物において使用される動物組織消化物は、当技術分野で公知の方法に従って、例えば、筋肉組織の食肉または内臓肉およびゼラチンの加水分解により調製することができる。酵母抽出物は、ＵＳＰにおいて「酵母細胞（［例えば、］サッカロミセス属(Saccharomyces)）の水溶性のペプトン様誘導体」と定義され、噴霧乾燥粉末として容易に入手可能である。市販のカゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、および酵母抽出物は、本発明の組成物において使用し得る。これらの成分は、例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（サンノゼ、ＣＡ）から入手し得る。これらの成分の各々は１５％（ｗ／ｗ）未満のナトリウムを含有する。
脱線維素ヒツジ血液は、当技術分野で公知の方法に従って、ヒツジから無菌採血し、その後、抗凝固剤の不在下で採取した血液の凝固過程の間にフィブリンを機械的除去することにより調製することができる。市販の脱線維素ヒツジ血液（例えば、Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．（ギルバーツビル、ＰＡ）製）は、本発明の組成物において使用し得る。ヒツジ血液は、ナトリウムを（３．４８±０．０２ｇ／１００ｍＬまで；例えば、Long et al., J. Anim. Sci., 24:145-150, 1965参照）含有することが知られている。溶血ヒツジ血液は、脱線維素ヒツジ血液を溶血させることにより調製することができる。市販の溶血ヒツジ血液は、本発明の組成物において使用することができる（例えば、Ｃｅｄａｒｌａｎｅ（バーリントン、ＮＣ）製）。
界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤）は、本発明の液体およびゲル組成物中での沈殿物の形成を制御するために、本発明の組成物において使用することができる。その界面活性剤は、ポロクサマー、ポリソルベート、またはトリトン(Triton)（商標）であり得る。これらの界面活性剤は、様々な化学製品供給業者、例えば、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（ミッドランド、ＭＩ）、およびＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、ＭＯ）などから市販されている。好ましい界面活性剤はポリソルベート２０である。
本発明の増殖培地はまた、当技術分野で公知の抗生物質を含み得る。前記増殖培地は、消毒剤の中和剤をさらに含み得る。中和すべき消毒剤の例としては、アルコール、次亜塩素酸塩、過酸化水素、酢酸、ペルオキシ酢酸、第四級アンモニウム化合物、フェノール類、ヨウ素、塩素製剤、水銀剤、ホルムアルデヒド、およびグルタルアルデヒドが挙げられる。中和剤の例としては、ヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンが挙げられる。他の中和剤としては、重亜硫酸塩、グリシン、二価陽イオン（例えば、Ｍｇ２＋またはＣａ２＋）、およびチオグリコール酸塩が挙げられる。上記のように、本発明の組成物は、好ましくは、ナトリウムを実質的に含まない非生物学的誘導成分を含む、すなわち、本発明の組成物は、シェドラーブロスよりも含有するナトリウムは少ない。好ましくは、本発明の組成物は、トリ（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）を含有しない。トリスの品質は、この成分を含有する培地で増殖させた微生物の回収の再現性の低下につながる可能性があるロット間変動を受けやすいため、この成分が不在であることは有利である。従って、リン酸バッファー、例えば、リン酸カリウムバッファーを本発明の組成物において使用する。
細胞集団を培養する方法
本発明の増殖培地は、アッセイおよび細胞培養のための一般的な増殖培地として採用し得る。本発明の増殖培地の使用は、例えば、微生物（例えば、細菌または真菌）の増殖のために透過性の膜を採用する細胞培養デバイスの使用を含む、増殖に基づく無菌アッセイにおいて特に有利である。そのような細胞培養デバイスは、国際公開第２００７／０３８４７８号、国際公開第２０１３／０７０７３０号、および国際公開第２０１３／１５８６６６号に詳細に記載されており、これらの開示は、その全体が引用することにより本明細書の一部とされる。具体的には、本発明の増殖培地は、国際公開第２０１３／０７０７３０号に記載されている方法に従って、グロースダイレクト（商標）無菌カセットとともに使用し得る。特定の利点としては、信頼性の高い無菌試験結果を迅速に達成し、それによって、医療および製造における効率的なコスト管理が可能になることが挙げられる。
本発明の増殖培地は、アッセイおよび細胞培養のための一般的な増殖培地として採用し得る。本発明の増殖培地の使用は、例えば、微生物（例えば、細菌または真菌）の増殖のために透過性の膜を採用する細胞培養デバイスの使用を含む、増殖に基づく無菌アッセイにおいて特に有利である。そのような細胞培養デバイスは、国際公開第２００７／０３８４７８号、国際公開第２０１３／０７０７３０号、および国際公開第２０１３／１５８６６６号に詳細に記載されており、これらの開示は、その全体が引用することにより本明細書の一部とされる。具体的には、本発明の増殖培地は、国際公開第２０１３／０７０７３０号に記載されている方法に従って、グロースダイレクト（商標）無菌カセットとともに使用し得る。特定の利点としては、信頼性の高い無菌試験結果を迅速に達成し、それによって、医療および製造における効率的なコスト管理が可能になることが挙げられる。
具体的には、本発明の増殖培地は、ＴＳＡおよびＦＴＭを採用する公定書収載試験の類似試験において採用することができる。例えば、その培地は、１つは３２．５℃でインキュベートする好気性生物についてのアッセイであり、１つは３２．５℃でインキュベートする嫌気性生物についてのアッセイであり、１つは２２℃でインキュベートする好気性生物についてのアッセイである、一連の３つのアッセイにおいて採用することができる。その増殖培地の他の使用には、環境モニタリング、バイオバーデン試験、臨床的および診断的使用、抗生物質耐性試験、および抗生物質選択が含まれる。抗生物質感受性試験または抗生物質耐性を有する細胞の選択（例えば、トランスフェクション後）では、その増殖培地は、当技術分野で公知のように、抗生物質を含み得る。
本発明の増殖培地の使用は、透過性の膜上での微生物の増殖を含む設定に限定されない。例えば、本発明の増殖培地は、試験管、ペトリ皿、ロダックプレート、マイクロ流体細胞培養デバイス（例えば、米国特許出願公開第２０１３／００９０２６８号および第２０１３／０１７１６７９号に記載されているものなど）、バイオリアクター（エッペンドルフセルゲン（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＣｅｌｌＧｅｎ）（登録商標）バイオリアクターまたは、例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１９６３７５号および第２０１４／００２４１０５号に記載されているものなど）、および他の細胞培養容器で微生物（例えば、細菌または真菌）を培養するために使用し得る。
本発明の増殖培地を使用してアッセイすることができるサンプルは、限定されず、工業的サンプル（例えば、食品、飲料、または栄養補給剤の製造における原材料、中間製品、または完成品；医療用または体外診断用機器の製造における原材料、中間製品、または完成品；化学製品；工業上の表面；器具類；または機械類）、医薬を調製するのに使用される医薬および試薬（例えば、ヒトまたは動物における局所使用または内部使用のための医薬品、化粧品、血液製剤、または他の製品の製造における原材料、完成品、または中間製品）、生体サンプル、環境サンプル（例えば、水サンプル（天然水域（河川、湖沼、池、および海洋など）、廃水、および処理された水源（地方自治体の水道水など））、空気サンプル、土壌サンプル、および表面サンプルなど）を含む。試験し得る表面には、商品（例えば、医薬）の製造、包装または保管に使用される機器、材料および設備；研究に使用される機器、材料および設備；衣類、寝具、および他の布地（例えば、医療提供者または患者のためのもの）；ならびに治療に使用される機器、材料および設備（例えば、病院、診療所、および医院）が含まれる。
本発明の増殖培地を使用して培養することができる微生物（例えば、細菌または真菌）の属の限定されない例としては、アシネトバクター属（例えば、アシネトバクター・ルオフィイ(Acinetobacter lwofii)）、アスペルギルス属（例えば、アスペルギルス・ブラジリエンシスまたはアスペルギルス・フミガーテス(Aspergillus fumigates)）、バチルス属（例えば、バチルス・クラウシイ、バチルス・イドリエンシス、バチルス・リケニフォルミス、またはバチルス・スブスチリス(Bacillus substilis)）、カンジダ属(Candida)（例えば、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)）、クロストリジウム属(Clostridium)（例えば、クロストリジウム・スポロゲネス(Clostridium sporogenes)）、コリネバクテリウム属（例えば、コリネバクテリウム・ツバークロステアリクムまたはゼローシス菌）、デルマコッカス属（例えば、デルマコッカス・ニシノミヤエンシス）、エシェリキア属（例えば、大腸菌）、エクセロヒルム属（例えば、エクセロヒルム・ロストラタム）、コクリア属（例えば、コクリア・リゾフィラ）、メチロバクテリウム属（例えば、メチロバクテリウム・ラジオトレランス）、ミクロコッカス属（例えば、ミクロコッカス・ルテウス）、パエニバチルス属（例えば、パエニバチルス・グルカノリティカス）、ペニシリウム属（例えば、ペニシリウム・クリソゲナムまたはペニシリウム・ノタタム）、シュードモナス属（例えば、緑膿菌またはシュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens)）、スフィンゴモナス属(Sphingomonas)（例えば、スフィンゴモナス・ジャポニカ）、スタフィロコッカス属（例えば、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、またはスタフィロコッカス・ホミニス）、ストレプトコッカス属（例えば、化膿レンサ球菌）、およびストレプトマイセス属（例えば、ストレプトマイセス・ハルステディイ）が挙げられる。具体的には、本発明の増殖培地は、漂白剤ストレスを受けた枯草菌を含む数多くの微生物の再現可能な良好な回収を可能にする。
本発明のキット
本発明はまた、上記の本発明の組成物を含有するキットを特徴とする。本発明の組成物は、本発明のキットに乾燥物品、例えば、粉末、ゲル、または液体として含め得る。固体、例えば、粉末は、単一の容器（例えば、ボトル、アンプル、またはジャー）中に混合物として包装し得る。あるいは、固体、例えば、粉末は、別々の容器（例えば、バッグ、缶、ポーチ、ボトル、バイアル、アンプル、ジャー、またはそれらの組合せ）に包装し得る。混合物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、およびゲル化剤（例えば、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、エラジウム（商標）、またはそれらの組合せ）の１つ以上を含有し得る。これらの成分の相対量は上記のとおりである。
本発明はまた、上記の本発明の組成物を含有するキットを特徴とする。本発明の組成物は、本発明のキットに乾燥物品、例えば、粉末、ゲル、または液体として含め得る。固体、例えば、粉末は、単一の容器（例えば、ボトル、アンプル、またはジャー）中に混合物として包装し得る。あるいは、固体、例えば、粉末は、別々の容器（例えば、バッグ、缶、ポーチ、ボトル、バイアル、アンプル、ジャー、またはそれらの組合せ）に包装し得る。混合物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、Ｌ−シスチン、およびゲル化剤（例えば、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、エラジウム（商標）、またはそれらの組合せ）の１つ以上を含有し得る。これらの成分の相対量は上記のとおりである。
以下の実施例は、本発明を例示することを意図しており、決して本発明を限定するものではない。
実施例１：本発明の増殖培地の調製
精製水（９５０ｍＬ）、カゼイン消化物（５．６ｇ、ＮｅｏｇｅｎまたはＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ダイズ消化物（１ｇ、Ｎｅｏｇｅｎ）、リン酸二カリウム（２．５ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、デキストロース（５．８２ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、動物組織消化物（５ｇ、ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＮｅｏｇｅｎ）、酵母抽出物（５ｇ、ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＮｅｏｇｅｎ）、リン酸一カリウム（０．３１ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ヘミン（０．０１ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、およびＬ−シスチン（０．４ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する組成物をオートクレーブ処理した。組成物を室温に冷却し、ＫＯＨまたはＨＣｌ水溶液を用いてｐＨを７．３（±０．２）に調整した。次いで、組成物を６５℃に加熱し、脱線維素ヒツジ血液（Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）５０ｍＬを加えた。赤色から褐色に色が変化するまで温度を一定に保ち、その時点で組成物を周囲温度（室温、約２２℃）に冷却した。
精製水（９５０ｍＬ）、カゼイン消化物（５．６ｇ、ＮｅｏｇｅｎまたはＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ダイズ消化物（１ｇ、Ｎｅｏｇｅｎ）、リン酸二カリウム（２．５ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、デキストロース（５．８２ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、動物組織消化物（５ｇ、ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＮｅｏｇｅｎ）、酵母抽出物（５ｇ、ＢＤ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＮｅｏｇｅｎ）、リン酸一カリウム（０．３１ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ヘミン（０．０１ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、およびＬ−シスチン（０．４ｇ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する組成物をオートクレーブ処理した。組成物を室温に冷却し、ＫＯＨまたはＨＣｌ水溶液を用いてｐＨを７．３（±０．２）に調整した。次いで、組成物を６５℃に加熱し、脱線維素ヒツジ血液（Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）５０ｍＬを加えた。赤色から褐色に色が変化するまで温度を一定に保ち、その時点で組成物を周囲温度（室温、約２２℃）に冷却した。
実施例２：様々な増殖培地における微生物の増殖の比較
この実施例では、米国薬局方モノグラフ＜７１＞に記載されている増殖に基づく無菌アッセイにおいて使用される標準培地と比較して、様々な微生物の増殖を支援する本発明の増殖培地の多用途性を例示する。標準培地はＴＳＢおよびＦＴＭである。
この実施例では、米国薬局方モノグラフ＜７１＞に記載されている増殖に基づく無菌アッセイにおいて使用される標準培地と比較して、様々な微生物の増殖を支援する本発明の増殖培地の多用途性を例示する。標準培地はＴＳＢおよびＦＴＭである。
本発明の増殖培地を種々の生物に対して試験した。本発明の培地はまた、当技術分野で公知の他の増殖培地と比較した。総ての試験は、グロースダイレクト（商標）無菌カセット（Ｒａｐｉｄ Ｍｉｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ベッドフォード、ＭＡ）またはペトリ皿で行った。
シェドラーブロスの改変物と、元のレシピ、シェドラーチョコレート寒天、および本発明の増殖培地との比較
元のレシピに従って調製したシェドラーブロス（１）、トリスを含まないシェドラーブロス（２）、ナトリウムを実質的に含まない非生物学的誘導成分を含有するシェドラーブロス（３）、カリウムが多いシェドラーブロス（４）、本発明の増殖培地（５）、およびシェドラーチョコレート寒天（６）での、漂白剤ストレスを受けた枯草菌の回収を図１Ａに示す。試験は、各培地の２つの異なるバッチを用いて三反復で行った。結果は、シェドラーチョコレート培地での回収に対して正規化した。図１Ｂに示されるように、結果は、粉末成分および／または血液の異なる基礎的ロットであっても再現可能である。
元のレシピに従って調製したシェドラーブロス（１）、トリスを含まないシェドラーブロス（２）、ナトリウムを実質的に含まない非生物学的誘導成分を含有するシェドラーブロス（３）、カリウムが多いシェドラーブロス（４）、本発明の増殖培地（５）、およびシェドラーチョコレート寒天（６）での、漂白剤ストレスを受けた枯草菌の回収を図１Ａに示す。試験は、各培地の２つの異なるバッチを用いて三反復で行った。結果は、シェドラーチョコレート培地での回収に対して正規化した。図１Ｂに示されるように、結果は、粉末成分および／または血液の異なる基礎的ロットであっても再現可能である。
グロースダイレクト（登録商標）無菌カセット中で本発明の増殖培地を使用した回収と、ペトリ皿でＴＳＡを使用した回収との比較
グロースダイレクト（登録商標）無菌カセット中での本発明の増殖培地における２３種の異なる生物の増殖を、ペトリ皿でのＴＳＢにおけるその生物の増殖と比較した。結果は、ペトリ皿でのＴＳＡで観察された増殖に対して正規化した。３種の生物だけが良好な増殖についての７０％カットオフ以下の回収を示した（ＵＳＰ基準）。２種の生物、デルマコッカス・ニシノミヤエンシスおよびメチロバクテリウム・ラジオトレランスでは、本発明の増殖培地における無菌カセット中での増殖は一貫して優れていた。図２はメチロバクテリウム・ラジオトレランスについてのデータを示している；しかしながら、ＴＳＡでは増殖は観察されなかったため、増殖をＴＳＡに対して正規化することはできなかった。
グロースダイレクト（登録商標）無菌カセット中での本発明の増殖培地における２３種の異なる生物の増殖を、ペトリ皿でのＴＳＢにおけるその生物の増殖と比較した。結果は、ペトリ皿でのＴＳＡで観察された増殖に対して正規化した。３種の生物だけが良好な増殖についての７０％カットオフ以下の回収を示した（ＵＳＰ基準）。２種の生物、デルマコッカス・ニシノミヤエンシスおよびメチロバクテリウム・ラジオトレランスでは、本発明の増殖培地における無菌カセット中での増殖は一貫して優れていた。図２はメチロバクテリウム・ラジオトレランスについてのデータを示している；しかしながら、ＴＳＡでは増殖は観察されなかったため、増殖をＴＳＡに対して正規化することはできなかった。
ＴＳＢ、シェドラー血液ブロス、および本発明の増殖培地を使用したグロースダイレクト（登録商標）無菌カセット中での微生物の増殖の比較
無菌カセットの関連の中で異なる培地における増殖を調査し、寒天の変動を排除した。この研究の焦点は問題のある生物にあった。図３はこの比較を、本発明の増殖培地における増殖に対して正規化したデータを用いて示している。５種の生物では、総ての培地の間に有意差はなかった。総ての増殖は７０％カットオフ〜１４２％カットオフの間にある。２種の生物、ゼローシス菌およびエクセロヒルム・ロストラタムでは、増殖は本発明の増殖培地において優れている。ストレプトマイセス・ハルステディイおよびペニシリウム・クリソゲナムでは、ＴＳＢにおいて増殖が優れているが、総ての場合において、増殖が検出される。ＴＳＡ、ＴＳＢ、またはシェドラー血液もしくはチョコレート寒天で増殖することができ、本発明の増殖培地で増殖することができない生物は同定されなかった。
無菌カセットの関連の中で異なる培地における増殖を調査し、寒天の変動を排除した。この研究の焦点は問題のある生物にあった。図３はこの比較を、本発明の増殖培地における増殖に対して正規化したデータを用いて示している。５種の生物では、総ての培地の間に有意差はなかった。総ての増殖は７０％カットオフ〜１４２％カットオフの間にある。２種の生物、ゼローシス菌およびエクセロヒルム・ロストラタムでは、増殖は本発明の増殖培地において優れている。ストレプトマイセス・ハルステディイおよびペニシリウム・クリソゲナムでは、ＴＳＢにおいて増殖が優れているが、総ての場合において、増殖が検出される。ＴＳＡ、ＴＳＢ、またはシェドラー血液もしくはチョコレート寒天で増殖することができ、本発明の増殖培地で増殖することができない生物は同定されなかった。
本発明の増殖培地における微生物の増殖と、ＦＴＭにおけるその微生物の増殖との比較
ＦＴＭは、嫌気性生物を液体形式で増殖させるために設計されている。この培地は、好気層および嫌気層の両方を有するため、多目的の培地であることが意図されている。これは液体増殖培地であるが濾過膜の表面での増殖を支援しないため、増殖は濁りの存在によってのみモニタリングすることができる。この情報の存在／非存在は、最確数(Most probable Number)（ＭＰＮ）法を用いて定量的データに変換することができ、この場合、低レベルの接種物の反復１０倍希釈物を増殖についてモニタリングし、増殖／非増殖のパターンを最も濃度の高い接種での最も可能性の高い接種物に変換することができる。
ＦＴＭは、嫌気性生物を液体形式で増殖させるために設計されている。この培地は、好気層および嫌気層の両方を有するため、多目的の培地であることが意図されている。これは液体増殖培地であるが濾過膜の表面での増殖を支援しないため、増殖は濁りの存在によってのみモニタリングすることができる。この情報の存在／非存在は、最確数(Most probable Number)（ＭＰＮ）法を用いて定量的データに変換することができ、この場合、低レベルの接種物の反復１０倍希釈物を増殖についてモニタリングし、増殖／非増殖のパターンを最も濃度の高い接種での最も可能性の高い接種物に変換することができる。
この方法を用いて、本発明の増殖培地での嫌気性無菌カセット中でのプロピオニバクテリウム・アクネスの増殖を、ＭＰＮ法を用いたＦＴＭでの増殖と比較した。表４に示すように、嫌気性カセットにおけるカウントは、ＭＰＮ法を用いたＦＴＭでのものと同様である。しかしながら、プロピオニバクテリウム・アクネスは、ＦＴＭでの増殖と比べて、本発明の増殖培地で著しく速く増殖した。
ｐＨ７．３±０．２を有する、精製水（９５０ｍＬ）、カゼイン消化物（５．６ｇ）、ダイズ消化物（１ｇ）、リン酸二カリウム（２．５ｇ）、デキストロース（５．８２ｇ）、動物組織消化物（５ｇ）、酵母抽出物（５ｇ）、リン酸一カリウム（０．３１ｇ）、ヘミン（０．０１ｇ）、Ｌ−シスチン（０．４ｇ）、および溶血ヒツジ血液（５０ｍＬ）または脱線維素ヒツジ血液（５０ｍＬ）を含有する増殖培地組成物を採用した。溶血ヒツジ血液を含有する組成物は、実施例１に記載のとおりに調製した混合物に溶血ヒツジ血液を４５℃以下で加えたことを除いて、実施例１に記載のとおりに調製した。
膜フィルターをブロス浸漬パッド上に置いた。組成物の増殖促進を、ヒト関連株、水生生物、酵母、ＵＳＰ微生物、カビおよび複数の胞子形成バチルス属種を含む一連の試験生物を用いて、トリプチカーゼダイズ寒天(trypticase soy agar)（ＴＳＡ）と比較した（表６）。表６では、％回収率は、本発明の増殖培地（ポリソルベート２０を含有しない）における微生物の回収を、ＴＳＡにおける回収に対するパーセンテージとして示している。
総ての場合において、本発明の増殖培地は、試験した総ての菌株にわたってＴＳＡと同等以上の増殖促進を示した。いずれの場合においても、本発明の増殖培地での試験菌株の回収がＴＳＡのものに実質的に劣っていることはなかった。
加えて、本発明の培地の増殖を、公定書収載無菌試験によって記載されているように、ＦＴＭにスパイクし増殖させた生物から計算したＭＰＮ値と比較した。本発明の増殖培地は、嫌気性条件下で、ＦＴＭと同じ増殖促進を示すかどうか調べるために、嫌気性生物であるプロピオニバクテリウム・アクネスおよびクロストリジウム・スポロゲネスを試験した。示されているように、両方の菌株は、ＦＴＭでのインキュベーションから得られたＭＰＮに対し、本発明の増殖培地を用いてセルロースパッド上で嫌気的にインキュベートした膜フィルターにおいて同等の回復を示した（図５）。
実施例４
ｐＨ７．３±０．２を有する、精製水（９５０ｍＬ）、カゼイン消化物（５．６ｇ）、ダイズ消化物（１ｇ）、リン酸二カリウム（２．５ｇ）、デキストロース（５．８２ｇ）、動物組織消化物（５ｇ）、酵母抽出物（５ｇ）、リン酸一カリウム（０．３１ｇ）、ヘミン（０．０１ｇ）、Ｌ−シスチン（０．４ｇ）、溶血ヒツジ血液（５０ｍＬ）、および１０ｍＬの５％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０を含有する増殖培地組成物を採用した。組成物は、溶血ヒツジ血液を含有する組成物は、実施例１に記載のとおりに調製した混合物に溶血ヒツジ血液を４５℃以下で加えたことを除いて、実施例１に記載のとおりに調製した。
ｐＨ７．３±０．２を有する、精製水（９５０ｍＬ）、カゼイン消化物（５．６ｇ）、ダイズ消化物（１ｇ）、リン酸二カリウム（２．５ｇ）、デキストロース（５．８２ｇ）、動物組織消化物（５ｇ）、酵母抽出物（５ｇ）、リン酸一カリウム（０．３１ｇ）、ヘミン（０．０１ｇ）、Ｌ−シスチン（０．４ｇ）、溶血ヒツジ血液（５０ｍＬ）、および１０ｍＬの５％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０を含有する増殖培地組成物を採用した。組成物は、溶血ヒツジ血液を含有する組成物は、実施例１に記載のとおりに調製した混合物に溶血ヒツジ血液を４５℃以下で加えたことを除いて、実施例１に記載のとおりに調製した。
漂白剤ストレスを受けた枯草菌、スフィンゴモナス・ジャポニカ、およびデルマコッカス・ニシノミヤエンシスについてのポリソルベート２０を含有する本発明の培地における増殖を、ポリソルベート２０を含まない本発明の培地における増殖およびＴＳＡにおける増殖と比較した。結果は図６に示している。ポリソルベート２０を含有する本発明の増殖培地はまた、嫌気性生物（例えば、プロピオニバクテリウム・アクネス）の増殖を支援する能力についても試験した。プロピオニバクテリウム・アクネスは、本発明の増殖培地を使用してグロースダイレクト（登録商標）嫌気性無菌カセットにおいて増殖させ、ＢＤ社製ガスパック（登録商標）嫌気性ポーチでの血液寒天培地プレートにおける増殖と回収を比較した。本発明の増殖培地におけるプロピオニバクテリウム・アクネスの回収は、血液寒天培地対照の場合の１８ＣＦＵに対し、平均１３．２ＣＦＵであった。
本発明はまた、以下の番号を付した実施形態によっても記載する。
１．カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる組成物。
２．２２℃において、前記組成物は固体である、実施形態１に記載の組成物。
３．前記組成物は粉末である、実施形態２に記載の組成物。
４．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態２または３に記載の組成物。
５．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態４に記載の組成物。
６．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態５に記載の組成物。
７．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２４５．３ｇ／ｋｇのカゼイン消化物を含んでなる、実施形態６に記載の組成物。
８．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のダイズ消化物を含んでなる、実施形態２〜７のいずれか１つに記載の組成物。
９．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約２００ｇ／ｋｇ間のダイズ消化物を含んでなる、実施形態８に記載の組成物。
１０．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約１００ｇ／ｋｇの間(between about 10 g/kg about 100 g/kg)のダイズ消化物を含んでなる、実施形態９に記載の組成物。
１１．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約４３．８ｇ／ｋｇのダイズ消化物を含んでなる、実施形態１０に記載の組成物。
１２．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態２〜１１のいずれか１つに記載の組成物。
１３．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態１２に記載の組成物。
１４．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態１３に記載の組成物。
１５．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２１９ｇ／ｋｇの動物組織消化物を含んでなる、実施形態１４に記載の組成物。
１６．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態２〜１５のいずれか１つに記載の組成物。
１７．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態１６に記載の組成物。
１８．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態１７に記載の組成物。
１９．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２１９ｇ／ｋｇの酵母抽出物を含んでなる、実施形態１８に記載の組成物。
２０．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、実施形態２〜１９のいずれか１つに記載の組成物。
２１．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、実施形態２０に記載の組成物。
２２．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、実施形態２１に記載の組成物。
２３．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２５５ｇ／ｋｇのデキストロースを含んでなる、実施形態２２に記載の組成物。
２４．前記組成物は、水性媒体への溶解時に０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２〜２３のいずれか１つに記載の組成物。
２５．前記組成物は、水性媒体への溶解時に１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜５０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２４に記載の組成物。
２６．前記組成物は、水性媒体への溶解時に２ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜２０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２５に記載の組成物。
２７．前記組成物は、水性媒体への溶解時に３ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２６に記載の組成物。
２８．前記組成物は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間のヘミンを含んでなる、実施形態２〜２７のいずれか１つに記載の組成物。
２９．前記組成物は、約０．４ｇ／ｋｇのヘミンを含んでなる、実施形態２８に記載の組成物。
３０．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約８ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、実施形態２〜２９のいずれか１つに記載の組成物。
３１．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１２ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、実施形態３０に記載の組成物。
３２．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１７．５ｇ／ｋｇのＬ−シスチンを含んでなる、実施形態３１に記載の組成物。
３３．前記組成物はゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態２〜３２のいずれか１つに記載の組成物。
３４．前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、実施形態３３に記載の組成物。
３５．前記ゲル化剤は寒天である、実施形態３４に記載の組成物。
３６．前記組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３３〜３５のいずれか１つに記載の組成物。
３７．前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約６００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３６に記載の組成物。
３８．前記組成物は、約２５０ｇ／ｋｇ〜約４５０ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３７に記載の組成物。
３９．前記組成物は、約３５０ｇ／ｋｇの前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３８に記載の組成物。
４０．前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態２〜３９のいずれか１つに記載の組成物。
４１．前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態４０に記載の組成物。
４２．前記組成物は、約０．４ｇ／ｋｇ〜約１９０ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４０または４１に記載の組成物。
４３．前記組成物は、約４ｇ／ｋｇ〜約８０ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４２に記載の組成物。
４４．前記組成物は、約４ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４３に記載の組成物。
４５．前記組成物は、約２０ｇ／ｋｇの前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４４に記載の組成物。
４６．２２℃において、前記組成物は液体またはゲルである、実施形態１に記載の組成物。
４７．精製水をさらに含んでなる、実施形態１または４６に記載の組成物。
４８．ヒツジ血液をさらに含んでなる、実施形態１、４６、および４７のいずれか１つに記載の組成物。
４９．前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約２００ｍＬ／ｋｇの間である、実施形態４８に記載の組成物。
５０．前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約１００ｍＬ／ｋｇの間(between about 5 mL/kg about 100 mL/kg)である、実施形態４９に記載の組成物。
５１．前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５０ｍＬ／ｋｇである、実施形態５０に記載の組成物。
５２．前記ヒツジ血液中の赤血球は溶解している、実施形態４８〜５１のいずれか１つに記載の組成物。
５３．前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、実施形態４８〜５２のいずれか１つに記載の組成物。
５４．前記ヒツジ血液は、脱線維素ヒツジ血液である、実施形態４８〜５２のいずれか１つに記載の組成物。
５５．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜５４のいずれか１つに記載の組成物。
５６．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態５５に記載の組成物。
５７．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態５６に記載の組成物。
５８．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約５．６ｇ／ｋｇである、実施形態５７に記載の組成物。
５９．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．０５ｇ／ｋｇ〜約３０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜５８のいずれか１つに記載の組成物。
６０．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態５９に記載の組成物。
６１．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約３ｇ／ｋｇの間である、実施形態６０に記載の組成物。
６２．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約１ｇ／ｋｇである、実施形態６１に記載の組成物。
６３．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜６２のいずれか１つに記載の組成物。
６４．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６３に記載の組成物。
６５．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６４に記載の組成物。
６６．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約５ｇ／ｋｇである、実施形態６５に記載の組成物。
６７．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜６６のいずれか１つに記載の組成物。
６８．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６７に記載の組成物。
６９．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６８に記載の組成物。
７０．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約５ｇ／ｋｇである、実施形態６９に記載の組成物。
７１．前記組成物中のデキストロースの濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜７０のいずれか１つに記載の組成物。
７２．前記組成物中のデキストロースの濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態７１に記載の組成物。
７３．前記組成物中のデキストロースの濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態７２に記載の組成物。
７４．前記組成物中のデキストロースの濃度は、５．８ｇ／ｋｇである、実施形態７３に記載の組成物。
７５．前記組成物は、０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／ｐＨの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態４６〜７４のいずれか１つに記載の組成物。
７６．前記組成物は、水性媒体への溶解時に１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜５０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態７５に記載の組成物。
７７．前記組成物は、水性媒体への溶解時に２ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜２０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態７６に記載の組成物。
７８．前記組成物は、水性媒体への溶解時に３ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態７７に記載の組成物。
７９．前記組成物中のヘミンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇである、実施形態４６〜７８のいずれか１つに記載の組成物。
８０．前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約０．５ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜７９のいずれか１つに記載の組成物。
８１．前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．４ｇ／ｋｇである、実施形態８０に記載の組成物。
８２．界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態４６〜８１のいずれか１つに記載の組成物。
８３．前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態８２に記載の組成物。
８４．前記組成物は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８３に記載の組成物。
８５．前記組成物は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約２ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８４に記載の組成物。
８６．前記組成物は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８５に記載の組成物。
８７．前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇの前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８６に記載の組成物。
８８．ゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態４６〜８７のいずれか１つに記載の組成物。
８９．前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、実施形態８８に記載の組成物。
９０．前記ゲル化剤は寒天である、実施形態８９に記載の組成物。
９１．前記ゲル化剤は、リゾビウム属種によって生産された多糖である、実施形態９０に記載の組成物。
９２．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約５ｇ／ｋｇ〜約２５ｇ／ｋｇの間である、実施形態９０または９１に記載の組成物。．
９３．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約１３．５ｇ／ｋｇである、実施形態９２に記載の組成物。
９４．前記ゲル化剤はジェランである、実施形態９３に記載の組成物。
９５．前記組成物中のジェランの濃度は約１．０ｇ／ｋｇ〜約１３ｇ／ｋｇの間である、実施形態９４に記載の組成物。
９６．前記組成物中のジェランの濃度は約６．８ｇ／ｋｇである、実施形態９５に記載の組成物。
９７．前記ゲル化剤はキサンタンガムまたはアルギン酸ナトリウムである、実施形態８９に記載の組成物。
９８．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約３．４ｇ／ｋｇ〜約１７ｇ／ｋｇの間である、実施形態９７に記載の組成物。
９９．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約９ｇ／ｋｇである、実施形態９８に記載の組成物。
１００．前記ゲル化剤はポリアクリルアミドである、実施形態８９に記載の組成物。
１０１．前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は約５０ｇ／ｋｇ〜約２００ｇ／ｋｇの間である、実施形態１００に記載の組成物。
１０２．前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は約１５０ｇ／ｋｇである、実施形態１０１に記載の組成物。
１０３．前記ゲル化剤はグアーガムである、実施形態８９に記載の組成物。
１０４．前記組成物中のグアーガムの濃度は約１０ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間である、実施形態１０３に記載の組成物。
１０５．前記組成物中のグアーガムの濃度は約２１ｇ／ｋｇである、実施形態１０４に記載の組成物。
１０６．前記組成物は液体である、実施形態４６〜８７のいずれか１つに記載の組成物。
１０７．前記組成物はゲルである、実施形態４６〜１０５のいずれか１つに記載の組成物。
１０８．前記組成物は、７．３±０．５のｐＨを有する、実施形態１および４６〜１０７のいずれか１つに記載の組成物。
１０９．前記組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含まない、実施形態１〜１０８のいずれか１つに記載の組成物。
１１０．前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、実施形態１〜１０９のいずれか１つに記載の組成物。
１１１．細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、実施形態４６〜１１０のいずれか１つに記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
１１２．前記細胞集団は、膜の第１の面に配置され、前記膜の第２の面は、実施形態４６〜１１０のいずれか１つに記載の組成物と接触している、実施形態１１１に記載の方法。
１１３．前記膜は透過性である、実施形態１１２に記載の方法。
１１４．前記細胞集団内の１種以上の細胞は好気性生物である、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１５．前記細胞集団内の１種以上の細胞は嫌気性生物である、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１６．前記嫌気性生物は偏性嫌気性生物である、実施形態１１５に記載の方法。
１１７．前記細胞集団内の１種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１８．前記スタフィロコッカス属は黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、またはスタフィロコッカス・ホミニスである、実施形態１１７に記載の方法。
１１９．前記メチロバクテリウム属はメチロバクテリウム・ラジオトレランスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２０．前記バチルス属はバチルス・クラウシイ、バチルス・イドリエンシス、バチルス・リケニフォルミス、またはバチルス・スブスチリス(Bacillus substilis)である、実施形態１１７に記載の方法。
１２１．前記バチルス属は酸化ストレスを受けている、実施形態１１７または１２０に記載の方法。
１２２．前記アスペルギルス属はアスペルギルス・ブラジリエンシスまたはアスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)である、実施形態１１７に記載の方法。
１２３．前記コリネバクテリウム属はコリネバクテリウム・ツバークロステアリクムまたはゼローシス菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１２４．前記デルマコッカス属はデルマコッカス・ニシノミヤエンシスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２５．前記エシェリキア属は大腸菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１２６．前記コクリア属はコクリア・リゾフィラである、実施形態１１７に記載の方法。
１２７．前記ミクロコッカス属はミクロコッカス・ルテウスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２８．前記パエニバチルス属はパエニバチルス・グルカノリティカスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２９．前記ペニシリウム属はペニシリウム・クリソゲナムまたはペニシリウム・ノタタムである、実施形態１１７に記載の方法。
１３０．前記シュードモナス属は緑膿菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１３１．前記ストレプトコッカス属は化膿レンサ球菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１３２．前記ストレプトマイセス属はストレプトマイセス・ハルステディイである、実施形態１１７に記載の方法。
１３３．前記アシネトバクター属はアシネトバクター・ルオフィイ(Acinetobacter lwofii)である、実施形態１１７に記載の方法。
１３４．前記プロピオニバクテリウム属はプロピオニバクテリウム・アクネスである、実施形態１１７に記載の方法。
１３５．前記エクセロヒルム属はエクセロヒルム・ロストラタムである、実施形態１１７に記載の方法。
１３６．前記細胞集団はサンプル由来である、実施形態１１１〜１３５のいずれか１つに記載の方法。
１３７．前記サンプルは、多細胞生物から得られた流体または組織を含んでなる、実施形態１３６に記載の方法。
１３８．前記サンプルは動物の体液または組織を含んでなる、実施形態１３７に記載の方法、。
１３９．前記サンプルはヒト由来である、実施形態１３８に記載の方法。
１４０．前記サンプルは非ヒト脊椎動物由来である、実施形態１３８に記載の方法。
１４１．前記サンプルは、呼吸器、尿生殖器、生殖管、中枢神経系、尿、血液、皮膚、血漿、血清、唾液、創傷組織、創傷滲出液、生検組織、糞便、生殖管、および固形組織のサンプル、およびそれらの誘導体からなる群から選択される、実施形態１３７〜１４０のいずれか１つに記載の方法。
１４２．前記サンプルは血液または尿サンプルである、実施形態１４１に記載の方法。
１４３．前記サンプルは植物由来である、実施形態１３７に記載の方法。
１４４．前記サンプルは、環境の空気、土壌、もしくは水、または環境に曝された表面、物体、もしくは生物をサンプリングすることによって得られる、実施形態１３６〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
１４５．前記サンプルは、ヒトまたは動物における局所使用または内部使用のための医薬品、化粧品、血液製剤、または他の製品の製造における原材料、完成品、または中間製品；食品、飲料、または栄養補給剤の製造における原材料、中間製品、または完成品；医療用または体外診断用機器の製造における原材料、中間製品、または完成品；化学製品；工業上の表面；器具類；ならびに機械類からなる群から選択される材料から得られる、実施形態１３６に記載の方法。
１４６．前記サンプルは、前記接触の前にそれを液化しかつ／またはホモジナイズするために処理される、実施形態１３６〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４７．前記サンプルは、前記接触の前に前記細胞集団以外の物質または物体を除去するために処理される、実施形態１３６〜１４６のいずれか１つに記載の方法。
１４８．実施形態４６〜１１０のいずれか１つに記載の組成物を調製する方法であって、
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．５に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。
１４９．ｖｉ）前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約６５℃に保つことをさらに含んでなる、実施形態１４８に記載の方法。
１５０．工程ｉｉ）における前記冷却は室温に冷却することである、実施形態１４８または１４９に記載の方法。
１５１．工程ｉｉ）における前記冷却は約４２℃に冷却することである、実施形態１４８または１４９に記載の方法。
１５２．工程ｉ）の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５１のいずれか１つに記載の方法。
１５３．工程ｉ）の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
１５４．工程ｉ）の後に前記混合物に界面活性剤を加えることをさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
１５５．前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態１５３または１５４に記載の方法。
１５６．前記界面活性剤は、５％（ｗ／ｖ）の前記界面活性剤を含んでなる水溶液として提供される、実施形態１５３〜１５５のいずれか１つに記載の方法。
１５７．調製工程が完了した後に前記組成物を保存容器に移すことをさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５６のいずれか１つに記載の方法。
１５８．前記保存容器はボトル、ジャー、バイアル、アンプル、またはカセットである、実施形態１５７に記載の方法。
１５９．前記移入後に前記保存容器をγ線照射処理することをさらに含んでなる、実施形態１５７または１５８に記載の方法。
１６０．前記γ線照射処理の線量は１０ｋＧｙより高い、実施形態１５９に記載の方法。
１６１．前記γ線照射処理の線量は約１０ｋＧｙ〜約５０ｋＧｙの間である、実施形態１６０に記載の方法。
１６２．前記γ線照射処理の線量は約１０ｋＧｙ〜約４０ｋＧｙの間である、実施形態１６１に記載の方法。
１６３．前記γ線照射処理の線量は約１０ｋＧｙ〜約２０ｋＧｙの間である、実施形態に記載の方法１６２。
１６４．前記γ線照射処理の線量は約１２ｋＧｙ〜約１９ｋＧｙの間である、実施形態１６３に記載の方法。
１６５．前記組成物は消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、実施形態１〜１６４のいずれかに記載の組成物または方法。
１６６．前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンである、実施形態１６５の組成物または方法。
１．カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる組成物。
２．２２℃において、前記組成物は固体である、実施形態１に記載の組成物。
３．前記組成物は粉末である、実施形態２に記載の組成物。
４．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態２または３に記載の組成物。
５．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態４に記載の組成物。
６．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態５に記載の組成物。
７．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２４５．３ｇ／ｋｇのカゼイン消化物を含んでなる、実施形態６に記載の組成物。
８．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のダイズ消化物を含んでなる、実施形態２〜７のいずれか１つに記載の組成物。
９．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約２００ｇ／ｋｇ間のダイズ消化物を含んでなる、実施形態８に記載の組成物。
１０．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約１００ｇ／ｋｇの間(between about 10 g/kg about 100 g/kg)のダイズ消化物を含んでなる、実施形態９に記載の組成物。
１１．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約４３．８ｇ／ｋｇのダイズ消化物を含んでなる、実施形態１０に記載の組成物。
１２．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態２〜１１のいずれか１つに記載の組成物。
１３．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態１２に記載の組成物。
１４．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態１３に記載の組成物。
１５．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２１９ｇ／ｋｇの動物組織消化物を含んでなる、実施形態１４に記載の組成物。
１６．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態２〜１５のいずれか１つに記載の組成物。
１７．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態１６に記載の組成物。
１８．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態１７に記載の組成物。
１９．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２１９ｇ／ｋｇの酵母抽出物を含んでなる、実施形態１８に記載の組成物。
２０．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、実施形態２〜１９のいずれか１つに記載の組成物。
２１．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約５０ｇ／ｋｇ〜約４００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、実施形態２０に記載の組成物。
２２．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、実施形態２１に記載の組成物。
２３．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約２５５ｇ／ｋｇのデキストロースを含んでなる、実施形態２２に記載の組成物。
２４．前記組成物は、水性媒体への溶解時に０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２〜２３のいずれか１つに記載の組成物。
２５．前記組成物は、水性媒体への溶解時に１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜５０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２４に記載の組成物。
２６．前記組成物は、水性媒体への溶解時に２ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜２０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２５に記載の組成物。
２７．前記組成物は、水性媒体への溶解時に３ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態２６に記載の組成物。
２８．前記組成物は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間のヘミンを含んでなる、実施形態２〜２７のいずれか１つに記載の組成物。
２９．前記組成物は、約０．４ｇ／ｋｇのヘミンを含んでなる、実施形態２８に記載の組成物。
３０．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約８ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、実施形態２〜２９のいずれか１つに記載の組成物。
３１．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１２ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、実施形態３０に記載の組成物。
３２．前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１７．５ｇ／ｋｇのＬ−シスチンを含んでなる、実施形態３１に記載の組成物。
３３．前記組成物はゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態２〜３２のいずれか１つに記載の組成物。
３４．前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、実施形態３３に記載の組成物。
３５．前記ゲル化剤は寒天である、実施形態３４に記載の組成物。
３６．前記組成物は、約１０ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３３〜３５のいずれか１つに記載の組成物。
３７．前記組成物は、約１００ｇ／ｋｇ〜約６００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３６に記載の組成物。
３８．前記組成物は、約２５０ｇ／ｋｇ〜約４５０ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３７に記載の組成物。
３９．前記組成物は、約３５０ｇ／ｋｇの前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態３８に記載の組成物。
４０．前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態２〜３９のいずれか１つに記載の組成物。
４１．前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態４０に記載の組成物。
４２．前記組成物は、約０．４ｇ／ｋｇ〜約１９０ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４０または４１に記載の組成物。
４３．前記組成物は、約４ｇ／ｋｇ〜約８０ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４２に記載の組成物。
４４．前記組成物は、約４ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４３に記載の組成物。
４５．前記組成物は、約２０ｇ／ｋｇの前記界面活性剤を含んでなる、実施形態４４に記載の組成物。
４６．２２℃において、前記組成物は液体またはゲルである、実施形態１に記載の組成物。
４７．精製水をさらに含んでなる、実施形態１または４６に記載の組成物。
４８．ヒツジ血液をさらに含んでなる、実施形態１、４６、および４７のいずれか１つに記載の組成物。
４９．前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約２００ｍＬ／ｋｇの間である、実施形態４８に記載の組成物。
５０．前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約１００ｍＬ／ｋｇの間(between about 5 mL/kg about 100 mL/kg)である、実施形態４９に記載の組成物。
５１．前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５０ｍＬ／ｋｇである、実施形態５０に記載の組成物。
５２．前記ヒツジ血液中の赤血球は溶解している、実施形態４８〜５１のいずれか１つに記載の組成物。
５３．前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、実施形態４８〜５２のいずれか１つに記載の組成物。
５４．前記ヒツジ血液は、脱線維素ヒツジ血液である、実施形態４８〜５２のいずれか１つに記載の組成物。
５５．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜５４のいずれか１つに記載の組成物。
５６．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態５５に記載の組成物。
５７．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態５６に記載の組成物。
５８．前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約５．６ｇ／ｋｇである、実施形態５７に記載の組成物。
５９．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．０５ｇ／ｋｇ〜約３０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜５８のいずれか１つに記載の組成物。
６０．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態５９に記載の組成物。
６１．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約３ｇ／ｋｇの間である、実施形態６０に記載の組成物。
６２．前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約１ｇ／ｋｇである、実施形態６１に記載の組成物。
６３．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜６２のいずれか１つに記載の組成物。
６４．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６３に記載の組成物。
６５．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６４に記載の組成物。
６６．前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約５ｇ／ｋｇである、実施形態６５に記載の組成物。
６７．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜６６のいずれか１つに記載の組成物。
６８．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６７に記載の組成物。
６９．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態６８に記載の組成物。
７０．前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約５ｇ／ｋｇである、実施形態６９に記載の組成物。
７１．前記組成物中のデキストロースの濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜７０のいずれか１つに記載の組成物。
７２．前記組成物中のデキストロースの濃度は、約１ｇ／ｋｇ〜約２０ｇ／ｋｇの間である、実施形態７１に記載の組成物。
７３．前記組成物中のデキストロースの濃度は、約２ｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇの間である、実施形態７２に記載の組成物。
７４．前記組成物中のデキストロースの濃度は、５．８ｇ／ｋｇである、実施形態７３に記載の組成物。
７５．前記組成物は、０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／ｐＨの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態４６〜７４のいずれか１つに記載の組成物。
７６．前記組成物は、水性媒体への溶解時に１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜５０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態７５に記載の組成物。
７７．前記組成物は、水性媒体への溶解時に２ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜２０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態７６に記載の組成物。
７８．前記組成物は、水性媒体への溶解時に３ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１０ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態７７に記載の組成物。
７９．前記組成物中のヘミンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇである、実施形態４６〜７８のいずれか１つに記載の組成物。
８０．前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約０．５ｇ／ｋｇの間である、実施形態４６〜７９のいずれか１つに記載の組成物。
８１．前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．４ｇ／ｋｇである、実施形態８０に記載の組成物。
８２．界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態４６〜８１のいずれか１つに記載の組成物。
８３．前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態８２に記載の組成物。
８４．前記組成物は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８３に記載の組成物。
８５．前記組成物は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約２ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８４に記載の組成物。
８６．前記組成物は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８５に記載の組成物。
８７．前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇの前記界面活性剤を含んでなる、実施形態８６に記載の組成物。
８８．ゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態４６〜８７のいずれか１つに記載の組成物。
８９．前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、実施形態８８に記載の組成物。
９０．前記ゲル化剤は寒天である、実施形態８９に記載の組成物。
９１．前記ゲル化剤は、リゾビウム属種によって生産された多糖である、実施形態９０に記載の組成物。
９２．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約５ｇ／ｋｇ〜約２５ｇ／ｋｇの間である、実施形態９０または９１に記載の組成物。．
９３．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約１３．５ｇ／ｋｇである、実施形態９２に記載の組成物。
９４．前記ゲル化剤はジェランである、実施形態９３に記載の組成物。
９５．前記組成物中のジェランの濃度は約１．０ｇ／ｋｇ〜約１３ｇ／ｋｇの間である、実施形態９４に記載の組成物。
９６．前記組成物中のジェランの濃度は約６．８ｇ／ｋｇである、実施形態９５に記載の組成物。
９７．前記ゲル化剤はキサンタンガムまたはアルギン酸ナトリウムである、実施形態８９に記載の組成物。
９８．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約３．４ｇ／ｋｇ〜約１７ｇ／ｋｇの間である、実施形態９７に記載の組成物。
９９．前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約９ｇ／ｋｇである、実施形態９８に記載の組成物。
１００．前記ゲル化剤はポリアクリルアミドである、実施形態８９に記載の組成物。
１０１．前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は約５０ｇ／ｋｇ〜約２００ｇ／ｋｇの間である、実施形態１００に記載の組成物。
１０２．前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は約１５０ｇ／ｋｇである、実施形態１０１に記載の組成物。
１０３．前記ゲル化剤はグアーガムである、実施形態８９に記載の組成物。
１０４．前記組成物中のグアーガムの濃度は約１０ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間である、実施形態１０３に記載の組成物。
１０５．前記組成物中のグアーガムの濃度は約２１ｇ／ｋｇである、実施形態１０４に記載の組成物。
１０６．前記組成物は液体である、実施形態４６〜８７のいずれか１つに記載の組成物。
１０７．前記組成物はゲルである、実施形態４６〜１０５のいずれか１つに記載の組成物。
１０８．前記組成物は、７．３±０．５のｐＨを有する、実施形態１および４６〜１０７のいずれか１つに記載の組成物。
１０９．前記組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含まない、実施形態１〜１０８のいずれか１つに記載の組成物。
１１０．前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、実施形態１〜１０９のいずれか１つに記載の組成物。
１１１．細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、実施形態４６〜１１０のいずれか１つに記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
１１２．前記細胞集団は、膜の第１の面に配置され、前記膜の第２の面は、実施形態４６〜１１０のいずれか１つに記載の組成物と接触している、実施形態１１１に記載の方法。
１１３．前記膜は透過性である、実施形態１１２に記載の方法。
１１４．前記細胞集団内の１種以上の細胞は好気性生物である、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１５．前記細胞集団内の１種以上の細胞は嫌気性生物である、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１６．前記嫌気性生物は偏性嫌気性生物である、実施形態１１５に記載の方法。
１１７．前記細胞集団内の１種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
１１８．前記スタフィロコッカス属は黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、またはスタフィロコッカス・ホミニスである、実施形態１１７に記載の方法。
１１９．前記メチロバクテリウム属はメチロバクテリウム・ラジオトレランスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２０．前記バチルス属はバチルス・クラウシイ、バチルス・イドリエンシス、バチルス・リケニフォルミス、またはバチルス・スブスチリス(Bacillus substilis)である、実施形態１１７に記載の方法。
１２１．前記バチルス属は酸化ストレスを受けている、実施形態１１７または１２０に記載の方法。
１２２．前記アスペルギルス属はアスペルギルス・ブラジリエンシスまたはアスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)である、実施形態１１７に記載の方法。
１２３．前記コリネバクテリウム属はコリネバクテリウム・ツバークロステアリクムまたはゼローシス菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１２４．前記デルマコッカス属はデルマコッカス・ニシノミヤエンシスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２５．前記エシェリキア属は大腸菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１２６．前記コクリア属はコクリア・リゾフィラである、実施形態１１７に記載の方法。
１２７．前記ミクロコッカス属はミクロコッカス・ルテウスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２８．前記パエニバチルス属はパエニバチルス・グルカノリティカスである、実施形態１１７に記載の方法。
１２９．前記ペニシリウム属はペニシリウム・クリソゲナムまたはペニシリウム・ノタタムである、実施形態１１７に記載の方法。
１３０．前記シュードモナス属は緑膿菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１３１．前記ストレプトコッカス属は化膿レンサ球菌である、実施形態１１７に記載の方法。
１３２．前記ストレプトマイセス属はストレプトマイセス・ハルステディイである、実施形態１１７に記載の方法。
１３３．前記アシネトバクター属はアシネトバクター・ルオフィイ(Acinetobacter lwofii)である、実施形態１１７に記載の方法。
１３４．前記プロピオニバクテリウム属はプロピオニバクテリウム・アクネスである、実施形態１１７に記載の方法。
１３５．前記エクセロヒルム属はエクセロヒルム・ロストラタムである、実施形態１１７に記載の方法。
１３６．前記細胞集団はサンプル由来である、実施形態１１１〜１３５のいずれか１つに記載の方法。
１３７．前記サンプルは、多細胞生物から得られた流体または組織を含んでなる、実施形態１３６に記載の方法。
１３８．前記サンプルは動物の体液または組織を含んでなる、実施形態１３７に記載の方法、。
１３９．前記サンプルはヒト由来である、実施形態１３８に記載の方法。
１４０．前記サンプルは非ヒト脊椎動物由来である、実施形態１３８に記載の方法。
１４１．前記サンプルは、呼吸器、尿生殖器、生殖管、中枢神経系、尿、血液、皮膚、血漿、血清、唾液、創傷組織、創傷滲出液、生検組織、糞便、生殖管、および固形組織のサンプル、およびそれらの誘導体からなる群から選択される、実施形態１３７〜１４０のいずれか１つに記載の方法。
１４２．前記サンプルは血液または尿サンプルである、実施形態１４１に記載の方法。
１４３．前記サンプルは植物由来である、実施形態１３７に記載の方法。
１４４．前記サンプルは、環境の空気、土壌、もしくは水、または環境に曝された表面、物体、もしくは生物をサンプリングすることによって得られる、実施形態１３６〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
１４５．前記サンプルは、ヒトまたは動物における局所使用または内部使用のための医薬品、化粧品、血液製剤、または他の製品の製造における原材料、完成品、または中間製品；食品、飲料、または栄養補給剤の製造における原材料、中間製品、または完成品；医療用または体外診断用機器の製造における原材料、中間製品、または完成品；化学製品；工業上の表面；器具類；ならびに機械類からなる群から選択される材料から得られる、実施形態１３６に記載の方法。
１４６．前記サンプルは、前記接触の前にそれを液化しかつ／またはホモジナイズするために処理される、実施形態１３６〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４７．前記サンプルは、前記接触の前に前記細胞集団以外の物質または物体を除去するために処理される、実施形態１３６〜１４６のいずれか１つに記載の方法。
１４８．実施形態４６〜１１０のいずれか１つに記載の組成物を調製する方法であって、
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．５に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。
１４９．ｖｉ）前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約６５℃に保つことをさらに含んでなる、実施形態１４８に記載の方法。
１５０．工程ｉｉ）における前記冷却は室温に冷却することである、実施形態１４８または１４９に記載の方法。
１５１．工程ｉｉ）における前記冷却は約４２℃に冷却することである、実施形態１４８または１４９に記載の方法。
１５２．工程ｉ）の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５１のいずれか１つに記載の方法。
１５３．工程ｉ）の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
１５４．工程ｉ）の後に前記混合物に界面活性剤を加えることをさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
１５５．前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態１５３または１５４に記載の方法。
１５６．前記界面活性剤は、５％（ｗ／ｖ）の前記界面活性剤を含んでなる水溶液として提供される、実施形態１５３〜１５５のいずれか１つに記載の方法。
１５７．調製工程が完了した後に前記組成物を保存容器に移すことをさらに含んでなる、実施形態１４８〜１５６のいずれか１つに記載の方法。
１５８．前記保存容器はボトル、ジャー、バイアル、アンプル、またはカセットである、実施形態１５７に記載の方法。
１５９．前記移入後に前記保存容器をγ線照射処理することをさらに含んでなる、実施形態１５７または１５８に記載の方法。
１６０．前記γ線照射処理の線量は１０ｋＧｙより高い、実施形態１５９に記載の方法。
１６１．前記γ線照射処理の線量は約１０ｋＧｙ〜約５０ｋＧｙの間である、実施形態１６０に記載の方法。
１６２．前記γ線照射処理の線量は約１０ｋＧｙ〜約４０ｋＧｙの間である、実施形態１６１に記載の方法。
１６３．前記γ線照射処理の線量は約１０ｋＧｙ〜約２０ｋＧｙの間である、実施形態に記載の方法１６２。
１６４．前記γ線照射処理の線量は約１２ｋＧｙ〜約１９ｋＧｙの間である、実施形態１６３に記載の方法。
１６５．前記組成物は消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、実施形態１〜１６４のいずれかに記載の組成物または方法。
１６６．前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンである、実施形態１６５の組成物または方法。
他の実施形態
本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、記載した組成物および本発明の使用方法の様々な改変および変形は当業者には明らかであろう。本発明を具体的な実施形態に関連して説明してきたが、特許請求する本発明はそのような具体的な実施形態に過度に限定されるべきではないことは理解されたい。実際に、当業者に自明な本発明を実施するための記載した形態の様々な改変は、本発明の範囲内であることが意図されている。
本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、記載した組成物および本発明の使用方法の様々な改変および変形は当業者には明らかであろう。本発明を具体的な実施形態に関連して説明してきたが、特許請求する本発明はそのような具体的な実施形態に過度に限定されるべきではないことは理解されたい。実際に、当業者に自明な本発明を実施するための記載した形態の様々な改変は、本発明の範囲内であることが意図されている。
他の実施形態は特許請求の範囲に含まれる。
他の実施形態は、下記を含む。
［項１］
カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる組成物。
［項２］
２２℃において、前記組成物は固体である、項１に記載の組成物。
［項３］
前記組成物は粉末である、項２に記載の組成物。
［項４］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、項２または３に記載の組成物。［項５］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のダイズ消化物を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項６］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項７］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項８］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、項２に記載の組成物。
［項９］
前記組成物は、水性媒体への溶解時に０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１０］
前記組成物は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間のヘミンを含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１１］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約８ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１２］
前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１３］
前記界面活性剤はポリソルベートである、項１２に記載の組成物。
［項１４］
２２℃において、前記組成物は液体またはゲルである、項１に記載の組成物。
［項１５］
精製水をさらに含んでなる、項１または１４に記載の組成物。
［項１６］
ヒツジ血液をさらに含んでなる、項１または１４に記載の組成物。
［項１７］
前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約２００ｍＬ／ｋｇの間である、項１６に記載の組成物。
［項１８］
前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、項１６に記載の組成物。
［項１９］
前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２０］
前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．０５ｇ／ｋｇ〜約３０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２１］
前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２２］
前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２３］
前記組成物中のデキストロースの濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２４］
前記組成物は、０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／ｐＨの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、項１４に記載の組成物。
［項２５］
前記組成物中のヘミンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇである、項１４に記載の組成物。［項２６］
前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約０．５ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２７］
界面活性剤をさらに含んでなる、項１４に記載の組成物。．
［項２８］
前記界面活性剤はポリソルベートである、項２７に記載の組成物。
［項２９］
ゲル化剤をさらに含んでなる、項１または１４に記載の組成物。
［項３０］
前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、項２９に記載の組成物。
［項３１］
前記ゲル化剤は寒天である、項３０に記載の組成物。
［項３２］
前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、固体では約１０ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤、液体またはゲルでは約５ｇ／ｋｇ〜約２５ｇ／ｋｇの間である、項３０に記載の組成物。
［項３３］
前記組成物は、７．３±０．５のｐＨを有する、項１または１４に記載の組成物。
［項３４］
前記組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含まない、項１に記載の組成物。
［項３５］
前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、項１に記載の組成物。
［項３６］
消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、項１に記載の組成物。
［項３７］
前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンである、項３６に記載の組成物。
［項３８］
細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、項１４に記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
［項３９］
前記細胞集団は、膜の第１の面に配置され、前記膜の第２の面は、前記組成物と接触している、項３８に記載の方法。
［項４０］
前記細胞集団内の１種以上の細胞は好気性生物である、項３８に記載の方法。
［項４１］
前記細胞集団内の１種以上の細胞は嫌気性生物である、項３８に記載の方法。
［項４２］
前記細胞集団内の１種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、項３８に記載の方法。
［項４３］
項１４に記載の組成物を調製する方法であって、
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．５に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。
［項４４］
前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約６５℃に保つことをさらに含む、項４３に記載の方法。
［項４５］
工程ｉｉ）における前記冷却は室温に冷却することである、項４３に記載の方法。
［項４６］
工程ｉ）の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、項４３に記載の方法。
［項４７］
工程ｉ）の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、項４３に記載の方法。
他の実施形態は特許請求の範囲に含まれる。
［項１］
カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる組成物。
［項２］
２２℃において、前記組成物は固体である、項１に記載の組成物。
［項３］
前記組成物は粉末である、項２に記載の組成物。
［項４］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、項２または３に記載の組成物。［項５］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のダイズ消化物を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項６］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項７］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項８］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、項２に記載の組成物。
［項９］
前記組成物は、水性媒体への溶解時に０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１０］
前記組成物は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間のヘミンを含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１１］
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約８ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１２］
前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、項２に記載の組成物。
［項１３］
前記界面活性剤はポリソルベートである、項１２に記載の組成物。
［項１４］
２２℃において、前記組成物は液体またはゲルである、項１に記載の組成物。
［項１５］
精製水をさらに含んでなる、項１または１４に記載の組成物。
［項１６］
ヒツジ血液をさらに含んでなる、項１または１４に記載の組成物。
［項１７］
前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約２００ｍＬ／ｋｇの間である、項１６に記載の組成物。
［項１８］
前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、項１６に記載の組成物。
［項１９］
前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２０］
前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．０５ｇ／ｋｇ〜約３０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２１］
前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２２］
前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２３］
前記組成物中のデキストロースの濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２４］
前記組成物は、０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／ｐＨの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、項１４に記載の組成物。
［項２５］
前記組成物中のヘミンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇである、項１４に記載の組成物。［項２６］
前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約０．５ｇ／ｋｇの間である、項１４に記載の組成物。
［項２７］
界面活性剤をさらに含んでなる、項１４に記載の組成物。．
［項２８］
前記界面活性剤はポリソルベートである、項２７に記載の組成物。
［項２９］
ゲル化剤をさらに含んでなる、項１または１４に記載の組成物。
［項３０］
前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、項２９に記載の組成物。
［項３１］
前記ゲル化剤は寒天である、項３０に記載の組成物。
［項３２］
前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、固体では約１０ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤、液体またはゲルでは約５ｇ／ｋｇ〜約２５ｇ／ｋｇの間である、項３０に記載の組成物。
［項３３］
前記組成物は、７．３±０．５のｐＨを有する、項１または１４に記載の組成物。
［項３４］
前記組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含まない、項１に記載の組成物。
［項３５］
前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、項１に記載の組成物。
［項３６］
消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、項１に記載の組成物。
［項３７］
前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンである、項３６に記載の組成物。
［項３８］
細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、項１４に記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
［項３９］
前記細胞集団は、膜の第１の面に配置され、前記膜の第２の面は、前記組成物と接触している、項３８に記載の方法。
［項４０］
前記細胞集団内の１種以上の細胞は好気性生物である、項３８に記載の方法。
［項４１］
前記細胞集団内の１種以上の細胞は嫌気性生物である、項３８に記載の方法。
［項４２］
前記細胞集団内の１種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、項３８に記載の方法。
［項４３］
項１４に記載の組成物を調製する方法であって、
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．５に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。
［項４４］
前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約６５℃に保つことをさらに含む、項４３に記載の方法。
［項４５］
工程ｉｉ）における前記冷却は室温に冷却することである、項４３に記載の方法。
［項４６］
工程ｉ）の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、項４３に記載の方法。
［項４７］
工程ｉ）の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、項４３に記載の方法。
他の実施形態は特許請求の範囲に含まれる。
Claims (47)
- カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる組成物。
- ２２℃において、前記組成物は固体である、請求項１に記載の組成物。
- 前記組成物は粉末である、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のカゼイン消化物を含んでなる、請求項２または３に記載の組成物。
- 前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約０．５ｇ／ｋｇ〜約３００ｇ／ｋｇの間のダイズ消化物を含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の動物組織消化物を含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間の酵母抽出物を含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約１ｇ／ｋｇ〜約５００ｇ／ｋｇの間のデキストロースを含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物は、水性媒体への溶解時に０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物は、約０．２ｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの間のヘミンを含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約８ｇ／ｋｇ〜約４０ｇ／ｋｇの間のＬ−シスチンを含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、請求項２に記載の組成物。
- 前記界面活性剤はポリソルベートである、請求項１２に記載の組成物。
- ２２℃において、前記組成物は液体またはゲルである、請求項１に記載の組成物。
- 精製水をさらに含んでなる、請求項１または１４に記載の組成物。
- ヒツジ血液をさらに含んでなる、請求項１または１４に記載の組成物。
- 前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約５ｍＬ／ｋｇ〜約２００ｍＬ／ｋｇの間である、請求項１６に記載の組成物。
- 前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、請求項１６に記載の組成物。
- 前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約０．０５ｇ／ｋｇ〜約３０ｇ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物中のデキストロースの濃度は、約０．１ｇ／ｋｇ〜約５０ｇ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物は、０．１ｍｍｏｌ／（ｐＨ単位）〜１００ｍｍｏｌ／ｐＨの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物中のヘミンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇである、請求項１４に記載の組成物。
- 前記組成物中のＬ−シスチンの濃度は、約０．０１ｇ／ｋｇ〜約０．５ｇ／ｋｇの間である、請求項１４に記載の組成物。
- 界面活性剤をさらに含んでなる、請求項１４に記載の組成物。．
- 前記界面活性剤はポリソルベートである、請求項２７に記載の組成物。
- ゲル化剤をさらに含んでなる、請求項１または１４に記載の組成物。
- 前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種（ＣＮＣＭ番号：Ｉ−１８０９）によって生産された多糖からなる群から選択される、請求項２９に記載の組成物。
- 前記ゲル化剤は寒天である、請求項３０に記載の組成物。
- 前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、固体では約１０ｇ／ｋｇ〜約８００ｇ／ｋｇの間の前記ゲル化剤、液体またはゲルでは約５ｇ／ｋｇ〜約２５ｇ／ｋｇの間である、請求項３０に記載の組成物。
- 前記組成物は、７．３±０．５のｐＨを有する、請求項１または１４に記載の組成物。
- 前記組成物は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含まない、請求項１に記載の組成物。
- 前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、請求項１に記載の組成物。
- 消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、請求項１に記載の組成物。
- 前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート８０、および／またはレシチンである、請求項３６に記載の組成物。
- 細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、請求項１４に記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
- 前記細胞集団は、膜の第１の面に配置され、前記膜の第２の面は、前記組成物と接触している、請求項３８に記載の方法。
- 前記細胞集団内の１種以上の細胞は好気性生物である、請求項３８に記載の方法。
- 前記細胞集団内の１種以上の細胞は嫌気性生物である、請求項３８に記載の方法。
- 前記細胞集団内の１種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、請求項３８に記載の方法。
- 請求項１４に記載の組成物を調製する方法であって、
ｉ）精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびＬ−シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること；
ｉｉ）所望により、前記混合物を冷却すること；
ｉｉｉ）所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりｐＨを７．３±０．５に調整すること；および
ｉｖ）前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。 - 前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約６５℃に保つことをさらに含む、請求項４３に記載の方法。
- 工程ｉｉ）における前記冷却は室温に冷却することである、請求項４３に記載の方法。
- 工程ｉ）の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、請求項４３に記載の方法。
- 工程ｉ）の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、請求項４３に記載の方法。
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