JP7084719B2 - 微生物増殖培地およびそれを使用する方法 - Google Patents
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Description
i)精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびL-シスチンを含有する混合物をオートクレーブ処理すること;
ii)所望により、前記混合物を室温に冷却すること;
iii)所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりpHを7.3±0.2に調整すること;および
iv)前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む。
増殖培地組成
本発明は、ヒト関連生物、嫌気性生物、水生生物、環境生物、およびカビを含む多くの属の多種多様な生物の増殖を促進する改良された増殖培地を提供する。従って、その培地は、アッセイおよび細胞培養のための汎用培地として使用され得る。培地の多用途性により、無菌試験におけるトリプチカーゼダイズブロス(TSB)および液体チオグリコール酸培地(FTM)の代わりにそれを使用することが可能になる。本発明の増殖培地の例示的な使用分野には、全般的な細胞培養および液体、空気、土壌、表面、工業的もしくは臨床的サンプル、医薬品(無菌または非無菌)、食品、飲料製品、または栄養補給剤の微生物バイオバーデンについての検査が含まれる。その増殖培地はまた、臨床アッセイ、例えば、血液または他の感染についてのアッセイ、および抗生物質耐性についてのアッセイのような他のアッセイにも使用し得る。本発明は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびL-シスチンを含有する組成物を特徴とする。その組成物は、本発明の方法により本発明の増殖培地を調製するために、液体(例えば、水および/またはヒツジ血液(例えば、脱線維素ヒツジ血液または溶血ヒツジ血液))と混合し得る固体であり得る。組成物はまた、界面活性剤を含み得る。好ましくは、その組成物は、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンおよび/または添加ナトリウムを含有しない。生物学的に誘導された成分はナトリウムを含有し得るため、その組成物はナトリウムフリーではない。本発明のこの組成物は、低ナトリウム含有量により、シェドラーブロスでの増殖と比較して、酸化ストレスを受けた枯草菌の優れた増殖を提供するため、有利である。加えて、より高いカリウム含有量、例えば、トリス(Tris)ではなくリン酸カリウムバッファーを使用することにより、シェドラーブロスでの増殖と比較して、例えば、酸化ストレスを受けた枯草菌の、優れた増殖をもたらした。
本発明の増殖培地は、アッセイおよび細胞培養のための一般的な増殖培地として採用し得る。本発明の増殖培地の使用は、例えば、微生物(例えば、細菌または真菌)の増殖のために透過性の膜を採用する細胞培養デバイスの使用を含む、増殖に基づく無菌アッセイにおいて特に有利である。そのような細胞培養デバイスは、国際公開第2007/038478号、国際公開第2013/070730号、および国際公開第2013/158666号に詳細に記載されており、これらの開示は、その全体が引用することにより本明細書の一部とされる。具体的には、本発明の増殖培地は、国際公開第2013/070730号に記載されている方法に従って、グロースダイレクト(商標)無菌カセットとともに使用し得る。特定の利点としては、信頼性の高い無菌試験結果を迅速に達成し、それによって、医療および製造における効率的なコスト管理が可能になることが挙げられる。
本発明はまた、上記の本発明の組成物を含有するキットを特徴とする。本発明の組成物は、本発明のキットに乾燥物品、例えば、粉末、ゲル、または液体として含め得る。固体、例えば、粉末は、単一の容器(例えば、ボトル、アンプル、またはジャー)中に混合物として包装し得る。あるいは、固体、例えば、粉末は、別々の容器(例えば、バッグ、缶、ポーチ、ボトル、バイアル、アンプル、ジャー、またはそれらの組合せ)に包装し得る。混合物は、カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、L-シスチン、およびゲル化剤(例えば、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、エラジウム(商標)、またはそれらの組合せ)の1つ以上を含有し得る。これらの成分の相対量は上記のとおりである。
精製水(950mL)、カゼイン消化物(5.6g、NeogenまたはBD Biosciences)、ダイズ消化物(1g、Neogen)、リン酸二カリウム(2.5g、Sigma-Aldrich)、デキストロース(5.82g、Sigma-Aldrich)、動物組織消化物(5g、BD BiosciencesまたはNeogen)、酵母抽出物(5g、BD BiosciencesまたはNeogen)、リン酸一カリウム(0.31g、Sigma-Aldrich)、ヘミン(0.01g、Sigma-Aldrich)、およびL-シスチン(0.4g、Sigma-Aldrich)を含有する組成物をオートクレーブ処理した。組成物を室温に冷却し、KOHまたはHCl水溶液を用いてpHを7.3(±0.2)に調整した。次いで、組成物を65℃に加熱し、脱線維素ヒツジ血液(Northeast LaboratoriesまたはThermo Scientific)50mLを加えた。赤色から褐色に色が変化するまで温度を一定に保ち、その時点で組成物を周囲温度(室温、約22℃)に冷却した。
この実施例では、米国薬局方モノグラフ<71>に記載されている増殖に基づく無菌アッセイにおいて使用される標準培地と比較して、様々な微生物の増殖を支援する本発明の増殖培地の多用途性を例示する。標準培地はTSBおよびFTMである。
元のレシピに従って調製したシェドラーブロス(1)、トリスを含まないシェドラーブロス(2)、ナトリウムを実質的に含まない非生物学的誘導成分を含有するシェドラーブロス(3)、カリウムが多いシェドラーブロス(4)、本発明の増殖培地(5)、およびシェドラーチョコレート寒天(6)での、漂白剤ストレスを受けた枯草菌の回収を図1Aに示す。試験は、各培地の2つの異なるバッチを用いて三反復で行った。結果は、シェドラーチョコレート培地での回収に対して正規化した。図1Bに示されるように、結果は、粉末成分および/または血液の異なる基礎的ロットであっても再現可能である。
グロースダイレクト(登録商標)無菌カセット中での本発明の増殖培地における23種の異なる生物の増殖を、ペトリ皿でのTSBにおけるその生物の増殖と比較した。結果は、ペトリ皿でのTSAで観察された増殖に対して正規化した。3種の生物だけが良好な増殖についての70%カットオフ以下の回収を示した(USP基準)。2種の生物、デルマコッカス・ニシノミヤエンシスおよびメチロバクテリウム・ラジオトレランスでは、本発明の増殖培地における無菌カセット中での増殖は一貫して優れていた。図2はメチロバクテリウム・ラジオトレランスについてのデータを示している;しかしながら、TSAでは増殖は観察されなかったため、増殖をTSAに対して正規化することはできなかった。
無菌カセットの関連の中で異なる培地における増殖を調査し、寒天の変動を排除した。この研究の焦点は問題のある生物にあった。図3はこの比較を、本発明の増殖培地における増殖に対して正規化したデータを用いて示している。5種の生物では、総ての培地の間に有意差はなかった。総ての増殖は70%カットオフ~142%カットオフの間にある。2種の生物、ゼローシス菌およびエクセロヒルム・ロストラタムでは、増殖は本発明の増殖培地において優れている。ストレプトマイセス・ハルステディイおよびペニシリウム・クリソゲナムでは、TSBにおいて増殖が優れているが、総ての場合において、増殖が検出される。TSA、TSB、またはシェドラー血液もしくはチョコレート寒天で増殖することができ、本発明の増殖培地で増殖することができない生物は同定されなかった。
FTMは、嫌気性生物を液体形式で増殖させるために設計されている。この培地は、好気層および嫌気層の両方を有するため、多目的の培地であることが意図されている。これは液体増殖培地であるが濾過膜の表面での増殖を支援しないため、増殖は濁りの存在によってのみモニタリングすることができる。この情報の存在/非存在は、最確数(Most probable Number)(MPN)法を用いて定量的データに変換することができ、この場合、低レベルの接種物の反復10倍希釈物を増殖についてモニタリングし、増殖/非増殖のパターンを最も濃度の高い接種での最も可能性の高い接種物に変換することができる。
pH7.3±0.2を有する、精製水(950mL)、カゼイン消化物(5.6g)、ダイズ消化物(1g)、リン酸二カリウム(2.5g)、デキストロース(5.82g)、動物組織消化物(5g)、酵母抽出物(5g)、リン酸一カリウム(0.31g)、ヘミン(0.01g)、L-シスチン(0.4g)、および溶血ヒツジ血液(50mL)または脱線維素ヒツジ血液(50mL)を含有する増殖培地組成物を採用した。溶血ヒツジ血液を含有する組成物は、実施例1に記載のとおりに調製した混合物に溶血ヒツジ血液を45℃以下で加えたことを除いて、実施例1に記載のとおりに調製した。
pH7.3±0.2を有する、精製水(950mL)、カゼイン消化物(5.6g)、ダイズ消化物(1g)、リン酸二カリウム(2.5g)、デキストロース(5.82g)、動物組織消化物(5g)、酵母抽出物(5g)、リン酸一カリウム(0.31g)、ヘミン(0.01g)、L-シスチン(0.4g)、溶血ヒツジ血液(50mL)、および10mLの5%(w/v)ポリソルベート20を含有する増殖培地組成物を採用した。組成物は、溶血ヒツジ血液を含有する組成物は、実施例1に記載のとおりに調製した混合物に溶血ヒツジ血液を45℃以下で加えたことを除いて、実施例1に記載のとおりに調製した。
1.カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる組成物。
2.22℃において、前記組成物は固体である、実施形態1に記載の組成物。
3.前記組成物は粉末である、実施形態2に記載の組成物。
4.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態2または3に記載の組成物。
5.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約50g/kg~約400g/kgの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態4に記載の組成物。
6.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約100g/kg~約300g/kgの間のカゼイン消化物を含んでなる、実施形態5に記載の組成物。
7.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約245.3g/kgのカゼイン消化物を含んでなる、実施形態6に記載の組成物。
8.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約0.5g/kg~約300g/kgの間のダイズ消化物を含んでなる、実施形態2~7のいずれか1つに記載の組成物。
9.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約10g/kg~約200g/kg間のダイズ消化物を含んでなる、実施形態8に記載の組成物。
10.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約10g/kg~約100g/kgの間(between about 10 g/kg about 100 g/kg)のダイズ消化物を含んでなる、実施形態9に記載の組成物。
11.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約43.8g/kgのダイズ消化物を含んでなる、実施形態10に記載の組成物。
12.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態2~11のいずれか1つに記載の組成物。
13.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約50g/kg~約400g/kgの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態12に記載の組成物。
14.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約100g/kg~約300g/kgの間の動物組織消化物を含んでなる、実施形態13に記載の組成物。
15.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約219g/kgの動物組織消化物を含んでなる、実施形態14に記載の組成物。
16.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態2~15のいずれか1つに記載の組成物。
17.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約50g/kg~約400g/kgの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態16に記載の組成物。
18.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約100g/kg~約300g/kgの間の酵母抽出物を含んでなる、実施形態17に記載の組成物。
19.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約219g/kgの酵母抽出物を含んでなる、実施形態18に記載の組成物。
20.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間のデキストロースを含んでなる、実施形態2~19のいずれか1つに記載の組成物。
21.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約50g/kg~約400g/kgの間のデキストロースを含んでなる、実施形態20に記載の組成物。
22.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約100g/kg~約300g/kgの間のデキストロースを含んでなる、実施形態21に記載の組成物。
23.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約255g/kgのデキストロースを含んでなる、実施形態22に記載の組成物。
24.前記組成物は、水性媒体への溶解時に0.1mmol/(pH単位)~100mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態2~23のいずれか1つに記載の組成物。
25.前記組成物は、水性媒体への溶解時に1mmol/(pH単位)~50mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態24に記載の組成物。
26.前記組成物は、水性媒体への溶解時に2mmol/(pH単位)~20mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態25に記載の組成物。
27.前記組成物は、水性媒体への溶解時に3mmol/(pH単位)~10mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態26に記載の組成物。
28.前記組成物は、約0.2g/kg~約1g/kgの間のヘミンを含んでなる、実施形態2~27のいずれか1つに記載の組成物。
29.前記組成物は、約0.4g/kgのヘミンを含んでなる、実施形態28に記載の組成物。
30.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約8g/kg~約40g/kgの間のL-シスチンを含んでなる、実施形態2~29のいずれか1つに記載の組成物。
31.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約12g/kg~約20g/kgの間のL-シスチンを含んでなる、実施形態30に記載の組成物。
32.前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約17.5g/kgのL-シスチンを含んでなる、実施形態31に記載の組成物。
33.前記組成物はゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態2~32のいずれか1つに記載の組成物。
34.前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、およびリゾビウム属種(CNCM番号:I-1809)によって生産された多糖からなる群から選択される、実施形態33に記載の組成物。
35.前記ゲル化剤は寒天である、実施形態34に記載の組成物。
36.前記組成物は、約10g/kg~約800g/kgの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態33~35のいずれか1つに記載の組成物。
37.前記組成物は、約100g/kg~約600g/kgの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態36に記載の組成物。
38.前記組成物は、約250g/kg~約450g/kgの間の前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態37に記載の組成物。
39.前記組成物は、約350g/kgの前記ゲル化剤を含んでなる、実施形態38に記載の組成物。
40.前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態2~39のいずれか1つに記載の組成物。
41.前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態40に記載の組成物。
42.前記組成物は、約0.4g/kg~約190g/kgの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態40または41に記載の組成物。
43.前記組成物は、約4g/kg~約80g/kgの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態42に記載の組成物。
44.前記組成物は、約4g/kg~約40g/kgの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態43に記載の組成物。
45.前記組成物は、約20g/kgの前記界面活性剤を含んでなる、実施形態44に記載の組成物。
46.22℃において、前記組成物は液体またはゲルである、実施形態1に記載の組成物。
47.精製水をさらに含んでなる、実施形態1または46に記載の組成物。
48.ヒツジ血液をさらに含んでなる、実施形態1、46、および47のいずれか1つに記載の組成物。
49.前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約5mL/kg~約200mL/kgの間である、実施形態48に記載の組成物。
50.前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約5mL/kg~約100mL/kgの間(between about 5 mL/kg about 100 mL/kg)である、実施形態49に記載の組成物。
51.前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約50mL/kgである、実施形態50に記載の組成物。
52.前記ヒツジ血液中の赤血球は溶解している、実施形態48~51のいずれか1つに記載の組成物。
53.前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、実施形態48~52のいずれか1つに記載の組成物。
54.前記ヒツジ血液は、脱線維素ヒツジ血液である、実施形態48~52のいずれか1つに記載の組成物。
55.前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、実施形態46~54のいずれか1つに記載の組成物。
56.前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約1g/kg~約20g/kgの間である、実施形態55に記載の組成物。
57.前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約2g/kg~約10g/kgの間である、実施形態56に記載の組成物。
58.前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約5.6g/kgである、実施形態57に記載の組成物。
59.前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約0.05g/kg~約30g/kgの間である、実施形態46~58のいずれか1つに記載の組成物。
60.前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約0.1g/kg~約10g/kgの間である、実施形態59に記載の組成物。
61.前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約0.2g/kg~約3g/kgの間である、実施形態60に記載の組成物。
62.前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約1g/kgである、実施形態61に記載の組成物。
63.前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、実施形態46~62のいずれか1つに記載の組成物。
64.前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約1g/kg~約20g/kgの間である、実施形態63に記載の組成物。
65.前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約2g/kg~約10g/kgの間である、実施形態64に記載の組成物。
66.前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約5g/kgである、実施形態65に記載の組成物。
67.前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、実施形態46~66のいずれか1つに記載の組成物。
68.前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約1g/kg~約20g/kgの間である、実施形態67に記載の組成物。
69.前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約2g/kg~約10g/kgの間である、実施形態68に記載の組成物。
70.前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約5g/kgである、実施形態69に記載の組成物。
71.前記組成物中のデキストロースの濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、実施形態46~70のいずれか1つに記載の組成物。
72.前記組成物中のデキストロースの濃度は、約1g/kg~約20g/kgの間である、実施形態71に記載の組成物。
73.前記組成物中のデキストロースの濃度は、約2g/kg~約10g/kgの間である、実施形態72に記載の組成物。
74.前記組成物中のデキストロースの濃度は、5.8g/kgである、実施形態73に記載の組成物。
75.前記組成物は、0.1mmol/(pH単位)~100mmol/pHの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態46~74のいずれか1つに記載の組成物。
76.前記組成物は、水性媒体への溶解時に1mmol/(pH単位)~50mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態75に記載の組成物。
77.前記組成物は、水性媒体への溶解時に2mmol/(pH単位)~20mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態76に記載の組成物。
78.前記組成物は、水性媒体への溶解時に3mmol/(pH単位)~10mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、実施形態77に記載の組成物。
79.前記組成物中のヘミンの濃度は、約0.01g/kgである、実施形態46~78のいずれか1つに記載の組成物。
80.前記組成物中のL-シスチンの濃度は、約0.01g/kg~約0.5g/kgの間である、実施形態46~79のいずれか1つに記載の組成物。
81.前記組成物中のL-シスチンの濃度は、約0.4g/kgである、実施形態80に記載の組成物。
82.界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態46~81のいずれか1つに記載の組成物。
83.前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態82に記載の組成物。
84.前記組成物は、約0.01g/kg~約5g/kgの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態83に記載の組成物。
85.前記組成物は、約0.1g/kg~約2g/kgの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態84に記載の組成物。
86.前記組成物は、約0.1g/kg~約1g/kgの間の前記界面活性剤を含んでなる、実施形態85に記載の組成物。
87.前記組成物は、約0.5g/kgの前記界面活性剤を含んでなる、実施形態86に記載の組成物。
88.ゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態46~87のいずれか1つに記載の組成物。
89.前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種(CNCM番号:I-1809)によって生産された多糖からなる群から選択される、実施形態88に記載の組成物。
90.前記ゲル化剤は寒天である、実施形態89に記載の組成物。
91.前記ゲル化剤は、リゾビウム属種によって生産された多糖である、実施形態90に記載の組成物。
92.前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約5g/kg~約25g/kgの間である、実施形態90または91に記載の組成物。.
93.前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約13.5g/kgである、実施形態92に記載の組成物。
94.前記ゲル化剤はジェランである、実施形態93に記載の組成物。
95.前記組成物中のジェランの濃度は約1.0g/kg~約13g/kgの間である、実施形態94に記載の組成物。
96.前記組成物中のジェランの濃度は約6.8g/kgである、実施形態95に記載の組成物。
97.前記ゲル化剤はキサンタンガムまたはアルギン酸ナトリウムである、実施形態89に記載の組成物。
98.前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約3.4g/kg~約17g/kgの間である、実施形態97に記載の組成物。
99.前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約9g/kgである、実施形態98に記載の組成物。
100.前記ゲル化剤はポリアクリルアミドである、実施形態89に記載の組成物。
101.前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は約50g/kg~約200g/kgの間である、実施形態100に記載の組成物。
102.前記組成物中のポリアクリルアミドの濃度は約150g/kgである、実施形態101に記載の組成物。
103.前記ゲル化剤はグアーガムである、実施形態89に記載の組成物。
104.前記組成物中のグアーガムの濃度は約10g/kg~約40g/kgの間である、実施形態103に記載の組成物。
105.前記組成物中のグアーガムの濃度は約21g/kgである、実施形態104に記載の組成物。
106.前記組成物は液体である、実施形態46~87のいずれか1つに記載の組成物。
107.前記組成物はゲルである、実施形態46~105のいずれか1つに記載の組成物。
108.前記組成物は、7.3±0.5のpHを有する、実施形態1および46~107のいずれか1つに記載の組成物。
109.前記組成物は、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを含まない、実施形態1~108のいずれか1つに記載の組成物。
110.前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、実施形態1~109のいずれか1つに記載の組成物。
111.細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、実施形態46~110のいずれか1つに記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
112.前記細胞集団は、膜の第1の面に配置され、前記膜の第2の面は、実施形態46~110のいずれか1つに記載の組成物と接触している、実施形態111に記載の方法。
113.前記膜は透過性である、実施形態112に記載の方法。
114.前記細胞集団内の1種以上の細胞は好気性生物である、実施形態111~113のいずれか1つに記載の方法。
115.前記細胞集団内の1種以上の細胞は嫌気性生物である、実施形態111~113のいずれか1つに記載の方法。
116.前記嫌気性生物は偏性嫌気性生物である、実施形態115に記載の方法。
117.前記細胞集団内の1種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、実施形態111~113のいずれか1つに記載の方法。
118.前記スタフィロコッカス属は黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、またはスタフィロコッカス・ホミニスである、実施形態117に記載の方法。
119.前記メチロバクテリウム属はメチロバクテリウム・ラジオトレランスである、実施形態117に記載の方法。
120.前記バチルス属はバチルス・クラウシイ、バチルス・イドリエンシス、バチルス・リケニフォルミス、またはバチルス・スブスチリス(Bacillus substilis)である、実施形態117に記載の方法。
121.前記バチルス属は酸化ストレスを受けている、実施形態117または120に記載の方法。
122.前記アスペルギルス属はアスペルギルス・ブラジリエンシスまたはアスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)である、実施形態117に記載の方法。
123.前記コリネバクテリウム属はコリネバクテリウム・ツバークロステアリクムまたはゼローシス菌である、実施形態117に記載の方法。
124.前記デルマコッカス属はデルマコッカス・ニシノミヤエンシスである、実施形態117に記載の方法。
125.前記エシェリキア属は大腸菌である、実施形態117に記載の方法。
126.前記コクリア属はコクリア・リゾフィラである、実施形態117に記載の方法。
127.前記ミクロコッカス属はミクロコッカス・ルテウスである、実施形態117に記載の方法。
128.前記パエニバチルス属はパエニバチルス・グルカノリティカスである、実施形態117に記載の方法。
129.前記ペニシリウム属はペニシリウム・クリソゲナムまたはペニシリウム・ノタタムである、実施形態117に記載の方法。
130.前記シュードモナス属は緑膿菌である、実施形態117に記載の方法。
131.前記ストレプトコッカス属は化膿レンサ球菌である、実施形態117に記載の方法。
132.前記ストレプトマイセス属はストレプトマイセス・ハルステディイである、実施形態117に記載の方法。
133.前記アシネトバクター属はアシネトバクター・ルオフィイ(Acinetobacter lwofii)である、実施形態117に記載の方法。
134.前記プロピオニバクテリウム属はプロピオニバクテリウム・アクネスである、実施形態117に記載の方法。
135.前記エクセロヒルム属はエクセロヒルム・ロストラタムである、実施形態117に記載の方法。
136.前記細胞集団はサンプル由来である、実施形態111~135のいずれか1つに記載の方法。
137.前記サンプルは、多細胞生物から得られた流体または組織を含んでなる、実施形態136に記載の方法。
138.前記サンプルは動物の体液または組織を含んでなる、実施形態137に記載の方法、。
139.前記サンプルはヒト由来である、実施形態138に記載の方法。
140.前記サンプルは非ヒト脊椎動物由来である、実施形態138に記載の方法。
141.前記サンプルは、呼吸器、尿生殖器、生殖管、中枢神経系、尿、血液、皮膚、血漿、血清、唾液、創傷組織、創傷滲出液、生検組織、糞便、生殖管、および固形組織のサンプル、およびそれらの誘導体からなる群から選択される、実施形態137~140のいずれか1つに記載の方法。
142.前記サンプルは血液または尿サンプルである、実施形態141に記載の方法。
143.前記サンプルは植物由来である、実施形態137に記載の方法。
144.前記サンプルは、環境の空気、土壌、もしくは水、または環境に曝された表面、物体、もしくは生物をサンプリングすることによって得られる、実施形態136~143のいずれか1つに記載の方法。
145.前記サンプルは、ヒトまたは動物における局所使用または内部使用のための医薬品、化粧品、血液製剤、または他の製品の製造における原材料、完成品、または中間製品;食品、飲料、または栄養補給剤の製造における原材料、中間製品、または完成品;医療用または体外診断用機器の製造における原材料、中間製品、または完成品;化学製品;工業上の表面;器具類;ならびに機械類からなる群から選択される材料から得られる、実施形態136に記載の方法。
146.前記サンプルは、前記接触の前にそれを液化しかつ/またはホモジナイズするために処理される、実施形態136~145のいずれか1つに記載の方法。
147.前記サンプルは、前記接触の前に前記細胞集団以外の物質または物体を除去するために処理される、実施形態136~146のいずれか1つに記載の方法。
148.実施形態46~110のいずれか1つに記載の組成物を調製する方法であって、
i)精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること;
ii)所望により、前記混合物を冷却すること;
iii)所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりpHを7.3±0.5に調整すること;および
iv)前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。
149.vi)前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約65℃に保つことをさらに含んでなる、実施形態148に記載の方法。
150.工程ii)における前記冷却は室温に冷却することである、実施形態148または149に記載の方法。
151.工程ii)における前記冷却は約42℃に冷却することである、実施形態148または149に記載の方法。
152.工程i)の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、実施形態148~151のいずれか1つに記載の方法。
153.工程i)の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、実施形態148~152のいずれか1つに記載の方法。
154.工程i)の後に前記混合物に界面活性剤を加えることをさらに含んでなる、実施形態148~152のいずれか1つに記載の方法。
155.前記界面活性剤はポリソルベートである、実施形態153または154に記載の方法。
156.前記界面活性剤は、5%(w/v)の前記界面活性剤を含んでなる水溶液として提供される、実施形態153~155のいずれか1つに記載の方法。
157.調製工程が完了した後に前記組成物を保存容器に移すことをさらに含んでなる、実施形態148~156のいずれか1つに記載の方法。
158.前記保存容器はボトル、ジャー、バイアル、アンプル、またはカセットである、実施形態157に記載の方法。
159.前記移入後に前記保存容器をγ線照射処理することをさらに含んでなる、実施形態157または158に記載の方法。
160.前記γ線照射処理の線量は10kGyより高い、実施形態159に記載の方法。
161.前記γ線照射処理の線量は約10kGy~約50kGyの間である、実施形態160に記載の方法。
162.前記γ線照射処理の線量は約10kGy~約40kGyの間である、実施形態161に記載の方法。
163.前記γ線照射処理の線量は約10kGy~約20kGyの間である、実施形態に記載の方法162。
164.前記γ線照射処理の線量は約12kGy~約19kGyの間である、実施形態163に記載の方法。
165.前記組成物は消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、実施形態1~164のいずれかに記載の組成物または方法。
166.前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート80、および/またはレシチンである、実施形態165の組成物または方法。
本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、記載した組成物および本発明の使用方法の様々な改変および変形は当業者には明らかであろう。本発明を具体的な実施形態に関連して説明してきたが、特許請求する本発明はそのような具体的な実施形態に過度に限定されるべきではないことは理解されたい。実際に、当業者に自明な本発明を実施するための記載した形態の様々な改変は、本発明の範囲内であることが意図されている。
[項1]
カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる組成物。
[項2]
22℃において、前記組成物は固体である、項1に記載の組成物。
[項3]
前記組成物は粉末である、項2に記載の組成物。
[項4]
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間のカゼイン消化物を含んでなる、項2または3に記載の組成物。
[項5]
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約0.5g/kg~約300g/kgの間のダイズ消化物を含んでなる、項2に記載の組成物。
[項6]
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間の動物組織消化物を含んでなる、項2に記載の組成物。
[項7]
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間の酵母抽出物を含んでなる、項2に記載の組成物。
[項8]
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約1g/kg~約500g/kgの間のデキストロースを含んでなる、項2に記載の組成物。
[項9]
前記組成物は、水性媒体への溶解時に0.1mmol/(pH単位)~100mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、項2に記載の組成物。
[項10]
前記組成物は、約0.2g/kg~約1g/kgの間のヘミンを含んでなる、項2に記載の組成物。
[項11]
前記組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、前記組成物は、約8g/kg~約40g/kgの間のL-シスチンを含んでなる、項2に記載の組成物。
[項12]
前記組成物は界面活性剤をさらに含んでなる、項2に記載の組成物。
[項13]
前記界面活性剤はポリソルベートである、項12に記載の組成物。
[項14]
22℃において、前記組成物は液体またはゲルである、項1に記載の組成物。
[項15]
精製水をさらに含んでなる、項1または14に記載の組成物。
[項16]
ヒツジ血液をさらに含んでなる、項1または14に記載の組成物。
[項17]
前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約5mL/kg~約200mL/kgの間である、項16に記載の組成物。
[項18]
前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液である、項16に記載の組成物。
[項19]
前記組成物中のカゼイン消化物の濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、項14に記載の組成物。
[項20]
前記組成物中のダイズ消化物の濃度は、約0.05g/kg~約30g/kgの間である、項14に記載の組成物。
[項21]
前記組成物中の動物組織消化物の濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、項14に記載の組成物。
[項22]
前記組成物中の酵母抽出物の濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、項14に記載の組成物。
[項23]
前記組成物中のデキストロースの濃度は、約0.1g/kg~約50g/kgの間である、項14に記載の組成物。
[項24]
前記組成物は、0.1mmol/(pH単位)~100mmol/pHの緩衝能を提供するのに十分なリン酸バッファーの量を含んでなる、項14に記載の組成物。
[項25]
前記組成物中のヘミンの濃度は、約0.01g/kgである、項14に記載の組成物。
[項26]
前記組成物中のL-シスチンの濃度は、約0.01g/kg~約0.5g/kgの間である、項14に記載の組成物。
[項27]
界面活性剤をさらに含んでなる、項14に記載の組成物。.
[項28]
前記界面活性剤はポリソルベートである、項27に記載の組成物。
[項29]
ゲル化剤をさらに含んでなる、項1または14に記載の組成物。
[項30]
前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種(CNCM番号:I-1809)によって生産された多糖からなる群から選択される、項29に記載の組成物。
[項31]
前記ゲル化剤は寒天である、項30に記載の組成物。
[項32]
前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、固体では約10g/kg~約800g/kgの間の前記ゲル化剤、液体またはゲルでは約5g/kg~約25g/kgの間である、項30に記載の組成物。
[項33]
前記組成物は、7.3±0.5のpHを有する、項1または14に記載の組成物。
[項34]
前記組成物は、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを含まない、項1に記載の組成物。
[項35]
前記組成物は添加ナトリウムを含有しない、項1に記載の組成物。
[項36]
消毒剤の中和剤をさらに含んでなる、項1に記載の組成物。
[項37]
前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート80、および/またはレシチンである、項36に記載の組成物。
[項38]
細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、項14に記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
[項39]
前記細胞集団は、膜の第1の面に配置され、前記膜の第2の面は、前記組成物と接触している、項38に記載の方法。
[項40]
前記細胞集団内の1種以上の細胞は好気性生物である、項38に記載の方法。
[項41]
前記細胞集団内の1種以上の細胞は嫌気性生物である、項38に記載の方法。
[項42]
前記細胞集団内の1種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、項38に記載の方法。
[項43]
項14に記載の組成物を調製する方法であって、
i)精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること;
ii)所望により、前記混合物を冷却すること;
iii)所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりpHを7.3±0.5に調整すること;および
iv)前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。
[項44]
前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約65℃に保つことをさらに含む、項43に記載の方法。
[項45]
工程ii)における前記冷却は室温に冷却することである、項43に記載の方法。
[項46]
工程i)の前記混合物はゲル化剤をさらに含んでなる、項43に記載の方法。
[項47]
工程i)の前記混合物は界面活性剤をさらに含んでなる、項43に記載の方法。
他の実施形態は特許請求の範囲に含まれる。
Claims (17)
- カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる、微生物培養用組成物であって、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを含まず、22℃において固体であり、該組成物の総質量から前記リン酸バッファーを除いて、約100g/kg~約300g/kgの間のカゼイン消化物、約10g/kg~約100g/kgの間のダイズ消化物、約100g/kg~約300g/kgの間の動物組織消化物、約100g/kg~約300g/kgの間の酵母抽出物、約100g/kg~約300g/kgの間のデキストロース、および約12g/kg~約20g/kgの間のL-シスチンを含んでなる、組成物。
- 前記組成物は粉末である、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物は、
(a) 水性媒体への溶解時に0.1mmol/(pH単位)~100mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分な量のリン酸バッファーを含み、
(b) 約0.2g/kg~約1g/kgの間のヘミンを含み、および/または
(c) 界面活性剤をさらに含む、
請求項1に記載の組成物。 - 前記界面活性剤はポリソルベートである、請求項3に記載の組成物。
- カゼイン消化物、ダイズ消化物、動物組織消化物、酵母抽出物、デキストロース、リン酸バッファー、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる、微生物培養用組成物であって、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを含まず、22℃において液体またはゲルであり、該組成物中のカゼイン消化物の濃度が約2g/kg~約10g/kgの間であり、該組成物中のダイズ消化物の濃度が約0.2g/kg~約3g/kgの間であり、該組成物中の動物組織消化物の濃度が約2g/kg~約10g/kgの間であり、該組成物中の酵母抽出物の濃度が約2g/kg~約10g/kgの間であり、該組成物中のデキストロースの濃度が約2g/kg~約10g/kgの間であり、そして該組成物中のL-シスチンの濃度が約0.01g/kg~約0.5g/kgの間である、組成物。
- 前記組成物は、
(a) 精製水をさらに含み、
(b) ヒツジ血液をさらに含み、
(c) ゲル化剤をさらに含み、および/または
(d) 7.3±0.5のpHを有する、
請求項5に記載の組成物。 - (a) 前記組成物中の前記ヒツジ血液の濃度は、約5mL/kg~約200mL/kgの間であり、
(b) 前記ヒツジ血液は溶血ヒツジ血液であり、および/または
(c) 前記ゲル化剤は、寒天、ジェラン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、グアーガム、ゼラチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびリゾビウム属種(CNCM番号:I-1809)によって生産された多糖からなる群から選択される、
請求項6に記載の組成物。 - (a) 前記組成物は、0.1mmol/(pH単位)~100mmol/(pH単位)の緩衝能を提供するのに十分な量のリン酸バッファーを含み、
(b) 前記組成物中のヘミンの濃度は、約0.01g/kgであり、および/または
(c) 前記組成物は界面活性剤をさらに含む、
請求項5に記載の組成物。 - 前記界面活性剤はポリソルベートである、請求項8に記載の組成物。
- (a) 前記ゲル化剤は寒天であり、および/または
(b) 前記組成物中の前記ゲル化剤の濃度は、約5g/kg~約25g/kgの間である、
請求項6に記載の組成物。 - (a) 前記組成物は添加ナトリウムを含有せず、および/または
(b) 前記組成物は消毒剤の中和剤をさらに含む、
請求項1または6に記載の組成物。 - 前記中和剤はヒスチジン、チオ硫酸塩、ポリソルベート80、および/またはレシチンである、請求項11に記載の組成物。
- 細胞集団を培養する方法であって、前記細胞集団の増殖を支援する条件下で、請求項5に記載の組成物と前記細胞集団を接触させることを含む、方法。
- (a) 前記細胞集団は、膜の第1の面に配置され、前記膜の第2の面は、前記組成物と接触しており、
(b) 前記細胞集団内の1種以上の細胞は好気性生物であり、
(c) 前記細胞集団内の1種以上の細胞は嫌気性生物であり、および/または
(d) 前記細胞集団内の1種以上の細胞は、アシネトバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、コリネバクテリウム属、デルマコッカス属、エシェリキア属、エクセロヒルム属、コクリア属、メチロバクテリウム属、ミクロコッカス属、パエニバチルス属、ペニシリウム属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、およびストレプトマイセス属からなる群から選択される属に属する、
請求項13に記載の方法。 - 請求項5に記載の組成物を調製する方法であって、
i)精製水、カゼイン消化物、ダイズ消化物、リン酸バッファー、デキストロース、動物組織消化物、酵母抽出物、ヘミン、およびL-シスチンを含んでなる混合物をオートクレーブ処理すること;
ii)所望により、前記混合物を冷却すること;
iii)所望により、前記混合物に滅菌水酸化カリウムまたは塩化水素を加えることによりpHを7.3±0.5に調整すること;および
iv)前記混合物にヒツジ血液を加えること
を含む、方法。 - v)前記混合物の色が赤色から褐色に変化するまで前記混合物の温度を約65℃に保つこと
をさらに含む、請求項15に記載の方法。 - (a) 工程ii)における前記冷却は室温に冷却することであり、
(b) 工程i)の前記混合物はゲル化剤をさらに含み、および/または
(c) 工程i)の前記混合物は界面活性剤をさらに含む、
請求項15に記載の方法。
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