JP2021130705A - 治療用ビタミンｄコンジュゲート - Google Patents
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Abstract
【課題】非コンジュゲート形と比較した場合に、吸収、バイオアベイラビリティ、または循環半減期が増大された化合物をもたらす、治療用化合物にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤを提供する。【解決手段】非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素で治療用化合物にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物である標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。例えば、下記式の担体が提供される。【選択図】図１
Description
関連出願の相互参照
本願は、どちらもその内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる２０１４年１０
月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／０６７，３８８号明細書、および２０１５
年１０月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／２４４，１８１号明細書の利益を主
張する。
本願は、どちらもその内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる２０１４年１０
月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／０６７，３８８号明細書、および２０１５
年１０月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／２４４，１８１号明細書の利益を主
張する。
本発明は、非コンジュゲート形と比較した場合に吸収、バイオアベイラビリティ、また
は循環半減期が増大された化合物をもたらす、治療用化合物にコンジュゲートされた非ホ
ルモン性ビタミンＤを提供する。ビタミンＤ標的指向基は、ビタミンＤ骨格上の第３の炭
素を介して治療用化合物にカップリングされる。
は循環半減期が増大された化合物をもたらす、治療用化合物にコンジュゲートされた非ホ
ルモン性ビタミンＤを提供する。ビタミンＤ標的指向基は、ビタミンＤ骨格上の第３の炭
素を介して治療用化合物にカップリングされる。
本発明は、治療用化合物の効力、吸収、または薬物動態特性を向上させることに、また
、ある種のビタミンＤ型に関する。ビタミンＤは、カルシウム、リン酸、および骨の恒常
性における役割を担っている。ビタミンＤのホルモン活性は、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ
）への結合によって仲介される。ビタミンＤは、核に入り、その場所で、ホルモン性ビタ
ミンＤに対して応答するある遺伝子サブセットのプロモーター内に存在するビタミンＤ受
容体エレメント（ＶＤＲＥ）に結合する。
、ある種のビタミンＤ型に関する。ビタミンＤは、カルシウム、リン酸、および骨の恒常
性における役割を担っている。ビタミンＤのホルモン活性は、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ
）への結合によって仲介される。ビタミンＤは、核に入り、その場所で、ホルモン性ビタ
ミンＤに対して応答するある遺伝子サブセットのプロモーター内に存在するビタミンＤ受
容体エレメント（ＶＤＲＥ）に結合する。
ビタミンＤは、脂溶性のセコステロイドの群である。いくつかの型（ビタマー）のビタ
ミンＤが存在する。２つの主な型は、ビタミンＤ２すなわちエルゴカルシフェロール、お
よびビタミンＤ３すなわちコレカルシフェロールである。添え字のないビタミンＤは、ビ
タミンＤ２、Ｄ３、または当技術分野で知られている他の型を指す。ヒトでは、ビタミン
Ｄは、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）またはエルゴカルシフェロール（ビタミン
Ｄ２）として摂取することができる。大抵のヒトにとってのビタミンＤの主な源は、太陽
光である。ビタミンＤがいったん皮膚内で作られるまたは摂取されると、一連のヒドロキ
シル化ステップによって、最初に肝臓内で２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５（ＯＨ）Ｄ
３）に、次いで腎臓内で１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１α，２５（ＯＨ）２Ｄ
３）に活性化される必要がある。１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３は、ＶＤＲに結合するので、
活性な「ホルモン」型のビタミンＤである。２５（ＯＨ）Ｄ３は、「非ホルモン」型のビ
タミンＤであり、ヒト体内の主な循環形態である。これは、ビタミンＤ結合タンパク質（
ＤＢＰ）と結合する。これは、必要に応じた場合のみホルモン型に転換される。非ホルモ
ンビタミンＤ型の例は、１α−ヒドロキシル基を欠くものである。非ホルモンビタミンＤ
型は、ＶＤＲに対する大きく低下した親和性と、ＤＢＰに対する大きく増大した親和性を
有する。
ミンＤが存在する。２つの主な型は、ビタミンＤ２すなわちエルゴカルシフェロール、お
よびビタミンＤ３すなわちコレカルシフェロールである。添え字のないビタミンＤは、ビ
タミンＤ２、Ｄ３、または当技術分野で知られている他の型を指す。ヒトでは、ビタミン
Ｄは、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）またはエルゴカルシフェロール（ビタミン
Ｄ２）として摂取することができる。大抵のヒトにとってのビタミンＤの主な源は、太陽
光である。ビタミンＤがいったん皮膚内で作られるまたは摂取されると、一連のヒドロキ
シル化ステップによって、最初に肝臓内で２５−ヒドロキシビタミンＤ（２５（ＯＨ）Ｄ
３）に、次いで腎臓内で１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１α，２５（ＯＨ）２Ｄ
３）に活性化される必要がある。１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３は、ＶＤＲに結合するので、
活性な「ホルモン」型のビタミンＤである。２５（ＯＨ）Ｄ３は、「非ホルモン」型のビ
タミンＤであり、ヒト体内の主な循環形態である。これは、ビタミンＤ結合タンパク質（
ＤＢＰ）と結合する。これは、必要に応じた場合のみホルモン型に転換される。非ホルモ
ンビタミンＤ型の例は、１α−ヒドロキシル基を欠くものである。非ホルモンビタミンＤ
型は、ＶＤＲに対する大きく低下した親和性と、ＤＢＰに対する大きく増大した親和性を
有する。
ＤＢＰは、ビタミンＤ代謝産物の主な輸送体である。血漿中のその濃度は、６〜７μＭ
であり、すべての体液区分において検出されている。ＤＢＰ濃度は、生理学的なビタミン
Ｄ代謝産物濃度を上回る。ＤＢＰは、ビタミンＤの皮膚から循環への、また細胞膜を通過
する細胞質（ここで、ビタミンＤが活性化されてホルモン型になる）への移動にとって重
要である。ＤＢＰに対する非ホルモン性ビタミンＤの親和性は、ホルモン型の親和性より
も有意に高い。対照的に、ホルモン型のＶＤＲへの親和性は、非ホルモン型よりも有意に
高い。
であり、すべての体液区分において検出されている。ＤＢＰ濃度は、生理学的なビタミン
Ｄ代謝産物濃度を上回る。ＤＢＰは、ビタミンＤの皮膚から循環への、また細胞膜を通過
する細胞質（ここで、ビタミンＤが活性化されてホルモン型になる）への移動にとって重
要である。ＤＢＰに対する非ホルモン性ビタミンＤの親和性は、ホルモン型の親和性より
も有意に高い。対照的に、ホルモン型のＶＤＲへの親和性は、非ホルモン型よりも有意に
高い。
ビタミンＤおよびビタミンＤ類似体は、骨粗鬆症および二次性副甲状腺機能亢進症の治
療のために認可されている。ビタミンＤはまた、正常細胞ならびに癌細胞における増殖を
阻害するおよび分化を誘発することが示されている。この働きに必要とされるビタミンＤ
のレベルは、高カルシウム血症という形で深刻な毒性を引き起こす。ビタミンＤの類似体
は、乾癬の治療のために認可されており、他のものは現在、癌治療のために試験中である
。側鎖修飾を含有する類似体の多くは、血漿カルシウム上昇作用の低下を有することが明
らかになっている。これらの修飾は、ＶＤＲ結合に大きくは影響を与えず、したがって、
細胞に基づく増殖分析では、等しいまたは同等の有効性の増大を示す。しかし、これらの
修飾の多くは、ＤＢＰへの結合を低下させ、それによって血流内での半減期を縮小するこ
とが示された。
療のために認可されている。ビタミンＤはまた、正常細胞ならびに癌細胞における増殖を
阻害するおよび分化を誘発することが示されている。この働きに必要とされるビタミンＤ
のレベルは、高カルシウム血症という形で深刻な毒性を引き起こす。ビタミンＤの類似体
は、乾癬の治療のために認可されており、他のものは現在、癌治療のために試験中である
。側鎖修飾を含有する類似体の多くは、血漿カルシウム上昇作用の低下を有することが明
らかになっている。これらの修飾は、ＶＤＲ結合に大きくは影響を与えず、したがって、
細胞に基づく増殖分析では、等しいまたは同等の有効性の増大を示す。しかし、これらの
修飾の多くは、ＤＢＰへの結合を低下させ、それによって血流内での半減期を縮小するこ
とが示された。
本発明は、治療化合物の効力、吸収、又は薬物動態的性質を向上させることに関する。
ポリ（エチレングリコール）すなわち（ＰＥＧ）の添加は、腎クリアランスの低下、凝集
の低下、及び潜在的に望ましくない免疫認識の減少により、いくつかの化合物の半減期を
増加させる公知の方法である（Ｊａｉｎ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａ
ｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．２５：４０３−４４７（２００８））。ＰＥＧは、典型的には、
循環中の半減期を最大にするため、かなり大きいサイズで使用される（２０〜４０ｋＤａ
）。これは、単一の大きいＰＥＧの使用でも、化合物に結合した複数のより小さなＰＥＧ
の使用でも達成できる（Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２
１９６９−２１９７７（１９９６）；Ｆｉｓｈｂｕｒｎ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７
：４１６７−４１８３（２００８））。
ポリ（エチレングリコール）すなわち（ＰＥＧ）の添加は、腎クリアランスの低下、凝集
の低下、及び潜在的に望ましくない免疫認識の減少により、いくつかの化合物の半減期を
増加させる公知の方法である（Ｊａｉｎ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａ
ｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．２５：４０３−４４７（２００８））。ＰＥＧは、典型的には、
循環中の半減期を最大にするため、かなり大きいサイズで使用される（２０〜４０ｋＤａ
）。これは、単一の大きいＰＥＧの使用でも、化合物に結合した複数のより小さなＰＥＧ
の使用でも達成できる（Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２
１９６９−２１９７７（１９９６）；Ｆｉｓｈｂｕｒｎ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７
：４１６７−４１８３（２００８））。
医薬の効果が起こる前に薬物は吸収されなければならないため、吸収は、薬物の開発及
び医薬の化学において主な焦点である。薬物の吸収プロファイルは、多くの因子に影響さ
れ得る。さらに、治療化合物の吸収性は、化合物によって著しく異なる。経口又は経皮投
与後にあまり吸収されない治療化合物がいくつかある。ほとんどのペプチド系及びタンパ
ク質系治療薬などの他の治療化合物は、経口投与できない。静脈内、皮下、又は筋肉内注
射などの代替投与経路が、いくつかの化合物に日常的に利用されている。しかし、これら
の経路は、遅い吸収及び分解を起こし得る酵素への治療化合物の曝露を起こすことが多く
、そのため有効性を得るためにより高い投与量を必要とする。
び医薬の化学において主な焦点である。薬物の吸収プロファイルは、多くの因子に影響さ
れ得る。さらに、治療化合物の吸収性は、化合物によって著しく異なる。経口又は経皮投
与後にあまり吸収されない治療化合物がいくつかある。ほとんどのペプチド系及びタンパ
ク質系治療薬などの他の治療化合物は、経口投与できない。静脈内、皮下、又は筋肉内注
射などの代替投与経路が、いくつかの化合物に日常的に利用されている。しかし、これら
の経路は、遅い吸収及び分解を起こし得る酵素への治療化合物の曝露を起こすことが多く
、そのため有効性を得るためにより高い投与量を必要とする。
いくつかのペプチドが、治療上期待が持てるものと特定されてきた。ペプチド及びタン
パク質の化学的性質及び生物学的性質により、それらは、治療化合物として使用するため
の魅力的な候補である。ペプチド及びタンパク質は、アミノ酸でできた天然の分子であり
、多くの生理学的プロセスに関与している。ペプチド及びタンパク質は、高度の選択性及
び効力を示し、潜在的な有害薬物間相互作用も他の負の副作用も欠点として持たないこと
がある。そのため、ペプチド及びタンパク質は、多様性が高く、効き目が強く、選択性の
高いクラスの低毒性の治療化合物として大いに有望なものである。しかし、ペプチド及び
タンパク質は、短いインビボ半減期を有し得る。そのようなペプチドでは、これは数分に
なり得る。これによって、ペプチドは、その本来の形態（本明細書では「野生の」、「野
生型」、または「ｗｔ」とも称される）では、治療的投与のためには一般に非実用的とな
る可能性がある。さらに、ペプチドは、作用の持続期間が短く、バイオアベイラビリティ
が不十分である可能性がある。
パク質の化学的性質及び生物学的性質により、それらは、治療化合物として使用するため
の魅力的な候補である。ペプチド及びタンパク質は、アミノ酸でできた天然の分子であり
、多くの生理学的プロセスに関与している。ペプチド及びタンパク質は、高度の選択性及
び効力を示し、潜在的な有害薬物間相互作用も他の負の副作用も欠点として持たないこと
がある。そのため、ペプチド及びタンパク質は、多様性が高く、効き目が強く、選択性の
高いクラスの低毒性の治療化合物として大いに有望なものである。しかし、ペプチド及び
タンパク質は、短いインビボ半減期を有し得る。そのようなペプチドでは、これは数分に
なり得る。これによって、ペプチドは、その本来の形態（本明細書では「野生の」、「野
生型」、または「ｗｔ」とも称される）では、治療的投与のためには一般に非実用的とな
る可能性がある。さらに、ペプチドは、作用の持続期間が短く、バイオアベイラビリティ
が不十分である可能性がある。
アペリンペプチド（配列番号１）は、ＡＰＬＮ遺伝子によってコードされる。アペリン
遺伝子は、Ｎ−末端領域内にシグナルペプチドを有する７７アミノ酸のプレプロタンパク
質をコードする。小胞体への移動およびシグナルペプチドの切断の後、５５アミノ酸のプ
ロタンパク質は、いくつかの活性な断片：配列４２〜７７（アペリン３６）に対応する３
６アミノ酸ペプチド、配列６１〜７７（アペリン１７）に対応する１７アミノ酸ペプチド
、および配列６５〜７７（アペリン１３）に対応する１３アミノ酸ペプチドをもたらすこ
とができる。この後者の断片はまた、そのＮ−末端グルタミン残基でのピログルタミル化
（ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍｙｌａｔｉｏｎ）を受ける可能性がある。
遺伝子は、Ｎ−末端領域内にシグナルペプチドを有する７７アミノ酸のプレプロタンパク
質をコードする。小胞体への移動およびシグナルペプチドの切断の後、５５アミノ酸のプ
ロタンパク質は、いくつかの活性な断片：配列４２〜７７（アペリン３６）に対応する３
６アミノ酸ペプチド、配列６１〜７７（アペリン１７）に対応する１７アミノ酸ペプチド
、および配列６５〜７７（アペリン１３）に対応する１３アミノ酸ペプチドをもたらすこ
とができる。この後者の断片はまた、そのＮ−末端グルタミン残基でのピログルタミル化
（ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍｙｌａｔｉｏｎ）を受ける可能性がある。
アペリンは、いくつかの細胞型の表面で発現されるＧ−タンパク質共役ＡＰＪ受容体に
対する内因性リガンドである。これは、心臓、肺、腎臓、肝臓、脂肪組織、消化管、脳、
副腎、内皮、およびヒト血漿などの様々な器官において広く発現される。
対する内因性リガンドである。これは、心臓、肺、腎臓、肝臓、脂肪組織、消化管、脳、
副腎、内皮、およびヒト血漿などの様々な器官において広く発現される。
アペリン受容体は、血圧の調節および新しい血管の形成（血管新生）に関与する。アペ
リンは、内皮細胞の表面上のその受容体の活性化により低血圧を引き起こす。これは、動
脈壁の平滑筋細胞の弛緩を誘発する、ＮＯ、すなわち強力な血管拡張因子の放出を誘発す
る。血管形成活性は、アペリンが内皮細胞の増殖および遊走、および新しい血管の形成を
促進することに起因する。アペリンの他の効果としては、体液恒常性の調節、食物および
水の摂取の視床下部による調節、下垂体ホルモン放出、および脳における抗利尿ホルモン
バソプレシンの下方調節が挙げられる。さらに、アペリンは、消化管において、また、膵
臓において分泌される。
リンは、内皮細胞の表面上のその受容体の活性化により低血圧を引き起こす。これは、動
脈壁の平滑筋細胞の弛緩を誘発する、ＮＯ、すなわち強力な血管拡張因子の放出を誘発す
る。血管形成活性は、アペリンが内皮細胞の増殖および遊走、および新しい血管の形成を
促進することに起因する。アペリンの他の効果としては、体液恒常性の調節、食物および
水の摂取の視床下部による調節、下垂体ホルモン放出、および脳における抗利尿ホルモン
バソプレシンの下方調節が挙げられる。さらに、アペリンは、消化管において、また、膵
臓において分泌される。
アペリンは、循環器および体液恒常性、食物摂取、細胞増殖、および血管新生を調節す
る。アペリンはまた、肥満および２型糖尿病などの代謝障害につながるアディポカインで
あると考えられている。したがって、アペリン療法は、これらの状態にとって有益な治療
であり得る。例えば、Ｃａｓｔａｎ−Ｌａｕｒｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎ
ｅ ４０（１）：１−９（２０１１）を参照されたい。実際、アペリンは、グルコースに
よって誘発されるインスリン分泌を阻害する。同様に、インスリンはアペリンを刺激し、
インスリン産生に関するフィードバックループが明らかになっている。しかし、アペリン
のインビボ半減期は、２０分以下である。例えば、Ｂｅｒｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｆｒ
ｏｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．６：１１５（２０１５）を参照されたい。
る。アペリンはまた、肥満および２型糖尿病などの代謝障害につながるアディポカインで
あると考えられている。したがって、アペリン療法は、これらの状態にとって有益な治療
であり得る。例えば、Ｃａｓｔａｎ−Ｌａｕｒｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎ
ｅ ４０（１）：１−９（２０１１）を参照されたい。実際、アペリンは、グルコースに
よって誘発されるインスリン分泌を阻害する。同様に、インスリンはアペリンを刺激し、
インスリン産生に関するフィードバックループが明らかになっている。しかし、アペリン
のインビボ半減期は、２０分以下である。例えば、Ｂｅｒｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｆｒ
ｏｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．６：１１５（２０１５）を参照されたい。
グレリンは、食欲および成長ホルモン（ＧＨ）の放出を刺激するために胃から循環に天
然に分泌される哺乳類のペプチド（配列番号２）である。グレリンは、細胞受容体ＧＨＳ
−Ｒを通して脳下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激し、エネルギー恒常性における重
要な役割を果たす。さらに、グレリンは、中枢神経系に直接的に作用して、交感神経活性
を低下させる。ＧＨＳ−Ｒは、視床下部−下垂体軸に集中している。ＧＨＳ−Ｒは、心臓
、肺、肝臓、腎臓、膵臓、胃、小腸および大腸、脂肪、および免疫細胞を含めた末梢組織
に分布している。
然に分泌される哺乳類のペプチド（配列番号２）である。グレリンは、細胞受容体ＧＨＳ
−Ｒを通して脳下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激し、エネルギー恒常性における重
要な役割を果たす。さらに、グレリンは、中枢神経系に直接的に作用して、交感神経活性
を低下させる。ＧＨＳ−Ｒは、視床下部−下垂体軸に集中している。ＧＨＳ−Ｒは、心臓
、肺、肝臓、腎臓、膵臓、胃、小腸および大腸、脂肪、および免疫細胞を含めた末梢組織
に分布している。
グレリンは、悪液質を患う患者における体重および除脂肪体重、または癌（Ｈｉｕｒａ
ｅｔ．ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ、１１８：４７８５−９４（２０１２））などの慢性疾患
に由来する意図的でない体重減少を増大させるために、治療的に使用されている。しかし
、グレリンは、ヒトにおいて１１分という元々は短い半減期を有し（Ａｋａｍｉｚｕ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １５０：４４７−５５（２００４））
、したがって、多くの場合、治療効果をみるために投与されなければならない。
ｅｔ．ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ、１１８：４７８５−９４（２０１２））などの慢性疾患
に由来する意図的でない体重減少を増大させるために、治療的に使用されている。しかし
、グレリンは、ヒトにおいて１１分という元々は短い半減期を有し（Ａｋａｍｉｚｕ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １５０：４４７−５５（２００４））
、したがって、多くの場合、治療効果をみるために投与されなければならない。
副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、パラトルモンまたはパラチリンは、副甲状腺の主細胞に
よって分泌される。これは、８４アミノ酸（配列番号１０）を含有するポリペプチドであ
る。これは、血液中のカルシウム（Ｃａ２＋）の濃度を（カルシウム濃度を低下させるカ
ルシトニンとは対照的に）増大させるように作用する。ＰＴＨは、副甲状腺ホルモン１受
容体（骨および腎臓）および副甲状腺ホルモン２受容体（中枢神経系、膵臓、精巣、およ
び胎盤）を活性化する。しかし、ＰＴＨは、およそ４分という非常に短い半減期を有する
。
よって分泌される。これは、８４アミノ酸（配列番号１０）を含有するポリペプチドであ
る。これは、血液中のカルシウム（Ｃａ２＋）の濃度を（カルシウム濃度を低下させるカ
ルシトニンとは対照的に）増大させるように作用する。ＰＴＨは、副甲状腺ホルモン１受
容体（骨および腎臓）および副甲状腺ホルモン２受容体（中枢神経系、膵臓、精巣、およ
び胎盤）を活性化する。しかし、ＰＴＨは、およそ４分という非常に短い半減期を有する
。
副甲状腺機能低下症は、最も一般的には甲状腺手術中の副甲状腺の損傷または除去、免
疫系関連の損傷、遺伝、または他のまれな原因に起因する、血液中のＰＴＨの低レベルで
ある。これは、血液中の低レベルのカルシウムをもたらし、しばしば筋肉のけいれんおよ
びれん縮、またはテタニー（不随意性筋収縮）、およびいくつかの他の症状を引き起こす
可能性がある。カルシウム補充またはビタミンＤが、これらの症状を改善することができ
るが、腎臓結石および慢性腎疾患のリスクを増大させる可能性がある。例えば、Ｗｉｎｅ
ｒ ＫＫ，ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．９７（２）
：３９１−３９９（２０１２）を参照されたい。
疫系関連の損傷、遺伝、または他のまれな原因に起因する、血液中のＰＴＨの低レベルで
ある。これは、血液中の低レベルのカルシウムをもたらし、しばしば筋肉のけいれんおよ
びれん縮、またはテタニー（不随意性筋収縮）、およびいくつかの他の症状を引き起こす
可能性がある。カルシウム補充またはビタミンＤが、これらの症状を改善することができ
るが、腎臓結石および慢性腎疾患のリスクを増大させる可能性がある。例えば、Ｗｉｎｅ
ｒ ＫＫ，ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．９７（２）
：３９１−３９９（２０１２）を参照されたい。
インスリンは、炭水化物および脂肪の代謝を調節する、膵臓におけるβ細胞によって産
生されるペプチドホルモンである（配列番号１１および１２）。ヒトインスリンタンパク
質は、５１アミノ酸からなり、５８０８ダルトンの分子量を有する。これは、ジスルフィ
ド結合によって連結されたＡ鎖とＢ鎖の二量体である。これは、血液から骨格筋および脂
肪組織へのグルコースの吸収を促進し、脂肪をエネルギーとして使用させるのではなく貯
蔵させる。
生されるペプチドホルモンである（配列番号１１および１２）。ヒトインスリンタンパク
質は、５１アミノ酸からなり、５８０８ダルトンの分子量を有する。これは、ジスルフィ
ド結合によって連結されたＡ鎖とＢ鎖の二量体である。これは、血液から骨格筋および脂
肪組織へのグルコースの吸収を促進し、脂肪をエネルギーとして使用させるのではなく貯
蔵させる。
正常な生理的条件下では、インスリンは、血液から過剰なグルコースを除去するために
一定の割合で産生される。しかし、インスリンレベルの調節ができなくなる場合、真性糖
尿病が起こる可能性がある。したがって、糖尿病患者は、インスリン注射を受けることが
多い。１型糖尿病を患う患者は、生存のために外因性インスリンに依存する。何故なら、
このホルモンが、体内で、もはや十分には産生されないからである。インスリンは、最も
一般的には、皮下に注射される。２型糖尿病を患う患者は、多くの場合、インスリン抵抗
性であり、「見かけ上の」インスリン不足を患っている可能性がある。
一定の割合で産生される。しかし、インスリンレベルの調節ができなくなる場合、真性糖
尿病が起こる可能性がある。したがって、糖尿病患者は、インスリン注射を受けることが
多い。１型糖尿病を患う患者は、生存のために外因性インスリンに依存する。何故なら、
このホルモンが、体内で、もはや十分には産生されないからである。インスリンは、最も
一般的には、皮下に注射される。２型糖尿病を患う患者は、多くの場合、インスリン抵抗
性であり、「見かけ上の」インスリン不足を患っている可能性がある。
線維芽細胞成長因子２１（配列番号２）は、ＦＧＦ２１遺伝子によってコードされる、
血清中を循環するタンパク質である。これは、ＦＧＦ１９およびＦＧＦ２３を含む、非定
型線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）のファミリーのメンバーである。これは、通常のＦＧＦ
ヘパリン結合ドメインを欠いている。ＦＧＦファミリーメンバーは、広い分裂促進および
細胞生存活性を有し、胚発生、細胞成長、形態形成、組織修復、腫瘍成長および浸潤を含
めた、様々な生物学的プロセスに関与する。ＦＧＦ２１は、ＨＭＧＣＳ２活性によって特
異的に誘発される。ＦＧＦ２１は、脂肪細胞におけるグルコース取り込みを刺激するが、
他の細胞型においては刺激しない。この効果は、インスリンの活性に対して相加的である
。
血清中を循環するタンパク質である。これは、ＦＧＦ１９およびＦＧＦ２３を含む、非定
型線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）のファミリーのメンバーである。これは、通常のＦＧＦ
ヘパリン結合ドメインを欠いている。ＦＧＦファミリーメンバーは、広い分裂促進および
細胞生存活性を有し、胚発生、細胞成長、形態形成、組織修復、腫瘍成長および浸潤を含
めた、様々な生物学的プロセスに関与する。ＦＧＦ２１は、ＨＭＧＣＳ２活性によって特
異的に誘発される。ＦＧＦ２１は、脂肪細胞におけるグルコース取り込みを刺激するが、
他の細胞型においては刺激しない。この効果は、インスリンの活性に対して相加的である
。
ＦＧＦ２１は、ＦＧＦＲ１ｃ／ｂ−Ｋｌｏｔｈｏ受容体複合体への結合を、他のＦＧＦ
Ｒアイソタイプを含有するものよりも好む（Ｋｌｉｅｗｅｒ ａｎｄ Ｍａｎｇｅｌｓｄ
ｏｒｆ，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．９１：２５４Ｓ−２５７Ｓ（２０１０））。糖
尿病動物へのＦＧＦ２１の投与は、循環グルコースレベルを低下させるが、過剰なＦＧＦ
２１は、過剰なインスリンの投与で見られるような低血糖を誘発しない（Ｋｈａｒｉｔｏ
ｎｅｎｋｏｖ ａｎｄ Ｓｈａｎａｆｅｌｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．
Ｄｒｕｇ １０：３５９−３６４（２００９））。したがって、ＦＧＦ２１は、糖尿病の
治療のための有望な治療用タンパク質である。しかし、天然状態のＦＧＦ２１は、血清に
おける極度に短い半減期（約１．１時間）を有し、臨床的に実用的でない治療となってい
る（例えば、国際公開第０３／０１１２１３号パンフレット；Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏ
ｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１６２７−１６３５（２００
５）を参照されたい）。さらに、ＦＧＦ２１は、皮下に注射された場合に不十分なバイオ
アベイラビリティを呈する（Ｘｕ Ｊ ｅｔ ａｌ．，２００９．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２９７：Ｅ１１０５−Ｅ１１１４）。
Ｒアイソタイプを含有するものよりも好む（Ｋｌｉｅｗｅｒ ａｎｄ Ｍａｎｇｅｌｓｄ
ｏｒｆ，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．９１：２５４Ｓ−２５７Ｓ（２０１０））。糖
尿病動物へのＦＧＦ２１の投与は、循環グルコースレベルを低下させるが、過剰なＦＧＦ
２１は、過剰なインスリンの投与で見られるような低血糖を誘発しない（Ｋｈａｒｉｔｏ
ｎｅｎｋｏｖ ａｎｄ Ｓｈａｎａｆｅｌｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．
Ｄｒｕｇ １０：３５９−３６４（２００９））。したがって、ＦＧＦ２１は、糖尿病の
治療のための有望な治療用タンパク質である。しかし、天然状態のＦＧＦ２１は、血清に
おける極度に短い半減期（約１．１時間）を有し、臨床的に実用的でない治療となってい
る（例えば、国際公開第０３／０１１２１３号パンフレット；Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏ
ｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１６２７−１６３５（２００
５）を参照されたい）。さらに、ＦＧＦ２１は、皮下に注射された場合に不十分なバイオ
アベイラビリティを呈する（Ｘｕ Ｊ ｅｔ ａｌ．，２００９．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２９７：Ｅ１１０５−Ｅ１１１４）。
インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ
Ｉｎｃ．，米国特許第５，９１９，４５２号明細書及び米国特許出願公開第２００２／
０１４１９９６号明細書、引用によりその全体として本明細書に組み込まれる）は、自己
免疫疾患の治療に使用される、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α、配列番号１３）に結合する
モノクローナル抗体である。インフリキシマブは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により、
乾癬、クローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、及び潰瘍性大腸炎の治
療用に認可された。ＴＮＦ−αは、化学的メッセンジャー（サイトカイン）及び自己免疫
反応の重要な部分である。インフリキシマブは、医療従事者により静脈内投与され、皮下
投薬には認可されていない。
Ｉｎｃ．，米国特許第５，９１９，４５２号明細書及び米国特許出願公開第２００２／
０１４１９９６号明細書、引用によりその全体として本明細書に組み込まれる）は、自己
免疫疾患の治療に使用される、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α、配列番号１３）に結合する
モノクローナル抗体である。インフリキシマブは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により、
乾癬、クローン病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、及び潰瘍性大腸炎の治
療用に認可された。ＴＮＦ−αは、化学的メッセンジャー（サイトカイン）及び自己免疫
反応の重要な部分である。インフリキシマブは、医療従事者により静脈内投与され、皮下
投薬には認可されていない。
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、多くの場合特定のｍＲＮＡ分子を分解させることによって
、ＲＮＡ分子が遺伝子発現を阻害するプロセスである。２つのタイプのＲＮＡ分子−マイ
クロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）および低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）−が、ＲＮＡ干渉の中
心となる。これらは、標的ｍＲＮＡ分子に結合し、その活性を増大または低下させる。Ｒ
ＮＡｉは、細胞を、ウイルスおよびトランスポゾン由来の核酸などの寄生的核酸から防御
するのを助ける。ＲＮＡｉはまた、発生にも影響を与える。
、ＲＮＡ分子が遺伝子発現を阻害するプロセスである。２つのタイプのＲＮＡ分子−マイ
クロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）および低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）−が、ＲＮＡ干渉の中
心となる。これらは、標的ｍＲＮＡ分子に結合し、その活性を増大または低下させる。Ｒ
ＮＡｉは、細胞を、ウイルスおよびトランスポゾン由来の核酸などの寄生的核酸から防御
するのを助ける。ＲＮＡｉはまた、発生にも影響を与える。
ＲＮＡｉについての当初の医療適用は、黄斑変性症およびハンチントン病などの遺伝性
疾患と関与する。追加的な適用には、ある種の癌、呼吸器多核体ウイルス、単純ヘルペス
ウイルス２型、ＨＩＶ、Ａ型およびＢ型肝炎、インフルエンザ、および麻疹が含まれ得る
。
疾患と関与する。追加的な適用には、ある種の癌、呼吸器多核体ウイルス、単純ヘルペス
ウイルス２型、ＨＩＶ、Ａ型およびＢ型肝炎、インフルエンザ、および麻疹が含まれ得る
。
ＲＮＡｉを標的組織、具体的には体の深部組織に送達することは難しいままである。ｓ
ｉＲＮＡ分子は、内因性ヌクレアーゼが原因で、短いインビボ半減期を有する。また、特
定の組織を標的にすることは、難易度が高い。ある手法は、確実に組織に到達させるため
の、高い投薬レベルのｓｉＲＮＡであった。しかし、これらの手法では、肝毒性が報告さ
れた。
ｉＲＮＡ分子は、内因性ヌクレアーゼが原因で、短いインビボ半減期を有する。また、特
定の組織を標的にすることは、難易度が高い。ある手法は、確実に組織に到達させるため
の、高い投薬レベルのｓｉＲＮＡであった。しかし、これらの手法では、肝毒性が報告さ
れた。
治療用オリゴヌクレオチドは、有望でありながら、短い血漿半減期を、また、送達およ
び細胞取り込みに関する問題を抱えている。これらの問題を克服するために、オリゴヌク
レオチドの小分子へのコンジュゲーションが提案されているが、今のところ成功していな
い。
び細胞取り込みに関する問題を抱えている。これらの問題を克服するために、オリゴヌク
レオチドの小分子へのコンジュゲーションが提案されているが、今のところ成功していな
い。
本発明は、３位炭素で治療用化合物に連結された非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、ま
たはその代謝産物である標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。いく
つかの実施態様では、非ホルモン性ビタミンＤ分子は、１位炭素ではヒドロキシル化され
ていない。これらの担体は、治療用化合物の吸収、安定性、半減期、効果の持続期間、効
力、またはバイオアベイラビリティを高める。担体は、任意選択で、本開示に記載される
非遊離可能であるスカフォールディング部分、例えばＰＥＧなどをさらに含む。
たはその代謝産物である標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。いく
つかの実施態様では、非ホルモン性ビタミンＤ分子は、１位炭素ではヒドロキシル化され
ていない。これらの担体は、治療用化合物の吸収、安定性、半減期、効果の持続期間、効
力、またはバイオアベイラビリティを高める。担体は、任意選択で、本開示に記載される
非遊離可能であるスカフォールディング部分、例えばＰＥＧなどをさらに含む。
したがって、本発明は、非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素で治療用化合物
にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物である標
的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの実施態様では、非ホ
ルモン性ビタミンＤは、炭素１位置ではヒドロキシル化されていない。好ましい実施態様
では、標的指向基は、約１００から２００，０００Ｄａであり、かつ、ポリ（エチレング
リコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチ
ド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反
応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリマー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の
治療用化合物からなる群から選択されるスカフォールドを介して、治療用化合物にコンジ
ュゲートされる。
にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物である標
的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの実施態様では、非ホ
ルモン性ビタミンＤは、炭素１位置ではヒドロキシル化されていない。好ましい実施態様
では、標的指向基は、約１００から２００，０００Ｄａであり、かつ、ポリ（エチレング
リコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチ
ド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反
応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリマー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の
治療用化合物からなる群から選択されるスカフォールドを介して、治療用化合物にコンジ
ュゲートされる。
別の実施態様では、本発明は、スカフォールドを介して非ホルモン性ビタミンＤ標的指
向基の３位炭素で治療用化合物にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体
、またはその代謝産物である標的指向基を含む担体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成
物を提供する。好ましい実施態様では、担体は、循環中の前記治療用化合物の吸収、バイ
オアベイラビリティ、または半減期を増大する。別の好ましい実施態様では、非ホルモン
性ビタミンＤは、１位炭素ではヒドロキシル化されていない。該医薬組成物の別の好まし
い実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエ
チレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキ
シン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有する修飾基、
水溶性ポリマー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からなる群から選択
される。
向基の３位炭素で治療用化合物にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体
、またはその代謝産物である標的指向基を含む担体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成
物を提供する。好ましい実施態様では、担体は、循環中の前記治療用化合物の吸収、バイ
オアベイラビリティ、または半減期を増大する。別の好ましい実施態様では、非ホルモン
性ビタミンＤは、１位炭素ではヒドロキシル化されていない。該医薬組成物の別の好まし
い実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエ
チレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキ
シン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有する修飾基、
水溶性ポリマー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からなる群から選択
される。
別の好ましい実施態様では、治療用化合物は、小分子、化学物質、核酸、核酸誘導体、
ペプチド、ペプチド誘導体、天然に存在するタンパク質、天然に存在しないタンパク質、
ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、ステープルペプチド、モルホリノ、ホスホロジアミデートモ
ルホリノ、オリゴヌクレオチド、アンチセンス薬、ＲＮＡに基づくサイレンシング薬、ア
プタマー、糖タンパク質、酵素、ホルモン、サイトカイン、インターフェロン、成長因子
、血液凝固因子、抗体、抗体断片、抗体誘導体、毒素をコンジュゲートさせた抗体、抗体
−薬物コンジュゲート、代謝エフェクター、鎮痛薬、解熱薬、抗炎症剤、抗生物質、抗菌
剤、抗ウイルス剤、抗真菌薬、筋骨格薬、心血管治療薬、腎薬物、肺薬物、消化器疾患薬
、血液系作用薬、泌尿器薬物、代謝薬物、肝薬物、神経薬、抗糖尿病薬、抗癌薬、胃の状
態を治療するための薬物、結腸の状態を治療するための薬物、皮膚の状態を治療するため
の薬物、およびリンパ状態を治療するための薬物からなる群から選択される。
ペプチド、ペプチド誘導体、天然に存在するタンパク質、天然に存在しないタンパク質、
ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、ステープルペプチド、モルホリノ、ホスホロジアミデートモ
ルホリノ、オリゴヌクレオチド、アンチセンス薬、ＲＮＡに基づくサイレンシング薬、ア
プタマー、糖タンパク質、酵素、ホルモン、サイトカイン、インターフェロン、成長因子
、血液凝固因子、抗体、抗体断片、抗体誘導体、毒素をコンジュゲートさせた抗体、抗体
−薬物コンジュゲート、代謝エフェクター、鎮痛薬、解熱薬、抗炎症剤、抗生物質、抗菌
剤、抗ウイルス剤、抗真菌薬、筋骨格薬、心血管治療薬、腎薬物、肺薬物、消化器疾患薬
、血液系作用薬、泌尿器薬物、代謝薬物、肝薬物、神経薬、抗糖尿病薬、抗癌薬、胃の状
態を治療するための薬物、結腸の状態を治療するための薬物、皮膚の状態を治療するため
の薬物、およびリンパ状態を治療するための薬物からなる群から選択される。
より好ましい実施態様では、治療用化合物は、配列番号１または１６との少なくとも９
０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、アペリン活性を有するタンパク質である
。別のより好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されてい
ないビタミンＤである。別のより好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチ
レングリコール）である。
０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、アペリン活性を有するタンパク質である
。別のより好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されてい
ないビタミンＤである。別のより好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチ
レングリコール）である。
本発明は、治療用化合物が、配列番号２、３、４、および５からなる群から選択される
タンパク質との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、グレリン活
性を有するタンパク質であり得るということを提供する。より好ましい実施態様では、標
的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。他のより好ま
しい実施態様では、治療用化合物は、配列番号２、３、４、または５のアミノ酸配列を含
むタンパク質である。別のより好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレ
ングリコール）である。
タンパク質との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、グレリン活
性を有するタンパク質であり得るということを提供する。より好ましい実施態様では、標
的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。他のより好ま
しい実施態様では、治療用化合物は、配列番号２、３、４、または５のアミノ酸配列を含
むタンパク質である。別のより好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレ
ングリコール）である。
本発明は、配列番号１０または１７との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ
酸配列を有する、ＰＴＨ活性を有するタンパク質を含む医薬組成物を提供する。好ましい
実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤであ
る。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である
。
酸配列を有する、ＰＴＨ活性を有するタンパク質を含む医薬組成物を提供する。好ましい
実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤであ
る。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である
。
本発明は、インスリン活性を有するタンパク質を含み、かつ配列番号１１または１２と
の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するペプチドを含む、医薬組
成物を提供する。好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化さ
れていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エ
チレングリコール）である。
の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するペプチドを含む、医薬組
成物を提供する。好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化さ
れていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エ
チレングリコール）である。
本発明の一実施態様では、治療用化合物は、抗体である。好ましい実施態様では、該抗
体は、配列番号１３との少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質に、高い親和
性で結合する。別の好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化
されていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（
エチレングリコール）である。
体は、配列番号１３との少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質に、高い親和
性で結合する。別の好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化
されていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（
エチレングリコール）である。
本発明は、治療用化合物がＲＮＡ分子であることを企図する。好ましい実施態様では、
標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。別の好まし
い実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。別の好まし
い実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
本発明は、治療用化合物を必要としている患者を治療する方法であって、本発明に記載
する有効量の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施態様では
、治療用化合物は、小分子、化学物質、核酸、核誘導体、ペプチド、ペプチド誘導体、天
然に存在するタンパク質、天然に存在しないタンパク質、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、ス
テープルペプチド、モルホリノ、オリゴヌクレオチド、モルホリノ、アンチセンス薬、Ｒ
ＮＡに基づくサイレンシング薬、アプタマー、糖タンパク質、酵素、ホルモン、サイトカ
イン、インターフェロン、成長因子、血液凝固因子、抗体、抗体断片、抗体誘導体、毒素
をコンジュゲートさせた抗体、抗体−薬物コンジュゲート、代謝エフェクター、鎮痛薬、
解熱薬、抗炎症剤、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌薬、筋骨格薬、心血管治療
薬、腎薬物、肺薬物、消化器疾患薬、血液系作用薬、泌尿器薬物、代謝薬物、肝薬物、神
経薬、抗糖尿病薬、抗癌薬、胃の状態を治療するための薬物、結腸の状態を治療するため
の薬物、皮膚の状態を治療するための薬物、およびリンパ状態を治療するための薬物から
なる群から選択される。
する有効量の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施態様では
、治療用化合物は、小分子、化学物質、核酸、核誘導体、ペプチド、ペプチド誘導体、天
然に存在するタンパク質、天然に存在しないタンパク質、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、ス
テープルペプチド、モルホリノ、オリゴヌクレオチド、モルホリノ、アンチセンス薬、Ｒ
ＮＡに基づくサイレンシング薬、アプタマー、糖タンパク質、酵素、ホルモン、サイトカ
イン、インターフェロン、成長因子、血液凝固因子、抗体、抗体断片、抗体誘導体、毒素
をコンジュゲートさせた抗体、抗体−薬物コンジュゲート、代謝エフェクター、鎮痛薬、
解熱薬、抗炎症剤、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌薬、筋骨格薬、心血管治療
薬、腎薬物、肺薬物、消化器疾患薬、血液系作用薬、泌尿器薬物、代謝薬物、肝薬物、神
経薬、抗糖尿病薬、抗癌薬、胃の状態を治療するための薬物、結腸の状態を治療するため
の薬物、皮膚の状態を治療するための薬物、およびリンパ状態を治療するための薬物から
なる群から選択される。
前記方法の一実施態様では、治療用化合物は、配列番号１または１５との少なくとも９
０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、アペリン活性を有するタンパク質である
。好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタ
ミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコー
ル）である。
０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、アペリン活性を有するタンパク質である
。好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタ
ミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコー
ル）である。
方法の別の実施態様では、治療用化合物は、配列番号２、３、４、および５からなる群
から選択されるタンパク質との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
む、グレリン活性を有するタンパク質である。好ましい実施態様では、標的指向基は、１
位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。他の好ましい実施態様では、
治療用化合物は、配列番号２、３、４、または５のアミノ酸配列を含むタンパク質である
。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
から選択されるタンパク質との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
む、グレリン活性を有するタンパク質である。好ましい実施態様では、標的指向基は、１
位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。他の好ましい実施態様では、
治療用化合物は、配列番号２、３、４、または５のアミノ酸配列を含むタンパク質である
。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
方法の別の実施態様では、治療用化合物は、配列番号１０または１６との少なくとも９
０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＰＴＨ活性を有するタンパク質である。
好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミ
ンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール
）である。
０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＰＴＨ活性を有するタンパク質である。
好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミ
ンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール
）である。
方法の別の実施態様では、治療用化合物は、配列番号１１との少なくとも９０％の配列
同一性または配列番号１２との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
む、インスリン活性を有するタンパク質である。好ましい実施態様では、標的指向基は、
１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では
、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
同一性または配列番号１２との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含
む、インスリン活性を有するタンパク質である。好ましい実施態様では、標的指向基は、
１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では
、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
方法の別の実施態様では、治療用化合物は、抗体である。好ましい実施態様では、該抗
体は、配列番号１３との少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質に、高い親和
性で結合する。別の好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化
されていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（
エチレングリコール）である。
体は、配列番号１３との少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質に、高い親和
性で結合する。別の好ましい実施態様では、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化
されていないビタミンＤである。別の好ましい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（
エチレングリコール）である。
方法の別の実施態様では、治療用化合物は、ＲＮＡ分子である。好ましい実施態様では
、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。別の好ま
しい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
、標的指向基は、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである。別の好ま
しい実施態様では、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）である。
本発明の方法は、医薬組成物が、経皮、経口、非経口、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、
関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、頭蓋内注射、注入、吸入、眼（ｏｃｕ
ｌａｒ）、局所、直腸内、経鼻、頬側、舌下、膣内、または埋め込み式リザーバー様式に
よって患者に送達されるということを提供する。
関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、頭蓋内注射、注入、吸入、眼（ｏｃｕ
ｌａｒ）、局所、直腸内、経鼻、頬側、舌下、膣内、または埋め込み式リザーバー様式に
よって患者に送達されるということを提供する。
本発明は、医薬品を必要としている患者の治療のための前記医薬品の製造のための医薬
組成物を提供する。
組成物を提供する。
本発明は、本明細書に開示した医薬組成物を製造する方法であって、標的指向基と治療
用化合物とをコンジュゲートする（ここでは、コンジュゲートステップは、カップリング
基を利用する）ことを含む方法を提供する。好ましい実施態様では、カップリング基は、
アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、アルデヒド基、Ｎ
ＨＳ−エステル基、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基
、スルホＳＭＣＣ基、カルボジイミド基、二官能性クロスリンカー、ＮＨＳ−マレイミド
、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。したがって、本発明は、方法か
ら得られる医薬組成物を提供する。ここでは、医薬組成物は、チオール結合、アミド結合
、オキシム結合、ヒドラゾン結合、およびチアゾリジノン結合からなる群から選択される
結合を含有する担体−薬物化合物を含む。別の実施態様では、コンジュゲートステップは
、付加環化反応によって実現される。
用化合物とをコンジュゲートする（ここでは、コンジュゲートステップは、カップリング
基を利用する）ことを含む方法を提供する。好ましい実施態様では、カップリング基は、
アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、アルデヒド基、Ｎ
ＨＳ−エステル基、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基
、スルホＳＭＣＣ基、カルボジイミド基、二官能性クロスリンカー、ＮＨＳ−マレイミド
、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。したがって、本発明は、方法か
ら得られる医薬組成物を提供する。ここでは、医薬組成物は、チオール結合、アミド結合
、オキシム結合、ヒドラゾン結合、およびチアゾリジノン結合からなる群から選択される
結合を含有する担体−薬物化合物を含む。別の実施態様では、コンジュゲートステップは
、付加環化反応によって実現される。
本発明は、式Ｉを含む医薬担体を提供する。
式中、
Ｂは、３位炭素でＬ１にコンジュゲートした非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはそ
の代謝産物である標的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレ
ングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ
酸、核酸、グリカン、反応性リンカー含有修飾基、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、低分子炭
素鎖リンカー、または追加の治療的部分を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、ジスルフィ
ド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、４−ニトロフェニルエステル、アシルイミダ
ゾール、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳ
ＭＣＣ基、カルボジイミド基、および二官能性クロスリンカー（ＮＨＳ−マレイミドなど
）、またはこれらの組み合わせであり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
Ｂは、３位炭素でＬ１にコンジュゲートした非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはそ
の代謝産物である標的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレ
ングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ
酸、核酸、グリカン、反応性リンカー含有修飾基、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、低分子炭
素鎖リンカー、または追加の治療的部分を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、ジスルフィ
ド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、４−ニトロフェニルエステル、アシルイミダ
ゾール、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳ
ＭＣＣ基、カルボジイミド基、および二官能性クロスリンカー（ＮＨＳ−マレイミドなど
）、またはこれらの組み合わせであり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
本発明は、式Ｖ
を含む医薬担体を提供する。
本発明は、式ＶＩ
を含む医薬担体を提供する。
本発明は、式ＶＩＩ
を含む医薬担体を提供する。
本発明は、治療用化合物、安定的に付着されたスカフォールド、標的指向基（これは、
３位炭素でコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物
である）を含む、医薬組成物を提供する。ここでは、第１の試験対象への投与後に、治療
用化合物は、複数の時点で採取された血液試料のＥＬＩＳＡ分析によって測定される、安
定的に付着されたスカフォールド部分および標的指向基を有しない、第２の試験対象に投
与された治療用化合物の半減期よりも長い半減期（複数の時点で採取された血液試料のＥ
ＬＩＳＡ分析によって測定される）を有する。好ましい実施態様では、第１および第２の
対象への投与は、皮下注射によって実現される。別の好ましい実施態様では、スカフォー
ルドおよび標的指向基に、安定的に付着された治療用化合物は、機能分析によって測定さ
れた場合に、スカフォールドおよび標的指向基に安定的に付着されていない治療用化合物
と実質的に同じ活性を保持する。
３位炭素でコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物
である）を含む、医薬組成物を提供する。ここでは、第１の試験対象への投与後に、治療
用化合物は、複数の時点で採取された血液試料のＥＬＩＳＡ分析によって測定される、安
定的に付着されたスカフォールド部分および標的指向基を有しない、第２の試験対象に投
与された治療用化合物の半減期よりも長い半減期（複数の時点で採取された血液試料のＥ
ＬＩＳＡ分析によって測定される）を有する。好ましい実施態様では、第１および第２の
対象への投与は、皮下注射によって実現される。別の好ましい実施態様では、スカフォー
ルドおよび標的指向基に、安定的に付着された治療用化合物は、機能分析によって測定さ
れた場合に、スカフォールドおよび標的指向基に安定的に付着されていない治療用化合物
と実質的に同じ活性を保持する。
医薬組成物の別の好ましい実施態様では、スカフォールド質量範囲は、１００Ｄａ．か
ら２０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０，
０００Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，０００Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ．
、６００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、２０
，００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、１００，０００から２００，０００Ｄａ．、５
０００Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、
２０，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ．、および２０，０００Ｄａ．から４０，００
０Ｄａからなる群から選択される。より好ましい実施態様では、スカフォールドは、治療
用化合物とほぼ同じ質量である。
ら２０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０，
０００Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，０００Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ．
、６００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、２０
，００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、１００，０００から２００，０００Ｄａ．、５
０００Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、
２０，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ．、および２０，０００Ｄａ．から４０，００
０Ｄａからなる群から選択される。より好ましい実施態様では、スカフォールドは、治療
用化合物とほぼ同じ質量である。
本発明は、治療用化合物に非遊離可能にコンジュゲートされたビタミンＤ、類似体、ま
たはその代謝産物である標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。好ま
しい実施態様では、ビタミンＤは、非ホルモンである。より好ましい実施態様では、非ホ
ルモン性ビタミンＤは、１位炭素ではヒドロキシル化されていない。より好ましい実施態
様では、治療用化合物は、非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素でコンジュゲー
トされる。より好ましい実施態様では、治療用化合物は、機能分析によって測定された場
合に、標的指向基にコンジュゲートされていない治療用化合物と実質的に同じ活性を保持
する。より好ましい実施態様では、標的指向基は、ポリ（エチレングリコール）、ポリリ
ジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン
、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有
する修飾基、水溶性ポリマー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からな
る群から選択されるスカフォールドを介して、治療用ペプチドまたは前記治療用核酸にコ
ンジュゲートされる。より好ましい実施態様では、スカフォールドは、治療用化合物とほ
ぼ同じ質量である。
たはその代謝産物である標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。好ま
しい実施態様では、ビタミンＤは、非ホルモンである。より好ましい実施態様では、非ホ
ルモン性ビタミンＤは、１位炭素ではヒドロキシル化されていない。より好ましい実施態
様では、治療用化合物は、非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素でコンジュゲー
トされる。より好ましい実施態様では、治療用化合物は、機能分析によって測定された場
合に、標的指向基にコンジュゲートされていない治療用化合物と実質的に同じ活性を保持
する。より好ましい実施態様では、標的指向基は、ポリ（エチレングリコール）、ポリリ
ジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン
、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有
する修飾基、水溶性ポリマー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からな
る群から選択されるスカフォールドを介して、治療用ペプチドまたは前記治療用核酸にコ
ンジュゲートされる。より好ましい実施態様では、スカフォールドは、治療用化合物とほ
ぼ同じ質量である。
本発明は、非ホルモン性ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、またはビタミンＤ代謝産物で
ある標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。例として、炭素１（Ｃ１
）位置ではヒドロキシル化されていないビタミンＤに基づく分子が挙げられる。担体は、
炭素３（Ｃ３）位で治療用化合物に連結される。本明細書に開示する通り、担体基は、非
ホルモン性ビタミンＤ型が使用される、また、治療用化合物が３位炭素に連結される場合
に、驚くほど有効である。理論に拘泥されることを望まないが、ホルモン形態のビタミン
Ｄは、高カルシウム血症の誘発により有毒である可能性があるので、本明細書に記載する
担体には適していないと考えられている。また、ホルモン型は、細胞におけるビタミンＤ
受容体と結合するので、担体−薬物コンジュゲートを望ましくない細胞または組織に不適
切に標的化する可能性がある。対照的に、非ホルモン性ビタミンＤ型は、ビタミンＤ結合
タンパク質（ＤＢＰ）と結合し、より長く循環を続ける。
ある標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲートを提供する。例として、炭素１（Ｃ１
）位置ではヒドロキシル化されていないビタミンＤに基づく分子が挙げられる。担体は、
炭素３（Ｃ３）位で治療用化合物に連結される。本明細書に開示する通り、担体基は、非
ホルモン性ビタミンＤ型が使用される、また、治療用化合物が３位炭素に連結される場合
に、驚くほど有効である。理論に拘泥されることを望まないが、ホルモン形態のビタミン
Ｄは、高カルシウム血症の誘発により有毒である可能性があるので、本明細書に記載する
担体には適していないと考えられている。また、ホルモン型は、細胞におけるビタミンＤ
受容体と結合するので、担体−薬物コンジュゲートを望ましくない細胞または組織に不適
切に標的化する可能性がある。対照的に、非ホルモン性ビタミンＤ型は、ビタミンＤ結合
タンパク質（ＤＢＰ）と結合し、より長く循環を続ける。
担体分子は、本明細書に記載した化学、本明細書にその内容全体が組み込まれる国際公
開第２０１３１７２９６７号パンフレットに記載された化学、または当技術分野で他に知
られているものを使用して治療用化合物に付着される。担体は、治療用化合物の効力、吸
収、バイオアベイラビリティ、循環半減期または薬物動態特性を向上させる。特定の実施
態様では、担体は、特に、標的指向基と治療用化合物との間の非遊離可能「スペーサー」
として作用する、「スカフォールド」として本明細書で記載することとなるものをさらに
含む。他の実施態様では、担体は、スカフォールドを欠いている。
開第２０１３１７２９６７号パンフレットに記載された化学、または当技術分野で他に知
られているものを使用して治療用化合物に付着される。担体は、治療用化合物の効力、吸
収、バイオアベイラビリティ、循環半減期または薬物動態特性を向上させる。特定の実施
態様では、担体は、特に、標的指向基と治療用化合物との間の非遊離可能「スペーサー」
として作用する、「スカフォールド」として本明細書で記載することとなるものをさらに
含む。他の実施態様では、担体は、スカフォールドを欠いている。
担体は、ヒトおよび動物における使用に適しているように設計される。担体は、担体に
カップリングされた、コンジュゲートされた、または融合された生物または化学物質の薬
物動態特性を向上させるという目的を果たす。これは、標的指向基とＤＢＰとの相互作用
を通して生じる。ＤＢＰは、投与部位から循環血漿まで、分子を迅速かつ効果的に能動輸
送することができ、それによって、分解酵素への薬物の曝露を低下させることができる。
担体はまた、ＤＢＰに結合することによって、薬物の循環半減期を向上させる。これは、
腎臓濾過および他の排出プロセスを妨げることによって、薬物の効力および治療有効性を
増大させる。
カップリングされた、コンジュゲートされた、または融合された生物または化学物質の薬
物動態特性を向上させるという目的を果たす。これは、標的指向基とＤＢＰとの相互作用
を通して生じる。ＤＢＰは、投与部位から循環血漿まで、分子を迅速かつ効果的に能動輸
送することができ、それによって、分解酵素への薬物の曝露を低下させることができる。
担体はまた、ＤＢＰに結合することによって、薬物の循環半減期を向上させる。これは、
腎臓濾過および他の排出プロセスを妨げることによって、薬物の効力および治療有効性を
増大させる。
この新しいクラスの治療法の、患者の健康に対する影響は、深刻であるだろう。癌悪液
質のためのグレリン、肺動脈性肺高血圧症、糖尿病、および心臓病のためのアペリン、お
よび副甲状腺機能低下症のためのＰＴＨなどの、重篤な状態については以前に使用不可能
であった多くの治療法を、本発明の適用によって実現することができる。糖尿病を治療す
るためのインスリンおよびＧＬＰ１などの他の現在の治療法の改善は、患者の健康および
便利さに大きな影響を与えることができた。多くの疾患が、ＲＮＡｉに基づく治療から恩
恵を受けることができる。これらには、黄斑変性症およびハンチントン病などの疾患が含
まれる。さらに、ある種の癌、肝疾患、および感染症（呼吸器多核体ウイルス、単純ヘル
ペスウイルス２型、ＨＩＶ、Ａ型およびＢ型肝炎、インフルエンザ、および麻疹を含めて
）も、ＲＮＡｉに基づく治療から恩恵を受けることができる。
質のためのグレリン、肺動脈性肺高血圧症、糖尿病、および心臓病のためのアペリン、お
よび副甲状腺機能低下症のためのＰＴＨなどの、重篤な状態については以前に使用不可能
であった多くの治療法を、本発明の適用によって実現することができる。糖尿病を治療す
るためのインスリンおよびＧＬＰ１などの他の現在の治療法の改善は、患者の健康および
便利さに大きな影響を与えることができた。多くの疾患が、ＲＮＡｉに基づく治療から恩
恵を受けることができる。これらには、黄斑変性症およびハンチントン病などの疾患が含
まれる。さらに、ある種の癌、肝疾患、および感染症（呼吸器多核体ウイルス、単純ヘル
ペスウイルス２型、ＨＩＶ、Ａ型およびＢ型肝炎、インフルエンザ、および麻疹を含めて
）も、ＲＮＡｉに基づく治療から恩恵を受けることができる。
本発明の１以上の実施態様を説明および主張する際には、下に記載する定義に従って、
次の専門用語が使用されることとなる。
次の専門用語が使用されることとなる。
用語「吸収」は、薬物の血流への移動である。薬物は、何らかの投与経路（例えば、経
口、局所若しくは経皮、皮下、筋肉内、または静脈内）を介して、或いは、錠剤、貼付剤
、カプセル剤、または液剤などの特定の剤形で、導入される必要がある。
口、局所若しくは経皮、皮下、筋肉内、または静脈内）を介して、或いは、錠剤、貼付剤
、カプセル剤、または液剤などの特定の剤形で、導入される必要がある。
用語「拮抗剤」は、リガンドの場合１つ以上の受容体に結合し、又は受容体の場合に１
つ以上のリガンドに結合することを含む、特定又は指定されたタンパク質の活性を、中和
し、遮断し、阻害し、無効にし、低減し、干渉できる分子を意味する。拮抗剤には、抗体
及びその抗原結合断片、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、糖ペプチド、糖脂質、多
糖類、オリゴ糖、核酸、生物有機分子、ペプチドミメティクス、薬理的薬剤（ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｎｔｓ）及びその代謝物、転写及び翻訳制御配列などがあ
る。拮抗剤には、タンパク質、ホルモン、又は他の生物活性分子の小分子阻害剤もある。
拮抗剤は、融合タンパク質、受容体分子、アンチセンス分子、アプタマー、リボザイム、
又はタンパク質、ホルモン、若しくは他の生物活性分子に特異的に結合して標的へのその
結合を封鎖する誘導体でもよい。
つ以上のリガンドに結合することを含む、特定又は指定されたタンパク質の活性を、中和
し、遮断し、阻害し、無効にし、低減し、干渉できる分子を意味する。拮抗剤には、抗体
及びその抗原結合断片、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、糖ペプチド、糖脂質、多
糖類、オリゴ糖、核酸、生物有機分子、ペプチドミメティクス、薬理的薬剤（ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｅｎｔｓ）及びその代謝物、転写及び翻訳制御配列などがあ
る。拮抗剤には、タンパク質、ホルモン、又は他の生物活性分子の小分子阻害剤もある。
拮抗剤は、融合タンパク質、受容体分子、アンチセンス分子、アプタマー、リボザイム、
又はタンパク質、ホルモン、若しくは他の生物活性分子に特異的に結合して標的へのその
結合を封鎖する誘導体でもよい。
「抗体」（Ａｂ）及び「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、類似の構造的特徴を有する糖タ
ンパク質を意味する。抗体は特定の抗原に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは
、抗体と、全般的に抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペ
プチドは、例えば、リンパ系により低レベルで産生され、骨髄腫により増加したレベルで
産生される。
ンパク質を意味する。抗体は特定の抗原に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは
、抗体と、全般的に抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペ
プチドは、例えば、リンパ系により低レベルで産生され、骨髄腫により増加したレベルで
産生される。
「アプタマー」は、特定の標的に結合するように選択された核酸系化合物である。アプ
タマー系治療化合物の例は、引用により本明細書にその全体として組み込まれる国際公開
第０７／０３５９２２号パンフレットに見ることができる。
タマー系治療化合物の例は、引用により本明細書にその全体として組み込まれる国際公開
第０７／０３５９２２号パンフレットに見ることができる。
用語「バイオアベイラビリティ」は、全身循環に到達する未変化の薬物の投与された投
与量の分率であり、薬物の主要な薬物動態的性質の１つである。医薬が静脈内に投与され
る場合、そのバイオアベイラビリティは１００％である。医薬が他の経路により（経口な
ど）投与される場合、そのバイオアベイラビリティは一般的に低下するか（不完全な吸収
及び初回通過代謝により）、又は患者により様々になり得る。バイオアベイラビリティは
、非静脈内投与経路の用量を計算する場合に考慮される、薬物動態において重要なパラメ
ータである。
与量の分率であり、薬物の主要な薬物動態的性質の１つである。医薬が静脈内に投与され
る場合、そのバイオアベイラビリティは１００％である。医薬が他の経路により（経口な
ど）投与される場合、そのバイオアベイラビリティは一般的に低下するか（不完全な吸収
及び初回通過代謝により）、又は患者により様々になり得る。バイオアベイラビリティは
、非静脈内投与経路の用量を計算する場合に考慮される、薬物動態において重要なパラメ
ータである。
「担体」は、治療化合物にコンジュゲートされ、融合され、結合され、又は共に製剤さ
れて、薬物の吸収、半減期、バイオアベイラビリティ、薬物動態的性質、又は薬力学的性
質を向上させることができる化合物である。それらは、標的化基、結合基、及び任意選択
的にスカフォールド部分を含む。いくつかの実施態様では、担体は、治療用化合物を皮下
注射の部位から循環に運ぶ、また、治療用化合物を循環内で長期間運ぶことができる。
れて、薬物の吸収、半減期、バイオアベイラビリティ、薬物動態的性質、又は薬力学的性
質を向上させることができる化合物である。それらは、標的化基、結合基、及び任意選択
的にスカフォールド部分を含む。いくつかの実施態様では、担体は、治療用化合物を皮下
注射の部位から循環に運ぶ、また、治療用化合物を循環内で長期間運ぶことができる。
「有効量」は、必要な用量及び期間で、所望の治療的又は予防的な結果を得るのに効果
的な治療化合物の量を意味する。治療化合物の「治療上有効な量」は、個人の病態、年齢
、性別、及び体重などの因子により変わり得る。治療上有効な量は、例えば、向上した生
存率、より迅速な回復若しくは寛解、症状の改善若しくは解消、又は他の許容できるバイ
オマーカー若しくは代用マーカーにより測定できる。治療上有効な量は、治療化合物の有
毒又は有害な作用より、治療上利益のある効果が上回るものでもある。「予防上有効な量
」は、必要な用量及び期間で、所望の予防的な結果を得るのに効果的な治療化合物の量を
意味する。必ずではないが典型的には、予防的な投与量は対象において疾病の前又は初期
に利用されるので、予防上有効な量は治療上有効な量より少ないだろう。
的な治療化合物の量を意味する。治療化合物の「治療上有効な量」は、個人の病態、年齢
、性別、及び体重などの因子により変わり得る。治療上有効な量は、例えば、向上した生
存率、より迅速な回復若しくは寛解、症状の改善若しくは解消、又は他の許容できるバイ
オマーカー若しくは代用マーカーにより測定できる。治療上有効な量は、治療化合物の有
毒又は有害な作用より、治療上利益のある効果が上回るものでもある。「予防上有効な量
」は、必要な用量及び期間で、所望の予防的な結果を得るのに効果的な治療化合物の量を
意味する。必ずではないが典型的には、予防的な投与量は対象において疾病の前又は初期
に利用されるので、予防上有効な量は治療上有効な量より少ないだろう。
「半減期」は、被験分子の量の半分がもはや検出されない経過時間の量を意味する、当
技術分野に公知である科学用語である。インビボ半減期は、被験分子の半分が、ヒト又は
動物の循環している血清又は組織にもはや検出されない経過時間を意味する。
技術分野に公知である科学用語である。インビボ半減期は、被験分子の半分が、ヒト又は
動物の循環している血清又は組織にもはや検出されない経過時間を意味する。
「ホルモン」は、ある細胞（又は細胞の群）と他の細胞の間で連絡を取り合う生物学的
又は化学的メッセンジャーである。本明細書に記載される通り、本発明に使用するホルモ
ンは、ペプチド、ステロイド、フェロモン、インターロイキン、リンフォカイン、サイト
カイン、又は当技術分野に公知である他のホルモンクラスのメンバーであり得る。
又は化学的メッセンジャーである。本明細書に記載される通り、本発明に使用するホルモ
ンは、ペプチド、ステロイド、フェロモン、インターロイキン、リンフォカイン、サイト
カイン、又は当技術分野に公知である他のホルモンクラスのメンバーであり得る。
「ホモログ」は、ヌクレオチド配列レベル、ペプチド配列レベル、機能的レベル、又は
構造的レベルで基準分子に類似である生物活性分子である。ホモログは、基準配列と特定
のパーセントの同一性を共有する配列誘導体を含み得る。そのため、一実施形態において
、ホモログ配列又は誘導配列は、少なくとも７０パーセントの配列同一性を共有する。好
ましい実施形態において、ホモログ配列又は誘導配列は、少なくとも８０又は８５パーセ
ントの配列同一性を共有する。より好ましい実施形態において、ホモログ配列又は誘導配
列は、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６
、９７、９８、又は９９パーセントの配列同一性を共有する。ホモログ核酸配列又は誘導
核酸配列は、ハイストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で基準核酸配列に結
合したままでいる能力によっても定義できる。基準分子に構造的又は機能的類似性を有す
るホモログは、基準分子の化学的誘導体であり得る。構造的又は機能的なホモログ並びに
誘導体を検出、発生、及びスクリーニングする方法は、当技術分野に公知である。
構造的レベルで基準分子に類似である生物活性分子である。ホモログは、基準配列と特定
のパーセントの同一性を共有する配列誘導体を含み得る。そのため、一実施形態において
、ホモログ配列又は誘導配列は、少なくとも７０パーセントの配列同一性を共有する。好
ましい実施形態において、ホモログ配列又は誘導配列は、少なくとも８０又は８５パーセ
ントの配列同一性を共有する。より好ましい実施形態において、ホモログ配列又は誘導配
列は、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６
、９７、９８、又は９９パーセントの配列同一性を共有する。ホモログ核酸配列又は誘導
核酸配列は、ハイストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で基準核酸配列に結
合したままでいる能力によっても定義できる。基準分子に構造的又は機能的類似性を有す
るホモログは、基準分子の化学的誘導体であり得る。構造的又は機能的なホモログ並びに
誘導体を検出、発生、及びスクリーニングする方法は、当技術分野に公知である。
「ハイブリダイゼーション」は、一般的には、相補鎖が環境中にある場合、その融解温
度未満で、変性したＤＮＡがリアニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイズ
可能な配列の間の望まれる相同性の程度が高いほど、利用可能な相対温度は高くなる。結
果として、より高い相対温度は反応条件をよりストリンジェントにする傾向となり、より
低い温度は、ストリンジェンシーを低くする傾向になることになる。ハイブリダイゼーシ
ョン反応のストリンジェンシーのさらなる詳細及び説明には、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａ
ｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（１９９５）を参照
されたい。
度未満で、変性したＤＮＡがリアニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイズ
可能な配列の間の望まれる相同性の程度が高いほど、利用可能な相対温度は高くなる。結
果として、より高い相対温度は反応条件をよりストリンジェントにする傾向となり、より
低い温度は、ストリンジェンシーを低くする傾向になることになる。ハイブリダイゼーシ
ョン反応のストリンジェンシーのさらなる詳細及び説明には、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａ
ｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（１９９５）を参照
されたい。
「個人」、「対象」、又は「患者」は、脊椎動物である。特定の実施形態において、脊
椎動物は哺乳動物である。哺乳動物には、霊長類（ヒト及びヒト以外の霊長類を含む）及
びげっ歯類（例えば、マウス、ハムスター、モルモット、及びラット）があるが、これら
に限定されない。特定の実施形態において、哺乳動物はヒトである。「対照対象」は、個
人、対象、又は患者に確認された疾病、機能不全、又は病態があると診断されていない健
康な対象を意味する。対照対象には、疾病、機能不全、又は病態に関連する徴候又は症状
が全くない。
椎動物は哺乳動物である。哺乳動物には、霊長類（ヒト及びヒト以外の霊長類を含む）及
びげっ歯類（例えば、マウス、ハムスター、モルモット、及びラット）があるが、これら
に限定されない。特定の実施形態において、哺乳動物はヒトである。「対照対象」は、個
人、対象、又は患者に確認された疾病、機能不全、又は病態があると診断されていない健
康な対象を意味する。対照対象には、疾病、機能不全、又は病態に関連する徴候又は症状
が全くない。
「医薬品」は、疾病、障害、又は病態の治療のために製造された活性薬物である。
「モルホリノ」は、引用により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第８，
０７６，４７６号明細書に記載されている、ホスホロジアミデート結合を利用する、天然
の核酸の非天然バリアントである合成分子である。
０７６，４７６号明細書に記載されている、ホスホロジアミデート結合を利用する、天然
の核酸の非天然バリアントである合成分子である。
「核酸」は、細胞機能を支配し得る遺伝情報を保持する高分子の群、ＤＮＡ、ＲＮＡ、
又はそのバリアントのいずれかである。核酸は、酵素様活性を持つことがあり（例えばリ
ボザイム）、又は対象の遺伝子発現の阻害に使用されることもある（例えばＲＮＡｉ）。
本明細書に記載される本発明に使用される核酸は、一本鎖でも、二本鎖でも、直鎖でも、
環状でもよい。本発明は、アプタマー、ＰＮＡ、モルホリノ、又は核酸の他の非天然バリ
アントを含むがこれらに限定されない核酸バリアントの使用をさらに組み込む。例として
は、本発明に有用な核酸は、引用によりその全体として本明細書に組み込まれる米国特許
第８，０７６，４７６号明細書に記載されている。
又はそのバリアントのいずれかである。核酸は、酵素様活性を持つことがあり（例えばリ
ボザイム）、又は対象の遺伝子発現の阻害に使用されることもある（例えばＲＮＡｉ）。
本明細書に記載される本発明に使用される核酸は、一本鎖でも、二本鎖でも、直鎖でも、
環状でもよい。本発明は、アプタマー、ＰＮＡ、モルホリノ、又は核酸の他の非天然バリ
アントを含むがこれらに限定されない核酸バリアントの使用をさらに組み込む。例として
は、本発明に有用な核酸は、引用によりその全体として本明細書に組み込まれる米国特許
第８，０７６，４７６号明細書に記載されている。
「患者の反応」又は「反応」は、非限定的に下記を含む、患者にとっての利益を示す任
意のエンドポイントを使用して評価できる、（１）安定化、緩徐化及び完全な停止を含む
、疾病の進行のある程度の阻害；（２）疾病エピソード及び／又は症状の数の低減；（３
）隣接周辺臓器及び／又は組織への疾病細胞の浸潤の阻害（すなわち、低減、緩徐化、又
は完全な停止）；（４）疾病の広がりの阻害（すなわち、低減、緩徐化、又は完全な停止
）；（５）自己免疫状態の低下；（６）疾病に関連するバイオマーカーの発現の有利な変
化；（７）疾病に関連する１つ以上の症状のある程度の緩和；（８）治療後の無病表示（
ｄｉｓｅａｓｅ−ｆｒｅｅ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の長さの増加；又は（９）治療
後のある時点での死亡率低下。
意のエンドポイントを使用して評価できる、（１）安定化、緩徐化及び完全な停止を含む
、疾病の進行のある程度の阻害；（２）疾病エピソード及び／又は症状の数の低減；（３
）隣接周辺臓器及び／又は組織への疾病細胞の浸潤の阻害（すなわち、低減、緩徐化、又
は完全な停止）；（４）疾病の広がりの阻害（すなわち、低減、緩徐化、又は完全な停止
）；（５）自己免疫状態の低下；（６）疾病に関連するバイオマーカーの発現の有利な変
化；（７）疾病に関連する１つ以上の症状のある程度の緩和；（８）治療後の無病表示（
ｄｉｓｅａｓｅ−ｆｒｅｅ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の長さの増加；又は（９）治療
後のある時点での死亡率低下。
本明細書では、用語「ペプチド」は、２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドである
。用語ペプチドは、短鎖ペプチドも（例えば、２〜１４個のアミノ酸を含むペプチド）、
中鎖ペプチド（１５〜５０）も、長鎖ペプチド（例えば、タンパク質）も含む。用語ペプ
チド、中鎖ペプチド、及びタンパク質は本明細書では互換的に使用できる。本明細書では
、用語「ペプチド」は、アミノ酸残基から構成されたポリマー、関連する天然の構造的バ
リアント、及びペプチド結合で結合した合成の非天然アナログ、関連する天然の構造的バ
リアント、及びその合成の非天然アナログを意味すると解釈される。合成ペプチドは、例
えば、自動ペプチド合成機を使用して合成できる。ペプチドは、細胞、細菌、酵母、又は
他の生物などの他の手段によっても合成できる。ペプチドは、遺伝子がコードした２０個
のアミノ酸以外のアミノ酸を含むことがある。ペプチドは、プロセシング及び他の翻訳後
修飾などの天然のプロセスにより修飾されたものも、化学修飾技術により修飾されたもの
も含む。そのような修飾は、基本的な教科書及びより詳述されたモノグラフに詳細に記載
されており、当業者に周知である。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、及びアミノ又
はカルボキシル末端を含む、ペプチド内のどこにでも起こる。
。用語ペプチドは、短鎖ペプチドも（例えば、２〜１４個のアミノ酸を含むペプチド）、
中鎖ペプチド（１５〜５０）も、長鎖ペプチド（例えば、タンパク質）も含む。用語ペプ
チド、中鎖ペプチド、及びタンパク質は本明細書では互換的に使用できる。本明細書では
、用語「ペプチド」は、アミノ酸残基から構成されたポリマー、関連する天然の構造的バ
リアント、及びペプチド結合で結合した合成の非天然アナログ、関連する天然の構造的バ
リアント、及びその合成の非天然アナログを意味すると解釈される。合成ペプチドは、例
えば、自動ペプチド合成機を使用して合成できる。ペプチドは、細胞、細菌、酵母、又は
他の生物などの他の手段によっても合成できる。ペプチドは、遺伝子がコードした２０個
のアミノ酸以外のアミノ酸を含むことがある。ペプチドは、プロセシング及び他の翻訳後
修飾などの天然のプロセスにより修飾されたものも、化学修飾技術により修飾されたもの
も含む。そのような修飾は、基本的な教科書及びより詳述されたモノグラフに詳細に記載
されており、当業者に周知である。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、及びアミノ又
はカルボキシル末端を含む、ペプチド内のどこにでも起こる。
本明細書では、「薬学的に許容できる担体」又は「治療上有効な担体」は、水性又は非
水性（固体）、例えばアルコール性又は油性、又はこれらの混合物であり、界面活性剤、
軟化薬、潤滑剤、安定剤、染料、香料、保存剤、ｐＨ調整用の酸若しくは塩基、溶媒、乳
化剤、ゲル化剤、保湿剤、安定剤、湿潤剤、時間放出剤（ｔｉｍｅ ｒｅｌｅａｓｅ ａ
ｇｅｎｔ）、保水剤、又は特定の形態の医薬組成物に通常含まれる他の成分を含み得る。
薬学的に許容できる担体は当技術分野に周知であり、例えば、水又は生理学的に緩衝され
た塩水などの水溶液、又は他の溶媒若しくはビヒクル、例えばグリコール、グリセロール
、及びオリーブ油又は注射用有機エステルなどの油類がある。薬学的に許容できる担体は
、例えば、特定の阻害剤の吸収を安定化又は増加させるように働く生理的に許容できる化
合物、例えば、グルコース、スクロース又はデキストランなどの炭水化物、アスコルビン
酸又はグルタチオンなどの酸化防止剤、キレート剤、低分子量タンパク質、又は他の安定
剤若しくは賦形剤を含み得る。
水性（固体）、例えばアルコール性又は油性、又はこれらの混合物であり、界面活性剤、
軟化薬、潤滑剤、安定剤、染料、香料、保存剤、ｐＨ調整用の酸若しくは塩基、溶媒、乳
化剤、ゲル化剤、保湿剤、安定剤、湿潤剤、時間放出剤（ｔｉｍｅ ｒｅｌｅａｓｅ ａ
ｇｅｎｔ）、保水剤、又は特定の形態の医薬組成物に通常含まれる他の成分を含み得る。
薬学的に許容できる担体は当技術分野に周知であり、例えば、水又は生理学的に緩衝され
た塩水などの水溶液、又は他の溶媒若しくはビヒクル、例えばグリコール、グリセロール
、及びオリーブ油又は注射用有機エステルなどの油類がある。薬学的に許容できる担体は
、例えば、特定の阻害剤の吸収を安定化又は増加させるように働く生理的に許容できる化
合物、例えば、グルコース、スクロース又はデキストランなどの炭水化物、アスコルビン
酸又はグルタチオンなどの酸化防止剤、キレート剤、低分子量タンパク質、又は他の安定
剤若しくは賦形剤を含み得る。
用語「薬物動態」は、治療化合物の吸収、分布、代謝、及び排泄の時間経過であると定
義されている。向上した「薬物動態的性質」は、特定の治療化合物に望まれる１つ以上の
薬物動態的性質を向上させることと定義される。例には、代謝又は分泌による排出を低減
すること、薬物吸収を増加させること、半減期を延ばすこと、及び／又はバイオアベイラ
ビリティを増加させることがあるが、これらに限定されない。
義されている。向上した「薬物動態的性質」は、特定の治療化合物に望まれる１つ以上の
薬物動態的性質を向上させることと定義される。例には、代謝又は分泌による排出を低減
すること、薬物吸収を増加させること、半減期を延ばすこと、及び／又はバイオアベイラ
ビリティを増加させることがあるが、これらに限定されない。
「ＰＮＡ」は、ＤＮＡ又はＲＮＡに類似の化学構造を持つペプチド核酸を意味する。ペ
プチド結合は、ヌクレオチド又はヌクレオシドを結合するために利用される。
プチド結合は、ヌクレオチド又はヌクレオシドを結合するために利用される。
「スカフォールド」は、他の分子を共有結合によってまたは非共有結合によって付着ま
たは構築させることができる分子である。本発明のスカフォールドは、標的指向基と薬物
との間の「スペーサー」として作用することができる。スペーサーは、２つの別の分子的
実体間の物理的距離を提供する分子的実体である。スカフォールドはまた、反応性の「リ
ンカー」を含有することもできるし、薬物に加えて有益な治療的特性を有することもでき
る。リンカーは、ある分子的実体から別の分子的実体までの付着の部位である。したがっ
て、本発明のスカフォールドは、例えば、ＰＥＧ、血清アルブミン、チオレドキシン、免
疫グロブリン、反応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリマー、または治療用化合物
であり得る。本発明のスカフォールドおよびリンカーは、安定（すなわち非遊離可能）で
ある。非遊離可能リンカーは、遊離可能リンカーよりも安定な化学結合を有し、付着され
た分子的実体をインビボで付着されたままにする。しかし、特定の実施態様では、これは
、特定の条件下で「遊離可能」であり得る。遊離可能リンカーは、固有の不安定性を有し
、時間と共に、ある種の条件下で、付着された分子を遊離させる。
たは構築させることができる分子である。本発明のスカフォールドは、標的指向基と薬物
との間の「スペーサー」として作用することができる。スペーサーは、２つの別の分子的
実体間の物理的距離を提供する分子的実体である。スカフォールドはまた、反応性の「リ
ンカー」を含有することもできるし、薬物に加えて有益な治療的特性を有することもでき
る。リンカーは、ある分子的実体から別の分子的実体までの付着の部位である。したがっ
て、本発明のスカフォールドは、例えば、ＰＥＧ、血清アルブミン、チオレドキシン、免
疫グロブリン、反応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリマー、または治療用化合物
であり得る。本発明のスカフォールドおよびリンカーは、安定（すなわち非遊離可能）で
ある。非遊離可能リンカーは、遊離可能リンカーよりも安定な化学結合を有し、付着され
た分子的実体をインビボで付着されたままにする。しかし、特定の実施態様では、これは
、特定の条件下で「遊離可能」であり得る。遊離可能リンカーは、固有の不安定性を有し
、時間と共に、ある種の条件下で、付着された分子を遊離させる。
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者により容易に決定可
能であり、プローブの長さ、洗浄温度、及び塩の濃度に依存する経験的計算である。一般
に、プローブが長いほど適切なアニーリングに高温が必要であり、プローブが短いほど低
温が必要である。
能であり、プローブの長さ、洗浄温度、及び塩の濃度に依存する経験的計算である。一般
に、プローブが長いほど適切なアニーリングに高温が必要であり、プローブが短いほど低
温が必要である。
本明細書に定義される「ストリンジェントな条件」又は「ハイストリンジェンシー条件
」は、以下により定義され得る：（１）洗浄に、低イオン強度及び高温を利用するもの、
例えば、５０℃で０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム
／０．１％ドデシル硫酸ナトリウム；（２）ハイブリダイゼーションの間に、ホルムアミ
ドなどの変性剤を利用するもの、例えば、４２℃で、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０
．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５
０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６．５）と、７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５
ｍＭのクエン酸ナトリウム；又は（３）４２℃での、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（
０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリ
ウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処
理されたサケ精子ＤＮＡ（５０μｌ／ｍ１）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％硫酸デキスト
ランを利用する溶液中での一晩のハイブリダイゼーション、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリ
ウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃での１０分間の洗浄、それに続いて、５５℃のＥＤ
ＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる１０分間のハイ−ストリンジェンシー洗浄。
」は、以下により定義され得る：（１）洗浄に、低イオン強度及び高温を利用するもの、
例えば、５０℃で０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム
／０．１％ドデシル硫酸ナトリウム；（２）ハイブリダイゼーションの間に、ホルムアミ
ドなどの変性剤を利用するもの、例えば、４２℃で、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０
．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５
０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６．５）と、７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５
ｍＭのクエン酸ナトリウム；又は（３）４２℃での、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（
０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリ
ウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処
理されたサケ精子ＤＮＡ（５０μｌ／ｍ１）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％硫酸デキスト
ランを利用する溶液中での一晩のハイブリダイゼーション、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリ
ウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃での１０分間の洗浄、それに続いて、５５℃のＥＤ
ＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる１０分間のハイ−ストリンジェンシー洗浄。
本明細書に開示される「治療化合物」は、対象に投与されて疾病若しくは機能不全を治
療するか、又は他の方法で個人の健康に影響を与える小分子、化学物質、核酸、核酸誘導
体、ペプチド、ペプチド誘導体、天然のタンパク質、非天然のタンパク質、糖タンパク質
、及びステロイドを意味する。治療化合物の非限定的な例には、酵素、ホルモン、サイト
カイン、抗体断片、抗体誘導体などのポリペプチド、代謝機能に影響する薬物、並びに、
鎮痛剤、解熱剤、抗炎症剤、抗生物質、抗ウイルス化合物、抗真菌化合物、心臓血管薬、
腎機能、電解質代謝に影響する薬物、中枢神経系に作用する薬物、化学療法化合物、受容
体作動剤、及び受容体拮抗剤などの有機化合物がある。治療化合物には、例えば、血清ア
ルブミン、免疫グロブリン、アポリポタンパク質、若しくはトランスフェリンなどの血漿
タンパク質、又は赤血球若しくはリンパ球の表面に存在するタンパク質があるがこれらに
限定されない血清因子などの細胞外分子がある。そのため、例示的な治療化合物は、小分
子、化学物質、核酸、核酸誘導体、ペプチド、ペプチド誘導体、天然のタンパク質、非天
然のタンパク質、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ステープルドペプチド、オリゴヌクレオチド
、モルホリノ、アンチセンス薬、ＲＮＡ系サイレンシング薬、アプタマー、糖タンパク質
、酵素、ホルモン、サイトカイン、インターフェロン、成長因子、血液凝固因子、抗体、
抗体断片、抗体誘導体、毒素結合抗体、抗体−薬結合体、代謝エフェクター、鎮痛剤、解
熱剤、抗炎症剤、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、筋骨格の薬、心臓血管の
薬、腎臓の薬、肺の薬、消化器疾患の薬、血液作用薬、泌尿器の薬、代謝作用薬、肝臓の
薬、神経作用薬、抗糖尿病薬、抗癌剤、胃の病気を治療する薬、結腸の病気を治療する薬
、皮膚病を治療する薬、及びリンパの病気を治療する薬を含む。本明細書での用語「治療
化合物」は、基本的に、用語「薬物」又は「治療剤」と同じ意味を有する。
療するか、又は他の方法で個人の健康に影響を与える小分子、化学物質、核酸、核酸誘導
体、ペプチド、ペプチド誘導体、天然のタンパク質、非天然のタンパク質、糖タンパク質
、及びステロイドを意味する。治療化合物の非限定的な例には、酵素、ホルモン、サイト
カイン、抗体断片、抗体誘導体などのポリペプチド、代謝機能に影響する薬物、並びに、
鎮痛剤、解熱剤、抗炎症剤、抗生物質、抗ウイルス化合物、抗真菌化合物、心臓血管薬、
腎機能、電解質代謝に影響する薬物、中枢神経系に作用する薬物、化学療法化合物、受容
体作動剤、及び受容体拮抗剤などの有機化合物がある。治療化合物には、例えば、血清ア
ルブミン、免疫グロブリン、アポリポタンパク質、若しくはトランスフェリンなどの血漿
タンパク質、又は赤血球若しくはリンパ球の表面に存在するタンパク質があるがこれらに
限定されない血清因子などの細胞外分子がある。そのため、例示的な治療化合物は、小分
子、化学物質、核酸、核酸誘導体、ペプチド、ペプチド誘導体、天然のタンパク質、非天
然のタンパク質、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ステープルドペプチド、オリゴヌクレオチド
、モルホリノ、アンチセンス薬、ＲＮＡ系サイレンシング薬、アプタマー、糖タンパク質
、酵素、ホルモン、サイトカイン、インターフェロン、成長因子、血液凝固因子、抗体、
抗体断片、抗体誘導体、毒素結合抗体、抗体−薬結合体、代謝エフェクター、鎮痛剤、解
熱剤、抗炎症剤、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、筋骨格の薬、心臓血管の
薬、腎臓の薬、肺の薬、消化器疾患の薬、血液作用薬、泌尿器の薬、代謝作用薬、肝臓の
薬、神経作用薬、抗糖尿病薬、抗癌剤、胃の病気を治療する薬、結腸の病気を治療する薬
、皮膚病を治療する薬、及びリンパの病気を治療する薬を含む。本明細書での用語「治療
化合物」は、基本的に、用語「薬物」又は「治療剤」と同じ意味を有する。
本明細書では、「治療」は、治療される個人又は細胞の自然の経過を変えようとする臨
床介入を意味し、臨床病理の過程の前又はその間に実施できる。治療の望ましい効果には
、疾病又はその状態若しくは症状の発生又は再発の予防、疾病の状態又は症状の緩和、疾
病の直接又は間接の病理的な結果の減少、疾病進行の速度の低減、疾病状態の寛解又は軽
減、軽快又は改善された予後の達成がある。いくつかの実施形態において、本発明の方法
及び組成物は、疾病又は疾患の発生を遅延する試みに有用である。
床介入を意味し、臨床病理の過程の前又はその間に実施できる。治療の望ましい効果には
、疾病又はその状態若しくは症状の発生又は再発の予防、疾病の状態又は症状の緩和、疾
病の直接又は間接の病理的な結果の減少、疾病進行の速度の低減、疾病状態の寛解又は軽
減、軽快又は改善された予後の達成がある。いくつかの実施形態において、本発明の方法
及び組成物は、疾病又は疾患の発生を遅延する試みに有用である。
「ビタミン」は、当技術分野における認識された用語であり、体の正常な成長及び活動
のために微量で欠くことのできない脂溶性又は水溶性有機物質であると定義され、植物性
又は動物性の食品又はサプリメントから自然に得られる。
のために微量で欠くことのできない脂溶性又は水溶性有機物質であると定義され、植物性
又は動物性の食品又はサプリメントから自然に得られる。
「ビタミンＤ」は、脂溶性のセコステロイドの群である。いくつかの型（ビタマー）の
ビタミンＤが存在する。２つの主な型は、ビタミンＤ２すなわちエルゴカルシフェロール
、およびビタミンＤ３すなわちコレカルシフェロールである。添え字のないビタミンＤは
、ビタミンＤ２、Ｄ３、または当技術分野で知られている他の型を指す。ヒトでは、ビタ
ミンＤは、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）またはエルゴカルシフェロール（ビタ
ミンＤ２）として摂取することができる。さらに、ヒトは、ビタミンＤを、日光曝露が十
分である場合に、コレステロールから合成することができる。コレカルシフェロールは、
肝臓またはインビトロで修飾されて、２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（「２５−
ヒドロキシビタミンＤ」）となり得る。２５−ヒドロキシビタミンＤは、腎臓またはイン
ビトロで修飾されて、別のホルモン型の１，２５−ヒドロキシビタミンＤとなり得る。
ビタミンＤが存在する。２つの主な型は、ビタミンＤ２すなわちエルゴカルシフェロール
、およびビタミンＤ３すなわちコレカルシフェロールである。添え字のないビタミンＤは
、ビタミンＤ２、Ｄ３、または当技術分野で知られている他の型を指す。ヒトでは、ビタ
ミンＤは、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）またはエルゴカルシフェロール（ビタ
ミンＤ２）として摂取することができる。さらに、ヒトは、ビタミンＤを、日光曝露が十
分である場合に、コレステロールから合成することができる。コレカルシフェロールは、
肝臓またはインビトロで修飾されて、２５−ヒドロキシコレカルシフェロール（「２５−
ヒドロキシビタミンＤ」）となり得る。２５−ヒドロキシビタミンＤは、腎臓またはイン
ビトロで修飾されて、別のホルモン型の１，２５−ヒドロキシビタミンＤとなり得る。
「ビタミンＤ結合タンパク質」又は「ＤＢＰ」は、いろいろな活性の中でも、ビタミン
Ｄ及びそのアナログに結合して、ビタミンがその活性型に修飾される肝臓及び腎臓中の部
位に輸送できる、全哺乳動物に見られる自然に循環している血清タンパク質であり、それ
は、ビタミンＤをその種々の形態で、ヒトで平均３０日間循環した状態に保つ。ＤＢＰタ
ンパク質配列は、配列番号１４に開示されており、ＤＢＰタンパク質配列をコードする例
示的な核酸配列は、配列番号１５に開示されている。ＤＢＰは、複数の天然のアイソフォ
ームを有する。例示的なアイソフォームは、公共の配列データベースで利用できる（例え
ば、受託番号ＮＭ＿００１２０４３０６．１、ＮＭ＿００１２０４３０７．１、ＮＭ＿０
００５８３．３、ＢＣ０３６００３．１、Ｍ１２６５４．１、Ｘ０３１７８．１、ＡＫ２
２３４５８、Ｐ＿００１１９１２３５．１、ＮＰ＿０００５７４．２、ＡＡＡ６１７０４
．１、ＡＡＤ１３８７２．１、ＮＰ＿００１１９１２３６．１、ＡＡＡ１９６６２．２、
Ｉ５４２６９、Ｐ０２７７４．１、ＥＡＸ０５６４５．１、ＡＡＨ５７２２８．１、ＡＡ
Ａ５２１７３．１、ＡＡＢ２９４２３．１、ＡＡＤ１４２４９．１、ＡＡＤ１４２５０．
１、及びＢＡＤ９７１７８．１）。
Ｄ及びそのアナログに結合して、ビタミンがその活性型に修飾される肝臓及び腎臓中の部
位に輸送できる、全哺乳動物に見られる自然に循環している血清タンパク質であり、それ
は、ビタミンＤをその種々の形態で、ヒトで平均３０日間循環した状態に保つ。ＤＢＰタ
ンパク質配列は、配列番号１４に開示されており、ＤＢＰタンパク質配列をコードする例
示的な核酸配列は、配列番号１５に開示されている。ＤＢＰは、複数の天然のアイソフォ
ームを有する。例示的なアイソフォームは、公共の配列データベースで利用できる（例え
ば、受託番号ＮＭ＿００１２０４３０６．１、ＮＭ＿００１２０４３０７．１、ＮＭ＿０
００５８３．３、ＢＣ０３６００３．１、Ｍ１２６５４．１、Ｘ０３１７８．１、ＡＫ２
２３４５８、Ｐ＿００１１９１２３５．１、ＮＰ＿０００５７４．２、ＡＡＡ６１７０４
．１、ＡＡＤ１３８７２．１、ＮＰ＿００１１９１２３６．１、ＡＡＡ１９６６２．２、
Ｉ５４２６９、Ｐ０２７７４．１、ＥＡＸ０５６４５．１、ＡＡＨ５７２２８．１、ＡＡ
Ａ５２１７３．１、ＡＡＢ２９４２３．１、ＡＡＤ１４２４９．１、ＡＡＤ１４２５０．
１、及びＢＡＤ９７１７８．１）。
本発明は、ＤＢＰまたは機能性ＤＢＰバリアント、および、ＤＢＰ活性を実質的に保持
する保存的または非保存的アミノ酸置換を含有するホモログと結合する、非ホルモン性ビ
タミンＤコンジュゲートを企図する。ＤＢＰ結合分子または機能性ＤＢＰバリアントは、
公知の技術を使用して特定する、および公知の方法を使用して特徴付けることができる（
Ｂｏｕｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ．６（１０）：１
０５１−７（１９９１）、Ｔｅｅｇａｒｄｅｎ ｅｔ．ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ １９９（２）：２９３−２９９（１９９１）、ＭｃＬｅｏｄ ｅｔ ａｌ
、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２６４（２）：１２６０−７（１９８９）、Ｒｅｖｅｌｌｅ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：４６９−４７４（１９８
５））。先の参考文献の全体を、参照によって本明細書に組み込む。
する保存的または非保存的アミノ酸置換を含有するホモログと結合する、非ホルモン性ビ
タミンＤコンジュゲートを企図する。ＤＢＰ結合分子または機能性ＤＢＰバリアントは、
公知の技術を使用して特定する、および公知の方法を使用して特徴付けることができる（
Ｂｏｕｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ．６（１０）：１
０５１−７（１９９１）、Ｔｅｅｇａｒｄｅｎ ｅｔ．ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ １９９（２）：２９３−２９９（１９９１）、ＭｃＬｅｏｄ ｅｔ ａｌ
、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２６４（２）：１２６０−７（１９８９）、Ｒｅｖｅｌｌｅ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：４６９−４７４（１９８
５））。先の参考文献の全体を、参照によって本明細書に組み込む。
用語「水溶性」は、水にいくらかの検出可能な程度の溶解度を有する部分を意味する。
水溶性を検出及び／又は定量化する方法は、当技術分野に周知である。例示的な水溶性ポ
リマーには、ペプチド、糖類、ポリ（エーテル）、ポリ（アミン）、ポリ（カルボン酸）
などがある。
水溶性を検出及び／又は定量化する方法は、当技術分野に周知である。例示的な水溶性ポ
リマーには、ペプチド、糖類、ポリ（エーテル）、ポリ（アミン）、ポリ（カルボン酸）
などがある。
本発明は、タンパク質、ペプチド、他の生物製剤、核酸、及び小分子薬物の投与のため
の効果的な経路を与える。本発明は、経皮、経口、非経口、皮下、皮内、静脈内、筋肉内
、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病変内、頭蓋内注射、注入、吸入、眼、局所
、直腸、鼻腔内、頬側、舌下、膣内、又は埋め込みリザーバー方式による、薬物投与の効
果的な経路をさらに与える。
の効果的な経路を与える。本発明は、経皮、経口、非経口、皮下、皮内、静脈内、筋肉内
、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病変内、頭蓋内注射、注入、吸入、眼、局所
、直腸、鼻腔内、頬側、舌下、膣内、又は埋め込みリザーバー方式による、薬物投与の効
果的な経路をさらに与える。
さらに、本明細書に記載される本発明は、治療化合物に、標的結合活性、すなわち薬力
学（ＰＤ）を維持する組成物及び方法を与える。それは、本明細書に記載される治療化合
物の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを向上させる組成物及び方法もさらに与える。本発明
は、同じ投与経路又は異なる投与経路を利用するが本明細書に記載される担体のない薬物
の薬物吸収プロファイルと比べて、向上した薬物吸収プロファイルのための組成物及び方
法をさらに与える。本発明は、同じ投与経路又は異なる投与経路を利用するが本明細書に
記載される本発明のない薬物の薬物バイオアベイラビリティプロファイルと比べて、向上
した薬物バイオアベイラビリティプロファイルのための組成物及び方法をさらに与える。
本発明は、同じ投与経路又は異なる投与経路を利用するが本明細書に記載される本発明の
ない薬物の薬物半減期プロファイルと比べて、向上した薬物半減期プロファイルのための
組成物及び方法をさらに与える。
学（ＰＤ）を維持する組成物及び方法を与える。それは、本明細書に記載される治療化合
物の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを向上させる組成物及び方法もさらに与える。本発明
は、同じ投与経路又は異なる投与経路を利用するが本明細書に記載される担体のない薬物
の薬物吸収プロファイルと比べて、向上した薬物吸収プロファイルのための組成物及び方
法をさらに与える。本発明は、同じ投与経路又は異なる投与経路を利用するが本明細書に
記載される本発明のない薬物の薬物バイオアベイラビリティプロファイルと比べて、向上
した薬物バイオアベイラビリティプロファイルのための組成物及び方法をさらに与える。
本発明は、同じ投与経路又は異なる投与経路を利用するが本明細書に記載される本発明の
ない薬物の薬物半減期プロファイルと比べて、向上した薬物半減期プロファイルのための
組成物及び方法をさらに与える。
本発明は、本明細書に記載される本発明のない薬物と比べて、より経済的または患者に
好都合な薬物投与の代替経路も与える。
好都合な薬物投与の代替経路も与える。
本明細書に開示する非ホルモン性ビタミンＤ担体は、連結された治療用化合物の吸収、
半減期、バイオアベイラビリティ、または薬物動態特性を向上させることができる。理論
に拘泥されることを望まないが、この担体は、体内の天然のＤＢＰに結合する性質を有す
る。ＤＢＰは、投与部位から循環血清まで、担体−薬物複合体を輸送することができる。
ビタミンＤ−ＤＢＰ相互作用は、治療用化合物を循環内に長期間保持することができる。
これは、身体からの排出を妨げ、体内の治療用化合物の曝露を増大させて、より長く持続
する治療効果を実現することができる。さらに、非修飾型と比較した場合、担体にコンジ
ュゲートされる場合に、より少ない用量の薬物が必要となる可能性がある。
半減期、バイオアベイラビリティ、または薬物動態特性を向上させることができる。理論
に拘泥されることを望まないが、この担体は、体内の天然のＤＢＰに結合する性質を有す
る。ＤＢＰは、投与部位から循環血清まで、担体−薬物複合体を輸送することができる。
ビタミンＤ−ＤＢＰ相互作用は、治療用化合物を循環内に長期間保持することができる。
これは、身体からの排出を妨げ、体内の治療用化合物の曝露を増大させて、より長く持続
する治療効果を実現することができる。さらに、非修飾型と比較した場合、担体にコンジ
ュゲートされる場合に、より少ない用量の薬物が必要となる可能性がある。
本発明の治療用化合物・担体コンジュゲートは、典型的には、治療用化合物にそれぞれ
付着された約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の標的指向基を有する
。治療用化合物に付着された標的指向基のそれぞれの構造は、同じでも異なってもよい。
好ましい実施態様では、１以上の標的指向基が、Ｎ−末端、Ｃ−末端、または治療用タン
パク質の他の部分に、治療用化合物に安定的または非遊離可能に付着される。例えば、治
療化合物担体コンジュゲートは、Ｎ末端に結合した標的化基及び追加的にリジン残基に結
合した標的化基を含み得る。他の実施形態において、治療化合物担体コンジュゲートは、
グリコシル化部位の一部としての糖残基などの修飾により、又はペプチドのアシル化部位
上で治療用タンパク質に結合した標的化基、又はリン酸化部位若しくは当業者に周知の他
の天然若しくは非天然の修飾に結合した標的化基を有する。上述の部位の組み合わせを利
用する結合部位も企図される。本発明のある好ましい実施形態は、治療化合物のある特異
的な部位で治療化合物に結合している標的化基を含む。他の好ましい実施形態において、
タンパク質上の結合部位は、システインでも、リジンでも、Ｎ末端でも、Ｃ末端でもよい
。
付着された約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の標的指向基を有する
。治療用化合物に付着された標的指向基のそれぞれの構造は、同じでも異なってもよい。
好ましい実施態様では、１以上の標的指向基が、Ｎ−末端、Ｃ−末端、または治療用タン
パク質の他の部分に、治療用化合物に安定的または非遊離可能に付着される。例えば、治
療化合物担体コンジュゲートは、Ｎ末端に結合した標的化基及び追加的にリジン残基に結
合した標的化基を含み得る。他の実施形態において、治療化合物担体コンジュゲートは、
グリコシル化部位の一部としての糖残基などの修飾により、又はペプチドのアシル化部位
上で治療用タンパク質に結合した標的化基、又はリン酸化部位若しくは当業者に周知の他
の天然若しくは非天然の修飾に結合した標的化基を有する。上述の部位の組み合わせを利
用する結合部位も企図される。本発明のある好ましい実施形態は、治療化合物のある特異
的な部位で治療化合物に結合している標的化基を含む。他の好ましい実施形態において、
タンパク質上の結合部位は、システインでも、リジンでも、Ｎ末端でも、Ｃ末端でもよい
。
他の実施形態において、スカフォールドは、薬学的に許容できる担体である。好ましい
実施形態において、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリ
エチレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレド
キシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含む修飾基、水
溶性ポリマー、小型炭素鎖リンカー、又は追加の治療部分である。
実施形態において、スカフォールドは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリ
エチレンイミン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレド
キシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含む修飾基、水
溶性ポリマー、小型炭素鎖リンカー、又は追加の治療部分である。
一実施形態において、水溶性スカフォールド部分は、水に対していくらかの検出可能な
程度の溶解度を有する。水溶性を検出及び／又は定量化する方法は、当技術分野に周知で
ある。例示的な水溶性ポリマーには、ペプチド、糖類、ポリ（エーテル）、ポリ（アミン
）、ポリ（カルボン酸）などがある。
程度の溶解度を有する。水溶性を検出及び／又は定量化する方法は、当技術分野に周知で
ある。例示的な水溶性ポリマーには、ペプチド、糖類、ポリ（エーテル）、ポリ（アミン
）、ポリ（カルボン酸）などがある。
ペプチドは、混合された配列を有しても、単一のアミノ酸、例えば、ポリ（リジン）で
構成されていてもよい。例示的な多糖類はポリ（シアル酸）である。例示的なポリ（エー
テル）はポリ（エチレングリコール）、例えば、ｍ−ＰＥＧである。ポリ（エチレンイミ
ン）は例示的なポリアミンであり、ポリ（アクリル）酸は代表的なポリ（カルボン酸）で
ある。水溶性ポリマーのポリマー骨格は、ポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ
）でよい。しかし、他の関連ポリマーも本発明の実施での使用に好適であり、用語ＰＥＧ
又はポリ（エチレングリコール）の使用がこの点で包括的であり、排他的でないものとす
ることを理解されたい。用語ＰＥＧは、その形態のいずれにあるポリ（エチレングリコー
ル）も含み、アルコキシＰＥＧ、二官能性ＰＥＧ、マルチアームＰＥＧ、フォーク状ＰＥ
Ｇ、分岐鎖ＰＥＧ、ペンダントＰＥＧ（すなわち、１つ以上の官能基がポリマー骨格に懸
垂しているＰＥＧ又は関連ポリマー）、又は中に分解性結合を有するＰＥＧを含む。ポリ
マー骨格は、直鎖でも分岐鎖でもよい。
構成されていてもよい。例示的な多糖類はポリ（シアル酸）である。例示的なポリ（エー
テル）はポリ（エチレングリコール）、例えば、ｍ−ＰＥＧである。ポリ（エチレンイミ
ン）は例示的なポリアミンであり、ポリ（アクリル）酸は代表的なポリ（カルボン酸）で
ある。水溶性ポリマーのポリマー骨格は、ポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ
）でよい。しかし、他の関連ポリマーも本発明の実施での使用に好適であり、用語ＰＥＧ
又はポリ（エチレングリコール）の使用がこの点で包括的であり、排他的でないものとす
ることを理解されたい。用語ＰＥＧは、その形態のいずれにあるポリ（エチレングリコー
ル）も含み、アルコキシＰＥＧ、二官能性ＰＥＧ、マルチアームＰＥＧ、フォーク状ＰＥ
Ｇ、分岐鎖ＰＥＧ、ペンダントＰＥＧ（すなわち、１つ以上の官能基がポリマー骨格に懸
垂しているＰＥＧ又は関連ポリマー）、又は中に分解性結合を有するＰＥＧを含む。ポリ
マー骨格は、直鎖でも分岐鎖でもよい。
分岐鎖ポリマー骨格は、一般的に当技術分野に公知である。典型的には、分岐鎖ポリマ
ーは、中心の分岐コア部分及び中心分岐コアに結合した複数の直鎖ポリマー鎖を有する。
ＰＥＧは、通常、エチレンオキシドを種々のポリオールに、例えばグリセロール、ペンタ
エリスリトール、及びソルビトールに付加して調製できる分岐鎖形態で使用されている。
中心の分岐部分は、リジンなどのいくつかのアミノ酸からも誘導できる。分岐鎖ポリ（エ
チレングリコール）は、Ｒ（−ＰＥＧ−ＯＨ）ｍとして一般形態で表すことができるが、
Ｒはグリセロール又はペンタエリスリトールなどのコア部分を表し、ｍはアームの数を表
す。引用により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第５，９３２，４６２号
明細書に記載されるものなどのマルチアームＰＥＧ分子もポリマー骨格として使用できる
。
ーは、中心の分岐コア部分及び中心分岐コアに結合した複数の直鎖ポリマー鎖を有する。
ＰＥＧは、通常、エチレンオキシドを種々のポリオールに、例えばグリセロール、ペンタ
エリスリトール、及びソルビトールに付加して調製できる分岐鎖形態で使用されている。
中心の分岐部分は、リジンなどのいくつかのアミノ酸からも誘導できる。分岐鎖ポリ（エ
チレングリコール）は、Ｒ（−ＰＥＧ−ＯＨ）ｍとして一般形態で表すことができるが、
Ｒはグリセロール又はペンタエリスリトールなどのコア部分を表し、ｍはアームの数を表
す。引用により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第５，９３２，４６２号
明細書に記載されるものなどのマルチアームＰＥＧ分子もポリマー骨格として使用できる
。
多くの他のポリマーも本発明に好適である。非ペプチド性で水溶性であり、２から約３
００の末端を持つポリマー骨格は、本発明に特に有用である。好適なポリマーの例には、
ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）などの他のポリ（アルキレングリコール）
、エチレングリコールとプロピレングリコールなどのコポリマー、ポリ（オキシエチル化
ポリオール）、ポリ（オレフィン性アルコール）、ポリビニルピロリドン）、ポリリジン
、ポリエチレンイミン、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド）、ポリ（α−ヒド
ロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、引用に
より本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第５，６２９，３８４号明細書に記
載のものなどのポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、並びにこれらのコポリマー、ター
ポリマー、及び混合物があるが、これらに限定されない。ポリマー骨格の各鎖の分子量は
さまざまになり得るが、典型的には約１００Ｄａから約１００，０００Ｄａの範囲である
。
００の末端を持つポリマー骨格は、本発明に特に有用である。好適なポリマーの例には、
ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）などの他のポリ（アルキレングリコール）
、エチレングリコールとプロピレングリコールなどのコポリマー、ポリ（オキシエチル化
ポリオール）、ポリ（オレフィン性アルコール）、ポリビニルピロリドン）、ポリリジン
、ポリエチレンイミン、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド）、ポリ（α−ヒド
ロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、引用に
より本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第５，６２９，３８４号明細書に記
載のものなどのポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、並びにこれらのコポリマー、ター
ポリマー、及び混合物があるが、これらに限定されない。ポリマー骨格の各鎖の分子量は
さまざまになり得るが、典型的には約１００Ｄａから約１００，０００Ｄａの範囲である
。
他の実施形態において、スカフォールド部分は、ペプチド、血清アルブミン、チオレド
キシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含む修飾基、水
溶性ポリマー、小型炭素鎖リンカー、又は追加の治療化合物でよい。一実施形態において
、スカフォールド部分はヒト及び動物にとって非毒性である。他の実施形態において、ス
カフォールドは内在性の血清タンパク質である。他の実施形態において、スカフォールド
部分は水溶性ポリマーである。他の実施形態において、スカフォールドは非天然ポリマー
である。他の実施形態において、スカフォールドは、追加の部分（例えば、ＰＥＧ、ポリ
（プロピレングリコール）、ポリ（アスパルテート）、生体分子、治療用部分、又は診断
用部分）への共有結合により修飾されている天然の部分である。本発明のスカフォールド
およびリンカーは、安定（すなわち非遊離可能）である。しかし、特定の実施態様では、
これは、特定の条件下で「遊離可能」であり得る。
キシン、免疫グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含む修飾基、水
溶性ポリマー、小型炭素鎖リンカー、又は追加の治療化合物でよい。一実施形態において
、スカフォールド部分はヒト及び動物にとって非毒性である。他の実施形態において、ス
カフォールドは内在性の血清タンパク質である。他の実施形態において、スカフォールド
部分は水溶性ポリマーである。他の実施形態において、スカフォールドは非天然ポリマー
である。他の実施形態において、スカフォールドは、追加の部分（例えば、ＰＥＧ、ポリ
（プロピレングリコール）、ポリ（アスパルテート）、生体分子、治療用部分、又は診断
用部分）への共有結合により修飾されている天然の部分である。本発明のスカフォールド
およびリンカーは、安定（すなわち非遊離可能）である。しかし、特定の実施態様では、
これは、特定の条件下で「遊離可能」であり得る。
ＰＥＧなどの親水性ポリマーのコンジュゲーションは当技術分野に公知である。その最
も通常の形態では、ＰＥＧは、各末端がヒドロキシル基である直鎖ポリマーである：ＨＯ
−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ、式中、ｎは、典型
的には、約３から約４０００の範囲である。好ましい実施形態において、ＰＥＧは、基本
的に単分散である分子量分布を有する。他の好ましい実施形態において、ＰＥＧは直鎖ポ
リマーである。他の好ましい実施形態において、ＰＥＧは分岐ポリマーである。
も通常の形態では、ＰＥＧは、各末端がヒドロキシル基である直鎖ポリマーである：ＨＯ
−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ、式中、ｎは、典型
的には、約３から約４０００の範囲である。好ましい実施形態において、ＰＥＧは、基本
的に単分散である分子量分布を有する。他の好ましい実施形態において、ＰＥＧは直鎖ポ
リマーである。他の好ましい実施形態において、ＰＥＧは分岐ポリマーである。
多くの末端官能化誘導体又は分岐誘導体並びに種々のサイズが当技術分野に公知であり
、市販されている。例としては、ＰＥＧ又はＰＥＯのコンジュゲーションは、本明細書に
記載並びにそれぞれ引用により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第７，８
０３，７７７号明細書（Ｄｅｆｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．）及び同第４，１７９，３３７号
明細書（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．）に記載の組成物及び方法を利用して実施できる。
、市販されている。例としては、ＰＥＧ又はＰＥＯのコンジュゲーションは、本明細書に
記載並びにそれぞれ引用により本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第７，８
０３，７７７号明細書（Ｄｅｆｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．）及び同第４，１７９，３３７号
明細書（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．）に記載の組成物及び方法を利用して実施できる。
いくつかの実施形態において、小さめの治療化合物は小さめのスカフォールド部分と組
み合わされ、大きめの治療化合物は大きめのスカフォールド部分と組み合わされる。しか
し、小さめの治療化合物を大きめのスカフォールド部分と組み合わせることができ、逆も
同様であることが企図される。小さめの治療化合物は、１Ｄａから１０ｋＤａの分子量を
持つものと定義される。大きめの治療化合物は、１０ｋＤａから１０００ｋＤａの分子量
を持つものと定義される。
み合わされ、大きめの治療化合物は大きめのスカフォールド部分と組み合わされる。しか
し、小さめの治療化合物を大きめのスカフォールド部分と組み合わせることができ、逆も
同様であることが企図される。小さめの治療化合物は、１Ｄａから１０ｋＤａの分子量を
持つものと定義される。大きめの治療化合物は、１０ｋＤａから１０００ｋＤａの分子量
を持つものと定義される。
いくつかの実施態様では、低分子治療用化合物の分子量とほぼ等しいスカフォールドは
、効果的な担体−薬物コンジュゲートをもたらす。有効性の向上は、さらにスカフォール
ドサイズを経験的に調整することによって得ることができる。理論に拘泥されることを望
まないが、コンジュゲートの薬物動態特性および有効性は、スカフォールド（必要に応じ
てリンカーと組み合わせて）が、ＤＢＰ結合による薬物の立体障害の可能性を除去するの
に十分に大きい場合に高めることができる（逆も同様）。したがって、治療用化合物は、
その活性な領域が曝露されて機能活性に利用可能であり、かつ担体がＤＢＰと結合できる
ようにコンジュゲートされる。追加の実施態様は、治療薬の循環を延長する非遊離可能な
付着を提供する。グレリンなどのいくつかの低分子ペプチド実施態様では、スカフォール
ドは、治療薬の分子量とほぼ等しいように選択することができる。抗体などのいくつかの
巨大タンパク質実施態様では、スカフォールドは、ビタミンＤ担体とＤＢＰとの間の結合
を可能にするのに十分に長いものであり得る。
、効果的な担体−薬物コンジュゲートをもたらす。有効性の向上は、さらにスカフォール
ドサイズを経験的に調整することによって得ることができる。理論に拘泥されることを望
まないが、コンジュゲートの薬物動態特性および有効性は、スカフォールド（必要に応じ
てリンカーと組み合わせて）が、ＤＢＰ結合による薬物の立体障害の可能性を除去するの
に十分に大きい場合に高めることができる（逆も同様）。したがって、治療用化合物は、
その活性な領域が曝露されて機能活性に利用可能であり、かつ担体がＤＢＰと結合できる
ようにコンジュゲートされる。追加の実施態様は、治療薬の循環を延長する非遊離可能な
付着を提供する。グレリンなどのいくつかの低分子ペプチド実施態様では、スカフォール
ドは、治療薬の分子量とほぼ等しいように選択することができる。抗体などのいくつかの
巨大タンパク質実施態様では、スカフォールドは、ビタミンＤ担体とＤＢＰとの間の結合
を可能にするのに十分に長いものであり得る。
好ましい実施態様では、治療用化合物のコンジュゲーションは、コンジュゲーション後
に、その活性の実質的にすべてを保持する。所与の治療薬の活性な領域は、当技術分野で
知られている、または実験によって決定することができる。他の実施態様では、コンジュ
ゲートは、担体に連結されながら、治療的に活性である。この実施態様は、循環の時間な
らびにその有効性を最大にすることができる。
に、その活性の実質的にすべてを保持する。所与の治療薬の活性な領域は、当技術分野で
知られている、または実験によって決定することができる。他の実施態様では、コンジュ
ゲートは、担体に連結されながら、治療的に活性である。この実施態様は、循環の時間な
らびにその有効性を最大にすることができる。
本発明のスカフォールドは、例えば、１００ダルトン（Ｄａ．）、５００Ｄａ．、１０
００Ｄａ．、２０００Ｄａ．、５０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．、１５，０００Ｄａ
．、２０，０００Ｄａ．、３０，０００Ｄａ．、４０，０００Ｄａ．又は６０，０００Ｄ
ａ．の分子量を有し得る。本発明の一実施形態において、「小さい」スカフォールドは、
約１００Ｄａ．から２０，０００Ｄａ．であり得る。他の実施形態において、「大きい」
スカフォールドは、約２０，０００Ｄａ．を超え約２００，０００Ｄａ．になり得る。好
ましい実施形態において、スカフォールド部分は、約１００Ｄａ．から２００，０００Ｄ
ａ．である。より好ましい実施形態において、スカフォールドは、約１００Ｄａ．から２
０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０，００
０Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，０００Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ．、６
００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、２０，０
０Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、１００，０００から２００，０００Ｄａ．、５００
０Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、２０
，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ．、又は２０，０００Ｄａ．から４０，０００Ｄａ
．である。スカフォールドのサイズは、吸収、バイオアベイラビリティ、循環半減期、ま
たはコンジュゲートされた治療用化合物の有効性を最大にするために変えることができる
。
００Ｄａ．、２０００Ｄａ．、５０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．、１５，０００Ｄａ
．、２０，０００Ｄａ．、３０，０００Ｄａ．、４０，０００Ｄａ．又は６０，０００Ｄ
ａ．の分子量を有し得る。本発明の一実施形態において、「小さい」スカフォールドは、
約１００Ｄａ．から２０，０００Ｄａ．であり得る。他の実施形態において、「大きい」
スカフォールドは、約２０，０００Ｄａ．を超え約２００，０００Ｄａ．になり得る。好
ましい実施形態において、スカフォールド部分は、約１００Ｄａ．から２００，０００Ｄ
ａ．である。より好ましい実施形態において、スカフォールドは、約１００Ｄａ．から２
０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０，００
０Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，０００Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ．、６
００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、２０，０
０Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、１００，０００から２００，０００Ｄａ．、５００
０Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、２０
，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ．、又は２０，０００Ｄａ．から４０，０００Ｄａ
．である。スカフォールドのサイズは、吸収、バイオアベイラビリティ、循環半減期、ま
たはコンジュゲートされた治療用化合物の有効性を最大にするために変えることができる
。
担体分子の他の構成要素は、好ましくは、スカフォールド又は担体に薬物を共有結合す
るのに使用される結合基を含む。本発明の結合基には、アミン反応性基、チオール反応性
基、マレイミド基、チオール基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、ハロアセチル基、
ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳＭＣＣ基、カルボジイミド
基、及びＮＨＳ−マレイミドなどの二官能性架橋剤、これらの組み合わせ、又は当業者に
周知である他の結合基がある。本発明の結合基は、チオール結合、アミド結合、オキシム
結合、ヒドラゾン結合、チアゾリジノン結合を促進することができ、クリックケミストリ
ーとも呼ばれる環化付加反応を利用して担体を治療化合物に結合することもできる。他の
実施形態において、組成物は、好ましくは、スカフォールド分子の結合基に結合した１つ
以上の治療化合物の組み合わせを含む。本発明のリンカーは、約４０〜１００ダルトンで
あり得る。好ましい実施態様では、リンカーは、約４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０
、７０〜８０、８０〜９０、または９０〜１００ダルトンであり得る。リンカーはまた、
担体と治療用化合物との間の連結の安定性または遊離可能性に影響を与えるために変える
ことができる。
るのに使用される結合基を含む。本発明の結合基には、アミン反応性基、チオール反応性
基、マレイミド基、チオール基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、ハロアセチル基、
ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳＭＣＣ基、カルボジイミド
基、及びＮＨＳ−マレイミドなどの二官能性架橋剤、これらの組み合わせ、又は当業者に
周知である他の結合基がある。本発明の結合基は、チオール結合、アミド結合、オキシム
結合、ヒドラゾン結合、チアゾリジノン結合を促進することができ、クリックケミストリ
ーとも呼ばれる環化付加反応を利用して担体を治療化合物に結合することもできる。他の
実施形態において、組成物は、好ましくは、スカフォールド分子の結合基に結合した１つ
以上の治療化合物の組み合わせを含む。本発明のリンカーは、約４０〜１００ダルトンで
あり得る。好ましい実施態様では、リンカーは、約４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０
、７０〜８０、８０〜９０、または９０〜１００ダルトンであり得る。リンカーはまた、
担体と治療用化合物との間の連結の安定性または遊離可能性に影響を与えるために変える
ことができる。
ＮＨＳ基は、結合の部位で操作する必要なく、天然のペプチド及びタンパク質にカップ
リングするのに有用であると、当業者に公知である。ＮＨＳ基は、リジン残基などのアミ
ン基を有するアミノ酸を含むほとんどのタンパク質及びペプチドへの結合を可能にする。
タンパク質構造及び反応時間が、結合部位及び治療化合物にコンジュゲートされる担体分
子の数に影響を与え得るので、ＮＨＳ基を利用すると担体コンジュゲーションの部位に柔
軟性ができる。例としては、ＮＨＳ−担体と治療化合物のモル比を制御することにより、
当業者は、治療化合物に結合する担体分子の数をいくらか制御することができ、そのため
、望まれる場合、２つ以上の担体が、ある治療化合物にコンジュゲートするのが可能とな
る。
リングするのに有用であると、当業者に公知である。ＮＨＳ基は、リジン残基などのアミ
ン基を有するアミノ酸を含むほとんどのタンパク質及びペプチドへの結合を可能にする。
タンパク質構造及び反応時間が、結合部位及び治療化合物にコンジュゲートされる担体分
子の数に影響を与え得るので、ＮＨＳ基を利用すると担体コンジュゲーションの部位に柔
軟性ができる。例としては、ＮＨＳ−担体と治療化合物のモル比を制御することにより、
当業者は、治療化合物に結合する担体分子の数をいくらか制御することができ、そのため
、望まれる場合、２つ以上の担体が、ある治療化合物にコンジュゲートするのが可能とな
る。
治療化合物への担体のコンジュゲーションは、分子の溶液を、特定のモル比で、適合性
のある溶液、緩衝液、又は溶媒を使用して混合することにより達成される。例えば、担体
と治療化合物の約１：１、２：１、４：１、５：１、１０：１、２０：１、２５：１、５
０：１、１００：１、１０００：１、又は約１：２、１：４、１：５、１：１０、１：２
０、１：２５、１：５０、１：１００、若しくは１：１０００のモル比を利用できる。比
率を変えれば、治療化合物に結合する個別の担体の数を変えることができ、結合の特定の
部位を選択するのを助けることができる。担体の結合は、ｐＨ、緩衝剤、塩、及び温度に
も依存し、他のパラメータの中でもこれらのパラメータを変えると、結合部位、結合する
担体の数、及び反応のスピードに影響を与えることができる。例えば、反応にｐＨ６以下
のｐＨを選択すると、担体のアルデヒドバージョンが選択的に治療用タンパク質又はペプ
チドのＮ末端にコンジュゲートするのを助けることができる。
のある溶液、緩衝液、又は溶媒を使用して混合することにより達成される。例えば、担体
と治療化合物の約１：１、２：１、４：１、５：１、１０：１、２０：１、２５：１、５
０：１、１００：１、１０００：１、又は約１：２、１：４、１：５、１：１０、１：２
０、１：２５、１：５０、１：１００、若しくは１：１０００のモル比を利用できる。比
率を変えれば、治療化合物に結合する個別の担体の数を変えることができ、結合の特定の
部位を選択するのを助けることができる。担体の結合は、ｐＨ、緩衝剤、塩、及び温度に
も依存し、他のパラメータの中でもこれらのパラメータを変えると、結合部位、結合する
担体の数、及び反応のスピードに影響を与えることができる。例えば、反応にｐＨ６以下
のｐＨを選択すると、担体のアルデヒドバージョンが選択的に治療用タンパク質又はペプ
チドのＮ末端にコンジュゲートするのを助けることができる。
さらに、治療用化合物の実質的に同じ活性を保持するために、担体へのコンジュゲーシ
ョンは、治療的機能を妨げない分子上の部位でなされることとなる。タンパク質について
は、アミノ末端、カルボキシ末端、または内部の反応性の高いアミノ酸へのコンジュゲー
ションを必要とする可能性がある。核酸については、５’末端、３’末端、または内部ヌ
クレオチド、ヌクレオシド、またはこれらの誘導体へのコンジュゲーションを必要とする
可能性がある。一実施態様では、担体は、ポリヌクレオチド分子への組み込みの前にヌク
レオチドまたはヌクレオシドにコンジュゲートされる。
ョンは、治療的機能を妨げない分子上の部位でなされることとなる。タンパク質について
は、アミノ末端、カルボキシ末端、または内部の反応性の高いアミノ酸へのコンジュゲー
ションを必要とする可能性がある。核酸については、５’末端、３’末端、または内部ヌ
クレオチド、ヌクレオシド、またはこれらの誘導体へのコンジュゲーションを必要とする
可能性がある。一実施態様では、担体は、ポリヌクレオチド分子への組み込みの前にヌク
レオチドまたはヌクレオシドにコンジュゲートされる。
特定の実施態様では、本発明は、式Ｉのものを含む担体を提供する：
式中：
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、ビタミンＤ関連代謝産物、ビタミンＤ関連代謝産
物の類似体、ＤＢＰと結合するペプチド、抗ＤＢＰ抗体、抗ＤＢＰ抗体誘導体、ＤＢＰと
結合するヌクレオチドアプタマー、またはＤＢＰと結合する低分子炭素に基づく分子から
選択される標的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレ
ングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ
酸、核酸、グリカン、反応性リンカー含有修飾基、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、低分子炭
素鎖リンカー、または追加の治療的化合物を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、ジスルフィ
ド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、４−ニトロフェニルエステル、アシルイミダ
ゾール、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳ
ＭＣＣ基、カルボジイミド基、および二官能性クロスリンカー（ＮＨＳ−マレイミドなど
）、またはこれらの組み合わせであり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、ビタミンＤ関連代謝産物、ビタミンＤ関連代謝産
物の類似体、ＤＢＰと結合するペプチド、抗ＤＢＰ抗体、抗ＤＢＰ抗体誘導体、ＤＢＰと
結合するヌクレオチドアプタマー、またはＤＢＰと結合する低分子炭素に基づく分子から
選択される標的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレ
ングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ
酸、核酸、グリカン、反応性リンカー含有修飾基、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、低分子炭
素鎖リンカー、または追加の治療的化合物を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、ジスルフィ
ド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、４−ニトロフェニルエステル、アシルイミダ
ゾール、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳ
ＭＣＣ基、カルボジイミド基、および二官能性クロスリンカー（ＮＨＳ−マレイミドなど
）、またはこれらの組み合わせであり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
好ましい実施態様では、本発明は、式Ｉのものを含む担体を提供する：
式中：
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、ビタミンＤ関連代謝産物、ビタミンＤ関連代謝産
物の類似体、またはＤＢＰと結合する低分子炭素に基づく分子から選択される標的指向基
であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプ
チド、血清アルブミン、アミノ酸、核酸、グリカン、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、または
低分子炭素鎖リンカーを含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、マレイミド基、チオール基、ジスルフィド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基
、ヨードアセチル基、またはブロモアセチル基であり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、ビタミンＤ関連代謝産物、ビタミンＤ関連代謝産
物の類似体、またはＤＢＰと結合する低分子炭素に基づく分子から選択される標的指向基
であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプ
チド、血清アルブミン、アミノ酸、核酸、グリカン、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、または
低分子炭素鎖リンカーを含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、マレイミド基、チオール基、ジスルフィド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基
、ヨードアセチル基、またはブロモアセチル基であり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
より好ましい実施態様では、本発明は、式Ｉのものを含む担体を提供する：
式中：
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、またはビタミンＤ関連代謝産物から選択される標
的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、またはポリ（プロピレングリコール）
を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、マレイミド基、ジスルフィド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、またはヨー
ドアセチル基であり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、またはビタミンＤ関連代謝産物から選択される標
的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、またはポリ（プロピレングリコール）
を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、マレイミド基、ジスルフィド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、またはヨー
ドアセチル基であり；
（Ｌ）ａおよび（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、
−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（
Ｏ）２−、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、０〜３の整数である。
最も好ましい実施態様では、本発明は、式ＩＩａ、ＩＩｂ、およびＩＩｃのものを含む
担体を提供する：
式中：
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、またはビタミンＤ関連代謝産物から選択される標
的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、またはポリ（プロピレングリコール）を含むスカフ
ォールド部分であり；
Ｃは、マレイミド基、ジスルフィド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、またはヨー
ドアセチル基であり；
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり；
Ｌ３は、−（ＣＨ２）ｏ−であり；
（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−
、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、およ
び−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、３であり；
ｏは、１である。
担体を提供する：
Ｂは、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、またはビタミンＤ関連代謝産物から選択される標
的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、またはポリ（プロピレングリコール）を含むスカフ
ォールド部分であり；
Ｃは、マレイミド基、ジスルフィド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、またはヨー
ドアセチル基であり；
Ｌ１は、−（ＣＨ２）ｎ−であり；
Ｌ３は、−（ＣＨ２）ｏ−であり；
（Ｍ）ｂは、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−
、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、およ
び−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
ｂは、０〜４の整数であり；
ｎは、３であり；
ｏは、１である。
参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１３／０３１７８
８号明細書では、２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３の炭素２５（Ｃ２５）位置でのコンジ
ュゲーションが例示されている。本発明は、２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３の炭素Ｃ３
位置でのコンジュゲーションを組み込む。これは、Ｃ２５コンジュゲートと比較して向上
した半減期延長およびバイオアベイラビリティを与える。
８号明細書では、２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３の炭素２５（Ｃ２５）位置でのコンジ
ュゲーションが例示されている。本発明は、２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３の炭素Ｃ３
位置でのコンジュゲーションを組み込む。これは、Ｃ２５コンジュゲートと比較して向上
した半減期延長およびバイオアベイラビリティを与える。
式ＩＩａの特定の最も好ましい実施態様では、Ｂは、式ＩＩＩによって表され、Ｓは、
ポリ（エチレングリコール）であり、（Ｍ）ｂ−Ｃは、式ＩＶａによって表される。
ポリ（エチレングリコール）であり、（Ｍ）ｂ−Ｃは、式ＩＶａによって表される。
式ＩＩｂの特定の最も好ましい実施態様では、Ｂは、式ＩＩＩによって表され、Ｓは、
ポリ（エチレングリコール）であり、（Ｍ）ｂ−Ｃは、式ＩＶｂによって表される。
ポリ（エチレングリコール）であり、（Ｍ）ｂ−Ｃは、式ＩＶｂによって表される。
式ＩＩｃの特定の最も好ましい実施態様では、Ｂは、式ＩＩＩによって表され、Ｓは、
ポリ（エチレングリコール）であり、（Ｍ）ｂ−Ｃは、式ＩＶｃによって表される。
ポリ（エチレングリコール）であり、（Ｍ）ｂ−Ｃは、式ＩＶｃによって表される。
特定の最も好ましい実施形態において、Ｓは、約１００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ
．である。他の最も好ましい実施形態において、スカフォールド部分は、約１００Ｄａ．
から２０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０
，０００Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，０００Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ
．、６００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、５
０００Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、
２０，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ．、又は２０，０００Ｄａ．から４０，０００
Ｄａ．である。
．である。他の最も好ましい実施形態において、スカフォールド部分は、約１００Ｄａ．
から２０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０
，０００Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，０００Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ
．、６００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、５
０００Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、
２０，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ．、又は２０，０００Ｄａ．から４０，０００
Ｄａ．である。
具体的な実施形態において、本発明は、式Ｖにより表される担体を与える。
別の具体的実施態様では、本発明は、式ＶＩによって表される担体を提供する。
別の具体的実施態様では、本発明は、式ＶＩＩによって表される担体を提供する。
特定の実施態様では、本発明は、式Ｉの担体：
を生成するための方法であって、式Ｉａの化合物：
を式Ｉｂの化合物：
と、アミドカップリング剤の存在下で反応させるステップ
を含む方法を提供する。式中、Ｂ、Ｓ、Ｃ、およびＬ１、Ｌ３、および（Ｍ）ｂは、上で
定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
を含む方法を提供する。式中、Ｂ、Ｓ、Ｃ、およびＬ１、Ｌ３、および（Ｍ）ｂは、上で
定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
当業者は、式Ｉａの化合物を、遊離塩基としても、好適な塩形態としても使用できるこ
とを認識するだろう。好適な塩形態には、ＴＦＡ、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ
、及びＡｃＯＨがあるが、これらに限定されない。
とを認識するだろう。好適な塩形態には、ＴＦＡ、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ
、及びＡｃＯＨがあるが、これらに限定されない。
任意の好適なアミドカップリング剤を使用して、式Ｉの化合物を形成できる。好適なア
ミドカップリング剤には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ
、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに限
定されない。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は単独で使用される。特定
の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬（ｃ
ｏ−ｒｅａｇｅｎｔ）と共に使用される。特定の実施形態において、アミドカップリング
剤は、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基と共に使用される。
特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬
と、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の両方と共に使用され
る。当業者は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰ以外の共試薬を使用できることを認識するだろう。
さらに、当業者は、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使用
できることを認識するだろう。
ミドカップリング剤には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ
、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに限
定されない。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は単独で使用される。特定
の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬（ｃ
ｏ−ｒｅａｇｅｎｔ）と共に使用される。特定の実施形態において、アミドカップリング
剤は、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基と共に使用される。
特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬
と、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の両方と共に使用され
る。当業者は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰ以外の共試薬を使用できることを認識するだろう。
さらに、当業者は、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使用
できることを認識するだろう。
当業者は、任意の好適な脱離基を、好適なカップリング剤の存在下で、式Ｉｂのカルボ
ン酸とカップリングさせて、式Ｉｃの活性なエステルを形成することができることを認識
するであろう：
式中、Ｒは、限定はされないが、イミダゾール、ＨＯＢＴ、ＮＨＳ、および４−ニトロフ
ェノールを含めた、好適な脱離基である。好適なカップリング試薬としては、限定はされ
ないが、ヨウ化２−クロロメチルピリジニウム、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴ
Ｕ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、およびＴ３Ｐが挙げられる。
いくつかの実施態様では、本発明は、式Ｉの担体：
を生成するための方法であって、式Ｉａの化合物：
を式Ｉｃの化合物：
と反応させるステップを含む方法を提供する。式中、Ｂ、Ｓ、Ｃ、Ｒ、およびＬ１、Ｌ３
、および（Ｍ）ｂは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
ン酸とカップリングさせて、式Ｉｃの活性なエステルを形成することができることを認識
するであろう：
ェノールを含めた、好適な脱離基である。好適なカップリング試薬としては、限定はされ
ないが、ヨウ化２−クロロメチルピリジニウム、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴ
Ｕ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、およびＴ３Ｐが挙げられる。
いくつかの実施態様では、本発明は、式Ｉの担体：
、および（Ｍ）ｂは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
当業者は、式Ｉａの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
特定の実施態様では、アミドカップリングは、トリエチルアミンまたはジイソプロピル
エチルアミンなどの塩基を用いて実施される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソ
プロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識するであろう。
エチルアミンなどの塩基を用いて実施される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソ
プロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識するであろう。
特定の他の実施態様では、本発明は、式ＩＩａの担体：
を生成するための方法であって、式Ｉａの化合物：
を式Ｉｄの化合物：
と、アミドカップリング剤の存在下で反応させて、式Ｉｅの化合物
を形成するステップと；
式Ｉｅの第一級アルコールの、式ＩＩａのアルデヒド
への酸化を含む方法を提供する。式中、Ｂ、Ｓ、Ｌ１、Ｌ３、（Ｍ）ｂ、ｂ、ｎ、および
ｏは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｃは、アルデヒド基
である。
式Ｉｅの第一級アルコールの、式ＩＩａのアルデヒド
ｏは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｃは、アルデヒド基
である。
任意の好適な酸化剤を使用して、式ＩＩａの化合物を形成することができる。好適な酸
化剤としては、限定はされないが、コリンズ試薬、ＰＤＣ、ＰＣＣ、塩化オキサリル／Ｄ
ＭＳＯ（スワーン酸化）、ＳＯ３−ピリジン／ＤＭＳＯ（パリック−デーリング酸化）、
デス−マーチン・ペルヨージナン、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ、およびＴＥＭＰＯ／ＮａＯＣｌが
挙げられる。
化剤としては、限定はされないが、コリンズ試薬、ＰＤＣ、ＰＣＣ、塩化オキサリル／Ｄ
ＭＳＯ（スワーン酸化）、ＳＯ３−ピリジン／ＤＭＳＯ（パリック−デーリング酸化）、
デス−マーチン・ペルヨージナン、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ、およびＴＥＭＰＯ／ＮａＯＣｌが
挙げられる。
当業者は、式Ｉａの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
任意の好適なアミドカップリング剤を使用して、式Ｉｅの化合物を形成できる。好適な
アミドカップリング剤には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯ
Ｐ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに
限定されない。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は単独で使用される。特
定の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬と
共に使用される。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、トリエチルアミン
又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基と共に使用される。特定の実施形態において
、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬と、トリエチルアミン又
はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の両方と共に使用される。当業者は、ＨＯＢＴ
又はＤＭＡＰ以外の共試薬を使用できることを認識するだろう。さらに、当業者は、トリ
エチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識するだ
ろう。
アミドカップリング剤には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯ
Ｐ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに
限定されない。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は単独で使用される。特
定の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬と
共に使用される。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、トリエチルアミン
又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基と共に使用される。特定の実施形態において
、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬と、トリエチルアミン又
はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の両方と共に使用される。当業者は、ＨＯＢＴ
又はＤＭＡＰ以外の共試薬を使用できることを認識するだろう。さらに、当業者は、トリ
エチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識するだ
ろう。
特定の実施態様では、任意の好適な脱離基を、好適なカップリング試薬の存在下で、式
Ｉｄのカルボン酸とカップリングさせて、式Ｉｆの活性なエステルを形成することができ
る：
式中、Ｒは、限定はされないが、イミダゾール、ＨＯＢＴ、ＮＨＳ、および４−ニトロフ
ェノールを含めた好適な脱離基である。好適なカップリング試薬としては、限定はされな
いが、ヨウ化２−クロロメチルピリジニウム、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ
、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、およびＴ３Ｐが挙げられる。
Ｉｄのカルボン酸とカップリングさせて、式Ｉｆの活性なエステルを形成することができ
る：
ェノールを含めた好適な脱離基である。好適なカップリング試薬としては、限定はされな
いが、ヨウ化２−クロロメチルピリジニウム、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ
、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、およびＴ３Ｐが挙げられる。
いくつかの実施態様では、本発明は、式Ｉｅの担体：
を生成するための方法であって、式Ｉａの化合物
を式Ｉｆの化合物
と反応させるステップと；
式Ｉｅの第一級アルコールの、式ＩＩａのアルデヒド
への酸化を含む方法を提供する。式中、Ｂ、Ｓ、Ｃ、Ｒ、およびＬ１、Ｌ３、および（Ｍ
）ｂは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
式Ｉｅの第一級アルコールの、式ＩＩａのアルデヒド
）ｂは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
当業者は、式Ｉａの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
特定の実施態様では、アミドカップリングは、トリエチルアミンまたはジイソプロピル
エチルアミンなどの塩基を用いて実施される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソ
プロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識するであろう。
エチルアミンなどの塩基を用いて実施される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソ
プロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識するであろう。
任意の好適な酸化剤を使用して、式ＩＩａの化合物を形成することができる。好適な酸
化剤としては、限定はされないが、コリンズ試薬、ＰＤＣ、ＰＣＣ、塩化オキサリル／Ｄ
ＭＳＯ（スワーン酸化）、ＳＯ３−ピリジン／ＤＭＳＯ（パリック−デーリング酸化）、
デス−マーチン・ペルヨージナン、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ、およびＴＥＭＰＯ／ＮａＯＣｌが
挙げられる。
化剤としては、限定はされないが、コリンズ試薬、ＰＤＣ、ＰＣＣ、塩化オキサリル／Ｄ
ＭＳＯ（スワーン酸化）、ＳＯ３−ピリジン／ＤＭＳＯ（パリック−デーリング酸化）、
デス−マーチン・ペルヨージナン、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ、およびＴＥＭＰＯ／ＮａＯＣｌが
挙げられる。
特定の他の実施態様では、本発明は、式ＩＩｃの担体：
を生成するための方法であって、式Ｉａの化合物：
を式Ｉｇの化合物：
と反応させて、式Ｉｈの化合物
を形成するステップと；
式Ｉｈのカルボン酸を式ＩＩｃの活性なエステル
に転換するステップとを含む方法を提供する。式中、Ｂ、Ｓ、Ｃ、Ｒ、Ｌ１、（Ｍ）ｂ、
ｂ、ｎ、およびｏは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
式Ｉｈのカルボン酸を式ＩＩｃの活性なエステル
ｂ、ｎ、およびｏは、上で定義した通りであり、Ｌ２は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。
当業者は、式Ｉａの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
好適な脱離基を、好適なカップリング試薬の存在下で、式Ｉｈのカルボン酸とカップリ
ングさせて、式ＩＩｃの活性なエステルを形成することができる。好適な脱離基には、イ
ミダゾール、ＨＯＢＴ、ＮＨＳ、及び４−ニトロフェノールがあるが、これらに限定され
ない。好適なカップリング試薬には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、
ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、
これらに限定されない。
ングさせて、式ＩＩｃの活性なエステルを形成することができる。好適な脱離基には、イ
ミダゾール、ＨＯＢＴ、ＮＨＳ、及び４−ニトロフェノールがあるが、これらに限定され
ない。好適なカップリング試薬には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、
ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、
これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、式ＩＩｃの活性エステルは、好適な脱離基とカップリン
グ試薬の組み合わせを使用して、式Ｉｈのカルボン酸から形成される。
グ試薬の組み合わせを使用して、式Ｉｈのカルボン酸から形成される。
いくつかの実施形態において、式ＩＩｃの活性エステルは、脱離基を生成しカップリン
グ反応も起こす単一の試薬を使用して、式Ｉｈのカルボン酸から形成される。そのような
試薬には、１，１’−カルボニルジイミダゾール、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル、
トリフルオロ酢酸４−ニトロフェニル、及びＨＢＴＵがあるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、単一の試薬が単独で使用される。他の実施形態において、
単一の試薬は、アシル転移触媒と共に使用される。そのようなアシル転移触媒には、ＤＭ
ＡＰ及びピリジンがあるが、これらに限定されない。当業者は、追加のアシル転移触媒を
使用してよいことを認識するだろう。
グ反応も起こす単一の試薬を使用して、式Ｉｈのカルボン酸から形成される。そのような
試薬には、１，１’−カルボニルジイミダゾール、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル、
トリフルオロ酢酸４−ニトロフェニル、及びＨＢＴＵがあるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、単一の試薬が単独で使用される。他の実施形態において、
単一の試薬は、アシル転移触媒と共に使用される。そのようなアシル転移触媒には、ＤＭ
ＡＰ及びピリジンがあるが、これらに限定されない。当業者は、追加のアシル転移触媒を
使用してよいことを認識するだろう。
具体的な実施形態において、本発明は、式Ｖ
により表される担体を生成するための方法であって、式Ｖａの化合物：
を、式Ｖｂの化合物：
と反応させて、式Ｖｃの化合物；
を形成するステップと、
ニトリル基を還元して、式Ｖｄのアミン；
を形成するステップと、
式Ｖｄの化合物を式Ｖｅの化合物；
と反応させて、式Ｖｆの化合物
を形成するステップと、
式Ｖｆの第一級アルコールを酸化させて、式Ｖのアルデヒド
を形成するステップと
を含む方法を提供する。
ニトリル基を還元して、式Ｖｄのアミン；
式Ｖｄの化合物を式Ｖｅの化合物；
式Ｖｆの第一級アルコールを酸化させて、式Ｖのアルデヒド
を形成するステップと
いくつかの実施態様では、式Ｖｂの化合物と式Ｖａの化合物との反応は、Ｔｒｉｔｏｎ
Ｂの添加によって促進される。当業者は、アクリロニトリルへの求核付加を促進するた
めに、他の試薬も使用することができることを認識するであろう。
Ｂの添加によって促進される。当業者は、アクリロニトリルへの求核付加を促進するた
めに、他の試薬も使用することができることを認識するであろう。
いくつかの実施態様では、式Ｖｃのニトリルの、式Ｖｄのアミンへの還元は、ＡｌＣｌ
３／ＬＡＨを使用して実施される。当業者は、ナトリウム、Ｈ２／Ｐｄ、Ｈ２／ラネーニ
ッケル、およびジボランを含めた他の還元試薬も使用できることを認識するであろう。
３／ＬＡＨを使用して実施される。当業者は、ナトリウム、Ｈ２／Ｐｄ、Ｈ２／ラネーニ
ッケル、およびジボランを含めた他の還元試薬も使用できることを認識するであろう。
当業者は、式Ｖｄの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
特定の実施態様では、式ＶｅのＮＨＳ−エステルと式Ｖｄのアミンとのカップリングを
促進するために、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基が使用
される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使
用できることを認識するであろう。
促進するために、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基が使用
される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使
用できることを認識するであろう。
任意の好適な酸化剤を使用して、式Ｖの化合物を形成することができる。好適な酸化剤
としては、限定はされないが、コリンズ試薬、ＰＤＣ、ＰＣＣ、塩化オキサリル／ＤＭＳ
Ｏ（スワーン酸化）、ＳＯ３−ピリジン／ＤＭＳＯ（パリック−デーリング酸化）、デス
−マーチン・ペルヨージナン、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ、およびＴＥＭＰＯ／ＮａＯＣｌが挙げ
られる。
としては、限定はされないが、コリンズ試薬、ＰＤＣ、ＰＣＣ、塩化オキサリル／ＤＭＳ
Ｏ（スワーン酸化）、ＳＯ３−ピリジン／ＤＭＳＯ（パリック−デーリング酸化）、デス
−マーチン・ペルヨージナン、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ、およびＴＥＭＰＯ／ＮａＯＣｌが挙げ
られる。
別の具体的実施態様では、本発明は、式ＶＩによって表される担体：
を生成するための方法であって、式Ｖｄの化合物：
を、アミドカップリング剤の存在下で、式ＶＩａの化合物：
と反応させるステップを含む方法を提供する。
当業者は、式Ｖｄの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
任意の好適なアミドカップリング剤を使用して、式ＶＩの化合物を形成できる。好適な
アミドカップリング剤には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯ
Ｐ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに
限定されない。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、単独で使用される。
特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬
と共に使用される。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、トリエチルアミ
ン又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基と共に使用される。特定の実施形態におい
て、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬と、トリエチルアミン
又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の両方と共に使用される。当業者は、ＨＯＢ
Ｔ又はＤＭＡＰ以外の共試薬を使用できることを認識するだろう。さらに、当業者は、ト
リエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識する
だろう。
アミドカップリング剤には、２−クロロメチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯ
Ｐ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに
限定されない。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、単独で使用される。
特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬
と共に使用される。特定の実施形態において、アミドカップリング剤は、トリエチルアミ
ン又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基と共に使用される。特定の実施形態におい
て、アミドカップリング剤は、ＨＯＢＴ又はＤＭＡＰなどの共試薬と、トリエチルアミン
又はジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の両方と共に使用される。当業者は、ＨＯＢ
Ｔ又はＤＭＡＰ以外の共試薬を使用できることを認識するだろう。さらに、当業者は、ト
リエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン以外の塩基を使用できることを認識する
だろう。
別の具体的実施態様では、本発明は、式ＶＩＩによって表される担体：
を生成するための方法であって、式Ｖｄの化合物：
を、式ＶＩＩａの化合物：
と反応させて式ＶＩＩｂの化合物；
を形成するステップと；
式ＶＩＩｂのカルボン酸を式ＶＩＩの活性なエステル；
に転換するステップとを含む方法を提供する。
式ＶＩＩｂのカルボン酸を式ＶＩＩの活性なエステル；
当業者は、式Ｖｄの化合物を、遊離塩基として、または好適な塩の形態として使用でき
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
ることを認識するであろう。好適な塩の形態としては、限定はされないが、ＴＦＡ、ＨＣ
ｌ、ＨＢｒ、ＭｓＯＨ、ＴｆＯＨ、およびＡｃＯＨが挙げられる。
特定の実施態様では、式ＶＩＩａのＮＨＳ−エステルと式Ｖａのアミンとのカップリン
グを促進するために、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基が
使用される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン以外の塩基
を使用できることを認識するであろう。
グを促進するために、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの塩基が
使用される。当業者は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン以外の塩基
を使用できることを認識するであろう。
ＮＨＳは、好適なカップリング試薬の存在下で式ＶＩＩｂのカルボン酸とカップリング
して、式ＶＩＩの活性エステルを形成できる。好適なカップリング試薬には、２−クロロ
メチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤ
ＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに限定されない。
して、式ＶＩＩの活性エステルを形成できる。好適なカップリング試薬には、２−クロロ
メチルピリジニウムヨージド、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＣＣ、ＥＤ
ＣＩ、ＴＢＴＵ、及びＴ３Ｐがあるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、式ＶＩＩの活性エステルは、ＮＨＳとカップリング試薬
の組み合わせを使用して、式ＶＩＩｂのカルボン酸から形成される。
の組み合わせを使用して、式ＶＩＩｂのカルボン酸から形成される。
いくつかの実施形態において、式ＶＩＩの活性エステルは、脱離基を生成しカップリン
グ反応も起こす単一の試薬を使用して、式ＶＩＩｂのカルボン酸から形成される。そのよ
うな試薬には、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルがあるが、これに限定されない。いく
つかの実施形態において、単一の試薬が単独で使用される。他の実施形態において、試薬
はアシル転移触媒と共に使用される。そのようなアシル転移触媒には、ＤＭＡＰ及びピリ
ジンがあるが、これらに限定されない。当業者は、追加のアシル転移触媒を使用してよい
ことを認識するだろう。
グ反応も起こす単一の試薬を使用して、式ＶＩＩｂのカルボン酸から形成される。そのよ
うな試薬には、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルがあるが、これに限定されない。いく
つかの実施形態において、単一の試薬が単独で使用される。他の実施形態において、試薬
はアシル転移触媒と共に使用される。そのようなアシル転移触媒には、ＤＭＡＰ及びピリ
ジンがあるが、これらに限定されない。当業者は、追加のアシル転移触媒を使用してよい
ことを認識するだろう。
当業者は、リンカーおよびスカフォールドを、ビタミンＤ誘導体および類似体のＣ３位
置にコンジュゲートするための他の方法が存在することを認識するであろう。例えば、Ｃ
３ヒドロキシ基は、Ｎ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｋ．Ｕｅｄａ，Ｊ．Ｋｉｔａｈｏｒｉ，ａ
ｎｄ Ｋ．Ｓｈｉｍａｄａ、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，５７，４８８−４９３（１９９２）；Ｊ
．Ｇ．Ｈａｄｄａｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１，７１７４−７１
８１（１９９２）；Ａ．Ｋｕｔｎｅｒ，Ｒ．Ｐ．Ｌｉｎｋ、Ｈ．Ｋ．Ｓｃｈｎｏｅｓ，Ｈ
．Ｆ．ＤｅＬｕｃａ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１４，１３４−１４７（１９８６）；
ならびにＲ．Ｒａｙ，Ｓ．Ａ．Ｈｏｌｉｃｋ，Ｎ．Ｈａｎａｆｉｎ，ａｎｄ Ｍ．Ｆ．Ｈ
ｏｌｉｃｋ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２５，４７２９−４７３３（１９８６）によっ
て実施される通りの様々な基によって、アシル化することができる。先の参考文献の全体
を、参照によって組み込む。当業者は、これらの化学を変更して、式Ｉの化合物：
（式中、Ｂ、Ｓ、Ｃ、（Ｌ）ａ、および（Ｍ）ｂは、上で定義した通りである）
を合成できることを認識するであろう。
置にコンジュゲートするための他の方法が存在することを認識するであろう。例えば、Ｃ
３ヒドロキシ基は、Ｎ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｋ．Ｕｅｄａ，Ｊ．Ｋｉｔａｈｏｒｉ，ａ
ｎｄ Ｋ．Ｓｈｉｍａｄａ、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，５７，４８８−４９３（１９９２）；Ｊ
．Ｇ．Ｈａｄｄａｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１，７１７４−７１
８１（１９９２）；Ａ．Ｋｕｔｎｅｒ，Ｒ．Ｐ．Ｌｉｎｋ、Ｈ．Ｋ．Ｓｃｈｎｏｅｓ，Ｈ
．Ｆ．ＤｅＬｕｃａ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１４，１３４−１４７（１９８６）；
ならびにＲ．Ｒａｙ，Ｓ．Ａ．Ｈｏｌｉｃｋ，Ｎ．Ｈａｎａｆｉｎ，ａｎｄ Ｍ．Ｆ．Ｈ
ｏｌｉｃｋ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２５，４７２９−４７３３（１９８６）によっ
て実施される通りの様々な基によって、アシル化することができる。先の参考文献の全体
を、参照によって組み込む。当業者は、これらの化学を変更して、式Ｉの化合物：
を合成できることを認識するであろう。
望まれる場合、異なる分子量を有する治療化合物担体コンジュゲートを、ゲル濾過クロ
マトグラフィー及び／又はイオン交換クロマトグラフィーを使用して単離できる。ゲル濾
過クロマトグラフィーを利用して、異なる分子量に基づいて（差異は、基本的に標的化基
の平均分子量に相当する）、異なる治療化合物担体コンジュゲートを分別することができ
る（例えば、１−マー、２−マー、３−マーなど、ここで、「１−マー」は、治療化合物
あたり１つの標的化基分子を示し、「２−マー」は治療化合物に結合した２つの標的化基
を示す、など）。
マトグラフィー及び／又はイオン交換クロマトグラフィーを使用して単離できる。ゲル濾
過クロマトグラフィーを利用して、異なる分子量に基づいて（差異は、基本的に標的化基
の平均分子量に相当する）、異なる治療化合物担体コンジュゲートを分別することができ
る（例えば、１−マー、２−マー、３−マーなど、ここで、「１−マー」は、治療化合物
あたり１つの標的化基分子を示し、「２−マー」は治療化合物に結合した２つの標的化基
を示す、など）。
この種の分離を実施するのに好適なゲル濾過カラムには、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）から入手できるＳｕｐｅｒｄｅｘ及
びＳｅｐｈａｄｅｘカラムがある。特定のカラムの選択は、所望の分別範囲によるだろう
。溶離は、一般的に、リン酸塩、酢酸塩などの好適な緩衝剤を使用して実施される。回収
された分画は、いくつかの異なる方法、例えば、（ｉ）タンパク質含量に関して２８０ｎ
ｍでの光学濃度（ＯＤ）、（ｉｉ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）タンパク質分析、及び
（ｉｉｉ）ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ ＰＡＧＥ
）により分析することができる。
ｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）から入手できるＳｕｐｅｒｄｅｘ及
びＳｅｐｈａｄｅｘカラムがある。特定のカラムの選択は、所望の分別範囲によるだろう
。溶離は、一般的に、リン酸塩、酢酸塩などの好適な緩衝剤を使用して実施される。回収
された分画は、いくつかの異なる方法、例えば、（ｉ）タンパク質含量に関して２８０ｎ
ｍでの光学濃度（ＯＤ）、（ｉｉ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）タンパク質分析、及び
（ｉｉｉ）ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ ＰＡＧＥ
）により分析することができる。
治療化合物担体コンジュゲートの分離は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ）Ｃ１８カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ又はＶｙｄａｃ）を
利用して逆相クロマトグラフィーによっても、イオン交換カラム、例えば、Ａｍｅｒｓｈ
ａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能なＤＥＡＥ−又はＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
イオン交換カラムを利用してイオン交換クロマトグラフィーによっても実施できる。生じ
た精製された組成物は、好ましくは、標的化基にコンジュゲートされていない治療化合物
を実質的に含まない。さらに、組成物は、好ましくは、他の非共有結合した標的化基の全
てを実質的に含まない。
ＰＬＣ）Ｃ１８カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ又はＶｙｄａｃ）を
利用して逆相クロマトグラフィーによっても、イオン交換カラム、例えば、Ａｍｅｒｓｈ
ａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能なＤＥＡＥ−又はＣＭ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
イオン交換カラムを利用してイオン交換クロマトグラフィーによっても実施できる。生じ
た精製された組成物は、好ましくは、標的化基にコンジュゲートされていない治療化合物
を実質的に含まない。さらに、組成物は、好ましくは、他の非共有結合した標的化基の全
てを実質的に含まない。
本明細書に記載する通り、本発明の担体は、３’炭素上にカップリング基を有する非ホ
ルモン性２５−ヒドロキシビタミンＤまたはその類似体であり得る。本明細書で使用する
場合の「２５−ヒドロキシビタミンＤ類似体」には、天然に存在するビタミンＤ代謝産物
型と他の化学的に改変された型との両方が含まれる。本発明の担体には、活性な（すなわ
ちホルモン）型のビタミンＤ（一般的に１炭素にヒドロキシル基を有する）は含まれない
。これらの化合物は、ビタミンＤの構造をベースにしており、親和性は様々であるが、ビ
タミンＤの一部の機能を保持している（すなわち、これらは、ＤＢＰと相互作用する）。
次のリストは、当技術分野で知られているビタミンＤ類似体の型を例示する。しかし、こ
れらは、ホルモン性である可能性も、Ｃ１ヒドロキシル基を有する可能性もある。これら
は、その機能上のホルモン性の性質についてではなく、ビタミンＤ類似体としてのその化
学的性質についてのみ、ここに示す：ＯＣＴ、すなわち側鎖の２２位に酸素原子を有する
化学的に合成された型の１，２５（ＯＨ）２Ｄ３（Ａｂｅ ｅｔ．ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌ
ｅｔｔ．２２６：５８−６２（１９８７））；ジェミニ（Ｇｅｍｉｎｉ）ビタミンＤ類似
体、すなわち１α，２５−ジヒドロキシ−２０Ｒ−２１（３−ヒドロキシ−３−ジュウテ
ロメチル−４，４，４−トリジュウテロブチル）−２３−イン−２６，２７−ヘキサフル
オロ−コレカルシフェロール（ＢＸＬ０１２４）（Ｓｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．７９（３）：３６０−７（２０１１））；パリカルシトール、すなわち、
すべての天然のビタミンＤ代謝産物中に見られる炭素−１９メチレン基を欠くビタミンＤ
２誘導ステロール（Ｓｌａｔｏｐｏｌｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ
Ｄｉｓ．２６：８５２（１９９５））；ドキセルカルシフェロール（１α−ヒドロキシビ
タミンＤ２）は、アルファカルシドール（１α−ヒドロキシビタミンＤ３）と同様に、肝
臓内で１α，２５（ＯＨ）２Ｄ２にヒドロキシル化されるプロドラッグであるが、アルフ
ァカルシドールとは異なり、ドキセルカルシフェロールはまた、２４−ヒドロキシル化さ
れて、１α，２４（Ｓ）−（ＯＨ）２Ｄ２（Ｋｎｕｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５３：８２９（１９９７））を生じる；インビボでヒドロキ
シル化されて２５（ＯＨ）ＤＨＴ２，１，２５（ＯＨ）２ＤＨＴ２になるジヒドロタキス
テロール２（ＤＨＴ２）（ＭｃＩｎｔｙｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．５
５：５００（１９９９））、ＥＤ−７１、およびエルデカルシトール。Ｅｒｂｅｎ ａｎ
ｄ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌ，Ｎｅｕｒｏｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．２（１）：５９−６９
（２００１）およびＳｔｅｄｄｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎ
ｓｐｌａｎｔ．１６（１０）：１９６５−１９６７（２００１）も参照のこと。先の参考
文献の全体を、参照によって組み込む。
ルモン性２５−ヒドロキシビタミンＤまたはその類似体であり得る。本明細書で使用する
場合の「２５−ヒドロキシビタミンＤ類似体」には、天然に存在するビタミンＤ代謝産物
型と他の化学的に改変された型との両方が含まれる。本発明の担体には、活性な（すなわ
ちホルモン）型のビタミンＤ（一般的に１炭素にヒドロキシル基を有する）は含まれない
。これらの化合物は、ビタミンＤの構造をベースにしており、親和性は様々であるが、ビ
タミンＤの一部の機能を保持している（すなわち、これらは、ＤＢＰと相互作用する）。
次のリストは、当技術分野で知られているビタミンＤ類似体の型を例示する。しかし、こ
れらは、ホルモン性である可能性も、Ｃ１ヒドロキシル基を有する可能性もある。これら
は、その機能上のホルモン性の性質についてではなく、ビタミンＤ類似体としてのその化
学的性質についてのみ、ここに示す：ＯＣＴ、すなわち側鎖の２２位に酸素原子を有する
化学的に合成された型の１，２５（ＯＨ）２Ｄ３（Ａｂｅ ｅｔ．ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌ
ｅｔｔ．２２６：５８−６２（１９８７））；ジェミニ（Ｇｅｍｉｎｉ）ビタミンＤ類似
体、すなわち１α，２５−ジヒドロキシ−２０Ｒ−２１（３−ヒドロキシ−３−ジュウテ
ロメチル−４，４，４−トリジュウテロブチル）−２３−イン−２６，２７−ヘキサフル
オロ−コレカルシフェロール（ＢＸＬ０１２４）（Ｓｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．７９（３）：３６０−７（２０１１））；パリカルシトール、すなわち、
すべての天然のビタミンＤ代謝産物中に見られる炭素−１９メチレン基を欠くビタミンＤ
２誘導ステロール（Ｓｌａｔｏｐｏｌｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ
Ｄｉｓ．２６：８５２（１９９５））；ドキセルカルシフェロール（１α−ヒドロキシビ
タミンＤ２）は、アルファカルシドール（１α−ヒドロキシビタミンＤ３）と同様に、肝
臓内で１α，２５（ＯＨ）２Ｄ２にヒドロキシル化されるプロドラッグであるが、アルフ
ァカルシドールとは異なり、ドキセルカルシフェロールはまた、２４−ヒドロキシル化さ
れて、１α，２４（Ｓ）−（ＯＨ）２Ｄ２（Ｋｎｕｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５３：８２９（１９９７））を生じる；インビボでヒドロキ
シル化されて２５（ＯＨ）ＤＨＴ２，１，２５（ＯＨ）２ＤＨＴ２になるジヒドロタキス
テロール２（ＤＨＴ２）（ＭｃＩｎｔｙｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．５
５：５００（１９９９））、ＥＤ−７１、およびエルデカルシトール。Ｅｒｂｅｎ ａｎ
ｄ Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌ，Ｎｅｕｒｏｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．２（１）：５９−６９
（２００１）およびＳｔｅｄｄｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎ
ｓｐｌａｎｔ．１６（１０）：１９６５−１９６７（２００１）も参照のこと。先の参考
文献の全体を、参照によって組み込む。
他の実施形態において、担体は、標的化基及び治療化合物に共有結合した薬学的に許容
できるスカフォールド部分をさらに含む。本発明の担体のスカフォールド部分は、治療化
合物の機能に必ずしも関与しないが、機能に貢献することがあり、治療化合物の薬物動態
的性質を向上させることがある。本発明のスカフォールドは、標的化基のＤＢＰへの結合
に実質的に干渉しない。同様に、本発明のスカフォールドは、治療化合物の構造又は機能
に実質的に干渉しない。スカフォールド部分の長さは、標的化基及び治療化合物の性質に
よる。当業者は、種々の結合間の公知の距離に基づいて、種々の原子の組み合わせが可変
の長さの分子を与えることを認識するだろう（引用により本明細書に組み込まれるＭｏｒ
ｒｉｓｏｎ，ａｎｄ Ｂｏｙｄ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ Ｅｄ，
Ａｌｌｙｎ ａｎｄ Ｂａｃｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．（１９７７））
。本発明によって企図される他のスカフォールドとしては、ペプチドリンカー、タンパク
質リンカー（ヒト血清アルブミン若しくは免疫グロブリンファミリータンパク質またはこ
れらの断片など）、核酸リンカー、低分子炭素鎖リンカー、酸素または窒素が散在してい
る炭素リンカー、またはこれらの組み合わせが挙げられる。好ましい実施態様では、リン
カーは、非遊離可能または安定である。
できるスカフォールド部分をさらに含む。本発明の担体のスカフォールド部分は、治療化
合物の機能に必ずしも関与しないが、機能に貢献することがあり、治療化合物の薬物動態
的性質を向上させることがある。本発明のスカフォールドは、標的化基のＤＢＰへの結合
に実質的に干渉しない。同様に、本発明のスカフォールドは、治療化合物の構造又は機能
に実質的に干渉しない。スカフォールド部分の長さは、標的化基及び治療化合物の性質に
よる。当業者は、種々の結合間の公知の距離に基づいて、種々の原子の組み合わせが可変
の長さの分子を与えることを認識するだろう（引用により本明細書に組み込まれるＭｏｒ
ｒｉｓｏｎ，ａｎｄ Ｂｏｙｄ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ Ｅｄ，
Ａｌｌｙｎ ａｎｄ Ｂａｃｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．（１９７７））
。本発明によって企図される他のスカフォールドとしては、ペプチドリンカー、タンパク
質リンカー（ヒト血清アルブミン若しくは免疫グロブリンファミリータンパク質またはこ
れらの断片など）、核酸リンカー、低分子炭素鎖リンカー、酸素または窒素が散在してい
る炭素リンカー、またはこれらの組み合わせが挙げられる。好ましい実施態様では、リン
カーは、非遊離可能または安定である。
治療用ペプチドも本発明の範囲内にある。用語ペプチドは、ひとつなぎのアミノ酸を含
むように意図される。本発明のペプチド中のアミノ酸は、天然でも、非天然でもよい。本
発明のペプチドは、化学的に合成されても生物学的に合成されてもよく、システインリッ
チペプチド、環状ペプチド、ステープルドペプチド、Ｄ−又はＬ−アミノ酸及びこれらの
混合物を含むペプチド、ペプチドミメティクス、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、並びにこれら
の組み合わせを含んでよい。例示的な実施形態には、ＡＩＤＳワクチン、アレルギーワク
チン、抗炎症ペプチド、抗インテグリンペプチド、抗ＴＣＲワクチン、抗アレルギーペプ
チド、抗癌ペプチド、抗真菌性ペプチド、抗菌性ペプチド、抗リウマチペプチド、抗トロ
ンビンペプチド、抗ウイルスペプチド、Ｇタンパク質結合受容体（ＧＰＣＲ）リガンド及
び関連ペプチド（例えば、セクレチンファミリー）、ＣＧＲＰ、ＧＰＣＲ拮抗剤、ＣＭＶ
ペプチド、カルパイン阻害剤、コラゲナーゼ阻害剤、ＤＡＰ阻害剤、ディフェンシン、透
析性オリゴペプチド（ｄｉａｌｙｔｉｃ ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）、エンハンシン
、エンドルフィン、エンドセリン拮抗剤、フィブロネクチン阻害剤、ガストリン拮抗剤、
グレリン、グルカゴン拮抗剤、ゴナドレリンアナログ、成長因子ペプチド、視床下部ホル
モン、下垂体ホルモン、腸の機能及び食欲を制御するペプチド、炎症誘発性脂肪組織産生
物、幹細胞増殖を刺激するペプチド、炎症性ペプチド、天然物、単純ヘルペスワクチン、
ヘパリン結合ペプチド、Ｂ型肝炎ワクチン、免疫調節性ペプチド、インフルエンザワクチ
ン、ＬＨＲＨ拮抗剤、オピオイドペプチド誘導体、ＭＭＰ阻害剤、ＭＵＣ−１ワクチン、
マラリアワクチン、メラノーマワクチン、髄膜炎ワクチン、神経ペプチド、オピオイドペ
プチド、骨形成ペプチド、骨粗鬆症ペプチド（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ）、パピローマウイルスワクチン、前立腺ガンワクチン、ＲＧＤペプチド、ＲＳＶワ
クチン、Ｔ細胞受容体ペプチドなどがある。本発明は、本明細書に記載される方法による
さらなる修飾により臨床製品として改良されるだろう、その合成アナログも企図する。当
業者は、増加した半減期、作用持続時間、吸収、及び／又はバイオアベイラビリティを与
える本明細書に記載される修飾を受ける余地がある多くの追加の商業的に重要なペプチド
を認識するだろう。
むように意図される。本発明のペプチド中のアミノ酸は、天然でも、非天然でもよい。本
発明のペプチドは、化学的に合成されても生物学的に合成されてもよく、システインリッ
チペプチド、環状ペプチド、ステープルドペプチド、Ｄ−又はＬ−アミノ酸及びこれらの
混合物を含むペプチド、ペプチドミメティクス、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、並びにこれら
の組み合わせを含んでよい。例示的な実施形態には、ＡＩＤＳワクチン、アレルギーワク
チン、抗炎症ペプチド、抗インテグリンペプチド、抗ＴＣＲワクチン、抗アレルギーペプ
チド、抗癌ペプチド、抗真菌性ペプチド、抗菌性ペプチド、抗リウマチペプチド、抗トロ
ンビンペプチド、抗ウイルスペプチド、Ｇタンパク質結合受容体（ＧＰＣＲ）リガンド及
び関連ペプチド（例えば、セクレチンファミリー）、ＣＧＲＰ、ＧＰＣＲ拮抗剤、ＣＭＶ
ペプチド、カルパイン阻害剤、コラゲナーゼ阻害剤、ＤＡＰ阻害剤、ディフェンシン、透
析性オリゴペプチド（ｄｉａｌｙｔｉｃ ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）、エンハンシン
、エンドルフィン、エンドセリン拮抗剤、フィブロネクチン阻害剤、ガストリン拮抗剤、
グレリン、グルカゴン拮抗剤、ゴナドレリンアナログ、成長因子ペプチド、視床下部ホル
モン、下垂体ホルモン、腸の機能及び食欲を制御するペプチド、炎症誘発性脂肪組織産生
物、幹細胞増殖を刺激するペプチド、炎症性ペプチド、天然物、単純ヘルペスワクチン、
ヘパリン結合ペプチド、Ｂ型肝炎ワクチン、免疫調節性ペプチド、インフルエンザワクチ
ン、ＬＨＲＨ拮抗剤、オピオイドペプチド誘導体、ＭＭＰ阻害剤、ＭＵＣ−１ワクチン、
マラリアワクチン、メラノーマワクチン、髄膜炎ワクチン、神経ペプチド、オピオイドペ
プチド、骨形成ペプチド、骨粗鬆症ペプチド（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ）、パピローマウイルスワクチン、前立腺ガンワクチン、ＲＧＤペプチド、ＲＳＶワ
クチン、Ｔ細胞受容体ペプチドなどがある。本発明は、本明細書に記載される方法による
さらなる修飾により臨床製品として改良されるだろう、その合成アナログも企図する。当
業者は、増加した半減期、作用持続時間、吸収、及び／又はバイオアベイラビリティを与
える本明細書に記載される修飾を受ける余地がある多くの追加の商業的に重要なペプチド
を認識するだろう。
本明細書に記載される実施形態の範囲内にやはり企図されるのは、分岐鎖又は分岐があ
るか若しくは分岐がない環状の治療用ペプチドである。環状、分岐鎖、及び分岐のある環
状ペプチドは、翻訳後の自然のプロセスから生じ、好適な合成法によっても作られる。い
くつかの実施形態において、本明細書に記載される任意のペプチド生成物は、先に記載さ
れたペプチドアナログを含み、それが次いでアルキル−グリコシド界面活性剤部分に共有
結合する。
るか若しくは分岐がない環状の治療用ペプチドである。環状、分岐鎖、及び分岐のある環
状ペプチドは、翻訳後の自然のプロセスから生じ、好適な合成法によっても作られる。い
くつかの実施形態において、本明細書に記載される任意のペプチド生成物は、先に記載さ
れたペプチドアナログを含み、それが次いでアルキル−グリコシド界面活性剤部分に共有
結合する。
他の実施態様は、天然および非天然のアミノ酸または天然のアミノ酸の類似体から構成
される治療用ペプチド鎖を含む。本明細書で使用する場合、ペプチドおよび／またはタン
パク質「類似体」は、パラ置換チロシン、オルト置換チロシン、およびメタ置換チロシン
を含むチロシン類似体などの、天然のアミノ酸に基づく非天然のアミノ酸を含む。ここで
は、チロシン上の置換基は、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロ
キシアミン、チオール基、カルボキシ基、メチル基、イソプロピル基、Ｃ２〜Ｃ２０直鎖
または分枝炭化水素、飽和または不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ハロ
ゲン、ニトロ基などを含む。
される治療用ペプチド鎖を含む。本明細書で使用する場合、ペプチドおよび／またはタン
パク質「類似体」は、パラ置換チロシン、オルト置換チロシン、およびメタ置換チロシン
を含むチロシン類似体などの、天然のアミノ酸に基づく非天然のアミノ酸を含む。ここで
は、チロシン上の置換基は、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロ
キシアミン、チオール基、カルボキシ基、メチル基、イソプロピル基、Ｃ２〜Ｃ２０直鎖
または分枝炭化水素、飽和または不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ハロ
ゲン、ニトロ基などを含む。
追加の実施態様は、修飾されたアミノ酸を有する治療用ペプチド鎖を含む。リジンのε
−位置のアシル化されたアミノ酸の例としては、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テ
トラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、３−フェニルプロパン酸などの脂肪酸
を有する、または、飽和または不飽和アルキル鎖を有するアミノ酸が挙げられる。（Ｚｈ
ａｎｇ、Ｌ．ａｎｄ Ｂｕｌａｊ，Ｇ．（２０１２）Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９
：１６０２−１６１８、その内容全体を参照によって本明細書に組み込む）。
−位置のアシル化されたアミノ酸の例としては、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テ
トラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、３−フェニルプロパン酸などの脂肪酸
を有する、または、飽和または不飽和アルキル鎖を有するアミノ酸が挙げられる。（Ｚｈ
ａｎｇ、Ｌ．ａｎｄ Ｂｕｌａｊ，Ｇ．（２０１２）Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １９
：１６０２−１６１８、その内容全体を参照によって本明細書に組み込む）。
本発明は、天然および非天然のアミノ酸または天然のアミノ酸の類似体を含む治療用ペ
プチド鎖をさらに企図する。いくつかの実施態様では、ペプチドまたはタンパク質「類似
体」は、パラ置換チロシン、オルト置換チロシン、およびメタ置換チロシンを含むチロシ
ン類似体などの、天然のアミノ酸に基づく非天然のアミノ酸を含む。ここでは、チロシン
上の置換基は、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、
チオール基、カルボキシ基、メチル基、イソプロピル基、Ｃ２〜Ｃ２０直鎖または分枝炭
化水素、飽和または不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ハロゲン、ニトロ
基などを含む。具体例には、２，４，６−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｔｍｐ）
、Ｏ−メチル−チロシン、３−（２−ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（２））、３−（１−
ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（１））、３−メチル−フェニルアラニン、１，２，３，４
−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、フッ化フェニルアラニン、イ
ソプロピル−フェニルアラニン、ｐ−アジド−フェニルアラニン、ｐ−アシル−フェニル
アラニン、ｐ−ベンゾイル−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブ
ロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−フェニルアラニン、及びイソプロピル−フェニルア
ラニンなどがあるが、これらに限定されない。
プチド鎖をさらに企図する。いくつかの実施態様では、ペプチドまたはタンパク質「類似
体」は、パラ置換チロシン、オルト置換チロシン、およびメタ置換チロシンを含むチロシ
ン類似体などの、天然のアミノ酸に基づく非天然のアミノ酸を含む。ここでは、チロシン
上の置換基は、アセチル基、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、
チオール基、カルボキシ基、メチル基、イソプロピル基、Ｃ２〜Ｃ２０直鎖または分枝炭
化水素、飽和または不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ハロゲン、ニトロ
基などを含む。具体例には、２，４，６−トリメチル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｔｍｐ）
、Ｏ−メチル−チロシン、３−（２−ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（２））、３−（１−
ナフチル）アラニン（Ｎａｌ（１））、３−メチル−フェニルアラニン、１，２，３，４
−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、フッ化フェニルアラニン、イ
ソプロピル−フェニルアラニン、ｐ−アジド−フェニルアラニン、ｐ−アシル−フェニル
アラニン、ｐ−ベンゾイル−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブ
ロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−フェニルアラニン、及びイソプロピル−フェニルア
ラニンなどがあるが、これらに限定されない。
実施形態の範囲内にやはり企図されるのは、当技術分野に公知である非標準的又は非天
然のアミノ酸を含む治療用ペプチド鎖であり、例えば、ＡｉｂなどのＣ−α−二置換アミ
ノ酸、Ｃａ−ジエチルグリシン（Ｄｅｇ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａ
ｃ４ｃ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａｃ５ｃ）などである。そのような
アミノ酸は、しばしばアルファヘリックス構造に偏る制限された構造になることが多い（
Ｋａｕｌ，Ｒ．ａｎｄ Ｂａｌａｒａｍ，Ｐ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈ
ｅｍ ７：１０５−１１７、引用により本明細書にその全体として組み込まれる）。アナ
ログ設計に有用な、そのような非天然のアミノ酸の追加例は、ホモ−アルギニン（Ｈａｒ
）などである。特定の例における還元アミド結合の置換は、酵素的破壊からの保護の向上
につながるか、又は受容体結合を変える。例としては、還元アミド結合を持つＴｉｃ−Ｐ
ｈｅジペプチドユニットの残基の間への組み込みは（Ｔｉｃ−Ｆ［ＣＨ２−ＮＨ］＾−Ｐ
ｈｅとして設計）、酵素分解を低減する。
然のアミノ酸を含む治療用ペプチド鎖であり、例えば、ＡｉｂなどのＣ−α−二置換アミ
ノ酸、Ｃａ−ジエチルグリシン（Ｄｅｇ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａ
ｃ４ｃ）、アミノシクロペンタン−１−カルボン酸（Ａｃ５ｃ）などである。そのような
アミノ酸は、しばしばアルファヘリックス構造に偏る制限された構造になることが多い（
Ｋａｕｌ，Ｒ．ａｎｄ Ｂａｌａｒａｍ，Ｐ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈ
ｅｍ ７：１０５−１１７、引用により本明細書にその全体として組み込まれる）。アナ
ログ設計に有用な、そのような非天然のアミノ酸の追加例は、ホモ−アルギニン（Ｈａｒ
）などである。特定の例における還元アミド結合の置換は、酵素的破壊からの保護の向上
につながるか、又は受容体結合を変える。例としては、還元アミド結合を持つＴｉｃ−Ｐ
ｈｅジペプチドユニットの残基の間への組み込みは（Ｔｉｃ−Ｆ［ＣＨ２−ＮＨ］＾−Ｐ
ｈｅとして設計）、酵素分解を低減する。
いくつかの実施態様では、本発明のペプチドまたはタンパク質に、アミノまたはカルボ
キシル末端での修飾を、任意選択で導入することができる（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊ
ｒ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６：４
３９９−４４１８）。例えば、本発明のペプチドまたはタンパク質は、Ｎ−末端で切断ま
たはアシル化することができる（Ｇｏｕｒｌｅｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｅｕ
ｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３５４：１０５−１ １ １、Ｇｏｚｅｓ，Ｉ．ａｎｄ
Ｆｕｒｍａｎ，Ｓ．（２００３）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ ９：４８３−４９４、
その内容全体を参照によって本明細書に組み込む）。Ｄ−ＰｈｅなどのＤ−アミノ酸の欠
損または組み込みなどの、ペプチドまたはタンパク質のＮ−末端に対する他の修飾は、長
鎖アルキルグリコシドなどの本明細書に記載した修飾で置換された場合、強力なかつ長時
間作用性のアゴニストまたはアンタゴニストをもたらす。
キシル末端での修飾を、任意選択で導入することができる（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊ
ｒ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６：４
３９９−４４１８）。例えば、本発明のペプチドまたはタンパク質は、Ｎ−末端で切断ま
たはアシル化することができる（Ｇｏｕｒｌｅｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｅｕ
ｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３５４：１０５−１ １ １、Ｇｏｚｅｓ，Ｉ．ａｎｄ
Ｆｕｒｍａｎ，Ｓ．（２００３）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ ９：４８３−４９４、
その内容全体を参照によって本明細書に組み込む）。Ｄ−ＰｈｅなどのＤ−アミノ酸の欠
損または組み込みなどの、ペプチドまたはタンパク質のＮ−末端に対する他の修飾は、長
鎖アルキルグリコシドなどの本明細書に記載した修飾で置換された場合、強力なかつ長時
間作用性のアゴニストまたはアンタゴニストをもたらす。
したがって、本発明は、本来の治療用化合物が、アセチル化、アシル化、ＰＥＧ化、Ａ
ＤＰ−リボシル化、アミド化、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスフォチジルイノシ
トール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋結合、環化、ジ
スルフィド結合形成、脱メチル、システインの共有結合架橋形成の形成、ピログルタミン
酸の形成、ホルミル化、γカルボキシル化、糖鎖付加、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシ
ル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化
、プレニル化、ラセミ化、糖鎖付加、脂質付着、硫酸化、γグルタミン酸残基のカルボキ
シル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質
へのアミノ酸の転移ＲＮＡ介在性付加（アルギニル化など）、およびユビキチン化によっ
て修飾された、治療用化合物類似体を提供する。例えば、（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊ
ｒ．（２００７）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ＩＩ ２：５７３−６０１、Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊｒ．（２００９）Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６：４３９９−４４１８、Ｕｙ，
Ｒ．ａｎｄ Ｗｏｌｄ，Ｆ．（１９７７）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：８９０−６、Ｓｅｉ
ｆｔｅｒ，Ｓ．ａｎｄ Ｅｎｇｌａｒｄ，Ｓ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ １８２：６２６−６４６、Ｒａｔｔａｎ，Ｓ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａ
ｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３：４８−６２）を参照のこと。先の参考文献の全
体を、参照によって組み込む。
ＤＰ−リボシル化、アミド化、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスフォチジルイノシ
トール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋結合、環化、ジ
スルフィド結合形成、脱メチル、システインの共有結合架橋形成の形成、ピログルタミン
酸の形成、ホルミル化、γカルボキシル化、糖鎖付加、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシ
ル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化
、プレニル化、ラセミ化、糖鎖付加、脂質付着、硫酸化、γグルタミン酸残基のカルボキ
シル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質
へのアミノ酸の転移ＲＮＡ介在性付加（アルギニル化など）、およびユビキチン化によっ
て修飾された、治療用化合物類似体を提供する。例えば、（Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊ
ｒ．（２００７）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ＩＩ ２：５７３−６０１、Ｎｅｓｔｏｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｊｒ．（２００９）Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １６：４３９９−４４１８、Ｕｙ，
Ｒ．ａｎｄ Ｗｏｌｄ，Ｆ．（１９７７）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：８９０−６、Ｓｅｉ
ｆｔｅｒ，Ｓ．ａｎｄ Ｅｎｇｌａｒｄ，Ｓ．（１９９０）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ １８２：６２６−６４６、Ｒａｔｔａｎ，Ｓ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａ
ｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３：４８−６２）を参照のこと。先の参考文献の全
体を、参照によって組み込む。
グリコシル化された治療用ペプチドは、従来のＦｍｏｃ化学及び例えば樹脂上の固相ペ
プチド合成を利用して調製できるが、その場合、所望の保護された糖アミノ酸がペプチド
合成の前に調製され、次いでペプチド合成の間に所望の部位でペプチド鎖に導入される。
このように、治療用ペプチドポリマーコンジュゲートはインビトロでコンジュゲートされ
得る。グリコシル化は脱保護の前に起こり得る。アミノ酸グリコシドの調製は、引用によ
り本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第５，７６７，２５４号明細書、国際
公開第２００５／０９７１５８号パンフレット、及びＤｏｏｒｅｓ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．
，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４０１−１４０３，２００６に記載されている。例えば
、セリン及びスレオニン残基のアルファ及びベータ選択的グリコシル化は、ケーニッヒ−
クノール反応及びシッフ塩基中間体を伴うＬｅｍｉｅｕｘのインサイチューアノマー化方
法を利用して実施される。次いで、シッフ塩基グリコシドの脱保護が、弱酸性条件又は加
水素分解を利用して実施される。グリコシル化された治療用ペプチドコンジュゲートを含
む組成物は、成長するペプチド鎖を、保護されたアミノ酸の少なくとも１つがグリコシル
化されている保護されたアミノ酸と段階的に接触させ、それに続いて、水溶性ポリマーの
コンジュゲーションを含む、段階的な固相ペプチド合成により作られる。そのような組成
物は、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９８％のグリコシル化され
コンジュゲートされた治療用ペプチドの単一の種の純度を有し得る。
プチド合成を利用して調製できるが、その場合、所望の保護された糖アミノ酸がペプチド
合成の前に調製され、次いでペプチド合成の間に所望の部位でペプチド鎖に導入される。
このように、治療用ペプチドポリマーコンジュゲートはインビトロでコンジュゲートされ
得る。グリコシル化は脱保護の前に起こり得る。アミノ酸グリコシドの調製は、引用によ
り本明細書にその全体として組み込まれる米国特許第５，７６７，２５４号明細書、国際
公開第２００５／０９７１５８号パンフレット、及びＤｏｏｒｅｓ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．
，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４０１−１４０３，２００６に記載されている。例えば
、セリン及びスレオニン残基のアルファ及びベータ選択的グリコシル化は、ケーニッヒ−
クノール反応及びシッフ塩基中間体を伴うＬｅｍｉｅｕｘのインサイチューアノマー化方
法を利用して実施される。次いで、シッフ塩基グリコシドの脱保護が、弱酸性条件又は加
水素分解を利用して実施される。グリコシル化された治療用ペプチドコンジュゲートを含
む組成物は、成長するペプチド鎖を、保護されたアミノ酸の少なくとも１つがグリコシル
化されている保護されたアミノ酸と段階的に接触させ、それに続いて、水溶性ポリマーの
コンジュゲーションを含む、段階的な固相ペプチド合成により作られる。そのような組成
物は、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９８％のグリコシル化され
コンジュゲートされた治療用ペプチドの単一の種の純度を有し得る。
本明細書に定義及び／又は開示される治療用ペプチドの１つ以上のアミノ酸残基の導入
に使用できる単糖類には、グルコース（デキストロース）、フルクトース、ガラクトース
、及びリボースがある。使用に好適な追加の単糖類には、グリセルアルデヒド、ジヒドロ
キシアセトン、エリトロース、トレオース、エリトルロース、アラビノース、リキソース
、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、マンノース、Ｎ−
アセチルノイラミン酸、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、及びＮ−アセチルグル
コサミンなどがある。本明細書に定義及び／又は開示される治療用ペプチド、治療用ペプ
チドの１つ以上のアミノ酸残基の修飾に使用される単糖類、二糖類、及び三糖類などのグ
リコシドには、とりわけ、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、メリビ
オース、及びセロビオースがある。三糖類には、アカルボース、ラフィノース、及びメレ
ジトースがある。
に使用できる単糖類には、グルコース（デキストロース）、フルクトース、ガラクトース
、及びリボースがある。使用に好適な追加の単糖類には、グリセルアルデヒド、ジヒドロ
キシアセトン、エリトロース、トレオース、エリトルロース、アラビノース、リキソース
、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、マンノース、Ｎ−
アセチルノイラミン酸、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、及びＮ−アセチルグル
コサミンなどがある。本明細書に定義及び／又は開示される治療用ペプチド、治療用ペプ
チドの１つ以上のアミノ酸残基の修飾に使用される単糖類、二糖類、及び三糖類などのグ
リコシドには、とりわけ、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、メリビ
オース、及びセロビオースがある。三糖類には、アカルボース、ラフィノース、及びメレ
ジトースがある。
本発明のさらなる実施形態において、本明細書に定義及び／又は開示される治療化合物
は、ビオチンに化学的に結合していてもよい。次いで、ビオチン／治療化合物がアビジン
に結合できる。
は、ビオチンに化学的に結合していてもよい。次いで、ビオチン／治療化合物がアビジン
に結合できる。
やはり本発明の範囲内にあるのは、抗体であるポリペプチドである。用語抗体は、モノ
クローナル抗体、ポリクローナル抗体、毒素結合抗体、薬結合抗体（ＡＤＣ）、ヒト化抗
体、抗体断片（例えば、Ｆｃドメイン）、Ｆａｂ断片、一本鎖抗体、二重特異性又は多重
特異性抗体、ラマ抗体、ナノボディ、ダイアボディ、アフィボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（
ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃなどを含むように意図される。用語の
中にやはり含まれるのは、Ｉｇキメラなどの抗体融合タンパク質である。好ましい抗体に
は、ヒト化若しくは完全ヒトモノクローナル抗体又はその断片がある。
クローナル抗体、ポリクローナル抗体、毒素結合抗体、薬結合抗体（ＡＤＣ）、ヒト化抗
体、抗体断片（例えば、Ｆｃドメイン）、Ｆａｂ断片、一本鎖抗体、二重特異性又は多重
特異性抗体、ラマ抗体、ナノボディ、ダイアボディ、アフィボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（
ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃなどを含むように意図される。用語の
中にやはり含まれるのは、Ｉｇキメラなどの抗体融合タンパク質である。好ましい抗体に
は、ヒト化若しくは完全ヒトモノクローナル抗体又はその断片がある。
用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は最も広い意味で互換的に使用され、モノクロー
ナル抗体（例えば、完全長又はインタクトモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、
一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り二重特異
性抗体）を含み、特定の抗体断片（本明細書により詳細に記載されるとおり）も含み得る
。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化、及び／又は親和性成熟であり得る。
ナル抗体（例えば、完全長又はインタクトモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、
一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り二重特異
性抗体）を含み、特定の抗体断片（本明細書により詳細に記載されるとおり）も含み得る
。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化、及び／又は親和性成熟であり得る。
用語「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「ホール抗体」は本明細書において互換
的に使用され、以下に定義される抗体断片ではなく、実質的に無傷な形態にある抗体を意
味する。その用語は、特に、Ｆｃ領域を含む重鎖を持つ抗体を意味する。「抗体断片」は
、好ましくは、抗原結合領域を含むインタクト抗体の一部を含む。抗体断片の例には、Ｆ
ａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗
体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体がある。用語「モノクローナル抗体
」は、本明細書では、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を意味し、すなわち、
その集団を構成する個々の抗体は、少量存在する可能性のある突然変異、例えば、自然発
生突然変異以外は同一である。そのため、修飾語「モノクローナル」は、別個の抗体の混
合物でないとして、抗体の特性を示す。
的に使用され、以下に定義される抗体断片ではなく、実質的に無傷な形態にある抗体を意
味する。その用語は、特に、Ｆｃ領域を含む重鎖を持つ抗体を意味する。「抗体断片」は
、好ましくは、抗原結合領域を含むインタクト抗体の一部を含む。抗体断片の例には、Ｆ
ａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗
体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体がある。用語「モノクローナル抗体
」は、本明細書では、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を意味し、すなわち、
その集団を構成する個々の抗体は、少量存在する可能性のある突然変異、例えば、自然発
生突然変異以外は同一である。そのため、修飾語「モノクローナル」は、別個の抗体の混
合物でないとして、抗体の特性を示す。
特定の実施形態において、そのようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合
するポリペプチド配列を含む抗体を含むが、その場合、標的結合ポリペプチド配列は、複
数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによ
り得られた。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、又
はリコンビナントＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからの独特のクローンの
選択であり得る。選択された標的結合配列が、さらに変化されて、例えば、標的への親和
性が改善されたり、標的結合配列がヒト化されたり、細胞培養物中でのその産生が向上さ
れたり、インビボでのその免疫原性が低下したり、多重特異性抗体が作り出されたりし得
ることなど、及び変化された標的結合配列を含む抗体が、やはり本発明のモノクローナル
抗体であることを理解されたい。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる
抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノ
クローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて
、モノクローナル抗体調製物は、典型的には、他の免疫グロブリンにより汚染されていな
いという点で有利である。
するポリペプチド配列を含む抗体を含むが、その場合、標的結合ポリペプチド配列は、複
数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによ
り得られた。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、又
はリコンビナントＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからの独特のクローンの
選択であり得る。選択された標的結合配列が、さらに変化されて、例えば、標的への親和
性が改善されたり、標的結合配列がヒト化されたり、細胞培養物中でのその産生が向上さ
れたり、インビボでのその免疫原性が低下したり、多重特異性抗体が作り出されたりし得
ることなど、及び変化された標的結合配列を含む抗体が、やはり本発明のモノクローナル
抗体であることを理解されたい。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる
抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノ
クローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて
、モノクローナル抗体調製物は、典型的には、他の免疫グロブリンにより汚染されていな
いという点で有利である。
ある抗原に特異的に結合する抗体は、その抗原に対する高い親和性を有する。抗体親和
性は、解離定数（Ｋｄ）によって測定することができる。特定の実施態様では、本明細書
で提供される抗体の解離定数（Ｋｄ）は、約１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ
、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭ以下（例えば１０−７Ｍ以下、１０−７Ｍから１
０−１３Ｍ、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、または１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である
。
性は、解離定数（Ｋｄ）によって測定することができる。特定の実施態様では、本明細書
で提供される抗体の解離定数（Ｋｄ）は、約１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ
、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭ以下（例えば１０−７Ｍ以下、１０−７Ｍから１
０−１３Ｍ、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、または１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である
。
一実施形態において、Ｋｄは、以下のアッセイにより記載されるとおり、対象としてい
る抗体のＦａｂバージョン及びその抗原と共に、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）
により測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、未標識の抗原の漸増系列の
存在下で、Ｆａｂを最低濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原と共に平衡化させ、次いで、結合
した抗原を、抗Ｆａｂ抗体−コートプレートにより捕捉して測定される（例えば、Ｃｈｅ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照
されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マル
チウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、５０ｍＭ炭酸ナトリウム
（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの抗Ｆａｂ捕捉抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）により一
晩被覆され、その後ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、２から５時間室
温（およそ２３℃）でブロックされる。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ ２６９６２０番）
において、１００μＭ又は２６μＭ［１２５Ｉ］−抗原は、対象とするＦａｂの段階希釈
物と混合される（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：
４５９３−４５９９（１９９７）中の、抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する
）。次いで、対象とするＦａｂは一晩インキュベートされる。しかし、確実に平衡に達す
るように、インキュベーションをより長時間（例えば、約６５時間）続けてもよい。その
後、混合物は捕捉プレートに移され、室温でインキュベートされる（例えば、１時間）。
次いで、溶液は除かれ、プレートは、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ
−２０（登録商標））で８回洗浄される。プレートが乾燥すると、１５０μｌ／ウェルの
シンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）が加えられ、プ
レートはＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計測
される。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度が、競合結合アッセイのために選
択される。
る抗体のＦａｂバージョン及びその抗原と共に、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）
により測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、未標識の抗原の漸増系列の
存在下で、Ｆａｂを最低濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原と共に平衡化させ、次いで、結合
した抗原を、抗Ｆａｂ抗体−コートプレートにより捕捉して測定される（例えば、Ｃｈｅ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照
されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マル
チウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、５０ｍＭ炭酸ナトリウム
（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの抗Ｆａｂ捕捉抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）により一
晩被覆され、その後ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、２から５時間室
温（およそ２３℃）でブロックされる。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ ２６９６２０番）
において、１００μＭ又は２６μＭ［１２５Ｉ］−抗原は、対象とするＦａｂの段階希釈
物と混合される（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：
４５９３−４５９９（１９９７）中の、抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する
）。次いで、対象とするＦａｂは一晩インキュベートされる。しかし、確実に平衡に達す
るように、インキュベーションをより長時間（例えば、約６５時間）続けてもよい。その
後、混合物は捕捉プレートに移され、室温でインキュベートされる（例えば、１時間）。
次いで、溶液は除かれ、プレートは、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ
−２０（登録商標））で８回洗浄される。プレートが乾燥すると、１５０μｌ／ウェルの
シンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）が加えられ、プ
レートはＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計測
される。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度が、競合結合アッセイのために選
択される。
他の実施形態によると、Ｋｄは、例えば、固定化された抗原ＣＭ５チップと共に、約１
０の応答単位（ＲＵ）で、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（
登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）
を２５℃で使用して、表面プラズモン共鳴アッセイにより測定される。簡単に述べると、
製造業者の説明書に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（Ｃ
Ｍ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）に
より活性化される。抗原は、ｐＨ４．８の１０ｍＭ酢酸ナトリウムで５μｇ／ｍｌ（約０
．２μＭ）に希釈されてから、流量５μｌ／分で注入されて、結合したタンパク質のおよ
そ１０応答単位（ＲＵ）を得る。抗原の注入後、１Ｍエタノールアミンが注入されて、未
反応の基がブロックされる。反応速度測定のため、Ｆａｂの２倍の段階希釈物（０．７８
ｎＭから５００ｎＭ）が、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（
商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、流量およそ２５μｌ／分で注入される
。会合速度（Ｋｏｎ）及び解離速度（Ｋｏｆｆ）が簡単な１対１ラングミュアーの結合モ
デル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン
３．２）を利用して、会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィッティングすることに
より計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）はｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。例え
ば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９
９）を参照されたい。ｏｎ速度が上記表面プラズモン共鳴アッセイにより１０６Ｍ−１ｓ
−１を超える場合、ｏｎ速度は、ストップフローを備えた分光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｐ
ｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００−シリーズＳＬＭ
−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計
中で測定して増加する濃度の抗原の存在下、撹拌しているキュベットで、２５℃で、ｐＨ
７．２のＰＢＳ中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度の増加又は減少を
測定する蛍光消光技法（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）を
利用して測定できる。チップ表面への標的抗原の他のカップリング化学作用（例えば、ス
トレプトアビジン／ビオチン、疎水性相互作用、又はジスルフィド化学作用）も、当業者
により理解されるとおり、上述のアミンカップリング方法（ＣＭ５チップ）の代りに容易
に利用可能である。
０の応答単位（ＲＵ）で、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（
登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）
を２５℃で使用して、表面プラズモン共鳴アッセイにより測定される。簡単に述べると、
製造業者の説明書に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（Ｃ
Ｍ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）に
より活性化される。抗原は、ｐＨ４．８の１０ｍＭ酢酸ナトリウムで５μｇ／ｍｌ（約０
．２μＭ）に希釈されてから、流量５μｌ／分で注入されて、結合したタンパク質のおよ
そ１０応答単位（ＲＵ）を得る。抗原の注入後、１Ｍエタノールアミンが注入されて、未
反応の基がブロックされる。反応速度測定のため、Ｆａｂの２倍の段階希釈物（０．７８
ｎＭから５００ｎＭ）が、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（
商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、流量およそ２５μｌ／分で注入される
。会合速度（Ｋｏｎ）及び解離速度（Ｋｏｆｆ）が簡単な１対１ラングミュアーの結合モ
デル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン
３．２）を利用して、会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィッティングすることに
より計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）はｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。例え
ば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９
９）を参照されたい。ｏｎ速度が上記表面プラズモン共鳴アッセイにより１０６Ｍ−１ｓ
−１を超える場合、ｏｎ速度は、ストップフローを備えた分光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｐ
ｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００−シリーズＳＬＭ
−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計
中で測定して増加する濃度の抗原の存在下、撹拌しているキュベットで、２５℃で、ｐＨ
７．２のＰＢＳ中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度の増加又は減少を
測定する蛍光消光技法（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）を
利用して測定できる。チップ表面への標的抗原の他のカップリング化学作用（例えば、ス
トレプトアビジン／ビオチン、疎水性相互作用、又はジスルフィド化学作用）も、当業者
により理解されるとおり、上述のアミンカップリング方法（ＣＭ５チップ）の代りに容易
に利用可能である。
修飾語「モノクローナル」は、抗体の特性を、抗体の実質的に均質な集団から得られた
ものとして示し、特別な方法による抗体の製造が必要であると解釈されないものとする。
例えば、本発明により使用すべきモノクローナル抗体は、種々の技法、例えば、ハイブリ
ドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７
５）；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒ
ｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
ｓ ｐｐ．５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ
法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書参照）、ファージディスプレイ技術
（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（
１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９
７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２
９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５
）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅ
ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−
１３２（２００４）参照）、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座又はヒト免疫グロブリン配
列をコードする遺伝子の一部又は全てを有する動物中でヒト又はヒト様抗体を製造する技
術（例えば、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；同第９６／３４０９６号パン
フレット；同第９６／３３７３５号パンフレット；同第９１／１０７４１号パンフレット
；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ
３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａ
ｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号明
細書；同第５，５４５，８０６号明細書；同第５，５６９，８２５号明細書；同第５，６
２５，１２６号明細書；同第５，６３３，４２５号明細書；同第５，６６１，０１６号明
細書；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８
３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５
９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２−８１３（１９９４
）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８
４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
．１４：８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ
．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）により製造できる。上
記特許、刊行物、及び引用文献は、引用によりその全体として組み込まれる。
ものとして示し、特別な方法による抗体の製造が必要であると解釈されないものとする。
例えば、本発明により使用すべきモノクローナル抗体は、種々の技法、例えば、ハイブリ
ドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７
５）；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒ
ｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
ｓ ｐｐ．５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ
法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書参照）、ファージディスプレイ技術
（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（
１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９
７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２
９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５
）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅ
ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−
１３２（２００４）参照）、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座又はヒト免疫グロブリン配
列をコードする遺伝子の一部又は全てを有する動物中でヒト又はヒト様抗体を製造する技
術（例えば、国際公開第９８／２４８９３号パンフレット；同第９６／３４０９６号パン
フレット；同第９６／３３７３５号パンフレット；同第９１／１０７４１号パンフレット
；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ
３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａ
ｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号明
細書；同第５，５４５，８０６号明細書；同第５，５６９，８２５号明細書；同第５，６
２５，１２６号明細書；同第５，６３３，４２５号明細書；同第５，６６１，０１６号明
細書；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８
３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５
９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２−８１３（１９９４
）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８
４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ
．１４：８２６（１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ
．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）により製造できる。上
記特許、刊行物、及び引用文献は、引用によりその全体として組み込まれる。
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、ネズミ科の）抗体は、非ヒト免疫グロブリンから誘
導された最小限の配列を含むキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レ
シピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有する
、マウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種の超可変領域（ドナー抗体
）由来の残基により代えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつ
かの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する
非ヒト残基により代えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体
にも見られない残基を含むことがある。これらの修飾は、抗体の性能をさらに改良するた
めに実施されることがある。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つ
の可変領域の実質的に全てを含むだろうが、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全
ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てはヒト免疫グロ
ブリン配列に対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、典型的にはヒト免疫グロブリンの
ものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むだろう。さらなる詳
細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１
９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９
（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９
３−５９６（１９９２）を参照されたい。以下の総説記事及びそこに引用されている引用
文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒ
ｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ
，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５−１０３８（１
９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４
２８−４３３（１９９４）。上記引用文献は、引用によりその全体として組み込まれる。
導された最小限の配列を含むキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レ
シピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有する
、マウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種の超可変領域（ドナー抗体
）由来の残基により代えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつ
かの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する
非ヒト残基により代えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体
にも見られない残基を含むことがある。これらの修飾は、抗体の性能をさらに改良するた
めに実施されることがある。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つ
の可変領域の実質的に全てを含むだろうが、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全
ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てはヒト免疫グロ
ブリン配列に対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、典型的にはヒト免疫グロブリンの
ものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むだろう。さらなる詳
細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１
９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９
（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９
３−５９６（１９９２）を参照されたい。以下の総説記事及びそこに引用されている引用
文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒ
ｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ
，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５−１０３８（１
９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４
２８−４３３（１９９４）。上記引用文献は、引用によりその全体として組み込まれる。
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を
含むか、且つ／又は本明細書に開示されるヒト抗体を製造する技術のいずれかを利用して
作られたものである。そのような技術には、ファージディスプレイライブラリーなどのヒ
トから誘導されたコンビナトリアルライブラリーのスクリーニング（例えば、Ｍａｒｋｓ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７（１９９１）及びＨｏ
ｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：４１３３−
４１３７（１９９１）参照）；ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒトミエローマ及
びマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞系の利用（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａ
ｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５５−９３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ，１４７：８６（１９９１）参照）；及び内因性免疫グロブリン産生のない状態でヒト
抗体の完全なレパートリーを産生できる遺伝子導入動物（例えばマウス）でのモノクロー
ナル抗体の生成（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）参照）がある。ヒ
ト抗体のこの定義は、非ヒト動物由来の抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に排除する
。
含むか、且つ／又は本明細書に開示されるヒト抗体を製造する技術のいずれかを利用して
作られたものである。そのような技術には、ファージディスプレイライブラリーなどのヒ
トから誘導されたコンビナトリアルライブラリーのスクリーニング（例えば、Ｍａｒｋｓ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７（１９９１）及びＨｏ
ｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：４１３３−
４１３７（１９９１）参照）；ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒトミエローマ及
びマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞系の利用（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａ
ｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５５−９３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ，１４７：８６（１９９１）参照）；及び内因性免疫グロブリン産生のない状態でヒト
抗体の完全なレパートリーを産生できる遺伝子導入動物（例えばマウス）でのモノクロー
ナル抗体の生成（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）参照）がある。ヒ
ト抗体のこの定義は、非ヒト動物由来の抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に排除する
。
公知の全種類のそのような抗体は本発明の範囲内にある。例示的な抗体には、成長因子
、サイトカイン、リンフォカイン、細胞表面受容体、酵素、血管内皮細胞増殖因子、線維
芽細胞増殖因子に結合するもの及びそれらのそれぞれの受容体に対する抗体がある。他の
例示的な抗体には、受容体−ＩｇＧ Ｆｃ融合タンパク質、及び糖タンパク質に対するモ
ノクローナル抗体がある。先に列記されたポリペプチドのいずれの修飾された（例えば、
突然変異した）任意のバージョンも、本発明の範囲内にある。本発明に使用すべき治療化
合物は当技術分野に公知であり、例としては、引用により本明細書にその全体として組み
込まれる米国特許第７，６０８，６８１号明細書に開示されている。さらに、本発明は、
自己免疫疾患又は望ましくない炎症状態を起こす、対象中の天然又は非天然の抗体の阻害
剤又は拮抗剤のコンジュゲートを企図する。
、サイトカイン、リンフォカイン、細胞表面受容体、酵素、血管内皮細胞増殖因子、線維
芽細胞増殖因子に結合するもの及びそれらのそれぞれの受容体に対する抗体がある。他の
例示的な抗体には、受容体−ＩｇＧ Ｆｃ融合タンパク質、及び糖タンパク質に対するモ
ノクローナル抗体がある。先に列記されたポリペプチドのいずれの修飾された（例えば、
突然変異した）任意のバージョンも、本発明の範囲内にある。本発明に使用すべき治療化
合物は当技術分野に公知であり、例としては、引用により本明細書にその全体として組み
込まれる米国特許第７，６０８，６８１号明細書に開示されている。さらに、本発明は、
自己免疫疾患又は望ましくない炎症状態を起こす、対象中の天然又は非天然の抗体の阻害
剤又は拮抗剤のコンジュゲートを企図する。
一実施態様では、薬物は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、アプタマー（一本鎖または二本鎖
）、ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチド、線状または環状であるより大きなＤＮＡ分
子、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のために使用されるオリゴヌクレオチド、ＤＮＡ／ＲＮＡハ
イブリッド分子の置換などのＤＮＡの変化形、ＰＮＡまたは他の核酸誘導体分子などの合
成のＤＮＡ様分子（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第０７／０
３５９２２号パンフレットを参照のこと）である。別の実施態様では、治療用化合物は、
ヌクレアーゼ耐性ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドからなる。好ましい実施態様で
は、ヌクレアーゼ耐性ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、モルホリノ（すなわち、配列特異的
な方式で核酸に結合する、核酸のホスホロジアミデート類似体、Ｓａｒｅｐｔａ Ｔｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ）である。
）、ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチド、線状または環状であるより大きなＤＮＡ分
子、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のために使用されるオリゴヌクレオチド、ＤＮＡ／ＲＮＡハ
イブリッド分子の置換などのＤＮＡの変化形、ＰＮＡまたは他の核酸誘導体分子などの合
成のＤＮＡ様分子（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第０７／０
３５９２２号パンフレットを参照のこと）である。別の実施態様では、治療用化合物は、
ヌクレアーゼ耐性ＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドからなる。好ましい実施態様で
は、ヌクレアーゼ耐性ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、モルホリノ（すなわち、配列特異的
な方式で核酸に結合する、核酸のホスホロジアミデート類似体、Ｓａｒｅｐｔａ Ｔｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ）である。
他の実施態様では、本発明のビタミンＤ担体にコンジュゲートされたＲＮＡｉが、遺伝
性疾患と感染症との両方を治療するために使用される。好ましい実施態様では、コンジュ
ゲートが、例えば、血液状態、肝臓状態、心臓血管状態、肝炎、眼状態、代謝性の状態、
移植片拒絶、癌、自己免疫状態、アミロイドーシス、および神経系状態を治療するために
使用される。
性疾患と感染症との両方を治療するために使用される。好ましい実施態様では、コンジュ
ゲートが、例えば、血液状態、肝臓状態、心臓血管状態、肝炎、眼状態、代謝性の状態、
移植片拒絶、癌、自己免疫状態、アミロイドーシス、および神経系状態を治療するために
使用される。
別の実施態様では、薬物は、小分子または化学物質である。別の実施態様では、薬物は
、ペプチドまたはペプチドの誘導体（ＰＮＡなど）である。別の実施態様では、薬物は、
完全長か断片か切断型かにかかわらず、ＰＥＧ化されているかグリコシル化されているか
別な方式で共有結合的にまたは非共有結合的に修飾されているか修飾されないままかにか
かわらず、ポリペプチドのすべてまたは一部から構成されるタンパク質である。
、ペプチドまたはペプチドの誘導体（ＰＮＡなど）である。別の実施態様では、薬物は、
完全長か断片か切断型かにかかわらず、ＰＥＧ化されているかグリコシル化されているか
別な方式で共有結合的にまたは非共有結合的に修飾されているか修飾されないままかにか
かわらず、ポリペプチドのすべてまたは一部から構成されるタンパク質である。
担体のアセンブリーのいくつかの態様は、当技術分野に周知である化学的方法を利用す
る。例えば、ビタミンＥ−ＰＥＧはＥａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌにより製造され、
ビオチン−ＰＥＧは、Ｅｎｚｏｎ、Ｎｅｋｔａｒ、及びＮＯＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
などの多くのＰＥＧ製造業者により製造されている。いくつかのビタミン及び他の治療化
合物が連結しているＰＥＧ分子を製造する方法は、これらの方法及び当技術分野に公知で
ある他の化学的方法に従う。例えば、５’アミン部分によりオリゴヌクレオチドに結合し
たＰＥＧ２−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなど、オリゴヌクレオチド又は関連
する分子へのＰＥＧの結合が起こる。いくつかのカップリング法が企図され、例えば、ペ
プチド上のリジン残基などのアミン基へのＮＨＳカップリング、システイン残基上などの
スルフヒドリル基へのマレイミドカップリング、スルフヒドリル基へのヨードアセチルカ
ップリング、スルフヒドリル基へのピリジルジチオールカップリング、炭水化物基へカッ
プリングするためのヒドラジド、Ｎ末端にカップリングするためのアルデヒド、又は一級
若しくは二級アミンと反応することが知られているテトラフルオロフェニルエステルカッ
プリングがある。他の可能な化学的カップリング法は当業者に知られており、代えること
ができる。例としては、本発明の結合基を使用するコンジュゲーションは、引用により本
明細書にその全体として組み込まれる国際公開第９３／０１２１４５号パンフレット（Ａ
ｔａｓｓｉ ｅｔ ａｌ．）に記載の組成物及び方法を利用して実施できるが、第７，８
０３，７７７号明細書（Ｄｅｆｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．）も参照されたい。
る。例えば、ビタミンＥ−ＰＥＧはＥａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌにより製造され、
ビオチン−ＰＥＧは、Ｅｎｚｏｎ、Ｎｅｋｔａｒ、及びＮＯＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
などの多くのＰＥＧ製造業者により製造されている。いくつかのビタミン及び他の治療化
合物が連結しているＰＥＧ分子を製造する方法は、これらの方法及び当技術分野に公知で
ある他の化学的方法に従う。例えば、５’アミン部分によりオリゴヌクレオチドに結合し
たＰＥＧ２−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなど、オリゴヌクレオチド又は関連
する分子へのＰＥＧの結合が起こる。いくつかのカップリング法が企図され、例えば、ペ
プチド上のリジン残基などのアミン基へのＮＨＳカップリング、システイン残基上などの
スルフヒドリル基へのマレイミドカップリング、スルフヒドリル基へのヨードアセチルカ
ップリング、スルフヒドリル基へのピリジルジチオールカップリング、炭水化物基へカッ
プリングするためのヒドラジド、Ｎ末端にカップリングするためのアルデヒド、又は一級
若しくは二級アミンと反応することが知られているテトラフルオロフェニルエステルカッ
プリングがある。他の可能な化学的カップリング法は当業者に知られており、代えること
ができる。例としては、本発明の結合基を使用するコンジュゲーションは、引用により本
明細書にその全体として組み込まれる国際公開第９３／０１２１４５号パンフレット（Ａ
ｔａｓｓｉ ｅｔ ａｌ．）に記載の組成物及び方法を利用して実施できるが、第７，８
０３，７７７号明細書（Ｄｅｆｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．）も参照されたい。
本発明の例示的な薬物製剤としては、水性の液剤、有機液剤、粉末製剤、固体製剤、お
よび混合相製剤が挙げられる。
よび混合相製剤が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、本発明の化合物のいずれか及びその薬学的に許容できる塩を、
任意の薬学的に許容できる担体、アジュバント、又はビヒクルと共に含む。本発明の医薬
組成物に使用できる薬学的に許容できる担体、アジュバント、及びビヒクルには、イオン
交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血
清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、
飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、硫酸プロタミン
、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など、コロイ
ダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエ
チレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリラート、蝋、ポ
リエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び
羊毛脂があるが、これらに限定されない。
任意の薬学的に許容できる担体、アジュバント、又はビヒクルと共に含む。本発明の医薬
組成物に使用できる薬学的に許容できる担体、アジュバント、及びビヒクルには、イオン
交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血
清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、
飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、硫酸プロタミン
、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩など、コロイ
ダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエ
チレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリラート、蝋、ポ
リエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び
羊毛脂があるが、これらに限定されない。
薬学的に許容できる塩は、毒性の副作用なしに治療用組成物の望ましい生物学的活性を
保持する。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸
、リン酸、硝酸などにより形成される酸付加塩／及び有機酸、例えば、酢酸、トリフルオ
ロ酢酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、
アスコルビン酸、安息香酸、タニン酸（ｔａｎｉｃ ａｃｉｄ）、パモ酸、アルギン酸、
ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン
酸などにより形成される塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウ
ム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどの多価金属カチオンにより
形成される；又はＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン又はエスレンジアミン（ｅｔｈ
ｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）から形成された有機カチオンにより形成される塩基付加塩若し
くは錯体；又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組み合わせ、例えば、亜鉛のタンニン酸塩などで
ある。
保持する。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸
、リン酸、硝酸などにより形成される酸付加塩／及び有機酸、例えば、酢酸、トリフルオ
ロ酢酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、
アスコルビン酸、安息香酸、タニン酸（ｔａｎｉｃ ａｃｉｄ）、パモ酸、アルギン酸、
ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン
酸などにより形成される塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウ
ム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどの多価金属カチオンにより
形成される；又はＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン又はエスレンジアミン（ｅｔｈ
ｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ）から形成された有機カチオンにより形成される塩基付加塩若し
くは錯体；又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組み合わせ、例えば、亜鉛のタンニン酸塩などで
ある。
本発明の医薬組成物は、皮下、経皮、経口、非経口、吸入、眼、局所、直腸、鼻腔内、
頬側（舌下含む）、膣内、又は埋め込み式リザーバー方式により投与できる。本発明の医
薬組成物は、従来の、非毒性で薬学的に許容できる担体、アジュバント、又はビヒクルを
含み得る。本明細書での用語非経口は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液
嚢内、胸骨内、髄腔内、病変内、及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。
頬側（舌下含む）、膣内、又は埋め込み式リザーバー方式により投与できる。本発明の医
薬組成物は、従来の、非毒性で薬学的に許容できる担体、アジュバント、又はビヒクルを
含み得る。本明細書での用語非経口は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液
嚢内、胸骨内、髄腔内、病変内、及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。
いくつかの実施形態において、薬学的に許容できる非毒性の成分との混合物中に有効成
分として本明細書に記載される治療化合物又はその薬学的に許容できる塩を含む医薬組成
物も企図される。上述の通り、そのような組成物は、非経口投与用に、特に、液体溶液又
は懸濁液の形態で；経口又は頬側投与用に、特に錠剤又はカプセルの形態で；鼻腔内投与
用に、特に、散剤、点鼻剤、蒸発する溶液、又はエアロゾルの形態で；吸入用に、特に、
液体溶液又は広く定義された賦形剤を含む乾燥粉末の形態で；経皮投与用に、特に皮膚パ
ッチ又はマイクロニードルパッチの形態で；及び直腸又は膣内投与用に、特に坐剤の形態
で調製することができる。
分として本明細書に記載される治療化合物又はその薬学的に許容できる塩を含む医薬組成
物も企図される。上述の通り、そのような組成物は、非経口投与用に、特に、液体溶液又
は懸濁液の形態で；経口又は頬側投与用に、特に錠剤又はカプセルの形態で；鼻腔内投与
用に、特に、散剤、点鼻剤、蒸発する溶液、又はエアロゾルの形態で；吸入用に、特に、
液体溶液又は広く定義された賦形剤を含む乾燥粉末の形態で；経皮投与用に、特に皮膚パ
ッチ又はマイクロニードルパッチの形態で；及び直腸又は膣内投与用に、特に坐剤の形態
で調製することができる。
組成物は、簡便には単位剤形で投与でき、例えば、引用により本明細書にその全体とし
て組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ
Ａ（１９８５）に記載の通り、医薬分野に周知である方法のいずれによっても調製できる
。非経口投与用の製剤は、賦形剤として、滅菌水又はプロピレングリコールなどの含塩ア
ルキレングリコール、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、糖類、
植物由来の油、水素化ナプタレン（ｎａｐｔｈａｌｅｎｅｓ）、血清アルブミン、又は他
のナノ粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（商標）に使用されるとおり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｉｎｃ．Ｓｃｈａｕｍｂｕｒｇ，ＩＬ）な
どを含んでよい。経口投与には、製剤は、胆汁酸塩又はアシルカルニチンの添加により強
化され得る。鼻腔内投与用の製剤は、固体でも、ハイドロフルオロカーボンなどの蒸発す
る溶媒中の溶液でもよく、安定化のための賦形剤、例えば、糖類、界面活性剤、サブミク
ロン無水アルファ−ラクトース又はデキストランを含んでよく、点鼻剤又は定量スプレー
の形態で使用するための水性又は油性の溶液でもよい。頬側投与には、典型的な賦形剤に
は、糖類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、アルファ化デンプンな
どがある。
て組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ
Ａ（１９８５）に記載の通り、医薬分野に周知である方法のいずれによっても調製できる
。非経口投与用の製剤は、賦形剤として、滅菌水又はプロピレングリコールなどの含塩ア
ルキレングリコール、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、糖類、
植物由来の油、水素化ナプタレン（ｎａｐｔｈａｌｅｎｅｓ）、血清アルブミン、又は他
のナノ粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（商標）に使用されるとおり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｉｎｃ．Ｓｃｈａｕｍｂｕｒｇ，ＩＬ）な
どを含んでよい。経口投与には、製剤は、胆汁酸塩又はアシルカルニチンの添加により強
化され得る。鼻腔内投与用の製剤は、固体でも、ハイドロフルオロカーボンなどの蒸発す
る溶媒中の溶液でもよく、安定化のための賦形剤、例えば、糖類、界面活性剤、サブミク
ロン無水アルファ−ラクトース又はデキストランを含んでよく、点鼻剤又は定量スプレー
の形態で使用するための水性又は油性の溶液でもよい。頬側投与には、典型的な賦形剤に
は、糖類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、アルファ化デンプンな
どがある。
本明細書に記載される修飾された治療化合物の、長時間にわたる、例えば１週間から１
年にわたる対象への送達は、所望の放出期間のために充分な有効成分を含む制御放出系の
単一投与により達成され得る。モノリシック又はリザーバータイプのマイクロカプセル、
デポインプラント（ｄｅｐｏｔ ｉｍｐｌａｎｔｓ）、ポリマー性ヒドロゲル、浸透圧ポ
ンプ、ベシクル、ミセル、リポソーム、経皮パッチ、イオン導入装置、及び別な注射可能
な剤形などの種々の制御放出系を、この目的に利用できる。有効成分の送達が望まれる部
位での局在化は、いくつかの制御放出装置の追加の特徴であり、特定の疾患の治療におい
て有益であると証明され得る。
年にわたる対象への送達は、所望の放出期間のために充分な有効成分を含む制御放出系の
単一投与により達成され得る。モノリシック又はリザーバータイプのマイクロカプセル、
デポインプラント（ｄｅｐｏｔ ｉｍｐｌａｎｔｓ）、ポリマー性ヒドロゲル、浸透圧ポ
ンプ、ベシクル、ミセル、リポソーム、経皮パッチ、イオン導入装置、及び別な注射可能
な剤形などの種々の制御放出系を、この目的に利用できる。有効成分の送達が望まれる部
位での局在化は、いくつかの制御放出装置の追加の特徴であり、特定の疾患の治療におい
て有益であると証明され得る。
経皮投与用の特定の実施形態において、皮膚のバリアを越えた送達が、電極（例えば、
イオン導入）、電気穿孔、又は短い高電圧の電気パルスの皮膚への印加、無線周波数、超
音波（例えば、超音波導入）、マイクロプロジェクション（例えば、マイクロニードル）
、ジェットインジェクター、熱アブレーション、磁気泳動、レーザー、速度、又はフォト
メカニカル波を利用すると増強され得る。薬物は、単層薬物含有粘着剤、複層薬物含有粘
着剤、リザーバー、マトリックス、又は蒸気型パッチ（ｖａｐｏｒ ｓｔｙｌｅ ｐａｔ
ｃｈｅｓ）に含まれてよく、パッチレス技術（ｐａｔｃｈｌｅｓｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ）を利用できる。皮膚のバリアを越えた送達は、カプセル化、皮脂流動化剤（ｓｋｉｎ
ｌｉｐｉｄ ｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）、又は中空型若しくは中実型ミクロ構造経皮システ
ム（ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｓｙｓｔｅｍ）（ＭＴ
Ｓ、３Ｍにより製造されるものなど）、ジェットインジェクターを利用しても増強できる
。治療化合物が皮膚を通るのを助けるための製剤への添加剤には、プロドラッグ、化学物
質、界面活性剤、細胞透過性ペプチド、透過促進剤、カプセル化技術、酵素、酵素阻害剤
、ゲル、ナノ粒子、及びペプチド又はタンパク質シャペロンがある。
イオン導入）、電気穿孔、又は短い高電圧の電気パルスの皮膚への印加、無線周波数、超
音波（例えば、超音波導入）、マイクロプロジェクション（例えば、マイクロニードル）
、ジェットインジェクター、熱アブレーション、磁気泳動、レーザー、速度、又はフォト
メカニカル波を利用すると増強され得る。薬物は、単層薬物含有粘着剤、複層薬物含有粘
着剤、リザーバー、マトリックス、又は蒸気型パッチ（ｖａｐｏｒ ｓｔｙｌｅ ｐａｔ
ｃｈｅｓ）に含まれてよく、パッチレス技術（ｐａｔｃｈｌｅｓｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ）を利用できる。皮膚のバリアを越えた送達は、カプセル化、皮脂流動化剤（ｓｋｉｎ
ｌｉｐｉｄ ｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）、又は中空型若しくは中実型ミクロ構造経皮システ
ム（ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｓｙｓｔｅｍ）（ＭＴ
Ｓ、３Ｍにより製造されるものなど）、ジェットインジェクターを利用しても増強できる
。治療化合物が皮膚を通るのを助けるための製剤への添加剤には、プロドラッグ、化学物
質、界面活性剤、細胞透過性ペプチド、透過促進剤、カプセル化技術、酵素、酵素阻害剤
、ゲル、ナノ粒子、及びペプチド又はタンパク質シャペロンがある。
制御放出製剤の一形態は、引用により本明細書に組み込まれるＫｅｎｔ ｅｔ ａｌ．
，米国特許第４，６７５，１８９号明細書の先駆的な研究に記載されている、コポリ（乳
酸／グリコール酸）などのゆっくりと分解する非毒性で非抗原性ポリマーに分散されてい
るか又はカプセル化されている治療化合物又はその塩を含む。化合物又はその塩は、コレ
ステロール若しくは他の脂質マトリックスペレット、又はシラストマーマトリックスイン
プラント中に製剤されていてもよい。追加の徐放性デポインプラント又は注射用製剤は、
当業者には明らかだろう。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＪＲ Ｒｏｂｉｎｓ
ｏｎ ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８；
及びＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ Ａｃｔ
ｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ，ＲＷ Ｂａｋｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，１９８７を参照されたい。上記は引用によりその全体として組み込まれる。
，米国特許第４，６７５，１８９号明細書の先駆的な研究に記載されている、コポリ（乳
酸／グリコール酸）などのゆっくりと分解する非毒性で非抗原性ポリマーに分散されてい
るか又はカプセル化されている治療化合物又はその塩を含む。化合物又はその塩は、コレ
ステロール若しくは他の脂質マトリックスペレット、又はシラストマーマトリックスイン
プラント中に製剤されていてもよい。追加の徐放性デポインプラント又は注射用製剤は、
当業者には明らかだろう。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＪＲ Ｒｏｂｉｎｓ
ｏｎ ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８；
及びＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ Ａｃｔ
ｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ，ＲＷ Ｂａｋｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，１９８７を参照されたい。上記は引用によりその全体として組み込まれる。
追加の形態の制御放出製剤は、生体許容性（ｂｉｏａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）溶媒中のコ
ポリ（乳酸／グリコール酸）又は乳酸とＰＥＧのブロックコポリマーなどの生分解性ポリ
マーの溶液を含み、それが皮下又は筋肉内に注射されて、デポ製剤が得られる。本明細書
に記載される治療化合物をそのようなポリマー性製剤と混合すると、作用持続時間が非常
に長い製剤を得るのに好適である。
ポリ（乳酸／グリコール酸）又は乳酸とＰＥＧのブロックコポリマーなどの生分解性ポリ
マーの溶液を含み、それが皮下又は筋肉内に注射されて、デポ製剤が得られる。本明細書
に記載される治療化合物をそのようなポリマー性製剤と混合すると、作用持続時間が非常
に長い製剤を得るのに好適である。
鼻腔内投与用に製剤される場合、鼻腔内粘膜を越える吸収は、例えばグリココール酸、
コール酸、タウロコール酸、エトコール酸（ｅｔｈｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、デオキ
シコール酸、ケノデオキシコール酸、デフドロコール酸（ｄｅｈｄｒｙｏｃｈｏｌｉｃ
ａｃｉｄ）、グリコデオキシコール酸、シクレデキストリン（ｃｙｃｌｅｄｅｘｔｒｉｎ
ｓ）などの界面活性剤を、約０．１から１５重量パーセント、約０．５から４重量パーセ
ント、又は約２重量パーセントの量で使用してさらに増強され得る。刺激が少なくより高
い有効性を示すことが報告されている追加のクラスの吸収促進剤は、テトラデシルマルト
シドなどのアルキルマルトシドのクラスである（全て引用により本明細書に組み込まれて
いるＡｒｎｏｌｄ，ＪＪ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９３：２
２０５−１３；Ａｈｓａｎ，Ｆ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １８：
１７４２−４６及びそこに引用されている引用文献）。
コール酸、タウロコール酸、エトコール酸（ｅｔｈｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、デオキ
シコール酸、ケノデオキシコール酸、デフドロコール酸（ｄｅｈｄｒｙｏｃｈｏｌｉｃ
ａｃｉｄ）、グリコデオキシコール酸、シクレデキストリン（ｃｙｃｌｅｄｅｘｔｒｉｎ
ｓ）などの界面活性剤を、約０．１から１５重量パーセント、約０．５から４重量パーセ
ント、又は約２重量パーセントの量で使用してさらに増強され得る。刺激が少なくより高
い有効性を示すことが報告されている追加のクラスの吸収促進剤は、テトラデシルマルト
シドなどのアルキルマルトシドのクラスである（全て引用により本明細書に組み込まれて
いるＡｒｎｏｌｄ，ＪＪ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ９３：２
２０５−１３；Ａｈｓａｎ，Ｆ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １８：
１７４２−４６及びそこに引用されている引用文献）。
医薬組成物は、例えば、滅菌注射用の水性又は油性懸濁剤としての滅菌注射用調合物の
形態でよい。この懸濁剤は、好適な分散剤又は湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）及
び懸濁化剤を使用して、当技術分野に公知である技術に従って製剤され得る。滅菌注射用
調合物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容でき
る希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用液剤又は懸濁剤でもよい。利用され得る許容できるビヒ
クル及び溶媒の中に、マンニトール、水、リンゲル液、及び等張性塩化ナトリウム溶液が
ある。さらに、滅菌の不揮発油は、従来、溶媒又は懸濁媒体として使用されている。この
目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の低刺激性不揮発油も利
用できる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、特にポリオキシエチル
化バージョンにおけるオリーブ油又はヒマシ油など、天然の薬学的に許容できる油である
ので、注射剤の調製に有用である。これらの油液剤又は懸濁剤は、スイス薬局方又は類似
のアルコールなどの長鎖アルコール希釈剤又は分散剤も含み得る。
形態でよい。この懸濁剤は、好適な分散剤又は湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）及
び懸濁化剤を使用して、当技術分野に公知である技術に従って製剤され得る。滅菌注射用
調合物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容でき
る希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用液剤又は懸濁剤でもよい。利用され得る許容できるビヒ
クル及び溶媒の中に、マンニトール、水、リンゲル液、及び等張性塩化ナトリウム溶液が
ある。さらに、滅菌の不揮発油は、従来、溶媒又は懸濁媒体として使用されている。この
目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の低刺激性不揮発油も利
用できる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、特にポリオキシエチル
化バージョンにおけるオリーブ油又はヒマシ油など、天然の薬学的に許容できる油である
ので、注射剤の調製に有用である。これらの油液剤又は懸濁剤は、スイス薬局方又は類似
のアルコールなどの長鎖アルコール希釈剤又は分散剤も含み得る。
本発明の医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、並びに水性懸濁剤及び液剤を含むがこれら
に限定されない経口的に許容できる任意の剤形で経口投与できる。経口使用のための錠剤
の場合、通常使用される担体には、ラクトース及びコーンスターチがある。ステアリン酸
マグネシウムなどの潤滑剤も典型的には加えられる。カプセル形態での経口投与のために
は、有用な希釈剤には、ラクトース及び乾燥コーンスターチがある。水性懸濁剤が経口投
与される場合、有効成分は、乳化剤及び懸濁化剤と組み合わされる。所望の場合、特定の
甘味剤及び／又は着香剤及び／又は着色剤を加えてよい。
に限定されない経口的に許容できる任意の剤形で経口投与できる。経口使用のための錠剤
の場合、通常使用される担体には、ラクトース及びコーンスターチがある。ステアリン酸
マグネシウムなどの潤滑剤も典型的には加えられる。カプセル形態での経口投与のために
は、有用な希釈剤には、ラクトース及び乾燥コーンスターチがある。水性懸濁剤が経口投
与される場合、有効成分は、乳化剤及び懸濁化剤と組み合わされる。所望の場合、特定の
甘味剤及び／又は着香剤及び／又は着色剤を加えてよい。
本発明の医薬組成物は、直腸投与用の坐剤の形態でも投与できる。これらの組成物は、
本発明の化合物を、室温で固体であるが直腸の温度で液体であり、したがって直腸で融け
て活性成分を放出する好適な非刺激性の賦形剤と混合して調製できる。そのような材料に
は、ココアバター、蜜蝋、及びポリエチレングリコールがあるが、これらに限定されない
。
本発明の化合物を、室温で固体であるが直腸の温度で液体であり、したがって直腸で融け
て活性成分を放出する好適な非刺激性の賦形剤と混合して調製できる。そのような材料に
は、ココアバター、蜜蝋、及びポリエチレングリコールがあるが、これらに限定されない
。
本発明の医薬組成物の局所投与は、所望の治療が、局所適用により容易にアクセスでき
る部分又は臓器を含む場合に特に有用である。皮膚に局所的に適用するために、医薬組成
物は、担体に懸濁又は溶解している活性成分を含む好適な軟膏により製剤されなくてはな
らない。本発明の化合物の局所投与用の担体には、鉱油、液化石油（ｌｉｑｕｉｄ ｐｅ
ｔｒｏｌｅｕｍ）、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキ
シプロピレン化合物、乳化蝋、及び水があるが、これらに限定されない。或いは、医薬組
成物は、担体に懸濁又は溶解している活性化合物を含む好適なローション又はクリームに
より製剤できる。好適な担体には、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート
６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベ
ンジルアルコール、及び水があるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物は、直
腸坐剤製剤により、又は好適な浣腸製剤で、下部消化管に局所適用することもできる。局
所経皮パッチも本発明に含まれる。
る部分又は臓器を含む場合に特に有用である。皮膚に局所的に適用するために、医薬組成
物は、担体に懸濁又は溶解している活性成分を含む好適な軟膏により製剤されなくてはな
らない。本発明の化合物の局所投与用の担体には、鉱油、液化石油（ｌｉｑｕｉｄ ｐｅ
ｔｒｏｌｅｕｍ）、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキ
シプロピレン化合物、乳化蝋、及び水があるが、これらに限定されない。或いは、医薬組
成物は、担体に懸濁又は溶解している活性化合物を含む好適なローション又はクリームに
より製剤できる。好適な担体には、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート
６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベ
ンジルアルコール、及び水があるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物は、直
腸坐剤製剤により、又は好適な浣腸製剤で、下部消化管に局所適用することもできる。局
所経皮パッチも本発明に含まれる。
本発明の医薬組成物は、鼻腔内エアゾールによっても、吸入よっても投与できる。その
ような組成物は、医薬製剤の分野に周知である技法により調製され、ベンジルアルコール
又は他の好適な保存剤、バイオアベイラビリティを高める吸収促進剤、フルオロカーボン
、及び／又は当技術分野に公知である他の可溶化剤若しくは分散剤を使用して、食塩水中
の液剤として調製できる。
ような組成物は、医薬製剤の分野に周知である技法により調製され、ベンジルアルコール
又は他の好適な保存剤、バイオアベイラビリティを高める吸収促進剤、フルオロカーボン
、及び／又は当技術分野に公知である他の可溶化剤若しくは分散剤を使用して、食塩水中
の液剤として調製できる。
吸入による送達のために製剤化される場合、いくつかの製剤が、利点をもたらす。ジケ
トピペラジン（例えば、Ｔｅｃｈｎｏｓｐｈｅｒｅ粒子（Ｐｆｕｔｚｎｅｒ，Ａ ａｎｄ
Ｆｏｒｓｔ，Ｔ、２００５、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ ２：１
０９７−１１０６）などの容易に分散する固体、または類似の構造に対する治療用化合物
の吸着は、治療用化合物の迅速な初期取り込みをもたらす製剤を与える。治療用化合物と
賦形剤とを含有する凍結乾燥粉末、特にガラス状粒子は、良好なバイオアベイラビリティ
を伴う肺への送達に有用であり、例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）（吸入型インスリ
ン、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．およびＡｖｅｎｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
Ｉｎｃ．）およびＡｆｒｅｚｚａ（登録商標）（吸入型インスリン、Ｍａｎｎｋｉｎｄ，
Ｃｏｒｐ．）を参照されたい。
トピペラジン（例えば、Ｔｅｃｈｎｏｓｐｈｅｒｅ粒子（Ｐｆｕｔｚｎｅｒ，Ａ ａｎｄ
Ｆｏｒｓｔ，Ｔ、２００５、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ ２：１
０９７−１１０６）などの容易に分散する固体、または類似の構造に対する治療用化合物
の吸着は、治療用化合物の迅速な初期取り込みをもたらす製剤を与える。治療用化合物と
賦形剤とを含有する凍結乾燥粉末、特にガラス状粒子は、良好なバイオアベイラビリティ
を伴う肺への送達に有用であり、例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）（吸入型インスリ
ン、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．およびＡｖｅｎｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
Ｉｎｃ．）およびＡｆｒｅｚｚａ（登録商標）（吸入型インスリン、Ｍａｎｎｋｉｎｄ，
Ｃｏｒｐ．）を参照されたい。
１日あたり約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１日あたり０．５
１から約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）の活性成分化合物の投薬レベルが、疾患の予防および治
療に有用である。こうした投与は、慢性または急性的治療法として使用することができる
。担体と組み合わせて単一の剤形を製造することができる薬物の量は、治療される宿主、
および個々の投与様式に応じて変動することとなる。典型的な調製物は、約５％から約９
５％の活性な化合物（ｗ／ｗ）を含有することとなる。好ましくは、こうした調製物は、
約２０％から約８０％の活性な化合物を含有する。
１から約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）の活性成分化合物の投薬レベルが、疾患の予防および治
療に有用である。こうした投与は、慢性または急性的治療法として使用することができる
。担体と組み合わせて単一の剤形を製造することができる薬物の量は、治療される宿主、
および個々の投与様式に応じて変動することとなる。典型的な調製物は、約５％から約９
５％の活性な化合物（ｗ／ｗ）を含有することとなる。好ましくは、こうした調製物は、
約２０％から約８０％の活性な化合物を含有する。
患者の状態が改善されると、本発明の化合物、組成物、又は組み合わせの維持量が、必
要な場合投与され得る。その後、投与の用量若しくは頻度、又はその両方を、症状に応じ
て、改善された状態が保持されるレベルに低減することができ、症状が望ましいレベルに
緩和した時、治療をやめなければならない。しかし、患者は、疾病の症状の再発時に、長
期間の間欠的な治療を必要とすることがある。
要な場合投与され得る。その後、投与の用量若しくは頻度、又はその両方を、症状に応じ
て、改善された状態が保持されるレベルに低減することができ、症状が望ましいレベルに
緩和した時、治療をやめなければならない。しかし、患者は、疾病の症状の再発時に、長
期間の間欠的な治療を必要とすることがある。
当業者が認識する通り、先に列挙したものより低い投与量又は高い投与量も必要になり
得る。特定の患者のための具体的な用量及び治療レジメンは、種々の因子、例えば、利用
される具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与の時間
、排泄率、薬物の組み合わせ、感染の重症度及び経過、患者の感染に対する傾向、並びに
治療する医師の判断に依存するだろう。
得る。特定の患者のための具体的な用量及び治療レジメンは、種々の因子、例えば、利用
される具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与の時間
、排泄率、薬物の組み合わせ、感染の重症度及び経過、患者の感染に対する傾向、並びに
治療する医師の判断に依存するだろう。
本明細書に記載した担体−薬物コンジュゲートは、薬物製造者および患者に対して、非
修飾薬物に勝る利点を提供する。具体的には、担体−薬物コンジュゲートまたは製剤は、
より強力で、より長期間持続性であり、必要とされる投薬がより少なく、より低頻度であ
ろう。これは、結果として、患者にとっての健康管理費用の低下、かつ、より便利な薬物
投与スケジュールとなる。担体−薬物コンジュゲートはまた、静脈内注射の代替手段とし
ての投与の皮下または経皮経路を提供する。これらの経路は、患者が自己投与することが
できるので、患者のコンプライアンスを向上させることができる。
修飾薬物に勝る利点を提供する。具体的には、担体−薬物コンジュゲートまたは製剤は、
より強力で、より長期間持続性であり、必要とされる投薬がより少なく、より低頻度であ
ろう。これは、結果として、患者にとっての健康管理費用の低下、かつ、より便利な薬物
投与スケジュールとなる。担体−薬物コンジュゲートはまた、静脈内注射の代替手段とし
ての投与の皮下または経皮経路を提供する。これらの経路は、患者が自己投与することが
できるので、患者のコンプライアンスを向上させることができる。
本発明のさらに他の態様において、ＤＢＰのレベルは、担体−薬物療法の一部として増
加させることができる。エストロゲンがＤＢＰレベルを増加させ得ることが報告されてい
る（Ｓｐｅｅｃｋａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ
３７１：３３）。担体−薬物コンジュゲートのより効果的な送達のためのエストロゲン
の投与により、ＤＢＰのレベルが増加し得ることが、ここで企図される。
加させることができる。エストロゲンがＤＢＰレベルを増加させ得ることが報告されてい
る（Ｓｐｅｅｃｋａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ
３７１：３３）。担体−薬物コンジュゲートのより効果的な送達のためのエストロゲン
の投与により、ＤＢＰのレベルが増加し得ることが、ここで企図される。
本発明のさらに他の態様において、薬物を経皮送達するために担体が使用できることが
企図される。ＤＢＰは、通常、皮膚の表面近くの位置でＵＶにより活性化されたビタミン
Ｄを輸送するので、担体を持つ経皮送達系を使用することが実現可能になる。
企図される。ＤＢＰは、通常、皮膚の表面近くの位置でＵＶにより活性化されたビタミン
Ｄを輸送するので、担体を持つ経皮送達系を使用することが実現可能になる。
本明細書に記載される本発明がより完全に理解されるために、以下の実施例が述べられ
る。これらの実施例が説明目的のみのものであり、本発明をどのようにも限定すると解釈
されるものでないことを理解されたい。具体的には、本明細書に開示した組成物および方
法は、すべての非ホルモン型のビタミンＤ（そのホモログ、類似体、および代謝産物を含
めて）と共に機能する。これには、以下の実施例で使用されるビタミンＤが含まれる。
る。これらの実施例が説明目的のみのものであり、本発明をどのようにも限定すると解釈
されるものでないことを理解されたい。具体的には、本明細書に開示した組成物および方
法は、すべての非ホルモン型のビタミンＤ（そのホモログ、類似体、および代謝産物を含
めて）と共に機能する。これには、以下の実施例で使用されるビタミンＤが含まれる。
実施例１：治療用化合物をＣ２５位置で非ホルモンビタミンＤにカップリングさせるため
の例示的な担体の調製
ビタミンＤと２ｋＤａのＰＥＧスカフォールドとを含有する例示的な担体を調製した。
ある例示的な担体は、チオール反応性であり、かつ、Ｃ２５位置にマレイミド反応性の基
を有するビタミンＤ−ＰＥＧを含んでいた（ここではビタミンＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ
−マレイミドまたはＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミドと称する）。
の例示的な担体の調製
ビタミンＤと２ｋＤａのＰＥＧスカフォールドとを含有する例示的な担体を調製した。
ある例示的な担体は、チオール反応性であり、かつ、Ｃ２５位置にマレイミド反応性の基
を有するビタミンＤ−ＰＥＧを含んでいた（ここではビタミンＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ
−マレイミドまたはＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミドと称する）。
別の例示的な担体は、アミン反応性であり、かつ、ＮＨＳ反応性の基を有するビタミン
Ｄ−ＰＥＧを含んでいた。これらの試薬を、その内容全体が参照によって本明細書に組み
込まれる国際公開第２０１３１７２９６７号パンフレット（Ｓｏｌｉｍａｎ ｅｔ ａｌ
．）に記載されている通りに調製した。
Ｄ−ＰＥＧを含んでいた。これらの試薬を、その内容全体が参照によって本明細書に組み
込まれる国際公開第２０１３１７２９６７号パンフレット（Ｓｏｌｉｍａｎ ｅｔ ａｌ
．）に記載されている通りに調製した。
実施例２：治療用化合物をＣ３位置で非ホルモンビタミンＤにカップリングさせるための
例示的なアミノ末端反応性の担体の調製
ビタミンＤのＣ３位置に接続されたアルデヒド反応性の基と２ｋＤａのＰＥＧスカフォ
ールドとを含有する、例示的なアミノ末端反応性の担体（ここではビタミンＤ−（３）−
ＰＥＧ２ｋ−アルデヒドまたはＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミドと称する）を
調製した。この実施例における担体上のアルデヒドを使用して、以下の実施例に開示する
タンパク質およびペプチド上の遊離のアミノ末端にコンジュゲートした。この合成の概要
を、図１に表す。
例示的なアミノ末端反応性の担体の調製
ビタミンＤのＣ３位置に接続されたアルデヒド反応性の基と２ｋＤａのＰＥＧスカフォ
ールドとを含有する、例示的なアミノ末端反応性の担体（ここではビタミンＤ−（３）−
ＰＥＧ２ｋ−アルデヒドまたはＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミドと称する）を
調製した。この実施例における担体上のアルデヒドを使用して、以下の実施例に開示する
タンパク質およびペプチド上の遊離のアミノ末端にコンジュゲートした。この合成の概要
を、図１に表す。
簡単に言うと、（Ｓ，Ｚ）−３−（（Ｅ）−２−（（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）−１−（
（Ｒ）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン−２−イル）−７ａ−メチルヘキサヒドロ
−１Ｈ−インデン−４（２Ｈ）−イリデン）エチリデン）−４−メチレンシクロヘキサノ
ール（化合物Ｖａ、２０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１当量、Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入、カタログ番号Ｃ１２５７００、カルシフェジオ
ールおよび２５−ヒドロキシビタミンＤとしても知られている）を、無水ｔｅｒｔ−ブタ
ノールとアセトニトリル（１０：１、１ｍＬ）との混合物に溶解し、４℃に冷却した。こ
れにアクリロニトリル（２６．６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１０当量）、続いてＴｒｉｔｏ
ｎ Ｂ（４０％水溶液、１０μＬ）を添加した。混合物を４℃で２．５時間攪拌した。冷
却した２％ ＨＣｌ（１０ｍＬ）を用いて反応を停止し、水相をエーテル（２×１０ｍＬ
）で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、蒸発させて、未精製生成物を得た。この材料を、
溶離液として５〜２０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィー
（ＴＬＣ、シリカゲル、５０％酢酸エチル（ヘキサン中））によって精製して、所望の生
成物３−（（（Ｓ，Ｚ）−３−（（Ｅ）−２−（（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）−１−（（Ｒ
）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン−２−イル）−７ａ−メチルヘキサヒドロ−１
Ｈ−インデン−４（２Ｈ）−イリデン）エチリデン）−４−メチレンシクロヘキシル）オ
キシ）プロパンニトリル、化合物Ｖ（１５ｍｇ、６８％）を、白色固体として単離した（
Ｒｆ ０．２ シリカゲル、４０％ ＥｔＯＡｃ（ヘキサン中））。ＮＭＲ分析は、少し
の測定可能量の溶媒も示さなかった。
（Ｒ）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン−２−イル）−７ａ−メチルヘキサヒドロ
−１Ｈ−インデン−４（２Ｈ）−イリデン）エチリデン）−４−メチレンシクロヘキサノ
ール（化合物Ｖａ、２０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ、１当量、Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入、カタログ番号Ｃ１２５７００、カルシフェジオ
ールおよび２５−ヒドロキシビタミンＤとしても知られている）を、無水ｔｅｒｔ−ブタ
ノールとアセトニトリル（１０：１、１ｍＬ）との混合物に溶解し、４℃に冷却した。こ
れにアクリロニトリル（２６．６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１０当量）、続いてＴｒｉｔｏ
ｎ Ｂ（４０％水溶液、１０μＬ）を添加した。混合物を４℃で２．５時間攪拌した。冷
却した２％ ＨＣｌ（１０ｍＬ）を用いて反応を停止し、水相をエーテル（２×１０ｍＬ
）で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、蒸発させて、未精製生成物を得た。この材料を、
溶離液として５〜２０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィー
（ＴＬＣ、シリカゲル、５０％酢酸エチル（ヘキサン中））によって精製して、所望の生
成物３−（（（Ｓ，Ｚ）−３−（（Ｅ）−２−（（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）−１−（（Ｒ
）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン−２−イル）−７ａ−メチルヘキサヒドロ−１
Ｈ−インデン−４（２Ｈ）−イリデン）エチリデン）−４−メチレンシクロヘキシル）オ
キシ）プロパンニトリル、化合物Ｖ（１５ｍｇ、６８％）を、白色固体として単離した（
Ｒｆ ０．２ シリカゲル、４０％ ＥｔＯＡｃ（ヘキサン中））。ＮＭＲ分析は、少し
の測定可能量の溶媒も示さなかった。
塩化アルミニウム（６６ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）の無水エーテル（２ｍＬ）溶液に
、０℃でアルゴン下で、水素化アルミニウムリチウム（１Ｍ、エーテル中、１９ｍｇ、０
．５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。混合物を５分間攪拌し、これに化合物Ｖ
ｃ（１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）のエーテル（３ｍＬ）溶液を滴下し、反応混合物を
０℃で５分間、次いで室温で１時間攪拌した。反応は、ＭＳおよびＴＬＣ（シリカゲル、
１０％ ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３／０．１％ ＮＨ４ＯＨ）によってモニタリングした。反
応混合物に、酢酸エチル（１ｍＬ）と水（１ｍＬ）、それに続いて５％ ＮａＯＨ（５ｍ
Ｌ）を添加した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル（５ｍＬ）およびエーテル（５ｍＬ
）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）さ
せ、ロータリーエバポレーターで蒸発させて、所望のアミン、（Ｒ）−６−（（１Ｒ，３
ａＳ，７ａＲ，Ｅ）−４−（（Ｚ）−２−（（Ｓ）−５−（３−アミノプロポキシ）−２
−メチレンシクロヘキシリデン）エチリデン）−７ａ−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−イン
デン−１−イル）−２−メチルヘプタン−２−オール、化合物Ｖｄ（１２．５ｍｇ、８２
％）を、淡黄色のオイルとして与えた。Ｒｆ ０．２（シリカゲル、２０％ ＭｅＯＨ／
ＤＣＭ／０．２％ ＮＨ４ＯＨ）。ＮＭＲ分析は、約８％の酢酸エチルの存在を明らかに
した。
、０℃でアルゴン下で、水素化アルミニウムリチウム（１Ｍ、エーテル中、１９ｍｇ、０
．５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。混合物を５分間攪拌し、これに化合物Ｖ
ｃ（１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）のエーテル（３ｍＬ）溶液を滴下し、反応混合物を
０℃で５分間、次いで室温で１時間攪拌した。反応は、ＭＳおよびＴＬＣ（シリカゲル、
１０％ ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３／０．１％ ＮＨ４ＯＨ）によってモニタリングした。反
応混合物に、酢酸エチル（１ｍＬ）と水（１ｍＬ）、それに続いて５％ ＮａＯＨ（５ｍ
Ｌ）を添加した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル（５ｍＬ）およびエーテル（５ｍＬ
）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）さ
せ、ロータリーエバポレーターで蒸発させて、所望のアミン、（Ｒ）−６−（（１Ｒ，３
ａＳ，７ａＲ，Ｅ）−４−（（Ｚ）−２−（（Ｓ）−５−（３−アミノプロポキシ）−２
−メチレンシクロヘキシリデン）エチリデン）−７ａ−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−イン
デン−１−イル）−２−メチルヘプタン−２−オール、化合物Ｖｄ（１２．５ｍｇ、８２
％）を、淡黄色のオイルとして与えた。Ｒｆ ０．２（シリカゲル、２０％ ＭｅＯＨ／
ＤＣＭ／０．２％ ＮＨ４ＯＨ）。ＮＭＲ分析は、約８％の酢酸エチルの存在を明らかに
した。
化合物Ｖｄ（１２．５ｍｇ、０．０２７３ｍｍｏｌ、１当量）、化合物Ｖｅ（ヒドロキ
シルＰＥＧ ＮＨＳエステル、ＭＷ ２０００、ｎ≒４５（ここではｎはＣＨ２ＣＨ２Ｏ
繰り返し単位の数である）、Ｊｅｎｋｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＵＳＡ ＃Ａ−５０
７６、４３ｍｇ、０．０２１６ｍｍｏｌ、０．８当量）を、無水ジクロロメタン（０．１
ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１２ｍｇ、１６μｌ、０．１１ｍｍｏｌ、４当量
）を添加し、反応混合物を窒素下で室温で２０時間攪拌した。この試料を、窒素気流下で
乾燥させて、未精製の化合物Ｖｆを与え、これを、溶離液として５〜１０％ ＭｅＯＨ／
ジクロロメタンを使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成
物Ｖｆを、白色の泡（３０ｍｇ、３８％）として単離した。Ｒｆ ０．４（シリカゲル、
１０％メタノール（ジクロロメタン中））。単離された材料の１Ｈ ＮＭＲ分析によって
、その同一性および純度が確認された。
シルＰＥＧ ＮＨＳエステル、ＭＷ ２０００、ｎ≒４５（ここではｎはＣＨ２ＣＨ２Ｏ
繰り返し単位の数である）、Ｊｅｎｋｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＵＳＡ ＃Ａ−５０
７６、４３ｍｇ、０．０２１６ｍｍｏｌ、０．８当量）を、無水ジクロロメタン（０．１
ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１２ｍｇ、１６μｌ、０．１１ｍｍｏｌ、４当量
）を添加し、反応混合物を窒素下で室温で２０時間攪拌した。この試料を、窒素気流下で
乾燥させて、未精製の化合物Ｖｆを与え、これを、溶離液として５〜１０％ ＭｅＯＨ／
ジクロロメタンを使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成
物Ｖｆを、白色の泡（３０ｍｇ、３８％）として単離した。Ｒｆ ０．４（シリカゲル、
１０％メタノール（ジクロロメタン中））。単離された材料の１Ｈ ＮＭＲ分析によって
、その同一性および純度が確認された。
化合物Ｖｆ（３０ｍｇ、０．０１２３ｍｍｏｌ、１当量）と、過ルテニウム酸テトラプ
ロピルアンモニウム（１．０ｍｇ、０．００２８４、０．２３当量）と、Ｎ−メチルモル
ホリン−Ｎ−オキシド（４．３ｍｇ、０．０３６９ｍｍｏｌ、３当量）とを、２ｍＬの乾
燥ジクロロメタンに入れた溶液に、粉末状の４Å分子ふるい（５００ｍｇ）を添加し、反
応混合物をＮ２でフラッシュ蒸発させた。光を避けるために反応フラスコをアルミニウム
ホイルで覆い、これを室温で３６時間攪拌した。出発材料も生成物も、ＴＬＣ（シリカゲ
ル、１０％ ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）でのＲｆが同じであるので、生成物の形成は、
一定分量の１Ｈ ＮＭＲを検査することによって確認した。反応混合物を、ジクロロメタ
ン（１５ｍＬ）およびＮ２圧力を用いて、ピペット内で、セライトのパッドを通して濾過
した。合わせた有機物を、Ｎ２気流下で濃縮し、高真空で２時間乾燥させて、３５ｍｇ（
１００％）の未精製生成物ＴＬＣ（Ｒｆ：０．３、１０％ ＭｅＯＨ／ジクロロメタン、
ＰＭＡで染色）を得た。厳密に同じ条件下での反応の２回目の実施によって、新たな３５
ｍｇの生成物がもたらされた。どちらの回分からの生成物の１Ｈ ＮＭＲも、同じであっ
たので、これらを合わせて、７０ｍｇの化合物Ｖ、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−アル
デヒドを得た。
ロピルアンモニウム（１．０ｍｇ、０．００２８４、０．２３当量）と、Ｎ−メチルモル
ホリン−Ｎ−オキシド（４．３ｍｇ、０．０３６９ｍｍｏｌ、３当量）とを、２ｍＬの乾
燥ジクロロメタンに入れた溶液に、粉末状の４Å分子ふるい（５００ｍｇ）を添加し、反
応混合物をＮ２でフラッシュ蒸発させた。光を避けるために反応フラスコをアルミニウム
ホイルで覆い、これを室温で３６時間攪拌した。出発材料も生成物も、ＴＬＣ（シリカゲ
ル、１０％ ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）でのＲｆが同じであるので、生成物の形成は、
一定分量の１Ｈ ＮＭＲを検査することによって確認した。反応混合物を、ジクロロメタ
ン（１５ｍＬ）およびＮ２圧力を用いて、ピペット内で、セライトのパッドを通して濾過
した。合わせた有機物を、Ｎ２気流下で濃縮し、高真空で２時間乾燥させて、３５ｍｇ（
１００％）の未精製生成物ＴＬＣ（Ｒｆ：０．３、１０％ ＭｅＯＨ／ジクロロメタン、
ＰＭＡで染色）を得た。厳密に同じ条件下での反応の２回目の実施によって、新たな３５
ｍｇの生成物がもたらされた。どちらの回分からの生成物の１Ｈ ＮＭＲも、同じであっ
たので、これらを合わせて、７０ｍｇの化合物Ｖ、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−アル
デヒドを得た。
実施例３：治療用化合物をＣ３位置で非ホルモンビタミンＤにカップリングさせるための
例示的なチオール反応性担体の調製
ビタミンＤのＣ３位置に接続されたマレイミド反応性の基を有するビタミンＤを含む、
例示的なチオール反応性の担体（ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド）を調製し
た。この実施例における担体上のマレイミドを使用して、以下の実施例におけるタンパク
質およびペプチド上の遊離のチオールにコンジュゲートした。この合成の概要を、図２に
表す。
例示的なチオール反応性担体の調製
ビタミンＤのＣ３位置に接続されたマレイミド反応性の基を有するビタミンＤを含む、
例示的なチオール反応性の担体（ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド）を調製し
た。この実施例における担体上のマレイミドを使用して、以下の実施例におけるタンパク
質およびペプチド上の遊離のチオールにコンジュゲートした。この合成の概要を、図２に
表す。
簡単に言うと、実施例２と同様に調製した化合物Ｖｄ（２３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、
１当量）、化合物ＶＩａ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｐｅｇｗｏｒｋｓ ｃａｔ．＃ ＰＨＢ−
９５６、ＭＡＬ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ、２ｋ、ｎ≒４５（ここではｎはＣＨ２ＣＨ２Ｏ繰り
返し単位の数である）、７９ｍｇ、０．０３９５ｍｍｏｌ、０．８当量）、およびヨウ化
２−クロロ−１−メチルピリジニウム（３２ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、２．５当量）を
、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（２０．４ｍｇ、２８μ
ｌ、０．２ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、反応混合物を窒素下で室温で４時間攪拌した。
この反応混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、５％クエン酸水溶液（２０ｍＬ
）、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２０ｍＬ）、およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し
た。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３０℃で濃縮した。試料をシリ
カゲル（１０ｇ）フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを１〜１０％
ＭｅＯＨ／ジクロロメタンで溶離した。純粋な生成物を含有する分画を合わせ、温度を
３０℃に維持しながらロータリーエバポレーターで蒸発させた。この試料を、窒素気流下
で乾燥させて、化合物ＶＩ、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミドを、褐色のゴム
として与えた（５８ｍｇ、４８％）（Ｒｆ ０．２５、シリカゲル、１０％メタノール（
ジクロロメタン中））。単離された材料の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、その同一性および
純度が確認された。
１当量）、化合物ＶＩａ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｐｅｇｗｏｒｋｓ ｃａｔ．＃ ＰＨＢ−
９５６、ＭＡＬ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ、２ｋ、ｎ≒４５（ここではｎはＣＨ２ＣＨ２Ｏ繰り
返し単位の数である）、７９ｍｇ、０．０３９５ｍｍｏｌ、０．８当量）、およびヨウ化
２−クロロ−１−メチルピリジニウム（３２ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、２．５当量）を
、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（２０．４ｍｇ、２８μ
ｌ、０．２ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、反応混合物を窒素下で室温で４時間攪拌した。
この反応混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、５％クエン酸水溶液（２０ｍＬ
）、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２０ｍＬ）、およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し
た。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３０℃で濃縮した。試料をシリ
カゲル（１０ｇ）フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを１〜１０％
ＭｅＯＨ／ジクロロメタンで溶離した。純粋な生成物を含有する分画を合わせ、温度を
３０℃に維持しながらロータリーエバポレーターで蒸発させた。この試料を、窒素気流下
で乾燥させて、化合物ＶＩ、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミドを、褐色のゴム
として与えた（５８ｍｇ、４８％）（Ｒｆ ０．２５、シリカゲル、１０％メタノール（
ジクロロメタン中））。単離された材料の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、その同一性および
純度が確認された。
実施例４：治療用化合物をＣ３位置で非ホルモンビタミンＤにカップリングさせるための
例示的なアミン反応性の担体の調製
ビタミンＤのＣ３位置に接続されたＮＨＳ反応性の基を有するビタミンＤを含む、例示
的なアミン反応性の担体（ここではビタミンＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳまたは
ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳと称する）を調製した。この実施例における
担体上のＮＨＳを使用して、以下の実施例におけるタンパク質およびペプチド上の遊離の
チオールにコンジュゲートした。この合成の概要を、図３に表す。
例示的なアミン反応性の担体の調製
ビタミンＤのＣ３位置に接続されたＮＨＳ反応性の基を有するビタミンＤを含む、例示
的なアミン反応性の担体（ここではビタミンＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳまたは
ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳと称する）を調製した。この実施例における
担体上のＮＨＳを使用して、以下の実施例におけるタンパク質およびペプチド上の遊離の
チオールにコンジュゲートした。この合成の概要を、図３に表す。
簡単に言うと、化合物Ｖｄ（２０ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ、１当量）および化合物Ｖ
ＩＩａ（Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ ｃａｔ．＃ １０１４０、ｎ＝２５（ここ
ではｎはＣＨ２ＣＨ２Ｏ繰り返し単位の数である）、４４ｍｇ、０．０３４６ｍｍｏｌ、
０．８当量）を、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（２２．
０ｍｇ、３１μｌ、０．２２ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、反応混合物を窒素下で室温で
２４時間攪拌した。この反応混合物を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、５％クエ
ン酸水溶液（２０ｍＬ）、およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、無水硫酸
ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３０℃の温度を維持しながら濃縮した。試料をシリカゲ
ル（１０ｇ）フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを１〜１０％ Ｍ
ｅＯＨ／ジクロロメタンで溶離した。純粋な生成物を含有する分画を合わせ、温度を３０
℃未満に維持しながらロータリーエバポレーターで蒸発させた。この試料を、窒素気流下
で乾燥させて、化合物ＶＩＩｂを、褐色のゴムとして与えた（３３ｍｇ、５６％）（Ｒｆ
０．２０、シリカゲル、１０％メタノール（ジクロロメタン中））。単離された材料の
１Ｈ ＮＭＲ分析によって、その同一性が確認された。
ＩＩａ（Ｑｕａｎｔａ Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ ｃａｔ．＃ １０１４０、ｎ＝２５（ここ
ではｎはＣＨ２ＣＨ２Ｏ繰り返し単位の数である）、４４ｍｇ、０．０３４６ｍｍｏｌ、
０．８当量）を、無水ジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（２２．
０ｍｇ、３１μｌ、０．２２ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、反応混合物を窒素下で室温で
２４時間攪拌した。この反応混合物を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、５％クエ
ン酸水溶液（２０ｍＬ）、およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、無水硫酸
ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３０℃の温度を維持しながら濃縮した。試料をシリカゲ
ル（１０ｇ）フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。カラムを１〜１０％ Ｍ
ｅＯＨ／ジクロロメタンで溶離した。純粋な生成物を含有する分画を合わせ、温度を３０
℃未満に維持しながらロータリーエバポレーターで蒸発させた。この試料を、窒素気流下
で乾燥させて、化合物ＶＩＩｂを、褐色のゴムとして与えた（３３ｍｇ、５６％）（Ｒｆ
０．２０、シリカゲル、１０％メタノール（ジクロロメタン中））。単離された材料の
１Ｈ ＮＭＲ分析によって、その同一性が確認された。
化合物ＶＩＩｂ（３１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１当量）と、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド（６．３ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、３当量）と、ＥＤＣＩ（８．６ｍｇ、０．
０４５ｍｍｏｌ、２．５当量）とを、無水ＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミ
ン（７．４ｍｇ、１０μＬ、０．０７３ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、反応混合物を窒素
下で室温で２４時間攪拌した。この反応混合物を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し
、５％クエン酸水溶液（２０ｍＬ）、およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を
、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３０℃の温度を維持しながら濃縮した。この
試料を、窒素気流下で乾燥させて、化合物ＶＩＩ、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨ
Ｓを、褐色のゴムとして与えた（３８．６ｍｇ、＞１００％）（Ｒｆ ０．２５、シリカ
ゲル、１０％メタノール（ジクロロメタン中））。単離された材料の１Ｈ ＮＭＲ分析に
よって、その同一性および純度が確認された。
ンイミド（６．３ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、３当量）と、ＥＤＣＩ（８．６ｍｇ、０．
０４５ｍｍｏｌ、２．５当量）とを、無水ＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミ
ン（７．４ｍｇ、１０μＬ、０．０７３ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、反応混合物を窒素
下で室温で２４時間攪拌した。この反応混合物を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し
、５％クエン酸水溶液（２０ｍＬ）、およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を
、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３０℃の温度を維持しながら濃縮した。この
試料を、窒素気流下で乾燥させて、化合物ＶＩＩ、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨ
Ｓを、褐色のゴムとして与えた（３８．６ｍｇ、＞１００％）（Ｒｆ ０．２５、シリカ
ゲル、１０％メタノール（ジクロロメタン中））。単離された材料の１Ｈ ＮＭＲ分析に
よって、その同一性および純度が確認された。
実施例５：非ホルモン性ビタミンＤにコンジュゲートされたアペリンの調製および特徴付
け
この実施例では、アペリンに対して実施例１で作製したＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２
Ｋ−マレイミド担体と実施例２で作製したＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒドに
コンジュゲートされたアペリンは、アペリンに、有意に長い半減期を付与した。得られた
コンジュゲートされた分子は、心疾患、肺高血圧症（例えば肺動脈性肺高血圧症または肺
静脈性肺高血圧症）、他の心血管疾患、または糖尿病の治療に有用な治療薬であり得る。
け
この実施例では、アペリンに対して実施例１で作製したＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２
Ｋ−マレイミド担体と実施例２で作製したＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒドに
コンジュゲートされたアペリンは、アペリンに、有意に長い半減期を付与した。得られた
コンジュゲートされた分子は、心疾患、肺高血圧症（例えば肺動脈性肺高血圧症または肺
静脈性肺高血圧症）、他の心血管疾患、または糖尿病の治療に有用な治療薬であり得る。
ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−アペリンの合成
Ｎ−末端システイン残基を有するアペリン−１３誘導体（Ｃ−アペリン）は、Ｂｉｏｐ
ｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１６）によって合成された。担
体とのコンジュゲーションは、５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解したチオール反応性部分［
実施例１のＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド］を、５ｍｇ／ｍＬの濃度（１
ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中）の遊離のシステインを含有するアペリンペプチド
と、担体対ペプチドのモル比１．４：１で混合することによって実現した。反応は、室温
で１時間、進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２
Ｋ−アペリンを、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から分離した。コ
ンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュ
ゲートの緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフ
ィルターを使用して濾過滅菌した。
Ｎ−末端システイン残基を有するアペリン−１３誘導体（Ｃ−アペリン）は、Ｂｉｏｐ
ｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１６）によって合成された。担
体とのコンジュゲーションは、５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解したチオール反応性部分［
実施例１のＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド］を、５ｍｇ／ｍＬの濃度（１
ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中）の遊離のシステインを含有するアペリンペプチド
と、担体対ペプチドのモル比１．４：１で混合することによって実現した。反応は、室温
で１時間、進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２
Ｋ−アペリンを、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から分離した。コ
ンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュ
ゲートの緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフ
ィルターを使用して濾過滅菌した。
ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンの合成：
アペリン−１３ペプチドは、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ、Ｃａｔ．ＮＯ．
Ｈ−４５６６）から購入した。担体上のアルデヒドとペプチド上のアミン部分とのコンジ
ュゲーションは、ペプチドのＮ−末端アミンとの反応に好都合であるように、低いｐＨで
実施した。５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解させたアミン反応性の担体［実施例２のビタミ
ンＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒド］を、５ｍｇ／ｍＬの濃度（ｄＨ２Ｏ中）の遊離
のシステインを含有するアペリンペプチドと、担体対ペプチドのモル比３：１で混合した
（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝５）および２５ｍＭ ＮａＣＮＢＨ３の最終濃度）。反
応は、４℃で一晩、進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（３）−Ｐ
ＥＧ２Ｋ−アペリンを、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から分離し
た。コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
アペリン−１３ペプチドは、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ、Ｃａｔ．ＮＯ．
Ｈ−４５６６）から購入した。担体上のアルデヒドとペプチド上のアミン部分とのコンジ
ュゲーションは、ペプチドのＮ−末端アミンとの反応に好都合であるように、低いｐＨで
実施した。５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解させたアミン反応性の担体［実施例２のビタミ
ンＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒド］を、５ｍｇ／ｍＬの濃度（ｄＨ２Ｏ中）の遊離
のシステインを含有するアペリンペプチドと、担体対ペプチドのモル比３：１で混合した
（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝５）および２５ｍＭ ＮａＣＮＢＨ３の最終濃度）。反
応は、４℃で一晩、進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（３）−Ｐ
ＥＧ２Ｋ−アペリンを、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から分離し
た。コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
細胞に基づくＡＰＪ受容体アッセイにおけるアペリン構築物の活性：
非修飾アペリン−１３、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−アペリン、およびＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンは、生理活性の決定のために、Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ
，Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）に提出した。Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ社のアペリン機能
分析は、アペリンに対する受容体、ＡＰＪを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｍｕｌｔｉｓ
ｐａｎカタログ＃：Ｃ１１９６）を使用する。この分析は、フォルスコリン刺激性のｃＡ
ＭＰ産生のアペリン阻害を測定する。アペリンと２種の修飾されたペプチドとの機能活性
比較を、図４に示す。ＥＣ５０値を決定するために、４パラメータロジスティック関数を
用いて曲線を適合させた。アペリンについてのＥＣ５０値は、およそ６ｎＭであり、修飾
されたアペリン誘導体は、３〜４倍高く、これは、この実験に関する観察される誤差の範
囲内であった。したがって、非修飾アペリンと修飾されたアペリンは、実質的に同じ活性
を有する。
非修飾アペリン−１３、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−アペリン、およびＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンは、生理活性の決定のために、Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ
，Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）に提出した。Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ社のアペリン機能
分析は、アペリンに対する受容体、ＡＰＪを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｍｕｌｔｉｓ
ｐａｎカタログ＃：Ｃ１１９６）を使用する。この分析は、フォルスコリン刺激性のｃＡ
ＭＰ産生のアペリン阻害を測定する。アペリンと２種の修飾されたペプチドとの機能活性
比較を、図４に示す。ＥＣ５０値を決定するために、４パラメータロジスティック関数を
用いて曲線を適合させた。アペリンについてのＥＣ５０値は、およそ６ｎＭであり、修飾
されたアペリン誘導体は、３〜４倍高く、これは、この実験に関する観察される誤差の範
囲内であった。したがって、非修飾アペリンと修飾されたアペリンは、実質的に同じ活性
を有する。
アペリンおよびアペリンコンジュゲートの薬物動態特性：
４グループの４種のラットそれぞれに、アペリン−１３、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ
２Ｋ−Ｃ−アペリン、またはビタミンＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンを、０．１ｍｇ
／ｋｇで静脈内注射した。５分、および０．５、１、２、４、８、および２４時間の時点
で、血漿試料を採取し、定量ＥＬＩＳＡ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＥＫ−０５７−２３）によって、ア
ペリンの存在について分析した。アペリンコンジュゲートは、非修飾アペリンと比較した
場合に劇的に向上した薬物動態プロファイルを示した（図５）。非修飾アペリンは、注射
から５分以内にバックグラウンドレベル近くまで低下した。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ
２Ｋ−Ｃ−アペリンは、非修飾アペリンと比較した場合に向上した薬物動態特性を示した
。しかし、驚いたことに、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンは、ＶｉｔＤ−（２
５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−アペリンを含めた他のアペリン分子と比較した場合に著しく向上
した薬物動態特性を示した。これは、ビタミンＤのＣ３位置に対する担体のコンジュゲー
ションが、Ｃ２５位置でのコンジュゲーションに対するさらなる向上を提供することを実
証する。
４グループの４種のラットそれぞれに、アペリン−１３、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ
２Ｋ−Ｃ−アペリン、またはビタミンＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンを、０．１ｍｇ
／ｋｇで静脈内注射した。５分、および０．５、１、２、４、８、および２４時間の時点
で、血漿試料を採取し、定量ＥＬＩＳＡ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＥＫ−０５７−２３）によって、ア
ペリンの存在について分析した。アペリンコンジュゲートは、非修飾アペリンと比較した
場合に劇的に向上した薬物動態プロファイルを示した（図５）。非修飾アペリンは、注射
から５分以内にバックグラウンドレベル近くまで低下した。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ
２Ｋ−Ｃ−アペリンは、非修飾アペリンと比較した場合に向上した薬物動態特性を示した
。しかし、驚いたことに、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンは、ＶｉｔＤ−（２
５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−アペリンを含めた他のアペリン分子と比較した場合に著しく向上
した薬物動態特性を示した。これは、ビタミンＤのＣ３位置に対する担体のコンジュゲー
ションが、Ｃ２５位置でのコンジュゲーションに対するさらなる向上を提供することを実
証する。
担体−コンジュゲートの崩壊速度は、複雑であり、おそらく、より遅い腎クリアランス
と、プロテアーゼ分解からの防御との組み合わせに相当する。次いで、ＷｉｎＮｏｎＬｉ
ｎ（ＰｈａｒＳｉｇｈｔ）およびＧｒａｐｈＰａｄ（Ｐｒｉｓｍ）を使用して、データの
薬物動態分析を実施した。重要なことに、本来のアペリン−１３ペプチドのＡＵＣは、０
．４ｎｇ＊時間／ｍＬであり、ビタミンＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンは、８５ｎ
ｇ＊時間／ｍＬであり、ビタミンＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋは、３２８ｎｇ＊時間／ｍＬで
あった。したがって、Ｃ２５およびＣ３担体のバイオアベイラビリティ向上は、それぞれ
２１３倍および８２０倍であった。
と、プロテアーゼ分解からの防御との組み合わせに相当する。次いで、ＷｉｎＮｏｎＬｉ
ｎ（ＰｈａｒＳｉｇｈｔ）およびＧｒａｐｈＰａｄ（Ｐｒｉｓｍ）を使用して、データの
薬物動態分析を実施した。重要なことに、本来のアペリン−１３ペプチドのＡＵＣは、０
．４ｎｇ＊時間／ｍＬであり、ビタミンＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−アペリンは、８５ｎ
ｇ＊時間／ｍＬであり、ビタミンＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋは、３２８ｎｇ＊時間／ｍＬで
あった。したがって、Ｃ２５およびＣ３担体のバイオアベイラビリティ向上は、それぞれ
２１３倍および８２０倍であった。
実施例６：非ホルモン性ビタミンＤにコンジュゲートされたグレリンの調製および特徴付
け
合成のグレリンペプチドを、表１Ａに列挙する。野生型（ｗｔ）ペプチドは、Ｂａｃｈ
ｅｍ［Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ，カタログ＃Ｈ−４８６４（ヒト）およびＨ−４８６２（
ラット）］から購入し、カスタム配列は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）
によって合成された。カスタム配列は、３位でのオクタノイル化セリン（Ｏｃｔ−Ｓ、Ｏ
−オクタノイル−セリンとしても知られている）が、オクタノイル化２，３−ジアミノプ
ロピオン酸（Ｏｃｔ−Ｄａｐ、Ｎβ−オクタノイル−２，３−ジアミノプロピオン酸とし
ても知られている）、チロシン（Ｙ）、またはトリプトファン（Ｗ）によって置き換えら
れた、ペプチドを含む。
け
合成のグレリンペプチドを、表１Ａに列挙する。野生型（ｗｔ）ペプチドは、Ｂａｃｈ
ｅｍ［Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ，カタログ＃Ｈ−４８６４（ヒト）およびＨ−４８６２（
ラット）］から購入し、カスタム配列は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）
によって合成された。カスタム配列は、３位でのオクタノイル化セリン（Ｏｃｔ−Ｓ、Ｏ
−オクタノイル−セリンとしても知られている）が、オクタノイル化２，３−ジアミノプ
ロピオン酸（Ｏｃｔ−Ｄａｐ、Ｎβ−オクタノイル−２，３−ジアミノプロピオン酸とし
ても知られている）、チロシン（Ｙ）、またはトリプトファン（Ｗ）によって置き換えら
れた、ペプチドを含む。
Ｏｃｔ−Ｓは、エステラーゼによってインビボで急速に脱アシル化され；脱アシル化さ
れた型のグレリンは、ＧＨＳ−Ｒ受容体をもはや活性化しない。Ｏｃｔ−Ｄａｐ、トリプ
トファン、およびチロシン誘導体は、エステラーゼによる脱アセチル化を受けないので、
その活性を維持するはずである。実施例１および３に記載した通りのビタミンＤ−ＰＥＧ
−マレイミド担体を、コンジュゲーションが生理活性に有意に影響を与えないように、２
〜３ｋＤａペプチドとサイズが比例するように選択した。担体とのコンジュゲーションは
、５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解したチオール反応性部分［実施例１のＶｉｔＤ−（２５
）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド、または実施例３の化合物ＶＩ：ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ
２Ｋ−マレイミド、またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ＃７３１７６５からのＰＥＧ２
Ｋ−マレイミド（ポリ（エチレングリコール）メチルエーテルマレイミドとしても知られ
ている）
］を、５ｍｇ／ｍＬの濃度（１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中）の遊離のシステイ
ンを含有するグレリンペプチドと、担体対ペプチドのモル比１．４：１で混合することに
よって実現した。反応は、室温で１時間、進行させた。コンジュゲートされたペプチドを
、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から分離した。コンジュゲーショ
ンおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いでラットグレリンペプチド（
ｒグレリン）、ヒトグレリンペプチド（ｈグレリン）およびグレリン−担体コンジュゲー
トの緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィル
ターを使用して濾過滅菌した。
れた型のグレリンは、ＧＨＳ−Ｒ受容体をもはや活性化しない。Ｏｃｔ−Ｄａｐ、トリプ
トファン、およびチロシン誘導体は、エステラーゼによる脱アセチル化を受けないので、
その活性を維持するはずである。実施例１および３に記載した通りのビタミンＤ−ＰＥＧ
−マレイミド担体を、コンジュゲーションが生理活性に有意に影響を与えないように、２
〜３ｋＤａペプチドとサイズが比例するように選択した。担体とのコンジュゲーションは
、５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解したチオール反応性部分［実施例１のＶｉｔＤ−（２５
）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド、または実施例３の化合物ＶＩ：ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ
２Ｋ−マレイミド、またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ＃７３１７６５からのＰＥＧ２
Ｋ−マレイミド（ポリ（エチレングリコール）メチルエーテルマレイミドとしても知られ
ている）
］を、５ｍｇ／ｍＬの濃度（１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中）の遊離のシステイ
ンを含有するグレリンペプチドと、担体対ペプチドのモル比１．４：１で混合することに
よって実現した。反応は、室温で１時間、進行させた。コンジュゲートされたペプチドを
、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から分離した。コンジュゲーショ
ンおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いでラットグレリンペプチド（
ｒグレリン）、ヒトグレリンペプチド（ｈグレリン）およびグレリン−担体コンジュゲー
トの緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィル
ターを使用して濾過滅菌した。
グレリンコンジュゲートの薬物動態
グレリンコンジュゲートの薬物動態を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて
検査した。コンジュゲートは、以下であった：ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイ
ミドにコンジュゲートされたｗｔ Ｏｃｔ−ｈグレリンおよびＯｃｔ−ｈグレリン−Ｃ；
ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミドまたは実施例３の化合物ＶＩ：ＶｉｔＤ−
（３）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミドのいずれかにコンジュゲートされたＤａｐ−ｈグレリン
−Ｃ；およびＰＥＧ２Ｋ−マレイミド。簡単に言うと、０．１ｍｇ／ｋｇの各分子を、静
脈内（ｉｖ）または皮下（ｓｃ）注射によって、ラットに別々に注射した。血漿の試料を
、５分（ｉｖのみ）、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、および２４時間の時点
で採取した。プロテアーゼ阻害剤とＨＣｌ（最終濃度０．０５Ｎ）を、血漿試料に添加し
、次いでこれを直ちに凍結させた。ラット血漿（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｃａｔ．＃ＥＺＲ
ＧＲＴ−９１Ｋおよび＃ＥＺＲＧＲＡ−９０Ｋ）からの全ｒグレリン（アシル化＋非アシ
ル化）または活性なｒグレリン（アシル化のみ）のいずれかを分析するために検証された
市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、試料を分析した。結果は、ｈグレリンとｈグレリン
−担体コンジュゲートとの薬物動態プロファイルの有意差を示す（図６〜８）。
グレリンコンジュゲートの薬物動態を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて
検査した。コンジュゲートは、以下であった：ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイ
ミドにコンジュゲートされたｗｔ Ｏｃｔ−ｈグレリンおよびＯｃｔ−ｈグレリン−Ｃ；
ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミドまたは実施例３の化合物ＶＩ：ＶｉｔＤ−
（３）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミドのいずれかにコンジュゲートされたＤａｐ−ｈグレリン
−Ｃ；およびＰＥＧ２Ｋ−マレイミド。簡単に言うと、０．１ｍｇ／ｋｇの各分子を、静
脈内（ｉｖ）または皮下（ｓｃ）注射によって、ラットに別々に注射した。血漿の試料を
、５分（ｉｖのみ）、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、および２４時間の時点
で採取した。プロテアーゼ阻害剤とＨＣｌ（最終濃度０．０５Ｎ）を、血漿試料に添加し
、次いでこれを直ちに凍結させた。ラット血漿（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｃａｔ．＃ＥＺＲ
ＧＲＴ−９１Ｋおよび＃ＥＺＲＧＲＡ−９０Ｋ）からの全ｒグレリン（アシル化＋非アシ
ル化）または活性なｒグレリン（アシル化のみ）のいずれかを分析するために検証された
市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、試料を分析した。結果は、ｈグレリンとｈグレリン
−担体コンジュゲートとの薬物動態プロファイルの有意差を示す（図６〜８）。
図６Ａは、静脈内注射されたグレリンの薬物動態プロファイルが、Ｃ２５およびＣ３位
置でビタミンＤにコンジュゲートされた場合に向上したことを示す。活性なグレリンと全
グレリンのレベルを分析した。なぜなら、Ｏｃｔ−Ｄａｐ修飾が、タンパク質を脱アシル
化から保護したのに対して、本来のＯｃｔ−Ｓｅｒを含有するペプチドは、急速に脱アシ
ル化されたからである。単独のまたはＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド担体
にコンジュゲートされたＷｔ−Ｏｃｔ−ｈグレリン、ならびにＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥ
Ｇ２ｋ−マレイミド担体またはＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド担体のいずれ
かにコンジュゲートされたＤａｐ−ｈグレリンを、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット
に、０．１ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。血漿試料中のグレリン濃度を、ＥＬＩＳＡによ
って、全グレリン（アシル化＋非アシル化）または活性なグレリン（アシル化のみ）のい
ずれかについて、２連で分析した。３動物からの平均値を、片対数グラフにプロットした
。オクタノイル化Ｄａｐ残基は、分解に対して耐性であった。
置でビタミンＤにコンジュゲートされた場合に向上したことを示す。活性なグレリンと全
グレリンのレベルを分析した。なぜなら、Ｏｃｔ−Ｄａｐ修飾が、タンパク質を脱アシル
化から保護したのに対して、本来のＯｃｔ−Ｓｅｒを含有するペプチドは、急速に脱アシ
ル化されたからである。単独のまたはＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド担体
にコンジュゲートされたＷｔ−Ｏｃｔ−ｈグレリン、ならびにＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥ
Ｇ２ｋ−マレイミド担体またはＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド担体のいずれ
かにコンジュゲートされたＤａｐ−ｈグレリンを、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット
に、０．１ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。血漿試料中のグレリン濃度を、ＥＬＩＳＡによ
って、全グレリン（アシル化＋非アシル化）または活性なグレリン（アシル化のみ）のい
ずれかについて、２連で分析した。３動物からの平均値を、片対数グラフにプロットした
。オクタノイル化Ｄａｐ残基は、分解に対して耐性であった。
Ｃ２５コンジュゲートとＣ３コンジュゲートはどちらも、薬物動態プロファイルの有意
な向上を示した。ただし、Ｃ３コンジュゲートが、最良の薬物動態プロファイルを示した
。ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤ担体は、非修飾ｗｔ Ｏｃｔ−ｈグレリンと比較して
、Ｏｃｔ−ｈグレリン−ＣとＤａｐ−ｈグレリンとの両方に対して有意な半減期延長を提
供したが、前者は、急速に脱アシル化されてその不活性形となる。ＰＥＧ２Ｋ−（３）−
ＶｉｔＤ担体は、ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤ担体と比較した場合に、さらに長い半
減期延長を提供した。
な向上を示した。ただし、Ｃ３コンジュゲートが、最良の薬物動態プロファイルを示した
。ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤ担体は、非修飾ｗｔ Ｏｃｔ−ｈグレリンと比較して
、Ｏｃｔ−ｈグレリン−ＣとＤａｐ−ｈグレリンとの両方に対して有意な半減期延長を提
供したが、前者は、急速に脱アシル化されてその不活性形となる。ＰＥＧ２Ｋ−（３）−
ＶｉｔＤ担体は、ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤ担体と比較した場合に、さらに長い半
減期延長を提供した。
図７は、ラットに皮下注射された活性なグレリンと全グレリンレベルを比較する。これ
は、ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤおよびＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ担体が、有意
な半減期延長およびバイオアベイラビリティの向上を提供したことを実証する。ビタミン
ＤのＣ３位置で修飾された担体の方が優れていた。Ｏｃｔ−Ｄａｐ修飾は、脱アシル化に
対する耐性を提供したが、皮下注射後に、静脈内送達では観察されなかった、ある程度の
脱アシル化が起こった。
は、ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤおよびＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ担体が、有意
な半減期延長およびバイオアベイラビリティの向上を提供したことを実証する。ビタミン
ＤのＣ３位置で修飾された担体の方が優れていた。Ｏｃｔ−Ｄａｐ修飾は、脱アシル化に
対する耐性を提供したが、皮下注射後に、静脈内送達では観察されなかった、ある程度の
脱アシル化が起こった。
図８は、ＰＥＧ２ｋ−マレイミド、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド、お
よびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド担体にコンジュゲートされた、Ｄａｐ−
ｈグレリン−Ｃについての薬物動態プロファイルを比較する。これらの試料を、静脈内ま
たは皮下のいずれかに注射した。血漿試料を、ＥＬＩＳＡによって、全グレリン（アシル
化＋非アシル化）レベルについて分析した。Ｃ２５コンジュゲートとＣ３コンジュゲート
は両方とも、ＰＥＧ化されたグレリンに勝る有意な向上を示したが、Ｃ３コンジュゲート
は、最も向上したバイオアベイラビリティおよび薬物動態特性を示した。２ｋＤａ ＰＥ
Ｇスカフォールドは単独で、静脈内に注射されたグレリンに対して、いくらかの半減期を
延長する性質を有していた。しかし、これは、皮下に注射されたグレリンの薬物動態特性
を修飾することについては効果がなかった。対照的に、ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤ
またはＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ担体でのグレリンの修飾は、静脈内注射時に、有意
に長い半減期をもたらした。さらに、バイオアベイラビリティは、皮下注射後に向上した
。ビタミンＤのＣ３位置で修飾された担体は、Ｃ２５位置で修飾された担体よりも優れて
いた。
よびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２ｋ−マレイミド担体にコンジュゲートされた、Ｄａｐ−
ｈグレリン−Ｃについての薬物動態プロファイルを比較する。これらの試料を、静脈内ま
たは皮下のいずれかに注射した。血漿試料を、ＥＬＩＳＡによって、全グレリン（アシル
化＋非アシル化）レベルについて分析した。Ｃ２５コンジュゲートとＣ３コンジュゲート
は両方とも、ＰＥＧ化されたグレリンに勝る有意な向上を示したが、Ｃ３コンジュゲート
は、最も向上したバイオアベイラビリティおよび薬物動態特性を示した。２ｋＤａ ＰＥ
Ｇスカフォールドは単独で、静脈内に注射されたグレリンに対して、いくらかの半減期を
延長する性質を有していた。しかし、これは、皮下に注射されたグレリンの薬物動態特性
を修飾することについては効果がなかった。対照的に、ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤ
またはＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ担体でのグレリンの修飾は、静脈内注射時に、有意
に長い半減期をもたらした。さらに、バイオアベイラビリティは、皮下注射後に向上した
。ビタミンＤのＣ３位置で修飾された担体は、Ｃ２５位置で修飾された担体よりも優れて
いた。
グレリンペプチド−担体の受容体結合活性の評価
いくつかの実施態様では、グレリンペプチドの活性は、担体にコンジュゲートされる場
合、非修飾ペプチドと実質的に同じである。グレリンとＶｉｔＤ−ＰＥＧ−グレリンを、
細胞に基づく受容体アゴニスト分析を使用して、受容体結合およびグレリン受容体の活性
化（アゴニスト活性）について比較した：ヒトグレリン受容体（ＧＨＳ−Ｒ、Ｍｕｌｔｉ
ｓｐａｎ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｃ１１９７ｂ）を安定的に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、Ｆ
ＬＩＰＲ ３８４機器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｃａｔ．Ｎｏｓ．ＦＬＩ
ＰＲおよび０２００−６０７２）上でＳｃｒｅｅｎ Ｑｕｅｓｔ（商標）Ｆｌｕｏ−８
Ｎｏ Ｗａｓｈ ｋｉｔ（ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３６３１５）を使
用して、試験化合物への曝露時の細胞内カルシウムの上昇についてモニタリングした。コ
ンジュゲートされていないグレリンとコンジュゲートされたグレリンについてのＥＣ５０
値を決定し、比較した。ｒグレリンについてのＥＣ５０値は、１．９ｎＭであった。Ｄａ
ｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤについてのＥＣ５０値は、２０．５
ｎＭであった。ＧＳＷ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤについてのＥＣ
５０値は、３．９ｎＭであった。したがって、グレリンのビタミンＤへのコンジュゲーシ
ョンは、非修飾グレリンペプチドと実質的に同じ受容体活性をもたらした。
いくつかの実施態様では、グレリンペプチドの活性は、担体にコンジュゲートされる場
合、非修飾ペプチドと実質的に同じである。グレリンとＶｉｔＤ−ＰＥＧ−グレリンを、
細胞に基づく受容体アゴニスト分析を使用して、受容体結合およびグレリン受容体の活性
化（アゴニスト活性）について比較した：ヒトグレリン受容体（ＧＨＳ−Ｒ、Ｍｕｌｔｉ
ｓｐａｎ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｃ１１９７ｂ）を安定的に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、Ｆ
ＬＩＰＲ ３８４機器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｃａｔ．Ｎｏｓ．ＦＬＩ
ＰＲおよび０２００−６０７２）上でＳｃｒｅｅｎ Ｑｕｅｓｔ（商標）Ｆｌｕｏ−８
Ｎｏ Ｗａｓｈ ｋｉｔ（ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔ，Ｃａｔ．Ｎｏ．３６３１５）を使
用して、試験化合物への曝露時の細胞内カルシウムの上昇についてモニタリングした。コ
ンジュゲートされていないグレリンとコンジュゲートされたグレリンについてのＥＣ５０
値を決定し、比較した。ｒグレリンについてのＥＣ５０値は、１．９ｎＭであった。Ｄａ
ｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤについてのＥＣ５０値は、２０．５
ｎＭであった。ＧＳＷ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤについてのＥＣ
５０値は、３．９ｎＭであった。したがって、グレリンのビタミンＤへのコンジュゲーシ
ョンは、非修飾グレリンペプチドと実質的に同じ受容体活性をもたらした。
反復投与を用いるグレリンコンジュゲートの薬物動態
２種のグレリンコンジュゲート、Ｄａｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−Ｖｉ
ｔＤおよびＧＳＷ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤの長期の薬物動態プ
ロファイルを、非修飾ｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリンと、様々な用量で比較した。各用量を、
次の通りの血液採取を伴う、４８時間によって隔てられる２回の皮下注射によって送達し
た：ｔ＝０（第１の投与前）、０．５、１、２、４、８、２４、３２、４８（第２の投与
前）、４８．５、４９、５０、５２、５６、７２、８０、および９６時間。検査した用量
は、５および０．５ｍｇ／ｋｇ（ｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリン）、０．５および０．１ｍｇ
／ｋｇ（Ｄａｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ、ならびに０．５およ
び０．１ｍｇ／ｋｇ（ＧＳＷ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ）であっ
た。採取した血漿試料に、Ｐｅｆａｂｌｏｃ ＳＣ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａ
ｔ＃ ７６３０９）を、１ｍｇ／ｍｌで添加し、この血漿を、ラット／マウスグレリン（
全）ＥＬＩＳＡキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｃａｔ．＃ＥＺＲＧＲＴ−９１Ｋ）を使用
してグレリンのレベルが分析されるまで、直ちに凍結させた。どちらの担体で修飾された
グレリンコンジュゲートも、非修飾グレリンと比較して、大いに向上した薬物動態プロフ
ァイルを示す（図６Ｂ）。最大用量のグレリンコンジュゲート（０．５ｍｇ／ｋｇ）で、
２回目の注射の７２時間後に、測定可能なレベルのコンジュゲートが認められたのに対し
て、同じ用量の非修飾グレリンは、６時間以内にベースラインレベルに戻った。０〜４８
時間の関数としての濃度プロファイルを、血管外のノンコンパートメント分析を使用する
Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて分析した。台形（
線形規則）方法を使用して、曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。０．５ｍｇ／ｋｇ用量に
ついての結果を、表１Ｂに与える。これらのコンジュゲートは、より高いピーク濃度（Ｃ
ｍａｘ）を達成し、非修飾グレリンよりも遅い排出時間を有しており、算出されたＡＵＣ
の大幅な増大（３０〜５０倍）をもたらした。算出されたｔ１／２値は、０．６時間から
およそ１０時間まで増加した（ＶｉｔＤ−（３）担体では、１７倍の向上）。
２種のグレリンコンジュゲート、Ｄａｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−Ｖｉ
ｔＤおよびＧＳＷ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤの長期の薬物動態プ
ロファイルを、非修飾ｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリンと、様々な用量で比較した。各用量を、
次の通りの血液採取を伴う、４８時間によって隔てられる２回の皮下注射によって送達し
た：ｔ＝０（第１の投与前）、０．５、１、２、４、８、２４、３２、４８（第２の投与
前）、４８．５、４９、５０、５２、５６、７２、８０、および９６時間。検査した用量
は、５および０．５ｍｇ／ｋｇ（ｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリン）、０．５および０．１ｍｇ
／ｋｇ（Ｄａｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ、ならびに０．５およ
び０．１ｍｇ／ｋｇ（ＧＳＷ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ）であっ
た。採取した血漿試料に、Ｐｅｆａｂｌｏｃ ＳＣ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａ
ｔ＃ ７６３０９）を、１ｍｇ／ｍｌで添加し、この血漿を、ラット／マウスグレリン（
全）ＥＬＩＳＡキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｃａｔ．＃ＥＺＲＧＲＴ−９１Ｋ）を使用
してグレリンのレベルが分析されるまで、直ちに凍結させた。どちらの担体で修飾された
グレリンコンジュゲートも、非修飾グレリンと比較して、大いに向上した薬物動態プロフ
ァイルを示す（図６Ｂ）。最大用量のグレリンコンジュゲート（０．５ｍｇ／ｋｇ）で、
２回目の注射の７２時間後に、測定可能なレベルのコンジュゲートが認められたのに対し
て、同じ用量の非修飾グレリンは、６時間以内にベースラインレベルに戻った。０〜４８
時間の関数としての濃度プロファイルを、血管外のノンコンパートメント分析を使用する
Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて分析した。台形（
線形規則）方法を使用して、曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。０．５ｍｇ／ｋｇ用量に
ついての結果を、表１Ｂに与える。これらのコンジュゲートは、より高いピーク濃度（Ｃ
ｍａｘ）を達成し、非修飾グレリンよりも遅い排出時間を有しており、算出されたＡＵＣ
の大幅な増大（３０〜５０倍）をもたらした。算出されたｔ１／２値は、０．６時間から
およそ１０時間まで増加した（ＶｉｔＤ−（３）担体では、１７倍の向上）。
悪液質および他の体重減少状態を治療するためのグレリンコンジュゲート
癌悪液質の動物モデルとして、ラットに、Ｙｏｓｈｉｄａ ＡＨ１３０腹水肝癌細胞を
移植した。腫瘍細胞の移植後、長寿命のグレリンコンジュゲート、Ｄａｐ−ｒグレリン−
Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤを、様々な用量で、毎日または１日おきに送達した。
非修飾グレリンは、皮下浸透圧ポンプを介する連続注入によって送達した。Ｄａｐ−ｒグ
レリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤをまた、類似の皮下用量のグレリンおよびＯ
ｃｔ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ（長寿命だけでなく恒常的に活性
なグレリン）と比較した。化合物投与の完全な一覧については、表１Ｃを参照されたい。
ここでは、「グレリン」＝ｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリン、「Ｄａｐ−ＶｉｔＤ」＝Ｄａｐ−
ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ、および「Ｏｃｔ−ＶｉｔＤ」＝Ｏｃｔ
−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ。
癌悪液質の動物モデルとして、ラットに、Ｙｏｓｈｉｄａ ＡＨ１３０腹水肝癌細胞を
移植した。腫瘍細胞の移植後、長寿命のグレリンコンジュゲート、Ｄａｐ−ｒグレリン−
Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤを、様々な用量で、毎日または１日おきに送達した。
非修飾グレリンは、皮下浸透圧ポンプを介する連続注入によって送達した。Ｄａｐ−ｒグ
レリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤをまた、類似の皮下用量のグレリンおよびＯ
ｃｔ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ（長寿命だけでなく恒常的に活性
なグレリン）と比較した。化合物投与の完全な一覧については、表１Ｃを参照されたい。
ここでは、「グレリン」＝ｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリン、「Ｄａｐ−ＶｉｔＤ」＝Ｄａｐ−
ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ、および「Ｏｃｔ−ＶｉｔＤ」＝Ｏｃｔ
−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２ｋ−（３）−ＶｉｔＤ。
第１日に体重（ＢＷ）範囲が１８５．１〜２６６．３ｇであった９週齢の雌のＷｉｓｔ
ａｒラット（Ｃｒｌ：ＷＩ，Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ．）を使用した。Ｙ
ｏｓｈｉｄａ ＡＨ−１３０ラット肝癌細胞を、ラットにインビボで増殖させた。最初の
接種の日に、肝癌細胞を解凍し、洗浄して凍結培地を除去し、ＰＢＳに再懸濁し、各ラッ
トに腹腔内（ｉｐ）注射した。それに続くインビボ継代のために、対数期増殖中に肝癌細
胞を腹水から採取し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に、２×１０７細胞／ｍＬで再懸
濁した。第０日に、グループ３〜９（ｎ＝１０／グループ）の動物はそれぞれ、０．２ｍ
Ｌの細胞懸濁液のｉｐ注射を受けた。グループ１および２には接種しなかった。
ａｒラット（Ｃｒｌ：ＷＩ，Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ．）を使用した。Ｙ
ｏｓｈｉｄａ ＡＨ−１３０ラット肝癌細胞を、ラットにインビボで増殖させた。最初の
接種の日に、肝癌細胞を解凍し、洗浄して凍結培地を除去し、ＰＢＳに再懸濁し、各ラッ
トに腹腔内（ｉｐ）注射した。それに続くインビボ継代のために、対数期増殖中に肝癌細
胞を腹水から採取し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に、２×１０７細胞／ｍＬで再懸
濁した。第０日に、グループ３〜９（ｎ＝１０／グループ）の動物はそれぞれ、０．２ｍ
Ｌの細胞懸濁液のｉｐ注射を受けた。グループ１および２には接種しなかった。
第１日に、ラットを１０匹の９つのグループに分け、表１Ｃのプロトコルに従って処置
した。グループ１〜３および５〜８についての用量は、毎日（ｑｄ）皮下に（ｓｃ）送達
した。グループ４についての用量は、皮下浸透圧ポンプ（Ｍｏｄｅｌ ２００１、１μｌ
／時間）を介して送達した。グループ９についての用量は、１日おきに（ｑｏｄ）送達し
た。グループ１および３には、ビヒクルを与え、グループ２および８には、Ｄａｐ−Ｖｉ
ｔＤを０．１ｍｇ／ｋｇで与え、グループ９には、Ｄａｐ−ＶｉｔＤを０．５ｍｇ／ｋｇ
で与えた。グループ４には、グレリンを、ｓ．ｃ．浸透圧ポンプを介して１．２５ｍｇ／
ｋｇ／日で与え、グループ５および６には、グレリンを０．１および０．５ｍｇ／ｋｇで
与えた。グループ７には、Ｏｃｔ−ＶｉｔＤを０．１ｍｇ／ｋｇで与えた。グループ１〜
３および５〜９についてのすべての用量は、１ｍＬ／ｋｇの用量体積で送達し、それぞれ
の体重の各動物に投与した。各動物について、第１〜６日に体重（ＢＷ）を記録した。治
療グループについての正規化された体重値の平均の間の差の有意性を、独立ｔ検定（Ｇｒ
ａｐｈＰａｄ）を使用して決定した。腫瘍接種グループでは、ある動物に見られる腹水が
１．０ｍＬ未満であった場合には、生着失敗が想定され、その動物に関するデータは使用
しなかった。
した。グループ１〜３および５〜８についての用量は、毎日（ｑｄ）皮下に（ｓｃ）送達
した。グループ４についての用量は、皮下浸透圧ポンプ（Ｍｏｄｅｌ ２００１、１μｌ
／時間）を介して送達した。グループ９についての用量は、１日おきに（ｑｏｄ）送達し
た。グループ１および３には、ビヒクルを与え、グループ２および８には、Ｄａｐ−Ｖｉ
ｔＤを０．１ｍｇ／ｋｇで与え、グループ９には、Ｄａｐ−ＶｉｔＤを０．５ｍｇ／ｋｇ
で与えた。グループ４には、グレリンを、ｓ．ｃ．浸透圧ポンプを介して１．２５ｍｇ／
ｋｇ／日で与え、グループ５および６には、グレリンを０．１および０．５ｍｇ／ｋｇで
与えた。グループ７には、Ｏｃｔ−ＶｉｔＤを０．１ｍｇ／ｋｇで与えた。グループ１〜
３および５〜９についてのすべての用量は、１ｍＬ／ｋｇの用量体積で送達し、それぞれ
の体重の各動物に投与した。各動物について、第１〜６日に体重（ＢＷ）を記録した。治
療グループについての正規化された体重値の平均の間の差の有意性を、独立ｔ検定（Ｇｒ
ａｐｈＰａｄ）を使用して決定した。腫瘍接種グループでは、ある動物に見られる腹水が
１．０ｍＬ未満であった場合には、生着失敗が想定され、その動物に関するデータは使用
しなかった。
治療の経過中の体重の変化を、図９に示す。これは、第１日を１００パーセントに正規
化された、各グループ（ｎ＝７〜１０）についての平均体重のプロットを示す。移植され
た腫瘍で処置されていないグループ（グループ３）は、６日の間に体重が減った。対照的
に、腫瘍で処置した群（グループ４〜９）はすべて、体重増加を示し、腫瘍を有しない健
康な動物（グループ１および２）の体重増加に接近していた。第４日に、各グループの平
均体重は、グループ３とは統計的に異なっていた（グループ３に対してｐ≦０．０５）。
第４日に、腫瘍を有するすべてのグループのうち、グレリンの連続注入を受けたグループ
（グループ４）が、体重が最も重く、そのすぐ後に、Ｄａｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２
ｋ−（３）−ＶｉｔＤを１日おきに皮下注射によって受けたグループ（グループ９）が続
いた。
化された、各グループ（ｎ＝７〜１０）についての平均体重のプロットを示す。移植され
た腫瘍で処置されていないグループ（グループ３）は、６日の間に体重が減った。対照的
に、腫瘍で処置した群（グループ４〜９）はすべて、体重増加を示し、腫瘍を有しない健
康な動物（グループ１および２）の体重増加に接近していた。第４日に、各グループの平
均体重は、グループ３とは統計的に異なっていた（グループ３に対してｐ≦０．０５）。
第４日に、腫瘍を有するすべてのグループのうち、グレリンの連続注入を受けたグループ
（グループ４）が、体重が最も重く、そのすぐ後に、Ｄａｐ−ｒグレリン−Ｃ−ＰＥＧ２
ｋ−（３）−ＶｉｔＤを１日おきに皮下注射によって受けたグループ（グループ９）が続
いた。
これらのデータは、ビタミンＤにコンジュゲートされたグレリンが、対象における体重
を有効に増大させることを示す。これを使用して、悪液質の消耗性作用および他の体重減
少障害を逆行させることができる。ビタミンＤ担体によって提供される優れた薬物動態プ
ロファイルは、投薬時間および量におけるさらなる柔軟性を提供する。
を有効に増大させることを示す。これを使用して、悪液質の消耗性作用および他の体重減
少障害を逆行させることができる。ビタミンＤ担体によって提供される優れた薬物動態プ
ロファイルは、投薬時間および量におけるさらなる柔軟性を提供する。
実施例７：Ｃ２５およびＣ３位置で非ホルモン性ビタミンＤにカップリングさせたインス
リンの調製
この実施例では、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳを、Ａ鎖（配列番号１１）
とＢ鎖（配列番号１２）を含むヒトインスリンにコンジュゲートさせて、糖尿病を治療す
るための治療薬を調製した。インスリンＡ鎖は、ｃｙｓ６−ｃｙｓ１１鎖内ジスルフィド
結合を含有する。Ａ鎖上のｃｙｓ７は、Ｂ鎖のｃｙｓ７に、鎖間ジスルフィド結合によっ
て連結されている。Ａ鎖上のｃｙｓ２０は、Ｂ鎖のｃｙｓ１９に、やはり鎖間ジスルフィ
ド結合によって連結されている。インスリン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ，ＭＯ、カタログ＃Ｉ２６４３）を、５ｍｇ／ｍｌの濃度で、ＤＭＳＯと１Ｍ Ｈ
ＥＰＥＳ＋０．８５％ ＮａＣｌ（ｐＨ＝８）との１：１混合物に再懸濁した。５ｍｇ／
ｍｌの濃度でＤＭＳＯに溶解したＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳ担体（インス
リン４に対して１．４モル当量）を添加した。インスリンの最終濃度は、１ｍｇ／ｍｌ（
ｄＨ２Ｏ中）となり、反応を、室温で１時間、進行させた。インスリンコンジュゲートは
、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
リンの調製
この実施例では、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳを、Ａ鎖（配列番号１１）
とＢ鎖（配列番号１２）を含むヒトインスリンにコンジュゲートさせて、糖尿病を治療す
るための治療薬を調製した。インスリンＡ鎖は、ｃｙｓ６−ｃｙｓ１１鎖内ジスルフィド
結合を含有する。Ａ鎖上のｃｙｓ７は、Ｂ鎖のｃｙｓ７に、鎖間ジスルフィド結合によっ
て連結されている。Ａ鎖上のｃｙｓ２０は、Ｂ鎖のｃｙｓ１９に、やはり鎖間ジスルフィ
ド結合によって連結されている。インスリン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ，ＭＯ、カタログ＃Ｉ２６４３）を、５ｍｇ／ｍｌの濃度で、ＤＭＳＯと１Ｍ Ｈ
ＥＰＥＳ＋０．８５％ ＮａＣｌ（ｐＨ＝８）との１：１混合物に再懸濁した。５ｍｇ／
ｍｌの濃度でＤＭＳＯに溶解したＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳ担体（インス
リン４に対して１．４モル当量）を添加した。インスリンの最終濃度は、１ｍｇ／ｍｌ（
ｄＨ２Ｏ中）となり、反応を、室温で１時間、進行させた。インスリンコンジュゲートは
、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
この実施例では、糖尿病を治療するための治療薬を調製するために、ＶｉｔＤ−（３）
−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳが、ヒトインスリンにコンジュゲートされる。インスリン（Ｓ
ｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ、カタログ＃Ｉ２６４３）を、５ｍ
ｇ／ｍｌの濃度で、ＤＭＳＯと１Ｍ ＨＥＰＥＳ＋０．８５％ ＮａＣｌ（ｐＨ＝８）と
の１：１混合物に再懸濁する。５ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯに溶解したＶｉｔＤ−（３
）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体（インスリン４に対して１．４モル当量）を添加した。
インスリンの最終濃度は、１ｍｇ／ｍｌ（ｄＨ２Ｏ中）にとなり、反応を、室温で１時間
、進行させた。インスリンコンジュゲートは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳが、ヒトインスリンにコンジュゲートされる。インスリン（Ｓ
ｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ、カタログ＃Ｉ２６４３）を、５ｍ
ｇ／ｍｌの濃度で、ＤＭＳＯと１Ｍ ＨＥＰＥＳ＋０．８５％ ＮａＣｌ（ｐＨ＝８）と
の１：１混合物に再懸濁する。５ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯに溶解したＶｉｔＤ−（３
）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体（インスリン４に対して１．４モル当量）を添加した。
インスリンの最終濃度は、１ｍｇ／ｍｌ（ｄＨ２Ｏ中）にとなり、反応を、室温で１時間
、進行させた。インスリンコンジュゲートは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
薬物動態実験、脂肪細胞によるグルコースの取り込みを測定するインビトロ生理活性分
析、および糖尿病ラットモデルにおける血糖低下能力のインビボ評価を、その内容全体が
参照によって本明細書に組み込まれる欧州特許第２０８５４０６号明細書に記載されてい
る通りに実施する。
析、および糖尿病ラットモデルにおける血糖低下能力のインビボ評価を、その内容全体が
参照によって本明細書に組み込まれる欧州特許第２０８５４０６号明細書に記載されてい
る通りに実施する。
実施例８：Ｃ３位置およびＣ２５位置で非ホルモン性ビタミンＤにカップリングさせたＰ
ＴＨの調製
ＰＴＨの半減期を延長し、それによって、コンジュゲートされた分子、すなわち副甲状
腺機能低下症および骨粗鬆症の治療に潜在的に有用な治療薬を作製するために、ＶｉｔＤ
−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド担体（実施例３の化合物ＶＩ）、ＶｉｔＤ−（３）−
ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒド（実施例２の化合物Ｖ）、およびＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２
Ｋ−マレイミド担体（実施例１より）を、ＰＴＨにコンジュゲートさせた。
ＴＨの調製
ＰＴＨの半減期を延長し、それによって、コンジュゲートされた分子、すなわち副甲状
腺機能低下症および骨粗鬆症の治療に潜在的に有用な治療薬を作製するために、ＶｉｔＤ
−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド担体（実施例３の化合物ＶＩ）、ＶｉｔＤ−（３）−
ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒド（実施例２の化合物Ｖ）、およびＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２
Ｋ−マレイミド担体（実施例１より）を、ＰＴＨにコンジュゲートさせた。
ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤの合成
Ｃ−末端システイン残基を有するＰＴＨ誘導体は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１７）によって合成された。担体とのコンジュゲーション
は、ＤＭＳＯに５ｍｇ／ｍＬで溶解したチオール反応性ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−
マレイミド担体（実施例３の化合物ＶＩ）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に
５ｍｇ／ｍＬの濃度で遊離のシステインを含有するＰＴＨペプチドと、担体対ペプチドの
モル比１．３：１で、混合することによって実現した。この反応は、室温で１００分間、
進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−Ｖｉｔ
Ｄを、未反応の成分から、イオン交換クロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲ
ーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュゲートの
緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィルター
を使用して濾過滅菌した。
Ｃ−末端システイン残基を有するＰＴＨ誘導体は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１７）によって合成された。担体とのコンジュゲーション
は、ＤＭＳＯに５ｍｇ／ｍＬで溶解したチオール反応性ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−
マレイミド担体（実施例３の化合物ＶＩ）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に
５ｍｇ／ｍＬの濃度で遊離のシステインを含有するＰＴＨペプチドと、担体対ペプチドの
モル比１．３：１で、混合することによって実現した。この反応は、室温で１００分間、
進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−Ｖｉｔ
Ｄを、未反応の成分から、イオン交換クロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲ
ーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュゲートの
緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィルター
を使用して濾過滅菌した。
ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨの合成：
ヒトＰＴＨ（１−３４）ペプチドは、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ、カタロ
グ＃Ｈ−４８３５、配列番号１０）から購入した。担体上のアルデヒドとペプチド上のア
ミン部分とのコンジュゲーションは、ペプチドのＮ−末端アミンとの反応に好都合である
ように、低いｐＨで実施した。５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解させたアミン反応性のＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒド担体（実施例２の化合物Ｖ）を、５ｍｇ／ｍＬの
濃度（ｄＨ２Ｏ中）のＰＴＨ（１−３４）ペプチドと、担体対ペプチドのモル比３：１で
混合した（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝５）および２５ｍＭ ＮａＣＮＢＨ３の最終濃
度）。反応は、４℃で一晩、進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（
３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨを、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から
分離した。コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
ヒトＰＴＨ（１−３４）ペプチドは、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ、カタロ
グ＃Ｈ−４８３５、配列番号１０）から購入した。担体上のアルデヒドとペプチド上のア
ミン部分とのコンジュゲーションは、ペプチドのＮ−末端アミンとの反応に好都合である
ように、低いｐＨで実施した。５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解させたアミン反応性のＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−アルデヒド担体（実施例２の化合物Ｖ）を、５ｍｇ／ｍＬの
濃度（ｄＨ２Ｏ中）のＰＴＨ（１−３４）ペプチドと、担体対ペプチドのモル比３：１で
混合した（５０ｍＭ ＮａＯＡｃ（ｐＨ＝５）および２５ｍＭ ＮａＣＮＢＨ３の最終濃
度）。反応は、４℃で一晩、進行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（
３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨを、イオン交換クロマトグラフィーによって、未反応成分から
分離した。コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
細胞に基づくＰＴＨ１受容体アッセイにおけるＰＴＨ（１−３４）構築物の活性：
非修飾ＰＴＨ（１−３４）、ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ、およびＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨは、生理活性の決定のために、Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ，
Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）に提出した。Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ社のＰＴＨ機能分析
は、ＰＴＨ１受容体を発現する哺乳類細胞（Ｍｕｌｔｉｓｐａｎカタログ＃Ｃ１３０１）
を使用する。この分析は、カルシウム動員（Ｓｃｒｅｅｎ Ｑｕｅｓｔ（商標） Ｆｌｕ
ｏ−８ Ｎｏ Ｗａｓｈキット、ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔカタログ＃３６３１５）およ
びｃＡＭＰ分析（ＨＴＲＦ ｃＡＭＰ ＨｉＲａｎｇｅ Ｋｉｔ、ＣｉｓＢｉｏカタログ
＃６２ＡＭ６ＰＥＣ）を使用して、アゴニスト活性を測定する。ＰＴＨ（１−３４）と２
種の修飾されたペプチドとの機能活性の比較を、表２に示す。ＥＣ５０値を決定するため
に、４パラメータロジスティック関数を用いて曲線を適合させた。ＰＴＨ（１−３４）と
ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤについてのＥＣ５０値が、非常に類似してい
たのに対して、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨについてのＥＣ５０値は、およそ
１０〜２０倍劣っていた。これは、Ｃ−末端へのＰＴＨのコンジュゲーションが、非修飾
ＰＴＨ（１−３４）と実質的に同じ活性をもたらすことを示した。しかし、ＰＴＨのＮ−
末端でのコンジュゲーションは、その活性を阻害する。
非修飾ＰＴＨ（１−３４）、ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ、およびＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨは、生理活性の決定のために、Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ，
Ｉｎｃ．（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）に提出した。Ｍｕｌｔｉｓｐａｎ社のＰＴＨ機能分析
は、ＰＴＨ１受容体を発現する哺乳類細胞（Ｍｕｌｔｉｓｐａｎカタログ＃Ｃ１３０１）
を使用する。この分析は、カルシウム動員（Ｓｃｒｅｅｎ Ｑｕｅｓｔ（商標） Ｆｌｕ
ｏ−８ Ｎｏ Ｗａｓｈキット、ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔカタログ＃３６３１５）およ
びｃＡＭＰ分析（ＨＴＲＦ ｃＡＭＰ ＨｉＲａｎｇｅ Ｋｉｔ、ＣｉｓＢｉｏカタログ
＃６２ＡＭ６ＰＥＣ）を使用して、アゴニスト活性を測定する。ＰＴＨ（１−３４）と２
種の修飾されたペプチドとの機能活性の比較を、表２に示す。ＥＣ５０値を決定するため
に、４パラメータロジスティック関数を用いて曲線を適合させた。ＰＴＨ（１−３４）と
ＰＴＨ−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤについてのＥＣ５０値が、非常に類似してい
たのに対して、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＰＴＨについてのＥＣ５０値は、およそ
１０〜２０倍劣っていた。これは、Ｃ−末端へのＰＴＨのコンジュゲーションが、非修飾
ＰＴＨ（１−３４）と実質的に同じ活性をもたらすことを示した。しかし、ＰＴＨのＮ−
末端でのコンジュゲーションは、その活性を阻害する。
ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨの合成
Ｎ−末端システイン残基を有するＰＴＨ誘導体は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１８）によって合成された。担体とのコンジュゲーション
は、ＤＭＳＯに５ｍｇ／ｍＬで溶解した実施例１のチオール反応性ＶｉｔＤ−（２５）−
ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド担体を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に５ｍｇ／ｍＬ
の濃度で遊離のシステインを含有するＰＴＨペプチドと、担体対ペプチドのモル比１．３
：１で混合することによって実現した。この反応は、室温で７５分間、進行させた。コン
ジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨを、未反応の
成分から、イオン交換クロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲーションおよび
純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュゲートの緩衝液をＰＢＳ
に交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィルターを使用して濾過
滅菌した。
Ｎ−末端システイン残基を有するＰＴＨ誘導体は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１８）によって合成された。担体とのコンジュゲーション
は、ＤＭＳＯに５ｍｇ／ｍＬで溶解した実施例１のチオール反応性ＶｉｔＤ−（２５）−
ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド担体を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に５ｍｇ／ｍＬ
の濃度で遊離のシステインを含有するＰＴＨペプチドと、担体対ペプチドのモル比１．３
：１で混合することによって実現した。この反応は、室温で７５分間、進行させた。コン
ジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨを、未反応の
成分から、イオン交換クロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲーションおよび
純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュゲートの緩衝液をＰＢＳ
に交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィルターを使用して濾過
滅菌した。
ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨの合成
Ｎ−末端システイン残基を有するＰＴＨ誘導体は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１８）によって合成された。担体とのコンジュゲーション
は、ＤＭＳＯに５ｍｇ／ｍＬで溶解したチオール反応性ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−
マレイミド担体（実施例３の化合物ＶＩ）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に
５ｍｇ／ｍＬの濃度で遊離のシステインを含有するＰＴＨペプチドと、担体対ペプチドの
モル比１．３：１で、混合することによって実現した。この反応は、室温で７５分間、進
行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨ
を、未反応の成分から、イオン交換クロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲー
ションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュゲートの緩
衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィルターを
使用して濾過滅菌した。
Ｎ−末端システイン残基を有するＰＴＨ誘導体は、Ｂｉｏｐｅｐｔｅｋ，Ｉｎｃ．（Ｍ
ａｌｖｅｒｎ，ＰＡ、配列番号１８）によって合成された。担体とのコンジュゲーション
は、ＤＭＳＯに５ｍｇ／ｍＬで溶解したチオール反応性ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−
マレイミド担体（実施例３の化合物ＶＩ）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に
５ｍｇ／ｍＬの濃度で遊離のシステインを含有するＰＴＨペプチドと、担体対ペプチドの
モル比１．３：１で、混合することによって実現した。この反応は、室温で７５分間、進
行させた。コンジュゲートされたペプチド、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨ
を、未反応の成分から、イオン交換クロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲー
ションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、コンジュゲートの緩
衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２ミクロンフィルターを
使用して濾過滅菌した。
ＰＴＨコンジュゲートの薬物動態
ＰＴＨコンジュゲートは、遊離のＰＴＨと比較した場合に、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌ
ｅｙラットにおいて、薬物動態の向上を示す。非修飾ＰＴＨ（１−３４）、ＶｉｔＤ−（
２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨ、およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨを
比較した。簡単に言うと、０．１ｍｇ／ｋｇの各分子を、皮下（ｓｃ）注射によって、ラ
ット（ｎ＝４）に別々に注射した。血漿の試料を、０時間（投与前）、０．５、１、２、
４、８、１２、２４、３２、４８、および５６時間の時点で採取し、次いで直ちに凍結さ
せた。試料を、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃａｔ
＃ ＥＫ−０５５−０８）によって、ヒトＰＴＨ（１−３４）について分析した。結果は
、ＰＴＨとＰＴＨ−担体コンジュゲートとの薬物動態プロファイルの有意差を示す（図１
０）。
ＰＴＨコンジュゲートは、遊離のＰＴＨと比較した場合に、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌ
ｅｙラットにおいて、薬物動態の向上を示す。非修飾ＰＴＨ（１−３４）、ＶｉｔＤ−（
２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨ、およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨを
比較した。簡単に言うと、０．１ｍｇ／ｋｇの各分子を、皮下（ｓｃ）注射によって、ラ
ット（ｎ＝４）に別々に注射した。血漿の試料を、０時間（投与前）、０．５、１、２、
４、８、１２、２４、３２、４８、および５６時間の時点で採取し、次いで直ちに凍結さ
せた。試料を、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃａｔ
＃ ＥＫ−０５５−０８）によって、ヒトＰＴＨ（１−３４）について分析した。結果は
、ＰＴＨとＰＴＨ−担体コンジュゲートとの薬物動態プロファイルの有意差を示す（図１
０）。
図１０は、皮下注射されたＰＴＨの薬物動態プロファイルが、Ｃ２５およびＣ３位置で
ビタミンＤにコンジュゲートされた場合に向上したことを示す。ただし、Ｃ３位置に対す
るコンジュゲーションを用いて、最良の薬物動態プロファイルが得られた。薬物動態パラ
メータは、Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いてデータ
を分析することによって得られた。非修飾ＰＴＨについての信頼できるパラメータは、野
生型ペプチドの不十分なバイオアベイラビリティおよび内在性ラットＰＴＨからのバック
グラウンドＰＴＨシグナルが原因で、得ることができなかった。しかし、ＰＴＨ（１−３
４）の半減期は、ラットの皮下に投与された場合、１５から６０分であることが以前に報
告されている（Ｆｒｏｌｉｃｋ、Ｂｏｎｅ ３３：３７２−３７９（２００３）およびＳ
ａｔｔｅｒｗｈｉｔｅ、Ｃａｌｃｉｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．８７：４８５−４９２（
２０１０））。したがって、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨの２．２時間
およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨの６．９時間という半減期は、非修飾
ＰＴＨと比較して、少なくともそれぞれ２倍および７倍の向上に相当する。同様に、ビタ
ミンＤ−コンジュゲートは、１０倍高いＣｍａｘ値によって示される通りのバイオアベイ
ラビリティの向上およびそれぞれＣ２５およびＣ３コンジュゲートについての少なくとも
５倍および１５倍のＡＵＣ値の向上を示す。
ビタミンＤにコンジュゲートされた場合に向上したことを示す。ただし、Ｃ３位置に対す
るコンジュゲーションを用いて、最良の薬物動態プロファイルが得られた。薬物動態パラ
メータは、Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いてデータ
を分析することによって得られた。非修飾ＰＴＨについての信頼できるパラメータは、野
生型ペプチドの不十分なバイオアベイラビリティおよび内在性ラットＰＴＨからのバック
グラウンドＰＴＨシグナルが原因で、得ることができなかった。しかし、ＰＴＨ（１−３
４）の半減期は、ラットの皮下に投与された場合、１５から６０分であることが以前に報
告されている（Ｆｒｏｌｉｃｋ、Ｂｏｎｅ ３３：３７２−３７９（２００３）およびＳ
ａｔｔｅｒｗｈｉｔｅ、Ｃａｌｃｉｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．８７：４８５−４９２（
２０１０））。したがって、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨの２．２時間
およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−Ｃ−ＰＴＨの６．９時間という半減期は、非修飾
ＰＴＨと比較して、少なくともそれぞれ２倍および７倍の向上に相当する。同様に、ビタ
ミンＤ−コンジュゲートは、１０倍高いＣｍａｘ値によって示される通りのバイオアベイ
ラビリティの向上およびそれぞれＣ２５およびＣ３コンジュゲートについての少なくとも
５倍および１５倍のＡＵＣ値の向上を示す。
実施例９：Ｃ３位置で非ホルモン性ビタミンＤにカップリングされた抗体の調製
この実施例では、抗体の半減期およびバイオアベイラビリティを延長するために、Ｖｉ
ｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳ担体（国際公開第２０１３１７２９６７号パンフレ
ットに記載されている通り）およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体（化
合物ＶＩＩ）をインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））にコンジュゲートさ
せた。Ｒｅｍｉｃａｄｅを使用して、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性
脊椎炎、および尋常性乾癬を治療する。
この実施例では、抗体の半減期およびバイオアベイラビリティを延長するために、Ｖｉ
ｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳ担体（国際公開第２０１３１７２９６７号パンフレ
ットに記載されている通り）およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体（化
合物ＶＩＩ）をインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））にコンジュゲートさ
せた。Ｒｅｍｉｃａｄｅを使用して、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性
脊椎炎、および尋常性乾癬を治療する。
適切な塩を伴って凍結乾燥粉末として販売されているインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａ
ｄｅ（登録商標））（Ｈａｎｎａｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を、水で再懸濁
して１０ｍｇ／ｍＬの濃度とした。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳまたはＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体を、ＤＭＳＯに、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で再
懸濁した。次いで、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳとインフリキシマブを、
担体とインフリキシマブのモル比５：１、１０：１、または３０：１で混合した。本発明
の治療用化合物・担体コンジュゲートは典型的には、少なくとも１個の担体分子を有し、
治療用化合物にそれぞれ付着された１〜１０個の担体分子であり得る。ＮＨＳ型の担体を
使用することによって、２個以上の担体を、治療用タンパク質に付着させることができる
。これは、反応における担体と標的治療薬のモル比を変えることによって制御することが
できる。この実施例では、１〜４担体の標的分配を使用した。これは、２つの異なるモル
比を試験すること、および得られたコンジュゲートを質量分析によって検査することによ
って確認した。Ｃ２５担体は、約１〜２：１の比で、抗体にコンジュゲートした。Ｃ３担
体は、約１：１の比で、抗体にコンジュゲートした。
ｄｅ（登録商標））（Ｈａｎｎａｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を、水で再懸濁
して１０ｍｇ／ｍＬの濃度とした。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳまたはＶｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体を、ＤＭＳＯに、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で再
懸濁した。次いで、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳとインフリキシマブを、
担体とインフリキシマブのモル比５：１、１０：１、または３０：１で混合した。本発明
の治療用化合物・担体コンジュゲートは典型的には、少なくとも１個の担体分子を有し、
治療用化合物にそれぞれ付着された１〜１０個の担体分子であり得る。ＮＨＳ型の担体を
使用することによって、２個以上の担体を、治療用タンパク質に付着させることができる
。これは、反応における担体と標的治療薬のモル比を変えることによって制御することが
できる。この実施例では、１〜４担体の標的分配を使用した。これは、２つの異なるモル
比を試験すること、および得られたコンジュゲートを質量分析によって検査することによ
って確認した。Ｃ２５担体は、約１〜２：１の比で、抗体にコンジュゲートした。Ｃ３担
体は、約１：１の比で、抗体にコンジュゲートした。
インフリキシマブおよびインフリキシマブＮＨＳ−担体コンジュゲートを、４０ｋＤａ
カットオフを有する脱塩カラム（Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ）の使用によって、コンジュゲートされていない担体から分離した。ＭＡＬＤＩ−Ｔ
ＯＦ質量分析を使用して、反応におけるインフリキシマブのインタクト質量を算出した。
結果は、非修飾インフリキシマブが、大部分は１４９ｋＤａの質量を有していたことを示
す。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳ担体の１から３の平均付着部分が、抗体に
付着し、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体の１から２が、抗体に付着した
。
カットオフを有する脱塩カラム（Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ）の使用によって、コンジュゲートされていない担体から分離した。ＭＡＬＤＩ−Ｔ
ＯＦ質量分析を使用して、反応におけるインフリキシマブのインタクト質量を算出した。
結果は、非修飾インフリキシマブが、大部分は１４９ｋＤａの質量を有していたことを示
す。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２ｋ−ＮＨＳ担体の１から３の平均付着部分が、抗体に
付着し、ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ１．３ｋ−ＮＨＳ担体の１から２が、抗体に付着した
。
実施例１０：非ホルモン性ビタミンＤにコンジュゲートされたＧＬＰ−１の調製および特
徴付け
合成のＧＬＰ−１（７−３７）ペプチド（配列番号１９、以下ではＧＬＰ−１と称する
）は、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ、カタログ＃Ｈ−９５６０）から購入し、
追加のＣ−末端システイン残基を有するＧＬＰ−１−Ｃ（配列番号２０）は、Ｂｉｏｐｅ
ｐｔｅｋ（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）によってカスタム合成された。これを、実施例１およ
び３に記載した通りのビタミンＤ−ＰＥＧ−マレイミド担体にコンジュゲートした。コン
ジュゲーションは、ＤＭＳＯに１０ｍｇ／ｍＬで溶解した、実施例１のチオール反応性部
分（ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド）または実施例３の化合物ＶＩ（Ｖｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に
〜１ｍｇ／ｍＬの濃度で遊離のシステインを含有するＧＬＰ−１−Ｃペプチドと、担体対
ペプチドのモル比１．３：１で、混合することによって実現した。この反応は、室温で１
時間、進行させた。コンジュゲートされたペプチドを、未反応の成分から、イオン交換ク
ロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅによって確認した。次いで、ＧＬＰ−１ペプチドおよびＧＬＰ−１−担体コンジュゲー
トの緩衝液をＰＢＳに交換した。
徴付け
合成のＧＬＰ−１（７−３７）ペプチド（配列番号１９、以下ではＧＬＰ−１と称する
）は、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ、カタログ＃Ｈ−９５６０）から購入し、
追加のＣ−末端システイン残基を有するＧＬＰ−１−Ｃ（配列番号２０）は、Ｂｉｏｐｅ
ｐｔｅｋ（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）によってカスタム合成された。これを、実施例１およ
び３に記載した通りのビタミンＤ−ＰＥＧ−マレイミド担体にコンジュゲートした。コン
ジュゲーションは、ＤＭＳＯに１０ｍｇ／ｍＬで溶解した、実施例１のチオール反応性部
分（ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド）または実施例３の化合物ＶＩ（Ｖｉ
ｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−マレイミド）を、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液中に
〜１ｍｇ／ｍＬの濃度で遊離のシステインを含有するＧＬＰ−１−Ｃペプチドと、担体対
ペプチドのモル比１．３：１で、混合することによって実現した。この反応は、室温で１
時間、進行させた。コンジュゲートされたペプチドを、未反応の成分から、イオン交換ク
ロマトグラフィーによって分離した。コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅによって確認した。次いで、ＧＬＰ−１ペプチドおよびＧＬＰ−１−担体コンジュゲー
トの緩衝液をＰＢＳに交換した。
ＧＬＰ−１ペプチド−担体の受容体結合活性の評価
いくつかの実施態様では、ＧＬＰ−１ペプチドの活性は、担体にコンジュゲートされる
場合、非修飾ペプチドとほぼ同じであった。ＧＬＰ−１とＧＬＰ−１−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−
ＶｉｔＤを、細胞に基づく受容体アゴニスト分析を使用して、受容体結合、およびＧＬＰ
１ＲすなわちＧＬＰ−１受容体の活性化（アゴニスト活性）について比較した：ヒトＧＬ
Ｐ−１受容体（ＧＬＰ１Ｒ、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）
を安定的に発現するＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）細胞を、化学発光シグナル検出を
用いるＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器上でＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録
商標）検出試薬カクテルを使用して、試験化合物への曝露時のβ−アレスチンの動員につ
いてモニタリングした。コンジュゲートされていないＧＬＰ−１についてのＥＣ５０値は
、０．８２μＭであった。ＧＬＰ−１−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤについての
ＥＣ５０値は、０．５１μＭであった。ＧＬＰ−１−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ
についてのＥＣ５０値は、０．５２μＭであった。したがって、ＧＬＰ−１のビタミンＤ
へのコンジュゲーションは、非修飾ＧＬＰ−１ペプチドとほぼ同じまたはより優れた受容
体活性をもたらした。
いくつかの実施態様では、ＧＬＰ−１ペプチドの活性は、担体にコンジュゲートされる
場合、非修飾ペプチドとほぼ同じであった。ＧＬＰ−１とＧＬＰ−１−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−
ＶｉｔＤを、細胞に基づく受容体アゴニスト分析を使用して、受容体結合、およびＧＬＰ
１ＲすなわちＧＬＰ−１受容体の活性化（アゴニスト活性）について比較した：ヒトＧＬ
Ｐ−１受容体（ＧＬＰ１Ｒ、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）
を安定的に発現するＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）細胞を、化学発光シグナル検出を
用いるＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器上でＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録
商標）検出試薬カクテルを使用して、試験化合物への曝露時のβ−アレスチンの動員につ
いてモニタリングした。コンジュゲートされていないＧＬＰ−１についてのＥＣ５０値は
、０．８２μＭであった。ＧＬＰ−１−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（２５）−ＶｉｔＤについての
ＥＣ５０値は、０．５１μＭであった。ＧＬＰ−１−Ｃ−ＰＥＧ２Ｋ−（３）−ＶｉｔＤ
についてのＥＣ５０値は、０．５２μＭであった。したがって、ＧＬＰ−１のビタミンＤ
へのコンジュゲーションは、非修飾ＧＬＰ−１ペプチドとほぼ同じまたはより優れた受容
体活性をもたらした。
実施例１１：Ｃ３およびＣ２５位置で非ホルモン性ビタミンＤにコンジュゲートされたＦ
ＧＦ２１の調製および特徴付け
修飾されたＦＧＦ２１を、実施例１および３に記載した通りにビタミンＤ−ＰＥＧ−マ
レイミド担体にコンジュゲートした。以下に示す通り、ＦＧＦ２１−担体組成物は、非修
飾ＦＧＦ２１と比較した場合に、有意に向上した薬物動態特性を提供した。どちらのコン
ジュゲートも、非修飾ＦＧＦ２１に勝る有意な向上を示したが、Ｃ３位置でのコンジュゲ
ーションは、Ｃ２５位置でのコンジュゲーションに勝る有意な向上を示した。まとめると
、この実施例は、ＦＧＦ２１−ＶｉｔＤコンジュゲートが、糖尿病を含めた、ＦＧＦ２１
治療の恩恵を受けるであろう疾患の治療のための重要な治療用化合物であることを示す。
ＧＦ２１の調製および特徴付け
修飾されたＦＧＦ２１を、実施例１および３に記載した通りにビタミンＤ−ＰＥＧ−マ
レイミド担体にコンジュゲートした。以下に示す通り、ＦＧＦ２１−担体組成物は、非修
飾ＦＧＦ２１と比較した場合に、有意に向上した薬物動態特性を提供した。どちらのコン
ジュゲートも、非修飾ＦＧＦ２１に勝る有意な向上を示したが、Ｃ３位置でのコンジュゲ
ーションは、Ｃ２５位置でのコンジュゲーションに勝る有意な向上を示した。まとめると
、この実施例は、ＦＧＦ２１−ＶｉｔＤコンジュゲートが、糖尿病を含めた、ＦＧＦ２１
治療の恩恵を受けるであろう疾患の治療のための重要な治療用化合物であることを示す。
ＦＧＦ２１は、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、精製し、次の通りに担体にコンジュゲ
ートした。ＦＧＦ２１のアミノ末端の近くに遊離のシステイン残基を有する修飾されたＦ
ＧＦ２１は、担体への部位特異的なカップリングを可能にする。精製しやすくするために
６−Ｈｉｓタグを添加した。修飾されたＦＧＦ２１コード配列（配列番号２１）は、Ｅ．
ｃｏｌｉにおける発現のために計算上最適化されたコドンであった。遺伝子は、ＤＮＡ２
．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）によって化学的に合成し、ＩＰＴＧ誘導性Ｔ５プロ
モーターとカナマイシン耐性遺伝子とを含有するＩＰ−Ｆｒｅｅ発現ベクターｐＤ４４１
−ＳＲにクローン化した。プラスミドを、Ｓｈｕｆｆｌｅ（登録商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ
Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ Ｃａｔ
．Ｎｏ：Ｃ３０２８Ｈ）に形質転換した。細胞を、対数期半ばまで３０℃で培養し、次い
で、０．１ｍＭ ＩＰＴＧを用いて２５℃で４時間誘導させた。細胞を回収し、溶解させ
、上清を収集した。ＦＧＦ２１タンパク質（配列番号２２）を、固定化金属親和性クロマ
トグラフィー（ＩＭＡＣ）樹脂を使用して精製し、アニオン交換クロマトグラフィーによ
って最終精製した。
ートした。ＦＧＦ２１のアミノ末端の近くに遊離のシステイン残基を有する修飾されたＦ
ＧＦ２１は、担体への部位特異的なカップリングを可能にする。精製しやすくするために
６−Ｈｉｓタグを添加した。修飾されたＦＧＦ２１コード配列（配列番号２１）は、Ｅ．
ｃｏｌｉにおける発現のために計算上最適化されたコドンであった。遺伝子は、ＤＮＡ２
．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）によって化学的に合成し、ＩＰＴＧ誘導性Ｔ５プロ
モーターとカナマイシン耐性遺伝子とを含有するＩＰ−Ｆｒｅｅ発現ベクターｐＤ４４１
−ＳＲにクローン化した。プラスミドを、Ｓｈｕｆｆｌｅ（登録商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ
Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ Ｃａｔ
．Ｎｏ：Ｃ３０２８Ｈ）に形質転換した。細胞を、対数期半ばまで３０℃で培養し、次い
で、０．１ｍＭ ＩＰＴＧを用いて２５℃で４時間誘導させた。細胞を回収し、溶解させ
、上清を収集した。ＦＧＦ２１タンパク質（配列番号２２）を、固定化金属親和性クロマ
トグラフィー（ＩＭＡＣ）樹脂を使用して精製し、アニオン交換クロマトグラフィーによ
って最終精製した。
担体とのコンジュゲーションは、実施例１のチオール反応性部分ＶｉｔＤ−（２５）−
ＰＥＧ２Ｋ−マレイミドまたは実施例３の化合物ＶＩ：ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−
マレイミドを混合することによって実現した。簡単に言うと、担体を、遊離のシステイン
を含有する精製されたＦＧＦ２１タンパク質と共に、担体対ＦＧＦ２１のモル比３：１で
、ＤＭＳＯに１０ｍｇ／ｍＬで溶解した。この反応は、室温で１時間、進行させた。コン
ジュゲートされたペプチドを、未反応の成分から、製造業者のプロトコルに従ってＺｅｂ
ａ（商標）スピン脱塩カラム、７Ｋ ＭＷＣＯ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｃａｔ．Ｎｏ．８９８８２）を使用することによって分離した。
コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、ＦＧＦ
２１、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１、およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ
２Ｋ−ＦＧＦ２１の緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２
ミクロンフィルターを使用して濾過滅菌した。
ＰＥＧ２Ｋ−マレイミドまたは実施例３の化合物ＶＩ：ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−
マレイミドを混合することによって実現した。簡単に言うと、担体を、遊離のシステイン
を含有する精製されたＦＧＦ２１タンパク質と共に、担体対ＦＧＦ２１のモル比３：１で
、ＤＭＳＯに１０ｍｇ／ｍＬで溶解した。この反応は、室温で１時間、進行させた。コン
ジュゲートされたペプチドを、未反応の成分から、製造業者のプロトコルに従ってＺｅｂ
ａ（商標）スピン脱塩カラム、７Ｋ ＭＷＣＯ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｃａｔ．Ｎｏ．８９８８２）を使用することによって分離した。
コンジュゲーションおよび純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。次いで、ＦＧＦ
２１、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１、およびＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ
２Ｋ−ＦＧＦ２１の緩衝液をＰＢＳに交換し、動物研究における使用のために、０．２２
ミクロンフィルターを使用して濾過滅菌した。
ＦＧＦ２１−担体コンジュゲートの受容体結合活性の評価
いくつかの実施態様では、ＦＧ２１の活性は、担体にコンジュゲートされる場合、非修
飾タンパク質と実質的に同じであった。ＦＧＦ２１とＶｉｔＤ−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１
コンジュゲートを、細胞に基づく受容体アゴニスト分析（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商
標）Ｕ２ＯＳ ＦＧＦＲ１−β−Ｋｌｏｔｈｏ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ａｓｓａｙ、Ｄ
ｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ、Ｃａｔ．Ｎｏ．９３−０９４３
Ｃ３）を使用して、受容体結合およびＦＧＦＲ１の活性化について比較した。ＰａｔｈＨ
ｕｎｔｅｒ（登録商標）細胞は、ヒトＦＧＦ２１受容体（ＦＧＦＲ１）を安定的に発現す
る。これらを、化学発光シグナル検出を用いるＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏ
ｎ機器上でＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）検出試薬カクテルを使用して、試験化合物
への曝露後のｃｏ−受容体、β−Ｋｌｏｔｈｏの動員についてモニタリングした。コンジ
ュゲートされていないＦＧＦ２１についてのＥＣ５０値は、０．１６μｇ／ｍｌであった
。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１についてのＥＣ５０値は、０．１３μｇ
／ｍｌであった。ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１についてのＥＣ５０値は、
０．４０μｇ／ｍｌであった。したがって、ＦＧＦ２１コンジュゲートは、非修飾ＦＧＦ
２１タンパク質とほぼ同じ、またはそれ以上の受容体活性を保持していた。
いくつかの実施態様では、ＦＧ２１の活性は、担体にコンジュゲートされる場合、非修
飾タンパク質と実質的に同じであった。ＦＧＦ２１とＶｉｔＤ−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１
コンジュゲートを、細胞に基づく受容体アゴニスト分析（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商
標）Ｕ２ＯＳ ＦＧＦＲ１−β−Ｋｌｏｔｈｏ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ａｓｓａｙ、Ｄ
ｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐ．，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ、Ｃａｔ．Ｎｏ．９３−０９４３
Ｃ３）を使用して、受容体結合およびＦＧＦＲ１の活性化について比較した。ＰａｔｈＨ
ｕｎｔｅｒ（登録商標）細胞は、ヒトＦＧＦ２１受容体（ＦＧＦＲ１）を安定的に発現す
る。これらを、化学発光シグナル検出を用いるＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏ
ｎ機器上でＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）検出試薬カクテルを使用して、試験化合物
への曝露後のｃｏ−受容体、β−Ｋｌｏｔｈｏの動員についてモニタリングした。コンジ
ュゲートされていないＦＧＦ２１についてのＥＣ５０値は、０．１６μｇ／ｍｌであった
。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１についてのＥＣ５０値は、０．１３μｇ
／ｍｌであった。ＶｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１についてのＥＣ５０値は、
０．４０μｇ／ｍｌであった。したがって、ＦＧＦ２１コンジュゲートは、非修飾ＦＧＦ
２１タンパク質とほぼ同じ、またはそれ以上の受容体活性を保持していた。
ＦＧＦ２１コンジュゲートの薬物動態
Ｓｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットにおけるＦＧＦ２１コンジュゲートの薬物動態を
決定した。非修飾ＦＧＦ２１、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１、およびＶ
ｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１を比較した。簡単に言うと、０．１ｍｇ／ｋｇ
の各分子を、皮下（ｓｃ）注射によって、ラット（ｎ＝３）に別々に注射した。血漿の試
料を、０時間（投与前）、０．５、１、２、４、８、２４、３２、４８、および５６時間
の時点で採取し、直ちに凍結させた。試料を、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、ヒト
ＦＧＦ２１について分析した（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＥＺＨＦＧＦ２１−
１９Ｋ）。結果は、コンジュゲートされていないＦＧＦ２１とＦＧＦ２１−担体コンジュ
ゲートとの薬物動態プロファイルの有意差を示す（図１１）。皮下注射されたＦＧＦ２１
の薬物動態プロファイルは、Ｃ２５およびＣ３位置でビタミンＤにコンジュゲートされた
場合に向上した。ただし、Ｃ３位置に対するコンジュゲーションを用いて、最良の薬物動
態プロファイルが得られた。薬物動態パラメータは、Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（Ｔ
ｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いてデータを分析することによって得られ、これを表３に
列挙する。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１の５．３時間およびＶｉｔＤ−
（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１の１１．５時間という半減期（ｔ１／２）は、非修飾Ｆ
ＧＦ２１と比較して、それぞれ４．１倍および８．８倍の向上に相当する。同様に、ビタ
ミンＤコンジュゲートは、およそ２倍高いＣｍａｘ値によって示される通りのバイオアベ
イラビリティの向上およびそれぞれＣ２５およびＣ３コンジュゲートについての７．２倍
および１２．０倍のＡＵＣ値の向上を示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）および終末相の速度
定数（Ｌｚ）値の向上も観察された。
Ｓｐｒａｇｕｅ ＤａｗｌｅｙラットにおけるＦＧＦ２１コンジュゲートの薬物動態を
決定した。非修飾ＦＧＦ２１、ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１、およびＶ
ｉｔＤ−（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１を比較した。簡単に言うと、０．１ｍｇ／ｋｇ
の各分子を、皮下（ｓｃ）注射によって、ラット（ｎ＝３）に別々に注射した。血漿の試
料を、０時間（投与前）、０．５、１、２、４、８、２４、３２、４８、および５６時間
の時点で採取し、直ちに凍結させた。試料を、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、ヒト
ＦＧＦ２１について分析した（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＥＺＨＦＧＦ２１−
１９Ｋ）。結果は、コンジュゲートされていないＦＧＦ２１とＦＧＦ２１−担体コンジュ
ゲートとの薬物動態プロファイルの有意差を示す（図１１）。皮下注射されたＦＧＦ２１
の薬物動態プロファイルは、Ｃ２５およびＣ３位置でビタミンＤにコンジュゲートされた
場合に向上した。ただし、Ｃ３位置に対するコンジュゲーションを用いて、最良の薬物動
態プロファイルが得られた。薬物動態パラメータは、Ｋｉｎｅｔｉｃａソフトウェア（Ｔ
ｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いてデータを分析することによって得られ、これを表３に
列挙する。ＶｉｔＤ−（２５）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１の５．３時間およびＶｉｔＤ−
（３）−ＰＥＧ２Ｋ−ＦＧＦ２１の１１．５時間という半減期（ｔ１／２）は、非修飾Ｆ
ＧＦ２１と比較して、それぞれ４．１倍および８．８倍の向上に相当する。同様に、ビタ
ミンＤコンジュゲートは、およそ２倍高いＣｍａｘ値によって示される通りのバイオアベ
イラビリティの向上およびそれぞれＣ２５およびＣ３コンジュゲートについての７．２倍
および１２．０倍のＡＵＣ値の向上を示す。平均滞留時間（ＭＲＴ）および終末相の速度
定数（Ｌｚ）値の向上も観察された。
例示的な配列
配列番号１（アペリン）
ＱＲＰＲＬＳＨＫＧＰＭＰＦ
配列番号２（ヒトｗｔ Ｏｃｔ−ｈグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲ
配列番号３（ヒトＯｃｔ−ｈグレリン−Ｃ）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号４（ヒトＤａｐ−ｈグレリン）
ＧＳＳ（Ｏｃｔ−Ｄａｐ）ＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号５（ヒトＧＳＹ−ｈグレリン）
ＧＳＹＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号６（ラットｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲ
配列番号７（ラットＯｃｔ−ｒグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号８（ラットＤａｐ−ｒグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｄａｐ）ＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号９（ラットＧＳＷ−ｒグレリン）
ＧＳＷＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号１０（ＰＴＨ（１−３４））
ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ
配列番号１１（ヒトインスリンＡ鎖）
ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ
配列番号１２：（ヒトインスリンＢ鎖）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ
配列番号１６（Ｃ−アペリン）
ＣＱＲＰＲＬＳＨＫＧＰＭＰＦ
配列番号１７（ＰＴＨ−Ｃ）
ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＣ
配列番号１８（Ｃ−ＰＴＨ）
ＣＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ
配列番号１９（ＧＬＰ−１（７−３７））
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ Ｇ
配列番号２０（ＧＬＰ−１−Ｃ）
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧＣ
配列番号１（アペリン）
ＱＲＰＲＬＳＨＫＧＰＭＰＦ
配列番号２（ヒトｗｔ Ｏｃｔ−ｈグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲ
配列番号３（ヒトＯｃｔ−ｈグレリン−Ｃ）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号４（ヒトＤａｐ−ｈグレリン）
ＧＳＳ（Ｏｃｔ−Ｄａｐ）ＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号５（ヒトＧＳＹ−ｈグレリン）
ＧＳＹＦＬＳＰＥＨＱＲＶＱＱＲＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号６（ラットｗｔ Ｏｃｔ−ｒグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲ
配列番号７（ラットＯｃｔ−ｒグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｓ）ＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号８（ラットＤａｐ−ｒグレリン）
ＧＳ（Ｏｃｔ−Ｄａｐ）ＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号９（ラットＧＳＷ−ｒグレリン）
ＧＳＷＦＬＳＰＥＨＱＫＡＱＱＰＫＥＳＫＫＰＰＡＫＬＱＰＲＣ
配列番号１０（ＰＴＨ（１−３４））
ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ
配列番号１１（ヒトインスリンＡ鎖）
ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ
配列番号１２：（ヒトインスリンＢ鎖）
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ
ＣＱＲＰＲＬＳＨＫＧＰＭＰＦ
配列番号１７（ＰＴＨ−Ｃ）
ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＣ
配列番号１８（Ｃ−ＰＴＨ）
ＣＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ
配列番号１９（ＧＬＰ−１（７−３７））
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ Ｇ
配列番号２０（ＧＬＰ−１−Ｃ）
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧＣ
本明細書に開示したまたは言及したすべての刊行物および特許文献の全体を、参照によ
って組み込む。先の記載は、例示および説明の目的でのみ提供されている。この記載は、
本発明を、開示された厳密な形態に限定することを意図していない。本発明の範囲は、本
明細書に添付された特許請求の範囲によって定義されるものとする。
って組み込む。先の記載は、例示および説明の目的でのみ提供されている。この記載は、
本発明を、開示された厳密な形態に限定することを意図していない。本発明の範囲は、本
明細書に添付された特許請求の範囲によって定義されるものとする。
Claims (78)
- 非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素で治療用化合物にコンジュゲートされた
非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物である標的指向基を含む、担体−
薬物コンジュゲート - 前記非ホルモン性ビタミンＤが、１位炭素ではヒドロキシル化されていない、請求項１
に記載の担体−薬物コンジュゲート。 - 前記標的指向基が、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、
ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロ
ブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリマー
、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からなる群から選択されるスカフォ
ールドを介して前記治療用化合物にコンジュゲートされる、請求項１に記載の担体−薬物
コンジュゲート。 - スカフォールドを介して非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素で治療用化合物
にコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝産物である標
的指向基を含む担体−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物。 - 前記担体が、循環中の前記治療用化合物の吸収、バイオアベイラビリティ、または半減
期を増大させる、請求項４に記載の医薬組成物。 - 前記非ホルモン性ビタミンＤが、１位炭素ではヒドロキシル化されていない、請求項４
に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミ
ン、ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫
グロブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリ
マー、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からなる群から選択される、請
求項５に記載の医薬組成物。 - 前記治療用化合物が、小分子、化学物質、核酸、核酸誘導体、ペプチド、ペプチド誘導
体、天然に存在するタンパク質、天然に存在しないタンパク質、ペプチド−核酸（ＰＮＡ
）、ステープルペプチド、モルホリノ、ホスホロジアミデートモルホリノ、アンチセンス
薬、ＲＮＡに基づくサイレンシング薬、アプタマー、糖タンパク質、酵素、ホルモン、サ
イトカイン、インターフェロン、成長因子、血液凝固因子、抗体、抗体断片、抗体誘導体
、毒素をコンジュゲートさせた抗体、抗体−薬物コンジュゲート、代謝エフェクター、鎮
痛薬、解熱薬、抗炎症剤、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌薬、筋骨格薬、心血
管治療薬、腎薬物、肺薬物、消化器疾患薬、血液系作用薬、泌尿器薬物、代謝薬物、肝薬
物、神経薬、抗糖尿病薬、抗癌薬、胃の状態を治療するための薬物、結腸の状態を治療す
るための薬物、皮膚の状態を治療するための薬物、およびリンパ状態を治療するための薬
物からなる群から選択される、請求項４から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号１または１６との少なくとも９０％の配列同一性を有す
るアミノ酸配列を含む、アペリン活性を有するタンパク質である、請求項８に記載の医薬
組成物。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項９に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項１０に記載の医薬
組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号２、３、４、および５からなる群から選択されるタンパ
ク質との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、グレリン活性を有
するタンパク質である、請求項８に記載の医薬組成物。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項１２に記載の医薬組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号２のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項１３
に記載の医薬組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号３のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項１３
に記載の医薬組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項１３
に記載の医薬組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項１３
に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項１３に記載の医薬
組成物。 - 前記治療用化合物が、配列番号１０または１７との少なくとも９０％の配列同一性を有
するアミノ酸配列を含む、ＰＴＨ活性を有するタンパク質である、請求項８に記載の医薬
組成物。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項１９に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項２０に記載の医薬
組成物。 - 前記治療用化合物が、インスリン活性を有するタンパク質であって、配列番号１１また
は１２との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するペプチドの二量
体を含むタンパク質である、請求項８に記載の医薬組成物。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項２２に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項２３に記載の医薬
組成物。 - 前記治療用化合物が、抗体である、請求項８に記載の医薬組成物。
- 前記抗体が、配列番号１３との少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質に、
高い親和性で結合する、請求項２５に記載の医薬組成物。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項２６に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項２７に記載の医薬
組成物。 - 前記治療用化合物が、ＲＮＡ分子である、請求項８に記載の医薬組成物。
- 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項２９に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項３０に記載の医薬
組成物。 - 治療用化合物を必要としている患者を治療する方法であって、請求項４から７のいずれ
か一項に記載の有効量の医薬組成物を投与することを含む方法。 - 前記治療用化合物が、小分子、化学物質、核酸、核酸誘導体、ペプチド、ペプチド誘導
体、天然に存在するタンパク質、天然に存在しないタンパク質、ペプチド−核酸（ＰＮＡ
）、ステープルペプチド、モルホリノ、ホスホロジアミデートオリゴヌクレオチド、アン
チセンス薬、ＲＮＡに基づくサイレンシング薬、アプタマー、糖タンパク質、酵素、ホル
モン、サイトカイン、インターフェロン、成長因子、血液凝固因子、抗体、抗体断片、抗
体誘導体、毒素をコンジュゲートさせた抗体、抗体−薬物コンジュゲート、代謝エフェク
ター、鎮痛薬、解熱薬、抗炎症剤、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌薬、筋骨格
薬、心血管治療薬、腎薬物、肺薬物、消化器疾患薬、血液系作用薬、泌尿器薬物、代謝薬
物、肝薬物、神経薬、抗糖尿病薬、抗癌薬、胃の状態を治療するための薬物、結腸の状態
を治療するための薬物、皮膚の状態を治療するための薬物、およびリンパ状態を治療する
ための薬物からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。 - 前記治療用化合物が、配列番号１または１６との少なくとも９０％の配列同一性を有す
るアミノ酸配列を含む、アペリン活性を有するタンパク質である、請求項３３に記載の方
法。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項３４に記載の方法。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項３５に記載の方法
。 - 前記治療用化合物が、配列番号２、３、４、および５からなる群から選択されるタンパ
ク質との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、グレリン活性を有
するタンパク質である、請求項３３に記載の方法。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項３７に記載の方法。 - 前記治療用化合物が、配列番号２のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項３８
に記載の方法。 - 前記治療用化合物が、配列番号３のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項３８
に記載の方法。 - 前記治療用化合物が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項３８
に記載の方法。 - 前記治療用化合物が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質である、請求項３８
に記載の方法。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項３８に記載の方法
。 - 前記治療用化合物が、配列番号１０または１７との少なくとも９０％の配列同一性を有
するアミノ酸配列を含む、ＰＴＨ活性を有するタンパク質である、請求項３３に記載の方
法。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項４４に記載の方法。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項４５に記載の方法
。 - 前記治療用化合物が、配列番号１１との少なくとも９０％の配列同一性または配列番号
１２との少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、インスリン活性を
有するタンパク質である、請求項３３に記載の方法。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項４７に記載の方法。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項４８に記載の医薬
組成物。 - 前記治療用化合物が、抗体である、請求項３３に記載の方法。
- 前記抗体が、配列番号１３との少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質に、
高い親和性で結合する、請求項５０に記載の方法。 - 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項５１に記載の方法。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項５２に記載の方法
。 - 前記治療用化合物が、ＲＮＡ分子である、請求項３３に記載の方法。
- 前記標的指向基が、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤである、請求
項５４に記載の方法。 - 前記スカフォールドが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項５５に記載の方法
。 - 前記医薬組成物が、経皮、経口、非経口、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、関節
滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、頭蓋内注射、注入、吸入、眼、局所、直腸内、経鼻
、頬側、舌下、膣内、または埋め込み式リザーバー様式によって前記患者に送達される、
請求項１９に記載の方法。 - 前記医薬品を必要としている患者の治療のための前記医薬品の製造のための、請求項４
から７のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。 - 請求項４から７のいずれか一項に記載の医薬組成物を製造する方法であって、前記標的
指向基と前記治療用化合物とをコンジュゲートさせることを含み、前記コンジュゲートス
テップがカップリング基を利用する方法。 - 前記カップリング基が、アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオ
ール基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロ
モアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳＭＣＣ基、カルボジイミド基、二官能性クロスリン
カー、ＮＨＳ−マレイミド、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求
項５９に記載の方法。 - 前記組成物が、チオール結合、アミド結合、オキシム結合、ヒドラゾン結合、およびチ
アゾリジノン結合からなる群から選択される結合を含有する担体−薬物化合物を含む、請
求項５９から得られる医薬組成物。 - 前記コンジュゲートステップが、付加環化反応によって実現される、請求項５９に記載
の方法。 - 式Ｉ
Ｂは、３位炭素でＬ１にコンジュゲートした非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはそ
の代謝産物である標的指向基であり；
Ｓは、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（プロピレ
ングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロブリン、アミノ
酸、核酸、グリカン、反応性リンカー含有修飾基、ポリ乳酸、水溶性ポリマー、低分子炭
素鎖リンカー、または追加の治療的部分を含むスカフォールド部分であり；
Ｃは、アミン反応性の基、チオール反応性の基、マレイミド基、チオール基、ジスルフィ
ド基、アルデヒド基、ＮＨＳ−エステル基、４−ニトロフェニルエステル、アシルイミダ
ゾール、ハロアセチル基、ヨードアセチル基、ブロモアセチル基、ＳＭＣＣ基、スルホＳ
ＭＣＣ基、カルボジイミド基、および二官能性クロスリンカー（ＮＨＳ−マレイミドなど
）、またはこれらの組み合わせであり；
Ｌ１およびＬ２は、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＨＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ
）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−
、および−ＮＨ−から独立に選択されるリンカーであり；
Ｌ３は、−（ＣＨ２）ｏ−であり
ｎは、０〜３の整数であり；
ｏは、０〜３の整数である）
を含む医薬担体。 - 式Ｖ
- 式ＶＩ
- 式ＶＩＩ
- 以下：
ａ．治療用化合物、
ｂ．安定的に付着されたスカフォールド、
ｃ．３位炭素でコンジュゲートされた非ホルモン性ビタミンＤ、類似体、またはその代謝
産物である標的指向基
（ここでは、第１の試験対象への投与後に、前記治療用化合物は、複数の時点で採取され
た血液試料の前記ＥＬＩＳＡ分析によって測定される、前記安定的に付着されたスカフォ
ールド部分および標的指向基を有しない、第２の試験対象に投与された前記治療用化合物
の半減期よりも長い半減期（前記複数の時点で採取された血液試料のＥＬＩＳＡ分析によ
って測定される）を有する）
を含む医薬組成物。 - 前記第１および第２の対象への前記投与が、皮下注射によって実現される、請求項６７
に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドおよび標的指向基に、安定的に付着された前記治療用化合物が、機
能分析によって測定された場合に、前記スカフォールドおよび標的指向基に安定的に付着
されていない前記治療用化合物と実質的に同じ活性を保持する、請求項６７に記載の医薬
組成物。 - スカフォールド質量範囲が、１００Ｄａ．から２０，０００Ｄａ．、２００Ｄａ．から
１５，０００Ｄａ．、３００Ｄａ．から１０，０００Ｄａ．、４００Ｄａ．から９，００
０Ｄａ．、５００Ｄａ．から５，０００Ｄａ．、６００Ｄａ．から２，０００Ｄａ．、１
０００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、２０，００Ｄａ．から２００，０００Ｄａ．、
１００，０００から２００，０００Ｄａ．、５０００Ｄａ．から１００，０００Ｄａ．、
１０，０００Ｄａ．から８０，０００Ｄａ．、２０，０００Ｄａ．から６０，０００Ｄａ
．、および２０，０００Ｄａ．から４０，０００Ｄａからなる群から選択される、請求項
６９に記載の医薬組成物。 - 前記スカフォールドが、治療用化合物とほぼ同じ質量である、請求項６９に記載の医薬
組成物。 - 治療用化合物に非遊離可能にコンジュゲートされたビタミンＤ、類似体、またはその代
謝産物である標的指向基を含む、担体−薬物コンジュゲート。 - 前記ビタミンＤが、非ホルモンである、請求項７２に記載の担体−薬物コンジュゲート
。 - 前記非ホルモン性ビタミンＤが、１位炭素ではヒドロキシル化されていないビタミンＤ
である、請求項７３に記載の担体−薬物コンジュゲート。 - 前記治療用化合物が、前記非ホルモン性ビタミンＤ標的指向基の３位炭素でコンジュゲ
ートされる、請求項７４に記載の担体−薬物コンジュゲート。 - 前記治療用化合物が、機能分析によって測定された場合に、前記標的指向基にコンジュ
ゲートされていない前記治療用化合物と実質的に同じ活性を保持する、請求項７５に記載
の担体−薬物コンジュゲート。 - 前記標的指向基が、ポリ（エチレングリコール）、ポリリジン、ポリエチレンイミン、
ポリ（プロピレングリコール）、ペプチド、血清アルブミン、チオレドキシン、免疫グロ
ブリン、アミノ酸、核酸、グリカン、反応性リンカーを含有する修飾基、水溶性ポリマー
、低分子炭素鎖リンカー、および追加の治療用化合物からなる群から選択されるスカフォ
ールドを介して前記治療用ペプチドまたは前記治療用核酸にコンジュゲートされる、請求
項７６に記載の担体−薬物コンジュゲート。 - 前記スカフォールドが、治療用化合物とほぼ同じ質量である、請求項７７に記載の医薬
組成物。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5691328A (en) * | 1996-02-02 | 1997-11-25 | Clarion Pharmaceuticals Inc. | Phosphoethanolamine conjugates of vitamin D compounds |
| JP2002518474A (ja) * | 1998-06-25 | 2002-06-25 | イムンディアグノスティック ゲセルシャフト フュア プロデュクツィオン ウント フェアトリープ フォン ラボルディアグノスティカ ミット ベシュレンクテル ハフツング | 機能性ビタミンＤ誘導体および２５−ヒドロキシ−および１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤの定量方法 |
| WO2013172967A1 (en) * | 2012-05-17 | 2013-11-21 | Extend Biosciences, Inc | Carriers for improved drug delivery |
| US20140275489A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Apelin fusion proteins and uses thereof |
Family Cites Families (239)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1477496A (en) * | 1923-08-18 | 1923-12-11 | Hutchison Miller Reese | Insectproof portal |
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| US4292250A (en) | 1980-11-17 | 1981-09-29 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Vitamin D derivatives |
| US4675189A (en) | 1980-11-18 | 1987-06-23 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Microencapsulation of water soluble active polypeptides |
| US4410515A (en) | 1981-04-01 | 1983-10-18 | Massachusetts General Hospital | Vitamin D glycosides and a method of use |
| US4456553A (en) | 1982-05-07 | 1984-06-26 | Teijin Limited | Vitamin D3 derivatives, process for preparation thereof, and antigens comprising said derivatives to be used for preparation of antibodies for immunochemical assay and antibodies prepared therefrom |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US5550111A (en) | 1984-07-11 | 1996-08-27 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof |
| NZ217821A (en) | 1985-10-10 | 1989-07-27 | Biotech Australia Pty Ltd | Oral delivery system; complex of active agent and vitamin b12 or analogue thereof |
| JPH02274A (ja) | 1987-10-14 | 1990-01-05 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な２５−ヒドロキシビタミンｄ↓３誘導体およびその製造法およびそれを用いた定量法 |
| US5232836A (en) | 1988-05-04 | 1993-08-03 | Ire-Medgenix S.A. | Vitamin D derivatives: therapeutic applications and applications to assays of metabolites of vitamin D |
| US5214170A (en) | 1988-10-05 | 1993-05-25 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Radioisotope iodine-labeled 1α (or 24R), 25-dihydroxy vitamin D3 |
| GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
| US5116964A (en) | 1989-02-23 | 1992-05-26 | Genentech, Inc. | Hybrid immunoglobulins |
| US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
| US5688488A (en) | 1989-04-03 | 1997-11-18 | Purdue Research Foundation | Composition and method for tumor imaging |
| US5122614A (en) | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| SE509359C2 (sv) | 1989-08-01 | 1999-01-18 | Cemu Bioteknik Ab | Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel |
| US5605690A (en) | 1989-09-05 | 1997-02-25 | Immunex Corporation | Methods of lowering active TNF-α levels in mammals using tumor necrosis factor receptor |
| US7217689B1 (en) | 1989-10-13 | 2007-05-15 | Amgen Inc. | Glycosylation analogs of erythropoietin |
| US6395492B1 (en) | 1990-01-11 | 2002-05-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
| SG48759A1 (en) | 1990-01-12 | 2002-07-23 | Abgenix Inc | Generation of xenogenic antibodies |
| US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| EP0546073B1 (en) | 1990-08-29 | 1997-09-10 | GenPharm International, Inc. | production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
| US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5612034A (en) | 1990-10-03 | 1997-03-18 | Redcell, Inc. | Super-globuling for in vivo extended lifetimes |
| AU1424492A (en) | 1991-02-20 | 1992-09-15 | Christopher Capelli | Non-protein intracellular receptor binding conjugates and a method of use thereof |
| EP0575545B1 (en) | 1991-03-15 | 2003-05-21 | Amgen Inc. | Pegylation of polypeptides |
| US7192584B2 (en) | 1991-03-18 | 2007-03-20 | Centocor, Inc. | Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies |
| US5919452A (en) | 1991-03-18 | 1999-07-06 | New York University | Methods of treating TNFα-mediated disease using chimeric anti-TNF antibodies |
| ATE152127T1 (de) | 1991-08-07 | 1997-05-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Muteine des menschlichen parathormons und ihre herstellung |
| ATE239484T1 (de) | 1991-10-24 | 2003-05-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Derivatisierte oligonukleotide mit verbessertem aufnahmevermögen |
| AU3423293A (en) | 1991-12-19 | 1993-07-19 | Baylor College Of Medicine | Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression |
| FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
| US5447851B1 (en) | 1992-04-02 | 1999-07-06 | Univ Texas System Board Of | Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells |
| US5470949A (en) | 1992-12-15 | 1995-11-28 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Method for making amino acid glycosides and glycopeptides |
| US5548064A (en) | 1993-05-24 | 1996-08-20 | Biotech Australia Pty Limited | Vitamin B12 conjugates with EPO, analogues thereof and pharmaceutical compositions |
| US6342225B1 (en) | 1993-08-13 | 2002-01-29 | Deutshces Wollforschungsinstitut | Pharmaceutical active conjugates |
| US6103709A (en) | 1993-12-23 | 2000-08-15 | The Regents Of The University Of California | Therapeutically effective 1α,25-dihydroxyvitamin D3 analogs and methods for treatment of vitamin D diseases |
| CA2184002A1 (en) | 1994-02-23 | 1995-08-31 | Jeffrey M. Blaney | Method and compositions for increasing the serum half-life of pharmacologically active agents |
| US6919441B2 (en) | 1994-03-14 | 2005-07-19 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Polyamide-oligonucleotide derivatives, their preparation and use |
| US5629384A (en) | 1994-05-17 | 1997-05-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces |
| US5574018A (en) | 1994-07-29 | 1996-11-12 | Amgen Inc. | Conjugates of vitamin B12 and proteins |
| ATE222589T1 (de) | 1994-10-06 | 2002-09-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Peptid-nukleinsäure-konjugate |
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| US5739277A (en) | 1995-04-14 | 1998-04-14 | Genentech Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| EP1978033A3 (en) | 1995-04-27 | 2008-12-24 | Amgen Fremont Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| CA2219486A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5981779A (en) | 1995-12-29 | 1999-11-09 | A And D Assay, Incorporated | Labeled vitamin D compounds and the use thereof |
| GB9526733D0 (en) | 1995-12-30 | 1996-02-28 | Delta Biotechnology Ltd | Fusion proteins |
| WO1997034637A2 (en) | 1996-03-22 | 1997-09-25 | Trustees Of Boston University | Photodynamic therapy using nuclear hormone receptors to target photosensitizers |
| ES2301183T3 (es) | 1996-12-03 | 2008-06-16 | Amgen Fremont Inc. | Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr. |
| US20030129194A1 (en) | 1997-02-13 | 2003-07-10 | Bone Care International, Inc. | Targeted therapeutic delivery of vitamin D compounds |
| CN1254293A (zh) | 1997-02-13 | 2000-05-24 | 骨疗国际公司 | 靶向治疗性给药维生素d化合物 |
| WO1998051678A1 (en) | 1997-05-16 | 1998-11-19 | Women & Infants Hospital | CYCLIC ETHER VITAMIN D3 COMPOUNDS, 1α (OH) 3-EPI-VITAMIN D3 COMPOUNDS AND USES THEREOF |
| AU7497798A (en) | 1997-05-16 | 1998-12-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 3-epi compounds of vitamin d3 and uses thereof |
| AU9503598A (en) | 1997-09-26 | 1999-04-23 | Regents Of The University Of California, The | Therapeutically effective 1alpha, 25-dihydroxyvitamin D3 analogs |
| CA2306344A1 (en) | 1997-10-14 | 1999-04-22 | Masahiko Sato | Method of building and maintaining bone |
| US6093701A (en) | 1997-12-12 | 2000-07-25 | Mirus, Inc. | Method for covalent attachment of compounds to genes |
| DE69942578D1 (de) | 1998-05-22 | 2010-08-26 | Univ R | Bifunktionelle moleküle sowie darauf basierende therapien. |
| US6537806B1 (en) | 1998-06-02 | 2003-03-25 | University Of Washington | Compositions and methods for treating diabetes |
| US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
| US7057012B1 (en) | 1998-12-31 | 2006-06-06 | The General Hospital Corporation | PTH functional domain conjugate peptides, derivatives thereof and novel tethered ligand-receptor molecules |
| EP1147133B1 (en) | 1998-12-31 | 2008-08-06 | The General Hospital Corporation | Peptides consisting of two PTH functional domains fused by a linker molecule, and derivatives thereof |
| PT1151102E (pt) | 1999-02-12 | 2006-07-31 | Amgen Inc | Composicoes de leptina glicosilada e metodos afins |
| US6713280B1 (en) | 1999-04-07 | 2004-03-30 | Thomas Jefferson University | Enhancement of peptide cellular uptake |
| AUPQ014699A0 (en) | 1999-05-04 | 1999-05-27 | Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited | Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using nanoparticles |
| DE60006100T2 (de) | 1999-05-17 | 2004-07-01 | Conjuchem, Inc., Montreal | Lang wirkende insulinotrope peptide |
| WO2000069900A2 (en) | 1999-05-17 | 2000-11-23 | Conjuchem, Inc. | Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components |
| US6887470B1 (en) | 1999-09-10 | 2005-05-03 | Conjuchem, Inc. | Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components |
| AUPQ071299A0 (en) | 1999-06-02 | 1999-06-24 | Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited | Vitamin directed dual targeting therapy |
| US6516294B1 (en) | 1999-07-01 | 2003-02-04 | The Regents Of The University Of California | Nuclear receptor for 1α,25-dihydroxyvitamin D3 useful for selection of vitamin D3 ligands and a method therefor |
| DK1795598T3 (da) | 1999-07-23 | 2010-02-01 | Kenji Kangawa | Hidtil ukendte peptider |
| US6989377B2 (en) | 1999-12-21 | 2006-01-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Treating vitamin D responsive diseases |
| US6358939B1 (en) | 1999-12-21 | 2002-03-19 | Northern Lights Pharmaceuticals, Llc | Use of biologically active vitamin D compounds for the prevention and treatment of inflammatory bowel disease |
| US7608681B2 (en) | 1999-12-24 | 2009-10-27 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds |
| GB0013810D0 (en) | 2000-06-06 | 2000-07-26 | Celltech Chiroscience Ltd | Biological products |
| US7371721B2 (en) | 2000-09-18 | 2008-05-13 | Sanos Bioscience A/S | Use of GLP-2 and related compounds for the treatment, prevention, diagnosis, and prognosis of bone-related disorders and calcium homeostasis related syndromes |
| CZ308214B6 (cs) | 2000-12-07 | 2020-03-04 | Eli Lilly And Company | GLP-1 fúzní proteiny |
| JP2004520395A (ja) | 2001-02-02 | 2004-07-08 | コンジュケム，インコーポレーテッド | 長期持続性成長ホルモン放出因子誘導体 |
| AU2002233089B2 (en) | 2001-02-16 | 2005-12-22 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting glucagon-like peptide 2 (GLP-2) for the treatment of gastrointestinal diseases and disorders |
| AU2002335930B2 (en) | 2001-03-09 | 2005-07-28 | Morphosys Ag | Serum albumin binding moieties |
| ATE345353T1 (de) | 2001-05-31 | 2006-12-15 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Langwirkende fusionspeptidinhibitoren gegen hiv- infektion |
| US20040259780A1 (en) | 2001-07-30 | 2004-12-23 | Glasebrook Andrew Lawrence | Method for treating diabetes and obesity |
| US7186797B2 (en) | 2001-08-10 | 2007-03-06 | Epix Pharmaceuticals, Inc. | Polypeptide conjugates with extended circulating half-lives |
| US7176278B2 (en) | 2001-08-30 | 2007-02-13 | Biorexis Technology, Inc. | Modified transferrin fusion proteins |
| AU2002362312A1 (en) | 2001-09-17 | 2003-04-01 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Cobalamin mediated delivery of nucleic acids, analogs and derivatives thereof |
| US6908963B2 (en) | 2001-10-09 | 2005-06-21 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith |
| US7560123B2 (en) | 2004-08-12 | 2009-07-14 | Everett Laboratories, Inc. | Compositions and methods for nutrition supplementation |
| US20100098779A1 (en) | 2008-10-22 | 2010-04-22 | Everett Laboratories, Inc. | Compositions and methods for prophylactic and therapeutic supplementation of nutrition in subjects |
| WO2003037915A1 (en) | 2001-10-31 | 2003-05-08 | Biopolymed Inc. | Biocompatible polymers including peptide spacer |
| US6858227B1 (en) | 2001-11-21 | 2005-02-22 | Sonus Pharmaceuticals, Inc. | Vitamin E conjugates |
| EP2261250B1 (en) | 2001-12-21 | 2015-07-01 | Human Genome Sciences, Inc. | GCSF-Albumin fusion proteins |
| WO2003064462A1 (fr) | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pth a liaison peg ou derive de pth a liaison peg |
| EP1483277A4 (en) | 2002-02-15 | 2007-10-03 | Merckle Gmbh | CONJUGATES OF BIOLOGICALLY ACTIVE COMPOUNDS, METHODS OF PREPARATION AND USE, AND FORMULATION AND PHARMACEUTICAL APPLICATIONS |
| US20040186063A1 (en) | 2002-02-15 | 2004-09-23 | Hans-Jurgen Gutke | Conjugates of biologically active compounds, methods for their preparation and use, formulation and pharmaceutical applications thereof |
| US7591994B2 (en) | 2002-12-13 | 2009-09-22 | Immunomedics, Inc. | Camptothecin-binding moiety conjugates |
| AU2003226148A1 (en) | 2002-04-05 | 2003-10-27 | Merck & Co., Inc. | Method for inhibiting bone resorption with an alendronate and vitamin d formulation |
| BR0311800A (pt) | 2002-07-19 | 2005-03-22 | Cytos Biotechnology Ag | Conjugados ghrelina-veìculo |
| PT1578778E (pt) | 2002-07-23 | 2011-03-07 | Ipsen Pharma | Análogos de grelina |
| EP1530588A2 (en) | 2002-07-31 | 2005-05-18 | Conjuchem, Inc. | Long lasting natriuretic peptide derivatives |
| WO2004024889A2 (en) | 2002-09-16 | 2004-03-25 | Elusys Therapeutics, Inc. | Production of bispecific molecules using polyethylene glycol linkers |
| EP3299393A1 (en) | 2002-11-08 | 2018-03-28 | Ablynx N.V. | Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor |
| US6814983B2 (en) | 2002-12-10 | 2004-11-09 | Everett Laboratories, Inc. | Compositions and methods for nutrition supplementation |
| US20040191196A1 (en) | 2002-12-16 | 2004-09-30 | Dov Tamarkin | Novel conjugate compounds and dermatological compositions thereof |
| US20040132104A1 (en) | 2003-01-07 | 2004-07-08 | Sackrison James L. | Vitamin D assay |
| WO2004069159A2 (en) | 2003-01-27 | 2004-08-19 | Endocyte, Inc. | Vitamin receptor binding drug delivery conjugates |
| CN101239190B (zh) | 2003-01-27 | 2013-09-25 | 恩多塞特公司 | 维生素受体结合递药缀合物 |
| GB0305332D0 (en) | 2003-03-10 | 2003-04-09 | Leuven K U Res & Dev | Biological evaluation of novel vitamin D analogues |
| KR20060003862A (ko) | 2003-03-14 | 2006-01-11 | 네오스 테크놀로지스, 인크. | 수용성분기폴리머 및 그 접합체 |
| PT1605897E (pt) | 2003-03-19 | 2012-09-10 | Lilly Co Eli | Compostos de glp-1 ligado a polietilenoglicol |
| WO2004084948A1 (en) | 2003-03-28 | 2004-10-07 | Biopolymed Inc. | Biologically active material conjugated with biocompatible polymer with 1:1 complex, preparation method thereof and pharmaceutical composition comprising the same |
| WO2004098507A2 (en) | 2003-04-30 | 2004-11-18 | Bioxell S.P.A. | 1,3 aclyated 24-keto-vitamin d3 compounds and methods of use thereof |
| US7947280B2 (en) * | 2003-05-22 | 2011-05-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Apelin and uses thereof |
| EP2085406A1 (en) | 2003-07-25 | 2009-08-05 | ConjuChem Biotechnologies Inc. | Long lasting insulin derivatives and methods thereof |
| TW200526254A (en) | 2003-09-19 | 2005-08-16 | Novo Nordisk As | Novel GLP-1 derivatives |
| US20080064668A1 (en) | 2003-09-24 | 2008-03-13 | Bioxell S.P.A. | 1,3-Diacylated, 26,27-Alkyl/Haloakyl Vitamin D3 Compounds and Methods of Use Thereof |
| MXPA06005887A (es) | 2003-11-25 | 2006-06-27 | Wisconsin Alumni Res Found | Analogos de vitamina d para la prevencion y el tratamiento de la obesidad. |
| US20050192256A1 (en) | 2003-12-05 | 2005-09-01 | Melnick Joel Z. | Methods of using vitamin D compounds in the treatment of patients undergoing hemodialysis |
| US20060193821A1 (en) | 2004-03-05 | 2006-08-31 | Diener John L | Aptamers to the human IL-12 cytokine family and their use as autoimmune disease therapeutics |
| US8377917B2 (en) | 2004-03-23 | 2013-02-19 | Complex Biosystems Gmbh | Polymeric prodrug with a self-immolative linker |
| US7803764B2 (en) | 2004-03-29 | 2010-09-28 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Amphipathic glycopeptides |
| WO2005105071A1 (en) | 2004-04-30 | 2005-11-10 | Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Ltd. | A topical composition containing a vitamin d derivative |
| RU2006143544A (ru) | 2004-05-10 | 2008-06-20 | Нэстек Фармасьютикал Кампани Инк. (Us) | Композиции и способ для облегченной чресслизистой доставки паратиреоидного гормона |
| US20080199960A1 (en) | 2004-05-13 | 2008-08-21 | Juliano Rudolph L | Methods for the Delivery of Oligomeric Compounds |
| US20050261250A1 (en) | 2004-05-19 | 2005-11-24 | Merck & Co., Inc., | Compositions and methods for inhibiting bone resorption |
| WO2005117906A1 (en) | 2004-05-19 | 2005-12-15 | Merck & Co., Inc. | Combination for inhibiting bone resorption comprising a bisphosponate (alendrona) and a vitamin d (cholecalciferol) |
| US7906137B2 (en) | 2004-05-21 | 2011-03-15 | Mediplex Corporation, Korea | Delivery agents for enhancing mucosal absorption of therapeutic agents |
| US20060024384A1 (en) | 2004-07-29 | 2006-02-02 | Giordano John A | Compositions and methods for nutrition supplementation |
| US20060024409A1 (en) | 2004-07-29 | 2006-02-02 | Everett Laboratories, Inc. | Compositions and methods for nutrition supplementation |
| US8101587B2 (en) | 2004-08-12 | 2012-01-24 | Everett Laboratories, Inc. | Kits for nutrition supplementation |
| US20060069021A1 (en) | 2004-08-13 | 2006-03-30 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Compositions and methods for intranasal administration of inactive analogs of PTH or inactivated preparations of PTH or PTH analogs |
| US20060045880A1 (en) | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Krieg Paul A | Methods for modulating angiogenesis and apoptosis with apelin compositions |
| US20080318911A1 (en) | 2004-09-24 | 2008-12-25 | Bioxell S.P.A. | 20-Cyclopropyl, 26,27-Alkyl/Haloalkyl Vitamin D3 Compounds and Methods of Use Thereof |
| EP1841787A2 (en) | 2005-01-25 | 2007-10-10 | Cell Therapeutics, Inc. | Conjugates of biologically active proteins having a modified in vivo half-life |
| EP1879596A4 (en) | 2005-03-23 | 2009-01-21 | Bioxell Spa | 20 ALKYL, GEMINI VITAMIN D3 COMPOUNDS AND METHOD OF USE THEREOF |
| US20090298799A1 (en) | 2005-03-23 | 2009-12-03 | Bioxell S.P.A. | Methods of Treating Osteoporosis and Secondary Hyperparathyroidism Using 20-Methyl, Gemini Vitamin D3 Compounds |
| US7833979B2 (en) | 2005-04-22 | 2010-11-16 | Amgen Inc. | Toxin peptide therapeutic agents |
| EP3144675A1 (en) | 2005-04-28 | 2017-03-22 | Ventana Medical Systems, Inc. | Enzymes conjugated to antibodies via a peg heterobifuctional linker |
| PL1888641T3 (pl) | 2005-05-18 | 2012-05-31 | Ablynx Nv | Białka wiążące albuminę surowicy |
| WO2007012188A1 (en) | 2005-07-27 | 2007-02-01 | Qinghua Wang | GLP/1/EXENDM 4 IgG Fc FUSION CONSTRUCTS FOR TREATMENT OF DIABETES |
| US20090298800A1 (en) | 2005-09-23 | 2009-12-03 | Bioxell S.P.A. | 1,25-dihydroxy, 20-cyclopropyl,26-27-deuteroalkyl vitamin d3 compounds and methods of use thereof |
| EP1996220B2 (en) | 2006-03-06 | 2023-08-16 | Amunix Operating Inc. | Unstructured recombinant polymers and uses thereof |
| ATE427965T1 (de) | 2005-09-29 | 2009-04-15 | Hoffmann La Roche | Antikírper gegen 25-hydroxyvitamin d |
| US20080280859A1 (en) | 2005-10-19 | 2008-11-13 | Bioxell S.P.A. | Gemini vitamin d3 compounds and methods of use thereof |
| JP2009513627A (ja) | 2005-10-27 | 2009-04-02 | ペプトロン カンパニー リミテッド | 生理活性物質−血液蛋白質複合体及びこれを利用する生理活性物質の安定化方法 |
| WO2007075377A2 (en) | 2005-12-15 | 2007-07-05 | Cytokinetics, Inc. | Certain chemical entities, compositions and methods |
| WO2007097934A2 (en) | 2006-02-17 | 2007-08-30 | Elusys Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for using erythrocytes as carriers for delivery of drugs |
| ES2424970T3 (es) | 2006-03-10 | 2013-10-10 | Ipsen Pharma | Uso de un agonista de la grelina para mejorar los efectos catabólicos del tratamiento con glucocorticoides |
| GB0616111D0 (en) | 2006-06-16 | 2006-09-20 | Ardana Bioscience Ltd | Agents, methods and uses |
| AU2007299705B2 (en) | 2006-09-22 | 2012-09-06 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference |
| WO2008047241A2 (en) | 2006-10-16 | 2008-04-24 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Modified corticotropin releasing factor peptides and uses thereof |
| WO2008101231A2 (en) | 2007-02-16 | 2008-08-21 | Endocyte, Inc. | Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease |
| WO2008109068A2 (en) | 2007-03-05 | 2008-09-12 | Syracuse University | A conjugate of insulin and vitamin b12 for oral delivery |
| CN101678124A (zh) | 2007-03-14 | 2010-03-24 | 恩多塞特公司 | 结合配体连接的微管溶素递药缀合物 |
| EP2308514B1 (en) | 2007-03-23 | 2013-06-05 | to-BBB Holding B.V. | Conjugates for targeted drug delivery across the blood-brain barrier |
| US8222217B2 (en) | 2007-05-31 | 2012-07-17 | Alize Pharma Sas | Unacylated ghrelin as therapeutic agent in the treatment of metabolic disorders |
| EP3569251A1 (en) | 2007-06-25 | 2019-11-20 | Endocyte, Inc. | Conjugates containing hydrophilic spacer linkers |
| WO2009045457A2 (en) | 2007-10-02 | 2009-04-09 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Tripartite rnai constructs |
| US8076476B2 (en) | 2007-11-15 | 2011-12-13 | Avi Biopharma, Inc. | Synthesis of morpholino oligomers using doubly protected guanine morpholino subunits |
| MX2010008024A (es) | 2008-02-01 | 2010-12-21 | Ascendis Pharma As | Profarmaco que comprende un enlazador que se puede separar por si mismo. |
| TWI489994B (zh) | 2008-03-17 | 2015-07-01 | Baxter Healthcare Sa | 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法 |
| EP2262539B1 (en) | 2008-04-01 | 2015-07-15 | Novo Nordisk A/S | Insulin albumin conjugates |
| WO2009142307A1 (ja) | 2008-05-23 | 2009-11-26 | アスビオファーマ株式会社 | 目的ペプチドの血漿中半減期延長作用を有するペプチド |
| JOP20190083A1 (ar) | 2008-06-04 | 2017-06-16 | Amgen Inc | بولي ببتيدات اندماجية طافرة لـfgf21 واستخداماتها |
| TWI451876B (zh) | 2008-06-13 | 2014-09-11 | Lilly Co Eli | 聚乙二醇化之離脯胰島素化合物 |
| EP2926825A1 (en) | 2008-06-27 | 2015-10-07 | Duke University | Therapeutic agents comprising elastin-like peptides |
| US8680263B2 (en) | 2008-09-19 | 2014-03-25 | Nektar Therapeutics | Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof |
| CA2746527A1 (en) | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna interference in skin indications |
| US8637306B2 (en) | 2008-12-10 | 2014-01-28 | The Scripps Research Institute | Production of carrier-peptide conjugates using chemically reactive unnatural amino acids |
| WO2010113157A1 (en) | 2009-04-01 | 2010-10-07 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Lipopeptide inhibitors of hiv-1 |
| EP2423233B1 (en) | 2009-04-22 | 2015-03-11 | Alteogen, Inc | In vivo half life increased fusion protein or peptide maintained by sustained in vivo release, and method for increasing in vivo half-life using same |
| PE20120358A1 (es) | 2009-05-05 | 2012-04-26 | Amgen Inc | Mutantes fgf21 y usos de los mismos |
| CA2760674A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Amgen Inc. | Fgf21 mutants and uses thereof |
| EP3192520B1 (en) | 2009-07-29 | 2019-03-06 | KAI Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic agents for reducing parathyroid hormone levels |
| DK2459171T3 (en) | 2009-07-31 | 2017-09-25 | Sanofi Aventis Deutschland | Long-acting insulin composition |
| WO2011012723A1 (en) | 2009-07-31 | 2011-02-03 | Ascendis Pharma As | Injectable sustained release compositions comprising a pramipexole prodrug |
| US20120191039A1 (en) | 2009-07-31 | 2012-07-26 | Ascendis Pharma A/S | Carrier linked pramipexole prodrugs |
| ES2559238T3 (es) | 2009-09-28 | 2016-02-11 | Kowa Company, Ltd. | Agente para reducir el peso de la grasa visceral |
| EP2485767A1 (en) | 2009-10-06 | 2012-08-15 | Ascendis Pharma A/S | Carrier linked paliperidone prodrugs |
| US20110097733A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-04-28 | Michel Anciaux | Process for the production of a hybridoma and antibody obtained therefrom, able to recognize more than one vitamin d metabolite |
| US20110152207A1 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-23 | Goff Jesse P | Use of vitamin d glycosides and sulfates for treatment of disease |
| US20130030359A1 (en) | 2010-01-22 | 2013-01-31 | Ascendis Pharma A/S | Dipeptide-based prodrug linkers for aromatic amine-containing drugs |
| US9062094B2 (en) | 2010-01-22 | 2015-06-23 | Ascendis Pharma As | Dipeptide-based prodrug linkers for aliphatic amine-containing drugs |
| SI2525834T1 (sl) | 2010-01-22 | 2019-10-30 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Rastni hormoni s podaljšano in vivo učinkovitostjo |
| US9561285B2 (en) | 2010-01-22 | 2017-02-07 | Ascendis Pharma As | Carrier-linked carbamate prodrug linkers |
| EP2372365A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-05 | Future Diagnostics B.V. | Direct immunoassay for vitamin D |
| WO2011123813A2 (en) | 2010-04-02 | 2011-10-06 | Amunix Operating Inc. | Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same |
| ES2674567T3 (es) | 2010-05-21 | 2018-07-02 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Proteínas de fusión biespecíficas |
| CN103313724A (zh) | 2010-09-06 | 2013-09-18 | 莫徳普罗有限公司 | 化合物和方法 |
| BR112013007160A2 (pt) | 2010-09-29 | 2016-06-14 | Philogen Spa | ligante tiazolidina para a conjugação de fármacos a anticorpos |
| US9023791B2 (en) | 2010-11-19 | 2015-05-05 | Novartis Ag | Fibroblast growth factor 21 mutations |
| WO2012129650A1 (en) | 2011-03-25 | 2012-10-04 | Nanospeed Diagnostics Inc. | Lateral flow immunoassay for detecting vitamins |
| WO2012158962A2 (en) | 2011-05-18 | 2012-11-22 | Eumederis Pharmaceuticals, Inc. | Improved peptide pharmaceuticals |
| US8785603B2 (en) | 2011-05-20 | 2014-07-22 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Antibodies to 25-hydroxyvitamin D2 and D3 and uses thereof |
| EP2530068A1 (en) | 2011-05-31 | 2012-12-05 | Lacer, S.A. | New strontium salts, synthesis and use thereof in the treatment of osteoporosis |
| EP3643306A3 (en) | 2011-08-12 | 2020-08-26 | Ascendis Pharma A/S | Carrier-linked prodrugs having reversible carboxylic ester linkages |
| AU2012296951B2 (en) | 2011-08-12 | 2016-09-15 | Ascendis Pharma A/S | Protein carrier-linked prodrugs |
| CN103874480A (zh) | 2011-08-12 | 2014-06-18 | 阿森迪斯药物股份有限公司 | 前列环素的缓释组合物 |
| EP2751270B1 (en) | 2011-08-29 | 2018-08-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomer-conjugate complexes and their use |
| US20140213512A1 (en) | 2011-08-31 | 2014-07-31 | Amgen Inc. | Method of Treating or Ameliorating Type 1 Diabetes Using FGF21 |
| US20160137711A1 (en) | 2011-09-12 | 2016-05-19 | Amunix Operating Inc. | Glucagon-like peptide-2 compositions and methods of making and using same |
| TW201315742A (zh) | 2011-09-26 | 2013-04-16 | Novartis Ag | 治療代謝病症之雙功能蛋白質 |
| US20130085121A1 (en) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | Jianguo Wang | Pharmaceutical compositions comprising phosphate binder, calcium receptor-active compound and/or active vitamin d |
| KR20140103099A (ko) | 2011-10-12 | 2014-08-25 | 아센디스 파마 옵탈몰로지 디비젼 에이/에스 | 안구 병태의 예방 및 치료 |
| US20140256626A1 (en) | 2011-10-18 | 2014-09-11 | Prolynx Llc | Peg conjugates of exenatide |
| US8968790B2 (en) | 2011-12-09 | 2015-03-03 | Shaker A. Mousa | Nanoformulation of vitamin D derivatives and/or vitamin D metabolites |
| US9163227B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-10-20 | Covx Technologies Ireland Limited | Anti-diabetic compounds |
| US8993248B2 (en) | 2011-12-31 | 2015-03-31 | Abbott Laboratories | Truncated human vitamin D binding protein and mutation and fusion thereof and related materials and methods of use |
| US9475856B2 (en) | 2012-03-02 | 2016-10-25 | New York University | Chimeric FGF21 proteins with enhanced binding affinity for β-klotho for the treatment of type II diabetes, obesity, and related metabolic disorders |
| US20150111246A1 (en) | 2012-04-24 | 2015-04-23 | Astrazeneca Pharmaceuticals Lp | Site-specific enzymatic modification of exendins and analogs thereof |
| US9464126B2 (en) | 2012-06-07 | 2016-10-11 | New York University | Chimeric fibroblast growth factor 21 proteins and methods of use |
| EP2890708B1 (en) | 2012-08-28 | 2019-08-07 | The Governors of the University of Alberta | Parathyroid hormone, insulin, and related peptides conjugated to bone targeting moieties and methods of making and using thereof |
| JP2015529076A (ja) | 2012-09-11 | 2015-10-05 | ウニセンス ダイアグノスティクス エーピーエス | 鎖置換交換反応を使用する非核酸分析物の検出 |
| EP2906617B1 (en) | 2012-10-11 | 2018-03-14 | Ascendis Pharma A/S | Hydrogel prodrugs |
| MX370543B (es) | 2012-10-11 | 2019-12-17 | Ascendis Pharma Ophthalmology Div A/S | Profarmacos neutralizantes del factor de crecimiento endotelial vascular para el tratamiento de afecciones oculares. |
| MY186106A (en) | 2012-10-11 | 2021-06-22 | Ascendis Pharma As | Diagnosis, prevention and treatment of diseases of the joint |
| DK3444281T3 (da) | 2012-11-20 | 2022-02-07 | Eumederis Pharmaceuticals Inc | Forbedrede peptidlægemidler |
| US9290557B2 (en) | 2012-11-28 | 2016-03-22 | Ngm Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides |
| US9244083B2 (en) | 2012-11-30 | 2016-01-26 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Compositions and methods for detecting vitamin D |
| EP2928501B1 (en) | 2012-12-07 | 2020-05-06 | Ascendis Pharma A/S | Carrier-linked prostanoid prodrugs |
| RU2015126650A (ru) | 2012-12-10 | 2017-01-12 | Фред Хатчинсон Кэнсер Рисёрч Сентер | Партнеры липокалина по слиянию |
| EP2946014A2 (en) | 2013-01-17 | 2015-11-25 | Moderna Therapeutics, Inc. | Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes |
| DE102013205055A1 (de) | 2013-03-21 | 2014-09-25 | Orgentec Diagnostika Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Vitamin D Metaboliten |
| CA2907830C (en) | 2013-04-22 | 2022-03-29 | Ascendis Pharma A/S | Hydrogel-linked prodrugs releasing tagged drugs |
| DE102013215580A1 (de) | 2013-08-07 | 2015-02-12 | Orgentec Diagnostika Gmbh | 25-OH Vitamin D Derivate zur Bestimmung von Vitamin D Metaboliten |
| US10040850B2 (en) | 2013-10-08 | 2018-08-07 | Ascendis Pharma A/S | Protecting group comprising a purification tag |
| WO2015057836A2 (en) | 2013-10-15 | 2015-04-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Bone anabolic parathyroid hormone and parathyroid hormone related-protein analogs |
| AU2015299055C1 (en) | 2014-08-06 | 2021-05-06 | Ascendis Pharma A/S | Prodrugs comprising an aminoalkyl glycine linker |
| WO2016065052A1 (en) | 2014-10-22 | 2016-04-28 | Extend Biosciences, Inc. | Insulin vitamin d conjugates |
| JP6946182B2 (ja) | 2014-10-22 | 2021-10-06 | エクステンド バイオサイエンシズ インコーポレーテッドＥｘｔｅｎｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ | 治療用ビタミンｄコンジュゲート |
| US9789197B2 (en) | 2014-10-22 | 2017-10-17 | Extend Biosciences, Inc. | RNAi vitamin D conjugates |
| US10046058B2 (en) | 2014-12-02 | 2018-08-14 | Rezolute, Inc. | Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates |
| US20170368189A1 (en) | 2015-01-09 | 2017-12-28 | Ascendis Pharma Growth Disorders A/S | Cnp prodrugs |
| US20200276276A1 (en) | 2016-03-01 | 2020-09-03 | Ascendis Pharma Bone Diseases A/S | PTH Prodrugs |
| MX2019003182A (es) | 2016-09-29 | 2019-08-05 | Ascendis Pharma Bone Diseases As | Compuestos de hormona paratiroidea con bajas relaciones pico - valle. |
| US20180271792A1 (en) | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Rezolute, Inc. | Oral delivery of physiologically active substances |
-
2015
- 2015-10-21 JP JP2017522071A patent/JP6946182B2/ja active Active
- 2015-10-21 EP EP15852241.7A patent/EP3220961B1/en active Active
- 2015-10-21 US US14/919,601 patent/US9585934B2/en active Active
- 2015-10-21 WO PCT/US2015/056723 patent/WO2016065042A1/en active Application Filing
- 2015-10-21 CA CA2964463A patent/CA2964463C/en active Active
-
2017
- 2017-02-11 US US15/430,449 patent/US10702574B2/en active Active
-
2018
- 2018-07-12 US US16/034,046 patent/US10406202B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-29 US US16/261,507 patent/US11116816B2/en active Active
-
2020
- 2020-07-03 US US16/920,652 patent/US20210008153A1/en active Pending
-
2021
- 2021-06-01 JP JP2021092596A patent/JP2021130705A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5691328A (en) * | 1996-02-02 | 1997-11-25 | Clarion Pharmaceuticals Inc. | Phosphoethanolamine conjugates of vitamin D compounds |
| JP2002518474A (ja) * | 1998-06-25 | 2002-06-25 | イムンディアグノスティック ゲセルシャフト フュア プロデュクツィオン ウント フェアトリープ フォン ラボルディアグノスティカ ミット ベシュレンクテル ハフツング | 機能性ビタミンＤ誘導体および２５−ヒドロキシ−および１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤの定量方法 |
| WO2013172967A1 (en) * | 2012-05-17 | 2013-11-21 | Extend Biosciences, Inc | Carriers for improved drug delivery |
| US20140275489A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Apelin fusion proteins and uses thereof |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BIOCHEMISTRY, 1986, VOL.25, NO.17, PP.4729-4733, JPN6019031752, ISSN: 0004819000 * |
| BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, 2013, VOL.21, PP.7779-7789, JPN6019031750, ISSN: 0004818999 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20210008153A1 (en) | 2021-01-14 |
| CA2964463A1 (en) | 2016-04-28 |
| EP3220961C0 (en) | 2023-07-05 |
| US20160113993A1 (en) | 2016-04-28 |
| JP2017533906A (ja) | 2017-11-16 |
| CA2964463C (en) | 2024-02-13 |
| US20170216449A1 (en) | 2017-08-03 |
| US9585934B2 (en) | 2017-03-07 |
| JP6946182B2 (ja) | 2021-10-06 |
| WO2016065042A1 (en) | 2016-04-28 |
| EP3220961B1 (en) | 2023-07-05 |
| US20190183966A1 (en) | 2019-06-20 |
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