JP2021119171A - 医薬製剤及びその使用 - Google Patents

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Abstract

【課題】可逆的自己会合が低減された抗体−薬物コンジュゲートを提供する。【解決手段】（ｉ）ベンゾジアゼピンを含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び（ｉｉ）小さな疎水性分子を含有する組成物、この組成物を使用する治療方法、及びこの組成物を製剤化する方法を提供する。更に、抗体における、及び抗体−薬物コンジュゲートにおける可逆的自己会合を低減させる方法を提供する。【選択図】図１

Description

＜優先権主張＞
本出願は、２０１６年７月２８日に出願された米国仮出願番号６２／３６８，１５６及び２０１５年１１月２５日に出願された米国仮出願番号６２／２６０，１０４の優先権を主張する。これら出願の全体の開示を本明細書の一部として援用する。
本開示は医薬品に関する。より具体的には、本開示は、抗体−薬物コンジュゲートのための製剤及び抗体−薬物コンジュゲート組成物に関連した方法に関する。
＜背景＞
近年、抗体−薬物コンジュゲート（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｔａｔｅｓ）(本明細書では「ＡＤＣ」、「コンジュゲート」または「イムノコンジュゲート」と
称する）の開発により、癌の治療は益々目標として定められるようになった。研究者らは、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原に結合する抗体に基づく薬剤を開発するために、癌細胞によって選択的に発現される、細胞表面受容体及び抗原を同定し、利用してきた。この特異的結合は、前記抗体に結合した細胞傷害性化合物の癌細胞への送達を可能にする。ＡＤＣによって与えられる選択性は、正常細胞に対する毒性を最小限に抑え、それにより患者における薬物の耐用性を高める。
ＡＤＣによって与えられる腫瘍選択性にもかかわらず、臨床的状況でのＡＤＣの使用は多くの要因によって制限される。これらの要因の中には、ＡＤＣが凝集して可逆的に自己会合する能力が含まれる。ＡＤＣは、共有結合及び疎水性相互作用を含む様々なメカニズムにより互いに凝集することができる。ＡＤＣはまた、モノマーと高次種との間の平衡を作り出す弱い相互作用を通じて、可逆的に自己会合することもできる。何れの場合も、凝集及び可逆的自己会合は、ＡＤＣが標的に対して結合する能力を阻害し、それによってＡＤＣの臨床効果を低下させる。従って、研究者等は、ＡＤＣの凝集及び可逆的自己会合を制限して、ＡＤＣの有効性を高めるためる方法を発見するために研究を続けている。
本開示は、可逆的自己会合が低減されたＡＤＣ組成物、そのような組成物を使用して癌を治療する方法、そのような組成物を製剤化する方法、及び可逆的自己会合を低減させる方法に向けられている。一つの態様において、本開示は、（ａ）少なくとも１つのベンゾジアゼピンを含むＡＤＣと、（ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を含む組成物を提供する。幾つかの実施形態において、前記組成物は約４．０〜約４．５のｐＨを有する。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、インドリノベンゾジアゼピンである。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、表1において以下で述べるＤ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、
ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。一定の実施形態において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）
からなる群から選択され、これらは後述の表２に記載されている。幾つかの実施形態において、前記組成物は水溶液である。
幾つかの実施形態において、前記抗体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される。他の実施形態において、前記抗体はヒト化ＣＤ１２３抗体である。特定の実施形態において、前記抗体は、米国仮特許出願番号６２／１８６，１６１、米国特許出願番号１５／１９４，４０１及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３９７９７号に記載されており、これらの全体を本明細書の一部として援用する。本明細書中で使用するとき、「ＡｂＸ」とは、米国仮特許出願番号６２／１８６，１６１、米国特許出願番号１５／１９４，４０１、及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３９７９７に記載されたヒト化ＣＤ１２３抗体を意味する。本明細書中で参照する全ての出願、特許及び他の刊行物を、本明細書の一部として援用する。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書中に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
更なる実施形態において、前記組成物は凍結乾燥組成物である。更なる実施形態において、前記組成物は再構成凍結乾燥組成物である。前記小さな疎水性分子は、凍結乾燥の前に組成物に添加することができるが、低減または阻害低減された可逆的自己会合の利点は、凍結乾燥後に再構成組成物においてもなお実現される。
幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はトリメチルグリシンである。一定の実施形態において、前記小さな疎水性分子はプロリンである。他の実施形態において、前記小さな疎水性分子はロイシンである。更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子はイソロイシンである。なお更なる実施形態において、前記組成物中には２以上の小さな疎水性分子を組み合わせて使用する。
ＡＤＣにおいて、抗体当たりのベンゾジアゼピンの数は変化し得る。幾つかの実施形態において、ＡＤＣは少なくとも１つのベンゾジアゼピンを含む。一定の実施形態において、ＡＤＣは少なくとも２つのベンゾジアゼピンを含む。更なる実施形態において、ＡＤＣは少なくとも３つのベンゾジアゼピンを含む。なお更なる実施形態において、ＡＤＣは少なくとも４つのベンゾジアゼピンを含む。他の実施形態において、ＡＤＣは、少なくとも５つのベンゾジアゼピンを含む。特定の実施形態において、ＡＤＣは少なくとも６つのベンゾジアゼピンを含む。幾つかの実施形態において、ＡＤＣは約７個のベンゾジアゼピンを含む。２つ以上のＡＤＣを含む組成物では、抗体あたりのベンゾジアゼピンの平均数を測定することができる。この数は、薬物対抗体比または「ＤＡＲ」と呼ばれる。幾つかの実施形態において、２以上のＡＤＣを含む組成物は、１〜約４のＤＡＲを有する。幾つかの実施形態において、２以上のＡＤＣを含む組成物は、０〜約１のＤＡＲを有する。他の実施形態において、２以上のＡＤＣを含む組成物は、約１〜約２のＤＡＲを有する。更に他の実施形態において、2以上のＡＤＣを含む組成物は、約２〜約３のＤＡＲを有する。
更なる実施形態において、２以上のＡＤＣを含む組成物は、約３〜約４のＤＡＲを有する。更に別の実施形態において、２以上のＡＤＣを含む組成物は、約４〜約５のＤＡＲを有する。なお更なる実施形態において、２以上のＡＤＣを含む組成物は、約５〜約６のＤＡＲを有する。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは部位特異的な様式で、例えば、操作されたシステインまたはセリン残基へのコンジュゲーションを介して、前記抗体にコンジュゲートされる。
幾つかの実施形態において、前記組成物は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２と、（ｃ）１０ｍＭコハク酸ナトリウムと、（ｄ）２８０ｍＭのベタインを含有する水性製剤であり、前記製剤は約４．２のｐＨを有する。別の実施形態に
おいて、前記組成物は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）２８０ｍＭのプロリンを含有する水性製剤であり、前記製剤は約４．２のｐＨを有する。更に別の実施形態において、前記組成物は、（ａ）水と、（ｂ）ＡｂＸ−Ｄ２と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）２８０ｍＭのプロリン及び２８０ｍＭのベタインからなる群から選択される小さな疎水性分子を含有する水性製剤であり、前記製剤は約４．２のｐＨを有する。１実施形態において、前記組成物は、水と、（ａ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１と、（ｂ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｃ）１２５ｍＭのロイシンを含有する水性製剤であり、前記製剤は約４．２のｐＨを有する。別の実施形態において、前記組成物は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）１２５ｍＭのイソロイシンを含有する水性製剤であり、前記製剤は前記約４．２のｐＨを有する。幾つかの実施形態において、前記組成物は、ここに記載された何れかの水性組成物の凍結乾燥された組成物である。
別の態様において、本開示は被験体の癌を治療する方法であって、それを必要とする被験体に対して有効量の組成物を投与することを含み、前記組成物は（ｉ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣと、（ｉｉ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を含有し、ここでの前記ＡＤＣは1以上の細胞において細胞傷
害性であり、それによって癌を治療する方法を提供する。幾つかの実施形態において、前記組成物は凍結乾燥された組成物である。一定の実施形態において、前記組成物は再構成凍結乾燥組成物である。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。一定の実施形態において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される。幾つかの実施形態において、前記抗体（Ａｂ）は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される。他の実施形態において、前記抗体は、ヒト化ＣＤ１２３抗体である。一定の実施形態において、前記抗体はＡｂＸである。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書中に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
前記方法の幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はトリメチルグリシンである。前記方法の更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子はプロリンである。前記方法の幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はロイシンである。前記方法の一定の実施形態において、前記小さな疎水性分子はイソロイシンである。前記方法のなお更なる実施形態では、前記組成物中に２以上の小さな疎水性分子が使用される。
前記方法の幾つかの実施形態において、前記方法で用いられる前記組成物は、上記で述べた特定の水性製剤の１つである。前記方法の一定の実施形態において、前記組成物は、本明細書に開示される水性製剤の1つに由来する再構成凍結乾燥組成物である。
更に別の態様において、この開示は組成物を製剤化する方法であって、（ａ）水溶液中にベンゾジアゼピンを含有するＡＤＣを提供することと、（ｂ）前記水溶液に、疎水性側
鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を加えることを含む方法を提供する。幾つかの実施形態において、この方法は更に、前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む。前記方法の幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。前記方法の幾つかの実施液体において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される。幾つかの実施形態において、前記抗体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される。他の実施形態において、前記抗体はヒト化ＣＤ１２３抗体である。一定の実施形態において、前記抗体はＡｂＸである。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書中に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
前記方法の幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子は、トリメチルグリシンである。前記方法の他の実施形態において、前記小さな疎水性分子はロイシンである。前記方法の幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はイソロイシンである。前記方法の一定の実施形態において、小さな疎水性分子はプロリンである。前記方法の更に他の実施形態においては、前記小さな疎水性分子の組み合わせが加えられる。
前記方法の更なる実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約３０％〜約４０％低減させる。幾つかの実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約４０％〜約５０％低減させる。一定の実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約５０％〜約６０％低下させる。更なる実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約６０％〜約７０％低減させる。更なる実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約７０％〜約８０％低減させる。更なる実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約８０％〜約９０％低減させる。幾つかの実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを約９０％〜１００％低減させる。なお更なる実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、水溶液中のＲＳＡを消失させる。幾つかの実施形態において、ＲＳＡの量は、マルチアングル光散乱によって測定される。幾つかの更なる実施形態において、ＲＳＡの量は、動的光散乱によって測定される。
幾つかの実施形態において、前記方法は更に、水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を得ることを含む。一定の実施形態において、前記方法は更に、前記凍結乾燥組成物を再構成し、それによって再構成凍結乾燥組成物を作製することを含む。前記方法の更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約３０％〜約４０％低減させる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約４０％〜約５０％低減させる。一定の実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約５０％〜約６０％低減させる。更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約６０％〜約７０％低減させる。なお更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成された凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約７０％〜約８０％低減させる。幾つかの実施形態において、
前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約８０％〜約９０％低減させる。幾つかの実施形態において、小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約９０％〜１００％低減させる。幾つかの実施形態において、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを消失させる。
更に別の態様において、本開示は、可逆的自己会合を低減させる方法を提供し、前記方法は、（ａ）水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを提供し、ここでのＡＤＣは可逆的自己会合を示すことと、（ｂ）前記水溶液に、疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を添加し、前記小さな疎水性分子は可逆的自己会合を低減させることを含む。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はトリメチルグリシンである。更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子はプロリンである。一定の実施形態において、前記小さな疎水性分子はロイシンである。なお更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子はイソロイシンである。
一定の実施形態において、前記方法は更に、可逆的自己会合を検出する工程を含む。更なる実施形態において、前記方法は更に、水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む。
前記方法の幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。前記方法の一定の実施形態において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される。幾つかの実施形態において、前記抗体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される。他の実施形態において、前記抗体はヒト化ＣＤ１２３抗体である。一定の実施形態において、前記抗体はＡｂＸであり、米国仮出願番号６２／１８６，１６１、米国特許出願番号１５／１９４，４０１、及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３９７９７に記載のヒト化ＣＤ１２３抗体を指す。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
前記方法の幾つかの実施形態において、前記可逆的自己会合は約３０％〜約４０％低減される。前記方法の更なる実施形態において、前記可逆的自己会合は約４０％〜約５０％低減される。前記方法のなお更なる実施形態において、前記可逆的自己会合は約５０％〜約６０％低減される。前記方法のなお更なる実施形態において、前記可逆的自己会合は約６０％〜約７０％低減される。前記方法の幾つかの実施形態において、前記可逆的自己会合は約７０％〜約８０％低減される。前記方法の一定の実施形態において、前記可逆的自己会合は約８０％〜約９０％低減される。前記方法の更なる実施形態において、前記可逆的自己会合は約９０％〜１００％低減される。前記方法の一定の実施形態においては、前記可逆的自己会合が消失される。
幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を作製することを含む。更なる実施形態において、前記方法は更に、前記
凍結乾燥組成物を再構成することを含む。
ＡＤＣを含む組成物は、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨの緩衝液（例えば、コハク酸塩緩衝液）を用いて製剤化された場合、可逆的自己会合が低減されることが見出されている。従って、本開示の更に別の態様は、ベンゾジアピンを含むＡＤＣであって可逆的自己会合を示すＡＤＣと、緩衝剤とを含有する組成物であって、前記組成物は約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する組成物に向けられる。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。一定の実施形態において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される。幾つかの実施形態において、前記抗体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される。他の実施形態において、前記抗体はヒト化ＣＤ１２３抗体である。一定の実施形態において、前記抗体はＡｂＸであり、米国仮出願番号６２／１８６，１６１、米国特許出願番号１５／１９４，４０１、及びＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３９７９７に記載されたヒト化ＣＤ１２３を言う。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
幾つかの実施形態において、前記組成物は更に糖を含む。一定の実施形態において、前記糖はトレハロースである。幾つかの実施形態において、前記トレハロースはトレハロース二水和物である。他の実施形態において、前記トレハロースは無水トレハロースである。他の実施形態において、前記糖はスクロースである。幾つかの実施形態において、前記緩衝剤はコハク酸塩である。幾つかの実施形態において、前記組成物は更に亜硫酸水素ナトリウムを含む。幾つかの実施形態において前記、組成物は水性製剤である。他の実施形態において、前記組成物は凍結乾燥組成物である。幾つかの実施形態において、前記組成物は更に増量剤を含む。一定の実施形態において、前記増量剤はグリシンである。他の実施形態において、前記増量剤はマンニトールである。
幾つかの実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ・ＤＧＮ４６２と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロースを含有し、ここで前記製剤は約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する。一定の実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）ＡｂＸ・Ｄ２またはＡｂＸ−Ｄ２（ａ）と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロースを含有し、ここで前記製剤は約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有し、任意に２〜２００μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含有する。一定の実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）ＡｂＸ−Ｄ５またはＡｂＸ−Ｄ５（ａ）と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロースを含有し、ここで前記水性製剤は約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有し、任意に２〜２００μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含有する。幾つかの実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）２ｍｇ／ｍＬのＡｂＸ−Ｄ５またはＡｂＸ−Ｄ５（ａ）と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロース二水和物と、（ｅ）５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含有し、ここでの前記製剤は約４．２のｐＨを有する。幾つか
の実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ・Ｄ１またはＤ１（ａ）と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロースを含有し、ここでの前記製剤は約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する。別の実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ・Ｄ２またはＤ２（ａ）と、（ｃ）１０ｍＭコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロースを含有する。更なる実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ・Ｄ４と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロースを含有し、ここでの前記製剤は約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する。幾つかの実施形態において、前記組成物は、本明細書に記載の何れかの水性組成物の凍結乾燥組成物である。幾つかの実施形態において、何れかの前記組成物のｐＨは４．２である。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は本明細書中に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
幾つかの実施形態において、前記組成物は更に界面活性剤を含む。幾つかの実施形態において、前記界面活性剤は０．０１％のポリソルベート２０である。幾つかの実施形態において、前記組成物は更に亜硫酸水素ナトリウムを含む。幾つかの実施形態において、前記組成物は、２〜２００μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含む。他の実施形態において、前記組成物は更に、５〜１００μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含む。一定の実施形態において、前記組成物は更に、約５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含む。
幾つかの実施形態において、前記組成物のｐＨは約４．２である。幾つかの実施形態において、前記水性製剤は、（ａ）水と、（ｂ）２ｍｇ／ｍＬのＡｂＸ−Ｄ５またはＡｂＸ−Ｄ５（ａ）と、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウムと、（ｄ）８％のトレハロース二水和物と、（ｅ）５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、前記製剤は約４．２のｐＨを有する。
本開示の別の態様は、可逆的自己会合を低減させる方法であって、（ａ）第１のｐＨの水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを提供し、前記ＡＤＣは可逆的自己会合を示すことと、（ｂ）前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５の範囲の第２のｐＨに調節し、前記第１のｐＨから前記第２のｐＨへのｐＨの調節によって可逆的自己会合を低減することを含む方法に向けられる。幾つかの実施形態において、前記第２のｐＨは約４．２である。
開示される方法の幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。幾つかの実施形態において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される。
幾つかの実施形態において、前記可逆的自己会合は約７０％〜約８０％低減される。更なる実施形態において、前記可逆的自己会合は、約８０％〜約９０％低減される。更に別の実施形態において、可逆的自己会合は約９０％〜１００％低減される。
幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を作製することを含む。なお更なる実施形態において、前記方法はまた、前記凍結乾燥組成物を再構成することも含む。
幾つかの実施形態において、前記ＡＤＣは、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡＤＣはヒト化ＣＤ１２３抗体を含む。幾つかの実施形態において、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体はＡｂＸである。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示されるＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、前記ＡｂＸ抗体は、本明細書に開示される重鎖可変領域ドメイン配列及び軽鎖可変領域ドメイン配列を含む。
本開示の更なる態様は、（ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣと、ｂ）トレハロースを含有する組成物であって、前記組成物は約４．０〜約４．５のｐＨ範囲を有する組成物に向けられる。幾つかの実施形態において、組成物は更にコハク酸ナトリウムを含む。幾つかの実施形態において、前記組成物は更に亜硫酸水素ナトリウムを含む。更なる実施形態において、前記組成物は更に界面活性剤を含む。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される。更なる実施形態において、前記ＡＤＣは、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される。
１例として、ｈｕＭ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２を使用する可逆的自己会合系の動的光散乱プロットを示す。 ２Ａ及び２Ｂは、１例としてｈｕＭ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２を使用する可逆的自己会合系のＳＶ−ＡＵＣ分布を示す。 動的光散乱により測定された、薬物対抗体比に対する流体力学的直径の変化を示す。 異なるＡＤＣ組成物の動的光散乱プロットを示す。 異なるＡＤＣ組成物のＳＶ−ＡＵＣ分布を示す。 脱グリコシル化ｈｕＭＯＶ１９−９０コンジュゲートについての質量スペクトル分析データを示す。 脱グリコシル化ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−１０７コンジュゲートについての質量スペクトル分析データを示す。 異なるＡＤＣ組成物の動的光散乱プロットを示す。 異なるＡＤＣ組成物の動的光散乱プロットを示す。 ある範囲のｐＨに亘って、コハク酸塩−トレハロース製剤についてのＲＳＡの評価から得られたデータを示す。 １０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、０．０１％のポリソルベート−２０、ｐＨ４．０におけるＡＤＣのＲＳＡを示す
他に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が
関係する当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明の実施または試験においては、本明細書に記載した方法及び材料と類似または均等な方法及び材料を使用できるが、以下では典型的で且つ適切な方法及び材料を記載する。本明細書で言及する全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、その全体を本明細書の一部として援用する。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が支配する。加えて、材料、方法、及び実施例は例示的なものに過ぎず、限定を意図するものではない。
＜定義＞
本明細書で使用するとき、用語「ａ」または「ａｎ」は、これらの用語が他の点でその使用が制限されていない限り、１以上を意味する。
本明細書で使用するとき、「約」の用語は、記載された値の±１０％を意味する。
本明細書で使用するとき、「被験体」の用語は、ヒトまたは動物を意味する。典型的な動物としては、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、サル、チンパンジー、ヒヒまたはアカゲザルなどの哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用するとき、「医薬製剤」の用語は、有効成分の生物学的活性を有効にしながら被験体に投与できる形態の製剤を指す。
本明細書で使用するとき、「治療有効量」の用語は、疾患または障害を治療するために有効な薬物の量を指す。
本明細書で使用するとき、「治療する」、「治療する」または「治療」とは、疾患または障害の軽減、寛解もしくは改善、または疾患もしくは障害の少なくとも１つの症状の軽減、寛解もしくは改善を意味する。
本明細書で使用するとき、「不可逆的凝集」の用語は、部分的アンフォールディングに起因した疎水性相互作用から典型的に生じる非共有結合的凝集を指称する。
本明細書で使用する「キメラ抗体」の用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性及び能力を有する哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の１つの種に由来する抗体の可変領域に対応する一方、定常領域は別の種（通常はヒト）に由来する抗体の配列と相同であり、その種（例えば、ヒト）において免疫応答を誘発する機会を回避または低減する。一定の実施形態において、キメラ抗体には、少なくとも１つのヒト重鎖及び／または軽鎖ポリペプチドを備えた抗体またはその抗原結合性断片、例えば、マウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを備えた抗体が含まれる。
本明細書で使用するとき、抗体の「抗原結合性断片」の用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持した抗体の１以上の断片を指す。
本明細書で使用するとき、「ポリクローナル」抗体とは、免疫化された動物の血清に典型的に含まれる抗体の異種集団をいう。
本明細書で使用するとき、「モノクローナル」抗体とは、特定の抗原に対して特異的な抗体分子の同種集団をいう。
本明細書で使用するとき、「リンカー」、「連結基」または「連結部分」の用語は、抗体及び細胞傷害性化合物のような２つの基を一緒に連結する部分を指す。
本明細書で使用するとき、「癌」及び「癌性」の用語は、哺乳類における生理学的状態であって、その中では細胞の集団が調節されない細胞増殖で特徴付けられる状態を指称し、または記載する。癌には、血液癌または固形腫瘍が含まれ得る。
＜凝集及び可逆的自己会合＞
商業的に実行可能で臨床的に有用なＡＤＣ組成物の開発は、異なる抗体及びＡＤＣの製剤化の際の予測不能な挙動によって複雑になる。抗体及びＡＤＣが凝集し且つ可逆的に自己会合する能力は、商業的及び臨床的に多くの望ましくない影響をもたらし得る。凝集及び可逆的自己会合は、効力の低下、安定性の低下、毒性の増加、粘度の増加、溶液の変色及び他の望ましくない影響をもたらす可能性がある。幾つかの状況において、凝集物は免疫系応答を引き起こし、患者の潜在的な安全性の懸念を生じる可能性がある。
共有結合凝集体は、少なくとも２つのモノマー間の化学結合の形成によって生じる。例えば、共有結合凝集体は、モノマー上の不対システイン間に形成されるジスルフィド結合、または分子間ジスルフィドスクランブリングの結果として、またはチオエーテル結合を介して生じ得る。
一定の場合、凝集は不可逆的である。免疫グロブリンの不可逆的凝集は、製剤中の免疫グロブリンの活性または機能の低下をもたらす。不可逆的凝集体は、尿素、グアニジン、またはドデシル硫酸ナトリウム（「ＳＤＳ」）などの薬剤によって阻害され得るが、抗体の濃度を低下させることでは阻害され得ない。
可逆的自己会合（「ＲＳＡ」）は、弱い非共有結合的な分子間相互作用を介してオリゴマー種を形成するＡＤＣの能力の結果として生じる。溶液中の任意のＡＤＣについてのこれら相互作用の量は、抗体自体（例えば、一次及び二次構造）及びｐＨなどの溶液特性、並びにＡＤＣ濃度を含む様々な因子に依存する。更に、自己会合の量及び程度は、前記細胞傷害性化合物及び前記抗体の特性に依存して、ＡＤＣによって変化することが発見されている。疎水性、不溶性、及び／または複数の芳香環を含む細胞傷害性化合物は、ＲＳＡを増大させることができる。従って、より疎水性のＡＤＣは、溶液中で可逆的に自己会合する傾向が増加する。ＡＤＣは自己会合し、溶液中ではモノマーと高次オリゴマー種との間での平衡が達成される。
ＡＤＣの可逆的自己会合は、製剤において多数の有害な影響を及ぼす。ＲＳＡは、治療上の関係において、ＡＤＣの製造、安定性、送達、及び安全性についての問題を引き起こす可能性がある。送達の観点から、ＲＳＡは溶液の粘度を上昇させる可能性があり、これは予め充填されたシリンジのプランジャを妨げる可能性がある。安定性及び安全性の観点では、ＲＳＡは効力を低下させる可能性があり（オリゴマー種は治療的に機能しないため）、免疫応答を誘発する可能性を高める。
研究者は、溶液中のＡＤＣモノマーの量を評価するために、幾つかの方法を自由に用いることができる。例えば、溶液中のＡＤＣモノマーの量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ及びＳＥＣ−ＭＳの両方）及び沈降速度（ＳＶ）によって測定することができる。ＳＥＣ分析の下では、ＡＤＣ凝集物は、より小さく且つＳＥＣ充填材料の細孔に深く入り込むＡＤＣモノマーよりも速く溶出する。ＳＥＣは、凝集体とモノマーとの間の良好な分離を提供することができ、それにより溶液中のモノマー量の良好な評価が提供される。
以下の実施例でより詳細に説明するように、ＳＶは、ＡＤＣを沈降させるために溶液に角加速度を印加する（一般に遠心分離を介して）ことによって、溶液中のＡＤＣの挙動を分析する。一般には、より大きな粒子、例えばＡＤＣ凝集体または可逆的に自己会合したオリゴマーは、より迅速に沈降する。したがって、ＳＶは、凝集体及びオリゴマーがモノマーよりも速く沈降するため、溶液中のＡＤＣモノマーの量を評価するために使用することができる。
幾つかの例では、ＳＥＣまたはＳＥＣ−ＭＳ及びＳＶは、同じ抗体に対して異なるモノマーパーセンテージを与える可能性がある。このような不一致は、可逆的に自己会合するモノマーの存在を示すことができる。更に、濃度及び溶液特性の変化は、典型的にはＲＳＡを低減させるが、存在する共有結合的または不可逆的凝集の何れの量にも影響しないであろう。
マルチアングル光散乱（「ＭＡＬＳ」）は、異なる次数のモノマー及びオリゴマーがどのように光を散乱させるかに基づいて、所与の溶液中の可逆的に会合したオリゴマー量を決定するために使用することができる。溶液中の抗体濃度が増加するにつれて、ＭＡＬＳは、典型的にはモノマーよりも高分子量の種、例えばオリゴマーの増加を検出する。この増加はＲＳＡの増加を示す。
動的光散乱（「ＤＬＳ」）もまた、溶液中のＲＳＡの存在及び程度を決定するために使用することができる。ＤＬＳは、溶液中の種により散乱される光の強度の時間依存的変化を測定することを含む。典型的には、ＤＬＳ測定機器は粒子の流体力学的直径をもたらす。溶液中の抗体の濃度が増加するにつれて、ＤＬＳ測定装置はより大きな流体力学的直径を有する種、例えばオリゴマーの増大した存在を検出する。この増大は、ＲＳＡの増加を示す。ＤＬＳ測定装置を用いて、溶液中の種の拡散係数を決定することもできる。拡散係数は抗体濃度の増加に伴って減少し、ＲＳＡの存在を示す。
＜ＡＤＣ＞
本開示は、ＡＤＣ、ＡＤＣを含む組成物、治療方法、ＡＤＣ組成物を製剤化する方法、及びＡＤＣにおけるＲＳＡを低減させる方法に向けられる。ＡＤＣは、細胞傷害性化合物にコンジュゲートした抗体または抗体断片を含む。幾つかの実施形態において、細胞傷害性化合物は、リンカーを介して抗体にコンジュゲートされる。他の実施形態では、細胞傷害性化合物は抗体に直接結合される。本開示に包含される抗体、リンカー、及び細胞傷害性化合物のタイプを以下に記載する。
＜抗体＞
抗体及びその抗原結合性断片を含む組成物が、本明細書中に開示される。抗体は、可溶型及び膜結合型として存在する大きな糖タンパク質であり、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと称されるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、５つの天然アイソタイプ、即ち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭを包含する。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造及び３次元立体配置を有する。当業者が理解するように、開示される組成物は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を含むことができる。特定の実施形態において、前記抗体には、二重特異性抗体のような多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体などの抗体が含まれる。前記組成物はまた、１以上の保存的または非保存的アミノ酸置換を有する抗体を含むことができる。更に、前記組成物は、１以上のアミノ酸残基において、修飾されたグリコシル化を含むことができる。そのような修飾された抗体または結合性断片は、前記修飾された抗体が所望の生物活性を示す限り、本明細書に開示される組成物の範囲内に入る。
本明細書中で使用される場合、「ヒト化」抗体は、抗体の抗原結合性ループを形成するマウスモノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）がヒト抗体分子のフレームワーク上に移植されるか、またはマウス抗体のフレームワークの可変ドメインが再表面化（即ち、露出した残基がヒト抗体の対応する位置に存在する残基で置換される）されているものである。例えば、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ．ａｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｖｏｌ ９． Ｎｏ． １０， ｐｐ． ８９５−９０４， １９９６を参照されたい。
典型的な抗体には、ヒト化モノクローナル抗体が含まれ、その例には、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３が含まれる。典型的な抗体にはヒト化ＣＤ１２３抗体もまた含まれ、その典型的な配列は、米国出願番号１５／１９４，４０１及びＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３９７９７に記載されており、本明細書では「ＡｂＸ」と称する。
米国出願番号１５／１９４，４０１及びＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３９７９７に記載された、本明細書に記載のＡｂＸの実施形態に含まれるヒト化ＣＤ１２３抗体（ＡｂＸ）の特定の例は次の通りである。
以下の重鎖可変領域ＣＤＲアミノ酸配列を含むヒト化ＣＤ１２３抗体：
ＶＨＣＤＲ１：ＳＳＩＭＨ（参照配列１）
ＶＨＣＤＲ２：ＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ（参照配列２）
ＶＨＣＤＲ３：ＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹ（参照配列３）
以下の軽鎖可変領域ＣＤＲアミノ酸配列を含むヒト化ＣＤ１２３抗体：
ＶＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（参照配列４）
ＶＬＣＤＲ２：ＲＶＮＲＬＶＤ（参照配列５）
ＶＬＣＤＲ３：ＬＱＹＤＡＦＰＹＴ（参照配列６）
以下の重鎖可変領域アミノ酸配列を含むヒト化抗ＣＤ１２３抗体：
ＡｂＸ１：
Ｑ（Ｆ／Ｖ）ＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（参照配列７）
ＡｂＸ２：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＧＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（参照配列８）
以下の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むヒト化抗ＣＤ１２３抗体：
ＡｂＸ１：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（参照配列９）
ＡｂＸ２：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＲＶＮＲＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（参照配列１０）
他の特定の実施形態において、抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合性断片は、操作されたＣｙｓ残基（例えば、Ｃ４４２）、ＱＸＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（参照配列７）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（参照配列９）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。一定の実施形態において、Ｘａａ、即ち、配列番号７のＮ末端から２番
目の残基はＰｈｅである。他の実施形態において、ＸａａはＶａｌである。
他の特定の実施形態において、抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合性断片は、操作されたＣｙｓ残基（例えば、Ｃ４４２）、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＧＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（参照配列８）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＲＶＮＲＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（参照配列１０）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。
以下の重鎖アミノ酸配列を含むヒト化抗ＣＤ１２３抗体：
ＡｂＸ１：
Ｑ（Ｆ／Ｖ）ＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（参照配列１１）
ＡｂＸ１Ｃ：
Ｑ（Ｆ／Ｖ）ＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＣＬＳＰＧ（参照配列１２）
ＡｂＸ２：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＧＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ
ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（参照配列１３）
以下の軽鎖アミノ酸配列を含むヒト化抗ＣＤ１２３抗体：
ＡｂＸ１：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（参照配列１４）
ＡｂＸ２：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＲＶＮＲＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（参照配列１５）
他の特定の実施形態において、前記抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合性断片は、操作されたＬｙｓ残基、Ｑ（Ｆ／Ｖ）ＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（参照配列１１）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（参照配列１４）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。一定の実施形態において、参照配列１１のＮ末端からの2番目の残基であるＸａａはＰ
ｈｅである。他の実施形態において、ＸａａはＶａｌである。
他の特定の実施形態において、前記抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合性断片は、Ｑ（Ｆ／Ｖ）ＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ
ＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＣＬＳＰＧ（参照配列１２）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（参照配列１４）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。一定の実施形態において、参照配列１２のＮ末端から2番目残基であるＸａａはＰｈｅである。他の実施形態に
おいて、ＸａａはＶａｌである。
他の特定の実施形態において、前記抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合性断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＧＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（参照配列１３）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＲＶＮＲＬＶＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（参照配列１５）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。
ｈｕＤＳ６のための典型的な配列は、米国特許第７，８３４，１５５号明細書及び国際特許出願公開番号ＷＯ２００５／００９３６９及びＷＯ２００７／０２４２２２に記載されており、それらの全体を本明細書の一部として援用する。ｈｕＭｏｖ１９の詳細な配列は、米国特許第８，５５７，９６６号及び同第８，７０９，４３２号、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１１／１０６５２８に記載されており、これらの全体を本明細書の一部として援用する。ｈｕＭｙ９−６重鎖可変領域部分の典型的な配列は、米国特許公開番号２００６０１７７４５５に記載されており、その全体を本明細書の一部として援用する。ｈｕＭｙ９−６軽鎖可変領域部分の例示的な配列は当技術分野において既知であり、米国特許第７，５５７，１８９号、同第７，３４２，１１０号、同第８，１９７，７８７号及び同第８，３３７，８５５号に記載されており、それらの全体を本明細書の一部として援用する。ｈｕＣＤ３７−３の典型的な配列は、米国特許第８，７６５，９１７号及び国際特許
出願公開番号ＷＯ２０１１／１１２９７８に記載されており、これらの全体を本明細書の一部として援用する。ｈｕＢ４の例示的な配列は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１２／１５６４５５に記載されており、その全体を本明細書の一部として援用する。
追加の典型的な抗体には、特異的抗原を標的とする抗体が含まれる。例としては、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＣＡ６、またはＦＯＬＲ１を標的とする抗体が挙げられる。更に、ＣＤ１２３を標的とする抗体もまた本明細書に含まれる。
一般に、「ヒト化抗体」の用語は、最小の非ヒト（例えばマウス）配列を含む特異的免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリンまたはそれらの断片である非ヒト（例えばネズミ）抗体の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体とは、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、または親和性を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基によって置換された、ヒト免疫グロブリンである。（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５， １９８６； Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７， １９８８； Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６， １９８８）。
抗体は、ＣＤＲ移植（ＥＰ ０ ２３９ ４００； ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号及び第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面化（ＥＰ ０ ５９２ １０６； ＥＰ ０ ５１９ ５９６； Ｐａｄｌａｎ Ｅ． Ａ．， １９９１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８； Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ． Ｍ． ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４； Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．
Ａ． ｅｔ ａｌ．， １９９４， ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３）、及び鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む種々の他の技術を用いてヒト化することができる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含む当技術分野で既知の様々な方法によって作製することができる。また、米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、及び国際特許出願公開番号ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、及びＷＯ９１／１０７４１を参照されたい（前記参照文献を本明細書の一部として援用する）。
幾つかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦＶフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種由来の抗体における対応する残基で置換される。このヒト化抗体は、抗体特異性、親和性及び／または能力を改良及び最適化するために、ＦＶフレームワーク領域及び／または置換された非ヒト残基内における追加の残基の置換によって更に修飾することができる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全部または実質的に全部を含む少なくとも１つ、典型的には２つまたは３つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＦＲ領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリンの定常領域または定常ドメイン（ＦＣ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部を含むことができる。ヒト化抗体を生じさせるために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号及び第５，６３９，６４１号、並びにＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１（３）：９６９−９７３， １９９４； 及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ９（１０）：８９５−９０４， １９９６（全て本明細書の一部として援用する）に記載されている。幾つかの実施形態において、「ヒト化抗体」は再表面化された抗体である。幾つかの実施形態において、「ヒト化抗体」はＣＤＲ移植抗体である。
加えて、前記抗体はキメラ抗体であることができる。
開示される組成物は、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、及びＦｖ断片）または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体のような、抗原結合性断片を含み得る。他の実施形態において、前記結合性断片は別個のタンパク質、ペプチド、またはオリゴペプチドに結合して、融合タンパク質を形成する。一定の実施形態において、前記融合タンパク質は、１以上のペプチド、オリゴペプチドまたはポリペプチドに融合された抗体の抗原決定部分を含む。
当業者は、適切な抗体の選択が、標的とされる細胞集団に依存することを理解するであろう。これに関して、特定の細胞集団（典型的には罹患細胞集団）において選択的に発現される細胞表面分子（即ち、抗原）のタイプ及び数は、開示される組成物において使用するための適切な抗体の選択を知らせるであろう。細胞表面発現プロファイルは、腫瘍細胞型を含む多種多様な細胞型について既知であり、或いは未知であれば、ルーチンの分子生物学及び組織化学の技術を用いて決定することができる。
本明細書で述べるように、前記抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。モノクローナル抗体は、典型的には、Ｂリンパ球（「Ｂ細胞」）の単一クローンによって産生される。モノクローナル抗体は、標準ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ５， ５１１−５１９ （１９７６）， Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （ｅｄｓ．）， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ （１９８８）， ａｎｄ Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ， ５ｔｈ Ｅｄ．， Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ （２００１）を参照のこと）を含む当業者に既知の様々な技術を用いて得ることができる。簡単に言うと、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ法は、典型的には、任意の適切な動物、典型的にはマウスに抗原（即ち、「免疫原」）を注入することを含む。続いて、この動物を屠殺し、その脾臓から単離したＢ細胞をヒトミエローマ細胞と融合させる。ハイブリッド細胞（即ち、「ハイブリドーマ」）が産生され、これは無限に増殖して、所望の特異性を有する高力価の抗体をインビトロで連続的に分泌する。当該技術分野で既知の任意の適切な方法を使用して、所望の特異性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定することができる。そのような方法には、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット分析、及びラジオイムノアッセイが含まれる。ハイブリドーマの集団をスクリーニングして、各々が前記抗原に対する単一の抗体を分泌する個々のクローンを単離する。各ハイブリドーマは単一のＢ細胞との融合に由来するクローンであるため、それが産生する全ての抗体分子は、それらの抗原結合部位及びアイソタイプを含めて構造が同一である。モノクローナル抗体はまた、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（例えば、Ｈａｓｋａｒｄ ａｎｄ Ａｒｃｈｅｒ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， ７４（２）， ３６１−６７ （１９８４）， ａｎｄ Ｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．， １２１， １４０−６７ （１９８６）参照）、またはバクテリオファージベクター発現系（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４６， １２７５−８１ （１９８９）参照）を含む他の適切な技術を用いて作製され得る。モノクローナル抗体断片を調製するために、組換え方法が典型的に用いられる。
モノクローナル抗体は、任意の適切な動物から単離でき、または任意の適切な動物において産生することができる。幾つかの実施形態において、前記抗体は哺乳動物において産生される。幾つかの実施形態において、前記哺乳動物はマウスである。幾つかの実施形態において、前記哺乳動物はヒトである。マウスにおいて抗体を産生するための方法は当業者に周知であり、本明細書に記載されている。ヒト抗体に関して、当業者は、ポリクローナル抗体が、適切な抗原でワクチン接種または免疫感作されたヒト被験体の血清から単離
され得ることを理解するであろう。或いは、ヒト抗体は、マウスのような非ヒト動物においてヒト抗体を産生するための既知の技術（例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、及び第５，７１４，３５２号、並びに米国特許出願公開番号２００２／０１９７２６６Ａ１参照）を適応させることによって作製することができる。
ヒト抗体、特にヒトモノクローナル抗体は、ヒトの治療用途において有効であるが、典型的にマウスモノクローナル抗体よりも作製が困難である。しかしながら、マウスモノクローナル抗体は、ヒトに投与されたときに迅速な宿主抗体応答を誘導し、ＡＤＣの治療上または診断上の可能性を低下させる可能性がある。これらの合併症を回避するために、モノクローナル抗体は、ヒト免疫系によって「外来」として認識されないのが好ましい。この目的のために、ファージディスプレイを用いて抗体を作製することができる。これに関して、抗体の抗原結合性可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリーが、標準的な分子生物学及び組換えＤＮＡ技術を使用して作製され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （２００１）参照）。所望の特異性を備えた可変領域をコードするファージを所望の抗原への特異的結合のために選択し、選択された可変ドメインを含む完全ヒト抗体を再構成する。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に使用されるミエローマ細胞のような適切な細胞系に導入され、その結果としてモノクローナル抗体の特徴を有するヒト抗体が細胞によって分泌されるようになる（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，
ｓｕｐｒａ， Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａ，及び米国特許第６，２６５，１５０号参照）。或いは、モノクローナル抗体は、特定のヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックであるマウスから作製することができる。そのような方法は当技術分野において既知であり、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号及び同第５，５６９，８２５号、並びにＪａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａに記載されている。幾つかの実施形態において、前記抗体はヒト化抗体である。マウス抗体及びヒト抗体のフレームワークの類似性のために、このアプローチは、前記ＣＤＲ配列が誘導されたマウスモノクローナル抗体と同じ抗原に結合するが、抗原的にはヒト抗体と同一であるモノクローナル抗体を産生することが、当該技術では受け入れられている。ヒト化抗体を産生するための方法は、当該分野において既知であり、例えば、上記のＪａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａ、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号及び第５，６９３，７６１号、欧州特許第０２３９４００Ｂ１号及び英国特許第２１８８６３８号に詳細に記載されている。ヒト化抗体はまた、米国特許第５，６３９，６４１号、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２３５，
９５９−９７３ （１９９４）， Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１（３）：９６９−９７３， １９９４；
及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ９（１０）：８９５−９０４， １９９６に記載された抗体再表面化技術を使用して作製することもできる。
少なくとも１つの抗原結合部位を有し、従って標的細胞の表面に存在する少なくとも１つの抗原または受容体を認識して結合する抗体断片もまた、本開示の範囲内である。この点で、インタクトな抗体分子のタンパク質分解切断は、抗原を認識して結合する能力を保持する様々な抗体断片を産生することができる。例えば、パパインプロテアーゼによる抗体分子の限定された消化は、典型的には３つの断片を産生し、そのうちの２つは同一であり、それらは親抗体分子の抗原結合活性を保持するのでＦａｂ断片と称される。酵素ペプシンによる抗体分子の切断は、通常２つの抗体断片を産生し、そのうちの１つは抗体分子の抗原結合アームの両方を保持し、従って、Ｆ（ａｂ’）２断片と称される。合成ペプチドを介して軽鎖抗体のＶドメインに連結された抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを備えた短縮Ｆａｂ断片からなる、一本鎖可変領域断片（ｓＦｖ）抗体断片は、ルーチンの組換えＤ
ＮＡ技術技術を用いて作製することができる（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，
ｓｕｐｒａ参照）。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製することができる（例えば、Ｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ７， ６９７−７０４ （１９９４）参照）。しかし、本開示の抗体断片は、これら典型的なタイプの抗体断片に限定されない。所望の細胞表面レセプターまたは抗原を認識して結合する、任意の適切な抗体断片を使用することができる。抗体−抗原結合は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫沈降、及び競合阻害アッセイのような、当技術分野で既知の任意の適切な方法を用いてアッセイすることができる（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａ，及び米国特許出願公開番号２００２／０１９７２６６ Ａ１参照）。
＜リンカー＞
本明細書に開示された組成物の態様には、リンカーに結合した抗体及びその抗原結合性断片が含まれる。リンカーが、抗体のその標的への結合を妨げない限り、または細胞傷害性化合物の細胞傷害性を排除しない限り、任意の適切なリンカーを本開示のＡＤＣと共に使用することができる。典型的には、リンカーは２つの基を連結するための条件下において実質的に不活性である。幾つかの実施形態において、リンカー部分は２つの反応基を含む結果として、最初に１つの反応基を細胞傷害性化合物と反応させて、リンカー部分及び第２の反応基を備えた化合物を得、次いでこれを抗体と反応させることができる。或いは、前記リンカー部分の１つの反応基を最初に抗体と反応させて、抗体及びリンカー部分及び第二の反応基を得、次いでこれを細胞傷害性化合物と反応させることができる。
典型的なリンカーとしては、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、アミド結合リンカー、ペプチダーゼ不安定性リンカー、酸不安定性リンカー、及びエステラーゼ不安定性リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、リンカーは開裂可能である。典型的な開裂可能なリンカーには、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＰＤＰ）、４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＰＤＢ）、４−（２−ピリジルジチオ）ペンタン酸（Ｎ−スクシンイミジルＳＰＰ）、４−メチル−４−［２−（５−ニトロ−ピリジル）−ジチオ］ペンタン酸Ｎ−スクシンイミジル（Ｎ−ＳＭＮＰ）が含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、前記リンカーは開裂不能である。例示的な開裂不能リンカーとしては、２−イミノチオラン、アセチルコハク酸無水物、及び４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の典型的なリンカー、例えば、（本明細書の一部として援用する米国特許出願公開番号ＵＳ２０１２０２５３０２１に記載のような）ＣＸ１−１及びアセチルコハク酸無水物は、開裂可能または非開裂可能なリンカーとして使用することができる。
幾つかの実施形態において、前記連結部分は、特定の部位での細胞傷害性化合物の放出を可能にする化学結合を含む。適切な化学結合は当技術分野で周知であり、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸不安定性結合、光不安定性結合、ペプチダーゼ不安定性結合及びエステラーゼ不安定性結合が含まれる（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４７５，０９２号、同第６，４４１，１６３号、同第６，７１６，８２１号、同第６，９１３，７４８号、同第７，２７６，４９７号、同第７，２７６，４９９号、同第７，３６８，５６５号、同第７，３８８，０２６号、及び同第７，４１４，０７３号参照）。他の適切なリンカーには、米国特許公開番号２００５０１６９９３３に詳細に記載されているような非切断性リンカー、または帯電リンカーまたは親水性リンカーが含まれ、それぞれ米国特許出願公開番号２００９／０２７４７１３、２０１０／０１２９３１４０、及び国際公開番号ＷＯ２００９／１３４９７６に記載されており、その各々を明示的に本明細書の一部として援用する。
＜細胞傷害性化合物＞
本開示の態様は、幾つかの細胞傷害性化合物に向けられる。これらの細胞傷害性化合物は、細胞内において細胞傷害性を誘導することができる。上記で述べた抗体の何れかに結合して本開示のＡＤＣを形成するときに、これら細胞傷害性化合物は、標的細胞に直接送達されることができる。正常な薬理学的クリアランス機構の結果として、ＡＤＣに用いられる抗体は限られた量でのみ標的細胞に接触して結合する。従って、前記コンジュゲートに用いられる細胞傷害剤は、治療効果を引き出すための十分な細胞死滅が起こるように、高度に細胞傷害性でなければならない。
本開示の細胞傷害性化合物は、ベンゾジアゼピンが含まれる。幾つかの実施形態において、前記細胞傷害性化合物は、ピローロベンゾジアゼピンである。幾つかの実施形態において、前記細胞傷害性化合物はインドリノベンゾジアゼピンである。幾つかの実施形態において、前記細胞傷害性化合物は表１の化合物である。ＤＧＮ４６２は、例えば米国特許第８，７６５，７４０号に記載されており、その全体を本明細書の一部として援用する。化合物Ｄ３は、例えば、米国特許第８，４２６，４０２号、同第８，８０９，３２０号及び同第８，８０２，６６７号に記載されており、それらの全体を本明細書の一部として援用する。化合物Ｄ１、Ｄ２及びＤ４は、例えば米国仮特許出願番号第１４／４８３，６０４及び第１４／４８３，５２０号（それらの両者を本明細書の一部として援用する）にそれぞれ記載されており、また、「インドリノ−ベンゾジアゼピンＤＮＡ−アルキル化剤の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）」、２０１５ＡＡＣＲ、アブストラクト番号６５２（これを本明細書の一部として援用する）に記載されている。
表１
Figure 2021119171
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表１の化合物を含むベンゾジアゼピンは、本明細書に記載のリンカーを用いて抗体及びその抗原結合性断片に連結される。ＡＤＣの幾つかの実施形態において、ベンゾジアゼピンはＣｙｓ結合型であってよい。他の実施形態では、ベンゾジアゼピンはＳｅｒ結合型であってよい。
本開示はまた、表１の化合物の変形、例えばスルホン化による表１の化合物の修飾に関する。表１の化合物の他の変形は、当業者には容易に明らかである。そのような変形は本開示に包含される。
＜ＡＤＣにおける増大したＲＳＡ＞
ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣは、本明細書において、増大したＲＳＡを示すことが示されている。増大したＲＳＡは、ベンゾジアゼピンに由来する疎水性相互作用の増大から生じ、さらなる可逆的な分子間相互作用をもたらすと考えられている。以下の実施例で示されるように、薬物負荷（「ＤＡＲ」または薬物対抗体比）の増加は、ＲＳＡの増大をもたらす。より高いＤＡＲを有する組成物は、より高い抗体当たりのベンゾジアゼピン量を有する。ベンゾジアゼピンは疎水性で不溶性であり、複数の芳香族環を含む。従って、ベンゾジアゼピンはＡＤＣの他の成分と相互作用すると考えられている。これらの付加的な可逆的分子間相互作用は、本明細書で開示されるＡＤＣのＲＳＡを増大させる。従って、ＲＳＡの量は、薬物負荷が増加するにつれて増大する。その結果として、本開示の疎水性分子（例えば、ベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン）を含むＡＤＣのための医薬製剤を開発することは更に困難である。
＜低下したＲＳＡ組成物＞
驚くべきことに、特定の小さな疎水性分子が、本開示のＡＤＣを含む組成物においてＲＳＡを阻害または低減することが発見された。これらの小分子は、（１）プロリン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン及びバリンを含む疎水性側鎖を有するアミノ酸、及び（２）ベタイン、正に帯電したカチオン性官能基及び負に帯電した官能基を有する小さな中性分子の二つの分類に分けられる。カチオン性官能基及び負に帯電した官能基は隣接している必要はない。カチオン性官能基としては、第４級アンモニウム、第４級ホスホニウムなどのオニウムイオンが挙げ
られる。負に帯電した官能基には、カルボキシル基、サルファイト基、及びホスファイト基が含まれる。典型的なベタインはトリメチルグリシンである。歴史的には、ベタインの用語はトリメチルグリシンを指す。従って、本明細書で使用される文脈に応じて、「ベタイン」の用語は、一般的にはベタインを、または特定的にはトリメチルグリシンを指すことができる。
本開示の１つの態様は、（ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣと、（ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及び／またはアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を含有する組成物に向けられる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子は疎水性側鎖を有するアミノ酸である。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はベタインである。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子はトリメチルグリシンである。幾つかの実施形態において、前記抗体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される。他の実施形態において、前記抗体はヒト化ＣＤ１２３抗体である。特定の実施形態において、前記抗体はＡｂＸである。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンはインドリノベンゾジアゼピンである。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは表１の化合物である。幾つかの実施形態において、前記ＡＤＣは表２におけるＡＤＣである。
表２
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表２において、ｒは１〜１０の整数であり、Ａｂ−ＮＨはリジンを介して化合物に共有結合した抗体であり、ＳｅｒはＮ末端セリンを介して化合物に結合した抗体を示し、Ｃｙｓはシステインを介して化合物に結合した抗体を示す。Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、または任意の医薬的に許容可能なカチオンである。
本開示はまた、表２のＡＤＣのリンカーにおける他の変形に向けられており、これは当業者には容易に明らかである。例えば、ＡＤＣを得るためにリンカー上に示されたＳＯ３Ｍ基が「Ｈ」で置換され、ここでの抗体ＡｂはＳＰＤＢリンカーを介して細胞障害性化合物Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）に結合される。そのような変形及び類似の変形は、本開示に包含される。
幾つかの実施形態では、前記開示された組成物においてＲＳＡが消失する。幾つかの実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約９０％〜１００％減少する。一定の実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約８０％〜約９０％減少する。幾つかの実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約７０％〜約８０％減少する。更なる実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約６０％〜約７０％減少する。なお更なる実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約５０％〜約６０％減少する。未だ更なる実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約４０％〜約５０％減少する。幾つかの実施形態において、ＲＳＡは前記開示された組成物において約３０％〜約４０％減少する。
抗体またはＡＤＣの構造及び安定性を維持するために、抗体またはＡＤＣのための従来の製剤は、約５〜６．５のｐＨに緩衝されている。驚くべきことに、我々は、ｐＨが溶液中のＲＳＡの量及び程度に影響を及ぼし、具体的には約４〜４．５の予想より低いｐＨがＡＤＣのＲＳＡを低下させ得ることを発見した。本開示の別の態様は、ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを含有する組成物であって、低ｐＨを有する前記組成物に関する。より低いｐＨはより高い量のＨ＋を可能にし、該イオンは溶液中の抗体と非共有結合的に相互作用して、分子間相互作用によりオリゴマー種を形成する抗体の能力を阻害し、それによってＲＳＡを低減させることができる。幾つかの実施形態において、前記組成物は約４．０〜約４．５のｐＨを有する。本開示の一態様は、約４．０〜約４．５のｐＨを有する組成物であって、ベタイン及びベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを含有する組成物に関する。幾つかの実施形態において、前記ベタインはトリメチルグリシンである。本開示の別の態様は、ｐＨが４．０〜４．５であり、疎水性側鎖を有するアミノ酸及びベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを含有する組成物に関する。幾つかの実施形態において、前記ベンゾジアゼピンは表１の化合物である。幾つかの実施形態において、前記ＡＤＣは表２のＡＤＣである。
本開示の組成物は、例えば、それを必要とするヒトへの投与のような、医薬用途について許容され得るように製剤化される。幾つかの実施形態において、ＡＤＣは、生理学的に許容可能な担体（例えば、賦形剤または希釈剤）を含有する組成物に製剤化される。生理学的に許容可能な担体は周知で且つ容易に入手可能であり、緩衝剤、抗酸化剤、静菌剤、塩、及び当該組成物を患者の血液または他の体液と等張にする溶質、並びに水性及び非水性の滅菌懸濁液であって、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤（例えば、界面活性剤）、及び防腐剤を含有できるものが含まれる。担体の選択は、少なくとも部分的には、標的組織及び／または細胞の位置、並びに組成物を投与するために使用される特定の方法によって決定される。ＡＤＣ医薬製剤に使用するのに適した担体及び賦形剤の例は、例えば、国際（ＰＣＴ）特許出願番号ＷＯ００／０２５８７、ＷＯ０２／０６０９５５、及びＷＯ０２／０９２１２７、並びに Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １１２， ２６７−２７７ （１９８８）に記載されている。
医薬的に許容される緩衝剤は、開示される組成物との関連で使用され得る。幾つかの実施形態においては、コハク酸塩が、開示される組成物との関連で緩衝剤として使用され得る。他の実施形態においては、開示された組成物に関連してクエン酸塩を緩衝剤として使用することができる。幾つかの実施形態では、コハク酸塩またはクエン酸塩に加えて亜硫酸水素ナトリウムを使用することができる。前記開示された組成物と共に使用できる他の典型的な緩衝剤には、酢酸塩及びリン酸塩が含まれる。前記緩衝剤は、所望の条件下で前記組成物の十分な安定性が達成される限り、任意の適切な濃度で本開示の組成物中に存在してよい。この点に関して、前記組成物中の緩衝剤の濃度は、約２ｍＭ〜約５０ｍＭ（例えば、約２〜１０ｍＭ、約１０〜２０ｍＭ、約２０〜３０ｍＭ、約３０〜４０ｍＭ、または約４０〜５０ｍＭ）である。幾つかの実施形態において、前記組成物中の緩衝剤の濃度は約５〜１５ｍＭ（例えば、約１０ｍＭ）である。幾つかの実施形態において、前記緩衝剤は、コハク酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウムである。幾つかの実施形態において、前記緩衝剤はクエン酸ナトリウムである。前記緩衝剤は、典型的にはｐＨが所望の範囲内に維持されるように、前記開示された組成物中に存在する。
本開示の組成物はまた、任意に界面活性剤を含む。任意の適切な界面活性剤を使用することができる。適切な界面活性剤は、当業者に周知である。幾つかの実施形態において、前記界面活性剤はポリソルベートである。幾つかの実施形態において、前記界面活性剤はポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。前記界面活性剤は、所望の条件下で前記組成物の十分な安定性が達成される限り、任意の適切な濃度で本開示の組成物中に存在し得る。この点に関して、前記組成物中の界面活性剤の濃度は、前記組成物の全容積の約０．００２％〜約０．１％ｗｔ／ｖｏｌ（例えば、約０．００２〜０．０１％、約０
．００５〜０．０２％、または約０．０１〜０．１％ｗｔ／ｖｏｌ）である。幾つか実施形態において、前記組成物中の界面活性剤の濃度は前記組成物の全容積の、約０．００５〜０．０２％ｗｔ／ｖｏｌ（例えば、約０．０１％ｗｔ／ｖｏｌ）である。
本開示の組成物は、糖の添加によって更に安定化され得る。幾つかの実施形態において、前記糖はスクロースまたはトレハロースである。幾つかの実施形態において、前記組成物中のスクロースまたはトレハロースの濃度は、前記組成物の全容積の約０．１％〜約１０％ｗｔ／ｖｏｌ（例えば、約０．１〜１％、約２〜５％、または約７〜１０％ｗｔ／ｖｏｌ）である。前記組成物はまた、更に増量剤を含むことができる。幾つかの実施形態において、前記増量剤はマンニトールである。他の実施形態において、前記増量剤はグリシンである。
本開示の組成物は、凍結乾燥することができる。凍結乾燥とは、真空下での凍結乾燥をいう。凍結乾燥は、典型的には、溶質が溶媒から分離されるように特定の製剤を凍結することによって達成される。次いで、昇華（即ち、一次乾燥）し、次に脱着（即ち、二次乾燥）することによって溶媒を除去する。本開示の組成物を凍結乾燥し、次いで再構成する場合、ＲＳＡは依然として低減または阻害される。従って、前記小さな疎水性分子は凍結乾燥の前に組成物に添加することができるが、低減または阻害されたＲＳＡの利点は、凍結乾燥後に再構成される組成物においてなお実現される。
凍結及び乾燥の際の組成物の分解を防ぐために、前記凍結乾燥組成物は任意に、更に凍結保護剤を含む。幾つかの実施形態において、前記凍結保護剤は非晶質の凍結防止剤である。本明細書で使用する「凍結保護剤」の用語は、凍結中に不安定な分子を保護する賦形剤を指す。本開示の組成物での使用に適した凍結防止剤は、当業者に知られており、例えばグリセロール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストラン、グルコース、トレハロース及びスクロースが含まれる。幾つかの実施形態において、前記凍結防止剤はスクロースである。前記凍結保護剤は、凍結乾燥組成物中に任意の適切な量で存在し得る。幾つかの実施形態において、前記凍結乾燥組成物は、前記コンジュゲートのｍｇ当たり約０．５ｍｇ〜約５ｍｇ（例えば約０．５ｍｇ〜約２ｍｇ）の凍結保護剤（例えば１ｍｇの前記コンジュゲート当たり約０．８ｍｇの凍結保護剤）を含有する。幾つかの実施形態において、前記凍結乾燥組成物は、１ｍｇのコンジュゲート当たり約２ｍｇの凍結保護剤を含有する。幾つかの実施形態において、前記凍結乾燥組成物は、１ｍｇのコンジュゲート当たり約４ｍｇの凍結保護剤を含有する。幾つかの実施形態において、前記凍結保護剤はスクロースであり、１ｍｇの前記コンジュゲート当たり約０．５ｍｇ〜約２ｍｇ（例えば約１ｍｇ）のスクロースを含有する。
凍結乾燥方法は当該技術分野で周知であり、例えば、Ｗａｎｇ， Ｗ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ．， ２０３， １−６０ （２０００）に記載されている。例えば、本開示の凍結乾燥組成物は、以下の工程を含む凍結サイクルを使用して製造することができる：（１）棚温度４℃及び周囲室内圧力で２．５時間の予備冷却、（２）−５０℃の棚温度及び周囲室内圧力で１４時間の凍結、（３）−２０℃の棚温度及び周囲室内圧力で６時間のグリシン再結晶化、（４）−５０℃の棚温度及び周囲室内圧力で１６時間の再凍結、（５）−１３℃の棚温度及び１００ｍＴｏｒｒの圧力で２４時間の一次乾燥、（６）２４℃の棚温度及び１００ｍＴｏｒｒの圧力で１０時間の二次乾燥１０時間、及び（７）２４℃の棚温度及び周囲室内圧力での停止段階。しかし、本開示の凍結乾燥組成物は、上記の方法により製造された組成物に限定されない。実際、任意の適切な凍結乾燥方法を用いて、本開示の凍結乾燥組成物を生成することができ、選択された凍結乾燥パラメータ（例えば、乾燥時間）は、凍結乾燥すべき溶液の容積を含む種々の因子に応じて変化することが当業者には明らかであろう。
本開示の組成物は、多くの理由で、先行技術の製剤よりも有利である。モノマーの量の増加は、効力の増加した組成物をもたらす。各組成物が１用量当たりでより大きな治療効果をもたらすので、効力が増加する。これは、被験体が必要とする投与の回数を低減させるので有利である。
効力の増加に加えて、本開示の組成物はまた毒性を減少させ、それにより患者の安全性を改善する。本開示の組成物は、低下したＲＳＡによって、標的部位により多くの細胞傷害性化合物を送達し、それにより非標的部位と相互作用する細胞傷害性化合物の量を低減させる。更に、ＲＳＡの低下は溶液の粘度を低下させ、それにより開示された組成物がシリンジのプランジャを詰まらせたり妨げたりする可能性が低いので、幾つかの投与様式の有効性が改善される。
＜治療の方法＞
本開示はまた、被験体において癌を処置する方法であって、前記被験体に対して、（ａ）ベンゾジアゼピンを含む有効量のＡＤＣと、（ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を含有する組成物を投与することを含み、前記ＡＤＣは１以上の細胞において細胞傷害性であり、それにより癌を治療する前記方法に向けられる。幾つかの実施形態において、前記組成物は約４．０〜約４．５のｐＨを有する。ベンゾジアゼピン、小さな疎水性分子、賦形剤（例えば、緩衝剤、界面活性剤、糖類など）、及び本明細書に記載の他の成分を含む前記ＡＤＣの記載はまた、本治療方法に使用される組成物にも適用可能である。
被験体に前記組成物を投与する任意の適切な手段を用いることができるが、幾つかの実施形態では、前記開示された組成物を注射によりヒトに投与する。幾つかの実施形態において、開示された組成物は輸液を介してヒトに投与される。本明細書で使用するとき、「注射」の用語は、開示された組成物をヒトの標的組織に強制的に導入することを言う。本明細書で使用するとき、用語「輸液」の用語は、ヒトの組織、例えば静脈内への開示された前記組成物の導入を指す。前記組成物は、任意の適切な経路によってヒトに投与することができる。幾つかの実施形態では、前記組成物をヒトの静脈内または腹腔内投与する。幾つかの実施形態において、前記投与は腫瘍内である。前記組成物が注射によって投与されるときは、任意の適切な注射装置を使用して組成物を投与することができる。例えば、一般的な医療用注射器は、組成物を皮下腫瘍に直接注射するために使用できる。或いは、開示された液体組成物中に腫瘍を浸すことによって、前記腫瘍に局所的に前記組成物を適用できる。同様に、任意の適切な送達装置（例えば、カテーテル）を使用して、開示された組成物を一定期間に亘って前記腫瘍に灌流することができる。前記組成物をヒトに送達するために、他の投与経路を使用できる。幾つかの経路は、他の経路よりも更に迅速かつ効果的な反応を提供できる。幾つかの実施形態において、前記組成物は、皮膚及び粘膜表面の群、並びにそれらの組み合わせの群から選択される被験体の表面に投与される。例えば、前記開示される組成物は、体腔内に適用または注入され、皮膚を介して吸収され、吸入され、または例えば筋肉内または動脈内投与を介して非経口的に投与されることができる。幾つかの実施形態において、ヒトに非経口投与された前記開示された組成物は、特定の細胞、例えば癌細胞に特異的にターゲッティングされる。
＜製剤化の方法＞
本開示はまた、製剤化の方法であって、水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを与えることと、前記ＡＤＣを含む水溶液に、疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を添加することを含む前記方法に向けられる。幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む。幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記溶液を凍結乾燥する工程を含む。幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記凍結乾燥された組成物
を再構成することを含む。
前記方法の更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約３０％〜約４０％低減させる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約４０％〜約５０％低減させる。一定の実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約５０％〜約６０％低減させる。更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約６０％〜約７０％低減させる。なお更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約７０％〜約８０％低減させる。未だ更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約８０％〜約９０％低減させる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを約９０％〜１００％低減させる。なお更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記水溶液中のＲＳＡを消失させる。幾つかの実施形態において、前記ＲＳＡの量はマルチアングル光散乱によって測定される。幾つかの更なる実施形態において、前記ＲＳＡの量は動的光散乱によって測定される。
幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それにより凍結乾燥組成物を得ることを含む。特定の実施形態において、前記方法は、前記凍結乾燥組成物を再構成し、それにより再構成凍結乾燥組成物を作製することを含む。前記方法の更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約３０％〜約４０％低減させる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約４０％〜約５０％低減させる。一定の実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約５０％〜約６０％低減させる。更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約６０％〜約７０％低減させる。なお更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約６０％〜約７０％低減させる。更なる実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約７０％〜約８０％低下させる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約８０％〜約９０％低減させる。特定の実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成された凍結乾燥組成物中のＲＳＡを約９０％〜１００％低減させる。幾つかの実施形態において、前記小さな疎水性分子の添加は、前記再構成凍結乾燥組成物中のＲＳＡを消失させる。
ベンゾジアゼピン、前記小さい疎水性分子、賦形剤（例えば、緩衝剤、界面活性剤、糖類など）、及び本明細書に記載の他の成分を含むＡＤＣの記載はまた、前記治療法に使用される組成物にも適用可能である。
＜ＲＳＡを低減させる方法＞
本開示はまた、ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣにおいてＲＳＡを低下させる方法にも向けられる。一つの態様は、ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣにおいてＲＳＡを低減させる方法であって、ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを水溶液中に提供し、ここでの前記ＡＤＣはＲＳＡを示すことと、前記水溶液に疎水性側鎖を有するベタイン及び及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を加え、ここでの前記小さな疎水性分子はＲＳＡを低減または阻害することとを含む、前記方法に向けられる。幾つかの実施形態において、前記方法は更に、可逆的自己会合を検出することを含む。一定の実施形態において、前記方法は更に、前記水溶液を凍結乾燥することを含む。更なる実施形態において、前記方法は更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む。
幾つかの実施形態では、前記開示された組成物においてＲＳＡが消失される。幾つかの
実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約９０％〜１００％減少する。一定の実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約８０％〜約９０％減少する。幾つかの実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約７０％〜約８０％減少する。更なる実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約６０％〜約７０％減少する。更に別の実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約５０％〜約６０％減少する。更に別の実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約４０％〜約５０％減少する。幾つかの実施形態では、開示される組成物においてＲＳＡは約３０％〜約４０％減少する。幾つかの実施形態において、前記方法は更に、前記溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む。
ベンゾジアゼピン、小さな疎水性分子、賦形剤（例えば、緩衝剤、界面活性剤、糖類など）、及び本明細書に記載される他の成分を含むＡＤＣの記載はまた、ＲＳＡを低減する方法において使用される組成物にも適用可能である。
実施例１：ＲＳＡの検査
この実施例は、インドリノベンゾジアゼピンＡＤＣ、ｈｕＭｙ９−６−ＤＧＮ４６２における可逆的自己会合の程度を評価するための技術として、動的光散乱及び沈降速度分析用超遠心分離の使用を実証する。
動的光散乱は、一定の散乱角で溶液中のタンパク質または抗体から散乱される光の強度の時間依存的変動を測定する。タンパク質または抗体またはＡＤＣ分子がブラウン運動を起こすに伴って、それらの相対位置は時間と共に変化する。急速に拡散する小分子は、急速に変動するシグナルを生成するが、より大きなタンパク質及び抗体は、より遅いシグナル変動を生じる。並進拡散係数Ｄｔは、強度における時間依存的変動の強度自己相関関数に関係する。流体力学的直径は、ストークス・アインシュタインの関係を用いて決定することができる［ｄｈ＝Κτ／３πηＤｔ、ここでのｄｈは流体力学的直径であり、ＫＴはボルツマン定数であり、ηは粘度であり、Ｄｔは並進拡散係数でである］。散乱強度データは、ＤＬＳ機器ソフトウェアを用いて処理されて、散乱分子、即ち、タンパク質または抗体検体の並進拡散係数及びサイズ分布の値が決定される。
全てのタンパク質は、天然状態と非天然状態との間の変動で生じる部分的アンフォールディングに由来する疎水性パッチの露出の結果として、静止保存中にある程度凝集する。これらの凝集体は、ｐＨまたは希釈度の変化に伴って解離することはなく、解離させるためにはグアニジンまたは尿素等のカオトロープ剤の導入を必要とする。動的光散乱技術によって調べると、少量の凝集タンパク質を含有する溶液は、純粋な単量体タンパク質の溶液と実質的に異なっては見えない。即ち、流体力学的直径及び拡散係数は、濃度のような溶液特性にかかわらず比較的一定のままである。
しかしながら、希釈などの溶液特性の変化が会合状態の変化をもたらし得る（即ち、自己会合を崩壊させる）可逆的自己会合の場合、ＤＬＳを使用して、所定の濃度についての独特な拡散係数を測定することができる。タンパク質または抗体濃度に対する並進拡散係数のプロットは、傾きｍ及びｙ切片ｂを有する最良適合線をもたらす。傾きｍが正の線は、タンパク質または抗体の正味の反発相互作用を示し、負の傾きは正味の引力相互作用を示す。これは図１に見ることができる。
沈降速度分析用超遠心分離（ＳＶ−ＡＵＣ）は、遠心分離機内で発生する遠心力に応答して溶液中の分子が移動する速度を測定する。ＳＶ−ＡＵＣでは、試料を非常に高速で回転させ（４２〜６０ｋｒｐｍ）、濃度勾配の発生をＵＶ吸収光学系によってモニターする。高い遠心力は、タンパク質または抗体をロータの中心から急速に枯渇させ、経時的にロ
ータの外側に向けて移動する境界を形成する。この境界が移動する速度は沈降係数の尺度であり、一般に式ｓ＝ｍ／６πηｒ０で表される分子量及び分子形状に関係し、ここでのｍは分子量、ηは粘度、ｒ０は粒子の半径である。これらのデータから、サンプル中の様々な大きさの成分の分布を測定することができる。
境界が移動する速度は、分子の沈降の反対方向に作用する拡散力及び摩擦力にも依存する。沈降境界の最小幅は拡散係数に関連している。類似した沈降係数を有する幾つかの種が存在すると、境界が予想よりも広くなる。
可逆的に自己会合する分子の場合、沈降境界は、沈降の時間スケールに亘って安定なより高次のオリゴマーの存在に起因して予想よりも広い。これは、測定された沈降係数の分子について予想されるよりも、遥かに速い拡散として現れる。これを説明するために、摩擦比ｆ／ｆ０［ここで、ｆはタンパク質または抗体の摩擦係数であり、ｆ０は半径ｒの硬い球体の摩擦係数である］から推測される分子の形状は、より球形になるように計算される。球形よりも伸長された可逆的に自己会合する抗体の場合、摩擦比は非会合抗体（約１．５）よりもかなり小さい（約１）。
可逆的に自己会合する分子の場合、試料中の成分分布の濃度依存的尺度も存在する。ＳＶ−ＡＵＣでは、連続的に希釈された一組のサンプルのセットが実行されると、成分の相対的な比率及び測定された沈降係数が変化する。溶液がより希釈されるにつれて、沈降係数は期待値に近づき始める。抗体の場合、これは約６．５ｓである。これは、図２Ａ及び図２Ｂに見ることができる。
実施例２ａ：ＲＳＡに対する薬物負荷の影響
この実施例は、インドリノベンゾジアゼピンＡＤＣにおける可逆的自己会合の程度に対する薬物負荷（ＤＡＲ）の影響を実証する。ＤＡＲは、抗体に結合したインドリノベンゾジアゼピン分子の平均を表す。
４−（２−ピリジニルジチオ）−２−スルホ−，１−（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）ブタン酸エステル（ｓＳＰＤＢ）リンカーを介してインドリノベンゾジアゼピンＤＧＮ４６２と化学的に結合したｈｕＭｙ−９−６モノクローナル抗体を含むコンジュゲート（このＡＤＣは「ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２」と呼ばれる）は、本明細書に記載され且つ当該技術で既知の方法を使用して調製され（本明細書の一部として援用する、例えば米国特許第８，８８９，６６９号を参照されたい）、１．８、２．４及び２．８の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を生じさせた。薬物負荷は異なるが、同じ抗体濃度（約２ｍｇ／ｍＬ）を有するｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２コンジュゲートを、２０ｍＭヒスチジン、８％トレハロース、０．０２％ポリソルベート２０、ｐＨ６．１中において製剤化した。
図３から分かるように、より低い薬物負荷を有する組成物は、より高い薬物負荷を有する組成物よりも小さい流体力学的直径を有し、各抗体に結合したインドリノベンゾジアゼピン部分の間に分子間相互作用があることを示唆する。
実施例２ｂ：ＲＳＡが減少した組成物
この実施例は、インドリのベンゾジアゼピン（ＤＧＮ４６２）に化学的に結合された抗体、緩衝剤、界面活性剤、疎水性アミノ酸、糖、及び水を含有した、可逆的自己会合を低減または阻害する組成物の製造を実証するものである。
４−（２−ピリジニルジチオ）−２−スルホ−，１−（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）ブタン酸エステル（ｓＳＰＤＢ）リンカーを介して、インドリノベンゾジアゼピ
ンＤＧＮ４６２と化学的に結合されたｈｕＭｙ−９−６モノクローナル抗体を含むコンジュゲート（ＡＤＣは「ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２」と呼ばれる）を、本明細書に記載の方法及び当技術分野で既知の方法（例えば、米国特許第８，８８９，６６９号参照）を用いて調製した。ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２コンジュゲートを、次のようにして製剤化した：（ａ）０．２ｍｇ／ｍＬのＡＤＣ、２０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ６．１、（ｂ）０．２ｍｇ／ｍＬのＡＤＣ、１０ｍＭのコハク酸塩、８％のトレハロース、ｐＨ４．２、（ｃ）０．５ｍｇ／ｍＬのＡＤＣ、１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、２８０ｍＭのベタイン、ｐＨ４．２、（ｄ）０．５ｍｇ／ｍＬのＡＤＣ、１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、２８０ｍＭのプロリン、ｐＨ４．２。可逆的自己会合に対する製剤のｐＨ及び賦形剤の効果を実証する、動的光散乱の分析結果を図４に示す。図４に示すように、プロリン及びベタインを含む製剤は最も小さい負の傾きを有し、他の製剤と比較したときに、正味の引力相互作用の量がより少ないことを示す。１０ｍＭのコハク酸塩、２８０ｍＭのプロリン製剤についてのＳＶ−ＡＵＣの結果を図５に示す。この結果は、コハク酸／プロリンまたはコハク酸／ベタイン製剤が、ＲＳＡを低下させるために、トレハロース／ヒスチジンｐＨ６．１製剤より優れていることを示している。
これらの実験は、本開示の前記組成物における驚くほど減少したＲＳＡを示している。
実施例３ａ：ＲＳＡが減少した製剤：プロリンとのＡｂＸ−Ｄ２コンジュゲート
この実施例は、インドリノベンゾジアゼピンＤ２に化学的に結合した抗体を含むコンジュゲート、緩衝剤、界面活性剤、疎水性アミノ酸、糖及び水を含有する、可逆的自己会合を減少または消失させるための組成物の製造を示す。
インドリノベンゾジアゼピンＤ２に化学的に結合したモノクローナル抗体ＡｂＸを含むコンジュゲート（本明細書では「ＡｂＸ−Ｄ２」と称する）は、本明細書及び米国特許出願番号１４／８４３，５２０（その全部を本明細書の一部として援用する）に記載の方法を用いて調製される。ＡｂＸ−Ｄ２コンジュゲートを含む組成物は、以下のように処方される：（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ６．１、（ｂ）１０ｍＭの酢酸塩、８％のトレハロース、ｐＨ４．２、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、２８０ｍＭのプロリンまたは２８０ｍＭのベタイン、ｐＨ４．２、（ｄ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、及び場合により０．０２％のポリソルベート、ｐＨ４．２。各組成物について、２〜２００μＭの亜硫酸水素塩もまた含まれてよい。
実施例３ｂ：ＲＳＡが減少した製剤：ロイシンを用いたｈｕＭｏｙｌ９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１コンジュゲート
この実施例は、インドリノベンゾジアゼピンＤ３に化学的に結合された抗体を含むコンジュゲート、緩衝剤、界面活性剤、疎水性アミノ酸、糖、及び水を含有した、可逆的自己会合を減少または消失させるための組成物の製造を示す。
インドリノベンゾジアゼピンＤ１に化学的に結合されたｈｕＭｏｖ１９モノクローナル抗体を含むコンジュゲート（本明細書では「ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１」と称する）は、本明細書に記載の方法を用いて調製される（例えば、米国特許出願番号１４／８４３，６０４参照）。ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１コンジュゲートを含む組成物は、以下のように処方される：（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ６．１、（ｂ）１０ｍＭの酢酸塩、８％のトレハロース、ｐＨ４．２、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、１２５ｍＭのロイシン、ｐＨ４．２、（ｄ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、及び場合により０．０２％のポリソルベート、ｐＨ４．２。
実施例３ｃ：ＲＳＡが減少した製剤：イソロイシンを用いたｈｕＭｏｙｌ９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４コンジュゲート
この実施例は、インドリノベンゾジアゼピンＤ４に化学的に結合した抗体を含むコンジュゲート、緩衝剤、界面活性剤、疎水性アミノ酸、糖及び水を含有した、可逆的自己会合を減少または消失させるための組成物の製造を示す。
インドリノベンゾジアゼピンＤ４に化学的に結合したｈｕＭｏｖ１９モノクローナル抗体を含むコンジュゲート（本明細書では「ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４」と称する）は、本明細書に記載の方法を用いて調製される（例えば、米国特許出願番号１４／８４３５２０参照）。ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４コンジュゲートを含有する組成物は、以下のように処方される：（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ６．１、（ｂ）１０ｍＭの酢酸塩、８％のトレハロース、ｐＨ４．２、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、１２５ｍＭのイソロイシン、ｐＨ４．２、（ｄ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、及び場合により０．０２％のポリソルベート（ｐＨ４．２）。
実施例４：Ｄ１を製造する方法
Figure 2021119171
化合物１ａ：無水ジメチルホルムアミド（１６．４８ｍＬ）及び無水テトラヒドロフラン（１６．４８ｍＬ）中の（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（１．０１ｇ、６．５９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタン酸（１．２８１ｇ、６．５９ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（２．５３ｇ、１３．１９ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（０．０８１ｇ、０．６５９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で１８時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。この有機抽出物を水及びブラインで洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。この溶液を濾過し、減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）により精製し、化合物Ｉａを白色固体として得た（０．７０ｇ、収率３２％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６：δ９．
９０（ｓ， １Ｈ）， ７．４３（ｓ， ２Ｈ）， ６．９３（ｓ， １Ｈ）， ５．１６（ｔ， ２Ｈ， Ｊ＝５．７Ｈｚ）， ４．４４（ｄ， ４Ｈ， Ｊ＝５．７Ｈｚ）， ２．４３（ｓ， ３Ｈ）， ２．４１−２．３８（ｍ， ２Ｈ）， １．９２−１．８８（ｍ， ２Ｈ）
， １．２９（ｓ， ６Ｈ）．ＭＳ（ｍ／ｚ）， 実測値３３０．０（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
化合物１ｂ：無水ジクロロメタン（６．６５ｍＬ）中の化合物Ｉａ（２１９ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）の冷却（−１０℃）溶液に、トリエチルアミン（４６３μＬ、３．３２ｍｍｏｌ）を加え、続いて無水メタンスルホン酸（２９８ｍｇ、１．６６２ｍｍｏｌ）を滴加した。この混合物を−１０℃で２時間撹拌し、次いで混合物を氷水でクエンチし、冷酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。この有機抽出物を氷水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して粗製ジメシレートを得た。
前記粗製ジメシレート（２２７ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ）及びＩＧＮモノマーＡ（３０３ｍｇ、１．０２８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（３．１１ｍＬ）中に溶解した。炭酸カリウム（１６１ｍｇ、１．１６９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。脱イオン水を加え、得られた沈殿物を濾過し、水で濯いだ。固体をジクロロメタンに再溶解し、水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ジクロロメタン）で精製して、化合物１ｂ（２２７ｍｇ、収率３６％）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）、実測値８８２．５（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
化合物１ｃ：化合物１ｂ（２２７ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）の無水１，２−ジクロロエタン（３．３４６ｍＬ）中の懸濁液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（ＳＴＡＢ）（３７．３ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で１時間撹拌し、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。この混合物をジクロロメタンで抽出し、ブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製残渣をＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｃ１８、水／アセトニトリル）により精製した。所望の生成物を含む画分をジクロロメタンで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して化合物１ｃを得た（３５ｍｇ、１９％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）、実測値８８４．３（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
化合物１ｄ：アセトニトリル（９２１μＬ）及びメタノール（６５８μＬ）中の化合物１ｃ（１８ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）（１７．５１ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）を加え、リン酸ナトリウム緩衝液（１３２μＬ、０．７５Ｍ、ｐＨ６．５）中の飽和炭酸水素ナトリウム溶液（０．２ｍＬ）で中和した。この混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで、ジクロロメタン及び脱イオン水で希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して粗製チオールを得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）、実測値８３８．３（Ｍ＋１）＋。
工程５からの粗製チオール（１５．５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を、２−プロパノール（１．２３ｍＬ）に溶解した。脱イオン水（６１７μＬ）及び亜硫酸水素ナトリウム（５．７７ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５時間撹拌した。反応物をアセトン／ドライアイス浴中で凍結し、凍結乾燥させ、ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｃ１８、脱イオン水／アセトニトリル）によって精製した。所望の生成物を含有する画分を凍結し、凍結乾燥して、化合物（１２Ｓ，１２ａＳ）−９−（（３−（４−メルカプト−４−メチルペンタンアミド）−５−（（（（Ｒ）−８−メトキシ−６−オキソ−１１，１２，１２ａ，１３−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２−ａ］インドール−９−イル）オキシ）メチル）ベンジル）オキシ）−８−メトキシ−６−オキソ−１１，１２，１２ａ，１３−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２−ａ］インドール−１２−スルホン酸（化合物１ｄ、本明細書ではＤ１とも称する）を得た（６．６ｍｇ、収率３９％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）、実測値９１８．２（Ｍ−１）−。
実施例５：ｈｕＭＯＶ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−１ｄの調製
５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液、及び１５％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒中に、リンカーによる２．０ｍｇ／ｍＬのｈｕＭＯＶ１９抗体及び６モル当量のスルホ−ＳＳＰＤＢ−１ｄのインサイチュー混合物を含有する反応物を、２５℃で６時間コンジュゲートさせた。前記インサイチュー混合物は、１０ｍＭのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下に、１．５ｍＭのスルホ−ＳＰＤＢリンカーを１００％ＤＭＡ中の１．９５ｍＭの化合物１ｄと４時間反応させることにより調製した。次いで、３倍過剰量のマレイミド−プロピオン酸を添加することにより、遊離のチオールをキャップした。
反応後、コンジュゲートを精製し、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ， ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、緩衝液を、１００ｍＭのアルギニン、２０ｍＭのヒスチジン、２％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０，５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム処方の緩衝液ｐＨ６．１に交換した。透析はＳｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２０，０００ ＭＷＣＯ）を用い、４℃で２０時間、同じ緩衝液中で行った。
前記精製されたコンジュゲートは、抗体当たり平均２．５分子の結合された化合物１ｄ（モル吸光係数は、化合物１ｄについてはε３３０ｎｍ＝１５，２８０ｃｍ−１Ｍ−１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１、並びにｈｕＭＯＶ１９抗体についてはε２８０ｎｍ＝２０１，４００ｃｍ−１Ｍ−１を使用したＵＶ−Ｖｉｓによる）、９５％モノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜０．１％の非コンジュゲート化合物１ｄ（アセトン沈殿、逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び１．８ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を有することが分かった。前記コンジュゲートされた抗体は、＞８０％完全な形であることがゲルチップ分析により判明した。
実施例６：Ｄ２を製造する方法
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル ６−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（（（（Ｓ）−８−メトキシ−６−オキソ−１１，１２，１２ａ，１３−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２−ａ］インドール−９−イル）オキシ）メチル）−５−（（（（Ｒ）−８−メトキシ−６−オキソ−１２ａ，１３−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２−ａ］インドール−９−イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−６−オキソヘキサノエート（化合物９０、本明細書ではＤ２とも呼ぶ）の合成
Figure 2021119171
工程１：（Ｓ）−２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５ｇ、２２．４０ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−アミノプロパノエート塩酸塩（４．４８ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（４４．８ｍＬ）中に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．７２ｇ， ２４．６４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．４３ｇ、２２．
４０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．７５ｍＬ、５６．０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を、アルゴン下において、室温で一晩攪拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、次いで飽和塩化アンモニウム、飽和炭酸水素ナトリウム、水及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。粗製油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製して化合物８１を得た（６．７ｇ、収率８５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ７．３８−７．３１（ｍ， ５Ｈ）， ６．５３−６．４２（ｍ， １Ｈ）， ５．４２−５．３３（ｍ， １Ｈ）， ５．１４
（ｓ， ２Ｈ）， ４．４８−４．４１（ｍ， １Ｈ）， ４．３２−４．２０（ｍ， １Ｈ
）， １．４９（ｓ， ９Ｈ）， １．４２（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， １．３８（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
Figure 2021119171
工程２：化合物８１（６．７ｇ、１９．１２ｍｍｏｌ）をメタノール（６０．７ｍＬ）及び水（３．０３ｍＬ）中に溶解した。溶液をアルゴンで５分間パージした。炭素上のパラジウム（湿潤、１０％）（１．０１７ｇ、０．９５６ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。反応物を水素雰囲気下で一晩撹拌した。この溶液を、セライトを通して濾過し、メタノールで
濯ぎ、濃縮した。それをメタノール及びアセトニトリルと共沸させ、得られた油状物を高真空下に直接置いて化合物８２（４．０２ｇ、収率９７％）を得、これを次の工程で直接使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ７．７８−７．６３（ｍ， １Ｈ）， ４．４９−４．４２（ｍ， １Ｈ）， ３．５５−３．５０（ｍ， １Ｈ）， １
．７３（ｓ， ２Ｈ）， １．４８（ｓ， ９Ｈ）， １．３９（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， １．３６（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）．
Figure 2021119171
工程３：化合物８２（４．０２ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ）及びアジピン酸モノメチル（３．０３ｍＬ、２０．４５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（６２．０ｍＬ）中に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（３．９２ｇ、２０．４５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．８５ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６．４９ｍＬ、３７．２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で一晩撹拌した。反応物をジクロロメタン／メタノール（１５０ｍＬ、５：１）で希釈し、飽和塩化アンモニウム、飽和炭酸水素ナトリウム及びブラインで洗浄した。これを硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、ストリッピングした。この化合物をアセトニトリル（５×）と共沸させ、次いで３５℃で高真空下にポンプ輸送して、化合物８３を得た（６．６６ｇ、収率１００％）。この粗製物質を精製することなく次の工程に用いた。１Ｈ
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ ６．７５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）
， ６．４４（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ４．５２−４．４４（ｍ， １Ｈ）， ４．４３−４．３６（ｍ， １Ｈ）， ３．６５（ｓ， ３Ｈ）， ２．３５−２．２９（ｍ，
２Ｈ）， ２．２５−２．１８（ｍ， ２Ｈ）， １．７１−１．６０（ｍ， ４Ｈ）， １．４５（ｓ， ９Ｈ）， １．３６（ｔ， ６Ｈ， Ｊ＝６．０Ｈｚ）．
Figure 2021119171
工程４：化合物８３（５．９１ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（２８．６ｍＬ、３７２ｍｍｏｌ）及び脱イオン水（１．５ｍＬ）中において室温で３時間攪拌した。反応混合物をアセトニトリルで濃縮し、高真空下に置いて、粗製化合物８４を粘着性固体として得た（５．８８ｇ、収率１００％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）：δ
７．２１（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ６．８１（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝７．６Ｈｚ）
， ４．６９−４．６０（ｍ， １Ｈ）， ４．５９−４．５１（ｍ， １Ｈ）， ３．６９
（ｓ， ３Ｈ）， ２．４０−２．３３（ｍ， ２Ｈ）， ２．３１−２．２４（ｍ， ２Ｈ
）， １．７２−１．６３（ｍ， ４Ｈ）， １．５１−１．４５（ｍ， ３Ｈ）， １．４
２−１．３７（ｍ， ３Ｈ）．
Figure 2021119171
工程５：化合物８４（５．６ｇ、１８．５２ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１１８ｍＬ）及び無水メタノール（５８．８ｍＬ）中に溶解した。（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（２．７０ｇ、１７．６４ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（８．７２ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。溶媒を除去し、酢酸エチルを加えた。得られたスラリーを濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空／Ｎ２下で乾燥して化合物８５を得た（２．７９ｇ、収率３６％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ ９．８２（ｓ， １Ｈ）， ８．０５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝９．２Ｈｚ）， ８．０１（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， ７．４６（ｓ， ２Ｈ）， ６．９５（３， １Ｈ）， ５．２１−５．１２（ｍ， ２Ｈ）， ４．４７−４．４２（ｍ， ４Ｈ）， ４．４０
−４．３３（ｍ， １Ｈ）， ４．３３−４．２４（ｍ， １Ｈ）， ３．５８（ｓ， ３Ｈ
）， ２．３３−２．２６（ｍ， ２Ｈ）， ２．１６−２．０９（ｍ， ２Ｈ）， １．５
４−１．４６（ｍ， ４Ｈ）， １．３０（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， １．２２（
ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝４．４Ｈｚ）．
Figure 2021119171
工程６：化合物８５（０．５２ｇ、１．１８９ｍｍｏｌ）及び四臭化炭素（１．１８３ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１１．８９ｍＬ）中に溶解した。トリフェニルホスフィン（ＰＰＨ３）（０．９３５ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を加え、反応物をアルゴン下で４時間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）で希釈し、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。この粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）により精製し、化合物８６を得た（２６２ｍｇ、収率３９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ １０．０
１（ｓ， １Ｈ）， ８．１１（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ８．０３（ｄ， １Ｈ，
Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ７．６７（ｓ， ２Ｈ）， ７．２１（ｓ， １Ｈ）， ４．７０−４．６４（ｍ， ４Ｈ）， ４．４０−４．３２（ｍ， １Ｈ）， ４．３１−４．２３（ｍ，
１Ｈ）， ３．５８（ｓ， ３Ｈ）， ２．３４−２．２６（ｍ， ２Ｈ）， ２．１８−２．１０（ｍ， ２Ｈ）， １．５５−１．４５（ｍ， ４Ｈ）， １．３１（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， １．２１（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
Figure 2021119171
工程７：二臭化物化合物８６及びＩＧＮモノマー化合物１０を、ＤＭＦ（１．８４ｍＬ）中に溶解した。炭酸カリウムを加え、室温で一晩撹拌した。水を反応混合物に加えて生成物を沈殿させた。スラリーを室温で撹拌し、次いで濾過し、真空／Ｎ２下で乾燥させた。この粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）で精製して、化合物８７（３３６ｍｇ、収率７４％）を得た。ＬＣＭＳ＝５．９１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９９０．６（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程８：ジイミン化合物８７を、１，２−ジクロロエタン中に溶解した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（ＳＴＡＢ）を反応混合物に加え、室温で１時間撹拌した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗製物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）で精製して、化合物８８を得た（８５．５ｍｇ、収率２５％）。ＬＣＭＳ＝６．６４分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９９２．６（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程９：メチルエステル化合物８８を、１，２−ジクロロエタン中に溶解した。トリメチルスタンナノールを反応混合物に加え、８０℃で一晩加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。水層を１ＭのＨＣｌでｐＨを約４に酸性化した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０：１，３×２０ｍＬ）で抽出した。合せた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗製物質をシリカプラグに通して、化合物８９を得た（４８．８ｍｇ、収率８０％）。ＬＣＭＳ＝５．８９分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９７８．６（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程１０：ＣＨ２Ｃｌ２中の酸化合物８９及びＮ−ヒドロキシスクシンアミドの撹拌溶液に、室温でＥＤＣ・ＨＣｌを添加した。反応混合物を２時間撹拌した。この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ
、濾過し、濃縮した。粗製物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）により精製して、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（（（（Ｓ）−８−メトキシ−６−オキソ−１１，１２，１２ａ，１３−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２−ａ］インドール−９−イル）オキシ）メチル）−５−（（（（Ｒ）−８−メトキシ−６−オキソ−１２ａ，１３−ジヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２−ａ］インドール−９−イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−６−オキソヘキサノエート、化合物９０を得た（８．２ｍｇ、収率３０％）。ＬＣＭＳ＝６．６４分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０７５．４（Ｍ＋１）＋。
実施例７：ｈｕＭＯＶ１９−９０の調製
２．０ｍｇ／ｍＬのｈｕＭＯＶ１９抗体及び３．９モル当量の化合物９０を含む反応物（９５：５ＤＭＡ：５０ｍＭコハク酸塩ｐＨ５．５中において２５℃で４時間、５倍過剰の亜硫酸水素ナトリウムで前処理したもの）を、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５の緩衝液及び１５％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒中において、２５℃で４時間インキュベートした。反応後、前記コンジュゲートを精製し、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ， ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、１０ｍＭのコハク酸塩、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５％ｗ／ｖのスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、ｐＨ６．２処方の緩衝液に交換した。透析は、同じ緩衝液中において、室温で４時間、次にＳｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３０，０００ＭＷＣＯ）を用いて４℃で一晩行った。
精製されたコンジュゲートは、１．８ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度、並びに抗体当たり平均２．７分子の結合した化合物９０（モル吸光係数は、化合物９０についてε３３０ｎｍ＝１５，２８０ｃｍ−１Ｍ−１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１、並びにｈｕＭＯＶ１９抗体についてε２８０ｎｍ＝２０１，４００ｃｍ−１Ｍ−１を使用するＵＶ−Ｖｉｓによる）、９８．３％のモノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、及び＜１．１％の非コンジュゲート化合物９０（アセトン沈殿、逆相ＨＰＬＣ分析による）を有することが分かった。ＭＳスペクトル分析データは図６に示されている。ＤＡＲ０は、非コンジュゲート抗体、即ち、ベンゾジアゼピンがそれにコンジュゲートしていない抗体を表す。ＤＡＲ６は、６個のベンゾジアゼピンがそれに結合した抗体を表す。中央におけるピークは、左から右に、ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３、ＤＡＲ４、及びＤＡＲ５に対応する。
実施例８．本明細書でＤ４とも呼ばれる化合物１０７の合成
Figure 2021119171
工程１：化合物８２（５００ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）、４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタン酸（４４９ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４６５ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３５４ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．８１ｍＬ、４．６２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７．７ｍＬ）中に溶解し、反応が完了するまで一晩攪拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和塩化
アンモニウムで洗浄し、水で２回洗浄した。有機物を乾燥させ、真空中で濃縮して化合物１００（８７５ｍｇ、収率９６％）を得、これを次の工程で直接使用した。１Ｈ ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ）：δ ８．１５（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ８．０
２（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ４．２６−４．３３（ｍ， １Ｈ）， ４．０３−
４．１２（ｍ， １Ｈ）， ２．４１（ｓ， ３Ｈ）， ２．１８−２．２２（ｍ， ２Ｈ）
， １．７６−１．８０（ｍ， ２Ｈ）， １．３９（ｓ， ９Ｈ）， １．２４（ｓ， ６Ｈ）， １．２４（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， １．１９（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
Figure 2021119171
工程２：無溶媒の化合物１００（８７５ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（２．６ｍｌ）及び水（０．１７ｍｌ）を加え、室温で反応が完了するまで撹拌した。反応物を希釈し、アセトニトリルと共沸させて粘着性油状物を得た。次いで、これをアセトニトリル及び水で希釈し、凍結及び凍結乾燥して、化合物１０１（１ｇ、収率１００％）を灰白色固体として得、これを更に精製することなく使用した。ＬＣＭＳ＝３．９９分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７．０（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程３：化合物１０１（９２３ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及び（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（２４０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５．２ｍｌ）に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（６０１ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（９６ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、水で３回洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製して、化合物１０２（１５０ｍｇ、収率２０％）を得た。ＬＣＭＳ＝３．９１分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７２．２（Ｍ＋１）＋。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＭｅＯＤ）：δ ９．６９（ｓ， １Ｈ）， ８．２１（ｄ
， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ８．１８（ｄ， １Ｈ， Ｊ＝６．８Ｈｚ）， ７．５２（ｓ， ２Ｈ）， ７．１２（ｓ， １Ｈ）， ４．５８（ｓ， ４Ｈ）， ４．４４−４．４８（ｍ， １Ｈ）， ４．２９−４．３２（ｍ， １Ｈ）， ３．３４（ｓ， ２Ｈ）， ２．３８（ｓ， ３Ｈ）， ２．３４−２．４０（ｍ， ２Ｈ）， １．９０−１．９５（ｍ， ２
Ｈ）， １．４３（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， １．３６（ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝７．２Ｈｚ）， １．３０（ｓ， ６Ｈ）．
Figure 2021119171
工程４：化合物１０２を無水ＤＣＭに懸濁させた。溶液が均質になるまで無水ＤＭＦを加えた。この溶液をアセトン／ドライアイス浴中で−１０℃に冷却した。トリエチルアミンを加え、続いて無水メタンスルホン酸を加えた。この混合物を−１０℃で１時間撹拌した。反応物を氷水でクエンチし、冷酢酸エチル／メタノール（２０：１）で抽出した。有機層を氷水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製物質を高真空下で乾燥させて化合物１０３（１７４ｍｇ、収率１０１％）を得、これを更に精製することなく次の工程で直接使用した。ＬＣＭＳ＝４．９５分（８分法）。
Figure 2021119171
工程５：ジメシレート化合物１０３（４３５ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解した。ＩＧＮ単量体化合物１０を添加し、続いてＫ２ＣＯ３を添加し、Ａｒ下に室温で一晩撹拌した。水を加えて生成物を沈殿させた。スラリーを５分間撹拌し、濾過し、真空／Ｎ２下で乾燥させた。粗製の固体は化合物１０４（２０３ｍｇ、収率４４％、純度６０％）を含み、それ以上精製することなく使用した。ＬＣＭＳ＝５．６８分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０２４．３（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程６：ジイミン化合物１０４を１，２−ジクロロエタン中に溶解した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３を反応混合物に加え、室温で撹拌した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製残渣をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、勾配、５０％〜６５％）により精製して、モノイミン化合物１０５を固体として得た（２２ｍｇ、収率１６％、純度９０％）。ＬＣＭＳ＝６．００分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０２７．３（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程７：化合物１０６を、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）及びＡＣＮ（０．２３ｍＬ）中に室温で溶解した。次いで、それを実施例９の化合物９８と同様にして調製した。混合物を完了するまで撹拌し、次いでＤＣＭ及び脱イオン水で希釈した。有機層をブラインで洗浄し、
乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮して粗製チオール化合物１０６（２１ｍｇ、１００％収率）を得、これを次の反応に直接使用した。ＬＣＭＳ＝５．６７分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９８０．４（Ｍ＋１）＋。
Figure 2021119171
工程８：化合物１０６（２１ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を、２−プロパノール（１４２８μｌ）及び水（７１４μｌ）中に懸濁させた。メタ亜硫酸水素ナトリウム（２２．３０ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）を加え、反応が完結するまで室温で撹拌した。この反応混合物をアセトニトリル／水で希釈し、凍結し、凍結乾燥した。得られた白色粉末を
ＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、勾配、２０％〜４０％）で精製し、所望の画分を集め、凍結乾燥して化合物１０７を得た（５．３ｍｇ、収率２３％）。ＬＣＭＳ＝５．６７分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０６０．２（Ｍ−１）−。
実施例９．ｈｕＭＯＶ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−１０７（またはｈｕＭＯＶ１９−１０７）コンジュゲート
コハク酸緩衝液（ｐＨ５）：ＤＭＡ（３０：７０）中に、１．９５ｍＭの化合物１０７及び１．５ｍＭのスルホ−ＳＰＤＢリンカーの最終濃度を含有するインサイチュー混合物を６時間インキュベートした後、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．５（８７：１３、水：ＤＭＡ）中に４ｍｇ／ｍＬのｈｕＭＯＶ１９抗体を含む反応物に、７倍過剰量の１０７−スルホ−ＳＰＤＢ−ＮＨＳを添加した。溶液を２５℃で一晩コンジュゲートさせた。
反応後、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５、ＤＮＡ等級、ＧＥヘルスケア）を用いてコンジュゲートを精製し、緩衝液を１０ｍＭのＴｒｉｓ、８０ｍＭのＮａＣｌ、５０μＭの銃亜硫酸塩、３．５％のスクロース、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０処方の緩衝液ｐＨ７．６に交換した。透析は、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １０，０００ＭＷＣＯ）を用い、同じ緩衝液中において４℃で一晩行った。
精製されたコンジュゲートは、抗体当たり平均２．７分子の結合した化合物１０７（化合物１０７についてはε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１、並びにｈｕＭＯＶ１９抗体についてはε２８０ｎｍ＝２０１，４００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を使用したＵＶ−Ｖｉｓ及びＳＥＣによる）、９５％モノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、及び１．１ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を有することが分かった。ＭＳスペクトル分析データは図７に示されている。ＤＡＲ０は、非コンジュゲート抗体、即ち、ベンゾジアゼピンがそれにコンジュゲートしていない抗体を表す。ＤＡＲ５は、５個のベンゾジアゼピンがそれに結合した抗体を表す。中央におけるピークは、左から右に、ＤＡＲ１、ＤＡＲ２、ＤＡＲ３、及びＤＡＲ４に対応する。
実施例１０．低ｐＨのコハク酸緩衝液によるＲＳＡの減少
この実施例は、可逆的自己会合を低減、阻害または消失させる組成物の製造であって、前記組成物は、インドリノベンゾジアゼピンに化学的に結合された操作されたシステイン（例えば、非システインアミノ酸の代わりに抗体重鎖または軽鎖に導入された非天然シス
テイン）を備えた抗体を含むコンジュゲート、緩衝液、界面活性剤、砂糖、及び水を含有する前記組成物の製造を実証する。
操作されたシステインを介してインドリノベンゾジアゼピンＤ２（ａ）に化学的に結合された、ＡｂＸモノクローナル抗体を含むコンジュゲートを製造した。前記コンジュゲートは、（ａ）１０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース、０．０１％のポリソルベート２０、ｐＨ５．５、または（ｂ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、０．０１％のポリソルベート２０、ｐＨ４．２として処方された。
図８に示すように、ｐＨ４．２におけるコハク酸塩及びトレハロースの組み合わせ（処方（ｂ））は、ヒスチジン及びトレハロースの組み合わせ（処方（ａ））と比較した時に、ＤＬＳにより測定される可逆的自己会合のより大きな減少を示した。
これらの結果は、ｐＨ４．２のようなより低いｐＨ範囲において、可逆的自己会合を低減、阻害または消失させる本明細書に開示した組成物の能力を実証している。
実施例１１．コハク酸緩衝液によるＲＳＡの減少
この実施例は、可逆的自己会合を低減、阻害、または消失させる組成物の製造であって、インドリノベンゾジアゼピンに化学的に結合した抗体を含むコンジュゲート、コハク酸塩ベースの緩衝剤、界面活性剤、砂糖及び水を含有する前記組成物の製造を実証する。
４−（２−ピリジニルジチオ）−２−スルホ−，１−（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）ブタン酸エステル（ｓＳＰＤＢ）リンカーを介してインドリノベンゾジアゼピンＤＧＮ４６２に化学的に結合したｈｕＭｙ−９−６モノクローナル抗体を含むコンジュゲート（「ｈｕＭｙ−９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２」）は、本明細書に記載された当該分野で既知の方法を用いて調製された（例えば、米国特許第６，４４１，１６３号参照）。ｈｕＭｙ−９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２コンジュゲートを以下のように処方した：（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース、０．０２％のポリソルベート２０、ｐＨ６．１、（ｂ）１０ｍＭの酢酸塩、８％のトレハロース、ｐＨ４．２、（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、ｐＨ４．２。
製剤のｐＨ及び緩衝剤の可逆的自己会合に対する効果を示す、動的光散乱による分析の結果を図９に示す。これらの結果は、緩衝剤としてのコハク酸塩（処方（ｃ））が、４．０〜４．５のｐＨ範囲において、可逆的自己会合を低減させる上で酢酸塩（処方（ｂ））よりも有効であり、また両者ともｐＨ６．１においてヒスチジン（処方（ａ））よりも有効であることを示している。
図９に示すように、コハク酸とトレハロースの組み合わせ（処方（ｃ））は、酢酸とトレハロースの組み合わせ（処方（ｂ））よりも、ｐＨ４．２において可逆的自己会合を低減させることにおいて効果的である。
更に、図１０に示すデータは、ｐＨ４．２〜ｐＨ５．７の範囲に亘って、コハク酸−トレハロースの組み合わせについての可逆的自己会合の評価から生じる。その結果は、ここではコハク酸緩衝液の使用で示されるように、ｐＨが低下するにつれて可逆的自己会合の減少の程度が増大することを示している。
実施例１２．低ｐＨコハク酸緩衝液によるＲＳＡの低下
この実施例は、可逆的自己会合を低減、阻害、または消失させる組成物の製造を実証しており、ここでの前記組成物は、インドリノベンゾジアゼピンに化学的に結合された操作されたシステイン（例えば、他の非システインアミノ酸の代わりに抗体重鎖または軽鎖に導入された非天然システイン）を備えた抗体を含むコンジュゲート、緩衝液、界面活性剤
、糖、及び水を含んでいる。
操作されたシステインを介してインドリノベンゾジアゼピンＤ２（ａ）に化学的に結合した、ＡｂＸモノクローナル抗体を含むコンジュゲートを製造した。前記コンジュゲートを、１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、８％のトレハロース、０．０１％のポリソルベート２０、ｐＨ４．０として製剤化した。
図１１に示すように、ｐＨ４．０におけるコハク酸塩及びトレハロースの組み合わせは、ｐＨ４．２におけるコハク酸塩／トレハロースの製剤と比較したとき、ＤＬＳで測定されるように可逆的自己会合の同等以上の低下を示した。
部位特異的コンジュゲートを用いることにより、この実施例は、より低いＤＡＲとのコンジュゲートにおいてさえもＲＳＡの減少を示す。これらの結果は、例えばＤＡＲが２．０である部位特異的コンジュゲートの場合でさえも、特にｐＨ４．０〜４．５のようなより低いｐＨ範囲において、可逆的自己会合を低減、阻害または消失させるという本明細書に開示した組成物の能力を更に実証する。
均等物
前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するものであり、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。当業者であれば、日常的な実験のみを用いて、本開示で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の均等物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような均等物、及び他の態様、利点及び改変は、添付の特許請求の範囲内のものである。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
（ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣ、及び
（ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子
を含有する組成物。
［態様２］
態様１に記載の組成物であって、約４．０〜約４．５のｐＨを有する前記組成物。
［態様３］
態様１に記載の組成物であって、前記ベンゾジアゼピンがインドリノベンゾジアゼピンである前記組成物。
［態様４］
態様１〜３の何れか１項に記載の組成物であって、前記ベンゾジアゼピンが、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
［態様５］
態様１〜３の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
［態様６］
態様１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がトリメチルグリシンである前記組成物。
［態様７］
態様１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がプロリンである前記組成物。
［態様８］
態様１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がイソロイシンである前記組成物。
［態様９］
態様１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がロイシンである前記組成物。
［態様１０］
態様１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が約１〜約４のＤＡＲを有する前記組成物。
［態様１１］
態様１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが１〜４個のベンゾジアゼピンを含む前記組成物。
［態様１２］
態様１〜１１の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が水溶液である前記組成物。
［態様１３］
態様１〜１１の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が凍結乾燥組成物である前記組成物。
［態様１４］
態様１〜１１の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が再構成された凍結乾
燥組成物である前記組成物。
［態様１５］
態様１〜１４の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣがｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記組成物。
［態様１６］
態様１〜１４の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記組成物。
［態様１７］
態様１６に記載の組成物であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記組成物。
［態様１８］
態様１〜１７の何れか１項に記載の組成物であって、更に亜硫酸水素ナトリウムを含有する前記組成物。
［態様１９］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）２８０ｍＭのベタイン
を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
［態様２０］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）２８０ｍＭのプロリン
を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
［態様２１］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ＡｂＸ−Ｄ２、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）２８０ｍＭのプロリン及び２８０ｍＭのベタインからなる群から選択される小さな疎水性分子
を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
［態様２２］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）１２５ｍＭのロイシン
を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
［態様２３］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）１２５ｍＭのイソロイシン
を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
［態様２４］
態様１９〜２３の何れか１項に記載の組成物であって、更に、亜硫酸水素ナトリウムを含有する前記組成物。
［態様２５］
可逆的自己会合を低減させる方法であって、
（ａ）水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを提供し、前記ＡＤＣは可逆的自己会合を示すことと、
（ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を前記水溶液に添加することとを含み、
前記小さな疎水性分子が可逆的自己会合を低減させる前記方法。
［態様２６］
態様２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がトリメチルグリシンである前記方法。
［態様２７］
態様２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がプロリンである前記方法。
［態様２８］
態様２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がイソロイシンである前記方法。
［態様２９］
態様２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がロイシンである前記方法。
［態様３０］
態様２５に記載の方法であって、更に、前記可逆的自己会合を検出することを含む前記方法。
［態様３１］
態様２５に記載の方法であって、更に、前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む前記方法。
［態様３２］
態様２５〜３１の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
［態様３３］
態様２５〜３１の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
［態様３４］
態様２５〜３３の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約７０％〜約８０％低減される前記方法。
［態様３５］
態様２５〜３３の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約８０％〜約９０％低減される前記方法。
［態様３６］
態様２５〜３３の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約９０％〜約１００％低減される前記方法。
［態様３７］
態様２５〜３６の何れか１項に記載の方法であって、更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を作製することを含む前記方法。
［態様３８］
態様３７に記載の方法であって、更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む前記方法。
［態様３９］
態様２５〜３８の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記方法。
［態様４０］
態様２５〜３８の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記方法。
［態様４１］
態様４０に記載の方法であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。［態様４２］
態様４１に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ１である前記方法。
［態様４３］
態様４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、並びに軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５及び参照配列６を含む前記方法。
［態様４４］
態様４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様４５］
態様４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様４６］
態様４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様４７］
態様４０に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ２である前記方法。
［態様４８］
態様４７に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列８と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１０と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様４９］
態様４７に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列１３と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１５と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様５０］
態様４０〜４９の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ５またはＤ５（ａ）である方法。
［態様５１］
製剤化する方法であって、
（ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを水溶液中に提供することと、
（ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水
性分子を水溶液に添加することを含む前記方法。
［態様５２］
態様５１に記載の方法であって、更に、前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む前記方法。
［態様５３］
態様５１に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンが、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
［態様５４］
態様５１〜５２の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
［態様５５］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がトリメチルグリシンである前記方法。
［態様５６］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がプロリンである前記方法。
［態様５７］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がイソロイシンである前記方法。
［態様５８］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がロイシンである前記方法。
［態様５９］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子の添加が、水溶液中のＲＳＡを約７０％〜約８０％低減させる前記方法。
［態様６０］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子の添加が、水溶液中のＲＳＡを約８０％〜約９０％低減させる前記方法。
［態様６１］
態様５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子の添加が、水溶液中のＲＳＡを約９０％〜約１００％低減させる前記方法。
［態様６２］
態様５１〜６１の何れか１項に記載の方法であって、更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を得ることを含む前記方法。
［態様６３］
態様６２に記載の方法であって、更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む前記方法。
［態様６４］
態様５１〜６３の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記方法。
［態様６５］
態様５１〜６３の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記方法。
［態様６６］
態様６５に記載の方法であって、ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。
［態様６７］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）２８０ｍＭのベタイン
を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
［態様６８］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）８％のトレハロース
を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
［態様６９］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ＡｂＸ−Ｄ２、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）８％のトレハロース
を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
［態様７０］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）８％のトレハロース
を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
［態様７１］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）８％のトレハロース
を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
［態様７２］
水性製剤であって、
（ａ）水、
（ｂ）２ｍｇ／ｍＬのＡｂＸ１−Ｄ５またはＡｂＸ１−Ｄ５（ａ）、
（ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
（ｄ）８％のトレハロース二水和物
を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
［態様７３］
態様７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、及び軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５、及び参照配列６を含む前記製剤。
［態様７４］
態様７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同
一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記製剤。
［態様７５］
態様７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記製剤。
［態様７６］
態様７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記製剤。
［態様７７］
態様６７〜７６の何れか１項に記載の製剤であって、更に、０．０１％のポリソルベート２０を含有する前記製剤。
［態様７８］
態様６７〜７７の何れか１項に記載の製剤であって、前記ｐＨが約４．２である前記製剤。
［態様７９］
態様６７〜７８の何れか１項に記載の製剤であって、更に、亜硫酸水素ナトリウムを含有する前記製剤。
［態様８０］
態様７９に記載の製剤であって、前記亜硫酸水素ナトリウムが５０μＭの濃度を有する前記製剤。
［態様８１］
可逆的自己会合を低減させる方法であって、
（ａ）第１のｐＨで水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを提供し、ＡＤＣが可逆的自己会合を示ことと、
（ｂ）前記水溶液のｐＨを第２のｐＨに調節し、前記第２のｐＨは約４．０〜約４．５の範囲であることとを含み、
前記第１のｐＨから前記第２のｐＨへのｐＨの調節が可逆的自己会合を低減させる方法。
［態様８２］
態様８１に記載の方法であって、前記第２のｐＨが約４．２である方法。
［態様８３］
態様８１〜８２の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンが、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
［態様８４］
態様８１〜８２の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
［態様８５］
態様８１〜８４の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約７０％〜約８０％低減される前記方法。
［態様８６］
態様８１〜８４の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約８０％〜約９０％低減される前記方法。
［態様８７］
態様８１〜８４の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約９０％〜約１００％低減される前記方法。
［態様８８］
態様８１〜８７の何れか１項に記載の方法であって、更に、前記水溶液を凍結乾燥することを含み、それによって凍結乾燥組成物を生成する前記方法。
［態様８９］
態様８８に記載の方法であって、更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む前記方法。
［態様９０］
態様８１〜８９の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記方法。
［態様９１］
態様８１〜８９の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記方法。
［態様９２］
態様９１に記載の方法であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。［態様９３］
態様９２に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ１である前記方法。
［態様９４］
態様９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、並びに軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５及び参照配列６を含む前記方法。
［態様９５］
態様９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様９６］
態様９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様９７］
態様９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様９８］
態様９２に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ２である前記方法。
［態様９９］
態様９８に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列８と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１０と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１００］
態様９８に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列１３と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１５と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１０１］
態様９１〜１００の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ５またはＤ５（ａ）である前記方法。
［態様１０２］
（ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣ、及び
（ｂ）トレハロース
を含有する組成物であって、約４．０〜約４．５のｐＨ範囲を有する前記組成物。
［態様１０３］
態様１０２に記載の組成物であって、更に、コハク酸ナトリウムを含有する前記組成物。
［態様１０４］
態様１０３に記載の組成物であって、更に、硫酸水素ナトリウムを含有する前記組成物。
［態様１０５］
態様１０２〜１０４の何れか１項に記載の組成物であって、更に、界面活性剤を含有する前記組成物。
［態様１０６］
態様１０２〜１０５の何れか1項に記載の組成物であって、前記ベンゾジアゼピンが、
Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
［態様１０７］
態様１０２〜１０６の何れか1項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳ
ＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
［態様１０８］
態様１０２〜１０７の何れか1項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが、ヒト化ＣＤ
１２３抗体を含む前記組成物。
［態様１０９］
態様１０８に記載の方法であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。
［態様１１０］
態様１０９に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ１である前記方法。
［態様１１１］
態様１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、並びに軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５及び参照配列６を含む前記方法。
［態様１１２］
態様１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１１３］
態様１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１１４］
態様１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１１５］
態様１０９に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ２である前記方法。
［態様１１６］
態様１１５に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列８と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１０と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１１７］
態様１１５に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列１３と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１５と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
［態様１１８］
態様１０８〜１１７の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ５またはＤ５（ａ）である前記方法。

Claims (118)

  1. （ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣ、及び
    （ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子
    を含有する組成物。
  2. 請求項１に記載の組成物であって、約４．０〜約４．５のｐＨを有する前記組成物。
  3. 請求項１に記載の組成物であって、前記ベンゾジアゼピンがインドリノベンゾジアゼピンである前記組成物。
  4. 請求項１〜３の何れか１項に記載の組成物であって、前記ベンゾジアゼピンが、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
  5. 請求項１〜３の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
  6. 請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がトリメチルグリシンである前記組成物。
  7. 請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がプロリンである前記組成物。
  8. 請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がイソロイシンである前記組成物。
  9. 請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記小さな疎水性分子がロイシンである前記組成物。
  10. 請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が約１〜約４のＤＡＲを有する前記組成物。
  11. 請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが１〜４個のベンゾジアゼピンを含む前記組成物。
  12. 請求項１〜１１の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が水溶液である前記組成物。
  13. 請求項１〜１１の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が凍結乾燥組成物である前記組成物。
  14. 請求項１〜１１の何れか１項に記載の組成物であって、前記組成物が再構成された凍結乾燥組成物である前記組成物。
  15. 請求項１〜１４の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣがｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記組成物。
  16. 請求項１〜１４の何れか１項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記組成物。
  17. 請求項１６に記載の組成物であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記組成物。
  18. 請求項１〜１７の何れか１項に記載の組成物であって、更に亜硫酸水素ナトリウムを含有する前記組成物。
  19. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）２８０ｍＭのベタイン
    を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
  20. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）２８０ｍＭのプロリン
    を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
  21. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ＡｂＸ−Ｄ２、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）２８０ｍＭのプロリン及び２８０ｍＭのベタインからなる群から選択される小さな疎水性分子
    を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
  22. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）１２５ｍＭのロイシン
    を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
  23. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）１２５ｍＭのイソロイシン
    を含有し、約４．２のｐＨを有する前記製剤。
  24. 請求項１９〜２３の何れか１項に記載の組成物であって、更に、亜硫酸水素ナトリウムを含有する前記組成物。
  25. 可逆的自己会合を低減させる方法であって、
    （ａ）水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを提供し、前記ＡＤＣは可逆的自己会合を示すことと、
    （ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を前記水溶液に添加することとを含み、
    前記小さな疎水性分子が可逆的自己会合を低減させる前記方法。
  26. 請求項２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がトリメチルグリシンである前記方法。
  27. 請求項２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がプロリンである前記方法。
  28. 請求項２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がイソロイシンである前記方法。
  29. 請求項２５に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がロイシンである前記方法。
  30. 請求項２５に記載の方法であって、更に、前記可逆的自己会合を検出することを含む前記方法。
  31. 請求項２５に記載の方法であって、更に、前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む前記方法。
  32. 請求項２５〜３１の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
  33. 請求項２５〜３１の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
  34. 請求項２５〜３３の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約７０％〜約８０％低減される前記方法。
  35. 請求項２５〜３３の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約８０％〜約９０％低減される前記方法。
  36. 請求項２５〜３３の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約９０％〜約１００％低減される前記方法。
  37. 請求項２５〜３６の何れか１項に記載の方法であって、更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を作製することを含む前記方法。
  38. 請求項３７に記載の方法であって、更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む前記方法。
  39. 請求項２５〜３８の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記方法。
  40. 請求項２５〜３８の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記方法。
  41. 請求項４０に記載の方法であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。
  42. 請求項４１に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ１である前記方法。
  43. 請求項４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、並びに軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５及び参照配列６を含む前記方法。
  44. 請求項４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  45. 請求項４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  46. 請求項４２に記載の方法であって、ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  47. 請求項４０に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ２である前記方法。
  48. 請求項４７に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列８と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１０と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  49. 請求項４７に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列１３と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１５と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  50. 請求項４０〜４９の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ５またはＤ５（ａ）である方法。
  51. 製剤化する方法であって、
    （ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを水溶液中に提供することと、
    （ｂ）疎水性側鎖を有するベタイン及びアミノ酸からなる群から選択される小さな疎水性分子を水溶液に添加することを含む前記方法。
  52. 請求項５１に記載の方法であって、更に、前記水溶液のｐＨを約４．０〜約４．５に調節することを含む前記方法。
  53. 請求項５１に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンが、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
  54. 請求項５１〜５２の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
  55. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がトリメチルグリシンである前記方法。
  56. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がプロリンである前記方法。
  57. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がイソロイシンである前記方法。
  58. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子がロイシンである前記方法。
  59. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子の添加が、水溶液中のＲＳＡを約７０％〜約８０％低減させる前記方法。
  60. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子の添加が、水溶液中のＲＳＡを約８０％〜約９０％低減させる前記方法。
  61. 請求項５１に記載の方法であって、前記小さな疎水性分子の添加が、水溶液中のＲＳＡを約９０％〜約１００％低減させる前記方法。
  62. 請求項５１〜６１の何れか１項に記載の方法であって、更に、前記水溶液を凍結乾燥し、それによって凍結乾燥組成物を得ることを含む前記方法。
  63. 請求項６２に記載の方法であって、更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む前記方法。
  64. 請求項５１〜６３の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記方法。
  65. 請求項５１〜６３の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記方法。
  66. 請求項６５に記載の方法であって、ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。
  67. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）２８０ｍＭのベタイン
    を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
  68. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｙ９−６−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）８％のトレハロース
    を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
  69. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ＡｂＸ−Ｄ２、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）８％のトレハロース
    を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
  70. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）８％のトレハロース
    を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
  71. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）ｈｕＭｏｖ１９−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）８％のトレハロース
    を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
  72. 水性製剤であって、
    （ａ）水、
    （ｂ）２ｍｇ／ｍＬのＡｂＸ１−Ｄ５またはＡｂＸ１−Ｄ５（ａ）、
    （ｃ）１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、及び
    （ｄ）８％のトレハロース二水和物
    を含有し、約４．０〜約４．５の範囲のｐＨを有する前記製剤。
  73. 請求項７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、及び軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列
    ５、及び参照配列６を含む前記製剤。
  74. 請求項７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記製剤。
  75. 請求項７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記製剤。
  76. 請求項７２に記載の水性製剤であって、ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記製剤。
  77. 請求項６７〜７６の何れか１項に記載の製剤であって、更に、０．０１％のポリソルベート２０を含有する前記製剤。
  78. 請求項６７〜７７の何れか１項に記載の製剤であって、前記ｐＨが約４．２である前記製剤。
  79. 請求項６７〜７８の何れか１項に記載の製剤であって、更に、亜硫酸水素ナトリウムを含有する前記製剤。
  80. 請求項７９に記載の製剤であって、前記亜硫酸水素ナトリウムが５０μＭの濃度を有する前記製剤。
  81. 可逆的自己会合を低減させる方法であって、
    （ａ）第１のｐＨで水溶液中にベンゾジアゼピンを含むＡＤＣを提供し、ＡＤＣが可逆的自己会合を示ことと、
    （ｂ）前記水溶液のｐＨを第２のｐＨに調節し、前記第２のｐＨは約４．０〜約４．５の範囲であることとを含み、
    前記第１のｐＨから前記第２のｐＨへのｐＨの調節が可逆的自己会合を低減させる方法。
  82. 請求項８１に記載の方法であって、前記第２のｐＨが約４．２である方法。
  83. 請求項８１〜８２の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンが、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
  84. 請求項８１〜８２の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記方法。
  85. 請求項８１〜８４の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約７０％〜約８０％低減される前記方法。
  86. 請求項８１〜８４の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約８０％〜約９０％低減される前記方法。
  87. 請求項８１〜８４の何れか１項に記載の方法であって、前記可逆的自己会合が約９０％〜約１００％低減される前記方法。
  88. 請求項８１〜８７の何れか１項に記載の方法であって、更に、前記水溶液を凍結乾燥することを含み、それによって凍結乾燥組成物を生成する前記方法。
  89. 請求項８８に記載の方法であって、更に、前記凍結乾燥組成物を再構成することを含む前記方法。
  90. 請求項８１〜８９の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣが、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＭｏｖ１９、及びｈｕＣＤ３７−３からなる群から選択される抗体を含む前記方法。
  91. 請求項８１〜８９の何れか１項に記載の方法であって、前記ＡＤＣがヒト化ＣＤ１２３抗体を含む前記方法。
  92. 請求項９１に記載の方法であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。
  93. 請求項９２に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ１である前記方法。
  94. 請求項９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、並びに軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５及び参照配列６を含む前記方法。
  95. 請求項９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  96. 請求項９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  97. 請求項９３に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  98. 請求項９２に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ２である前記方法。
  99. 請求項９８に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列８と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１０と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  100. 請求項９８に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列１３と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１５と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  101. 請求項９１〜１００の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ５またはＤ５（ａ）である前記方法。
  102. （ａ）ベンゾジアゼピンを含むＡＤＣ、及び
    （ｂ）トレハロース
    を含有する組成物であって、約４．０〜約４．５のｐＨ範囲を有する前記組成物。
  103. 請求項１０２に記載の組成物であって、更に、コハク酸ナトリウムを含有する前記組成物。
  104. 請求項１０３に記載の組成物であって、更に、硫酸水素ナトリウムを含有する前記組成物。
  105. 請求項１０２〜１０４の何れか１項に記載の組成物であって、更に、界面活性剤を含有する前記組成物。
  106. 請求項１０２〜１０５の何れか1項に記載の組成物であって、前記ベンゾジアゼピンが
    、Ｄ１、Ｄ１（ａ）、Ｄ２、Ｄ２（ａ）、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ４６２（ａ）、Ｄ３、Ｄ３（ａ）、Ｄ４、Ｄ４（ａ）、Ｄ５、Ｄ５（ａ）、Ｄ６、及びＤ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
  107. 請求項１０２〜１０６の何れか1項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが、Ａｂ−ｓ
    ＳＰＤＢ−Ｄ１、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｄ２、Ａｂ−Ｄ２（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｄ３、Ａｂ−Ｄ３（ａ）、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４、Ａｂ−ｓＳＰＤＢ−Ｄ４（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ１（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｃｙｓ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２、Ａｂ−Ｓｅｒ−ＤＧＮ４６２（ａ）、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５、Ａｂ−Ｃｙｓ−Ｄ５（ａ）、Ａｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６、及びＡｂ−Ｓｅｒ−Ｄ６（ａ）からなる群から選択される前記組成物。
  108. 請求項１０２〜１０７の何れか1項に記載の組成物であって、前記ＡＤＣが、ヒト化Ｃ
    Ｄ１２３抗体を含む前記組成物。
  109. 請求項１０８に記載の方法であって、前記ヒト化ＣＤ１２３抗体がＡｂＸである前記方法。
  110. 請求項１０９に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ１である前記方法。
  111. 請求項１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、重鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列１、参照配列２及び参照配列３、並びに軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の参照配列４、参照配列５及び参照配列６を含む前記方法。
  112. 請求項１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列７と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列９と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  113. 請求項１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１１と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  114. 請求項１１０に記載の方法であって、前記ＡｂＸ１が、参照配列１２と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１４と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  115. 請求項１０９に記載の方法であって、前記ＣＤ１２３抗体がＡｂＸ２である前記方法。
  116. 請求項１１５に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列８と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１０と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  117. 請求項１１５に記載の方法であって、ＡｂＸ２が、参照配列１３と少なくとも約９０％同一である重鎖可変領域ドメイン、及び参照配列１５と少なくとも約９０％同一である軽鎖可変領域を含む前記方法。
  118. 請求項１０８〜１１７の何れか１項に記載の方法であって、前記ベンゾジアゼピンがＤ５またはＤ５（ａ）である前記方法。
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