TW202339803A - 包含磷(v)及喜樹鹼分子部分的共軛物 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及具有式（I）之共軛物：

Description

包含磷(V)及喜樹鹼分子部分的共軛物
相關申請之交互引用。本申請主張於2021年11月9日提出申請之歐洲專利申請第21207284.7號之優先權權益，其內容出於所有目的透過引用方式整體併入本文。
本發明涉及一種受體結合分子與喜樹鹼分子部分的共軛物、用於生產該共軛物之中間體、其製備方法、包含該共軛物之醫藥組合物以及其用途。
抗體藥物共軛物（antibody-drug conjugates，ADCs）為一種生物治療藥物，其結合了細胞毒性分子與抗體的標靶特性，以特異性殺死癌細胞。喜樹鹼及其衍生物為一類用於探索其在ADCs上的應用的藥物。喜樹鹼及其衍生物可作為拓撲異構酶I的抑制劑，此一特性引起了人們的極大興趣。示例性的喜樹鹼及其衍生物的ADCs如下等人所述：Han等人，「The Potential of Topoisomerase Inhibitor-Based Antibody-Drug Conjugates」，Pharmaceutics 2022年，14，1701，https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14081707；Conilh等人， 「 Exatecan Antibody Drug Conjugates Based on a Hydrophilic Polysarcosine Drug-Linker Platform 」，Pharmaceuticals 2021年，14，247，https://doi.org/10.3390/ph1403024；WO 2020/245229；WO 2019/236954；Burke等人， 「 Design ， Synthesis ， and Biological Evaluation of Antibody-Drug Conjugates Comprised of Potent Camptothecin Analogs 」，Bioconjugate Chem. 2009年，20，1242-1250，doi: 10.1021/bc9001097；以及Viricel等人， 「 Monodisperse polysarcosine-based highly-loaded Antibody-drug conjugates 」，Chemical Science，2019，10，4048-4053，doi: 10.1039/c9sc00285e。
抗Her2抗體曲妥珠單抗（Trastuzumab）與德魯替康（deruxtecan）的ADC為一種獲得大量關注的喜樹鹼衍生物的ADC。該ADC已獲准用於醫療用途，亦稱為DS-8201a，以商品名Enhertu進行銷售。該ADC如Ogitani等人所述， 「 DS-8201a ， A Novel HER 2-Targeting ADC with A Novel DNA Topoisomerase I Inhibitor ， Demonstrates A Promising Antitumor Efficacy with Differentiation from T-DM1 」，Clinical Cancer Research（22）20，October 15，2016，pp. 5097-5108（DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-2822）。
Enhertu已初步獲准用於治療實體瘤，亦即Her2+乳腺癌與結直腸癌。最近，Enhertu被發現改變了Her2陽性乳腺癌的標靶治療模式，因為它在以前被認為不符合標靶治療條件的Her2低表現程度的患者中顯示出非常有希望的治療結果（參見，例如，Siddiqui等人， 「 Enhertu （ Fam- 曲妥珠單抗 -deruxtecan-nxki ）－ Revolutionizing treatment paradigm for HER 2-Low breast cancer 」，Annals of Medicine And Surgery 82（2022年）104665；https://doi.org.10.1016/j.amsu.2022.104665）。雖然Enhertu為一種經過核准上市的ADC，但其仍然存在某些缺點。特別是，事實證明，Enhertu表現出相對較低的血清穩定性。此外，Enhertu的非靶點相關毒性仍然是治療應用中常見的問題。造成這種情況的許多原因可能與有效載荷及抗體之間的連接子系統的缺陷有關（Mckertish等人，「Advances And Limitations of Antibody Drug Conjugates for Cancer」，Biomedicines 2021年，9，872；https://doi.org/10.3390/biomedicines9080872）。例如，由於膜與疏水連接子-有效載荷結構的相互作用，ADC被吸收到非標靶細胞中，或者由於有效載荷的疏水性而形成更高分子量物質形式的聚集體，可能會導致患者產生非靶點相關的毒性。此外，有效載荷從ADC過早釋放並轉移至血清蛋白還會導致脫靶副作用。這些影響的組合可能導致危及生命的副作用，例如間質性肺病或白血球（特別是嗜中性細胞）減少，這兩種現象都是Enhertu最常被描述的嚴重副作用。
因此，仍需要包含喜樹鹼分子部分的其他共軛物作為藥物，特別是表現出改善的血清穩定性或表現出相對於Enhertu的其他改進的共軛物。
這種需求由如申請專利範圍以及本文描述之具體實施例中所定義的標的來解決。
因此，本發明涉及一種具有式（I）之共軛物： （I） 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： RBM為受體結合分子； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ；或 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。
本發明還涉及一種具有式（II）之化合物： （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數。
本發明還涉及一種製備具有式（I）之共軛物的方法，該方法包括： 使公式（II）之化合物 （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數；以及 與具有式（III）之含硫醇分子反應 （III）， 其中RBM為受體結合分子；以及 n為1至20之間的整數； 得到具有以下公式（I）之化合物 （I）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 當在式（II）之化合物的 為三鍵時， 為雙鍵；或 當在式（II）之化合物的 為雙鍵時， 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。
本發明還涉及可透過本發明之方法獲得或正在獲得之具有式（I）之共軛物。
本發明還涉及包含本發明之共軛物的醫藥組合物。
本發明還涉及本發明之共軛物在一種治療疾病之方法中的用途。該疾病可為癌症。該癌症可為實體瘤。
本發明還涉及本發明之醫藥組合物在一種治療疾病之方法中的用途。該疾病可為癌症。該癌症可為實體瘤。
以下詳細描述本發明，並將透過所附實施例及附圖進一步說明本發明。 定義
除非另有說明，否則「烷基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有指定碳原子數的取代或未取代的直鏈或支鏈飽和烴；例如，「-(C 1-C 8)烷基」或「-(C 1-C 10)烷基」係指分別具有1至8或1至10個碳原子的烷基。當未指明碳原子數時，烷基可具有1至8個碳原子。代表性的直鏈-(C 1-C 8)烷基包括，但不限於，-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基，以及-正辛基；支鏈-(C 1-C 8)烷基包括，但不限於，-異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基、-異戊基，以及-2-甲基丁基。於某些方面，烷基可為未取代的。選擇性地，烷基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「亞烷基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指取代或未取代的支鏈或直鏈飽和烴基，其具有規定的碳原子數，較佳為1-10個碳原子（-(C 1-C 10)亞烷基-）或較佳為1至8個碳原子（-(C 1-C 8)亞烷基-），具有透過從母體烷烴的相同或兩個不同碳原子上去除兩個氫原子而衍生的兩個單價自由基中心。當未指明碳原子數時，亞烷基可具有1至8個碳原子。典型的亞烷基包括，但不限於：亞甲基（-CH 2-）、1,2-亞乙基（-CH 2CH 2-）、1,3-正亞丙基（-CH 2CH 2CH 2-），以及1,4-正亞丁基（-CH 2CH 2CH 2CH 2-）。於某些方面，亞烷基可為未取代的。選擇性地，亞烷基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「烯基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有雙鍵以及指定碳原子數的取代或未取代的直鏈或支鏈不飽和烴；例如，「-(C 2-C 8)烯基」或「-(C 2-C 10)烯基」係指分別具有2至8個或2至10個碳原子的烯基。當未指明碳原子數時，烯基可具有2至8個碳原子。代表性的-(C 2-C 8)烯基包括，但不限於，-乙烯基、-1-丙烯基、-2-丙烯基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基，以及-2,3-二甲基-2-丁烯基。於某些方面，烯基可為未取代的。選擇性地，烯基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「亞烯基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指取代或未取代的不飽和支鏈或直鏈烴基，具有指定碳原子數，較佳為2-10個碳原子（-(C 2-C 10)亞烯基-）或較佳為2至8個碳原子（-(C 2-C 8)亞烯基-），且具有一雙鍵，並且具有透過從母體烯烴的相同或兩個不同碳原子上去除兩個氫原子而衍生的兩個單價自由基中心。當未指明碳原子數時，亞烯基可具有2至8個碳原子。典型的亞烯基包括，但不限於：-亞乙烯基-、-1-亞丙烯基-、2-亞丙烯基-、-1-亞丁烯基-、-2-亞丁烯基-、-異丁烯基-、-1-亞戊烯基-、-2-亞戊烯基-、-3-甲基-1-亞丁烯基-、-2-甲基-2-亞丁烯基-，以及-2,3-二甲基-2-亞丁烯基-。於某些方面，亞烯基可為未取代的。選擇性地，亞烯基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「炔基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有三鍵以及指定碳原子數的取代或未取代的直鏈或支鏈不飽和烴；例如，「-(C 2-C 8)炔基」或「-(C 2-C 10)炔基」係指分別具有2至8或2至10個碳原子的炔基。當未指明碳原子數時，炔基可具有2至8個碳原子。代表性的-(C 2-C 8)炔基包括，但不限於，-乙炔基、-1-丙炔基、-2-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基，以及-3-甲基-1-丁炔基。於某些方面，炔基可為未取代的。選擇性地，炔基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「亞炔基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指取代或未取代的、支鏈或直鏈、不飽和烴基，具有規定的碳原子數，較佳為2-10個碳原子（-(C 2-C 10)亞炔基-）或較佳為2至8個碳原子（-(C 2-C 8)亞炔基-），且具有三鍵，並且具有透過從母體炔烴的相同或兩個不同碳原子上去除兩個氫原子而衍生的兩個單價自由基中心。當未指明碳原子數時，亞炔基可具有2至8個碳原子。典型的亞炔基包括，但不限於：-亞乙炔基-、-1-亞丙炔基-、-2-亞丙炔基-、-1-亞丁炔基-、-2-亞丁炔基-、-1-亞戊炔基-、-2-亞戊炔基-，以及-3-甲基-1-亞丁炔基-。於某些方面，亞炔基可為未取代的。選擇性地，亞炔基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「芳基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有6至20個碳原子（較佳為6至14個碳原子，更佳為6至10個碳原子，在非常佳的具體實施例中為6個碳原子）的取代或未取代的單價碳環芳烴基團，透過從母體芳環系統的單個碳原子上去除一個氫原子而衍生。一些芳基於示例性結構中表示為「Ar」。典型的芳基包括，但不限於，衍生自苯、取代的苯、萘、蒽，以及聯苯的基團。示例性的芳基為苯基。於某些方面，芳基可為未取代的。選擇性地，芳基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「亞芳基」乙詞本身或作為另一術語的一部分，通常為如上所定義之芳基，其中該芳基的一個氫原子被一個化學鍵所替代（亦即，其為二價的），且可處於對位、間位或鄰位方向，如以下結構所示，以苯基作為示例性基團： 在選定的具體實施例中，例如，當並行的連接子單元包含一亞芳基時，該亞芳基為如上所定義之芳基，其中該芳基的兩個或更多個氫原子被一化學鍵所替代（亦即，該亞芳基可為三價的）。於某些方面，亞芳基可為未取代的。選擇性地，亞芳基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「雜環（heterocycle）」或「雜環（heterocyclic ring）」等詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有指定碳原子數的單價取代或未取代的芳香族或非芳香族單環或雙環環系統（例如，「(C 3-C 8)雜環」或「(C 3-C 10)雜環」係指分別具有3至8個或3至10個碳原子的雜環）且1至4個獨立選自N、O、P或S的雜原子環成員，並透過從母環系統的環原子上去除一個氫原子而衍生。雜環中的一個或多個N、C或S原子可被氧化。包含雜原子的環可為芳香族或非芳香族的。除非另有說明，否則雜環在產生穩定結構的任何雜原子或碳原子處連接至其側基。(C 3-C 8)雜環的代表性實例包括，但不限於，吡咯烷基、氮雜環丁烷基、哌啶基、嗎啉基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、吲哚基、苯並吡唑基、吡咯基、噻吩基(thiophene)、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、吡啶基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基和異噁唑基。於某些方面，雜環基團可為未取代的。選擇性地，雜環基團可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「雜環（heterocycle）」或「雜環（heterocyclic ring）」等詞本身或作為另一術語的一部分，通常指如上所定義之雜環基團且具有指定的碳原子數（例如，(C 3-C 8)雜環或(C 3-C 10)雜環）其中該雜環基團的一個氫原子被一個化學鍵替代（亦即，其為二價的）。在選定的具體實施例中，例如，當並行的連接子單元包含一雜環時，該雜環為如上所定義之雜環基團，其中該雜環基團的兩個或更多個氫原子被一化學鍵替代（亦即，該雜環基可為三價的）。於某些方面，「雜環（heterocycle）」或「雜環（heterocyclic ring）」可為未取代的。選擇性地，雜環可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「碳環（carbocycle）」或「碳環（carbocyclic ring）」等詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有指定碳原子數的單價、取代或未取代的芳香族或非芳香族單環或雙環碳環系統（例如，「(C 3-C 8)碳環」或「(C 3-C 10)碳環」係指分別具有3至8個或3至10個碳原子的碳環）並透過從母環系統的環原子上去除一個氫原子而衍生。作為說明性但非限制性的實例，碳環可為3-、4-、5-、6-、7-或8-元碳環。代表性的(C 3-C 8)碳環包括，但不限於，苯基、環丙基、環丁基、環戊基、環戊二烯基、環己基、環己烯基、1,3-環己二烯基、1,4-環己二烯基、環庚基、1,3-環庚二烯基、1,3,5-環庚三烯基、環辛基，以及環辛二烯基。於某些方面，碳環可為未取代的。選擇性地，碳環可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「碳環（carbocycle）」或「碳環（carbocyclic ring）」等詞本身或作為另一術語的一部分，通常指具有指定碳原子數的如上所定義之碳環基團（例如，「(C 3-C 8)碳環」或「(C 3-C 10)碳環」指分別具有3至8個或3至10個碳原子的碳環(carbocyclo)或碳環(carbocyclic ring)），其中碳環基團的另一個氫原子被一個化學鍵所替代（亦即，其為二價的）。在選定的具體實施例中，例如，當並行的連接子單元包含一碳環時，該碳環為如上所定義之碳環基團，其中碳環基團的兩個或多個氫原子被一個化學鍵所替代（亦即，該碳環可為三價的）。於某些方面「碳環（carbocyclo）」或「碳環（carbocyclic ring）」可為未取代的。選擇性地，碳環可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「雜烷基」乙詞本身或與另一術語組合可表示，除非另有說明，一穩定的直鏈或支鏈烴或其組合，完全飽和或含有1至3個不飽和度，由規定數目的碳原子（例如，(C 1-C 8)雜烷基或(C 1-C 10)雜烷基)以及一至十個，較佳為一至三個選自由O、N、Si以及S所組成之群組的雜原子所組成，且其中氮及硫原子可選擇性地被氧化且氮雜原子可選擇性地被季銨化。雜原子O、N以及S可位於雜烷基的任何內部位置或烷基與分子其餘部分連接的位置。雜原子Si可位於雜烷基的任何位置，包括烷基與分子其餘部分連接的位置。實例包括-CH 2-CH 2-O-CH 3、-CH 2-CH 2-NH-CH 3、-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 3、-CH 2-S-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-S(O)-CH 3、-NH-CH 2-CH 2-NH-C(O)-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2-S(O) 2-CH 3、-CH=CH-O-CH 3、-Si(CH 3) 3、-CH 2-CH=N-O-CH 3，以及-CH=CH-N(CH 3)-CH 3。最多兩個雜原子可為連續的，例如-CH 2-NH-OCH 3與-CH 2-O-Si(CH 3) 3。於較佳具體實施例中，(C 1-C 4)雜烷基或雜亞烷基具有1至4個碳原子與1或2個雜原子，以及(C 1-C 3)雜烷基或雜亞烷基具有1至3個碳原子與1或2個雜原子。於某些方面，雜烷基或雜亞烷基為飽和的。於某些方面，雜烷基或雜亞烷基可為未取代的。選擇性地，雜烷基或亞雜烷基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有說明，否則「雜亞烷基」乙詞本身或作為另一個取代基的一部分，係指衍生自具有指定碳原子數的雜烷基（如上所述）的二價基團（例如，(C 1-C 8)雜亞烷基或(C 1-C 10)雜亞烷基），例如，-CH 2-CH 2-S-CH 2-CH 2-以及-CH 2-S-CH 2-CH 2-NH-CH 2-。針對雜亞烷基，雜原子亦可佔據鏈末端的一個或兩個。此外，針對亞烷基與雜亞烷基連接基團，不暗示連接基團的取向。在選擇的具體實施例中，例如，當並行的連接子單元包含雜亞烷基時，雜亞烷基為如上所定義之雜烷基，其中雜烷基的兩個或更多個氫原子被化學鍵取代（亦即，雜亞烷基可為三價的）。於某些方面，雜烷基或雜亞烷基可為飽和的。於某些方面，雜亞烷基為未取代的。選擇性地，雜亞烷基可被例如一個或多個基團取代。
除非另有定義，否則「鹵素」乙詞一般指第7主族元素；較佳為氟、氯、溴及碘；更佳為氟、氯及溴；甚至更佳為氟與氯。
除非另有說明，否則「取代」、「可選擇性取代」、「可選擇性被取代」等詞通常表示一個或多個氫原子可各自獨立地被取代基替代。典型的取代基包括，但不限於，-X、-R、-O -、-OR、-SR、-S -、-NR 2、-NR 3、=NR、-CX 3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=O、-NCS、-NO、-NO 2、=N 2、-N 3、-NRC(=O)R、-C(=O)R、-C(=O)NR 2、-SO 3 -、-SO 3H、-S(=O) 2R、-OS(=O) 2OR、-S(=O) 2NR、-S(=O)R、-OP(=O)(OR) 2 、-P(=O)(OR) 2、-PO 4 3-、-PO 3H 2、-C(=O)R、-C(=O)X、-C(=S)R、-CO 2R、-CO 2、-C(=S)OR、-C(=O)SR、-C(=S)SR、-C(=O)NR 2、-C(=S)NR 2,，或-C(=NR)NR 2,，其中每個X獨立地為鹵素：-F、-Cl、-Br或-I；每個R獨立地為-H、-(C 1-C 20)烷基（例如，-(C 1-C 10)烷基或-(C 1-C 8)烷基）、-(C 6-C 20)芳基（例如-(C 6-C 10)芳基或較佳為-C 6-芳基）、-(C 3-C 14)雜環（例如，-(C 3-C 10)雜環或-(C 3-C 8)雜環）、保護基，或前藥分子部分。典型的取代基還包括（=O）。
如本文所用，「脂肪族或芳香族殘基」乙詞通常係指一脂肪族取代基，例如，但不限於烷基殘基，然而，其可選擇性被另外的脂肪族及/或芳香族取代基所取代。作為非限制性實例，脂肪族殘基可為核酸、酶、輔酶、核苷酸、寡核苷酸、單醣、多醣、聚合物、螢光團、可選擇性取代的苯，等等，只要這種分子與核心結構（在R 1的情況下，例如，跟與磷結合的氧原子的連接）的直接連接是脂肪族即可。芳香族殘基為取代基，其中與該核心結構的直接連接為芳香族系統的一部分，例如可選擇性取代的苯基或三唑基或吡啶基或核苷酸；作為非限制性實例，如果核苷酸與核心結構的直接連接為例如透過苯基殘基。如本文所用，「芳香族殘基」乙詞還包括雜芳香族殘基。
「胜肽」乙詞，除非另有說明，一般指包含兩個或多個胺基酸透過胜肽鍵(醯胺鍵)共價連接的有機化合物。胜肽可根據組成的胺基酸之數量來指代，亦即，一個二胜肽包含兩個胺基酸殘基，一個三胜肽包含三個胺基酸殘基，等等。含有十個或更少胺基酸的胜肽可稱為寡胜肽，而含有超過十個胺基酸殘基的，例如具有最多約30個胺基酸殘基的為多胜肽。
如本文所用，「胺基酸」乙詞通常指具有-CH(NH 3)-COOH基團的有機化合物。於一具體實施例中，「胺基酸」乙詞係指天然存在的胺基酸。作為說明性實例，天然存在的胺基酸包括精胺酸、離胺酸、天門冬胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、天門冬醯胺、組胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、色胺酸、丙胺酸、異白胺酸、白胺酸、苯丙胺酸、纈胺酸、脯胺酸，以及甘胺酸。然而，該術語在其更廣泛的含義中也包括非天然存在的胺基酸。
根據本發明之胺基酸及胜肽亦可在官能基團處被修飾。非限制性實例為醣類，例如，N-乙醯半乳糖胺（N-Acetylgalactosamine ，GalNAc），或保護基，例如，芴基甲氧基羰基（Fluorenylmethoxycarbonyl，Fmoc）-修飾或酯類。
如本文所用，「抗體」乙詞目的在於指免疫球蛋白分子，較佳地由通常透過雙硫鍵相互連接的四個多胜肽鏈（兩個重（H）鏈以及兩個輕（L）鏈）所組成。每條重鏈由一重鏈可變區（本文縮寫為VH）以及一重鏈恆定區所組成。該重鏈恆定區可包含例如三個結構域CH1、CH2以及CH3。每條輕鏈由一輕鏈可變區（本文縮寫為VL）以及一輕鏈恆定區所組成。該輕鏈恆定區由一個結構域（CL）所組成。VH與VL區可進一步細分為高變異區，稱為互補決定區（complementarity determining regions，CDR），與更保守的區域相互穿插，該更保守的區域稱為框架區（framework regions，FR）。每個VH與VL通常由三個CDRs與最多四個FRs所組成，由胺基端至羧基端排列，例如按以下順序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
如本文所用，「互補決定區」（CDRs；例如CDR1、CDR2，以及CDR3）乙詞係指抗體可變結構域的胺基酸殘基，抗原結合必需有互補決定區的存在。每個可變結構域通常具有三個CDR區域，標識為CDR1、CDR2，以及CDR3。每個互補決定區可包含來自Kabat所定義之「互補決定區」的胺基酸殘基（例如，關於輕鏈可變結構域中的殘基24-34（L1）、50-56（L2）以及89-97（L3），以及在重鏈可變結構域中的殘基31-35（H1）、50-65（H2）以及95-102（H3）；及/或來自「高變異環」的那些殘基（例如，在輕鏈可變結構域中的殘基26-32（L1）、50-52（L2）以及91-96（L3），以及在重鏈可變結構域中的殘基26-32（H1）、53-55（H2）以及96-101（H3））。於某些情況下，互補決定區可包括來自根據Kabat定義之CDR區以及高變異環的胺基酸。
根據其重鏈恆定結構域的胺基酸序列，完整的抗體可歸入不同的「類別」。有五個主要類別的完整抗體：IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM，其中一些可進一步分為「亞類」（同種型），例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2。用於本發明的一類較佳的免疫球蛋白為IgG。
對應於不同類別抗體的重鏈恆定結構域分別稱為alpha、delta、epsilon、gamma，以及mu。不同類別免疫球蛋白的次單元結構與立體構型為已知的。如本文所用，抗體為常規已知的抗體及其功能片段。
抗體/免疫球蛋白的「功能片段」或「抗原結合抗體片段」，或「抗體的抗原結合片段」，或「抗體片段」，或「抗體的片段」一般涉及保留抗原結合區的抗體/免疫球蛋白的片段（例如，IgG的可變區）。抗體的「抗原結合區」通常存在於抗體的一個或多個超可變區，例如CDR1、-2及/或-3區；然而，可變的「框架」區也可在抗原結合中發揮重要作用，例如為CDRs提供支架。較佳地，「抗原結合區」至少包含可變輕鏈（VL）的第4至103個胺基酸殘基以及可變重鏈（VH）的第5至109個胺基酸殘基，更佳地包含VL的第3至107個胺基酸殘基以及VH的第4至111個胺基酸殘基，特別較佳的是完整的VL與VH鏈（VL的第1至109個胺基酸以及VH的第1至113個胺基酸；編號係根據WO 97/08320）。
本發明之「功能片段」、「抗原結合抗體片段」、「抗體的抗原結合片段」或「抗體片段」或「抗體的片段」可包括，但不限於，那些含有至少一個可與本文所述之還原劑反應的雙硫鍵。合適片段之實例包括Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab') 2以及Fv片段；雙體；單結構域抗體（DAbs）、線性抗體；單鏈抗體分子（scFv）；以及多特異性抗體，例如由抗體片段形成的雙特異性及三特異性抗體。不同於「多特異性」或「多功能」抗體的抗體被認為具有相同的每個結合位點。F(ab') 2或Fab可設計為最小化或完全消除CH1以及CL結構域之間發生的分子間雙硫鍵相互作用。
本文中的「Fc區」乙詞通常用於定義至少包含恆定區的一部分的免疫球蛋白重鏈的C端區域。該術語包括天然序列Fc區以及變異Fc區。於一具體實施例中，人類IgG重鏈Fc區從Cys226或Pro230延伸至重鏈的羧基端。然而，Fc區的C端離胺酸（Lys447）可能存在也可能不存在。除非本文另有說明，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基的編號是根據EU編號系統，亦稱為EU索引。
本文考慮的抗體或抗原結合抗體片段的變異體為其中抗體或抗原結合抗體片段的結合活性得以保持的分子。
如本文所用，「結合蛋白」或「具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子」通常為本領域技術人員所知。說明性的非限制性實例包括親和體、adnectins重組蛋白、anticalin重組蛋白、DARPins重組蛋白，以及avimers重組蛋白。
「人類」抗體或其抗原結合片段通常定義為非嵌合（例如，非「人源化」）且不是（全部或部分）來自非人類物種的抗體。人類抗體或其抗原結合片段可源自人類或可為合成的人類抗體。「合成的人類抗體」於本文中被定義為具有全部或部分源自基於已知人類抗體序列分析的合成序列的電腦模擬序列的抗體。例如，可透過分析人類抗體或抗體片段序列的數據庫，並利用從中獲得的數據設計多胜肽序列來實現人類抗體序列或其片段的電腦設計。人類抗體或其抗原結合片段的另一實例是由從人源抗體序列庫中分離的核酸編碼的抗體或其抗原結合片段（例如，此類文庫基於取自人類天然來源的抗體）。
「人源化抗體」或其人源化抗原結合片段於本文中通常定義為（i）源自非人類來源（例如，具有異源免疫系統的轉基因小鼠），該抗體基於人類種系序列；（ii）非人類抗體框架區的胺基酸透過基因工程技術被部分交換為人類胺基酸序列，或（iii）CDR-嫁接的，其中可變結構域的CDRs來自非人類來源，而可變結構域的一個或多個框架為人類來源的且恆定結構域（如果有的話）為人類來源的。
「嵌合抗體」或其抗原結合片段於本文中一般定義為其中可變結構域源自非人類來源且一些或所有恆定結構域源自人類來源。
如本文所用，「單株抗體」乙詞通常指從基本上同質的抗體群體獲得的抗體，亦即，除了可能的突變外，構成該群體的個體抗體是相同的，例如，可能存在少量的自然發生的突變。因此，「單株」乙詞表示抗體的特徵不是離散抗體的混合物。與通常包括針對不同決定簇（抗原決定位）的不同抗體的多株抗體製劑相反，單株抗體製劑的每個單株抗體針對一抗原上的單個決定簇。除了它們的特異性外，單株抗體製劑的優勢還在於它們通常不受其他免疫球蛋白的污染。「單株」乙詞不應解釋為需要透過任何特定方法生產抗體。單株抗體乙詞具體包括嵌合抗體、人源化抗體，以及人類抗體。
「分離的」抗體通常是已經鑑定並與表現它的細胞成分分離的抗體。細胞的污染物成分是會干擾抗體診斷或治療用途的物質，可能包括酶、激素以及其他蛋白質或非蛋白質溶質。
如本文所用，抗體「特異性結合」、「特異於/針對」或「特異性識別」目標抗原，例如，腫瘤相關多胜肽抗原靶標，通常是一種以足夠的親和力結合抗原，使得該抗體可作為以表現抗原的細胞或組織為標靶的治療劑，並且不與其他蛋白質發生顯著交叉反應，或者不與上述抗原靶標的直系同源物及變異體（例如，突變形式、剪接變異體或蛋白水解截短形式）以外的蛋白質發生顯著交叉反應。「特異性識別」或「特異性結合」或「特異於/針對」等詞特定多胜肽或如本文所用的特定多胜肽靶標上的抗原決定位可被展示，例如，透過抗體或其抗原結合片段，其對抗原的單價K D小於約10 -4M，或者小於約10 -5M，或者小於約10 -6M，或者小於約10 -7M，或者小於約10 -8M，或者小於約10 -9M，或者小於約10 -10M，或者小於約10 -11M，或者小於約10 -12M或更少。如果抗體能夠區分抗原與一種或多種參考抗原，則該抗體「特異性結合於」、「特異性於/針對」或「特異性識別」該抗原。在其最一般的形式中，「特異性結合」、「特異性結合於」、「特異性於/針對」或「特異性識別」係指抗體區分目標抗原及不相關抗原的能力，例如，根據以下方法之一確定。此類方法包括，但不限於，表面等離子共振（surface plasmon resonance，SPR）、西方墨點分析法、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-測試以及胜肽掃描。例如，可進行標準ELISA分析。可透過標準顯色進行評分（例如，使用辣根過氧化物酶的二級抗體以及使用過氧化氫的四甲基聯苯胺）。某些孔中的反應透過光密度評分，例如，於波長450 nm處。典型背景（=陰性反應）可能為0.1 OD；典型的陽性反應可能為1 OD。這表示陽性/陰性的差異超過5倍、10倍、50倍，且較佳為超過100倍。通常，結合特異性的確定不只使用單一參考抗原，而是使用一組大約三至五個不相關的抗原，例如奶粉、BSA、轉鐵蛋白等。
「結合親和力」或「親和力」通常係指分子的單個結合位點與其結合配偶體之間非共價相互作用的總和的強度。除非另有說明，如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對成員（例如，抗體與抗原）之間1:1相互作用的內在結合親和力。解離常數「K D」通常用於描述分子（例如，抗體）與其結合夥伴（例如，抗原）之間的親和力，亦即配體與特定蛋白質結合的緊密程度。配體-蛋白質親和力受兩個分子之間的非共價分子間相互作用的影響。親和力可透過本領域已知的常用方法測量，包括本文所述之那些。於一具體實施例中，根據本發明之「K D」或「K D值」透過使用合適的裝置使用表面等離子共振分析來測量，所述裝置包括，但不限於，Biacore儀器，如Biacore T100、Biacore T200、Biacore 2000、Biacore 4000、Biacore 3000（GE Healthcare Biacore公司）或ProteOn XPR36 儀器（Bio-Rad Laboratories公司）。
「抗體藥物共軛物」乙詞或縮寫ADC為本領域技術人員所熟知的，且如本文所用，一般指抗體或其抗原結合片段與藥物（如，化學治療劑、毒素、免疫治療劑、影像探針等）的連接。
本發明還涉及「醫藥上可接受之鹽類」。可以使用任何醫藥上可接受之鹽類。特別是，「醫藥上可接受之鹽類」乙詞係指共軛物或本發明之化合物的鹽類，其為醫藥上可接受的且具有母體化合物所需之藥理學活性。特別地，此類鹽類具有低毒性且可為無機或有機酸加成鹽以及鹼加成鹽。具體而言，此類鹽類包括，但不限於，：（1）酸加成鹽，與鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸所形成；或與乙酸、丙酸、己酸、環戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-（4-羥基苯甲醯基）苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、麩胺酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸等有機酸所形成；或（2）當存在於母體化合物中的酸性質子被金屬離子取代時形成的鹽類，例如鹼金屬離子、鹼土金屬離子或鋁離子；或與乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等有機鹼配位。該鹽類還包括，僅作為實例，鈉、鉀、鈣、鎂、銨、四烷基銨等；以及當化合物含有鹼性官能基團時，無毒的有機或無機酸的鹽類，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽等。抗衡離子或陰離子抗衡離子可用於季胺中以保持電子中性。示例性的抗衡離子包括鹵化物離子（例如F -、Cl -、Br -、I -）、NO 3 -、ClO 4 -、OH -、H 2PO 4 -、HSO 4 -、磺酸鹽離子（例如，甲磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、10-樟腦磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、萘-1-磺酸-5-磺酸鹽等），以及羧酸根離子（例如，乙酸根、乙酸根、丙酸根、苯甲酸根、甘油酸根、乳酸根、酒石酸根、乙醇酸根等）。
如本文所用，「溶劑化物」乙詞可指包含一個或多個分子的本文所述之共軛物或化合物與一個或多個溶劑分子的聚集體。該溶劑可為水，在這種情況下溶劑化物可為水合物。或者，該溶劑可為有機溶劑。因此，本發明之共軛物或化合物可以作為水合物存在，包括一水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等，以及相應的溶劑化形式。本發明之化合物可為真正的溶劑化物，而於其他情況下，本發明之化合物可以僅僅保留外來水或者是水加一些外來溶劑的混合物。 式（ I ）之共軛物
如上所述，本發明涉及一種具有式（I）之共軛物： （I） 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： RBM為受體結合分子； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。
式（I）之共軛物包含透過磷（V）分子部分（磷（V）分子部分有時也表示為「P5」）連接至喜樹鹼分子部分的受體結合分子以及連接子。已經發現式（I）之共軛物具有如下所示的許多優點。
作為最初的優勢，式（I）之共軛物表現出良好的親水性且在溶液中以及在與抗體的共軛過程中表現出低聚集，實例為獲得高產率的ADCs，且沒有形成或僅形成少量聚集體（ 實施例 2以及 圖 18 至 41）。此外，式（I）之共軛物顯示出良好的細胞毒性，其對抗體標靶的細胞株具有選擇性。選擇性超過市售產品之一Enhertu（ 實施例 4以及 圖 43 至 46）。相較於Enhertu，式（I）之共軛物還顯示有利的旁觀者效應，效果相當或優於Enhertu（ 實施例 5以及 圖 47，以及 實施例 16以及 圖 59，以及 實施例 17以及 圖 60）。此外，式（I）之共軛物在癌細胞中表現出良好的DNA損傷（ 實施例 6以及 圖 48）。特別是，式（I）之共軛物顯示出優異的血清穩定性，其超越了市售產品Enhertu的穩定性（ 實施例 7以及 圖 49）。相較於Enhertu的另一個優勢是，式（I）之共軛物在人類及囓齒動物血清中體外作用一定時間後保持其功效與選擇性（ 實施例 8以及 圖 50及 51）。這種作用與在血清存在下的出色穩定性相結合，可能有助於減少以共軛物治療患者期間的副作用。式（I）之共軛物也顯示出有利的體內藥物動力學特性（ 實施例 9以及 圖 52，以及 實施例 23以及 圖 67）。特別是，相較於Enhertu，以式（I）之共軛物進行的體內藥物動力學實驗證明了相似的清除率。此外，藥物動力學實驗已經證明，作為進一步的優勢，相較於Enhertu，式（I）之共軛物在體內表現出顯著更高的穩定性（ 實施例 19以及 圖 62）。進一步的體內藥物動力學實驗顯示，即使在喜樹鹼藥物的高載量下，式（I）之共軛物與未修飾抗體的動力學非常相似。此外，已經證實式（I）之共軛物在體內循環期間的長期穩定性（ 實施例 21以及 圖 65）。相較於Enhertu，式（I）之共軛物也具有相似的熱穩定性（ 實施例 10以及 圖 53）。此外，式（I）之共軛物以及Enhertu對細胞外靶點表現出相似的結合特性（ 實施例 11以及 圖 54）。作為進一步的優勢，相較於Enhertu，式（I）之共軛物在水性介質中經過最多數週的作用時間還顯示減少的聚集（ 實施例 12以及 圖 55）。相較於Enhertu，作為另一個優勢，式（I）之共軛物還顯示出增強的抗體依賴性細胞毒性（antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC）（ 實施例 13以及 圖 56）。發明人進一步觀察到，相較於Enhertu，式（I）之共軛物表現出相似的內化至靶標陽性（Her2+）細胞中，同時減少到標靶陰性細胞中的不希望的內化（ 實施例 14以及 圖 57）。對於不高度過度表現靶標的細胞株，相較於Enhertu，式（I）之共軛物還顯示出更好的體外功效（ 實施例 16以及 圖 58）。因此，相較於Enhertu，本文所述之共軛物在功效方面具有改進的特性，特別是在標靶低表現的細胞中。發明人還發現，相較於Enhertu的另一個優點，式（I）之共軛物對健康人體組織的不同細胞表現出較少的不良毒性（ 實施例 18以及 圖 61）。式（I）之共軛物用於治療腫瘤的優異功效已在體內得到證實（ 實施例 20， 圖 63以及 圖 64）。具體而言，已證明劑量依賴性以及優於Enhertu的體內功效（ 實施例 24以及 圖 68）。此外，可以喜樹鹼分子部分與受體結合分子的不同比例來製備式（I）之共軛物（參見 實施例 2及 3以及 圖 42，以及 實施例 22以及 圖 66）。總之，本案發明人驚奇地發現式（I）之共軛物表現出優異的性質，這使得它們可作為藥物，包括增強的血清穩定性以及其他優勢，例如，有利的旁觀者效應、良好的體內藥物動力學特性、體內長期穩定性、減少聚集、增強的ADCC、減少標靶陰性細胞的不需要的內化、對標靶低表現的細胞株的更好療效、減少對健康人體組織的細胞不需要的毒性、對體內腫瘤的治療具有極好的療效。應當注意的是，包含磷（V）分子部分的共軛物為例如在WO 2018/041985A1以及WO 2019/170710 中所描述，透過引用將其併入本文。
較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。較佳地，當存在時R 4為H或(C 1-C 8)烷基；當存在時，R 4更佳為H。較佳地，當存在時R 5為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 5為H。較佳地，當存在時R 6為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 6為H。較佳地，當存在時R 7為H或(C 1-C 8)烷基；當存在時，R 7更佳為H。
較佳地， 為雙鍵；V不存在；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。
更佳地， 代表雙鍵；V不存在；X代表 ，R 3代表H或(C 1-C 8)烷基。較佳地，R 3代表H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。於較佳具體實施例中，R 3為H。
於某些具體實施例中， 可為一化學鍵；V為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，V為H；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；更佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H；R 4為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或一可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 4為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地R 4為H。
於某些具體實施例中， 可代表化學鍵；V可為H或(C 1-C 8)烷基；X可代表 ；R 3與R 4可獨立地代表H或(C 1-C 8)烷基。較佳地，R 3與R 4獨立地表示H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。較佳地，R 3與R 4相同；甚至更佳地，R 3、R 4與V相同。更佳地，R 3與R 4都為H。較佳地，V為H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。甚至更佳地，V為H。於較佳具體實施例中，R 3、R 4與V各自為H。
整數m的範圍為1至10。因此，整數m可為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。較佳地，整數m的範圍為1至4。更佳地，整數m為1或2。甚至更佳地，整數m為1。
整數n的範圍為1至20。因此，整數n可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。較佳地，整數n的範圍為1至10。更佳地，整數n的範圍為2至10。還更佳地，整數n的範圍為4至10。還更佳地，整數n的範圍為6至10。還更佳地，整數n為6、7、8、9或10。還更佳地，整數n為7至10的範圍內。還更佳地，整數n為7、8或9。還更佳地，整數n為7或8。甚至更佳地，整數n為8。
整數n的範圍為1至20。較佳地，整數n的範圍為1至10。更佳地，整數n的範圍為2至8。還更佳地，整數n為2、3、4、5或6。還更佳地，整數n在3至6的範圍內。還更佳地，整數n為3、4或5。還更佳地，整數n為4或5。甚至更佳地，整數n為4。
較佳地，m為1至4的整數，更佳為1或2，還更佳為1；且較佳地，n為1至20的整數，更佳為1至10，還更佳為2至10，還更佳為4至10，還更佳為6至10，更佳地，n為6、7、8、9或10，更佳地，n為7至10，還更佳地，n為7、8或9，還更佳地，n為7或8，甚至更佳地，n為8。
較佳地，m為1至4的整數，較佳為1或2，更佳為1；且n較佳為1至20的整數，更佳為1至10，進一步更佳為2至8。還更佳地，n為2、3、4、5或6；還更佳地，n為3至6的範圍內；還更佳地，n為3、4或5；還更佳地，n為4或5，甚至更佳地，n為4。
較佳地，m為1；較佳地，n為1至20的整數，更佳為1至10，還更佳為2至10，還更佳為4至10，還更佳為6至10，還更佳地，n為6、7、8、9或10，還更佳地，n在7至10的範圍內，還更佳地，n為7、8或9，還更佳地，n為7或8，甚至更佳地，n為8。因此，較佳地，m為1且n為1至20之間的整數。更佳地，m為1且n為1至10之間的整數。還更佳地，m為1且n為2至10之間的整數。還更佳地，m為1且n為4至10之間的整數。還更佳地，m為1且n為6至10之間的整數。還更佳地，m為1且n為6、7、8、9或10。還更佳地，m為1且n為7至10之間的整數。還更佳地，m為1且n為7、8或9。還更佳地，m為1且n為7或8。甚至更佳地，m為1且n為8。
較佳地，m為1；n較佳為1至20之間的整數，更佳為1至10，進一步更佳為2至8。更佳地，n為2、3、4、5或6，更佳地，n為3至6；還更佳地，n為3、4或5；還更佳地，n為4或5，甚至更佳地，n為4。因此，較佳地，m為1且n為1至20之間的整數。更佳地，m為1且n為1至10之間的整數。還更佳地，m為1且n為2至8之間的整數。還更佳地，m為1且n為2、3、4、5或6。還更佳地，m為1且n為3至6之間。還更佳地，m為1且n為3、4或5。還更佳地，m為1且n為4或5。甚至更佳地，m為1且n為4。
於某些具體實施例中，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量可為從1至20。較佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為1至14。更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為2至14。更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為4至14。還更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為5至12。還更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為6至12。還更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為7至10。甚至更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為8。
於某些具體實施例中，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量可為1至20。較佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為1至14。更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為1至12。更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為2至10。還更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為2至8。還更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為2至6。還更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數量為3至5。甚至更佳地，每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數目為4。 受體結合分子（ RBM ）
RBM為受體結合分子。「受體結合分子」乙詞一般指能夠結合受體的任何分子。作為說明性但非限制性的實例，受體結合分子可結合的受體可在細胞表面上表現。作為說明性但非限制性的實例，表現受體的細胞可為癌細胞。本領域技術人員知道選擇合適的受體結合分子。
受體可為腫瘤相關表面抗原。因此，受體結合分子可能能夠特異性結合腫瘤相關表面抗原。如本文所用，「腫瘤相關表面抗原」乙詞一般係指呈遞或可呈遞在位於腫瘤細胞上或腫瘤細胞內的表面上的抗原。這些抗原可以在細胞表面呈遞細胞外部分，通常與分子的跨膜及細胞質部分結合。於某些具體實施例中，這些抗原可以僅由腫瘤細胞呈遞而不由正常細胞（亦即非腫瘤細胞）呈遞。腫瘤抗原可以只在腫瘤細胞上表現，或者相較於非腫瘤細胞可能代表腫瘤特異性突變。於這樣的具體實施例中，相應的抗原可稱為腫瘤特異性抗原。一些抗原同時由腫瘤細胞及非腫瘤細胞呈遞，可稱為腫瘤相關抗原。相較於非腫瘤細胞，這些腫瘤相關抗原可在腫瘤細胞上過度表現，或者由於與非腫瘤組織相比腫瘤組織的結構不太緊湊，因此可在腫瘤細胞中進行抗體結合。於某些具體實施例中，腫瘤相關表面抗原位於腫瘤的脈管系統上。腫瘤相關表面抗原的說明性但非限制性實例包括CD19、CD30、Her2或PMSA。腫瘤相關表面抗原為本領域技術人員已知的。特別是，於Criscitello等人的評論文章中描述了那些已被發現對ADCs的開發有用的內容，「Antibody-drug conjugates in solid tumors: A look into novel targets」，Journal of Hematology And Oncology（2021年）14:20（https://doi.org/10.1186/s13045-021-01035-z）。
受體結合分子可選自由下列所組成之群組：抗體、抗體片段，以及具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子。
較佳地，該受體結合分子為抗體。更佳地，該抗體選自以下所組成之群組：單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體以及單一結構域抗體，例如駱駝或鯊魚單一結構域抗體。還更佳地，該抗體為單株抗體。較佳地，該抗體能夠特異性結合腫瘤相關表面抗原。於某些具體實施例中，該抗體可為布倫妥昔單抗。於某些具體實施例中，該抗體可為曲妥珠單抗。
該受體結合分子可為抗體片段。較佳地，該抗體片段為雙價抗體片段。更佳地，該雙價抗體片段選自以下所組成之群組：(Fab) 2'-片段、雙價單鏈Fv片段、雙親和力重新標靶（DART）抗體，以及雙抗體。或者，較佳的抗體片段為單價抗體片段。更佳地，該單價抗體片段選自以下所組成之群組：Fab片段、Fv片段以及單鏈Fv片段(scFv)。單價抗體片段也可為駱駝單一結構域或鯊魚單一結構域抗體的片段。較佳地，該抗體片段能夠特異性結合腫瘤相關表面抗原。
受體結合分子可為具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子。可作為受體結合分子的具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子的實例包括，但不限於，適體、基於脂質運載蛋白家族多胜肽的突變蛋白、glubody重組蛋白、基於錨蛋白支架的蛋白、基於結晶支架的蛋白、adnectin重組蛋白、avimer重組蛋白、類EGF結構域、Kringle結構域、第I型纖維連接蛋白結構域、第II型纖維連接蛋白結構域、第III型纖維連接蛋白結構域、PAN結構域、G1a結構域、SRCR結構域、Kunitz/牛胰蛋白酶抑制劑結構域、tendamistat重組蛋白、Kazal型絲胺酸蛋白酶抑制劑結構域、三葉草（P型）結構域、馮維勒布蘭德因子C型結構域、過敏毒素樣結構域、CUB結構域、第I型甲狀腺球蛋白重複序列、LDL受體A類結構域、Sushi結構域、Link結構域、第I型血小板反應蛋白結構域、免疫球蛋白結構域或類免疫球蛋白結構域（例如，結構域抗體或駱駝重鏈抗體）、C型凝集素結構域、MAM結構域、馮維勒布蘭德因子A型結構域、軀體生長素B結構域、WAP型四雙硫核心結構域、F5/8 C型結構域、血凝酵素結構域、SH2結構域、SH3結構域、層連結蛋白型類EGF結構域、C2結構域，「Kappa體（Kappabodies）」（Ill.等人，Design And construction of A hybrid immunoglobulin domain with properties of both heavy And light chain variable regions」Protein Eng 10:949-57（1997年）），「微抗體（Minibodies）」（Martin 等人，「The Affinity-selection of A minibody polypeptide inhibitor of human interleukin-6」EMBO J 13:5303-9（1994年）），「雙抗體（Janusins）」（Traunecker 等人，「Bispecific single chain molecules（Janusins）target cytotoxic lymphocytes on HIV infected cells」EMBO J 10:3655-3659（1991年），以及Traunecker等人，「Janusin: new molecular design for bispecific reagents」Int J Cancer Suppl 7:51-52（1992年））、奈米抗體、adnectin重組蛋白、四聯蛋白、微體、affilin重組蛋白、親和體（affibody）或ankyrin重組蛋白、晶狀體蛋白、結節蛋白、泛素、鋅指蛋白、自發螢光蛋白、錨蛋白或錨蛋白重複蛋白或富含白胺酸的重複蛋白、avimer重組蛋白（Silverman、Lu Q、Bakker A、To W、Duguay A、Alba BM、Smith R、Rivas A、Li P、Le H、Whitehorn E、Moore KW、Swimmer C、Perlroth V、Vogt M、Kolkman J，Stemmer WP 2005年，Nat Biotech，12月23日（12）:1556-61，E-Publication in Nat Biotech. 2005年11月20日版）；以及透過人類受體結構域家族的外顯子改組進化而來的多價avimer重組蛋白，也在如Silverman J、Lu Q、Bakker A、To W、Duguay A、Alba BM、Smith R、Rivas A、Li P、Le H、Whitehorn E、Moore KW、Swimmer C、Perlroth V、Vogt M、Kolkman J、Stemmer WP等人的報導中所描述，Nat Biotech，12月23日（12）:1556-61，E-Publication in Nat Biotech. 2005年11月20日版。較佳地，具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子選自由下列所組成之群組：基於脂質運載蛋白家族多胜肽的突變蛋白、glubody重組蛋白、基於錨蛋白支架的蛋白、基於結晶支架的蛋白、adnectin重組蛋白、avimer重組蛋白、DARPin，以及親和體（affibody）。較佳地，具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子能夠特異性結合腫瘤相關表面抗原。 基團 Y
基團Y選自由下列所組成之群組：NR 5、S、O，以及CR 6R 7。R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 5為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 5為H。R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 6為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 6為H。R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 7為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 7為H。
較佳地，Y選自由下列所組成之群組：NH、S、O以及CH 2。更佳地，Y為NH、S或O。於某些具體實施例中，Y為CH 2。於某些具體實施例中，Y為O。於某些具體實施例中，Y為S。
在非常佳的具體實施例中，Y為NH。 R 1 群
R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基。
R 1可表示可選擇性取代的(C 1-C 8)烷基。
R 1可表示可選擇性被F、Cl、Br、I、-NO 2、-N((C 1-C 8)烷基)H、-NH 2、-N 3、-N((C 1-C 8)烷基) 2、=O、(C 3-C 8)環烷基、-S-S-((C 1-C 8)烷基)、(C 2-C 8)烯基或(C 2-C 8)炔基取代的(C 1-C 8)烷基。
R 1可表示可選擇性取代的苯基。
R 1可表示可選擇性獨立地被(C 1-C 8)烷基、F、Cl、I、Br、-NO 2、-N((C 1-C 8)烷基)H、-NH 2或-N((C 1-C 8)烷基) 2取代的苯基。
R 1可表示可選擇性取代的5-或6-元雜芳環，例如吡啶。
R 1可表示(C 1-C 8)烷基，被-S-S-(C 1-C 8)烷基取代的(C 1-C 8)烷基，被可選擇性取代的苯基取代的(C 1-C 8)烷基；或苯基；或被-NO 2取代的苯基。
R 1可表示甲基、乙基、丙基或丁基，較佳為甲基或乙基，更佳為乙基。 第一聚亞烷基二醇單元 R F
較佳地，R 1為第一聚亞烷基二醇單元R F。如本文所用，「第一聚亞烷基二醇單元」乙詞係指與O原子結合的聚亞烷基二醇單元，其連接至磷（V）分子部分的磷上。第一聚亞烷基二醇單元R F包含至少一個亞烷基二醇次單元。較佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含一個或多個具有以下結構的亞烷基二醇次單元： 。更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含一個或多個具有以下結構的亞烷基二醇次單元： 。因此，第一聚亞烷基二醇單元R F可為聚丁二醇單元、聚丙二醇單元或聚乙二醇單元。還更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含一個或多個具有以下結構的亞烷基二醇次單元： 。
較佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含1至100個如本文所述之亞烷基二醇次單元。更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含2至50個如本文所述之亞烷基二醇次單元。還更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含3至45個如本文所述之亞烷基二醇次單元。還更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含4至40個如本文所述之亞烷基二醇次單元。還更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含6至35個如本文所述之亞烷基二醇次單元。甚至更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含8至30個如本文所述之亞烷基二醇次單元。
較佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含1至20個如本文所述之亞烷基二醇次單元。更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含2至12個如本文所述之亞烷基二醇次單元。還更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F包含3至11個如本文所述之亞烷基二醇次單元。
第一聚亞烷基二醇單元R F可為包含1至100個聚亞烷基二醇單元，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元： 。較佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F可為包含1至100個聚亞烷基二醇單元，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元： 。更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F可為包含1至100個聚亞烷基二醇單元，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元： 。在非常佳的具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元R F可為包含1至100個聚乙二醇單元，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個次單元，每個次單元具有以下結構： 。
第一聚亞烷基二醇單元 RF可為包含1至20個的聚亞烷基二醇單元，較佳為2至12個，更佳為3至11個具有以下結構的次單元： 。較佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F可為包含1至20個的聚亞烷基二醇單元，較佳為2至12個，更佳為3至11個具有以下結構的次單元： 。更佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F可為包含1至20個的聚亞烷基二醇單元，較佳為2至12個，更佳為3至11個具有以下結構的次單元： 。在非常佳的具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元R F可為聚乙二醇單元，其包含1至20個，較佳為2至12個，更佳為3至11個次單元，每個次單元具有以下結構： 。
較佳地，第一聚亞烷基二醇單元R F為： ， 其中： 表示O與磷相連的位置； K F為H或第一封端基團；較佳地，K F選自由下列所組成之群組：-H（氫）、-PO 3H、-（C 1-C 10）烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；更佳地，K F為H；以及 o為1至100之間的整數。
當於本文中提及時，「第一封端基團」可為能夠充當第一聚亞烷基二醇單元的末端基團的任何部分。可用於本發明之第一封端基團的實例包括-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2。於某些具體實施例中，該第一封端基團可為-(C 1-C 10)烷基，尤其是甲基。
較佳地，K F為H(氫)。
整數o表示該第一聚亞烷基二醇單元 中的重複單元數。整數o可為1至100之間的範圍內。較佳地，o為2至50的範圍內。更佳地，o為3至45的範圍內。還更佳地，o為4至40的範圍內。還更佳地，o為6至35的範圍內。甚至更佳地，o為8至30的範圍內。於較佳具體實施例中，o為12或大約12。甚至更佳地，o為16至30的範圍內。甚至更佳地，o為20至28的範圍內。甚至更佳地，o為22、23、24、25或26。甚至更佳地，o為23、24或25。於較佳具體實施例中，o為24或大約24。較佳地，該重複單元為 。更佳地，該重複單元為 。
在該第一聚亞烷基二醇單元中，整數o可為1至20。較佳地，o為2至12。更佳地，o為3至11的範圍內。較佳地，該重複單元為 。更佳地，該重複單元為 。
較佳地，該第一聚亞烷基二醇單元R F包含乙二醇次單元，每個次單元具有以下結構： ，亦即，該次單元表示為「乙二醇次單元」。因此，較佳地，該第一聚亞烷基二醇單元為第一聚乙二醇單元。該第一聚乙二醇單元包含至少一個乙二醇次單元。
較佳地，該第一聚亞烷基二醇單元R F可包含1至100個該第一聚乙二醇單元，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個乙二醇次單元，每個次單元具有以下結構： 。
較佳地，該第一聚亞烷基二醇單元R F可包含1至20個該第一聚乙二醇單元，較佳為2至12個，更佳為3至11個乙二醇次單元，每個次單元具有以下結構： 。
較佳地，該第一聚亞烷基二醇單元R F為具有以下結構的第一聚乙二醇單元： ， 其中： 表示O與磷相連的位置； K F為H(氫)或本文所述之第一封端基團；較佳地，K F選自由下列所組成之群組：-H（氫）、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；更佳地，K F為H；以及 o為1至100之間的整數。
整數o表示該第一聚乙二醇單元 中的重複單元數。整數o可為1至100之間的範圍。較佳地，o為2至50的範圍內。更佳地，o為3至45的範圍內。還更佳地，o為4至40的範圍內。還更佳地，o為6至35的範圍內。甚至更佳地，o為8至30的範圍內。於較佳具體實施例中，o為12或大約12。甚至更佳地，o為16至30的範圍內。甚至更佳地，o為20至28的範圍內。甚至更佳地，o為22、23、24、25或26。甚至更佳地，o為23、24或25。於較佳具體實施例中，o為24或大約24。
在該第一聚乙二醇單元中，整數o可為1至20的範圍內。較佳地，o為2至12的範圍內。更佳地，o為3至11的範圍內。
通常，在該第一聚亞烷基二醇單元R F（較佳為第一聚乙二醇單元）中可使用多分散聚亞烷基二醇（較佳為多分散聚乙二醇）、單分散聚亞烷基二醇（較佳為單分散聚乙二醇），以及離散的聚亞烷基二醇（較佳為離散的聚乙二醇）。多分散聚亞烷基二醇（較佳為多分散聚乙二醇）為大小及分子量的異質混合物，而單分散聚亞烷基二醇（較佳為單分散聚乙二醇）通常從異質混合物中純化，因此提供單一的鏈長及分子量。較佳的第一聚亞烷基二醇單元為不連續的聚亞烷基二醇（較佳為不連續的聚乙二醇），即以逐步方式而非透過聚合過程合成的化合物。離散的聚亞烷基二醇（較佳為離散的聚乙二醇）提供具有定義及特定鏈長的單個分子。
本文提供之第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）包含一個或多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）。聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可連接在一起，例如，以線性、支化或星形構型連接在一起。可選擇地，至少一個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可在一端被衍生化以共價連接至與磷結合的氧原子上。
該第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）將在與磷結合的氧原子處連接至該共軛物（或其中間體）。該第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）的另一端（或多個末端）將為游離的且不受束縛的並可採用氫、甲氧基、羧酸、醇或其他合適的官能基團的形式，例如，如本文所述之任何第一封端基團。甲氧基、羧酸、醇或其他合適的官能基團作為第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）的末端聚亞烷基二醇次單元（較佳為聚乙二醇次單元）的封端。不受束縛係指該第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）不會在那個不受束縛的位點連接喜樹鹼分子部分（C）、受體結合分子或連接喜樹鹼分子部分及/或受體結合分子的連接子（L）的組成分。對於其中該第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）包含多於一個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）的那些具體實施例，多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可為相同或不同化學分子部分（例如，聚亞烷基二醇，特別是聚乙二醇，具有不同的分子量或次單元數量）。多個第一聚亞烷基二醇鏈（較佳為第一聚乙二醇鏈）在單個連接位點連接至與磷結合的氧原子。技術人員將理解，第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）除了包含重複的聚亞烷基二醇次單元（較佳為聚乙二醇次單元）之外還可含有非聚亞烷基二醇材料（較佳為非聚乙二醇材料）（例如，以促進多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）彼此共軛或促進與結合至磷的氧原子的共軛）。非聚亞烷基二醇材料（較佳為非聚乙二醇材料）係指第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）中不屬於重複亞烷基二醇次單元（較佳為-CH 2CH 2O-次單元）的原子。於本文提供的具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）可包含透過非聚亞烷基二醇（非聚乙二醇）元素彼此連接的兩個單體聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）。於本文提供的其他具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元（較佳為第一聚乙二醇單元）可包含連接至中心核的兩個直鏈聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈），該中心核連接至結合磷（即，聚亞烷基二醇單元（較佳為聚乙二醇單元）為支化的）。
本領域技術人員可使用多種聚亞烷基二醇（較佳為聚乙二醇）連接方法，[參見，例如，EP 0 401 384（將PEG與G-CSF共軛）；美國專利號5,757,078（EPO胜肽的聚乙二醇化）；美國專利號5,672,662（聚乙二醇）以及被丙酸或丁酸單取代的相關聚合物及其用於生物技術應用的功能性衍生物）；美國專利號6,077,939（胜肽的N端alpha-碳的聚乙二醇化）；以及Veronese（2001年）Biomaterials 22:405-417（關於胜肽與蛋白質聚乙二醇化的評論文章）]。
於較佳具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元，更佳為第一聚乙二醇單元，直接連接至與磷結合的氧原子上。於這些具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元，較佳為第一聚乙二醇單元，不包含用於連接至與磷結合的氧原子的官能基團，亦即，氧原子直接與第一聚亞烷基二醇單元的碳原子結合，較佳為與該第一聚乙二醇單元的CH 2結合。
於一組具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含至少一個亞烷基二醇次單元，較佳為至少兩個亞烷基二醇次單元，更佳為至少3個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少4個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少6個亞烷基二醇次單元，甚至更佳為至少8個亞烷基二醇次單元。於某些此類具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含不超過約100個亞烷基二醇次單元，較佳為不超過約50個亞烷基二醇單元，更佳為不超過約45個亞烷基二醇次單元，更佳為不超過約40個亞烷基二醇次單元，更佳為不超過約35個次單元，甚至更佳為不超過約30個亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第一聚亞烷基二醇單元為一第一聚乙二醇單元。
於一組具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含一個或多個線性聚亞烷基二醇鏈，每個鏈具有至少一個亞烷基二醇次單元，較佳為至少2個亞烷基二醇次單元，更佳為至少3個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少4個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少6個亞烷基二醇次單元，甚至更佳為至少8個亞烷基二醇次單元。於較佳具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含總共至少1個亞烷基二醇次單元，較佳為至少2個亞烷基二醇次單元，更佳為至少3個，還更佳為至少4個，還更佳為至少6個，或甚至更佳為至少8個亞烷基二醇次單元。於某些這樣的具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含不超過約100個亞烷基二醇次單元的組合總數，較佳為不超過約50個亞烷基二醇次單元的組合總數，更佳為不超過約45個次單元的組合總數，還更佳為不超過約40個次單元的組合總數，還更佳為不超過約35個次單元的組合總數，甚至更佳為不超過約30個次單元的組合總數。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為一乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第一聚亞烷基二醇單元為包含一個或多個直鏈聚乙二醇鏈的第一聚乙二醇單元。
於另一組具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含1至100個的組合總數，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第一聚亞烷基二醇單元為一第一聚乙二醇單元。
於另一組具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元包含一個或多個線性聚亞烷基二醇鏈，其具有從1至100個的組合總數，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，該亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第一聚亞烷基二醇單元為包含一個或多個直鏈聚乙二醇鏈的第一聚乙二醇單元。
於另一組具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元為具有至少一個次單元，較佳為至少兩個次單元，更佳為至少3個次單元，還更佳為至少6個次單元，甚至更佳為至少8個次單元的線性單聚亞烷基二醇鏈。於這些具體實施例的任一個中，該亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些具體實施例的任一個中，該第一聚亞烷基二醇單元為第一聚乙二醇單元，其為線性單聚乙二醇鏈。可選擇地，於這些實施例的任一個中，可衍生線性單聚亞烷基二醇鏈。
於另一組具體實施例中，該聚亞烷基二醇單元為線性單聚亞烷基二醇鏈，具有1至100個，較佳為2至50個，更佳為3至45個，更佳為4至40個，更佳為6至35個，更佳為8至30個亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些具體實施例的任一個中，該第一聚亞烷基二醇單元為第一聚乙二醇單元，其為線性單聚乙二醇鏈。可選擇地，於這些實施例的任一個中，可衍生線性單聚亞烷基二醇鏈。
可作為第一聚亞烷基二醇單元的示例性線性聚乙二醇單元，特別是作為第一聚乙二醇單元，於本文提供的任一具體實施例中如下： 其中波浪線表示與磷結合的氧原子的連接位點； R 20為PEG連接子單元；較佳地，R 20不存在； R 21為PEG封端單元（此處R 21也標記為「K F」）； R 22為PEG耦合單元（亦即用於將多個PEG次單元鏈耦合在一起； n獨立地選自1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，更佳為4至40，還更佳為6至35，甚至更佳為8至30； e為2至5； 每個n'獨立地選自1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，更佳為4至40，還更佳為6至35，甚至更佳為8至30。於較佳具體實施例中，在聚乙二醇單元中有至少1個，較佳至少2個，更佳為至少3個，更佳為至少4個，更佳為至少6個，甚至更佳為至少8個乙二醇次單元。於某些具體實施例中，不超過100個，較佳為不超過50個，更佳為不超過45個，更佳為不超過40個，更佳為不超過35個，甚至更佳為不超過30個乙二醇次單元。當R 20不存在時，一（CH 2CH 2O）次單元直接與氧原子結合，而氧原子與磷相連。
較佳地，該線性聚乙二醇單元為 ， 其中波浪線表示與磷結合的氧原子的連接位點；R 20、R 21（本文也表示為「K F」）與n如本文所定義；更佳地，R 20不存在。於較佳具體實施例中，n為12或大約12。於較佳具體實施例中，n為24或約24。較佳地，R 21為H。
當存在聚乙二醇連接單元R 20時，R 20為第一聚乙二醇單元的一部分並用於將該第一聚乙二醇單元連接至與磷結合的氧原子上。於此方面，與磷結合的氧原子與該第一聚乙二醇單元形成一化學鍵。於示例性具體實施例中，當存在時，PEG連接單元R 20選自由以下所組成之群組：*-(C 1-C 10)烷基- #、*-亞芳基- #、*-(C 1-C 10)烷基-O- #、*-(C 1-C 10)烷基-C(O)- #、*-(C 1-C 10)烷基-C(O)O- #、*-(C 1-C 10)烷基-NH- #、*-(C 1-C 10)烷基-S- #、*-(C 1-C 10)烷基-C(O)-NH- #、*-(C 1-C 10)烷基-NH-C(O)- #，以及*-CH 2-CH 2SO 2-(C 1-C 10)烷基- #；其中*表示與磷結合的氧的連接點， #表示與乙二醇單元的連接點。
當存在該PEG共軛單元R 22時，R 22為聚乙二醇單元的一部分且為非PEG材料，其作用為連接兩個或多個重複-CH 2CH 2O-次單元鏈。於示例性具體實施例中，當存在時，PEG共軛單元R 22獨立地選自由以下所組成之群組：*-(C 1-C 10)烷基-C(O)-NH- #、*-(C 1-C 10)烷基-NH-C(O)- #、*-(C 2-C 10)烷基-NH- #、*-(C 2-C 10)烷基-O- #、*-(C 1-C 10)烷基-S- #，或*-(C 2-C 10)烷基-NH- #；其中*表示與乙二醇次單元的氧原子的連接點， #表示與另一個乙二醇次單元的碳原子的連接點。
基團R 21，於本文中也表示為「K F」，於示例性具體實施例中為H(氫)，或者可為一如本文所述之第一封端基團；較佳地，R 21獨立地選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2。於某些具體實施例中，R 21可為-(C 1-C 10)烷基，特別是甲基。更佳地，R 21為H。
可作為本文提供之任一具體實施例中的第一聚亞烷基二醇單元的示例性直鏈第一聚乙二醇單元如下。 ； ； ；以及 ； 其中波浪線表示與磷結合的氧原子的連接位點；以及每個n為1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，還更佳為4至40，還更佳為6至35，甚至更佳為8至30。於某些具體實施例中，n約為12。於某些具體實施例中，n約為24。
於某些具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元為約300道爾頓至約5千道爾頓；約300道爾頓至約4千道爾頓；約300道爾頓至約3千道爾頓；約300道爾頓至約2千道爾頓；或者約300道爾頓至約1千道爾頓。於某些此類方面，該第一聚亞烷基二醇單元可具有至少6個亞烷基二醇次單元或至少8個亞烷基二醇次單元。於某些此類方面，該第一聚亞烷基二醇單元可具有至少6個亞烷基二醇次單元或至少8個亞烷基二醇次單元，但不超過100個亞烷基二醇次單元，較佳為不超過50個亞烷基二醇次單元。於某些具體實施例中，該第一聚亞烷基二醇單元為約300道爾頓至約5千道爾頓；約300道爾頓至約4千道爾頓；約300道爾頓至約3千道爾頓；約300道爾頓至約2千道爾頓；或者約300道爾頓至約1千道爾頓的第一聚乙二醇單元。於某些此類方面，該第一聚乙二醇單元可具有至少6個乙二醇次單元或至少8個乙二醇次單元。於某些此類方面，該第一聚乙二醇單元具有至少6個乙二醇次單元或至少8個乙二醇次單元，但不超過100個乙二醇次單元，較佳為不超過50個乙二醇次單元。
於某些具體實施例中，當R 1為第一聚亞烷基二醇單元R F時，在式（I）之共軛物中不存於其他亞烷基二醇次單元（亦即，沒有亞烷基二醇次單元存在於共軛物的任何其他組成分中，例如本文提供之連接子L中）。於其他方面，當R 1為第一聚亞烷基二醇單元時，不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個其他亞烷基二醇次單元存在於式（I）之共軛物中（亦即，不超過8、7、6、5、4、3、2或1個其他亞烷基二醇次單元存在於共軛物的其他組成分中，例如於本文提供之連接子L中）。
較佳地，於其他具體實施例中，當R 1為第一聚亞烷基二醇單元R F時，該共軛物還包含一如本文所述之第二聚亞烷基二醇單元R S。較佳地，當R 1為第一聚乙二醇單元且該共軛物進一步包含一第二聚亞烷基二醇單元R S時，該第二聚亞烷基二醇單元為一如本文所述之第二聚乙二醇單元。
應當理解的是，當提到亞烷基二醇次單元，特別是乙二醇次單元時，並取決於上下文，次單元的數量可表示平均數，例如，當涉及一組共軛物或中間化合物時，並使用多分散聚亞烷基二醇，特別是多分散聚乙二醇。 「 L 」：連接子
本發明提供共軛物，其中如本文所述之受體結合分子與喜樹鹼分子部分連接。根據本發明，該受體結合分子可透過基團Y以及透過連接子L的共價連接而連接至喜樹鹼分子部分。如本文所用，「連接子」L為能夠連接基團Y的任何化學分子部分（例如NH）至另一分子部分，例如喜樹鹼分子部分。就此而言，再次參考本文所述之式（I）： （I）， 因此，喜樹鹼分子部分C可透過連接子L連接至Y。於式（I）中，RBM、 、V、X、Y、R 1、L、C、m以及n如本文所定義。連接子L用於連接Y與喜樹鹼分子部分（C）。連接子L為能夠將Y連接至喜樹鹼分子部分C的任何化學分子部分。具體而言，連接子L透過共價鍵將Y連接至喜樹鹼分子部分C。連接子試劑為可用於連接喜樹鹼分子部分C與Y以形成式（I）之共軛物的雙功能或多功能分子部分。「連接子試劑」、「交聯試劑」、「衍生自交聯試劑的連接子」以及「連接子」等詞在整個本發明中可互換使用。
連接子可能易於切割（可切割連接子），例如酶促切割、酸誘導切割、光誘導切割和雙硫鍵切割。酶促裂解包括，但不限於，蛋白酶誘導的裂解、胜肽酶誘導的裂解、酯酶誘導的裂解、糖苷酶誘導的裂解、磷酸酶誘導的裂解，以及硫酸酯酶誘導的裂解，較佳為在喜樹鹼分子部分及/或受體結合分子保持活性的條件下。或者，連接子可基本上抗切割（例如，穩定連接子或不可切割連接子）。於某些方面，連接子可為預帶電連接子、親水連接子、基於PEG的連接子或基於二羧酸的連接子。因此，於本文公開之任何一種抗體藥物共軛物的一些具體實施例中，該連接子（L）選自由下列所組成之群組：可切割連接子、不可切割連接子、親水連接子、基於PEG的連接子、預帶電連接子、胜肽連接子，以及基於二羧酸的連接子。較佳地，該連接子L為可裂解的連接子。於某些具體實施例中，該連接子L為不可切割的連接子。
較佳地，如本文所述，該連接子L為可切割的。於某些具體實施例中，L為易受酶裂解影響的連接子。於某些具體實施例中，L為酸不穩定連接子、光不穩定連接子、胜肽酶可切割連接子、蛋白酶可切割連接子、酯酶可切割連接子、糖苷酶可切割連接子、磷酸酶可切割連接子、硫酸酯酶可切割連接子、雙硫鍵可還原連接子、親水連接體、預帶電連接體、基於PEG的連接子，或基於二羧酸的連接子。較佳地，該連接子L可被蛋白酶、葡萄醣醛酸酶、硫酸酯酶、磷酸酶、酯酶，或透過雙硫化物還原切割。較佳地，該連接子為胜肽酶可切割的連接子。其他較佳的連接子可被蛋白酶切割。
不可裂解連接子為任何能夠以穩定、共價方式將喜樹鹼分子部分連接至Y的化學分子部分，且不屬於本文列出的可裂解連接子類別。因此，不可切割的連接子基本上抵抗酸誘導的切割、光誘導裂解、胜肽酶誘導裂解、蛋白酶誘導的裂解、糖苷酶誘導的裂解、磷酸酶誘導的裂解、酯酶誘導的裂解，以及雙硫鍵裂解。此外，不可裂解係指連接子中或與連接子相鄰的化學鍵承受由酸、光不穩定裂解劑、胜肽酶、蛋白酶、糖苷酶、磷酸酶、酯酶誘導的裂解的能力，或在喜樹鹼分子部分或受體結合分子不失去其活性的條件下承受裂解二硫鍵的化學或生理化合物。
酸不穩定連接子為在酸性pH下可切割的連接子。例如，某些細胞內隔室，如核內體與溶酶體，具有酸性pH（pH 4-5），並提供適合裂解酸不穩定連接子的條件。
一些連接子可被胜肽酶切割，亦即胜肽酶可切割連接子。於此方面，某些胜肽很容易在細胞內或細胞外被切割，參見例如Trout等人，79 Proc. Natl.Acad. Sci. USA，626-629（1982年）以及Umemoto等人，43 Int. J. Cancer，677-684（1989年）。胜肽由α-胺基酸與胜肽鍵所組成，胜肽鍵在化學上為一個胺基酸的羧酸鹽與第二個胺基酸的胺基之間的醯胺鍵。
一些連接子可被酯酶切割，亦即酯酶可切割連接子。於此方面，某些酯可被存在於細胞內部或外部的酯酶裂解。酯為由羧酸及醇縮合形成的。簡單酯為以簡單醇生成的酯，例如脂肪醇、小環醇，以及小芳香醇。
預帶電連接子源自帶電交聯劑，在摻入抗體藥物共軛物後保留其電荷。可在美國專利公開號US 2009/0274713中找到預充電連接子的示例。
較佳地，如本文所述，連接子L為可切割的。作為說明性實施例，連接子可被蛋白酶、葡醣醛酸糖苷酶、硫酸酯酶、磷酸酶、酯酶或雙硫化物還原切割。較佳地，連接子L可被蛋白酶切割。更佳地，連接子可被組織蛋白酶切割，例如特別是組織蛋白酶B。連接子可包含二胜肽分子部分，例如纈胺酸-瓜胺酸分子部分或纈胺酸-丙胺酸分子部分，其可被組織蛋白酶（如組織蛋白酶B）切割。因此，於某些具體實施例中，該連接子包含纈胺酸-瓜胺酸分子部分。於某些具體實施例中，該連接子包含纈胺酸-丙胺酸分子部分。該連接子可包含切割位點。「切割位點」乙詞可指被酶識別然後切割的化學分子部分，例如透過水解的方式。作為說明性實施例，切割位點為一胺基酸序列，其被蛋白酶或胜肽酶識別，並被該蛋白酶或胜肽酶水解。於某些具體實施例中，切割位點為二胜肽。於某些具體實施例中，切割位點為纈胺酸-瓜胺酸分子部分。於某些具體實施例中，切割位點是纈胺酸-丙胺酸分子部分。 第二間隔單元
於較佳具體實施例中，該連接子（L）包含結合至-Y-的第二間隔單元-A-。該第二個間隔單元用於將-Y-連接至該連接子的另一部分（如果存在），或連接至喜樹鹼分子部分（-C）。如本領域技術人員容易理解的，這取決於該連接子的另一部分是否存在。該第二個間隔單元（-A-）可為任何化學基團或分子部分，它能夠將-Y-連接至連接子的另一部分（如果存在），或連接至喜樹鹼分子部分（-C），這取決於該連接子的另一部分存在與否。於此方面，如本文所述，-Y-鍵合至該第二間隔單元（-A-）。該第二間隔單元（-A-）可包含或可為能夠與連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）形成化學鍵的官能基團。同樣地，這取決於該連接子的另一部分是否存在。較佳地，能夠與連接子的另一部分或與喜樹鹼分子部分（-C）形成化學鍵的官能基團為羰基，其描述為例如 或-C(O)-。
該第二間隔基單元可為本領域技術人員已知的任何間隔基，例如直鏈或支鏈的基於烴的分子部分。第二間隔單元也可包含環狀分子部分，例如但不限於芳香族分子部分。若該第二間隔單元為基於烴的分子部分，則該第二間隔分子部分的主鏈可僅包含碳原子但也可包含雜原子例如氧（O）、氮（N）或硫（S）原子，及/或者可包含羰基(C=O)。該第二間隔單元可包含或者可為例如(C 1-C 20)碳原子鏈。在基於烴的第二間隔單元的典型具體實施例中，間隔分子部分包含1至約150個、1至約100個、1至約75個、1至約50個、或1至約40個、或1至約30個、或1至約20個，包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18，以及19個主鏈原子。本領域技術人員知道如何選擇合適的第二間隔單元。
於某些具體實施例中，該第二間隔單元（-A-），當存在時，選自*-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #、*-(C 3-C 8)碳環-C(O)- #、*-亞芳基-C(O)- #、*-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-C(O)- #、*-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #、*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環-C(O)- #、*-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #、*-(C 3-C 8)雜環-C(O)- #、*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-C(O)- #，以及*-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，這取決於該連接子的另一部分是否存在。較佳地，該第二間隔單元（-A-），當存在時，選自*-(C 3-C 8)碳環-C(O)- #、*-亞芳基-C(O)- #，以及*-(C 3-C 8)雜環-C(O)- #；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於其他具體實施例中，該第二間隔單元（-A-），當存在時，可以選自由下列所組成之群組：*-(C 1-C 10)亞烷基- #、*-(C 3-C 8)碳環- #、*-亞芳基- #、*-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基- #、*-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基- #、*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環- #、*-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基- #、*-(C 3-C 8)雜環- #、*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環- #，以及*-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基- #；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。較佳地，第二間隔單元（-A-），如果存在，可以選自*-(C 3-C 8)碳環- #、*-亞芳基- #，以及*-(C 3-C 8)雜環- #；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
較佳地，該第二間隔單元-A-為 ，其中 為五元或六元碳環；*表示-Y-的連接點；且 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。碳環可為芳香族的或非芳香族的。較佳地，該第二間隔單元-A-為 ，其中 為包含1、2，或3個獨立地選自由N、O以及S所組成之群組的雜原子的五元或六元雜環；*表示-Y-的連接點；且 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。雜環可為芳香族的或非芳香族的。
更佳地， 選自由下列所組成之群組： 、 ，以及 ，其中A、B、C以及D各自獨立地選自N（氮）以及C-H；較佳地，A、B、C以及D中的至少一個為C-H；更佳地，A、B、C以及D中的至少兩個為C-H；還更佳地，A、B、C以及D中的至少三個為C-H，甚至更佳地，A、B、C以及D中的每一個為C-H；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。還更佳地， 為 或 ，其中A、B、C以及D各自獨立地選自N（氮）以及C-H；較佳地，A、B、C以及D中的至少一個為C-H；更佳地，A、B、C以及D中的至少兩個為C-H；還更佳地，A、B、C以及D中的至少三個為C-H，甚至更佳地，A、B、C以及D中的每一個為C-H；其中*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。甚至更佳地， 為 ，其中A、B、C以及D各自獨立地選自N（氮）以及C-H；較佳地，A、B、C以及D中的至少一個為C-H；更佳地，A、B、C以及D中的至少兩個為C-H；還更佳地，A、B、C以及D中的至少三個為C-H，甚至更佳地，A、B、C以及D中的每一個為C-H；其中*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。在非常佳的具體實施例中，該第二個間隔單元A為 ，其中*表示與-Y-的連接點；且 #表示連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於其他具體實施例中，該第二間隔單元（-A-）可為 ；且m及n各自獨立地為整數，例如0至20、0至15、1至10、1至8、1至6、1至4、1至3、1至2，或1，較佳地，m為1且n為1；*表示-Y-的位置， #表示與連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。這樣的第二間隔單元可選擇性地被取代，例如具有一個或兩個(C 1-C 8)烷基，特別是在與星號（*）相鄰的碳上。 基團 Z
於較佳具體實施例中，該第二間隔單元-A-為一基團Z，該基團Z具有以下結構： ， 其中： L P為一並行的連接子單元； R S各自獨立地為一第二聚亞烷基二醇單元； M各自獨立地為一結合R S與L P的化學鍵或分子部分； s*為1至4的整數；以及 該波浪線表示與-Y-及該連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
如公式 所示，該第二聚亞烷基二醇單元R S透過合適的分子部分M鍵合至該並行的連接子單元L P。於某些具體實施例中，M為一化學鍵。於某些具體實施例中，M可為能夠將一聚亞烷基二醇單元與該並行的連接子單元L P結合的任何分子部分。作為說明性實施例，M可各自獨立地選自由下列所組成之群組：-NH-、-O-、S、-C(O)-O-、-C(O)-NH-以及-(C 1-C 10)亞烷基。較佳地，M各自獨立地選自由下列所組成之群組：-NH-、-O-以及-S-。更佳地，每個M為-O-。
整數s*可具有1至4的範圍。較佳地，整數s*具有1至3的範圍。更佳地，整數s*為1或2。甚至更佳地，整數s*為1。整數s*表示連接至該並行的連接子單元L P的基團-M-R S的數量。
該並行的連接子單元（L P）用於將-Y-連接至該連接子（L）的另一部分，並透過M連接至一個或多個第二聚亞烷基二醇單元，如整數s*所示。因此，當存在時，L P可為任何化學基團或分子部分，其能夠將-Y-連接至該連接子的另一部分並經由M連接至一第二聚亞烷基二醇單元。或者，該並行的連接子單元（L P）可將Y連接至喜樹鹼分子部分（C），如果不存在該連接子的其他部分，並透過M連接至該第二聚亞烷基二醇單元。於此方面，如本文所述，Y鍵合至該並行的連接子單元（L P）。該並行的連接子單元（L P）可包含或可為能夠與連接子（L）的另一部分或喜樹鹼分子部分（C）形成化學鍵的官能基團，這取決於該連接子(L)的另一部分是否存在。較佳地，能夠與連接子（L）的另一部分或與喜樹鹼分子部分（-C）形成化學鍵的官能基團為羰基，其描述為例如， ，或-C(O)-，或-(C=O)-。
該並行的連接子單元（L P）可為例如直鏈或支鏈的烴基部分。該並行的連接子單元（L P）也可包含環狀部分。如果該並行的連接子單元（L P）為基於烴基的分子部分，則該第二間隔部分的主鏈可以僅包含碳原子，但也可包含雜原子，例如氧（O）、氮（N）或硫（S）原子，及/或可包含羰基（C=O）。該並行的連接子單元（L P）可包含或者可為例如(C 1-C 20)碳原子鏈。在基於烴的並行的連接子單元（L P）的典型具體實施例中，連接部分包含1至約150、1至約100、1至約75、1至約50、或1至約40、或1至約30，或1至約20，包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18，以及19個主鏈原子。該並行的連接子單元L P能夠透過M與一第二聚亞烷基二醇單元R S結合。本領域技術人員知道選擇合適的並行的連接子單元（L P）。
於某些具體實施例中，基團Z ，當存在時，選自由下列所組成之群組：*-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1至3個，更佳為1或2個，還更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 3-C 8)碳環-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-亞芳基-C(O)- #取代，各自獨立地被1至4個，較佳為1個或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環-C(O)- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 3-C 8)雜環-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；以及*-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-C(O)- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1個或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。較佳地，基團Z ，當存在時，選自由下列所組成之群組：*-(C 3-C 8)碳環-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1個或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-亞芳基-C(O)- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；以及*-(C 3-C 8)雜環-C(O)- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於其他具體實施例中，基團Z ，當存在時，可選自由下列所組成之群組：*-(C 1-C 10)亞烷基- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1至3個，更佳為1或2個，還更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 3-C 8)碳環- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*-亞芳基- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 3-C 8)雜環- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；以及*-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。較佳地，基團Z ，當存在時，可選自由下列所組成之群組：*-(C 3-C 8)碳環- #，各自獨立地被1至4個，較佳為1個或2個，更佳為1個基團-M-R S取代；*-亞芳基- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；以及*-(C 3-C 8)雜環- #，各自獨立地被1至4個、較佳為1或2個、更佳為1個基團-M-R S取代；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於某些具體實施例中，基團Z 中的L P可為一個或多個胺基酸，其包含合適的分子部分M以便可連接一第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，s*為1。該胺基酸可為天然或非天然胺基酸。例如，該胺基酸可選自由下列所組成之群組：離胺酸、麩胺酸、天門冬胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸，硒代半胱胺酸、甘胺酸，以及高丙胺酸。特別地，該胺基酸可選自由下列所組成之群組：酪胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、麩胺酸、離胺酸，以及甘胺酸。其他合適的分子部分L P可選自由下列所組成之群組：胺基醇、胺基醛，以及多胺。例如在PCT專利公開號WO 2015/057699中描述用於連接聚亞烷基二醇單元的合適的胺基酸及其他基團。
較佳地，基團Z 為 ，其中 為五元或六元碳環；該碳環可為芳香族或非芳香族；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；s*為1至3的整數，較佳地，s*為1或2，更佳地，s*為1；*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
更佳地， 選自由下列所組成之群組： 、 ，以及 ，其中A、B、C以及D中的每一個為C-H；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚（亞烷基）二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或者於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S替換；*表示-Y-的連接點；且 #表示與連接子（例如，胺基酸單元-Ww-）的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。還更佳地， 為 或 ，其中A、B、C以及D中的每一個為C-H；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或者於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S替換；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。還更佳地， 為 ，其中A、B、C以及D中的每一個為C-H；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或者於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S替換；*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。在非常佳的具體實施例中，基團Z 為 ，其中R S為如本文所述之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，R S為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M如本文所述；較佳地，M為-O-；*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於某些具體實施例中，基團Z 為 ，其中 為包含1或2個獨立地選自由N、O或S所組成之群組的雜原子的五元或六元雜環；該雜環可為芳香族或非芳香族環；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；s*為1或2（特別是六元雜環的情況下），較佳地，s*為1（特別是，在五元或六元雜環的情況下）；*表示-Y-的連接點； #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於某些具體實施例中， 選自由下列所組成之群組： 、 ，以及 ，其中A、B、C以及D中的三個獨立地為C-H，且A、B、C以及D中的一個獨立地為N；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地為如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S代替；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。於某些具體實施例中， 為 或 ，其中A、B、C以及D中的三個獨立地為C-H，且A、B、C以及D中的一個獨立地為N；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S替換；*表示-Y-的連接點； #表示與連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。於某些具體實施例中， 為 ，其中A、B、C以及D中的三個獨立地為C-H，並且A、B、C以及D中的一個獨立地為N；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或者於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S替換；*表示-Y-的連接點； #表示與連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。
於某些具體實施例中， 選自由下列所組成之群組： 、 ，以及 ，其中A、B、C以及D中的兩個獨立地為C-H，且A、B、C以及D中的兩個獨立地為N；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳為，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或於一C-H中，當s*為1時，H被替換為R S；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。於某些具體實施例中， 為 或 ，其中A、B、C以及D中的兩個獨立地為C-H，且A、B、C以及D中的兩個獨立地為N；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或者於一C-H中，當s*為1時，H被替換為-M-R S；*表示-Y-的連接點；以及 #表示連接子的另一部分（當存在時）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。於某些具體實施例中， 為 ，其中A、B、C以及D中的兩個獨立地為C-H，且A、B、C以及D中的兩個獨立地為N；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；整數s*為1或2，較佳地，s*為1；如 所示，在兩個C-H中，當s*為2時，H獨立地被-M-R S替換，或於一C-H中，當s*為1時，H被-M-R S替換；*表示-Y-的連接點； #表示與連接子的另一部分（如果存在）或喜樹鹼分子部分（-C）的連接點，取決於該連接子的另一部分是否存在。 第二聚亞烷基二醇單元 R S
如本文所用，「第二聚亞烷基二醇單元」乙詞係指結合至並行的連接子單元（L P）的聚亞烷基二醇單元，其透過M存在於基團Z中。該第二聚亞烷基二醇單元包含至少一個亞烷基二醇次單元。較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S包含一個或多個具有以下結構的亞烷基二醇次單元： 。更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S包含一個或多個具有以下結構的亞烷基二醇次單元： 。因此，該第二聚亞烷基二醇單元R S可為聚（丁二醇）單元、聚（丙二醇）單元或聚（乙二醇）單元。還更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元包含一個或多個具有以下結構的亞烷基二醇次單元： 。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S各自獨立地包含1至100個如本文所述之亞烷基二醇次單元。更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S各自獨立地包含2至50個亞烷基二醇次單元。還更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元各自獨立地包含3至45個如本文所述之亞烷基二醇次單元。還更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元各自獨立地包含4至40個如本文所述之亞烷基二醇次單元。還更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元各自獨立地包含6至35個如本文所述之亞烷基二醇次單元。甚至更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元各自獨立地包含8至30個如本文所述之亞烷基二醇次單元。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S各自獨立地包含1至20個如本文所述之亞烷基二醇次單元。更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S各自獨立地包含2至12個亞烷基二醇次單元。還更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元各自獨立地包含3至11個如本文所述之亞烷基二醇次單元。
該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至100個，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元的聚亞烷基二醇單元： 。較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至100個，較佳為2至50個，更佳為3至45個，更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元的聚亞烷基二醇單元： 。更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至100個、更佳為2至50個，還更佳為3至45個，還更佳為4至40，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元的聚亞烷基二醇單元： 。在非常佳的具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至100個，較佳為2至50個，更佳為3至45個，還更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元的聚乙二醇單元： 。
該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至20個，較佳為2至12個，更佳為3至11個具有以下結構的次單元的聚亞烷基二醇單元： 。較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至20個、較佳為2至12個、更佳為3至11個具有以下結構的次單元的聚亞烷基二醇單元： 。更佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至20個、更佳為2至12個、還更佳為3至11個具有以下結構的次單元的聚亞烷基二醇單元： 。在非常佳的具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至20個、較佳為2至12個、更佳為3至11個具有以下結構的次單元的聚乙二醇單元： 。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S各自獨立地為， ， 其中： 表示M在基團Z中的位置； K S為H或一第二封端基團；較佳地，K S選自由下列所組成之群組：-H（氫）、-PO 3H、-（C 1-C 10）烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；更佳地，K S為H；以及 p為1至100之間的整數。
當於本文中提及時，「第二封端基團」可為能夠充當第二聚亞烷基二醇單元的末端基團的任何分子部分。可用於本發明之第二封端基團的實例包括-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2。於某些具體實施例中，該第一封端基團可為-(C 1-C 10)烷基，尤其為甲基。
較佳地，K S為H（氫）。
整數p表示第二聚亞烷基二醇單元中的重複單元 的數目。整數p的範圍可為1至100。較佳地，p為2至50的範圍內。更佳地，p為3至45的範圍內。更佳地，p為4至40的範圍內。還更佳地，p為6至35的範圍內。甚至更佳地，p為8至30的範圍內。於較佳具體實施例中，p為12或大約12。甚至更佳地，p為16至30的範圍內。甚至更佳地，p為20至28的範圍內。甚至更佳地，p為22、23、24、25或26。甚至更佳地，p為23、24或25。於較佳具體實施例中，p為24或約24。較佳地，該重複單元為 。更佳地，該重複單元為 。
在第二聚亞烷基二醇單元中，整數p可為1至20的範圍內。較佳地，p為2至12的範圍內。更佳地，p為3至11的範圍內。較佳地，該重複單元為 。更佳地，重複單元為 。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S包含乙二醇次單元，每個次單元具有以下結構： ，亦即，該次單元表示為「乙二醇次單元」。因此，較佳的第二聚亞烷基二醇單元為第二聚乙二醇單元。該第二聚乙二醇單元包含至少一個乙二醇次單元。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為一第二聚乙二醇單元，其包含1至100個，較佳為2至50個，更佳為3至45個，更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個具有以下結構的次單元： 。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為包含1至20個、較佳為2至12個、更佳為3至11個具有以下結構的次單元的第二聚乙二醇單元： 。
較佳地，該第二聚亞烷基二醇單元R S可各自獨立地為具有以下結構的第二聚乙二醇單元： ， 其中： 表示M在基團Z中的位置； K S為H（氫）或一本文所述之第二封端基團；較佳地，K S選自由下列所組成之群組：-H（氫）、-PO 3H、-（C 1-C 10）烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；更佳地，K S為H；以及 p為1至100之間的整數。
整數p表示該第二聚乙二醇單元中的重複單元 的數目。整數p的範圍可為1至100。較佳地，p為2至50的範圍內。更佳地，p為3至45的範圍內。還更佳地，p為4至40的範圍內。還更佳地，p為6至35的範圍內。甚至更佳地，p為8至30的範圍內。於較佳具體實施例中，p為12或大約12。甚至更佳地，p為16至30的範圍內。甚至更佳地，p為20至28的範圍內。甚至更佳地，p為22、23、24、25或26。甚至更佳地，p為23、24或25。於較佳具體實施例中，p為24或約24。
在該第二聚乙二醇單元中，整數p可為1至20。較佳地，p為2至12的範圍內。更佳地，p為3至11的範圍內。
通常，在該第二聚亞烷基二醇單元R F中（較佳為第二聚乙二醇單元），可使用多分散聚亞烷基二醇（較佳為多分散聚乙二醇）、單分散聚亞烷基二醇（較佳為單分散聚乙二醇），以及離散聚亞烷基二醇（較佳為離散的聚乙二醇）。多分散聚亞烷基二醇（較佳為多分散聚乙二醇）為大小及分子量的異質混合物，而單分散聚亞烷基二醇（較佳為單分散聚乙二醇）通常從異質混合物中純化，因此提供單一的鏈長及分子量。較佳的第二聚亞烷基二醇單元為不連續的聚亞烷基二醇（較佳為不連續的聚乙二醇），亦即以逐步方式而非透過聚合過程合成的化合物。離散的聚亞烷基二醇（較佳為離散的聚乙二醇）提供具有定義及特定鏈長的單個分子。
本文提供之第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）包含一個或多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）。聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可連接在一起，例如，以線性、支化或星形構型。選擇性地，至少一個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可在一端被衍生化以共價連接至基團Z中的M。
該第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二個聚乙二醇單元）將在基團Z中的M處連接至共軛物（或其中間體）。該第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）的另一末端（或多個末端）將是游離的且不受束縛的，並可採取氫、甲氧基、羧酸、醇或其他合適的官能基團的形式，例如，如本文所述之任何第二封端基團。甲氧基、羧酸、醇或其他合適的官能基團作為第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）的末端聚亞烷基二醇次單元（較佳為聚乙二醇次單元）的帽。不受束縛的係指該第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二個聚乙二醇單元）不會在那個不受束縛的位點連接喜樹鹼分子部分（C）、受體結合分子，或連接喜樹鹼分子部分及/或受體結合分子的連接子（L）的組成分。對於其中該第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）包含多於一個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）的那些實施例，多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可為相同或不同的化學分子部分（例如，聚亞烷基二醇，特別是聚乙二醇，具有不同的分子量或次單元數）。多個第二聚亞烷基二醇鏈（較佳為第二聚乙二醇鏈）在單個連接位點處連接至基團Z中的M。技術人員將理解，第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）除了包含重複的聚亞烷基二醇次單元（較佳為聚乙二醇次單元）之外還可以含有非聚亞烷基二醇材料（較佳為非聚乙二醇材料），例如，以促進多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）彼此共軛或促進共軛至基團Z中的M。非聚亞烷基二醇材料（較佳為非聚亞烷基二醇材料）係指第二個聚亞烷基二醇單元中的原子（較佳為第二聚乙二醇單元）不是重複的亞烷基二醇次單元（較佳為-CH 2CH 2O-次單元）的一部分。於本文提供的具體實施例中，第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）可包含透過非聚亞烷基二醇（較佳為非聚乙二醇）元件彼此連接的兩個單體聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）。於本文提供的其他具體實施例中，第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）可包含連接至中心核的兩個線性聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈），該中心核連接至基團Z中的M（亦即，聚亞烷基二醇單元（較佳為聚乙二醇單元）為支化的）。
有許多本領域技術人員可用的聚亞烷基二醇（較佳為聚乙二醇）連接方法，[參見，例如，EP 0 401 384（將PEG與G-CSF共軛）；美國專利號5,757,078（EPO胜肽的聚乙二醇化）；美國專利號5,672,662（聚乙二醇）以及被丙酸或丁酸單取代的相關聚合物及其用於生物技術應用的功能性衍生物）；美國專利號6,077,939（胜肽的N-末端alpha-碳的聚乙二醇化）；以及Veronese（2001年）Biomaterials 22:405-417（關於胜肽與蛋白質聚乙二醇化的評論文章）]。
例如，聚亞烷基二醇（較佳為聚乙二醇）可透過反應基團共價結合至胺基酸殘基上。反應性基團為可與活化的聚亞烷基二醇分子（較佳為聚乙二醇分子）結合的那些基團（例如，游離胺基或羧基）。例如，N-端胺基酸殘基以及離胺酸（K）殘基具有游離胺基；C-端胺基酸殘基具有游離羧基。巰基（例如，在半胱胺酸殘基上發現的）亦可作為連接聚亞烷基二醇（較佳為聚乙二醇）的反應基團。此外，還描述了在多胜肽的C端特異性引入活化基團（例如，醯肼、醛以及芳香胺基）的酶輔助方法（參見Schwarz等人（1990年）Methods Enzymol. 184:160；Rose 等人（1991年）Bioconjugate Chem. 2:154；以及Gaertner等人（1994年）J. Biol. Chem. 269:7224）。
於某些具體實施例中，構成第二聚亞烷基二醇單元（較佳為第二聚乙二醇單元）的至少一個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）可被官能化，使得它可以連接至基團Z中的M，或當M為一化學鍵合時連接至基團Z中的並行的連接子單元L P。功能化可為，例如，透過胺、硫醇、NHS酯、炔烴、疊氮化物、羰基或其他官能基團。聚亞烷基二醇單元（較佳為聚乙二醇單元）可以進一步包含非聚亞烷基二醇材料（較佳為聚乙二醇材料，亦即，不包含-CH 2CH 2O-的材料），當M為一化學鍵時，以促進與Z基團中的M或並行的連接子單元的共軛，或促進兩個或多個聚亞烷基二醇鏈（較佳為聚乙二醇鏈）的共軛。
於較佳具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元，更佳為第二聚乙二醇單元，直接連接至基團Z中的M。於這些具體實施例中，第二聚亞烷基二醇單元，較佳為第二聚亞烷基二醇單元，不包含用於連接至基團Z中的M的官能基團，亦即M直接鍵合至該第二聚亞烷基二醇單元的碳原子，更佳為鍵合至該第二個聚乙二醇單元的CH 2。較佳地，於這些實施例的任一個中，M非為一化學鍵。
於一組具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包含至少一個亞烷基二醇次單元，較佳為至少2個亞烷基二醇次單元，更佳為至少3個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少4個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少6個亞烷基二醇次單元，甚至更佳為至少8個亞烷基二醇次單元。於某些此類具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包含不超過約100個亞烷基二醇次單元，較佳為不超過約50個亞烷基二醇單元，更佳為不超過約45個亞烷基二醇次單元，更佳為不超過約40個亞烷基二醇次單元，更佳為不超過約35個次單元，甚至更佳為不超過約30個亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第二聚亞烷基二醇單元為第二聚乙二醇單元。
於一組具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包含一個或多個線性聚亞烷基二醇鏈，每個鏈具有至少一個亞烷基二醇次單元，較佳為至少2個亞烷基二醇次單元，更佳為至少3個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少4個亞烷基二醇次單元，還更佳為至少6個亞烷基二醇次單元，甚至更佳為至少8個亞烷基二醇次單元。於較佳具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包括總共至少1個亞烷基二醇次單元，較佳為至少2個亞烷基二醇次單元，更佳為至少3個，還更佳為至少4個，還更佳為至少6個，或甚至更佳為至少8個亞烷基二醇次單元。於某些此類實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包含不超過約100個亞烷基二醇次單元的組合總數，較佳為不超過約50個亞烷基二醇次單元的組合總數，更佳為不超過約45個次單元的組合總數，還更佳為不超過約40個次單元的組合總數，還更佳為不超過約35個次單元的組合總數，甚至更佳為不超過約30個次單元的組合總數。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第二聚亞烷基二醇單元為包含一個或多個直鏈聚乙二醇鏈的第二聚乙二醇單元。
於另一組具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包含1至100、較佳為2至50、更佳為3至45，還更佳為4至40，還更佳為6至35，甚至更佳為8至30的組合總數的亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，第二聚亞烷基二醇單元為第二聚乙二醇單元。
於另一組具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元包含一個或多個直鏈聚亞烷基二醇鏈，其組合總數為1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，還更佳為4至40，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個亞烷基二醇次單元。於這些具體實施例的任一個中，亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第二聚亞烷基二醇單元為包含一個或多個直鏈聚乙二醇鏈的第二聚乙二醇單元。
於另一組具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元為具有至少1個次單元、較佳為至少2個次單元、更佳為至少3個次單元，還更佳為至少6個次單元，甚至更佳為至少8個次單元的線性單一聚亞烷基二醇鏈。於這些具體實施例的任一個中，該亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些實施例的任一個中，該第二聚亞烷基二醇單元為第二聚乙二醇單元，其為線性單聚乙二醇鏈。可選擇性地，於這些實施例的任一個中，可以衍生線性單聚亞烷基二醇鏈。
於另一組具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元為具有1至100個、較佳為2至50個、更佳為3至45個、更佳為4至40個、更佳為6至35個、更佳為8個至30個亞烷基二醇次單元的線性單聚亞烷基二醇鏈。於這些具體實施例的任一個中，該亞烷基二醇次單元可為如本文所述之任何亞烷基二醇次單元。較佳地，於這些具體實施例的任一個中，每個亞烷基二醇次單元為具有以下結構的乙二醇次單元： 。較佳地，當每個亞烷基二醇次單元為乙二醇次單元時，於這些具體實施例的任一個中，該第二聚亞烷基二醇單元為第二聚乙二醇單元，其是線性單聚乙二醇鏈。可選擇性地，於這些實施例的任一個中，可以衍生線性單聚亞烷基二醇鏈。
於本文提供之任一具體實施例中，可作為第二聚亞烷基二醇單元，特別是作為第二聚乙二醇單元的示例性線性聚乙二醇單元如下： 其中波浪線表示基團Z中M的連接位點； R 20為PEG連接子單元；較佳地，R 20不存在；更佳地，M不為化學鍵； R 21為PEG封端單元（此處R 21也標記為「K S」）； R 22為PEG耦合單元（亦即用於將多個PEG次單元鏈共軛在一起； n獨立地選自1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，更佳為4至40，還更佳為6至35，甚至更佳為8至30； e為2至5； 每個n’獨立地選自1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，更佳為4至40個，還更佳為6至35個，甚至更佳為8至30個。於較佳具體實施例中，在聚乙二醇單元中存在至少1個、較佳為至少2個、更佳為至少3個、更佳為至少4個、更佳為至少6個、甚至更佳為至少8個乙二醇次單元。於某些具體實施例中，在聚乙二醇單元中具有不超過100個，較佳為不超過50個，更佳為不超過45個，更佳為不超過40個，更佳為不超過35個，甚至更佳為不超過30個乙二醇次單元。當R 20不存在時，一個（CH 2CH 2O）次單元直接與Z基團中的M結合；更佳地，於此類具體實施例中，M不為一化學鍵。
較佳地，該線性聚乙二醇單元為 ， 其中波浪線表示基團Z中M的連接位點；R 20、R 21（本文也表示為「K S」）以及n如本文所定義；更佳地，R 20不存在；還更佳地，M不為化學鍵。於較佳具體實施例中，n為12或大約12。於較佳具體實施例中，n為24或約24。較佳地，R 21為H。
該聚乙二醇連接單元R 20，當存在時，為第二聚乙二醇單元的一部分並用於將第二聚乙二醇單元連接至M。於這些具體實施例中，較佳地，M不為一化學鍵且與第二聚乙二醇單元形成一化學鍵。於示例性具體實施例中，PEG連接單元R 20，當存在時，選自由下列所組成之群組：*-C(O)- #、*-S(O)- #、*-C(O)O- #、*-C(O)-(C 1-C 10)烷基- #、*-C(O)-(C 1-C 10)烷基-O- #、*-C(O)-(C 1-C 10)烷基-CO 2- #，*-C(O)-(C 1-C 10)烷基-NH- #，*-C(O)-(C 1-C 10)烷基-S- #；*-C(O)-(C 1-C 10)烷基-C(O)-NH- #；*-C(O)-(C 1-C 10)烷基-NH-C(O)- #；-(C 1-C 10)烷基- #，*-(C 1-C 10)烷基-O- #，*-(C 1-C 10)烷基-C(O)- #，*-(C 1-C 10)烷基-C(O)O- #，*-(C 1-C 10)烷基-NH- #，*-(C 1-C 10)烷基-S- #，*-(C 1-C 10)烷基-C(O)-NH- #，*-(C 1-C 10)烷基-NH-C(O)- #，以及*-CH 2-CH 2SO 2-(C 1-C 10)烷基- #，*-CH 2-C(O)-(C 1-C 10)烷基- #；其中*表示與基團Z中M的連接點， #表示與乙二醇單元的連接點。
該PEG共軛單元R 22，當存在時，為第二聚乙二醇單元的一部分且為非PEG材料，其作用為連接兩條或多條重複-CH 2CH 2O-次單元鏈。於示例性具體實施例中，PEG共軛單元R 22，當存在時，獨立地選自由下列所組成之群組：*-(C 1-C 10)烷基-C(O)-NH- #，*-(C 1-C 10)烷基-NH-C(O)- #，*-(C 2-C 10)烷基-NH- #，*-(C 2-C 10)烷基-O- #，*-(C 1-C 10)烷基-S- #，或*-(C 2-C 10)烷基-NH- #；其中*表示與乙二醇次單元的氧原子的連接點， #表示與另一個乙二醇次單元的碳原子的連接點。
基團R 21，於本文中也表示為「K S」，於示例性具體實施例中為H（氫），或者可為封端基團，如本文所述；較佳地，R 21獨立地選自由以下所組成之群組：-H(氫)、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2。於某些具體實施例中，R 21可為-(C 1-C 10)烷基，特別是甲基。更佳地，R 21為H。
可作為本文提供的任一具體實施例中的第二聚亞烷基二醇單元的示例性直鏈第二聚乙二醇單元如下。 ； ； ； ；以及 ； 其中波浪線表示基團Z中M的連接位點；較佳地，M不為一化學鍵；每個n為1至100，較佳為2至50，更佳為3至45，還更佳為4至40，還更佳為6至35，甚至更佳為8至30。於某些具體實施例中，n約為12。於某些具體實施例中，n約為24。
於某些具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元為約300道爾頓至約5千道爾頓；約300道爾頓至約4千道爾頓；約300道爾頓至約3千道爾頓；約300道爾頓至約2千道爾頓；或約300道爾頓至約1千道爾頓。於某些此類方面，該第二聚亞烷基二醇單元具有至少6個亞烷基二醇次單元或至少8個亞烷基二醇次單元。於某些此類方面，該第二聚亞烷基二醇單元可具有至少6個亞烷基二醇次單元或至少8個亞烷基二醇次單元但不超過100個亞烷基二醇次單元，較佳為不超過50個亞烷基二醇次單元。於某些具體實施例中，該第二聚亞烷基二醇單元為約300道爾頓至約5千道爾頓的第二聚乙二醇單元；約300道爾頓至約4千道爾頓；約300道爾頓至約3千道爾頓；約300道爾頓至約2千道爾頓；或約300道爾頓至約1千道爾頓。於某些此類方面，該第二聚乙二醇單元可具有至少6個乙二醇次單元或至少8個乙二醇次單元。於某些此類方面，該第二聚乙二醇單元可具有至少6個乙二醇次單元或至少8個乙二醇次單元但不超過100個乙二醇次單元，較佳為不超過50個乙二醇次單元。
於某些具體實施例中，當存在該第二聚亞烷基二醇單元R S時，在式（I）之共軛物中不存於其他亞烷基二醇次單元（亦即，沒有亞烷基二醇次單元存在於共軛物的任何其他組成分中，例如基團R 1中或如本文提供的連接子L的另一部分中）。於其他方面，當存在第二聚亞烷基二醇單元R S時，不超過8個、不超過7個、不超過6個、不超過5個、不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個其他亞烷基二醇次單元存在於式（I）之共軛物中（亦即，不超過8、7、6、5、4、3、2或1個其他亞烷基二醇次單元存在於共軛物的其他組成分中，例如，如本文所提供之基團R 1中或連接子L的另一部分中）。
較佳地，於其他具體實施例中，當存在該第二聚亞烷基二醇單元R S時，該共軛物還包含作為如本文所述之R 1的第一聚亞烷基二醇單元R F。較佳地，當R S為第二聚乙二醇單元且該共軛物還包含第一聚亞烷基二醇單元R F時，該第一聚亞烷基二醇單元為如本文所述之第一聚乙二醇單元。
應當理解的是，當提到亞烷基二醇次單元，特別是乙二醇次單元時，並取決於上下文，該次單元的數量可表示平均數，例如，當涉及一組共軛物或中間化合物時，並使用多分散聚亞烷基二醇，特別是多分散聚乙二醇。 連接子 *-A a-W w-B b- ##
於某些具體實施例中，該連接子L具有下式：*-A a-W w-B b- # #，其中：-A-為第二間隔單元，如本文所述；a為0或1；每個-W-獨立地為一個胺基酸；w獨立地為0至12的整數；-B-為第一間隔單元；b為0或1；*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分的連接點。此處，符號「Ww」或-「Ww-」等，即W與相關整數w的組合，也表示為「胺基酸單元」。例如WO 2004/010957A2中描述了合適的第二間隔單元、胺基酸單元以及第一間隔單元的實例。
在具有結構*-A a-W w-B b- ##的連接子中，該第二間隔單元用於將-Y-連接至胺基酸單元-Ww-。第二間隔單元（-A-）可為本文所述之任何第二間隔單元。當存在時，第二間隔單元（-A-）可為能夠將-Y-連接至胺基酸單元的任何化學基團或分子部分。或者，在不存在胺基酸單元的情況下，第二間隔單元可將-Y-連接至第一間隔單元。或者，在不存在第一間隔單元和胺基酸單元的情況下，第二間隔單元可將-Y-連接至喜樹鹼分子部分（-C）。於此方面，如本文所述，-Y-鍵合至第二間隔單元（-A-）。第二間隔單元（-A-）可包含或可為能夠與胺基酸單元（Ww-），或與第一間隔單元（-B-），或與喜樹鹼分子部分（-C）形成一化學鍵的官能基團，取決於是否存在胺基酸單元（-Ww-）及/或第一個間隔單元（-B-）。較佳地，能夠與胺基酸單元（-Ww-）形成一化學鍵的官能基團，特別是胺基酸單元的N端，或第一個間隔單元（-B-），或喜樹鹼分子部分（-C），為一羰基，其被描述為，例如， 或-C(O)-。與第二間隔單元相關聯的整數a可為0或1。較佳地，整數a為1。或者，於其他具體實施例中，第二間隔單元不存在（a＝0）。
在連接子*-A a-W w-B b- ##中，該第二間隔單元-A-（如果存在）可為本文所述之任何第二間隔單元。在連接子*-A a-W w-B b- ##的較佳具體實施例中，該第二間隔單元-A-，當存在時（a = 1），可為具有 結構的基團Z，其中 如本文所定義。因此，在較佳具體實施例中，該連接子（L）可具有 結構，其中L P、R S、s*、M、W、w、B以及b如本文所定義；*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
如果存在第一個間隔單元，則胺基酸單元（-Ww-）可將第二間隔單元A連接至第一個間隔單元B。或者，在第一個間隔單元不存在的情況下，胺基酸單元可將第二個間隔單元連接至喜樹鹼分子部分（C）。或者，在第二間隔單元不存在的情況下，胺基酸單元可將Y連接至第一間隔單元。或者，在第一間隔單元與第二間隔單元不存在的情況下，胺基酸單元可將Y連接至喜樹鹼分子部分。
胺基酸單元-W w-可為二胜肽（w = 2）、三胜肽（w = 3）、四胜肽（w = 4）、五胜肽（w = 5）、六胜肽（w = 6）、七胜肽（w = 7）、八胜肽（w = 8）、九胜肽（w = 9）、十胜肽（w = 10）、十一胜肽（w = 11）或十二胜肽（w = 12）。
於某些具體實施例中，該胺基酸單元可包含天然胺基酸。於某些具體實施例中，該胺基酸單元可包含非天然胺基酸。
於本文所述之任一具體實施例中，該胺基酸單元的每個胺基酸，除了非手性胺基酸（例如甘胺酸），可獨立地為L構型或D構型。較佳地，於本文描述的任何一個具體實施例中，該胺基酸單元的每個胺基酸，除了非手性胺基酸（例如甘胺酸）之外，為L構型（亦即，處於天然存在的構型）。
較佳地，當存在第二間隔單元（-A-）時，於本文所述之任一具體實施例中，該胺基酸單元-W w-的N端結合至第二間隔單元（A），更佳為透過該第二間隔單元的羰基。較佳地，於本文所述之任何一個具體實施例中，該胺基酸單元-W w-的C端結合至第一間隔單元（B），以防該第一間隔單元存在。或者，於本文所述之任一具體實施例中，該胺基酸單元-W w-的C端可結合喜樹鹼分子部分（-C），以防該第一個間隔單元不存在。於其他具體實施例中，當第一間隔單元（B）存在時，該胺基酸單元-W w-的N端可結合至第一間隔單元（B），且當第二間隔單元A存在時，C端可結合至第二間隔單元A。
於某些具體實施例中，w可為1或2。較佳地，該胺基酸單元W w為二胜肽（w＝2）。在二胜肽中，每個胺基酸獨立地可具有在方括號中表示的下式： 其中R 19為氫、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、芐基、對羥基芐基、-CH 2OH、-CH(OH)CH 3、-CH 2CH 2SCH 3、-CH 2CONH 2、-CH 2COOH、-CH 2CH 2CONH 2、-CH 2CH 2COOH、-(CH 2) 3NHC(=NH)NH 2、-(CH 2) 3NH 2、-(CH 2) 3NHCOCH 3、-(CH 2) 3NHCHO、-(CH 2) 4NHC(=NH)NH 2、-(CH 2) 4NH 2、-(CH 2) 4NHCOCH 3、-(CH 2) 4NHCHO、-(CH 2) 3NHCONH 2、-(CH 2) 4NHCONH 2、-CH 2CH 2CH(OH)CH 2NH 2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、環己基、 。
該胺基酸單元可被一種或多種酶進行酶切，包括，但不限於，腫瘤相關蛋白酶，較佳為組織蛋白酶，更佳為組織蛋白酶B，以釋放喜樹鹼分子部分（-C），於一具體實施例中，其在釋放後在體內質子化以提供游離的喜樹鹼分子部分（C）。說明性的-W w-單元由式（VII）表示。
因此，-W w-單元可為式（VII）的二胜肽： 其中R 20與R 21如下：
R 20 R 21
芐基 (CH 2) 4NH 2
甲基 (CH 2) 4NH 2
異丙基 (CH 2) 4NH 2
異丙基 (CH 2) 3NHCONH 2
芐基 (CH 2) 3NHCONH 2
異丁基 (CH 2) 3NHCONH 2
仲丁基 (CH 2) 3NHCONH 2
(CH 2) 3NHCONH 2
芐基 甲基；以及
芐基 (CH 2) 3NHC(=NH)NH 2
示例性胺基酸單元包括，但不限於，式（VII）的單元，其中：R 20為芐基且R 21為-(CH 2) 4NH 2(Phe-Lys)；R 20為異丙基且R 21為-(CH 2) 4NH 2(Val-Lys)；R 20為異丙基且R 21為-(CH 2) 3NHCONH 2(Val-Cit)。
可設計有用的-W w-單元並優化它們對特定酶（例如，腫瘤相關蛋白酶）的酶促切割的選擇性。於一具體實施例中，-W w-單元為由組織蛋白酶B、C及/或D或纖溶酶（「腫瘤相關蛋白酶」）催化所裂解的單元。較佳地，-W w-單元被組織蛋白酶B切割。可被蛋白酶切割的合適的連接子描述於例如，G.M. Dubowchik等人， 「 Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin from Internalizing Immunoconjugates ； Model Studies of Enzymatic Drug Release And Antigen-Specific In Vitro Anticancer Activity 」，Bioconjugate Chem.，Vol. 13，No. 4，2002，855-869；S.C. Jeffrey等人， 「 Dipeptide-based highly potent doxorubicin Antibody conjugate 」，Bioorg. Med. Chem. Lett. 16（2006），358-362；以及M.S. Kung Sutherland等人， 「 SGN-CD33A: A novel CD33-targetingAntibody—drug conjugate using A pyrrolobenzodiazepine dimer is Active in models of drug-resistant AML 」，Blood，2013年8月22日，第122卷，第8期，1455-1463頁。
當R 19、R 20或R 21不為氫時，R 19、R 20或R 21所連接的碳原子為手性的。R 19、R 20或R 21連接的每個碳原子可獨立地為（S）或（R）構型。較佳地，R 19、R 20或R 21所連接的每個碳原子在手性時為（S）構型。
於一較佳的具體實施例中，該胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。於另一個較佳的具體實施例中，該胺基酸單元為纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。於另一個較佳的具體實施例中，該胺基酸單元為丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA）。於另一個較佳的具體實施例中，該胺基酸單元為苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。此類連接子為可被蛋白酶（例如組織蛋白酶B）切割的連接子的說明性實例。
貫穿本說明書本文使用之胜肽的符號遵循常規命名法。因此，胜肽的N端寫在左邊，胜肽的C端寫在右邊。作為一說明性但非限制性的實例，在纈胺酸-瓜胺酸二胜肽（亦即，Val-Cit或VC）中，纈胺酸具有N端，而瓜胺酸具有C端。較佳地，於本文所述之任一具體實施例中，當存在第二間隔單元（-A-）時，胜肽的N端，例如，二胜肽的（作為說明性非限制性實例：Val-Cit），與第二個間隔單元（-A-）結合，更佳地經由第二間隔單元的羰基，且如果存在第一個間隔單元（-B-），該胜肽的C端結合至第一間隔單元（-B-），或者如果不存在第一個間隔單元（-B-），則結合至喜樹鹼分子部分（-C）。
於又一具體實施例中，胺基酸單元為N-甲基纈胺酸-瓜胺酸。於又一個具體實施例中，胺基酸單元選自由下列所組成之群組：5-胺基戊酸、高苯丙胺酸-離胺酸、四異喹啉羧酸鹽-離胺酸、環己基丙胺酸-離胺酸、異果膠酸-離胺酸、beta-丙胺酸-離胺酸，以及異果膠酸。
較佳地，胺基酸單元為選自纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）的二胜肽。更佳地，胺基酸單元為選自纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，al-Ala或VA）。甚至更佳地，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。
於某些具體實施例中，該胺基酸單元選自纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。較佳地，胺基酸單元選自纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。更佳地，胺基酸單元為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例，包含胺基酸單元的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。例如在Salomon等人中， 「 Optimizing Lysosomal Activation of Antibody-Drug Conjugates （ ADCs ） by Incorporation of Novel Cleavable Dipeptide Linkers 」， Mol. Pharmaceutics2019年，16，12，4817-4825，公開了這些具體實施例的胺基酸單元以及其他合適的胺基酸單元。
當存在胺基酸單元時，第一間隔單元（B）可將胺基酸單元（Ww）連接至喜樹鹼分子部分。或者，當胺基酸單元不存在時，第一間隔單元（B）可將第二間隔單元（A）連接至喜樹鹼分子部分（C）。當胺基酸單元與第二間隔單元均不存在時，第一間隔單元可將喜樹鹼分子部分連接至Y。
整數b可為0或1。於較佳具體實施例中，整數b為1。或者，於其他具體實施例中，整數b為0，且第一間隔單元不存在。
第一個間隔單元（-B-）可能有兩種一般類型：自消型以及非自消型。非自消型的第一個間隔單元在裂解（特別是酶解）後，第一個間隔單元的部分或全部仍與該連接子（L）的一胺基酸單元（-Ww-）的喜樹鹼分子部分（C）結合。或者，包含一自消型的第一間隔單元的示例性化合物可釋放一藥物分子部分-D而不需要單獨的水解步驟。於示例性具體實施例中，自消型的第一間隔單元為PAB基團，其透過PAB基團的胺基氮原子連接至-Ww-，並透過碳酸酯基、胺基甲酸酯基或醚基直接連接至-D。不受任何特定理論或機制的約束，方案2描述了PAB基團的藥物釋放的可能機制，其透過Toki等人（（2002年）J Org. Chem. 67:1866-1872）支持的胺基甲酸酯或碳酸酯基團直接連接至-D。 其中Q為-(C 1-C 8)烷基、-O-(C 1-C 8)烷基、-鹵素、-硝基，或-氰基；m為0至4的整數，較佳為0、1或2，更佳為0或1，進一步較佳為0；p的範圍為1至20。
不受任何特定理論或機制的束縛，方案3描述了透過醚或胺鍵直接連接至藥物分子部分-D的PAB基團的藥物釋放的可能機制。 其中Q為-(C 1-C 8)烷基、-O-(C 1-C 8)烷基、-鹵素、-硝基，或-氰基；m為0至4的整數，較佳為0、1或2，更佳為0或1，進一步較佳為0；p的範圍為1至20。
自消型的間隔物的其他實例包括，但不限於，與PAB基團電子相似的芳香族化合物，例如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物（Hay等人（1999年）Bioorg.Med.Chem.Lett . 9:2237）以及鄰或對胺基芐縮醛。可使用在醯胺鍵水解時發生環化的間隔子，例如，取代與未取代的4-胺基丁酸醯胺（Rodrigues等人，Chemistry Biology，1995年，2，223）、適當取代的雙環[2.2.1]與雙環[2.2.2]環系統（Storm等人，J.Amer. Chem. Soc.，1972，94，5815），以及2-胺基苯基丙酸醯胺（Amsberry等人，J. Org. Chem.，1990，55，5867）。在甘胺酸的alpha位取代的含胺藥物的消除（Kingsbury等人，J. Med. Chem.，1984，27，1447）亦為可用於示例性化合物的自消型的間隔物之實例。
於一具體實施例中，該第一間隔單元為如方案4中所描述的支化雙（羥甲基）苯乙烯（branched bis（hydroxymethyl）styrene，BHMS）單元，其可用於摻入及釋放多種藥物（D）。 其中Q為-(C 1-C 8)烷基、-O-(C 1-C 8)烷基、-鹵素、-硝基，或-氰基；m為0至4的整數；較佳地，m為0、1或2；更佳地，m為0或1；更佳地，m為0；p的範圍為1至10；n為0或1；p的範圍為1至20。
於較佳具體實施例中，該第一間隔單元由式（X）表示： 其中Q為-(C 1-C 8)烷基、-O-(C 1-C 8)烷基、-鹵素、-硝基，或-氰基；m為0至4的整數；較佳地，m為0、1或2；更佳地，m為0或1；在非常佳的具體實施例中，m為0。較佳地，當存在胺基酸單元時，在式（X）中，NH基團結合至胺基酸單元的C端。較佳地，在式（X）中，C（O）基團與喜樹鹼分子部分（C）結合。
在非常佳的具體實施例中，該第一間隔單元為具有以下結構的PAB基團： 。 較佳地，當存在胺基酸單元時，NH基團結合至胺基酸單元（-Ww-），更佳為結合至胺基酸單元的C端。較佳地，C（O）基團與喜樹鹼分子部分（C）結合。
於某些具體實施例中，該第一間隔基團（-B-）為與喜樹鹼分子部分結合的式I、II或III的雜環「自消分子部分」，且合併一醯胺基團，該醯胺基團在被細胞內蛋白酶水解後引發反應，最終從喜樹鹼分子部分切割該第一間隔單元（-B-），進而使藥物以活性形式從共軛物中釋放出來。該連接子分子部分還包含與第一間隔基團（-B-）相鄰的胺基酸單元（-Ww-），其為細胞內酶（例如，細胞內蛋白酶，如組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B））的基質，在與第一間隔基團（-B-）共享的醯胺鍵處切割胜肽。在例如PCT專利公開號WO 2019/236954中描述了雜環的自消分子部分。
於某些具體實施例中，該第一間隔單元（-B-）為選自式I、II及III的雜環自消基團： ， 其中波浪線表示胺基酸單元-Ww-與喜樹鹼分子部分的共價連接位點，以及其中U為O、S或NR 6；Q為CR 4或N；V 1、V 2以及V 3獨立地為CR 4或N，條件為對於式II及III，Q、V 1以及V 2中的至少一個為N；T為來自喜樹鹼分子部分（-C）的O；R 1、R 2、R 3以及R 4獨立選自H、F、Cl、Br、I、OH、-N(R 5) 2、-N(R 5) 3 +、-(C 1-C 8)烷基鹵化物、羧酸鹽、硫酸鹽，胺基磺酸鹽，磺酸鹽，-SO2R 5、-S(=O)R 5、-SR 5、-SO2N(R 5) 2、-C(=O)R 5、-CO2R 5、-C(=O)N(R 5) 2、-CN、-N 3、-NO 2、-(C 1-C 8)烷氧基、-(C 1-C 8)鹵代烷基、聚氧乙烯、膦酸鹽、磷酸鹽、-(C 1-C 8)烷基、-(C 1-C 8)取代的烷基、-(C 2-C 8)烯基、-(C 2-C 8)取代的烯基、-(C 2-C 8)炔基、-(C 2-C 8)取代的炔基、-(C 6-C 20)芳基、-(C 6-C 20)取代的芳基、-(C 3-C 20)雜環，以及-(C 3-C 20)取代的雜環；或者當結合在一起時，R 2與R 3形成羰基(=O)，或3至7個碳原子的螺碳環；R 5與R 6獨立選自H、-(C 1-C 8)烷基、-(C 1-C 8)取代的烷基、-(C 2-C 8)烯基、-(C 2-C 8)取代的烯基、-(C 2-C 8)炔基、-(C 2-C 8)取代的炔基、-(C 6-C 20)芳基、-(C 6-C 20)取代的芳基、-(C 3-C 20)雜環，以及-(C 3-C 20)取代的雜環；其中-(C 1-C 8)取代的烷基、-(C 2-C 8)取代的烯基、-(C 2-C 8)取代的炔基、-(C 6-C 20)取代的芳基，以及-(C 3-C 20)取代的雜環獨立地被一個或多個選自由下列所組成之群組的取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、-N(R 5) 2、-N(R 5) 3 +、-(C 1-C 8)鹵代烷羧酸鹽、硫酸鹽、胺基磺酸鹽、磺酸鹽、-(C 1-C 8)烷基磺酸鹽、-(C 1-C 8)烷基胺基、4-二烷基胺基吡啶鎓、-(C 1-C 8)烷基羥基、-(C 1-C 8)烷基硫醇、-SO2R 5、-S(=O)R 5、-SR 5、-SO 2N(R 5) 2、-C(=O)R 5、-CO2R 5、-C(=O)N(R 5) 2、-CN、-N 3、-NO 2、-(C 1-C 8)烷氧基、-(C 1-C 8)三氟烷基、-(C 1-C 8)烷基、-(C 3-C 12)碳環、-(C 6-C 20)芳基、-(C 3-C 20)雜環、聚氧乙烯、膦酸鹽，以及磷酸鹽。
包含雜環自消分子部分的共軛物在細胞外，或在能夠裂解自消分子部分的醯胺鍵的酶不存在的情況下是穩定的。然而，在進入細胞或暴露於合適的酶後，醯胺鍵被裂解，引發自發的自消反應，導致將自消分子部分與喜樹鹼分子部分共價連接的鍵斷裂，進而影響釋放未衍生化或藥理活性形式的藥物。
共軛物中的自消分子部分摻入一個或多個雜原子，進而可提供改善的溶解度，可提高裂解速率及/或可降低共軛物聚集的傾向。因此，於某些情況下，雜環自消連接子構築物可導致功效增加、毒性降低及/或所需的藥物動力學及/或藥效學特性。
應當理解的是，式I-III中的T為O，因為它衍生自喜樹鹼分子部分的內酯環部分上的叔羥基（-OH）。
不受理論或任何特定機制的限制，式I、II或III的雜環上吸電子基團的存在可緩和裂解速率。
於一具體實施例中，自消分子部分為式I的基團，其中Q為N，且U為O或S。這樣的基團具有改善共軛物溶解度的非線性結構特徵。於本文中，R有時為H、甲基、硝基或CF 3。於一具體實施例中，Q為N且U為O，進而形成噁唑環且R為H。於另一個具體實施例中，Q為N且U為S，進而形成可選擇性地在R處被Me或CF 3基團取代的噻唑環。
於另一示例性具體實施例中，自消分子部分為式II的基團，其中Q為N且V 1及V 2獨立地為N或CH。於另一具體實施例中，Q、V 1以及V 2各自為N。於另一具體實施例中，Q及V 1為N而V 2為CH。於另一具體實施例中，Q以V 2為N而V 1為CH。於另一個具體實施例中，Q及V 1為CH且V 2為N。於另一具體實施例中，Q為N而V 1及V 2為CH。
於另一個具體實施例中，自消分子部分為式III的基團，其中Q、V 1、V 2以及V 3各自獨立地為N或CH。於另一具體實施例中，Q為N而V 1、V 2以及V 3每個都為N。於另一個具體實施例中，Q、V 1以及V 2各自為CH而V 3為N。於另一個具體實施例中，Q、V 2以及V 3各自為CH而V 1為N。於另一個具體實施例中，Q、V 1以及V 3各自為CH而V 2為N。於另一具體實施例中，Q及V 2為N而V 1及V 3為CH。於另一個具體實施例中，Q及V 2為CH而V 1及V 3為N。於另一具體實施例中，Q及V 3為N而V 1及V 2為CH。
較佳地，連接子（L）具有式：*-Aa-Ww-Bb- ##，其中整數a為1，整數b為1，整數w為2、3或4，更佳地，整數w為2或3；在非常佳的實施例中，整數w為2；-A-，每個-W-以及-B-如本文所定義；*表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（C）的連接點。
較佳地，連接子（L）具有以下結構： *-Aa-Ww-Bb- ##， 其中-A-為如本文所述之第二間隔單元；a為本文所述之整數；較佳地，a為1； -B-為本文所述之第一間隔單元；b為本文所述之整數；較佳地，b為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點； -Ww-為一種二胜肽，選自由下列所組成之群組：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元選自由下列所組成之群組：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-離胺酸或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
較佳地，連接子L具有以下結構： 。 其中-A-為如本文所述之第二間隔單元；a為本文所述之整數；較佳地，a為1； -Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數；較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽），例如w可為1或2；在非常佳的具體實施例中，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； Q如本文所定義； m為本文定義之整數，較佳地，m為0； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
更佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中： 如本文所定義；*表示Y的連接點； #表示與胺基酸單元-Ww-（如果存在）或NH基團的連接點； -Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數，較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽）， 在非常佳的具體實施例中，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； Q如本文所定義； m為本文定義之整數，較佳地，m為0； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
還更佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中： -Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數，較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽），在非常佳的具體實施例中，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
於較佳具體實施例中，連接子L具有以下結構： ， 其包含二胜肽纈胺酸-瓜胺酸作為胺基酸單元-Ww-；以及 其中*表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。此類連接子為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
於另一個較佳具體實施例中，連接子L具有以下結構： ， 其包含二胜肽纈胺酸-丙胺酸作為胺基酸單元-Ww-；以及 其中*表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。此類連接子為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
較佳地，連接子（L）具有下式： ，其中整數b為1，整數w為2、3或4，更佳地，整數w為2或3，在非常佳的具體實施例中，整數w為2；以及如本文所述之 ；R S各自獨立地為如本文所述之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所述之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地為，如本文所述，較佳地，每個M為-O-；s*為本文所述之整數；較佳地，s*為1；每個-W-與-B-如本文所定義；*表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
較佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中 如本文所述；R S各自獨立地為如本文所述之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所述之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地為，如本文所述，較佳地，每個M為-O-；s*為本文所述之整數；較佳地，s*為1； -Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數；較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽）， 在非常佳的具體實施例中，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； Q如本文所述； m為本文所述之整數，較佳地，m為0； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
更佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中： 如本文所定義；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；s*為本文定義之整數；較佳地，s*為1；*表示Y的連接點；以及 #表示與胺基酸單元-Ww-（如果存在）或與NH基團的連接點； -Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數，較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽）， 在非常佳的具體實施例中，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； Q如本文所定義； m為本文定義之整數，較佳為，m為0； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
還更佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中： R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義，較佳地，每個M為-O-；s*為本文定義之整數；較佳地，s*為1； -Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數，較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽），更佳地，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
於較佳具體實施例中，連接子L具有以下結構： …， 其包含二胜肽纈胺酸-瓜胺酸作為胺基酸單元-Ww-； 其中R S為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，R S為本文定義之第二聚乙二醇單元；M如本文所定義；較佳為，m為-O-；以及 *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
於另一個較佳的實施例中，連接子L具有以下結構： ， 其包含二胜肽纈胺酸-丙胺酸作為胺基酸單元-Ww-；以及 其中R S為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，R S為本文定義之第二聚乙二醇單元；M如本文所定義；較佳為，m為-O-；以及 *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。根據這些具體實施例的連接子可為可切割的連接子的說明性實例，特別是可被蛋白酶切割，例如，組織蛋白酶（例如，組織蛋白酶B）。
於某些具體實施例中，連接子L具有下式：*-Aa-Ww- ##，其中-A-為如本文所定義之第二間隔單元；與第二間隔單元相關的整數a如本文所定義；-Ww-為如本文所定義之胺基酸單元；與胺基酸單元W相關的整數w於本文中定義；第一個間隔單元（-B b-）不存在；*表示Y的連接點；以及 #表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，整數a為1。較佳地，整數w為2、3或4，更佳地，整數w為2或3，還更佳地，整數w為2。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（亦即，Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。於這些實施例的任一者中，第二間隔單元-A-可為具有 結構的基團Z，其中 如本文所定義。
連接子L可具有以下結構： ， 其中： 如本文所定義；*表示Y的連接點； #表示胺基酸單元-Ww-的連接點；-Ww-為本文所述之胺基酸單元；w為本文所述之整數，較佳地，w為2、3或4（亦即，較佳地，-Ww-為二胜肽、三胜肽或四胜肽），更佳地，整數w為2或3（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽或三胜肽），還更佳地，w為2（亦即，更佳地，-Ww-為二胜肽）； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。較佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）、丙胺酸-丙胺酸（即Ala-Ala或AA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）、纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA），以及苯丙胺酸-離胺酸（亦即，Phe-Lys或FK）。還更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）或纈胺酸-丙胺酸（亦即，Val-Ala或VA）。甚至更佳地，於這些具體實施例中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸（亦即，Val-Cit或VC）。或者，於這些具體實施例中，胺基酸單元-Ww-可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）、苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ），以及蘇胺酸-蘇胺酸（亦即，Thr-Thr或TT）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為選自由下列所組成之群組的二胜肽：纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）、白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ），以及苯丙胺酸-麩醯胺酸（亦即，Phe-Gln或FQ）。於這些具體實施例中，胺基酸單元可為纈胺酸-麩醯胺酸（亦即，Val-Gln或VQ）或白胺酸-麩醯胺酸（亦即，Leu-Gln或LQ）。
於某些具體實施例中，連接子L可具有以下結構： ， 其包含二胜肽纈胺酸-瓜胺酸作為胺基酸單元-Ww-；以及 其中*表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於某些具體實施例中，連接子L可具有以下結構： ， 其包含二胜肽纈胺酸-丙胺酸作為胺基酸單元-Ww-；以及 其中*表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於某些具體實施例中，連接子（-L-）具有式：*-Aa- ##，其中-A-為如本文所定義之第二間隔單元；第二間隔單元的整數a為1；胺基酸單元-Ww-不存在；第一間隔單元（-B-）不存在；*表示Y的連接點；以及 ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些實施例的任一者中，第二間隔單元-A-可為具有 結構的基團Z，其中 如本文所定義。
連接子（-L-）可具有以下結構： ， 其中： 如本文所定義；*表示Y的連接點； #表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於某些具體實施例中，連接子L可具有以下結構： ， 其中*表示Y的連接點； #表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。 連接子 *-A a-Q CO q-G- ##
於某些具體實施例中，連接子L具有以下結構：*-Aa-Q CO q-G- ##，其中：-A-為如本文所述之第二間隔單元；如本文所述，a為0或1；每個-Q CO-為一個獨立的連接子單元；q為0或1；-G-為包含一糖分子部分的第一間隔單元；*表示Y的連接點；以及 ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。包含糖分子部分的連接子，例如葡醣醛酸分子部分描述於例如Jeffrey等人所述， 「 Development And Properties of Beta-Glucuronide Linkers for Monoclonal Antibody-Drug Conjugates，Bioconjugate Chem. 2006年，17，831-840，doi: 10.1021/bc0600214；WO 2019/236954；以及WO 2015/057699。
在連接子*-Aa-Q CO q-G- ##中，第二間隔單元-A-（如果存在）可為本文所述之任何第二間隔單元。在具有*-Aa-Q CO q-G- ##結構的連接子中，第二個間隔單元A用於將Y與連接子單元Q CO（如果存在）或與包含糖分子部分的第一個間隔單元連接。第二間隔單元（-A-），當存在時，可為能夠將Y連接至連接子單元（Q CO）的任何化學基團或分子部分。或者，如果不存在連接子單元Q CO，則第二間隔單元（-A-）可將Y連接至包含糖分子部分（G-）的第一間隔單元。於此方面，如本文所述，Y鍵合至第二間隔單元（-A-）。第二個間隔單元（-A-）包含或者為一個能夠與連接子單元（-Q CO-）或具有糖分子部分（-G-）的第一個間隔單元形成一化學鍵的官能基團，取決於連接子單元（-Q CO-）是否存在。較佳地，能夠與連接子單元（-Q CO-）或與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元形成一化學鍵的官能基團是羰基，其被描述為例如， 或-C(O)-。與第二間隔單元相關聯的整數a可為0或1。較佳地，整數a為1。可選地，於其他具體實施例中第二間隔單元不存在（a＝0）。
在連接子*-Aa-Q CO q-G- ##中，第二間隔單元-A-（如果存在）可為本文所述之任何第二間隔單元。於某些具體實施例中，第二間隔單元-A-，當存在時，可為具有結構 的基團Z，其中 如本文所定義。因此，於某些具體實施例中，連接子（L）可具有結構 ，其中L P、R S、s*、M、Q CO、q和G如本文所定義；*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
在希望在-Y-之間或在存在時在第二間隔單元（-A-）以及包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元之間增加額外距離的情況下，可包括連接子單元（-Q CO-）。於某些具體實施例中，額外距離可有助於包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元內的活化。因此，連接子單元（-Q CO-）在存在時擴展了連接子（-L-）的框架。於此方面，連接子單元（-QCO-）與-Y-共價鍵合，或者當存在第二個間隔單元-A-時，於一末端與第二個間隔單元（-A-）共價鍵合，且連接子單元（-Q CO-）共價鍵合至在其另一端包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元。與連接子單元Q CO相關聯的整數q可為0或1。較佳地，整數q為1。或者，於其他具體實施例中，連接子單元Q CO不存在（q＝0）。
當存在時，連接子單元（-Q CO-）用於將包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元連接至第二間隔單元（-A-）（當存在時）或-Y-。連接子單元Q CO可為任何化學基團或分子部分，用於提供包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元與第二間隔單元（-A-）（如果存在）或-Y-的連接。連接子單元可以例如由一個或多個（例如，1-10個，較佳地，1、2、3或4個）天然或非天然胺基酸、胺基醇、胺基醛，以及二胺基殘基所組成。於某些具體實施例中，連接子單元（-Q CO-）為單一天然或非天然胺基酸、胺基醇、胺基醛，或二胺基殘基。於某些具體實施例中，能夠充當連接子單元的胺基酸為beta-丙胺酸。特別地，連接子單元可為單個beta-丙胺酸。
於某些具體實施例中，連接子單元（-Q CO-）具有以下表示之公式： ， 其中波浪線表示連接子單元在連接子（-L-）內或與-Y-的連接， 當第二間隔單元（-A-）不存在時；且其中R 111獨立地選自由下列所組成之群組：氫、羥基芐基、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、-CH 2OH、-CH(OH)CH 3、-CH 2CH 2SCH 3、-CH 2CONH 2、-CH 2COOH、-CH 2CH 2CONH 2、-CH 2CH 2COOH、-(CH 2) 3NHC(=NH)NH 2、-(CH 2) 3NH 2、-(CH 2) 3NHCOCH 3、-(CH 2) 3NHCHO、-(CH 2) 4NHC(=NH)NH 2、-(CH 2) 4NH 2、-(CH 2) 4NHCOCH 3、-(CH 2) 4NHCHO、-(CH 2) 3NHCONH 2、-(CH 2) 4NHCONH 2、-CH 2CH 2CH(OH)CH 2NH 2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、 ，以及 每個R 100獨立地選自氫或-(C 1-C 3)烷基，較佳為氫或CH 3；下標c為1至10，較佳為1至3的獨立選擇的整數。
於較佳具體實施例中，連接子單元具有以下結構（-Q CO-），其具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，當存在時，如下： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4之間的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1。
更佳地，連接子單元（-Q CO-）具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，當存在時，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔基團的共價連接；以及m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。
更佳地，連接子單元（-Q CO-）具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，當存在時，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔基團的共價連接。
具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔物單元的羰基的另一種代表性連接子單元（-Q CO-）如下： ， 其中R 13為-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，或-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基。
具有連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔物單元的NH部分的另一種代表性連接子單元如下： ， 其中在每種情況下，R 13獨立地選自-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，且下標c為1至14。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且下標c為1。
具有連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔物單元的NH部分的另一種代表性連接子單元（-Q CO-）如下： ， 其中R 13為-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-、-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-、-C(=O)(C 1-C 10)亞烷基-，或-(C 1-C 6)亞烷基-C(=O)-(C 1-C 6)亞烷基。
具有糖分子部分（-G-）的第一個間隔單元為必須存在的具有*-Aa-Q CO q-G- ##結構的連接子的唯一組成分。於某些具體實施例中，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元與喜樹鹼分子部分（-C）形成可裂解的化學鍵。於某些具體實施例中，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元與連接子單元（-Q CO-）（當存在時）形成可裂解的化學鍵。於某些具體實施例中，可裂解的化學鍵在包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元內但允許釋放游離的藥物（例如，透過裂解後的1,6-消除反應）。用於形成可裂解的化學鍵的官能基團可包括例如糖以形成糖苷鍵。
包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的結構與序列可使得該單元被存在於靶位點的酶的作用切割。於其他具體實施例中，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元可被其他機制切割。包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元可包含一個或多個切割位點。
較佳地，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元包含糖切割位點。於某些這樣的具體實施例中，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元包含經由氧糖苷鍵連接至資一自消基團的糖分子部分（Su）。在此類方面，該自消基團被認為是包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的一部分。於此方面，「自消基團」可為能夠將三個間隔的化學分子部分（亦即，糖分子部分（透過糖苷鍵）、喜樹鹼分子部分（-C），以及連接子單元-Q CO-、第二間隔單元-A-或-Y-，取決於是否存在-Q CO-單元及/或-A-單元）共價連接在一起的三官能化學分子部分。糖苷鍵可為可在標靶位點被切割以啟動導致藥物釋放的自消反應序列的糖苷鍵。特定的糖分子部分可以選自，例如，選自由下列所組成之群組：葡萄醣醛酸、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、6-磷酸甘露糖、岩藻糖、鼠李糖、古洛糖、阿洛糖、6-去氧葡萄糖、乳糖、麥芽糖、纖維二糖、龍膽二糖、麥芽三糖、GlcNAc、GalNAc，以及麥芽六糖。
因此，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元可包含透過糖苷鍵（-O'-）連接至下式的自消基團（K）的糖分子部分（Su）： 其中自消基團K與喜樹鹼分子部分形成共價鍵並與-Q CO-、-A-或-Y-形成共價鍵，視情況而定。
包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元可例如由下式表示： 或 ， 其中Su為糖分子部分，-O'-代表氧糖苷鍵；每個R獨立地為氫、鹵素、-CN，或-NO 2；其中波浪線表示與-Q CO-、-A-或-Y-的連接，視情況而定，星號表示與喜樹鹼分子部分的連接（直接或間接透過間隔單元；間隔單元在存在時可為例如-(C＝O)-）。
於某些這樣的具體實施例中，糖切割位點被beta-葡糖苷酸酶識別且該包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元包含一葡糖苷酸單元。該葡糖苷酸單元可包含透過糖苷鍵（-O'-）連接至下式的自消基團（K）的葡醣醛酸： ， 其中該自消基團K與喜樹鹼分子部分形成共價鍵（直接或間接透過間隔單元；間隔單元，當存在時，可為例如-(C=O)-）以及與喜樹鹼分子部分的共價鍵-Q CO-、-A-或-Y-，視情況而定。
葡糖苷酸單元可例如由下式表示： ， 其中波浪線表示與-Q CO-、-A-或-Y-的共價連接，視情況而定，星號表示與喜樹鹼分子部分-C的共價連接（直接或間接透過間隔單元；間隔單元在存在時可為例如-(C＝O)-）。
於某些具體實施例中，包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元包含一糖裂解位點，且-S-C，亦即包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元與喜樹鹼分子部分（於下式中，喜樹鹼分子部分例外地表示為「D」）的組合，由下式表示： ， ， 其中Su為糖分子部分，D為喜樹鹼基，-O'-代表氧糖苷鍵；每個R各自獨立地為氫或鹵素、-CN、-NO 2，或其他吸電子基團，-Q CO-為連接子單元，如本文所述；其中波浪鍵表示與-A-或-Y-的共價連接，視情況而定。
當包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元包含葡糖苷酸單元時，則-S-C，亦即包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元與喜樹鹼分子部分的組合（在下式中，喜樹鹼分子部分例外地表示為「D」），例如可以由下式表示： 其中波浪鍵表示與-A-或-Y-的共價連接，視情況而定；D為喜樹鹼分子部分；-Q CO-為連接子單元，如本文所述。
不受理論的束縛，方案1a描述了喜樹鹼藥物單元透過胺取代基的氮原子從一游離藥物連接至包含葡糖苷酸單元的可釋放連接子的游離藥物釋放機制。 方案1a
於較佳具體實施例中，連接子（L）具有以下結構： ， 其中： -A-為本文所述之第二間隔單元；a為本文所述之整數，較佳地，a為1； -Q CO-為本文所述之連接子單元；q為如本文所定義之整數，較佳地，q為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些具體實施例中，連接子單元（Q CO），當存在時，可具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，如果存在，可能如下所示： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1；較佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，可具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，當存在時，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔基團的共價連接；m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。更佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，如果存在的話，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔基團共價連接。
更佳地，連接子（L）具有以下結構： ， 其中： 如本文所定義；*表示-Y-的連接點； #表示與連接子單元（-Q CO-）的連接點（如果存在）或與NH基團的連接點； -Q CO-為本文定義之連接子單元；q為如本文所定義之整數，較佳地，q為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些具體實施例中，連接子單元（Q CO），當存在時，可具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，其可能如下： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自由下列所組成之群組：-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1。較佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，可具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）共價連接；以及m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。更佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，如果存在的話，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔基團共價連接。
還更佳地，連接子（L）具有以下結構： ， 其中： Q CO為此處定義之連接子單元；q為如本文所定義之整數，較佳地，q為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些具體實施例中，連接子單元（Q CO），當存在時，可具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，其可能如下： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1。較佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，可具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，並且與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔基團的共價連接；m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。更佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）的共價連接。
還更佳地，連接子L可具有以下結構： ， 其中*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於較佳具體實施例中，連接子L具有以下結構： ， 其中 如本文所述；R S各自獨立地為如本文所述之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個RS獨立地為如本文所述之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所述；較佳地，每個M為-O-；s*為本文所述之整數；較佳地，s*為1； -Q CO-為本文所述之連接子單元；q為如本文所定義之整數，較佳地，q為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些具體實施例中，連接子單元（Q CO），當存在時，可具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，其可能如下： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-，-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-，-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1。較佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，可具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）共價連接；以及m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。更佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）的共價連接。
更佳地，連接子（L）具有以下結構： ， 其中： 如本文所定義；R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所定義之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；s*為本文定義之整數；較佳地，s*為1；*表示Y的連接點；*表示-Y-的連接點； #表示與連接子單元（-Q CO-）的連接點（如果存在）或與NH基團的連接點； -Q CO-為本文定義之連接子單元；q為如本文所定義之整數，較佳地，q為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些具體實施例中，連接子單元（Q CO），當存在時，可具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，其可能如下： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自由下列所組成之群組：-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1。較佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，可具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）共價連接；m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。更佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）的共價連接。
更佳地，連接子（L）具有以下結構： ， 其中： R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所述之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；s*為本文定義之整數；較佳地，s*為1。 Q CO為此處定義之連接子單元；q為如本文所定義之整數，較佳地，q為1； *表示Y的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於這些具體實施例中，連接子單元（Q CO），當存在時，可具有用於連接至包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元的羰基以及用於連接至第二間隔單元（-A-）的NH基團，其可能如下： ， 其中在每種情況下R 13獨立地選自由下列所組成之群組：-(C 1-C 6)亞烷基-、-(C 3-C 8)碳環-、-亞芳基-、-(C 1-C 10)雜亞烷基-、-(C 3-C 8)雜環-、-(C 1-C 10)亞烷基-亞芳基-、-亞芳基-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)碳環)-、-(C 3-C 8)碳環-(C 1-C 10)亞烷基-、-(C 1-C 10)亞烷基-(C 3-C 8)雜環-，以及-(C 3-C 8)雜環-(C 1-C 10)亞烷基-，下標c為1至4的整數。於某些具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1至4的整數。於較佳具體實施例中，R 13為-(C 1-C 6)亞烷基且c為1。較佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，可具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）共價連接；m為1至6的整數，較佳為2至6，更佳為2至4。更佳地，於這些實施例中，連接子單元（-Q CO-），當存在時，具有以下結構： ， 其中與氮相鄰的波浪線表示與第二間隔單元（-A-）的共價連接，與羰基相鄰的波浪線表示與包含糖分子部分的第一間隔基團（-G-）的共價連接。
還更佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中： R S各自獨立地為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，每個R S獨立地為如本文所述之第二聚乙二醇單元；M各自獨立地如本文所定義；較佳地，每個M為-O-；s*為本文定義之整數；較佳地，s*為1。 *表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
還較佳地，連接子L具有以下結構： ， 其中*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於一具體實施例中，連接子L具有以下結構： ， 其中*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。於此具體實施例中，Y可如本文所定義；較佳地，Y可為NH。 連接子 *-A a-U AT u-Sulf- ##
於某些具體實施例中，連接子L具有以下結構：*-A a-U AT u-Sulf- ##，其中：-A-為第二間隔單元；a為0或1；每個-U AT u-都是獨立的連接單元；u為0或1；-Sulf-為具有硫酸酯酶可裂解分子部分的第一個間隔單元；*表示Y的連接點；以及 ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。對於硫酸酯酶可切割連接子，參見例如Bargh 等人所述， 「 Sulfatase-cleavable Linkers forAntibody-drug conjugates 」，Chemical Science，2020年，11，2375-2380，doi: 10.1039/c9sc06410a.。
在具有結構*-A a-U AT u-Sulf- ##的連接子中，第二個間隔單元（-A-）（如果存在）用於將Y連接至連接單元（U AT）（如果存在）或該具有硫酸酯酶可裂解分子部分的第一間隔單元。第二間隔單元（-A-）可為能夠將Y連接至連接單元（U AT）的任何化學基團或分子部分。或者，如果不存在連接單元（U AT），則第二間隔單元（-A-）可將Y連接至具有硫酸酯酶可裂解分子部分（-Sulf-）的第一間隔單元。於此方面，如本文所述，Y鍵合至第二間隔單元（-A-）。第二間隔單元（-A-）包含或者為能夠與連接單元（U AT）或具有硫酸酯酶可裂解分子部分（-Sulf-）的第一間隔單元形成一化學鍵的官能基團，取決於連接單元（-U AT-）是否存在。較佳地，能夠與連接單元（U AT）或與具有硫酸酯酶可裂解分子部分（-Sulf-）的第一間隔單元形成一化學鍵的官能基團為羰基，其被描述為，例如， 或-C(O)-。與第二間隔單元相關聯的整數a可為0或1。較佳地，整數a為1。或者，於其他具體實施例中，第二間隔單元不存在（a＝0）。
在連接子*-A a-U AT u-Sulf- ##中，第二間隔單元-A-可為本文所述之任何第二間隔單元。於某些具體實施例中，第二間隔單元-A-，當存在時，可為具有結構 的基團Z，其中 如本文所定義。因此，於某些具體實施例中，連接子（L）可具有結構 ，其中L P、R S、s*、M、U AT、u，以及Sulf如本文所定義；*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
在希望增加-Y-或第二間隔單元（-A-）（當存在時）與具有硫酸酯酶可裂解分子部分（-Sulf-）的第一間隔單元之間的額外距離的情況下，可包含連接單元（-U AT-）。因此，當存在連接單元（-U AT-）時擴展了連接子（-L-）的框架。於此方面，連接單元（-U AT-）可與-Y-共價鍵合，或者當存在第二個間隔單元-A-時，於一末端與第二個間隔單元（-A-）共價鍵合，且連接單元（-U AT-）共價鍵合至在其另一端具有硫酸酯酶可裂解基團（-Sulf-）的第一個間隔單元。
連接單元（-U AT-）可為任何化學基團或分子部分，其用於提供具有硫酸酯酶可裂解分子部分（-Sulf-）的第一間隔單元與第二間隔單元（-A-）（當存在時）或與-Y-的連接。
於某些具體實施例中，連接單元（U AT）具有以下表示之公式： ， 其中v為1至6的整數；較佳地，v為1或2；更佳地，v為2；以及 v*為1至6的整數；較佳地，v*為1或2；更佳地，v*為1； 其中*表示與第二間隔單元（-A-）（如果存在）的連接點， #表示與硫酸酯酶可裂解分子部分（Sulf）的連接點。
較佳地，具有硫酸酯酶可裂解分子部分（Sulf）的第一間隔單元具有以下表示之公式： ， 其中X為氫（H）或吸電子基團，例如二氧化氮；*表示連接單元（U AT）（如果存在），或（-A-）（如果存在）的連接點； #表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於某些具體實施例中，連接子L可具有以下結構： ， 其中X為H或NO 2； *表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於某些具體實施例中，連接子L可具有以下結構： ． 其中： X為H或NO 2； R S為如本文所定義之第二聚亞烷基二醇單元；較佳地，R S為本文定義之第二聚乙二醇單元； M如本文所定義；較佳地，m為-O-； *表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。 第三間隔單元
於某些具體實施例中，當存在第一間隔單元（-B-）或包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元或具有硫酸酯酶可切割部分（Sulf）的第一間隔單元時，連接子（L）可包含可選擇性的第三間隔單元（-E-），其佈置在第一間隔單元（-B-），或包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元，或具有硫酸酯酶可裂解分子部分（Sulf）的第一間隔單元與喜樹鹼分子部分（-C）之間。第三間隔單元可為一可促進第一間隔單元（-B-），或包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元，或具有硫酸酯酶可裂解分子部分（Sulf）的第一間隔單元，連接至喜樹鹼分子部分（-C）的官能基團，或者其可提供額外的結構成分，這些成分可促進喜樹鹼分子部分（-C）從共軛物的其餘部分釋放。合適的第三間隔單元描述於例如WO 2019/236954中。
於某些具體實施例中，第三間隔單元（-E-）與第一間隔單元（-B-）以及與喜樹鹼分子部分（-C）結合。因此，連接子（-L-）可能具有*-A a-W w-B b-E- ##結構；其中-E-為如本文所述之第三間隔單元；其中-A-、a、-W-、w以及-B-如本文所述，特別是關於具有結構*-A a-W w-B b- ##的連接子（L）；b為1；其中，在每種情況下，*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於其他具體實施例中，第三間隔單元（-E-）與包含糖分子部分（-G-）的第一間隔單元以及與喜樹鹼分子部分（-C-）結合。因此，連接子（-L-）可能具有結構*-A a-Q CO q-G-E- ##；其中-E-為如本文所述之第三間隔單元；其中-A-、a、-Q CO-、q以及G如本文所述，特別是關於具有結構*-Aa-Q CO q-G- ##的連接子（-L-）；其中，在每種情況下，*表示-Y-的連接點；以及 ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於其他具體實施例中，第三間隔單元（-E-）與具有硫酸酯酶可裂解分子部分（-Sulf-）的第一間隔單元以及與喜樹鹼分子部分（-C-）結合。因此，連接子（-L-）可能具有結構*-A a-U AT u-Sulf-E- ##；其中-E-為如本文所述之第三間隔單元；其中-A-、a、-U AT-、u以及Sulf如本文所述，特別是關於具有結構*-A a-U AT u-Sulf- ##的連接子（-L-）；其中，在每種情況下，*表示-Y-的連接點； ##表示喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。
於某些具體實施例中，示例性第三間隔單元-E-由下式表示： ， 其中EWG表示吸電子基團，R 1為-H或(C 1-C 4)烷基，下標n為1或2。於某些具體實施例中，EWG選自由下列所組成之群組：-CN、-NO 2、-CX 3、-X、C(=O)OR’、-C(=O)N(R’) 2、-C(=O)R’、-C(=O)X、-S(=O) 2R’、-S(=O) 2OR’、-S(=O) 2NHR’、-S(=O) 2N(R’) 2、-P(=O)(OR’) 2、-P(=O)(CH 3)NHR’、-NO、-N(R’) 3 +，其中X為-F、-Br、-Cl或-I，並且R’獨立地選自氫以及(C 1-C 6)烷基，且其中式（a）、（a'）、（a」）、（b）以及（b'）中與氮原子相鄰的波浪線為第一間隔單元（-B-）的共價連接點，且與式（b）及式（b'）的羰基碳原子相鄰的波浪線為與喜樹鹼分子部分（-C）的羥基或伯胺或仲胺的雜原子的共價連接點；以及其中式（a）、式（a’）以及式（a」）表示示例性單元，其中T*為來自喜樹鹼分子部分（-C）的羥基或伯胺或仲胺官能基團的雜原子；以及其中與T*相鄰的波浪線是與喜樹鹼分子部分的其餘部分共價連接的點。於這些具體實施例中，第三間隔單元-E-可促進喜樹鹼分子部分作為游離藥物的釋放。
於其他具體實施例中，第三間隔單元由下式表示： ， 其中每個R獨立地為-H或(C 1-C 4)烷基的式（a1）及式（a1’）表示其中O*為來自喜樹鹼分子部分（-C）的羥基取代基的氧原子的單元；式（a1）、式（a1’）、式（b1）中的波浪線分別保留了式（a）、（a’）、（b）中的含義。在式（a1’）中，-CH 2CH 2N +（R） 2分子部分代表質子化形式的示例性基本單元。
不受理論的束縛，方案1b描述了從連接至具有自消分子部分的共軛物中的亞甲基胺基甲酸酯單元的喜樹鹼分子部分的游離藥物釋放機制。在該方案中，T*為來自併入亞甲基胺基甲酸酯單元的喜樹鹼分子部分的羥基或伯胺或仲胺的雜原子。 方案1b 喜樹鹼分子部分（ -C ）
「喜樹鹼分子部分」乙詞包括喜樹鹼本身以及喜樹鹼的類似物。喜樹鹼為一種拓撲異構酶毒物，1966年由M. E. Wall以及M. C. Wani在系統篩選抗癌藥物天然產物時發現。喜樹鹼為從喜樹（Camptotheca，HappyTree）的樹皮及莖中所分離出來的，喜樹為一種原產於中國的樹種，在中藥上作為癌症治療劑。喜樹鹼具有以下結構： 「喜樹鹼分子部分」乙詞還包括喜樹鹼類似物。於此方面，「喜樹鹼分子部分」乙詞表示包含喜樹鹼結構的任何部分： ， 且可選擇性地被取代。作為說明性非限制性之實例，可選擇性的取代基可包括，(C 1-C 10)烷基、(C 3-C 8)碳環、(C 3-C 8)雜環、芳基、胺基、羥基、羰基、醯胺基、酯基、胺基甲酸酯基、碳酸酯基，及/或甲矽烷基。喜樹鹼分子部分可具有一個或多個能夠與連接子L形成一化學鍵的官能基團。本領域技術人員將容易地選擇具有所需生物活性的合適的喜樹鹼分子部分。喜樹鹼類似物已獲得核准並用於現今的癌症化學療法，例如托泊替康（topotecan）、伊立替康（Irinotecan），或貝洛替康（belotecan）。
以下喜樹鹼類似物也涵蓋在喜樹鹼分子部分乙詞的預想：
類似物 R 1 R 2 R 3 R 4
托泊替康（topotecan） —H —OH —H
伊立替康（Irinotecan）（CPT-11） —H —H
喜拉替康（Silatecan）（DB-67，AR-67） —H —OH —H
可替康（Cositecan）（BNP-1350） —H —H —H
依沙替康（exatecan） —CH 3 —F
魯托替康（lurtotecan） —H
吉馬替康（gimatecan）（ST1481） —H —H —H
貝洛替康（belotecan）（CKD-602） —H —H —H
盧比替康（rubitecan） —H —H —H
PCT專利公開號WO 2019/236954以及歐洲專利號EP 0 495 432中描述了可作為喜樹鹼分子部分的其他喜樹鹼類似物。
於某些具體實施例中，喜樹鹼分子部分（C）選自由下列所組成之群組：依沙替康（exatecan）、SN38、喜樹鹼、托泊替康（topotecan）、伊立替康（irinotecan）、貝洛替康（belotecan）、魯托替康（lurtotecan）、盧比替康（rubitecan）、喜拉替康（Silatecan）、可替康（cositecan），以及吉馬替康（gimatecan）。較佳地，喜樹鹼分子部分選自由下列所組成之群組：依沙替康（exatecan）、SN38、喜樹鹼、托泊替康（topotecan）、伊立替康（irinotecan），以及貝洛替康（belotecan）。SN38具有以下結構： ； 依沙替康（exatecan）、喜樹鹼、托泊替康（topotecan）、伊立替康（irinotecan），以及貝洛替康（belotecan）的結構如本文所述。
更佳地，於本文所述之任一具體實施例中，喜樹鹼分子部分C為具有以下結構的依沙替康： 。 還更佳地，喜樹鹼分子部分為具有以下結構的依沙替康： 。 較佳地，於這些具體實施例的任一個中，依沙替康透過胺基（亦即，透過依沙替康的NH 2基團）與連接子L結合。依沙替康透過胺基與連接子L結合，可描述如下： 或 ， 其中 #表示連接子L的連接點。
本發明還涉及一種具有式（I）之共軛物： （I）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： RBM為抗體； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NH； R 1為具有以下結構的聚乙二醇單元： ， 其中： 表示O的位置； K F如本文所定義；較佳的K F為H；以及 o為本文定義之整數；較佳的o為8至30的整數；更佳為16至30；還更佳為20至28；還更佳地，o為22、23、24、25或26；還更佳地，o為23、24或25；甚至更佳地o為24； R 3為H R 4為H L為具有以下結構的連接子； ， 其中 #表示與Y的連接點，*表示與喜樹鹼分子部分（C）的連接點； C為喜樹鹼分子部分； m為1；以及 n為本文定義之整數； 較佳地，n為1至10的整數；更佳為2至10；還更佳為4至10；更佳為6至10，進一步較佳為7至10，進一步較佳地，n為8；或者 較佳地，n為1至10的整數，更佳為2至8，還更佳為3至6，還更佳地，n為4或5，甚至更佳地，n為4。 較佳地，喜樹鹼分子部分C為具有以下結構的依沙替康： 。 更佳地，喜樹鹼分子部分為具有以下結構的依沙替康： 。 較佳地，於這些具體實施例的任一個中，依沙替康經由胺基與連接子L結合。
本發明還涉及具有下式（Ia）的共軛物： （Ia） 其中： RBM為抗體；以及 n為本文定義之整數a； 較佳地，n為1至10的整數；更佳為2至10；還更佳為4至10；更佳為6至10，進一步更佳為7至10，進一步更佳地，n為8；或者 較佳地，n為1至10的整數，更佳為2至8，還更佳為3至6，還更佳地，n為4或5，甚至更佳地，n為4。 式（ II ）之化合物
本發明還涉及一種具有式（II）之化合物： （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數。
較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。較佳地，當存在時，R 4為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 4為H。較佳地，當存在時，R 5為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 5為H。較佳地，當存在時，R 6為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 6為H。較佳地，當存在時，R 7為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 7為H。
較佳地， 為一三鍵；V不存在；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。
更佳地， 代表三鍵；V不存在；X代表 ，R 3代表H或(C 1-C 8)烷基。較佳地，R 3代表H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。甚至更佳地，R 3為H。
於某些具體實施例中， 可為雙鍵；V為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，V為H；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；更佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H；R 4為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 4為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，R 4為H。
於某些具體實施例中， 可表示雙鍵；V可為H或(C 1-C 8)烷基；X可能代表 ；R 3與R 4可以獨立地代表H或(C 1-C 8)烷基。較佳地，R 3與R 4獨立地表示H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。較佳地，R 3與R 4相同；甚至更佳地，R 3、R 4以及V相同。更佳地，R 3與R 4都為H。較佳地，V為H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。甚至更佳地，V為H。於較佳具體實施例中，R 3、R 4以及V各自為H。
在任何一種式（II）化合物中，任何變量可如本文所述定義，特別是關於式（I）共軛物及/或式（III）含硫醇分子。因此，RBM、 、V、X、Y、R 1、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、L、C、m以及n可以如本文所定義。較佳地，Y為NH。 製備式（ I ）之共軛物的方法
本發明還涉及一種製備具有式（I）之共軛物的方法，該方法包括： 使式（II）之化合物 （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數；以及 與具有以下公式（III）之含硫醇分子反應 （III）， 其中RBM為受體結合分子；以及 n為1至20之間的整數； 得到具有以下公式（I）之化合物 （I）， 其中： 當在公式（III）之化合物的 為三鍵時， 為雙鍵；或 當在公式（II）之化合物的 為雙鍵時， 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NH、S、O，或CH 2； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。
較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。較佳地，當存在時，R 4為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 4為H。較佳地，當存在時，R 5為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 5為H。較佳地，當存在時，R 6為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 6為H。較佳地，當存在時，R 7為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，當存在時，R 7為H。
較佳地， 為三鍵；V不存在；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H；且 代表雙鍵。
更佳地， 代表三鍵；V不存在；X代表 ，R 3代表H或(C 1-C 8)烷基；且 代表雙鍵。較佳地，R 3代表H或(C 1-C 6)烷基，更佳為H或(C 1-C 4)烷基，還更佳為H或(C 1-C 2)烷基。甚至更佳地，R 3為H。
於某些具體實施例中， 可為雙鍵；V為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，V為H；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；且 可為化學鍵；更佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H；R 4為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 4為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地R 4為H。
於某些具體實施例中， 可表示雙鍵；V可為H或(C 1-C 8)烷基；X可能代表 ；R 3與R 4可以獨立地表示H或(C 1-C 8)烷基；且 可能代表化學鍵。較佳地，R 3與R 4獨立地表示H或C 1-C 6-烷基，更佳為H或C 1-C 4-烷基，還更佳為H或C 1-C 2-烷基。較佳地，R 3與R 4相同；甚至更佳地，R 3、R 4以及V相同。更佳地，R 3與R 4都為H。較佳地，V為H或C 1-C 6-烷基，更佳為H或C 1-C 4-烷基，還更佳為H或C 1-C 2-烷基。甚至更佳地，V為H。於較佳具體實施例中，R 3、R 4以及V各自為H。
關於本文所用之 與 表示，應當注意的是，如本領域技術人員所知的，每個碳原子為四價的。因此，一結構 ，其中X及V如本文所定義且星號（*）表示與磷的連接的結構包括結構 以及 ，其中R 3、R 4以及V如本文所定義。結構 ，其中X及V如本文所定義，星號（*）表示與磷的連接， #表示與受體結合分子（RBM）的連接，包括結構 以及 ，其中R 3、R 4以及V如本文所定義，H為氫。波浪鍵表示雙鍵的構型可為E或Z。該化合物也可能以E及Z異構物的混合物形式存在。
當受體結合分子包含一個或多個雙硫鍵時，例如抗體，該方法可進一步包括在還原劑存在下還原受體結合分子的至少一個雙硫鍵以形成硫醇基團（SH）。得到式（III）化合物然後可與式（II）化合物反應以產生式（I）共軛物。還原劑可選自三（2-羧乙基）膦（tris（2-carboxyethyl）phosphine，TCEP）、雙硫蘇糖醇（dithiothreitol，DTT）、連二亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉，以及亞硫酸鈉。因此，還原劑可為雙硫蘇糖醇（DTT）。還原劑可為連二亞硫酸鈉。還原劑可為亞硫酸鈉。較佳地，還原劑為三（2-羧乙基）膦（TCEP）。
較佳地，至少一個雙硫鍵的還原包括每1個待還原的雙硫鍵使用約1至約3當量、較佳為約1至約2當量、更佳為約1當量的還原劑。於本文中，注意到理論上1當量的還原劑，特別為如本文所述之還原劑，對於還原1個雙硫鍵以產生2個硫醇基團（SH）是必要的。
較佳地，針對每個硫醇基團（SH），式（III）的含硫醇分子與約1至約4當量，較佳為約1至約3當量，更佳為約1至約2當量，還更佳為約1.5當量的式（II）化合物反應。
較佳地，式（II）的化合物與式（III）的含硫醇分子的反應在水性介質中進行。
較佳地，式（II）的化合物與式（III）的含硫醇分子的反應在中性pH或弱鹼性條件下進行。還更佳地，該反應在pH 6至10的環境下進行。甚至更佳地，該反應在pH 7至9的環境下進行。
在任何一種方法中，可如本文所述定義任何變量，特別是關於式（I）之共軛物及/或式（II）的化合物。因此，RBM、 、 、V、X、Y、R 1、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、L、C、m以及n可如本文所定義。較佳地，Y為NH。
製備式（II）化合物的方法為本領域已知的。作為說明性實例，式（II）的化合物，其中基團Y為NH，可透過使用，例如施陶丁格（Staudinger）亞膦酸酯反應的技術及條件來製備，例如於PCT專利公開號WO 2018/041985A1所描述，其透過引用併入本文。式（II）的化合物，其中Y為S或O，可透過使用例如於PCT專利公開號WO 2019/170710中所描述之技術及條件製備，其透過引用併入本文。以類似於WO 2019/170710中描述的，其中Y為S或O的式（I）化合物的方式，可以製備其中Y為CR 6R 7的式（II）化合物，作為說明性實例，透過使用例如合適的有機金屬化合物（例如，格氏（Grignard）化合物或有機鋰化合物）在磷原子上進行取代來製備。本領域技術人員容易選擇合適的方法及條件來製備式（II）的化合物。本發明之實施例部分還包括關於如何製備或獲得式（II）化合物及/或式（I）共軛物的指導。
本發明還涉及可透過本文所述之製備式（I）共軛物的任何方法獲得或正在獲得的式（I）共軛物。 醫藥組合物
本發明進一步涉及包含式（I）之共軛物的醫藥組合物。
醫藥組合物可包含一組式（I）之共軛物，其中該組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為大於0至約14，較佳為約1至約14，更佳為約2至約14，還更佳為約4至約14，還更佳為約5至約12，還更佳為約6至約12，還更佳為約6至約10，甚至更佳為約8。因此，該醫藥組合物可包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數為大於0至約14。較佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為約1至約14。更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為約2至約14。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為約4至約14。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為約5至約12。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為約6至約12。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為約6至約10。甚至更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數目為約8。當該受體結合分子於某些較佳的具體實施例中為抗體或抗體片段時，這樣的平均數也表示為「平均藥物抗體比（average drug To Antibody ratio，DARav）」。在這種情況下，本領域技術人員理解組合物可包含共軛物群體，其可在每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分數量上不同，且還可選擇性地包含未共軛的受體結合分子，得到之結果為每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數。
醫藥組合物可包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數量為大於0至約14，較佳為約1至約14，更佳為約1至約12，還更佳地，約2至約10，還更佳為約2至約8，還更佳為約2至約6，還更佳為約3至約5，甚至更佳為約4。因此，該醫藥組合物可包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數為大於0至約14。較佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數為約1至約14。更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數量為約1至約12。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數量為約2至約10。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數量為約2至約8。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數量為約2至約6。還更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數為約3至約5。甚至更佳地，該醫藥組合物包含一組式（I）之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數約為4。當受體結合分子於某些較佳的具體實施例中為抗體或抗體片段時，這樣的平均數也表示為「平均藥物抗體比（DARav）」。
醫藥組合物還可包含一種或多種醫藥上可接受的載體。於一具體的具體實施例中，「醫藥上可接受的」乙詞係指由監管機構或其他普遍認可的藥典核准用於動物，更具體地用於人類上的。醫藥上可接受的載體為本領域熟知的且包括例如水溶液，如水、5%葡萄糖或生理緩衝鹽水或其他溶劑或載體如乙二醇、甘油、油，如橄欖油，或適合施用於人類或非人類受試者的可注射的有機酯。具體的示例性醫藥上可接受的載體包括（可生物降解的）脂質體；由生物可降解聚合物聚（D,L-乳酸-乙醇酸（PLGA），白蛋白微球製成的微球；合成聚合物（可溶性）；奈米纖維，蛋白質-DNA複合物；蛋白質共軛物；紅u血球；或病毒體。各種基於載體的劑型包括：固體脂質奈米顆粒（solid Lipid nanoparticles，SLNs）、聚合物奈米顆粒、陶瓷奈米顆粒、水凝膠奈米顆粒、共聚胜肽奈米顆粒、奈米晶體與奈米懸浮液、奈米晶體、奈米管與奈米線、功能化奈米載體、奈米球、奈米膠囊、脂質體、脂質乳劑、脂質微管/微管柱、脂質微泡、脂質球、脂多聚物、反脂質膠束、樹枝狀聚合物、乙醇體、複合超薄膠囊、水分子體、藥效體、膠體體、類囊體、盤狀體、proniosomes載體、微球、微乳液，以及聚合物膠束。其他合適的醫藥上可接受的載體與賦形劑尤其描述於Remington's Pharmaceutical Sciences，第15 版，Mack出版公司，紐澤西州（1991年），以及Bauer 等人，Pharmazeutische Technologie，第5版，Govi-Verlag Frankfurt（1997年）。參見，例如，Remington:The Science And Practice of Pharmacy，第21版；Lippincott Williams & Wilkins公司，2005年。
於某些具體實施例中，醫藥上可接受的載體或組合物為無菌的。除了活性劑之外，醫藥組合物還可包含生理上可接受的化合物，其作為例如填充劑、充填劑、增溶劑、穩定劑、滲透劑、攝取增強劑等。生理上可接受的化合物包括，例如，碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、乳糖；葡聚醣；甘露醇等多元醇；抗氧化劑，如抗壞血酸或穀胱甘肽；防腐劑；螯合劑；緩衝液；或其他穩定劑或賦形劑。
醫藥上可接受的載體及/或生理學上可接受的化合物的選擇可取決於例如活性劑的性質，例如，溶解度、相容性（表示這些物質可一起存在於組合物中，而不會以在普通使用情況下會顯著降低醫藥組合物的藥效的方式相互作用）及/或組合物的給藥途徑。
本發明之醫藥組合物可包含一治療有效量之本文所述之式（I）之共軛物且可被構造成各種形式，例如呈固體、液體、氣體或凍乾形式，尤其可為軟膏、乳膏的形式、透皮貼劑、凝膠、粉末、片劑、溶液、氣霧劑、顆粒劑、丸劑、混懸劑、乳劑、膠囊、糖漿、液體、酏劑、萃取物、酊劑或液體萃取物，或以特別適合局部或口服給藥的形式存在。多種途徑適用於施用式（I）之共軛物，包括，但不限於，口服、局部、透皮、皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內或眼內。然而，如果需要，本領域技術人員可容易地選擇任何其他途徑。 在治療方法中之用途
如實施例所示，本發明之式（I）之共軛物可用於治療，尤其是癌症的治療。因此，本發明進一步涉及用於治療疾病之方法的本發明之式（I）的共軛物，可選擇性地包括施用一有效量的本發明之共軛物或本發明之醫藥組合物給一有此需要的受試者或患者。此外，本發明涉及用於治療疾病之方法的本發明之醫藥組合物，可選擇性地包括將一有效量的本發明之共軛物或本發明之醫藥組合物給與一有此需要的受試者或患者。該疾病可能與CD30的過度表現有關。該疾病可能與Her2的過度表現有關。該疾病可為癌症。該癌症可為實體瘤。該疾病可能是與CD30過度表現相關的癌症。該疾病可能是與Her2過度表現相關的癌症。
本發明還涉及本發明式（I）的共軛物在製備治療一疾病的藥物中之用途。本發明還涉及本發明之醫藥組合物在製備治療一疾病的藥物中之用途。該疾病可能與CD30的過度表現有關。該疾病可能與Her2的過度表現有關。該疾病可為癌症。該癌症可為實體瘤。該疾病可能是與CD30過度表現相關的癌症。該疾病可能是與Her2過度表現相關的癌症。
本發明還涉及一種治療疾病之方法，包括將一有效量的本發明式（I）之共軛物給予一有此需要的受試者或患者。本發明還涉及一種治療疾病之方法，包括將一有效量的本發明醫藥組合物給予一有此需要的受試者或患者。該疾病可能與CD30的過度表現有關。該疾病可能與Her2的過度表現有關。該疾病可為癌症。該癌症可為實體瘤。該疾病可能是與CD30過度表現相關的癌症。該疾病可能是與Her2過度表現相關的癌症。
短語「有效量」一般係指治療劑（例如，本發明之共軛物）的量，當單獨使用或與另一種治療劑組合使用時，保護一受試者免於疾病發作或促進疾病消退，係透過疾病症狀嚴重程度的降低、疾病無症狀期的頻率及持續時間的增加、或疾病折磨引起的損傷或殘疾的預防來證明該消退。可以使用技術人員已知的多種方法評估治療劑促進疾病消退的能力，例如在臨床試驗期間在人類受試者中，在預測人類療效的動物模型系統中，或透過體外試驗測定試劑的活性。確切的量將取決於治療的目的，且將由本領域技術人員使用已知技術確定（參見，例如，Lloyd（1999年）The Art，Science And Technology of Pharmaceutical Compounding）。
此外，本發明涉及如本文所述之式（I）之共軛物在治療患者癌症的方法之用途。本發明還涉及如本文所述之醫藥組合物在治療患者癌症的方法之用途。根據本發明，「患者」乙詞係指人類、非人類靈長類動物或其他動物，特別是哺乳動物如牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓，或囓齒動物如小鼠及大鼠。於特別佳的實施例中，該患者為一人類。除非另有說明，術語「患者」或「受試者」於本文中可互換使用。所有語法形式的「治療」乙詞包括治療性或預防性治療。「治療性或預防性治療」包括目的在完全預防臨床及/或病理表現的預防性治療，或目的在於改善或緩解臨床及/或病理表現的治療性治療。因此，「治療」乙詞還包括改善或預防疾病。
本發明之式（I）共軛物可以任何治療有效的劑量給藥。上限通常為在副作用方面仍然可以安全給藥的劑量。作為說明性實例，本發明之共軛物可以20 mg/kg、18 mg/kg、16 mg/kg、14 mg/kg、12 mg/kg、10 mg/kg、9 mg/kg、8 mg/kg、7 mg/kg、6 mg/kg、5 mg/kg、4 mg/kg、3 mg/kg、2 mg/kg、1 mg/kg、0.5 mg/kg or 0.25 mg/kg的一（有效）劑量來施用。該劑量可以在給定的時間量內施用，例如在三到四個星期（21天至28天）內，也稱為「治療週期」的時期內。可重複這樣的治療週期，這取決於疾病進展或消退，即治療結果。作為一個說明性實例，式（I）共軛物可例如以推薦Enhertu用於治療患有不可切除或轉移性HER2陽性乳腺癌的成年患者的量來施用。在該適應症中，Enhertu的推薦劑量為5.4 mg/kg，每3週（21天週期）靜脈輸注一次，直至疾病進展或出現不可接受的毒性。在這樣的治療週期中，該共軛物可以與Enhertu相似或相同的方式施用，即在第一次輸注中，共軛物輸注超過90分鐘，而在隨後的輸注中，如果先前輸注的耐受性良好，則施用共軛物超過30分鐘。與此一致，本發明之共軛物可透過任何合適的方式施用於患者，例如透過注射或輸注（如靜脈內輸注）。特別是，本發明之共軛物可以5mg/kg的（有效）劑量作為靜脈內輸注給藥，例如每三週一次。
如本文所用，「癌症」乙詞可表示任何癌症，例如，較佳地，該癌症選自由下列所組成之群組：乳腺癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、直腸癌、大腸癌、食道癌、胃癌、肺癌、腎癌、腎上腺癌、膀胱癌、肝癌、肉瘤、腦癌、痣與黑色素瘤、泌尿生殖系統癌症、前列腺癌、外陰鱗狀細胞癌、口咽癌、內分泌腺癌、胸癌、間皮瘤、胰腺癌、膽管癌、血癌、視網膜母細胞瘤、甲狀腺癌、輸卵管癌；進一步較佳地，該癌症為實體癌，例如，選自由下列所組成之群組：乳腺癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮癌（例如，包括肌肉片的癌症）、子宮頸癌、直腸癌、大腸癌、肛門癌、食道癌、胃癌、肺癌、腎癌、腎上腺癌、膀胱癌、肝癌、肉瘤（例如，包括骨肉瘤與卡波西肉瘤）、腦癌（例如，包括垂體瘤）、痣與黑色素瘤癌症、皮膚癌（例如，包括鱗狀細胞癌與黑色素瘤）、泌尿生殖系統癌症（例如，輸尿管與膀胱癌、睾丸癌、前列腺癌、陰莖癌）、前列腺癌、外陰鱗狀細胞癌、口咽癌、內分泌腺癌、胸癌、間皮瘤、胰腺癌、膽管癌、血癌（例如，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵、骨髓纖維化）、眼癌（例如，包括視網膜母細胞瘤）、神經內分泌腫瘤、未知原發性癌症（Cancer of unknown Primary，CUP））。較佳地，該癌症為實體及/或轉移性癌症，進一步較佳地，該癌症選自由下列所組成之群組：肺癌、卵巢癌、甲狀腺癌、非鱗狀非小細胞肺癌、非黏液性卵巢癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、子宮內膜癌、子宮癌、輸尿管癌、膀胱癌和輸卵管癌。該癌症還可選自由下列所組成之群組：青少年癌症、腎上腺皮質癌、肛門癌、星形細胞瘤、非典型畸胎瘤樣/橫紋肌樣瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦腫瘤、乳腺癌、支氣管腫瘤、子宮頸癌、脊索瘤、慢性骨髓增生性腫瘤、結直腸癌、顱咽管瘤、胚胎性腫瘤、髓母細胞瘤和其他中樞神經系統、童年（腦癌）、子宮內膜癌（子宮癌）、室管膜瘤、童年（腦癌）、食管癌、敏感性神經胚細胞瘤（頭頸癌）、尤文肉瘤（骨癌）、顱外生殖細胞腫瘤、童年、性腺外生殖細胞腫瘤、輸卵管癌、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌、胃腸道間質瘤（astrointestinal Stromal Tumors，GIST）、妊娠滋養細胞疾病、頭頸癌、心臟腫瘤、肝細胞（肝）癌、組織細胞增生症、朗格漢斯細胞、下嚥癌（頭頸癌）、眼內黑色素瘤、胰島細胞瘤、胰腺神經內分泌腫瘤、卡波西肉瘤（軟組織肉瘤）、腎（腎細胞）癌、朗格漢斯細胞組織細胞增生症、喉癌（頭頸癌）、唇癌和口腔癌（頭頸癌）、肝癌、肺癌、男性乳腺癌、黑色素瘤、黑色素瘤、眼內（眼睛）、默克爾細胞癌（皮膚癌）、間皮瘤、惡性、口腔癌（頭頸癌）、多發性內分泌腫瘤綜合徵、鼻腔與鼻竇癌（頭頸癌）、鼻咽癌（頭頸癌）、神經母細胞瘤、非小細胞肺癌、口腔癌、唇癌和口腔癌以及口咽癌（頭頸癌）、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳頭狀瘤病（兒童喉）、副神經節瘤、副鼻竇和鼻腔癌（頭頸癌）、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌（頭頸癌）、嗜鉻細胞瘤、垂體瘤、胸膜肺母細胞瘤（肺癌）、原發性中樞神經系統（Central Nervous System，CNS）淋巴瘤、原發性腹膜癌、前列腺癌、肺部炎性肌纖維母細胞瘤（肺癌）、直腸癌、腎細胞（腎）癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、童年（軟組織肉瘤）、唾液腺癌（頭頸癌）、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、皮膚鱗狀細胞癌—見皮膚癌、原發性隱匿性鱗狀頸癌、轉移性（頭頸癌）、胃（胃）癌、睾丸癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、氣管支氣管腫瘤（肺癌）、腎盂與輸尿管移行細胞癌（腎（腎細胞）癌）、輸尿管與腎盂、移行細胞癌（腎（腎細胞）癌、尿道癌、子宮癌、子宮內膜癌、子宮肉瘤、陰道癌、血管瘤（軟組織肉瘤）、外陰癌、腎母細胞瘤，以及ㄧ其他兒童腎臟腫瘤。
「腫瘤」係指由錯誤調節的細胞增殖形成的一群細胞或組織，特別是癌症。腫瘤可表現出部分或完全缺乏與正常組織的結構組織及功能協調，且通常形成明顯的組織塊，其可為良性的也可為惡性的。特別地，「腫瘤」乙詞係指惡性腫瘤。「腫瘤」乙詞可指實體瘤。根據一具體實施例，「腫瘤」或「腫瘤細胞」等詞還指非實體癌及非實體癌的細胞，例如白血病細胞。根據另一具體實施例，相應的非實體癌或其細胞不包括在「腫瘤」及「腫瘤細胞」等詞中。
「轉移」係指癌細胞從其原始部位擴散到身體的另一部分。轉移的形成是一個非常複雜的過程，通常涉及癌細胞從原發性腫瘤脫離，進入身體循環並在身體其他部位的正常組織內生長。當腫瘤細胞轉移時，新腫瘤稱為繼發性或轉移性腫瘤，其細胞通常與原發腫瘤中的細胞相似。這表示，例如，如果乳腺癌轉移到肺部，則繼發性腫瘤由異常的乳腺細胞組成，而非由異常的肺細胞組成。該在肺部的腫瘤稱為轉移性乳腺癌，而非肺癌。 發明項目本發明進一步涉及以下項目： 1. 一種具有式（I）之共軛物： （I） 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： RBM為受體結合分子； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。 2. 如第1項所述之共軛物，其中： R 3為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 3為H； R 4當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 4當存在時為H； R 5當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 5當存在時為H； R 6當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 6當存在時為H；以及 R 7當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 7當存在時為H。 3. 如第1項或第2項所述之共軛物，其中 為雙鍵；V不存在；X為 ；且R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。 4. 如第1項或第2項所述之共軛物，其中 為化學鍵;V為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，V為H；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；更佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H；R 4為H或一可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 4為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，R 4為H。 5. 如前述任一項所述之共軛物，其中該受體結合分子係選自由下列所組成之群組：抗體、抗體片段，以及具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子。 6. 如第5項所述之共軛物，其中該受體結合分子為抗體，較佳為其中該抗體係選自由下列所組成之群組：單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體，以及單一結構域抗體，例如駱駝或鯊魚單一結構域抗體。 7. 如第5項所述之共軛物，其中該受體結合分子為抗體片段， 較佳地，其中該抗體片段為雙價抗體片段， 更佳地，其中該雙價抗體片段選自由下列所組成之群組：(Fab) 2'-片段、雙價單鏈Fv片段、雙親和力重新標靶（dual Affinity re-targeting，DART）抗體，以及雙抗體；或 較佳地，其中抗體片段為單價抗體片段， 更佳地，其中該單價抗體片段選自由下列所組成之群組：Fab片段、Fv片段，以及單鏈Fv片段（scFv）。 8. 如第5項所述之共軛物，其中該受體結合分子為具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子， 較佳地，其中該具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子選自由下列所組成之群組：基於脂質運載蛋白家族多胜肽的突變蛋白、glubody重組蛋白、基於錨蛋白支架的蛋白、基於結晶支架的蛋白、adnectin重組蛋白、avimer重組蛋白、DARPin，以及親和體（affibody）。 9. 如前述任一項所述之共軛物，其中Y為NH。 9a.   如第9項所述之共軛物，其中該受體結合分子為抗體。 10. 如前述任一項所述之共軛物，其中該連接子L為可切割的。 11. 如第10項所述之共軛物，其中該連接子L可被蛋白酶、葡醣醛酸糖苷酶、硫酸酯酶、磷酸酶、酯酶，或雙硫化物還原切割。 12. 如第11項所述之共軛物，其中該連接子L可被蛋白酶切割，較佳被組織蛋白酶，例如組織蛋白酶B切割。 13. 如前述任一項所述之共軛物，其中該連接子L包含纈胺酸-瓜胺酸分子部分。 14. 如第13項所述之共軛物，其中該連接子L為： ， 其中 #表示與Y的連接點，*表示與該喜樹鹼分子部分的連接點。 15. 如第1項至第12項任一項所述之共軛物，其中該連接子L包含纈胺酸-丙胺酸分子部分。 16. 如第15項所述之共軛物，其中該連接子L為： ， 其中*表示與Y的連接點， ##表示與喜樹鹼分子部分的連接點。 17. 如第1項至第9項任一項所述之共軛物，其中該連接子為不可切割的。 18. 如前述任一項所述之共軛物，其中R 1為第一聚亞烷基二醇單元R F。 19. 如第18項所述之共軛物，其中該第一聚亞烷基二醇單元R F包含1至100個具有以下結構的次單元： ； 較佳地，其中R F為： ， 其中： 表示O的位置； K F選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；較佳地，K F為H；以及 o為1至100之間的整數。 20. 如第18項或第19項所述之共軛物，其中R 1為第一聚乙二醇單元。 21. 如第17項所述之共軛物，其中該第聚乙二醇單元R F包含1至100個具有以下結構的次單元： ; 較佳地，其中R F為： ， 其中 表示O的位置； K F選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；較佳地，K F為H；以及 o為1至100之間的整數。 21a.  如第21項所述之共軛物，其中K F為H， 21b. 如第21項或第21a項所述之共軛物，其中o的範圍為8至30。 21c. 如第21b項所述之共軛物，其中o的範圍為20至28。 21d. 如第21c項所述之共軛物，其中o為22、23、24、25，或26。 22. 如第1項至第13項、第15項以及第17項至第21d項任一項，特別為第18項至第21d項任一項所述之共軛物，其中該連接子包含一第二間隔單元A，該第二間隔單元A為一基團Z，該基團Z具有以下結構： ， 其中： L P為一並行的連接子單元； R S各自獨立地為一第二聚亞烷基二醇單元； M各自獨立地為一結合R S及L P的化學鍵或分子部分； s*為一1至4之間的整數；較佳地，s*為1；以及 該波浪線表示與-Y-及該連接子的另一部分（如果存在）或與喜樹鹼分子部分（-C）的連接點。 23. 如第22項所述之共軛物，其中M各自獨立地選自由下列所組成之群組：-NH-、-O-、-S-、-C(O)-O-、-C(O)-NH-，以及-(C 1-C 10)亞烷基-；較佳地每個M為-O-。 24. 如第22項至第23項任一項所述之共軛物，其中該第二聚亞烷基二醇單元R S各自獨立地包含1至100個具有以下結構的次單元： ； 較佳地，其中R S各自獨立地， ， 其中： 表示M在Z基團中的位置； K S選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；較佳地，K S為H；以及 p為1至100之間的整數。 25. 如第22項至第24項任一項所述之共軛物，其中R S各自獨立地為一第二聚乙二醇單元。 26. 如第25項所述之共軛物，其中該第二聚乙二醇單元R S各自獨立地包含1至100個具有以下結構的次單元： ； 較佳地，其中R S各自獨立： ， 其中 表示M在Z基團中的位置； K S選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；較佳地，K S為H；以及 p為1至100之間的整數。 27. 如前述任一項所述之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C係選自由下列所組成之群組：依沙替康（exatecan）、SN38、喜樹鹼、托泊替康（topotecan）、伊立替康（irinotecan）、貝洛替康（belotecan）、魯托替康（lurtotecan）、盧比替康（rubitecan）、喜拉替康（Silatecan）、可替康（cositecan），以及吉馬替康（gimatecan）。 28. 如第27項所述之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C為具有以下公式之依沙替康： ， 較佳地具有下式： 。 29. 如第28項所述之共軛物，其中該依沙替康係透過該胺基與連接子L結合。 30. 如前述任一項所述之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數目為1至14，較佳為2至14，更佳為4至14，還更佳為5至12，還更佳為6至12，還更佳為7至10，甚至更佳為8。 31. 如第1項至第29項任一項所述之共軛物，其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的數目為1至14，較佳為1至12，更佳為2至10，還更佳為2至8，還更佳為2至6，還更佳為3至5，甚至更佳為4。 32. 如第1項至第29項任一項所述之共軛物，其中m為一1至4之間的整數，較佳為1或2，更佳為1；以及 n為一1至20之間的整數，較佳為1至10，更佳為2至10，還更佳為4至10，還更佳為6至10，還更佳為7至10，甚至更佳為8。 33. 如第1項至第29項任一項所述之共軛物，其中m為一1至4之間的整數，較佳為1或2，更佳為1；以及 n為一1至20之間的整數，較佳為1至10，更佳為2至8，還更佳為3至6，還更佳為4至5，甚至更佳為4。 33a. 一種具有式（I）之共軛物： （I）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： RBM為抗體； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NH； R 1為具有以下結構之聚乙二醇單元： ， 其中： 表示O的位置； K F為H；以及 o為8至30之間的整數； R 3為H； R 4為H； L為具有以下結構之連接子； ， 其中 #表示與Y的連接點，*表示與該喜樹鹼分子部分（C）的連接點。 C為喜樹鹼分子部分； m為1；以及 n為1至10之間的整數。 33b. 如第33a項所述之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C為具有下式之依沙替康： 。 33c. 如第33a項或第33b項所述之共軛物，其中該依沙替康係透過該胺基與連接子L結合。 33d. 如第33a項至第33c項任一項所述之共軛物，其中o的範圍為20至28。 33e. 如第33d項所述之共軛物，其中o為22、23、24、25，或26。 33f. 如第33a項至第33e項任一項所述之共軛物，其中n的範圍為2至10。 33g. 如第33f項所述之共軛物，其中n為4。 33h. 如第33f項所述之共軛物，其中n為8。 33i. 一種具有式（Ia）之共軛物： （Ia）， 其中RBM為抗體。 34. 一種具有式（II）之化合物： （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數。 35. 如第34項所述之化合物，其中 R 3為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 3為H； R 4當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 4當存在時為H； R 5當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 5當存在時為H； R 6當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 6當存在時為H；以及 R 7當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 7當存在時為H。 36. 如第34項或第35項所述之化合物，其中 為三鍵；V不存在；X為 ；且R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H。 37. 如第34項或第35項所述之化合物，其中 為雙鍵；V為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，V為H；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H；R 4為H或或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 4為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 4為H。 38. 如第34項至第37項任一項所述之化合物，其中RBM、V、X、Y、R 1、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、L、C、m，以及n如第1項至第33i項任一項所定義；較佳地，Y為NH。 39. 一種製備具有式（I）之共軛物的方法，該方法包括： 使式（II）之化合物 （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數；以及 與具有式（III）之含硫醇分子反應 （III）， 其中RBM為受體結合分子；以及 n為1至20之間的整數； 得到具有以下公式（I）之化合物 （I）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 當在式（II）之化合物的 為三鍵時， 為雙鍵；或 當在式（II）之化合物的 為雙鍵時， 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或（C 1-C 8）烷基； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。 40. 如第39項所述之方法，其中： R 3為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 3為H； R 4當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 4當存在時為H； R 5當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 5當存在時為H； R 6當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 6當存在時為H；以及 R 7當存在時為H或(C 1-C 8)烷基；較佳地，R 7當存在時為H。 41. 如第39項或第40項所述之方法，其中 為三鍵；V不存在；X為 ；且R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H，且 為一雙鍵。 42. 如第39項或第40項所述之方法，其中 為雙鍵；V為H或(C 1-C 8)烷基，較佳地，V為H；X為 ；R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 3為H；R 4為H或或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 4為H或(C 1-C 8)烷基，更佳地，R 4為H，且 為一化學鍵。 43. 如第39項至第42項任一項所述之方法，其中該反應在中性pH值或弱鹼性條件下進行，較佳為在pH 6至10的條件下進行。 44. 如第39項至第43項任一項所述之方法，進一步包括在還原劑的存在下還原該受體結合分子的至少一個雙硫鍵以形成硫醇基團（SH）。 45. 如第44項所述之方法，其中該還原劑選自由下列所組成之群組：三（2-羧乙基）膦（tris（2-carboxyethyl）phosphine，TCEP）、雙硫蘇糖醇（dithiothreitol誒DTT）、連二亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉，以及亞硫酸鈉； 較佳地，其中該還原劑為三（2-羧乙基）膦（TCEP）。 46. 如第44項或第45項所述之方法，其中至少一個雙硫鍵的還原包含每個待還原的雙硫鍵使用約1至約3當量，較佳為約1至約2當量，更佳為約1當量的還原劑。 47. 如第39項至第46項任一項所述之方法，其中式（III）的含硫醇分子以每個硫醇基團（SH）與約1至約4當量，較佳為約1至約3當量，更佳為約1至約2當量，還更佳為約1.5當量的式（II）化合物反應。 48. 如第39項至第47項任一項所述之方法，其中式（II）化合物與式（III）的含硫醇分子的反應在水性介質中進行。 49. 如第39項至第48項任一項所述之方法，其中RBM、V、X、Y、R 1、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、L、C、m，以及n如第1項至第33i項任一項所定義；較佳地，Y為NH 2。 50. 一種透過第39項至第49項任一項所述之方法可獲得或正在獲得之式（I）之共軛物。 51. 一種包含如第1項至第33i項或第50項任一項所述之共軛物的醫藥組合物。 52. 如第51項所述之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含如第1項至第33項任一項所述之共軛物的群體，且其中在該組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為大於0至約14，較佳為約1至約14，更佳為約2至約14，還更佳為約4至約14，還更佳為約5至約12，還更佳為約6至約12，還更佳為約6至約10，甚至更佳為約8。 53. 如第51項所述之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含如第1項至第33項任一項所述之共軛物的群體，且其中在該組合物中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分的平均數量為大於0至約14，較佳為約1至約14，更佳為約1至約12，還更佳為約2至約10，還更佳為約2至約8，還更佳為約2至約6，還更佳為約3至約5，甚至更佳為約4。 54. 一種如第1項至第33i項或第50項任一項所述之共軛物在一種治療疾病之方法中的用途。 55. 如第54項所述之共軛物的用途，其中該疾病為癌症。 55a. 如第55項所述之共軛物的用途，其中該癌症為實體瘤。 56. 一種如第51項至第53項任一項所述之醫藥組合物在一種治療疾病之方法中的用途。 57. 如第56項所述之醫藥組合物的用途，其中該疾病為癌症。 58. 如第57項所述之醫藥組合物的用途，其中該癌症為實體瘤。 59. 一種如第1項至第33i項或第50項任一項所述之共軛物在製備一種治療疾病之藥物的用途。 60. 如第59項之用途，其中該疾病為癌症。 61. 如第60項之用途，其中該癌症為實體瘤。 62. 一種如第51項至第53項任一項所述之醫藥組合物在製備一種治療疾病之藥物的用途。 63. 如第62項之用途，其中該疾病為癌症。 64. 如第63項之用途，其中該癌症為實體瘤。 65. 一種治療疾病的方法，包含對一有此需要的受試者或患者施用有效量之一種如第1項至第33f項或第50項任一項所述之共軛物。 66. 如第65項之方法，其中該疾病為癌症。 67. 如第66項之方法，其中該癌症為實體瘤。 68. 一種治療疾病的方法，包含對有此需要的受試者或患者施用有效量之一種如第51項至第53項任一項所述之醫藥組合物。 69. 如第68項之方法，其中該疾病為癌症。 70. 如第69項之方法，其中該癌症為一實體瘤。 *****
應當注意的是，如本文所用，單數形式「一」、「一個」以及「該」包括複數指代，除非上下文清楚地另有說明。因此，例如，提及「一種試劑」包括一種或多種這樣的不同試劑，提及「該方法」包括提及本領域普通技術人員已知的可被修改或替代本文所述之方法的等效步驟及方法。
除非另有說明，在一系列要素之前的「至少」乙詞應被理解為係指該系列中的每個要素。本領域的技術人員僅使用常規實驗就會認識到或能夠確定本文所述之本發明的具體實施例的許多等同物。這樣的等價物目的在於包括在本發明中。
此處使用之「及/或」乙詞包括「及」、「或」以及「由該術語連接的要素的所有或任何其他組合」的含義。
「小於」或反過來「大於」等詞不包括該具體數字。例如，小於20表示小於指示的數字。類似地，多於或大於表示多於或大於指示的數目，例如大於80%表示多於或大於80%的指示數。
貫穿本說明書及隨後的申請專利範圍，除非上下文另有要求，否則詞語「包含」以及例如「含有」以及「包括」的變體將被理解為暗示包括規定的整數或步驟或一組整數或步驟，但不排除任何其他整數或步驟或一組整數或步驟。當於本文中使用時，「包含」乙詞可被「含有」或「包括」等詞替代，或者有時當於本文中使用時被「具有」乙詞替代。當於本文中使用時，「由...組成」不包括任何未指定的元素、步驟或成分。
「包括」乙詞係指「包括，但不限於，」。「包括」以及「包括，但不限於，」可互換使用。
如本文所用，「約」、「大約」或「基本上」等詞係指給定值或範圍的20%以內，較佳為15%以內，較佳為10%以內，更佳為5%以內。它還包括具體數字，即「大約20」包括20的數量。
應當理解的是，本發明不限於本文所述之特定方法、方案、材料、試劑以及物質等，因此可以變化。此處使用的術語僅用於描述特定具體實施例之目的，目的並不在於限制本發明之範圍，本發明之範圍僅由申請專利範圍限定。
本說明書全文引用的所有出版物（包括所有專利、專利申請、科學出版物、說明書等），無論是上文還是下文，均透過引用整體併入本文。本文中的任何內容都不應被解釋為承認本發明無權憑藉在先發明而早於此類公開。如果透過引用併入的材料與本說明書相抵觸或不一致，本說明書將取代任何此類材料。
本文引用之所有文件及專利文件的內容透過引用整體併入。 實施例
本發明及其優點的更好理解將從以下實施例中顯而易見，提供這些實施例僅用於說明之目的。這些實施例無意以任何方式限制本發明之範圍。 一般資訊、材料與方法 化學品、溶劑與抗體
化學品及溶劑購自Merck公司（默克集團，德國）、TCI（東京化成工業株式會社，日本）、Iris生物技術公司（IrisBiotech GmbH，德國）、MCE公司（MedChemExpress，美國），以及Carl Roth（Carl Roth GmbH+ Co. KG，德國），無需進一步純化即可使用。除非另有說明，否則胺基酸都具有其天然存在的構型（亦即，L構型）。乾溶劑購自Merck公司（默克集團，德國）。曲妥珠單抗購自羅氏公司（Hoffmann-La RocheAG，瑞士）。Enhertu購自Daichi-Sankyo（Daiichi Sankyō K.K，日本），布倫妥昔單抗由Evitria公司（evitriaAG，瑞士）生產。PEG24購自BiochemPEG（Pure Chemistry Scientific 公司，美國）。 製備型高效液相層析（ HPLC ）
製備型HPLC在BÜCHIPure C-850 Flash-Prep系統（BÜCHILabortechnikAG，瑞士）上使用小量用的VP 250/10 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum管柱（Macherey-Nagel GmbH & Co. Kg，德國）。使用以下梯度：方法C：（A = H 2O + 0.1%TFA（三氟乙酸），B = MeCN（乙腈）+ 0.1%TFA，流速6 ml/分鐘，30%B 0-5分鐘，30-70%B 5-35分鐘，99%B 35-45分鐘。針對較大規模，使用具有以下梯度的VP 250/21 Macherey-Nagel Nucleodur C 18HTec Spum 管柱（Macherey-Nagel GmbH & Co. Kg，德國）：方法 D：（A = H 2O + 0.1%TFA（三氟乙酸），B = MeCN（乙腈）+ 0.1%TFA，流速14 ml/分鐘，30%B 0-5分鐘，30-70%B 5-35分鐘，99%B 35-45分鐘。 LC/MS
針對抗體及ADCs，使用配備四元溶劑管理器的Waters H級儀器、Waters樣品管理器-FTN、WatersPDA檢測器，以及配備Acquity UPLC蛋白質BEH C4層析管柱（300 Å，1.7 µm，2.1 mm x 50 mm）的Waters層析管柱管理器分析小分子、連接子有效載荷、抗體。此處，樣品在80℃的管柱溫度下流洗。使用以下梯度：A：0.1%甲酸的H 2O 溶液；B：含 0.1%甲酸的MeCN。25%B 0-1分鐘，0.4 mL/分鐘，25-95%B 1-3.5分鐘 0.2 mL/分鐘，95%B 3.5-4.5分鐘 0.2 mL/分鐘，95-25%B 4.5-5分鐘 0.4 mL/分鐘，25-95%B 5-5.5分鐘 0.4 mL/分鐘，95-25%B 5.5-7.5分鐘 0.4 mL/分鐘。使用Waters XEVO G2-XS QT的分析儀進行質量分析。施用40 kV的錐電壓以正離子模式電離蛋白質。使用 MaxEnt 1分析原始數據。使用Acquity UPLC-BEH C18層析管柱（300 Å，1.7 µm，2.1 mm x 50 mm）分析小分子與連接子有效載荷。此處，樣品在45℃的管柱溫度下以0.4 mL/分鐘的流速流洗。使用以下梯度：A：0.1%甲酸水溶液；B：含 0.1%甲酸的MeCN。2%B 0-1分鐘，2-98%B 1-5分鐘，98%B 5-5.5分鐘，98-2%B 5.5-6分鐘，2%B 6-7分鐘。 製備型粒徑篩析層析法（ Size-Exclusion-Chromatography ， SEC ）
使用配備有F9-C級分收集器的ÄKTAPure FPLC 系統（GE Healthcare，美國）透過粒徑篩析層析純化蛋白質。 ADC 濃度測定
在96孔盤中使用Pierce™ Rapid GoldBCA 蛋白測定套組（Thermo Fisher Scientific公司，美國）與Bradford試劑B6916（Merck公司，德國）以及牛gamma球蛋白的預稀釋蛋白測定標準品測定ADC濃度（Thermo Fisher Scientific公司，美國）。兩種測定的結果均進行算術平均。 製備用於 MS 的 ADC 與抗體的樣品
將0.5 μlPNGase-F溶液（Pomega公司，德國，重組，自10 u/μl的伊莉莎白菌Elizabethkingia miricola中選殖）以及5 μL 100 mM DTT水溶液加入至含50 μl 0.2 mg/mL抗體或ADC的PBS溶液中，將溶液於37℃下作用至少2小時。對樣品進行LC/MS，每個樣品注入2 µl。 分析型粒徑篩析層析法（ SEC ）
ADCs的分析粒徑篩析層析（A-SEC）在配有DAD檢測器、分流進樣器FT（4℃）、管柱溫箱H（25℃）以及二元泵F（Thermo Fisher Scientific公司，美國）的Vanquish Flex UHPLC系統上進行，使用MAbPac SEC-1 300 Å，4 x 300 mm層析管柱（Thermo Fisher Scientific公司，美國），流速為0.15 mL/分鐘。使用pH 7的磷酸鹽緩衝液（20 mM Na 2HPO 4/NaH 2PO 4、300 mM NaCl、5%V/v 異丙醇作為流動相）在30分鐘等度梯度期間進行不同ADC/mAb群體的分離。8 µgADC/mAb加載到層析管柱上用於A-SEC 分析。在波長220以及280 nm處記錄UV層析圖。 分析型疏水相互作用層析（ Hydrophobic Interaction Chromatography ， HIC ）
測量是在配備MabPac HICButyl 4.6 x 100 mm層析管柱（Thermo Fischer Scientific公司，美國）的Vanquish Flex UHPLC系統（2.9）上進行的。不同ADC/抗體的分離透過以下梯度來進行：A：1 M (NH 4) 2SO 4、500 mM NaCl、100 mM NaH 2PO 4PH 7.4B：20 mM NaH 2PO4，20%（v/v）異丙醇，pH 7.4。0%B：0-1分鐘，0-95%B：1-15分鐘，95%B：15-20分鐘，95-0%B：20-23分鐘，0%B：23-25分鐘，流速為700 µL/分鐘。每次分析將15 µg樣品加載至層析管柱上。在波長220以及280 nm處記錄UV層析圖。 將基於 P5 的依沙替康連接子 - 有效負載構築物與抗體結合以達到 DAR8 的一般方法
將50 μl的10.0 mg/ml的共軛緩衝液（新鮮製備的100 mM NH 4HCO 3-緩衝液，pH 8.0）抗體溶液與3.33 μl的10 mMTCEP的P5-共軛緩衝液混合。緊接著，加入1.67 µl的溶解於DMSO中的40 mMP5-依沙替康構築物溶液。將混合物以350 rpm及在25℃下搖動16小時。使用25 ml Superdex™ 200 Increase 10/300GL（Cytiva公司，瑞典）以及0.8 ml/分鐘的流速，以無菌PBS（Merck公司）流洗，透過製備型粒徑篩析層析純化反應混合物。合併含有抗體的級分並透過旋轉過濾（Amicon® Ultra-2mL MWCO：30 kDa，Merck公司，德國）濃縮。 體外細胞毒性
為了研究ADCs的直接細胞毒性，以布倫妥昔單抗ADCs對各種細胞作用4天，以曲妥珠單抗ADCs作用7天，ADCs濃度逐漸增加（0-3 µg/ml），以產生劑量反應曲線。使用終濃度為55 µM（Sigma-Aldrich公司）的刃天青細胞活性染料分析殺傷效果，方法是將培養基中對照細胞的螢光除以ADC處理的細胞的螢光。在酶標儀Infinite M1000Pro（Tecan公司）上測量波長590 nM的螢光發射。 體外旁觀者能力
為了分析ADCs對標靶陰性細胞的旁觀者活性，將20,000個標靶陽性細胞（用於曲妥珠單抗ADCs的SKBR-3細胞）與增加濃度的ADCs（0-3 µg/ml）一起作用。5天後，將一半的細胞培養上清液體積轉移至5,000個標靶陰性細胞（用於曲妥珠單抗ADCs的MDA-MB-468細胞）並再作用5天。如上所述，透過基於刃天青的生存力測量來分析殺傷效果。 DNA 損傷
透過基於流式細胞儀的讀數分析作為對ADCs或小分子（依沙替康以及喜樹鹼）反應的DNA損傷標記物的上調。為此，將50,000個Her2陽性 SKBR-3細胞與5 µg/ml ADCs或5 nM小分子一起作用24至72小時。作用時間結束後，使用LIVE/DEAD™ Fixable Aqua（Thermo Fisher Scientific公司）對細胞進行染色，然後根據製造商的說明使用BD Cytofix/Cytoperm Kit（BD Biosciences公司）進行固定及透化。使用抗裂解的PARP（Asp214）PE、抗 H 2AX（pSer139）AF647，以及抗活性凋亡蛋白酶3 FITC（所有皆為BD Biosciences公司產品）對DNA損傷標記物進行細胞內染色。在Cytoflex LX流式細胞儀（Beckmann Coulter公司）上獲取細胞。 構築物之血清穩定性
將40 μl正常大鼠血清（至少 80%大鼠血清（Thermo Fisher Scientific公司，美國）中含有濃度為0.4 mg/ml的相應ADCs）以UFC30GV0S離心過濾裝置（Merck公司，德國）進行無菌過濾，並於37℃下培養1、3以及7天。第0天的樣品直接進行進一步處理。
透過離心去除50 µl的抗人類IgG（Fc 特異性）瓊脂糖漿（Sigma Aldrich公司，美國）的上清液，剩餘樹脂以300 µLPBS洗滌 3 次。將樹脂與40 μl的血清-ADC混合物於室溫下作用1小時。然後，去除上清液，樹脂以300 µLPBS洗滌 3 次。隨後於室溫下以60 μl的100 mM甘胺酸緩衝液pH 2.3作用5分鐘。使用具有7K MWCO的0.5 mL Zeba™ 離心去鹽管柱（Thermo Fisher Scientific公司，美國）將該溶液重新緩衝至PBS。如上所述，進一步處理樣品以用於MS測量。0天樣品在血清與ADC混合後直接以同樣的方式進行分析。 血清穩定性後進行體外毒性測量
50 μl的正常大鼠血清（Thermo Fisher Scientific公司，美國）或人類血清，含有相應的ADCs（曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康或Enhertu，在至少80%的大鼠中濃度為0.4 mg/ml 血清（Thermo Fisher Scientific公司，美國）以UFC30GV0S 離心過濾裝置（Merck公司，德國）進行無菌過濾，並於37℃下培養0、1、3以及7天。第0天的樣品直接進一步處理。在各自的作用時間後，將樣品在液態氮中深度冷凍並儲存於-80℃，直到測量細胞毒性。含有假設起始濃度為0.4 mg/mL的ADCs的血清樣本在未經任何進一步處理下直接稀釋，以達到ADCs濃度逐漸增加（0-3 µg/ml）的濃度梯度，進而產生劑量-反應曲線。之後測量SKBR3以及MDA-MB-468細胞的體外細胞毒性，完全如前所述。 體內藥物動力學（ Pharmacokinetics ， PK ）研究
雌性Sprague-Dawley大鼠透過尾靜脈以5 mgADC/公斤體重（推注）以及相應的ADC進行靜脈內治療。在0.5小時、1小時、4小時、24小時、48小時、96小時、168小時、336小時，以及504小時後各收集約1 mL的血液。血液樣本於室溫下靜置30分鐘以凝結。離心並收集上清液後，從樣品中分離出血清。透過以下ELISA分析血清樣品。 以 ELISA 分析體內樣品
方法 1：為了評估ADCs在體內的藥物動力學（PK），在不同時間點測量ADC處理的SD大鼠血清中的總抗體濃度。在 2000 - 15.6 ng/ml的大鼠血清中分析總人源化抗CD30抗體。Nunc 96孔盤（100 µL/孔）塗覆有以PBS稀釋的重組人類CD30/TNFRSF8（所需濃度：0.25 µg/mL），並以PCR 鋁箔密封。將孔盤在冰箱內作用以將溫度保持在2-8℃之間過夜。以300 µl的PBST洗滌該塗覆的孔盤3次。加入200 μl/孔的阻隔液（含2%白蛋白的PBST），密封該孔盤並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該塗覆的孔盤3次。添加100 µl/孔的製備的標準品（2000 - 15.6 ng/ml的相應ADCs）、QC以及測試樣品，密封該孔盤並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該孔盤3次。添加100 µl/孔的抗人類IgG（gamma鏈特異性）-過氧化物酶抗體（以PBS進行1:60000稀釋）並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該孔盤3次。加入50 μl/孔的TMB，密封該孔盤並於室溫下作用15分鐘。添加50 µl/孔的1 M硫酸。使用Tecan微量盤分析儀，測量450 nm波長下的吸光度。
方法 2：為了評估ADCs在體內的藥物動力學（PK），在不同時間點測量以ADC處理的SD大鼠或SCID小鼠血清中的總抗體濃度。在 2000 - 15.6 ng/ml 範圍內分析血清中的總抗體。Nunc 96孔盤（100 µL/孔）塗覆有以PBS稀釋的抗體標靶（Her2，用於基於曲妥珠單抗的ADCs；所需濃度：0.25 µg/mL），並以PCR鋁箔密封。將孔盤在冰箱中作用以將溫度保持在2-8℃之間過夜。以300 µl的PBST洗滌該塗覆的孔盤3次。加入200 μl/孔的阻隔液（含 2% 白蛋白的PBST），密封該孔盤並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該塗覆的孔盤3次。添加100 µl/孔的製備的標準品（2000 - 15.6 ng/ml的相應ADCs）、QC以及測試樣品，密封該孔盤並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該孔盤3次。添加100 µl/孔的抗人類IgG（gamma鏈特異性）-過氧化物酶抗體（以PBS進行1:60000稀釋）並於室溫下作用 1小時。以300 µl的PBST洗滌該孔盤3次。加 50 µl/孔的TMB，密封該孔盤並於室溫下作用15分鐘。添加 50 µl/孔的1 M硫酸。使用Tecan微量盤分析儀，測量450 nm波長下的吸光度。 為了評估ADCs在體內的穩定性，在不同時間點測量以ADC處理的SD大鼠血清中的完整ADC濃度。在2000 - 15.6 ng/ml 範圍內對大鼠血清中的完整ADC進行分析。Nunc96孔盤（100 µl/孔）塗覆有以PBS稀釋的兔抗依沙替康單株抗體（所需濃度：1 µg/ml），並以PCR鋁箔密封。將孔盤在冰箱中作用以將溫度保持在2-8℃之間過夜。以300 µl的PBST洗滌該塗覆的孔盤3次。加入200 μl/孔的阻隔液（含 2% 白蛋白的PBST），密封該孔盤並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該塗覆的孔盤3次。100 µl/孔的製備的標準品（添加 2000 - 15.6 ng/ml的相應ADCs）、QC以及測試樣品，密封該孔盤並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該孔盤3次。100 µl/孔的山羊抗人類IgG（H+L）預吸收（以PBS進行1:25000稀釋），並於室溫下作用1小時。以300 µl的PBST洗滌該孔盤3次。加入100 µl/孔的TMB，密封該孔盤並於室溫下作用10分鐘。添加100 µl/孔的1 M硫酸。使用Tecan微量盤分析儀，測量450 nm波長下的吸光度。 透過 MS 分析血清樣本
透過離心去除50 µl的抗人類IgG（Fc特異性）瓊脂糖漿（SigmaAldrich公司，美國）的上清液，以300 µL的PBS洗滌剩餘樹脂3次。將樹脂與100 μl的血清一起作用，該血清是在循環一定時間後從以相應ADC處理的囓齒類動物中收集的，於室溫下培養1小時。然後，去除上清液，以300 µL的PBS洗滌該樹脂3次。隨後於室溫下以60 μl的100 mM甘胺酸緩衝液pH 2.3作用5分鐘。使用具有7K MWCO的0.5 mL Zeba™ 離心去鹽管柱（Thermo Fisher Scientific公司，美國）將該溶液重新緩衝至PBS。如上所述，進一步處理樣品以用於MS測量。 實施例 1 ：連接子有效載荷合成 聚乙二醇化苯基疊氮化物的合成之一般方法 1
於25 mL圓底燒瓶中，將50 mg的4-疊氮基-2-羥基苯甲酸甲酯（0.259 mmol，1.0當量）、0.518 mmol所需的PEG-醇（2.0當量）以及82 mg的三苯基膦（0.311 mmol，1.2當量）溶解於5 mL的無水THF中，並將反應混合物冷卻至0℃。滴加54 mg的偶氮二甲酸二異丙酯（0.311mmol，1.2當量），並在攪拌的同時使溶液溫熱至室溫過夜。在N 2氣流中除去所有揮發物，並將固體溶解於1 mL的2N NaOH中。將混合物於室溫下攪拌30分鐘，以2N HCL中和，粗產物透過製備型HPLC純化。 4- 疊氮基 -2- （十二乙二醇）苯甲酸甲酯
根據一般方法1，從18 mg的4-疊氮基-2-羥基苯甲酸甲酯（91 µmol，1.00當量）、100 mg的十二乙二醇（183 µmol，2.0當量）、29 mg的三苯基膦（110 µmol，1.2當量）、19 mg的偶氮二甲酸二異丙酯（110 µmol，1.2當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（6.2 mg，8.8 µmol，10%）。C 31H 54N 3O 15 +[M+H] +的HR計算值為708.3550，實測值為708.74。 圖 1所示為化合物4-疊氮基-2-（十二乙二醇）苯甲酸甲酯的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。 4- 疊氮基 -2- （乙二醇四乙二醇）苯甲酸甲酯 根據一般方法1，從36 mg的4-疊氮基-2-羥基苯甲酸甲酯（186 µmol，1.00當量）、400 mg的PEG24（372 µmol，2.0當量）、59 mg的三苯基膦（223 µmol，1.2當量）、39 mg的偶氮二甲酸二異丙酯（223 µmol，1.2當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（58 mg，46.9 µmol，10%）。C 55H 102N 3O 27 +[M+H] +的MS計算值為1236.6696，實測值為1237.05。 圖 2所示為化合物4-疊氮基-2-（乙二醇四乙二醇）苯甲酸甲酯的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。 透過施陶丁格（ Staudinger ）亞膦酸鹽反應合成聚乙二醇化 P5 構建塊的一般方法 2
在氬氣下，於一25 mL Schlenk燒瓶內裝 267 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（1.00 mmol，1.00 當量），冷卻至0 ℃，逐滴添加2.20 mL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF中，濃度為0.5 M，1.10 mmol，1.10當量）。將淡黃色溶液溫熱至室溫並再攪拌30分鐘。添加溶解於5.56 mL的1H四唑溶液（在MeCN中，濃度為0.45M，2.50 mmol，2.50當量）中的3.00 mmol（3.0當量）所需的PEG-醇，並將白色懸浮液於室溫下攪拌過夜。透過 31P-NMR監測所需亞膦酸酯的形成。加入溶解在2 mL的DMF、THF或MeCN中的1.0 mmol（1.0當量）所需疊氮化物，並將懸浮液於室溫下進一步攪拌24小時。使用製備型HPLC純化粗反應混合物。 P5(PEG12)-Osu
根據一般方法2，從19.5 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（73 µmol，1.00當量）、146 µL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF中，濃度為0.5 M，73 µmol，1.00當量）、100 mg的十二乙二醇（183 µmol，2.50當量）、400 µL的1H-四唑溶液（在MeCN中，濃度為0.45 M，183 µmol），以及19 mg的4-疊氮基苯甲酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯（73 µmol，1.00當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（42.5 mg，50 µmol，68%）。 1H NMR（300 MHz，乙腈-d3）δ 8.06 (d，J = 8.7 Hz，2H)，7.32 (d，J = 8.8 Hz，2H)，4.40 － 4.14 (m，2H)，3.79 - 3.69 (m，2H)，3.66 - 3.47 (m，40H)，3.21 (d，J = 13.1 Hz，1H)，2.86 (s，4H)，1.30 (m，2H)，1.13 - 0.79 (m，2H)。 13C NMR (151 MHz，CDCl 3) δ 169.77，169.46，161.66，161.47，152.75，146.09，132.90，132.24，117.82，113.97，113.29，89.25，88.92，77.27，77.06，76.85，74.69，72.57，71.19，70.62，70.54，70.51，70.47，70.44，70.36，70.27，70.20，69.74，69.70，68.14，65.77，65.73，61.63，61.60，40.72，30.34，25.68。 31P NMR (122 MHz，乙腈- d 3) δ-10.87。HRMS C 37H 60N 2O 19P +計算值為851.3573 [M+H] +，851.3571。 P5(PEG12)-COOH
根據一般方法2，從40 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（150 µmol，1.00當量）、360 µL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF中，濃度為0.5 M，180 µmol，1.2當量）、245 mg的PEG12（450 µmol，3.0當量）、0.83 mL的1H-四唑溶液（在MeCN中，濃度為0.45 M，450 µmol，2.5當量），以及39 mg的4-疊氮基苯甲酸（150 µmol，1.00當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（25 mg，34 µmol，23%）。C 33H 57NO 16P +[M+H] +的HR-MS計算值為754.3410，實測值為754.3398。 圖 3所示為化合物P5(PEG12)-COOH的分析型HPLC層析圖。 P5(PEG24)-OSu
根據一般方法2，從41 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（159 µmol，1.00當量）、370 µL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF溶液中，濃度為0.5 M，185 µmol，1.2當量）、450 mg的PEG24（388 µmol，2.50當量）、1.02 mL的1H-四唑溶液（MeCN 中 0.45 M、466 µmol、3.0當量），以及40 mg的4-疊氮苯甲酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯（155 µmol，1.00當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（79 mg，57 µmol，37%）。C 61H 109N 2O 30P 2+[M+2H] 2+的MS計算值為690.3396，實測值為690.81。 圖 4所示為化合物P5(PEG24)-OSu的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。 P5(PEG12 ， PEG12)-COOH
根據一般方法2，從6.8 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（25 µmol，1.00當量）、61 µL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF中，濃度為0.5 M，31 µmol，1.2當量）、42 mg的十二乙二醇（76 µmol，3.0當量）、164 µL的1H-四唑溶液（在MeCN中，濃度為0.45 M、64 µmol、2.5當量），以及18.4 mg的4疊氮基2（十二乙二醇）苯甲酸甲酯（25 µmol，1.00當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（4.8 mg，3.4 µmol，13%）。C 57H 106NO 29P 2+[M+2H] 2+的MS計算值為649.8289，實測值為650.22。 P5 （ PEG12,PEG24 ） -COOH
根據一般方法2，從5.4 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（20 µmol，1.00當量）、50 µL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF中，濃度為0.5 M，24 µmol，1.2當量）、33 mg的十二乙二醇（61 µmol，3.0當量）、115 µL的1H-四唑溶液（在MeCN中，濃度為0.45 M，51 µmol，3.0當量），以及25 mg的4疊氮基2（二十乙二醇）苯甲酸甲酯（20 µmol，1.00當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（6.6 mg，3.6 µmol，18%）。C 81H 154NO 41P 2+[M+2H] 2+的MS計算值為913.9862，實測值為914.45。 圖 5所示為化合物P5(PEG12,PEG24)-COOH的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。 P5(PEG24,PEG24)-COOH
根據一般方法2，從5.4 mg的雙（二異丙基胺基）氯膦（20 µmol，1.00當量）、50 µL的乙炔基溴化鎂溶液（在THF中，濃度為0.5 M，24 µmol，1.2當量）、65 mg的PEG24（61 µmol，3.0當量）、115 µL的1H-四唑溶液（在MeCN中，濃度為0.45 M，51 µmol，3.0當量），以及25 mg的4疊氮基2（二十乙二醇）苯甲酸甲酯（20 µmol，1.00當量）合成標題化合物。以製備型HPLC（方法 D）純化及凍乾後，獲得呈無色油狀的產物（18.4 mg，7.5 µmol，37%）。C 105H 202NO 53P 2+[M+2H] 2+的MS計算值為1178.6451，實測值為1178.69。 圖 6所示為化合物P5(PEG24,PEG24)-COOH的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。 NH 2-VC-PAB- 依沙替康 TFA 鹽類
螺旋蓋小瓶中裝有34.3 mg的依沙替康甲磺酸鹽（0.0645 mmol，1.0當量），並懸浮於645 µL的無水DMSO 中。加入241 µL的溶於無水DMSO中的0.4 mol/L Fmoc-VC-PAB-PNP溶液溶液（0.0967 mmol，1.5當量）、64.5 µL的溶於無水DMSO中的1 mol/L HOBt水合物的溶液（0.0645 mmol，1.0當量），以及113 µL的DIPEA（0.645 mmol，10.0當量）。黃色溶液在50℃下攪拌 2小時。然後，加入425 µL的溶於無水DMSO中的50%二乙醇胺（w/w）溶液，並將反應混合物於室溫下再攪拌 30分鐘。添加1.5 ml的MeCN以及2.5 mL的H 2O，使用方法D透過製備型HPLC直接純化黃色溶液。凍乾後，獲得47.3 mg（76.7%，0.0495 mmol）淡黃色固體，為TFA鹽。 C 43H 50FN 8O 9 +[M+H] +的HR-MS計算值為841.3680，實測值為841.3696。 圖 7所示為化合物NH 2-VC-PAB-依沙替康TFA鹽的分析型HPLC層析圖。 NH 2-VA-PAB- 依沙替康 TFA 鹽類
螺旋蓋小瓶中裝有1.23 mg的依沙替康甲磺酸鹽（0.00232 mmol，1.0當量）並懸浮於23 µL的無水 DMSO 中。加入8.7 µL的溶於無水DMSO中的0.4 mol/L Fmoc-VA-PAB-PNP溶液（0.00348 mmol，1.5當量）、2.3 µL的溶於無水DMSO中的1 mol/L HOBt水合物的溶液（0.00232 mmol，1.0當量），以及4 µL的DIPEA（0.0232 mmol，10.0當量）。黃色溶液於室溫下攪拌過夜。然後，加入15 µL的溶於無水DMSO中的50% 二乙醇胺（w/w）溶液，並將反應混合物於室溫下再攪拌 30分鐘。添加 1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，使用方法C透過製備型HPLC直接純化黃色溶液。凍乾後，獲得1.01 mg（50.0%，0.00116 mmol）淡黃色固體，為TFA鹽。 C 40H 44FN 6O 8 +[M+H] +的HR-MS計算值為755.3200，實測值為755.3201。 圖 8所示為化合物NH 2-VA-PAB-依沙替康TFA鹽的分析型HPLC層析圖。 NH 2-VA- 依沙替康
在螺旋蓋小瓶中裝入5.12 mg的依沙替康甲磺酸鹽（0.00964 mmol，1.0當量）並懸浮於96 µL的無水DMSO中。加入96 µL的溶於無水DMSO中的300 mM Fmoc-VA-COOH（0.02892，3.0當量）溶液，96 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPybop（0.01928 mmol，2.0當量），以及33.4 µL的DIPEA（0.0289 mmol，6.0當量），並將溶液於室溫下攪拌 2小時。加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，使用方法C透過製備型HPLC直接純化黃色溶液。分離出兩種非鏡像異構物（異構物A，首先流洗，異構物B，隨後流洗）。凍乾後，獲得5.04 mg的異構物A（72.6%，0.0070 mmol）淡黃色固體以及1.68 mg的異構物B（24.0%，0.00232 mmol）淡黃色固體，為TFA鹽。 異構物A C 32H 37FN 5O 6 +[M+H] +的HR-MS 計算值為606.2723，實測值為606.2744。 異構物B C 32H 37FN 5O 6 +[M+H] +的HR-MS 計算值為606.2723，實測值為606.2744）。 圖 9所示為化合物NH 2-VA-依沙替康的異構物A的分析型HPLC層析圖。 圖 10所示為化合物NH 2-VA-依沙替康的異構物B的分析型HPLC層析圖。 P5(PEG2)-VC-PAB- 依沙替康
螺旋蓋小瓶裝有23.4 µL的溶於無水DMSO中的200 mM NH 2-VC-PAB-依沙替康TFA鹽溶液（0.00468 mmol，1.0當量）、46.8 µL的200 mM 2-（2-羥基乙氧基）乙基-N-（4-苯甲酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯）-P-乙炔基膦醯胺酸酯（P5(PEG2)-COOSu，0.00936 mmol，2.0當量），以及4.08 µL的DIPEA（0.0234 mmol，5.0 當量）。將溶液於50℃下搖動5小時，冷卻至室溫，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，並使用方法C透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得1.33 mg（25.0%，0.00117 mmol）淡黃色固體。 C 56H 64FN 9O 14P +[M+H] +的HR-MS計算值為1136.4289，實測值為1136.4306。 圖 11所示為化合物P5(PEG2)-VC-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 P5(PEG12)-VC-PAB- 依沙替康
螺旋蓋小瓶中裝有51 µL的溶於無水DMSO中的200 mM NH 2-VC-PAB-依沙替康TFA鹽溶液（0.0102 mmol，1.0當量）、102 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPEG12- N-（4-苯甲酸）- P-乙炔基磷醯胺（P5(PEG12)-COOH，0.0204 mmol，2.0當量）、102 µL的溶於無水DMSO中的250 mMPybop溶液（0.0255 mmol，2.5當量），以及8.89 µL的DIPEA（0.051 mmol，5.0當量）。將溶液於室溫下搖動2小時，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，然後使用方法D透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得15.91 mg（99.0%，0.0101 mmol）淡黃色固體。 C 76H 105FN 9O 24P 2+[M+H] 2+的HR-MS 計算值為788.8492，實測值為788.8485。 圖 12所示為化合物P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 P5(PEG24)-VC-PAB- 依沙替康
螺旋蓋小瓶中裝有102 µL的溶於無水DMSO中的200 mM NH 2-VC-PAB-依沙替康TFA鹽溶液（0.0204 mmol，1.0當量）、204 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPEG24- N-（4-苯甲酸）- P-乙炔基膦醯胺（P5(PEG24)-COOH，0.0408 mmol，2.0當量），204 µL的溶於無水DMSO中的250 mMPybop溶液（0.051 mmol，2.5當量），以及17.78 µL的DIPEA（0.102 mmol，5.0當量）。將溶液於室溫下搖動 2小時，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，然後使用方法D透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得25.76 mg（60.0%，0.01224 mmol）淡黃色固體。 C 100H 153FN 9O 36P 2+[M+H] 2+的HR-MS計算值為1053.5081，實測值為1053.50833。 圖 13所示為化合物P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 P5(PEG12)-VA-PAB- 依沙替康
螺旋蓋小瓶中裝有11.6 µL的溶於無水DMSO中的100 mM NH 2-VA-PAB-依沙替康TFA鹽溶液（0.00116 mmol，1.0當量）、8.7 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPEG12- N-（4-苯甲酸）- P-乙炔基膦醯胺（P5(PEG12)-COOH，0.00174 mmol，1.5當量）、11.6 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPybop溶液（0.00232 mmol，2.0當量），以及2.02 µL的DIPEA（0.0116 mmol，10.0當量）。將溶液於室溫下搖動 2小時，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，然後使用方法C透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得0.56 mg（32.2%，0.000375 mmol）淡黃色固體。 C 73H 99FN 7O 23P 2+[M+H] 2+的HR-MS計算值為745.8252，實測值為745.8255。 圖 14所示為化合物P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 來自異構物 A 的 P5(PEG12)-VA- 依沙替康
螺旋蓋小瓶裝有35 µL的溶於無水DMSO中的200 mM NH 2-VA-依沙替康TFA 鹽（異構物A）（0.0070 mmol，1.0當量）溶液、52.5 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPEG12- N-（4-苯甲酸）- P-乙炔基膦醯胺（P5(PEG12)-COOH，0.0104 mmol，1.5當量）、70 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPybop 溶液（0.0140 mmol，2.0當量），以及12.2 µL的DIPEA（0.07 mmol，10.0當量）。將溶液於室溫下搖動 2小時，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，然後使用方法C透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得3.6 mg（38.4%，0.0026 mmol）淡黃色固體。 C 65H 92FN 6O 21P 2+[M+H] 2+的HR-MS計算值為671.3013，實測值為671.3004。 圖 15所示為來自異構物A的化合物P5(PEG12)-VA-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 來自異構物 B 的 P5(PEG12)-VA- 依沙替康
螺旋蓋小瓶中裝有11.6 µL的溶於無水DMSO中的200 mM NH 2-VA-依沙替康TFA 鹽（異構物A）（0.0023 mmol，1.0當量）溶液、17.4 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPEG12- N-（4-苯甲酸）- P-乙炔基膦醯胺（P5(PEG12)-COOH，0.00345 mmol，1.5當量）、23.3 µL的溶於無水DMSO中的200 mMPybop溶液（0.0046 mmol，2.0當量），以及4.04 µL的DIPEA（0.023 mmol，10.0當量）。將溶液於室溫下搖動 2小時，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，然後使用方法C透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得1.68 mg（54.0%，0.0012 mmol）淡黃色固體。 C 65H 92FN 6O 21P 2+[M+H] 2+的HR-MS計算值為671.3013，實測值為671.3004。 圖 16所示為來自異構物B的化合物P5(PEG12)-VA-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 P5(PEG12)- 依沙替康
螺旋蓋小瓶裝有50 µL的溶於無水DMSO中的100 mM 依沙替康甲磺酸鹽懸浮液（0.005 mmol，1.0當量），20 µL的溶於無水DMSO中的250 mMPEG12-N-（4-苯甲酸）-對乙炔基膦醯胺酸酯（P5(PEG12)-COOH，0.005 mmol，1.0當量）溶液、20 µL的溶於無水DMSO中的300mMPybop 溶液（0.006 mmol，1.2當量），以及4.33 µL的DIPEA（0.025 mmol，5.0 當量）。將溶液於室溫下搖動 2小時，加入1.5 mL的MeCN以及2.5 mL的H 2O，然後使用方法C透過製備型HPLC直接純化溶液。凍乾後，獲得2.63 mg（45.0%，0.0023 mmol）淡黃色固體。 C 57H 77FN 4O 19P +[M+H] +的HR-MS計算值為1171.4899，實測值為1171.4852。 圖 17所示為化合物P5(PEG12)-依沙替康的分析型HPLC層析圖。 實施例 2 ：合成的 ADCs 與抗體起始材料之分析
抗體/ADC 分析型SEC 分析型HIC 完全共軛的DAR8 物種的MS 分析，DAR 共軛與純化後的ADC 產量（蛋白質濃度）
曲妥珠單抗 參閱 圖 18 參閱 圖 19 LC: 計算值為23439 實測值：23438 HC: 計算值為49146 實測值：49149 -/-
布倫妥昔單抗 參閱 圖 20 參閱 圖 21 LC: 計算值為23724 實測值：23724 HC: 計算值為48878 實測值：48877 -/-
帕利珠單抗 參閱 圖 22 參閱 圖 23 LC: 計算值為23296 實測值：23294 HC: 計算值為49200 實測值：49202 -/-
曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康 參閱 圖 24 參閱 圖25 DARav: 4,91 LC: 計算值為25015 實測值：25014 HC: 計算值為53873 實測值：53878 80%
曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康 參閱 圖 26 參閱 圖27 DARav: 7,91 LC: 計算值為25544 實測值：25543 HC: 計算值為55461 實測值：55464 99%
曲妥珠單抗-P5(PEG12)-依沙替康 參閱 圖 28 參閱 圖29 DARav: 7,19 LC: 計算值為24609 實測值：24609 HC: 計算值為52658 實測值：52661 97%
曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康 參閱 圖 30 參閱 圖31 DARav: 4,39 LC: 計算值為24929 實測值：24928 HC: 計算值為53615 實測值：53620 84%
曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康(異構物A) 參閱 圖 32 參閱 圖33 DARav: 7,89 LC: 計算值為24780 實測值：24779 HC: 計算值為53168 實測值：53173 77%
曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康(異構物B) 參閱 圖 34 參閱 圖 35 DARav: 7,71 LC: 計算值為24780 實測值：24779 HC: 計算值為53168 實測值：53173 86%
布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康 參閱 圖36 參閱 圖37 DARav: 7,6 LC: 計算值為25300 實測值：25299 HC: 計算值為53605 實測值：53605 60%
布倫妥昔單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康 參閱 圖 38 參閱 圖 39 DARav: 8,0 LC: 計算值為25829 實測值：25828 HC: 計算值為55192 實測值：55191 71%
帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康 參閱 圖 40 參閱 圖 41 DARav: 8,0 LC: 計算值為25401 實測值：25400 HC: 計算值為55512 實測值：55517 81%
DARav表示平均藥物抗體比。LC：輕鏈的質量；HC：重鏈的質量。
圖 18所示為曲妥珠單抗的分析型SEC層析圖。SEC表示粒徑篩析層析法。
圖 19所示為曲妥珠單抗的分析型HIC層析圖。HIC表示疏水相互作用層析法。
圖 20所示為布倫妥昔單抗的分析型SEC層析圖。
圖 21所示為布倫妥昔單抗的分析型HIC層析圖。
圖 22所示為帕利珠單抗的分析型SEC層析圖。
圖 23所示為帕利珠單抗的分析型HIC層析圖。
圖 24所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 25所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 26所示為曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 27所示為曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 28所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 29所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 30所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 31所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 32所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物A）的分析型SEC層析圖。
圖 33所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物A）的分析型HIC層析圖。
圖 34所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物B）的分析型SEC層析圖。
圖 35所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物B）的分析型HIC層析圖。
圖 36所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 37所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 38所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 39所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 40所示為帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 41所示為帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
SEC層析圖（SEC = 粒徑篩析層析）顯示共軛物在水溶液中表現出低聚集至基本無聚集。已顯示基於喜樹鹼的ADC共軛物在與抗體的共軛過程中已經表現出強烈的聚集趨勢。強烈的聚集趨勢這個問題尤其存在於當喜樹鹼分子部分透過VC-PAB-連接子與用於抗體共軛的馬來醯亞胺單進行元共軛時，（Burke 等人， 「 Design ， Synthesis ， and Biological Evaluation of Antibody-Drug Conjugates Comprised of Potent Camptothecin Analogs 」，Bioconjugate Chem. 2009年，20，1242-1250，https://doi.org/10.1021/bc9001097）。在這種情況下，據報導產生出高達80%的聚合ADC。
相較之下，本文所述之SEC數據顯示高度單體的基於喜樹鹼的ADCs，包括那些攜帶VC-PAB連接子的ADCs，在所有測試的變體中純化後聚集體小於5%。結合本文所述之高共軛產率（根據共軛過程前後的抗體濃度測定，通常在80-90%的範圍內），這清楚地顯示，當使用本文所述之P5共軛技術時，僅形成較小百分比的聚集體。
HIC層析圖（HIC = 疏水相互作用層析）顯示共軛物表現出良好的親水性以及在共軛過程中形成的僅一種主要DAR8ADC 物質的優異同質性。 實施例 3 ：研究如何合成較低 DARADCs
較低的DARADC（DAR 意指「藥物與抗體的比率」）可透過在抗體共軛過程中減少TCEP的當量而從P5(PEG24)-VC來合成。 圖 42所示為DAR對TCEP當量的依賴性。
圖 42所示為在與不同當量的TCEP（上圖）以及15當量連接子有效負載（P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）反應後醣基化的還原曲妥珠單抗的MS 譜圖。根據TCEP的量從這些光譜計算的DAR如下方圖表所示。 實施例 4 ：構築物的體外細胞毒性評估
已經評估了本文所述之ADCs對抗原陽性（標靶）以及抗原陰性（非標靶）細胞株的體外效力。結果如 圖 43所示。 l 已觀察到所有測試構築物對標靶（抗原陽性）細胞株的選擇性。
圖 43所示為與不同的基於依沙替康的連接子-有效負載構築物連接的曲妥珠單抗（抗Her2）的ADCs對抗原陽性細胞株（HCC-78，上圖，以及SKBR3，左下圖）以及抗原陰性細胞株（MDA-MB-468，右下圖）的體外細胞毒性。 l VC-PAB切割側提供了構築物的高體外活性。不可切割的對照（P5(PEG12)-依沙替康）以及不可切割的VA-異構物P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物B）導致標靶細胞株的活性降低。 l 以Enhertu作為本文所述之ADCs的參考，且可被視為基於喜樹鹼的ADCs的重要標準，這是因為Enhertu被核准上市並用於治療不可切除或轉移性HER2陽性乳腺癌，這些乳腺癌在轉移性環境中接受過兩種或兩種以上基於 HER2的方案。 l 相較於Enhertu ，本文所述之新型構築物在細胞殺傷中表現出相似的IC 50值（ 圖 43），且基於P5-VC-PAB-依沙替康的構築物在HCC-7上表現出更好的絕對細胞殺傷力（ 圖 44）。
圖 44所示為曲妥珠單抗（抗 Her2）ADC（曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）以及具有帕利珠單抗的非結合同種型對照（Pali-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）對抗原陽性細胞株（HCC-78）的體外細胞毒性。 l 基於依沙替康的ADCs的作用不僅對標靶細胞株具有選擇性，如 圖 43所示，且對標靶細胞株內的標靶抗體也具有特異性，如 圖 44所示。
圖 45所示為布倫妥昔單抗（抗 CD30）ADC（Bren-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康）對兩種抗原陽性細胞株（L-540，左圖，以及SU-DHL-1，右圖）的體外細胞毒性。
圖 46所示為布倫妥昔單抗（抗 CD30）ADC（Bren-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）對一組抗原陽性細胞株（SR-786、SU-DHL-1、HH、HBLM-2、L-540）MOTN-1）以及非標靶對照細胞株（HL-60）的體外細胞毒性。 l Bren-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康（ 圖 45）以及Bren-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康（ 圖 46）顯示對整個不同的CD30陽性細胞株的選擇性作用。HL-60用於證明靶標選擇性，因為未觀察到對該細胞株的影響。 實施例 5 ：體外旁觀者效應l 旁觀者效應有利於ADCs的體內活性，尤其是在實體瘤的情況下，因為它能夠殺死具有異質標靶表現程度的腫瘤細胞。 l 因此，本案發明人設計了一個實驗，其中標靶細胞（SKBR3、Her2+）與基於曲妥珠單抗的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康構築物以及Enhertu一起作用，並處理非標靶細胞（MDA-MB-468）與SKBR3培養物的上清液。在這種情況下，MDA-MB-468細胞只能透過有效的旁觀者殺傷效應來殺死，因為ADCs不會單獨誘導該細胞株的殺傷效果。 l Enhertu的旁觀者效應與P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康一樣高。
圖 47所示為與Enhertu直接比較的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康旁觀者效應的評估。ADCs對抗原陽性細胞株（SKBR3，左上圖）以及抗原陰性細胞株（MDA-MB-468，右上圖）的體外細胞毒性。將SKBR-3與ADC作用後的上清液轉移至MDA-MB-468，以評估旁觀者殺傷（MDA-MB-468，下圖）。 實施例 6 ： DNA 損傷l 基於喜樹鹼的ADCs的作用機制為抑制核拓撲異構酶-I後DNA單鏈斷裂，隨後在S期複製後雙鏈斷裂。 l DNA損傷的讀數為Ser139處的組蛋白H2A.X磷酸化、活化的凋亡蛋白酶3（Caspase 3）以及活化的PARP。 l 本案發明人在曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康以及Enhertu處理後透過FACS研究所有三種標記物。
圖 48所示為相較於未處理組，在以曲妥珠單抗-P5處理(PEG24)-VC-PAB-依沙替康、Enhertu、共軛的依沙替康或未共軛的喜樹鹼處理SKBR-3細胞1、2或3天後，組蛋白H2A.X磷酸化（左上圖）、活化的凋亡蛋白酶3（右上圖）及活化的PARP（左下圖）以及細胞活性（右下圖）的相對定量。 l 該數據集清楚地顯示，前述實施例中描述的細胞殺傷是由有效載荷的作用模式調節的，這些有效載荷是透過ADC傳遞的。 l 當以曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康或Enhertu處理細胞時，未觀察到顯著差異。 實施例 7 ：血清穩定性l 穩定的共軛為ADC循環期間穩定療效以及減少脫靶毒性的關鍵因素。 l 為了評估本文所述構築物與Enhertu直接比較的穩定性，本案發明人將P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康以及Enhertu與大鼠血清於37℃下作用一段不同的時間，然後以LC/MS測量藥物與抗體比率
圖 49所示為於37℃下，Enhertu以及P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康在大鼠血清中作用 0、1、3以及7天後的藥物與抗體比率。在從血清中下拉ADC後，以MS測量藥物與抗體比率。 l Enhertu顯著損失了血清中的連接子有效載荷（63%的有效載荷損失），導致3天後DAR已大幅降低至 3 l 相較之下，P5在7天後仍穩定，DAR為7.6（5%的有效載荷損失） 實施例 8 ：血清穩定性後的體外毒性測量
這些實驗的結果如 圖 50與 圖 51所示。
圖 50所示為ADCs曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康（上圖）、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康（中圖）以及Enhertu（下圖）在與大鼠血清於37℃下作用0、1、3以及7天後，測量對Her2陰性細胞株MDA-MB-468（左側）以及對Her2陽性細胞株 SKBR3（右側）的細胞毒性。
圖 51所示為ADCs曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康（上圖）、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康（中圖）以及Enhertu（下圖）在與人類血清於37℃下作用0、1、3以及7天後，測量對Her2陰性細胞株MDA-MB-468（左側）以及對Her2陽性細胞株 SKBR3（右側）的細胞毒性。
圖 50及 圖 51顯示隨著Enhertu在大鼠血清以及人類血清中的作用時間增加，對標靶細胞株SKBR3的體外功效隨之降低。而在人類及大鼠血清中的曲妥珠單抗P5-VC-PAB-依沙替康構築物，這種降低的效果不明顯或不存在。因此，與Enhertu不同，根據本發明之一具體實施例的ADC在作用時間內保持其功效。
此外，隨著在大鼠及人類血清中作用時間的增加，Enhertu對標靶陰性細胞株MDA-MB-468的非特異性作用越來越大。而在人類及大鼠血清中的曲妥珠單抗P5-VC-PAB-依沙替康構築物，則不存在這種增加的非特異性。因此，與Enhertu不同，根據本發明之一具體實施例的ADC在作用時間內保持其對標靶細胞株的選擇性。 實施例 9 ：構築物的體內評估l 已針對布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康進行了體內藥物動力學（PK）實驗 l 已用5 mg/kg的布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康治療雌性 Sprague Dawley大鼠 l 在不同時間點進行血液採樣，並根據上述一般資訊、材料及方法中所述之方法1，在總布倫妥昔單抗的抗體ELISA分析中對ADC的量進行了量化。
圖 52所示為在以布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康-DAR8處理雌性Spraque-Dawley大鼠後透過ELISA對血液循環中總抗體量的量化。 l 實驗清楚地顯示出良好的PK行為以及合理的清除率。 實施例 10 ：以 NanoDSF 評估的熔解曲線
使用奈米差示掃描螢光測定法（nano differential scanning fluorimetry，nanoDSF）測定蛋白質的熱穩定性，該測定法測量色胺酸與酪胺酸殘基固有螢光的溫度依賴性變化（Tycho NT.6，NanoTemperTechnologies公司）。為此，在PBS中的1 µM 抗體或ADC被隨後放入讀取器的毛細管吸收。之後，在升高的溫度下作用時，在330 nM以及350 nM 處測量固有蛋白質螢光。螢光訊號的變化表示蛋白質折疊狀態的轉變，轉變發生的溫度稱為拐點溫度（inflectionTemperatures，Ti）或熔化溫度（meltingTemperatures，Tm）（Haffke，M.等人，Label－freeThermal UnfoldingAssay of GProtein-Coupled Receptors for Compound ScreeningAndBuffer Composition Optimization. 2016年）。
圖 53所示為使用奈米差示掃描螢光測定法（nanoDSF）確定的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康以及Enhertu的熔解曲線。Enhertu以及曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的熔解曲線重疊，表示兩種ADCs的生物物理蛋白質穩定性相似，熔解溫度幾乎相同。 實施例 11 ：以流式細胞儀分析評估與細胞外 Her2 之結合
為了確定平衡結合常數（K D），將SKBR3、Her2+細胞與濃度範圍為0.0001至200 nM的抗體與ADC 一起作用，並以Alexa 染料標記的抗人類IgG H+L二級抗體（Thermo Fisher Scientific 公司），並透過流式細胞儀進行分析。將平均螢光強度（Mean fluorescence intensity，MFI）比率以非特異性結合對照進行標準化。進行二重複測試，並使用單點特異性結合模型透過非線性回歸分析數據點，以使用Prism 9軟體得出K D值。 圖 54中的圖表所示為n = 2 ± SEM的平均值。
圖 54所示為用於確定Enhertu以及曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康與細胞外Her2結合的平衡結合常數（K D）的圖表，以及獲得的平衡結合常數（K D）值。結果顯示，Enhertu以及曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康與細胞外Her2的結合沒有顯著差異，表示兩種ADCs結合標靶 Her2受體的生物物理能力相似，K D幾乎相同。 實施例 12 ：聚合壓力測試
藥物抗體比率為8的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康（於本文中表示為「DAR8」）以及Enhertu已配製在含有20 mM磷酸鹽、20 mM 海藻糖，以及0.009% 聚山梨醇酯 0的緩衝液中，濃度為1 mg/mL。使用 UFC30GV0S離心過濾裝置（Merck公司，德國）對樣品進行無菌過濾，並於4℃或37℃下避光培養。在1、2、3以及4週後抽取50μl 樣品，並透過粒徑篩析層析法進行分析，方法如上所述。
ADC聚集發生在患者體內循環過程中，已知會導致脫靶毒性。 圖 55所示為曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，以及Enhertu在 37℃以及4℃下避光作用0、1、2以及4週後形成的聚集體的百分比。結果清楚地顯示，相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8ADC 在作用條件下的聚集減少，這為本文所述技術的優勢。 實施例 13: 共軛抗體的 ADCC
針對基於鈣黃綠素釋放的抗體依賴性細胞毒性（antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC）分析，購買以負篩選從周邊血單核細胞（peripheralBlood mononuclear cells，PBMCS）中分離出來的冷凍原代健康供體來源的自然殺手（natural killer，NK）細胞作為效應細胞（Lonza公司）。Her2陽性標靶細胞以16 µM鈣黃綠素AM（Thermo Fisher Scientific公司）染色。然後在50 nM曲妥珠單抗、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康、Enhertu以及一市售人類IgG1同種型（BioLegend公司）存在的情況下，於37℃下以3:1的效應細胞與標靶細胞的比例將NK細胞以及標靶細胞一起培養4小時。以2.5%Triton X（Sigma-Aldrich公司）透化的細胞作為陽性對照。將上清液轉移至扁平的黑色非結合96 孔盤（GreinerBio-One公司）中，並透過Infinite M1000Pro微量盤分析儀（Tecan公司）於波長485/535 nM處測量螢光。
透過將抗體調節的殺傷釋放的鈣黃綠素減去Triton X透化細胞釋放的鈣黃綠素（最大殺傷）減去背景鈣黃綠素釋放（NKs + 靶標）減去背景鈣黃綠素釋放（僅靶標）來計算特異性殺傷百分比。我們確定了15 µg/ml的最大ADCC/特異性殺傷，或生成一濃度依賴性殺傷曲線，該曲線使用單點特異性結合模型透過非線性回歸進行分析。
圖 56所示為當使用未共軛的曲妥珠單抗、具有藥物抗體比為8（DAR8）的ADC曲妥珠單抗-P5(PEG24 )-VC-PAB-依沙替康、Enhertu，以及一同種型對照，以基於鈣黃綠素釋放的抗體依賴性細胞毒性（ADCC）分析測量在Her2陽性標靶細胞SKBR-3、SKOV-3，以及N87的特異性殺傷百分比。結果顯示，相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8具有更好的ADCC效應。相較於Enhertu，使用具有P5連接子的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8時，效應子功能受到的影響較小。 實施例 14 ：共軛抗體的內化
針對基於pHrodo的內化研究，根據製造商的說明使用pHrodo™ 深紅抗體標記套組（Thermo Fisher Scientific公司）對抗體及ADCs進行標記。將Her2陽性實體瘤細胞以及陰性細胞與5 µg/ml的pHrodo標記的抗體或ADCs於37℃下作用1小時、5小時以及24小時。MFI的增加表示晚期胞內體與溶酶體隔室中存在抗體。透過將與pHrodo一起培養的細胞的MFI除以未染色細胞的MFI 來確定MFI比率。
圖 57所示為使用未共軛的曲妥珠單抗、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，以及Enhertu對Her2陽性SKOV-3細胞以及Her2陰性MDA-MB-468細胞進行的基於pHrodo的內化研究之結果。相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8進入標靶Her2細胞的內化相似，而進入標靶陰性細胞的不想要的內化程度較低。該觀察結果可以減少由ADC內化到非標靶細胞中引起的脫靶毒性。 實施例 15 ：與 Enhertu 直接比較的額外體外功效數據
體外細胞毒性已如上述一般資訊、材料及方法中所述進行測量。
圖 58所示為使用曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，以及Enhertu對Her2陽性細胞SKBR-3 (Her2++)、N87 (Her2++)、HCC-1569 (Her2++)、HCC-78 (Her2+)、OE-19 (Her2+)、SK-GT-2 (Her2+)，以及SKOV-3 (Her2++)進行的體外細胞毒性測量之結果。相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8在體外的效果更好，特別是在Her2非高度過表現的細胞株（在 圖 58中表示為「Her2+」的細胞）中。 實施例 16 ：以上清液轉移評估之體外旁觀者能力
體外旁觀者能力已如上述一般資訊、材料及方法中所述進行測量。除了上述數據集外，其他細胞株（Karpas 299 (Her2-)以及DU-145 (Her2-)）已用於測試轉移材料。
圖 59所示為在 Her2陽性SKBR3細胞在與曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，以及Enhertu一同培養後所測量的體外旁觀者能力之結果，並將上清液轉移至Her2陰性細胞Karpas-299以及DU-145。相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8的旁觀者效應更好。 實施例 17 ：以 FACS 評估之體外旁觀者能力
針對基於共培養的旁觀者能力分析，將Her2陽性SKBR-3細胞與Her2陰性MDA-MB-468細胞以5:1的比例培養，並加入濃度漸增的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康以及Enhertu，其最大濃度達3 µg/ml。培養5天後，共培養物以αHer2-FITC（BioLegend公司）以及FixableAqua死亡細胞染色套組（Thermo Fisher Scientific公司）進行染色。以流式細胞儀分析確定死亡的Her2陽性及陰性細胞的百分比，以作為旁觀者效應的讀數。
圖 60所示為在Her2-陽性SKBR-3細胞以及Her2-陰性MDA-MB-468細胞的共培養物中的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8以及Enhertu的體外旁觀者能力之測量結果。觀察到相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8的旁觀者效應略佳，當細胞共培養時也為如此。 實施例 18: 對人類初始細胞之細胞毒性
如上述一般資訊、材料與方法中所述對人類臍靜脈內皮細胞、人類支氣管內皮細胞、肝竇內皮細胞、許旺細胞、人類腎近端腎小管上皮細胞、正常人類真皮纖維母細胞、人類角膜上皮細胞，以及THLE-3（肝細胞）測量體外細胞毒性。
圖 61所示為使用曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8、Enhertu以及帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，對人類臍靜脈內皮細胞、人類支氣管內皮細胞、肝竇內皮細胞、許旺細胞、人類腎近端腎小管上皮細胞、正常人類真皮纖維母細胞、人類角膜上皮細胞，以及THLE-3（肝細胞）進行的細胞毒性測量之結果。所示為相較於帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8以及Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8的細胞毒性。該模型使用健康人體組織的培養細胞，因此是對不良毒性的體外測量。在所有測試的組織類型中，數據集顯示，相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8的脫靶毒性的不良影響不太明顯。該數據集顯示由本專利中描述之技術引起的更廣泛的治療期間，因為 圖 61的圖式顯示對非標靶細胞株的不良影響較小，而 圖 58的圖式顯示對標靶細胞株具有較佳的所欲之效果。 實施例 19 ：曲妥珠單抗 -P5(PEG24)-VC-PAB- 依沙替康 DAR8 對比 Enhertu 在 SCID 小鼠中的體內 PK 評價
在已經以20 mg/kg的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或Enhertu處理的雌性SCID小鼠中，以曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8進行體內藥物動力學實驗（PK 實驗）。在不同時間點後進行了血液採樣，並根據上述一般資訊、材料與方法中所述之方法2在總抗體ELISA分析中對ADC的量進行了量化。如上述一般資訊、材料與方法中所述，透過完整MS分析ADC（連接子完整性）的藥物抗體比（DAR）。
圖 62所示為在已經以20 mg/kg的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或以作為參考的Enhertu處理的雌性SCID小鼠中，以曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8進行體內藥物動力學實驗。由ELISA分析中獲得的數據集顯示，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，以及Enhertu在循環過程中從生物體中清除的情況相似。此外，DAR分析證實了 曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8在體內的穩定性，相較於Enhertu的穩定性具有顯著改善。 實施例 20 ：腫瘤治療的體內功效
所有動物實驗均按照德國動物福利法進行，並經地方當局核准。簡言之，將1x10 7個MDA-MB-468細胞皮下注射至CB17-Scid小鼠中。當腫瘤在植入後28天達到平均腫瘤體積0.188 cm 3時開始治療。每組5隻動物以1 mg/kg、3 mg/kg或10 mg/kg的H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或載體治療一次，在隨機分配到治療組及對照組後進行靜脈注射。在整個研究過程中記錄腫瘤體積、體重以及一般健康狀況。
人源化H8抗體序列來源於國際專利申請公開號WO 2006/031653，其係針對5T4抗體。透過以pcDNA3.4表現質體（Thermo Fisher公司）共轉染細胞，在Expi-CHO-S細胞（Thermo Fisher公司）中瞬時表現抗體，以1:1的比例編碼各自序列的重鏈及輕鏈，使用Expi-CHO轉染系統（Thermo Fisher公司）。透過於4℃下以300 g離心5分鐘來收穫細胞。為了從上清液中清除微粒，將上清液於4℃下以4000-5000 g離心30分鐘。為了進一步澄清，將上清液以0.22 µm過濾器過濾。透過蛋白A層析從澄清及過濾的上清液中純化抗體，並透過HPLC-SEC、HPLC-HIC、LC-MS以及SDS-PAGE進行分析。之後如上述一般資訊、材料與方法中所述進行P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的共軛以生成 DAR8ADC。選擇5T4 H8抗體在不同於Her2的實體瘤模型中生成示例性體內數據集。
圖 63所示為在以H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8處理後在實體瘤模型中測定的CB17-Scid小鼠的平均腫瘤體積。 圖 64所示為以H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8治療後CB17-Scid小鼠的體重。實體瘤模型中沒有出現體重減輕。因此，測得的體外效應也轉化為基於P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR 8的ADC的高體內功效。當在攻毒的實體瘤模型中給予1至3 mg/kg的有效劑量時，已在體內證實了劑量依賴性功效。在1與3 mg/kg 單劑量時有所有5隻小鼠（5/5）完全反應。
於另一實體瘤模型中獲得類似的療效結果，亦即基於OVCAR-3的體內異種移植模型，其ADC來自抗NaPi2B抗體，其序列源自美國專利申請US 2017/0266311A1。ADC的製備及實驗如上針對H8抗體所述進行。
此外，目前正在進行一項使用基於N87的體內異種移植模型，使用曲妥珠單抗-P5 (PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8進行研究，預計將在體內功效方面提供相同/可比較的結果。 實施例 21: SD 大鼠體內抗靶標 -P5(PEG24)-VC-PAB- 依沙替康 DAR8 的體內 PK 評價
在已經以10 mg/kg的H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或未修飾的H8抗體處理過的雌性SD大鼠中進行體內藥物動力學實驗（PK 實驗）。如上所述獲得抗體及ADC。
在不同時間點後進行血液採樣，並根據上述一般資訊、材料與方法中所述之方法2以總抗體ELISA分析對ADC的量進行量化。ADC的完整性已透過完整的ADC ELISA得到確認。以完整MS分析ADC（連接子完整性）的藥物抗體比（DAR）。
圖 65所示為在已經以10 mg/kg的H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或未修飾的H8抗體處理過的雌性SD大鼠中所獲得的體內藥物動力學實驗（PK-實驗）之結果。總單株抗體ELISA中未修飾的單株抗體以及ADC之間的良好重疊表示，連接子有效負載的八個分子的共軛不會對整個ADC從循環中的清除產生負面影響。DAR8ADC以類似單株抗體的動力學清除。總單株抗體與完整ADC之間的高度重疊證實了良好的體內穩定性，以MS評估的DAR強調了這一點。MS測量證實DAR 8，亦即連接子-有效載荷與抗體的完全結合，在體內循環3週後得以維持。 實施例 22 ：曲妥珠單抗 P5(PEG24)-VC-PAB- 依沙替康 DAR4 合成與特徵描述
為了進行P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的8個半胱胺酸殘基與曲妥珠單抗IgG1的統計結合，些微調整了上述一般資訊、材料與方法中的共軛方案如下：單株抗體的濃度已降至1 mg/ml，用於共軛反應的P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的當量降至10，TCEP的當量降至3。以MS對ADC進行特徵描述，並計算出平均藥物抗體比率為4（DAR4），如上所述。此外，以HIC對該產品進行特徵描述，證明DAR0至DAR8物種的分佈。還以SEC對該產品進行特徵描述，顯示出同質性。
圖 66所示為平均DAR為4的曲妥珠單抗P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR4的HIC及SEC層析圖。
應當注意的是，「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR4」或「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR4」等詞係指平均藥物抗體比率為4的ADC（DAR4），其係用於 實施例 22及 23。另一方面，「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8」、「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8」、「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康」、「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康」等詞，亦即也沒有指出其DAR，當於本文中使用時，都是指藥物抗體比率為8（DAR8）的ADC；關於「曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康」的結構及DAR，還參見例如上文 實施例 2下的表格。 實施例 23 ：曲妥珠單抗 P5(PEG24)-VC-PAB- 依沙替康 DAR4 體內 PK 評估
在已經以10 mg/kg的具有平均藥物抗體比為4（DAR4）的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR4處理過的雌性SD大鼠中進行體內藥物動力學實驗（PK 實驗）。在不同時間點後進行血液採樣，並在總抗體ELISA分析中量化ADC的量。ADC的完整性已透過完整的ADC ELISA得到確認。
圖 67所示為在已經以10 mg/kg的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR4處理過的雌性SD大鼠中獲得的體內藥物動力學實驗（PK 實驗）的結果。良好的PK概況與上述 實施例 21中測試的以及 圖 65中左側上圖所示的未修飾 H8抗體具有高度可比性，表示四個P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康分子與八個半胱胺酸的統計共軛連接子有效載荷的殘留不會對整個ADC從循環中的清除產生負面影響。平均 DAR為4的ADC以類似單株抗體的動力學清除。總單株抗體與完整ADC之間的高度重疊證實了良好的體內穩定性。 實施例 24 ：曲妥珠單抗 -P5(PEG24)-VC-PAB- 依沙替康 DAR8 對比 Enhertu 的體內評價
所有動物實驗均按照德國動物福利法進行，並經地方當局核准。簡言之，將2x10 6個NCI-N87細胞（一種實體人類胃癌細胞株）皮下注射至CB17-Scid小鼠體內。當腫瘤達到0.1-0.15 cm 3的平均腫瘤體積時開始治療。每組10隻動物分別以0.25、0.5、1或2 mg/kg的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR 8或Enhertu處理一次。每組5隻動物以載體或以2 mg/kg的帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康作為同種型對照。在將動物隨機分配到治療組及對照組後，所有ADC均透過靜脈內注射給藥。在整個研究過程中記錄腫瘤體積、體重，以及一般健康狀況。
圖 68所示為藥物抗體比為8（DAR8）的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的體內評估結果。報導為觀察腫瘤生長幾天後的初步結果。在最初的7天後，觀察到在所有處理組中，相較於Enhertu，曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8構築物導致更大幅度的腫瘤縮小。最明顯的是施用濃度為0.5 mg/kg時的效果，其中曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8導致腫瘤消退，而Enhertu則導致腫瘤進展。預計隨著研究的漸漸深入，這種影響會更加明顯。所有基於曲妥珠單抗的標靶ADC的功效都具有劑量依賴性。應當注意的是，最高劑量的非結合同種型對照ADC帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康沒有產生任何效果，因為其腫瘤表現與載體對照組的腫瘤表現相同，所示為由P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康連接子系統的抗體調節的藥物遞送。
無
圖 1所示為化合物4-疊氮基-2-（十二乙二醇）苯甲酸甲酯的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。
圖 2所示為化合物4-疊氮基-2-（十二乙二醇）苯甲酸甲酯的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。
圖 3所示為化合物P5(PEG12)-COOH的分析型HPLC層析圖。
圖 4所示為化合物P5(PEG24)-OSu的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。
圖 5所示為化合物P5(PEG12,PEG24)-COOH的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。
圖 6所示為化合物P5(PEG24,PEG24)-COOH的分析型HPLC層析圖。水平軸描繪以分鐘為單位的滯留時間。
圖 7所示為化合物NH 2-VC-PAB-依沙替康TFA鹽的分析型HPLC層析圖。
圖 8所示為化合物NH 2-VC-PAB-依沙替康TFA鹽的分析型HPLC層析圖。
圖 9所示為化合物NH 2-VA-依沙替康的異構物A的分析型HPLC層析圖。
圖 10所示為化合物NH 2-VA-依沙替康的異構物B的分析型HPLC層析圖。
圖 11所示為化合物P5(PEG2)-VC-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 12所示為化合物P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 13所示為化合物P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 14所示為化合物P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 15所示為來自異構物A的化合物P5(PEG12)-VA-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 16所示為來自異構物B的化合物P5(PEG12)-VA-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 17所示為化合物P5(PEG12)-依沙替康的分析型HPLC層析圖。
圖 18所示為曲妥珠單抗的分析型SEC層析圖。SEC表示粒徑篩析層析法。
圖 19所示為曲妥珠單抗的分析型HIC層析圖。HIC表示疏水相互作用層析。
圖 20所示為布倫妥昔單抗的分析型SEC層析圖。
圖 21所示為布倫妥昔單抗的分析型HIC層析圖。
圖 22所示為帕利珠單抗的分析型SEC層析圖。
圖 23所示為帕利珠單抗的分析型HIC層析圖。
圖 24所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 25所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 26所示為曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 27所示為曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 28所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 29所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 30所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 31所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 32所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物A）的分析型SEC層析圖。
圖 33所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物A）的分析型HIC層析圖。
圖 34所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物B）的分析型SEC層析圖。
圖 35所示為曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VA-依沙替康（異構物B）的分析型HIC層析圖。
圖 36所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 37所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 38所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 39所示為布倫妥昔單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 40所示為帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型SEC層析圖。
圖 41所示為帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的分析型HIC層析圖。
圖 42所示為在與不同當量的TCEP（上方）以及15當量的連接子有效負載（P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）反應後醣基化的還原曲妥珠單抗的MS譜圖。根據TCEP量從這些光譜計算的DAR如下方的圖表所示。
圖 43所示為與不同的基於依沙替康的連接子有效負載構築物連接的曲妥珠單抗（抗Her2）ADCs對抗原陽性細胞株（HCC-78，上圖，以及SKBR3，左下圖）以及抗原陰性細胞株（MDA-MB-468，右下圖）的體外細胞毒性。
圖 44所示為曲妥珠單抗（抗Her2）ADC（曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）以及一非結合同種型對照（Pali-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）對一抗原陽性細胞株(HCC-78)的體外細胞毒性。
圖 45所示為布倫妥昔單抗（抗CD30）ADC（Bren-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康）對兩種抗原陽性細胞株（L-540，左圖，以及SU-DHL-1，右圖）的體外細胞毒性。
圖 46所示為布倫妥昔單抗（抗CD30）ADC（Bren-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康）對一組抗原陽性細胞株（SR-786、SU-DHL-1、HH、HBLM-2、L-540、MOTN-1）以及一非標靶對照細胞株（HL-60）的體外細胞毒性。
圖 47所示為與Enhertu直接比較的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康的旁觀者效應之評估。ADCs對一抗原陽性細胞株（SKBR3，左上圖）與一抗原陰性細胞株（MDA-MB-468，右上圖）的體外細胞毒性。將SKBR-3與ADCs作用後的上清液轉移至MDA-MB-468細胞，以評估旁觀者殺傷效果（MDA-MB-468，下圖）。
圖 48所示為以曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康、Enhertu、未共軛的依沙替康或未共軛的喜樹鹼處理SKBR-3細胞後1、2或3天，相較於未處理組，組蛋白H2A.X磷酸化（左上圖）、活化的凋亡蛋白酶3（右上圖）以及活化的PARP（左下圖）與細胞活性（右下圖）的相對定量。
圖 49所示為Enhertu以及P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康在大鼠血清中於37℃下作用0、1、3以及7天後的藥物與抗體比率。在從血清中下拉ADC後，以MS測量藥物與抗體的比率。
圖 50所示為ADCs曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康（上圖）、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康（中圖），以及Enhertu（下圖）在與大鼠血清於37℃下作用0、1、3以及7天後對一Her2陰性細胞株MDA-MB-468（左列圖）以及一Her2陽性細胞株SKBR3（右列圖）的細胞毒性。
圖 51所示為ADCs曲妥珠單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康（上圖）、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康（中圖），以及Enhertu（下圖）在與人類血清於37℃下作用0、1、3以及7天後對一Her2陰性細胞株MDA-MB-468（左列圖）以及一Her2陽性細胞株SKBR3（右列圖）的細胞毒性。
圖 52所示為以布倫妥昔單抗-P5(PEG12)-VC-PAB-依沙替康-DAR8處理雌性Spraque-Dawley大鼠後，透過ELISA對血液循環中總抗體量進行定量。
圖 53所示為使用奈米差示掃描螢光法（nano differential scanning fluorimetry，nanoDSF）確定的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康以及Enhertu的熔解曲線。
圖 54所示為用於確定Enhertu以及曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康與細胞外Her2結合的平衡結合常數（K D）的圖表，以及獲得的平衡結合常數（K D）值。
圖 55所示為具有藥物抗體比為8（表示為「DAR8」）的ADC曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康以及Enhertu於黑暗中在37℃及4℃下作用0、1、2及4週後形成的聚集體的百分比。
圖 56所示為當使用未共軛的曲妥珠單抗、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8、Enhertu，以及一同種型對照時，以基於鈣黃綠素釋放的抗體依賴性細胞毒性（antibody-dependent cellular cyctotoxicity，ADCC）分析測量對Her2陽性標靶細胞SKBR-3、SKOV-3以及N87的特異性殺傷百分比。
圖 57所示為使用未共軛的曲妥珠單抗、曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，以及Enhertu對Her2陽性SKOV-3細胞以及Her2陰性 MDA-MB-468細胞進行的基於pHrodo的內化研究之結果。
圖 58所示為使用曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8以及Enhertu對Her2陽性細胞SKBR-3、N87、HCC-1569、HCC-78、OE-19、SK-GT-2，以及SKOV-3進行的體外細胞毒性測量之結果。
圖 59所示為在Her2陽性SKBR3細胞與曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8以及Enhertu作用後，並將上清液轉移至Her2陰性細胞 Karpas-299與DU-145後所測量的體外旁觀者能力之結果。
圖 60所示為在Her2-陽性SKBR-3細胞與Her2-陰性MDA-MB-468細胞的共培養物中曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8以及Enhertu的體外旁觀者能力之測量結果。
圖 61所示為使用曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8、Enhertu，以及帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8，對人類臍靜脈內皮細胞、人類支氣管內皮細胞、肝竇內皮細胞、許旺細胞、人類腎近端小管上皮細胞、正常人類真皮纖維母細胞、人類角膜上皮細胞，以及THLE-3（肝細胞）進行的細胞毒性測量結果。所示為曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8與帕利珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8以及Enhertu相比的細胞毒性。
圖 62所示為在已經以20 mg/kg曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或作為參考的Enhertu處理的雌性SCID小鼠中，以曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8進行的體內藥物動力學實驗之結果。
圖 63所示為在以H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8治療後在實體瘤模型中測定的CB17-Scid小鼠的平均腫瘤體積。
圖 64所示為以H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8治療後 CB17-Scid小鼠的體重。
圖 65所示為在已經以10 mg/kg H8-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8或未修飾的H8抗體處理的雌性SD大鼠中獲得的體內藥物動力學實驗（PK-實驗）之結果。
圖 66所示為平均DAR為4的曲妥珠單抗P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR4的HIC與SEC層析圖。
圖 67所示為在已經以10 mg/kg的平均DAR為4的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康處理的雌性SD大鼠中獲得的體內藥物動力學實驗（PK-實驗）之結果。
圖 68所示為具有藥物抗體比為8（DAR8）的曲妥珠單抗-P5(PEG24)-VC-PAB-依沙替康DAR8與Enhertu直接比較的體內評估結果。報導的是觀察腫瘤生長幾天後的初步結果。
無

Claims (42)

  1. 一種具有式（I）之共軛物： （I）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： RBM為受體結合分子； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。
  2. 如請求項1之共軛物，其中 為雙鍵；V不存在；X為 ；且R 3為H或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基；較佳地，R 3為H或(C 1-C 8)烷基；更佳地，R 3為H。
  3. 如請求項1或2之共軛物，其中該受體結合分子係選自由下列所組成之群組：抗體、抗體片段，以及具有類抗體結合特性之蛋白質結合分子。
  4. 如請求項3之共軛物，其中該受體結合分子為抗體。
  5. 如請求項4之共軛物，其中該抗體係選自由下列所組成之群組：單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人類抗體，以及單一結構域抗體，例如駱駝或鯊魚單一結構域抗體。
  6. 如前述任一請求項所述之共軛物，其中Y為NH。
  7. 如請求項6之共軛物，其中該受體結合分子為抗體。
  8. 如前述任一請求項之共軛物，其中該連接子L為可切割的。
  9. 如請求項8之共軛物，其中該連接子L可被蛋白酶、葡醣醛酸糖苷酶、硫酸酯酶、磷酸酶、酯酶，或雙硫化物還原切割。
  10. 如請求項9之共軛物，其中該連接子L可被蛋白酶切割，較佳被組織蛋白酶，例如組織蛋白酶B切割。
  11. 如前述任一請求項之共軛物，其中該連接子L包含纈胺酸-瓜胺酸分子部分或纈胺酸-丙胺酸分子部分。
  12. 如請求項11之共軛物，其中該連接子L為： ， 其中#表示與Y的連接點，*表示與該喜樹鹼分子部分的連接點。
  13. 如請求項11之共軛物，其中該連接子L為： ， 其中*表示與Y的連接點，##表示與喜樹鹼分子部分的連接點。
  14. 如前述任一請求項之共軛物，其中R 1為第一聚亞烷基二醇單元R F。
  15. 如請求項14之共軛物，其中該第一聚亞烷基二醇單元R F包含1至100個具有以下結構的次單元： 。
  16. 如請求項15之共軛物，其中R F為 ， 其中： 表示O的位置； K F選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；以及 o為1至100 之間的整數。
  17. 如請求項14至16任一項之共軛物，其中R 1為第一聚乙二醇單元。
  18. 如請求項17之共軛物，其中該第一聚乙二醇單元R F包含1至100個具有以下結構的次單元： 。
  19. 如請求項18之共軛物，其中R F為： ， 其中 表示O的位置； K F選自由下列所組成之群組：-H、-PO 3H、-(C 1-C 10)烷基、-(C 1-C 10)烷基-SO 3H、-(C 2-C 10)烷基-CO 2H、-(C 2-C 10)烷基-OH、-(C 2-C 10)烷基-NH 2、-(C 2-C 10)烷基-NH(C 1-C 3)烷基，以及-(C 2-C 10)烷基-N((C 1-C 3)烷基) 2；以及 o為1至100 之間的整數。
  20. 如請求項19之共軛物，其中K F為H。
  21. 如請求項20之共軛物，其中o的範圍為8至30。
  22. 如請求項21之共軛物，其中o的範圍為20至28。
  23. 如請求項22之共軛物，其中o為22、23、24、25，或26。
  24. 如前述任一請求項所述之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C係選自由下列所組成之群組：依沙替康（exatecan）、SN38、喜樹鹼、托泊替康（topotecan）、伊立替康（irinotecan）、貝洛替康（belotecan）、魯托替康（lurtotecan）、盧比替康（rubitecan）、喜拉替康（Silatecan）、可替康（cositecan），以及吉馬替康（gimatecan）。
  25. 如請求項24之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C為具有下式之依沙替康： 。
  26. 如請求項25之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C為具有下式之依沙替康： 。
  27. 如請求項25或26之共軛物，其中該依沙替康係透過該胺基與連接子L結合。
  28. 如請求項1之共軛物， 其中： RBN為抗體； 為雙鍵；或 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H； 當 為雙鍵時，X為 ； 當 為化學鍵，X為 ； Y為NH； R 1為具有以下結構的聚乙二醇單元： ， 其中： 表示O的位置； K F為H；以及 o為8至30 之間的整數； R 3為H； R 4為H； L為一具有以下結構的連接子： ， 其中#表示與Y的連接點，*表示與該喜樹鹼分子部分(C)的連接點； C為喜樹鹼分子部分； m為1；以及 n為1至10之間的整數。
  29. 如請求項28之共軛物，其中該喜樹鹼分子部分C為具有下式之依沙替康： 。
  30. 如請求項29之共軛物，其中該依沙替康係透過該胺基與連接子L結合。
  31. 如請求項30之共軛物，其中o的範圍為20至28。
  32. 如請求項31之共軛物，其中o為22、23、24、25，或26。
  33. 如請求項28至32任一項之共軛物，其中n的範圍為2至10，較佳為其中n為4或8。
  34. 如請求項33之共軛物，具有式（Ia） （Ia）， 其中RBM為抗體。
  35. 一種具有式（II）之化合物： （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數。
  36. 一種製備具有式（I）之共軛物的方法，該方法包括： 使式（II）之化合物 （II）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 為三鍵；或 為雙鍵； 當 為三鍵時，V不存在；或 當 為雙鍵時，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為三鍵時，X為 ；或 當 為雙鍵時，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分；以及 m為1至10之間的整數；以及 與具有式（III）之含硫醇分子反應 （III）， 其中RBM為受體結合分子；以及 n為1至20之間的整數； 得到具有以下公式（I）之化合物 （I）， 或其醫藥上可接受之鹽類或溶劑化物； 其中： 當在式（II）之化合物的 為三鍵時， 為雙鍵；或 當在式（II）之化合物的 為雙鍵時， 為化學鍵； 當 為雙鍵時，V不存在；或 當 為化學鍵，V為H或(C 1-C 8)烷基； 當 為雙鍵時，X為 ；或 當 為化學鍵，X為 ； Y為NR 5、S、O，或CR 6R 7； R 1為可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 3為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 4為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 5為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 6為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； R 7為H；或可選擇性取代的脂肪族殘基或可選擇性取代的芳香族殘基； L為連接子； C為喜樹鹼分子部分； m為1至10之間的整數；以及 n為1至20之間的整數。
  37. 如請求項36之方法，進一步包含在還原劑存在下還原該受體結合分子的至少一個雙硫鍵以形成硫醇基團（SH）。
  38. 一種醫藥組合物，包含如請求項1至34任一項所述之共軛物。
  39. 如請求項38之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含如請求項1至27任一項所述之共軛物群體，且其中每個受體結合分子的喜樹鹼分子部分C的平均數目為大於0至約14。
  40. 一種如請求項1至34任一項之共軛物或一種如請求項38或39所述之醫藥組合物在一種治療疾病之方法中的用途。
  41. 如請求項40之共軛物或醫藥組合物之用途，其中該疾病為癌症。
  42. 如請求項41之共軛物或醫藥組合物之用途，其中該癌症為實體瘤。
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