JP2021087446A - 細胞培地および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
以降で、種々の代表的実施形態に対し詳細な言及を行う。以下の詳細な説明は、読み手に対し、特定の実施形態、特徴、および本開示の態様の詳細のより完全な理解を与えるために提供されており、本開示の範囲を制限するものと解釈されるべきではないことは理解されよう。
本開示がさらに容易に理解できるように、特定の用語が最初に定義される。追加の定義は、詳細な説明のそれぞれの該当場所で記述される。
栄養素フィード、機能性添加物またはサプリメントは、通常、バイオリアクター中に直接送られる透明液体濃縮物に再構成される透明液体濃縮物または粉末として供給される。これは、中の成分は、溶解限度を決して超えられないことを意味する。溶解限度を超えて調製される場合、通常白濁色の薄片または微細沈殿物としてビン中に沈殿物が形成されることはよく知られている。これらの成分の沈降は、数時間内に発生し、これは、この濃縮液を使用して、正確なフィード量を送ることができないことを意味する。
本開示は、乾燥粉末化細胞培地、フィード、サプリメントまたは濃縮物から作られた上述のマイクロ/ナノ懸濁液をマイクロカプセル化する方法を提供する。得られたカプセル化生成物は、本開示では、「マイクロカプセル」、「カプセル化ビーズ」、「ビーズ」、「カプセル」または「マイクロビーズ」と呼ぶ場合もある。カプセル化マイクロ/ナノ懸濁液をビーズに乾燥する場合、乾燥ステップは、より大きな濃度のカプセル化マイクロ/ナノ懸濁液を与える。マイクロカプセル化は、例えば、錯体混合物中の細胞培地/フィードなどの感受性もしくは不安定成分を「離しておく」または隔離するために行ってもよい。従って、カプセル化は、より高い濃度のアミノ酸などの特定のフィード成分を得ることができ、それにより、これらのフィードを、濃縮高栄養素サプリメントとして、任意の培養系、例えば、流加培養中に直接添加できる。さらなるカプセルのコーティングは、細胞培養液中への栄養素の遅延放出を行わせることができる(下記で考察)。カプセル化は、(a)数時間にわたり一部または全部の成分を「徐々に放出する」ためのマイクロ懸濁液およびナノ懸濁液用標準的マイクロカプセル化プロセス、(b)内部成分放出を大きく遅らせる代替ビーズゲル化プロセス、によって行うことができる。代表的な遅延放出の実例は、実施例ならびに図3、4および8で見ることができる。
また、本開示は、カプセル内の不安定な化合物は、カプセル化プロセスの前に、抗酸化剤などの1つまたは複数の保護物質とさらに組み合わせることができることについて記載する。従って、特定の実施形態では、粉末化培地、フィード、またはサプリメント中の抗酸化剤および不安定な成分の混合物を、カプセル化前のマイクロ懸濁液調製物を調製する出発材料として使用できる。代表的抗酸化剤には、限定されないが、アスコルビン酸、ベータカロテン、ビタミンA、Eなどのビタミン、リコペン、フラバノイド、セレンなどが含まれる。照射に対する保護に与える抗酸化剤の効果を図8に示す。
また、本開示は、キレート化剤について記載する。キレート化剤は、培地内で認められるカチオン、金属イオン、微量元素などの反応性分子をキレート化する、不活化または閉じ込める薬品である。反応性分子は、培地中の不安定な化合物と不都合な相互作用を起こし、それらの効力を低減させる。反応性化合物をキレート化/錯体化することにより、EDTA、クエン酸塩、スクシナート、シクロデキストリン、クラスレート、デンドリマー、アミノ酸などの化合物は、それらの反応性を低減させる。さらに、キレート化物は、不安定な化合物を含むマイクロカプセル/ビーズの外側に分離されて残るように設計できる。キレート化の不安定な化合物の保護に与える効果を図9に示す。
一実施形態では、任意選択として、マイクロカプセルは、マイクロカプセル内の成分の遅延放出または持続放出のためのPLGAなどの保護剤コーティングでさらにコートできる。典型的な遅延放出対象の培地成分には、限定されないが、ビタミン、グルコース、アミノ酸、増殖因子またはサイトカインが含まれる。成分は、遅延放出配合物に応じて、同じマイクロカプセル内から同じ速度で放出してもよく、または、異なるマイクロカプセルから異なる速度で、異なる時間に放出してもよい。このような二重型遅延放出培地に対する代表的使用は、培養の早期の成長成分(例えば、グルコース、アミノ酸など)の放出と、それに続く、培養の対数期後の後期の生産性関連成分の放出(例えば、組換えタンパク質発現がガラクトースなどを誘発する)での使用であろう。このような培地は、二重型培地が、必要な成分の適時放出を管理するので、使用者の操作は必要ないであろう。別の例は、特定の目的のために、培養液内で一緒に反応させる必要がある場合に、2つ以上の成分を指定時間まで別々に維持する場合であろう。
放出遅延の検出は、ある期間にわたり目的の成分のアッセイをすること、および経時的増加を観察することを含む。典型的CHO細胞栄養素サプリメントの一例は、グルコースの測定であろう。グルコースを含むサプリメントを、水に添加し、T=0試料を抜き出し、保持する。次に、その後、時間区分(例えば、24、48、72時間)で、追加の試料を取り出すことができる。サプリメント中に遅延放出成分がある場合、グルコースは、経時的に上昇するのが認められるであろう。グルコースを測定する1つのアッセイは、キットの形態で市販されているグルコースオキシダーゼの測定であろう。この原理は、グルコースオキシダーゼがグルコースと反応しグルコン酸と過酸化水素が得られるということである。過酸化水素は、o−ジアニシジンと反応し、酸化o−ジアニシジンを生成し、硫酸にさらすとピンク色になる。これは、分光光度的に読み取ることができる。グルコースまたはアミノ酸などの他のサプリメント成分測定用の別のアッセイは、HPLCによるものであろう。この方法は、遅延放出の顕著な特徴である放出成分の経時的連続増加を測定できる。
本開示では、不安定な、感受性または影響を受けやすい化合物には、限定されないが、物理的、化学的照射分解/破壊に敏感な物質が含まれる。典型的な感受性培地物質は、反応性酸素種との化学相互作用に対する感受性、微量金属を含む金属に対する感受性、高温に対する感受性、照射(ガンマ、X線、UV、電離など)に対する感受性、凍結温度に対する感受性、凍結融解に対する感受性、圧力、撹拌、に対する感受性、などであってもよい。本実施形態のさらなる態様では、微量元素または反応性酸素種(ROS)を生成する物質などは、キレート化される、および/または不安定な成分を含むマイクロカプセルの外部に保持されてもよい。
細胞培地は、多くの構成要素から構成され、これらの構成要素は、培地毎に変動する。細胞培地は、完全配合物、すなわち、細胞を培養するために補充の必要がない細胞培地であっても、不完全配合物、すなわち、補充の必要な細胞培地であっても、または不完全配合物を補充するために使われるサプリメントであってもよく、もしくは完全配合物の場合には、培養または培養結果を改善し得る。
また、本明細書記載のマイクロ懸濁液および/またはカプセル化マイクロ懸濁液を含む培地/フィードを使って、種々の細胞を培養できる。一実施形態では、培地を使って、植物または動物細胞、例えば、哺乳動物細胞、魚類細胞、昆虫細胞、藻類細胞、両生類細胞もしくは鳥類細胞を含む真核細胞が培養され、または培地を使ってウイルス、ウイルス様粒子が産生される。
本明細書記載の培地が対応している細胞は、研究者により決定される実験条件に従って培養できる。所与の動物細胞型に対する最適播種条件および培養条件は、常用の実験を使うだけで当業者により決定できることは理解されよう。本明細書記載の細胞培地を使った常用の単層培養条件に関しては、細胞を、接着因子なしで培養容器の表面に播種し培養できる。あるいは、容器を天然、組換え型または合成接着因子またはペプチド断片(例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニンなど、またはそれらの天然もしくは合成断片)でプレコートできる。これらは、例えば、Life Technologies、Corp.(Carlsbad、CA R&D Systems、Inc.(Rochester、Minnesota)、Genzyme(Cambridge、Massachusetts)およびSigma(St.Louis、Missouri)、から市販品として入手できる。また、細胞は、形成済みコラーゲンゲルもしくは合成生物高分子材料などの天然または合成3次元支持マトリックスの中または上に播種できる。懸濁培養に関しては、細胞は、典型的な例では、本明細書記載の培地中に懸濁され、スピナーフラスコ、灌流培養装置、またはバイオリアクターなどの、懸濁状態で細胞の培養を促進する培養容器中に導入される。理想的には、培地成分の変性と培養中の細胞の剪断を避けるために、培地と懸濁細胞の撹拌は、最小限にされる。
懸濁状態の細胞の培養または単層細胞培養に加えて、本培地は、哺乳動物細胞由来ウイルスの産生方法に使用可能である。このような方法は、(a)細胞(例えば、哺乳動物細胞)をウイルスによる感染を促進するのに適する条件下でウイルスと接触させること、および(b)本明細書記載の培地中、細胞によるウイルスの産生を促進するのに適した条件下で細胞を培養すること、を含む。培地中で細胞培養の前、その間、またはその後に細胞をウイルスと接触させることができる。哺乳動物細胞にウイルスを感染させる最適な方法は、当技術分野でよく知られており、当業者は精通している。本明細書記載の培地で培養されたウイルス感染哺乳動物細胞は、本明細書記載の細胞培地以外の細胞培地で培養された細胞よりも高いウイルス力価(例えば、2、3、5、10、20、25、50、100、250、500、または1000倍高い力価)を生じることが期待できる。
また、本培地は、懸濁状態で成長させた真核細胞を含む細胞由来の組換えタンパク質の産生法に使用可能であるが、哺乳動物細胞が好ましく、特に、懸濁状態で成長させた哺乳動物細胞由来のタンパク質の産生法が好ましい。本開示によるポリペプチドの産生方法は、本明細書記載の培地中、細胞によるポリペプチドの発現に適する条件下でポリペプチドを産生するように遺伝的に操作されている細胞(例えば、哺乳動物細胞)を培養することを含む。哺乳動物細胞を目的のポリペプチドを発現するように遺伝的操作をする最適な方法は、当技術分野でよく知られ、従って、当業者は精通している。細胞は、本開示の培地中で培養する前に遺伝的に操作でき、または、培養液中に入れた後で、培地中で、それらに、1つまたは複数の外因性の核酸分子を形質移入できる。遺伝的に操作された細胞は、本培地中で、上述の方法に従って、単層培養、またはより好ましくは、懸濁培養として培養できる。細胞培養後、目的のポリペプチドは、任意選択で、当業者によく知られたタンパク質単離技術により細胞、および/または使用された培地から精製できる。
本明細書で提供されるのは、培地成分を含むマイクロまたはナノ懸濁液の調製方法である。この方法は、例えば、特定成分のマイクロ懸濁液(ms)、および/またはナノ懸濁液(ns)により、溶解度をはるかに超えて培地および/またはサプリメントを濃縮することを可能にでき、またさらに、マイクロ懸濁液(ms)、および/またはナノ懸濁液(ns)のカプセル化により、ビーズを形成し、続けて、カプセル化ビーズの乾燥を行い、成分濃度のさらなる増加が生じる。
約7X濃度の培地成分のマイクロ懸濁液作製用(リン酸ナトリウムなし)プロトコル:
1) 30gの乾燥形態粉末化培地、サプリメントまたはフィード(リン酸ナトリウムなし)を乳鉢中に秤取。
2) 7.5mlのWFI(注射用の水)を添加。
3) フレキシブルなグリーンプラスチックスパチュラを使って、粉末が湿り、水を「取り込み」、ペーストを形成し始めるまで混合する。均一になるようにペーストを全体的に素早く混合し、マイクロ懸濁液を得る。
4) 1mlの追加のWFIをマイクロ懸濁液に加え、全体を混合する。
5) マイクロ懸濁液を容器に集め、スパチュラを使って「スクイージを行って」最後の量までマイクロ懸濁液を容器に送り込む。容量は、約29mlである。
6) 送出のために、ピストン送出装置(例えば、シリンジタイプ装置)を使用する。
マイクロカプセル化は、特に、粉末化細胞培地中の反応性成分から不安定な成分を物理的に分離または隔離する機序を提供できる。例として挙げると、アルギナートもしくは他のいずれかのカプセル化マトリックスまたはカプセル形成物質は、マイクロカプセル化に使用できる。
培地、サプリメントまたはフィードをさらに濃縮する方法であるカプセル化マイクロ懸濁液の作製用プロトコル:
1) 培地、サプリメントまたはフィードのマイクロ懸濁液(リン酸ナトリウムなし)を作る(例えば、上述のようにして)。
2) 13.5mlの6%アルギナートをマイクロ懸濁液に加え、全体をスパチュラで混ぜて、アルギナートを混合する。容量は、約40.5mlになるはずである。
3) 四角の(中サイズ)ポリプロピレン使い捨て秤量皿の底を覆うためにパラフィルムを円形状に切り出す。パラフィルムを秤量皿の底に置く。
4) エッペンドルフ・リピーター・プラス・ピペット用チップを、はさみで末端の約1/64"を切り取って整え、完全に押し下げた場合、切り口がプランジャーの末端の位置までではないことを確認する。
5) 位置1(25μl)に設定した2.5mlのシリンジを備えたエッペンドルフ・リピーター・プラスを使って、マイクロ懸濁液をシリンジ中にゆっくり引き込む。空気は粘性マイクロ懸濁液中に残り、送出容量を変えるので、空気がシリンジ中に吸い込まれていないことを確認する。
6) エッペンドルフのレバーを数回押し下げてシリンジに呼び水を差す。マイクロ懸濁液をシリンジ末端から流し出した後で、シリンジの末端を拭き取る。その後、シリンジ末端をパラフィルム表面から数mmの位置に垂直に保持し、レバーを押し下げ、同じ箇所に約5秒間保持し、全25μlの液滴をパラフィルム表面上に送出させる。次に、隣の位置に移動し、繰り返す。パラフィルム全表面にわたり液滴を配置することを続ける。アルギナート−マイクロ懸濁液液滴は、パラフィルム上に数秒間、放置後凸面の球状形を形成する。
7) アルギナートを架橋してヒドロゲルを形成させるために、25mlの塩化カルシウム(無水)の133g/Lの溶液を秤量皿中に送出する。Ca溶液が下に入ると液滴が浮揚しようとするので、ピンセットを使って、パラフィルム(およびアルギナート−マイクロ懸濁液液滴)を塩化カルシウム溶液表面の下に保持することが必要となる場合がある。
8) パラフィルムとアルギナート−マイクロ懸濁液液滴を塩化カルシウムの下に30秒間保持する。ビーズを形成させる。
9) 30秒後、ピンセットを使ってパラフィルムの一端を掴み、押し動かしてゆるめ、全ビーズを取り外す。それにより、パラフィルムを秤量皿中で上下反対に回転させ、塩化カルシウム中で前後に振り回すのを行い易くなる。ビーズは、パラフィルムから容易に剥がれる。
10) マイクロ懸濁液は、吸収性ティッシュペーパー上に置かれる(ステップ16)まで処理全体を通してゆっくり溶解するので、ステップ11〜18を遅滞なく通過すること。
11) 直ちに秤量皿を半分に折り畳み、秤量皿の末端を狭めて皿内にビーズを保持するように注意して、塩化カルシウム溶液を廃棄する。
12) 秤量皿の把持を緩めて、直ちに必要量のWFIを半分まで加える(注ぐ)。
13) 直ちに秤量皿を前のように折り畳み、WFIを廃棄する。
14) 秤量皿の把持を緩めて、直ちに必要量のWFIを半分まで注ぎ込む。
15) 直ちに秤量皿を前のように折り畳み、WFIを廃棄する。
16) ひっくり返し、各秤量皿の中身を二重のティッシュペーパー上に出し、できる限りビーズから水を吸収させる。
17) ティッシュペーパーを秤量皿上に保持し、白色のフレキシブルなプラスチックスパチュラを使ってビーズをすくう。
18) 2つの白色プラスチックスパチュラを使って、相互に接触しないようにビーズを離す。
19) ドラフト中に一晩置く。
20) 翌朝、ビーズを真空乾燥チャンバー中のCaSO4上に置く。
21) 3日間乾燥させ、その後、ビーズを取りだし、軽く付着している秤量皿の表面から取り外す。透明秤量皿をひっくり返し、秤量皿中のビーズのカバーとして使用する。一端をわずかに持ち上げ、秤量皿の表面に沿って白色フレキシブルスパチュラを押し込み、ビーズを取り外す。全てを取り外した後で、新しい秤量皿中に置き、追加の4日間、真空乾燥チャンバーのCaSO4上に戻し、乾燥を確実にする。
カプセル化標的が、ビタミンなどの少ない培地成分の場合、ステップIは、カプセル化される成分の濃縮物溶液を直接2%アルギナート溶液中に混合することを含む。溶液は、充分濃縮されているため、1%以下の容量の2%アルギナートしか必要としない。マイクロ懸濁液の形成は必要ない。このアルギナート−成分溶液は、次に、133g/LのCaCl2溶液中に直接落下する25μlの液滴として添加され、30秒間保持される。
a) CaCl2溶液からビーズを流し出し、迅速に2回洗浄する。
b) ビーズを分離し、平面上に置いて数日間乾燥し、水分を確実に1%未満とする。
c) 次に、ビーズを屈折性が生じ、硬くなるまで真空デシケーター中のCaSO4上に数日間置く。
d) 乾燥ビーズは、次の使用に関して準備が整った状態である。
ビーズコーティング設備を利用できないため、代用のプロセスを開発した。ビーズの持続放出コーティング層中に、孔、または弱い領域が全く発生しないことを確実にする必要があることが明らかになった。インタクトビーズは、手で加えられている有機相の性質に起因して、繰り返し均一にコートできなかった。従って、スライド代用コーティングおよび試験アッセイが開発された。
1) 上述のようにアルギナート−マイクロ懸濁液を作製する。
2) エッペンドルフピペットを使って、赤色環状スライドの透明ガラス円形部内に5μlのアルギナート−マイクロ懸濁液の点を打つ。
3) 直ちにプラスチックスパチュラまたは他のフレキシブルツールを使って、5μlのアルギナート−マイクロ懸濁液を「つぶす」か、または平坦化して、できるだけ多くの円形ガラス透明領域を満たす(目標は、アルギナート−マイクロ懸濁液の表面をできる限り低くして、その後のPLGAコーティングを支援することである:背の高いビーズは、スライド上方に高く突き出過ぎるので、うまくいかない)。
4) スライドを133g/Lの塩化カルシウム溶液中に約20〜30秒間置く。
5) WFI中に浸漬して洗浄する。
6) スライドのWFIを流し出し(ティッシュペーパーを各ウエルに接触させて過剰水を吸収する)、ドラフト中で一晩乾燥する。
7) 次に真空中でCaSO4上に置き、乾燥させる。
8) PLGAストックは、25mg/0.6mlのクロロホルムの濃度で保持。50μLのクロロホルム中PLGAを加え、赤色環状スライド中のウエルを覆う。50μLの容量が、円形ウエル領域とビーズを「満たし」、ウエル上に凹型隆起を与える。このPLGA−クロロホルムの容量は、容易に蒸発し、乾燥アルギナート−マイクロ懸濁液上の平たい、接触レンズ様被覆を形成する。遅延:3コート>2コート>1コート。
9) PLGAの乾燥後、持続放出の各種濃度およびグリコール酸/乳酸比による比較を行うために使用する。
1. 55mlのPBSを50mlの遠心チューブに入れる。
2.14ウエル全てを覆う同じPLGA組成のスライド1つを加える。水平に保持して室温でインキュベートする。
3. 代表的カプセル化グルコースビーズのグルコースをアッセイし、各種比率のコーティング材料成分:グリコール酸/乳酸比の持続放出特性を試験した。
4. 種々の時間でのサンプリングのために、グルコースのSigmaグルコースオキシダーゼアッセイ(GAGO)を行った:
a) 0.10ml試料を50ml遠心チューブから10x75mmガラスチューブまたは1.5mlのWheatonゴムストッパー付化学分析用ガラスバイアルに入れる。
b) 0.20mlの試薬を同じチューブに入れ、混ぜる。
c) 37℃で15分間インキュベートする。
d) 0.20mlの12N硫酸を加え、混ぜる。
e) 対照:1g/Lグルコース溶液を1:10に希釈する(0.1ml+0.9ml WFI=100ug/ml);12.5ug/mlまで2X系列希釈(0.5mlグルコース+0.5ml WFI)を行う。対照は、100、50、25および12.5ug/mlグルコースである。またWFIブランクを含める。
f) 目安として、全14ウエルからの全てのマイクロ懸濁液が溶解されると、試料を、1:4に希釈して対照基準の範囲内に入るようにする必要がある[適用された合計グルコースは、14ウエルで0.022g/スライドである必要がある、pg 69 NB 1138]。
出力を読み取るために、Spectra Max384を使用:96ウエルトレー中に350μlの試料。透明または濃色の壁はいずれも同様に機能し、差は認められない。540nmでの吸光度を読み取る。
計算:[Sigmaグルコース(GO)アッセイキット、製品コードGAGO−20による]
グルコース量(mg)=(試験のΔA@540)(標準のグルコース量(mg)*)
*4つの希釈の内で一番近い標準濃度。
Δは、試験のOD読み間の差、または標準−ブランクの読み、を意味する。
**上記測定グルコース量(mg)に、試料調製で使った希釈因子を乗ずる。
多孔性金属シリンダーにアルギナートカプセル化マイクロ懸濁液乾燥ビーズを満たし、攪拌子を備えた1Lビーカー内に入れてバイオリアクター内の条件を模擬した。遅延放出用ビーズのPLGAコーティングは行わなかった。図11の図は、バイオリアクター内で攪拌するだけで、ビーズから栄養素サプリメントが得られ、溶解し、さらに、「バイオリアクター」中へ送るのに充分であることを示す。多孔性金属シリンダーは、サプリメントを得て、細胞培養系中に入れるのにポンプ圧送、管で運ぶ、などの必要はない。実際、一実験では、アルギナートビーズ単独(PLGAコーティング無し)中のサプリメントは、約20時間以内に完全にその含有物を放出するほど速く遊離する。持続放出には、ビーズが多孔性金属内にある場合でも、PLGAコーティングが必要である。図11の下段チャートは、AGT単独処理の粉末は、多孔性金属シリンダーを比較的素早く通過できるが、AGT単独では、遅延放出用としては機能しそうにないことを示す。留意すべき点は、多孔性金属シリンダーは、バイオリアクターに取り付けてオートクレーブ処理でき、サプリメントビーズは、培養中いつでも添加できるということである。
培地、フィードまたはサプリメント組成物を作製する方法であって、
最小限の容量の水溶液を、培地、フィードまたはサプリメントの乾燥粉末に加え、ペーストを作るステップ、
ペーストを激しく混ぜ合わせ、マイクロ懸濁液を調製するステップ、
を含む、方法。
項1に記載の培地のマイクロ懸濁液を調製するステップ、
任意選択で、有効量の抗酸化剤をマイクロ懸濁液と混ぜ合わせ、混合物を形成するステップ、
マイクロ懸濁液、またはステップ2の混合物を、マイクロカプセルまたはビーズが形成されるように、適切なカプセル形成物質でカプセル化するステップ、
マイクロカプセルまたはビーズを乾燥するステップ、
を含み、
培地が不安定な物質を含む、方法。
Claims (21)
- 培地、フィードまたはサプリメント組成物を作製する方法であって、
最小限の容量の水溶液を、培地、フィードまたはサプリメントの乾燥粉末に加え、ペーストを作るステップ、
前記ペーストを激しく混ぜ合わせ、マイクロ懸濁液を調製するステップ、
を含む、方法。 - 培地組成物を調製する方法であって、
請求項1に記載の前記培地のマイクロ懸濁液を調製するステップ、
任意選択で、有効量の抗酸化剤を前記マイクロ懸濁液と混ぜ合わせ、混合物を形成するステップ、
前記マイクロ懸濁液、または前記ステップ2の混合物を、マイクロカプセルまたはビーズが形成されるように、適切なカプセル形成物質でカプセル化するステップ、
前記マイクロカプセルまたはビーズを乾燥するステップ、
を含み、
培地が不安定な物質を含む、方法。 - 成分を含むマイクロ懸濁液を含む、培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- カプセル形成マトリックスを使ってビーズとしてマイクロカプセル化されている、不安定な成分および抗酸化剤の混合物を含む、培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記カプセル形成物質が、アルギナート、ポリ−L−乳酸、キトサン、アガロース、ゼラチン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デキストラン、硫酸デキストラン、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヘパラン硫酸、ジェランガム、キサンタンガム、グアーガム、水溶性セルロース誘導体およびカラゲナン、からなる群より選択される、請求項3に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記ビーズが、コーティング溶液でコートされる、請求項5に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記コーティング溶液が、ポリグリコール酸、PLGA(ポリ乳酸・グリコール酸共重合体)、コラーゲン、ポリヒドロキシアルカン酸(PHA)、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリホスファゼン、ポリアミノ酸、ポリジメチルシロキサン、ポリウレタン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリスルホン、ポリ−メチルメタクリラート、ポリ−2−ヒドロキシエチルメタクリラート、ポリアミド、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリビニルピロリドン、ポリ−L−リジンおよびポリオルニチン、からなる群より選択される、請求項6に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- キレート化反応種をさらに含む、請求項6に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記反応種がカチオン、金属イオンまたは微量元素のいずれかである、請求項8に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記キレート化成分が、EDTA、クエン酸塩、スクシナート、シクロデキストリン、クラスレート、デンドリマーおよびアミノ酸、からなる群より選択される、請求項8に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記組成物が照射される、請求項1〜10のいずれか1項に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記照射がガンマ線を使って行われる、請求項11に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記ガンマ線が25〜100kGyである、請求項12に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記ガンマ線が30〜50kGyである、請求項12に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記ガンマ線が30kGyである、請求項14に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 無菌状態でバイオリアクターに加えられる、請求項1〜15のいずれか1項に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記細胞培地、フィードまたはサプリメントが無タンパク質である、請求項1〜16のいずれか1項に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 前記マイクロ懸濁液に使われる前記粉末化細胞培地がAGT(先進造粒技術細胞培地)である、請求項1〜17のいずれか1項に記載の培地、フィードまたはサプリメント組成物。
- 乾燥形態細胞培地を生成するための、請求項1〜18のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 前記細胞培地の保存可能期間を延長するための、請求項1〜19のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 室温で貯蔵し、取り扱うための、請求項1〜20のいずれか1項に記載の組成物の使用。
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