JP2020523361A - ポリ（ａｄｐ−リボース）ポリメラーゼ阻害剤、調製方法および使用 - Google Patents

ポリ（ａｄｐ−リボース）ポリメラーゼ阻害剤、調製方法および使用 Download PDF

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Abstract

本発明には、一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグが開示され、本発明の化合物は、強力なＰＡＲＰ阻害活性を有し、癌、炎症性疾患などのＰＡＲＰに関連する疾患の治療に使用することができる。

Description

本出願は、２０１７年６月１４日に出願された中国特許出願であるＣＮ２０１７１０４５４４８５．５の優先権を主張する。本出願は、前記中国特許出願の全文を引用する。
本発明は、ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ阻害剤、調製方法および使用に関する。
ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ＰＡＲＰ）は、ＤＮＡ損傷修復、ゲノム安定性、プログラム細胞死などさまざまな細胞プロセスに関与する真核生物細胞におけるリボザイムの一種であり、最初に報告されたのは１９６３年であり、ＰＡＲＰファミリーには、ＰＡＲＰ−１、ＰＡＲＰ−２、ＰＡＲＰ−４、タンキラーゼ−１と２およびほかのＰＡＲＰ−３〜１６を含む構造および細胞機能が異なる少なくとも１８種類のサブタイプが含まれている。ＰＡＲＰは、ＤＮＡ結合ドメイン、カスパーゼカットドメイン、自己修飾ドメイン、触媒ドメインを含む４つのドメインで構成されている。その中で、ＰＡＲＰ−１が最初に発見され、ＰＡＲＰ−１とＰＡＲＰ−２の構造は似ているが、ＤＮＡ損傷修復のプロセスのほとんどがＰＡＲＰ−１によって行われるため、ＰＡＲＰ阻害剤の薬物研究は主にＰＡＲＰ−１阻害剤に集中している。
多くの種類の癌細胞は、正常な細胞よりもさらにＰＡＲＰに依存しているため、ＰＡＲＰ阻害薬は癌治療において最も魅力的な標的となっている。ＰＡＲＰ−１阻害剤は、抗がん剤の効果を向上させる増感剤として使用でき、化学療法薬または放射線療法薬は、腫瘍細胞のＤＮＡ構造を破壊することにより、細胞を阻害しまたは殺し、ＰＡＲＰ−１によって腫瘍細胞は損傷を受けたＤＮＡ細胞に対して修復することができるため、化学療法薬に対する耐性が生じる。したがって、ＰＡＲＰ−１阻害薬を化学療法薬と組み合わせて薬物耐性に対処し、それにより用量を減らして有効性を改善することができる。また、ＰＡＲＰ−１阻害剤のみを使用すると、ＤＮＡ修復欠損がん細胞、特にＢＲＣＡ−１／２欠失または突然変異がん細胞を殺すことができることが研究で明らかになった。
ＰＡＲＰ阻害剤に関する長年の研究に基づいて、目前でＰＡＲＰ−１阻害剤は抗癌剤の開発におけるホットスポットの１つになり、このターゲットの信頼性と実現可能性が確認された。ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのオラパリブ（Ｏｌａｐａｒｉｂ）、商品名Ｌｙｎｐａｒｚａは、２０１４年に、ＥＭＡとＦＤＡにより、ＢＲＣＡゲノム突然変異に関連した進行卵巣癌の化学療法後の単剤療法について前後に承認された。その後、ファイザーのＲｕｃａｐａｒｉｂとＴｅｓａｒｏのＮｉｒａｐａｒｉｂは、相次いで化学療法後の治療についてＦＤＡにより承認され、それ以外に、ＴａｌａｚｏｐａｒｉｂやＶｅｌｉｐａｒｉｂなどの他の研究されている薬が臨床試験中にある。これらの最近の研究結果も、ＢＲＣＡ遺伝子欠失またはゲノム突然変異関連癌の治療において、ＰＡＲＰ阻害剤が大きな利点を持っていることが裏付けられた。
本発明の目的は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ阻害剤、調製方法および使用を提供することにある。本発明の化合物は、強力なＰＡＲＰ阻害活性を有し、癌、炎症性疾患などのＰＡＲＰに関連する疾患の治療に使用することができる。
第１の態様において、本発明は、一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグを提供する；
ただし、
Ｒａは、水素、重水素、フッ素、置換または非置換Ｃ１−６アルキル、または置換または非置換シクロアルキルから選択され、
Ｒｂは、水素、重水素、置換または非置換Ｃ１−６アルキル、または置換または非置換シクロアルキルから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、水素、重水素またはフッ素から選択される。且つ、Ｒａが水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９の少なくとも一つは重水素またはフッ素であり、
Ｒａが水素である場合、ｎは１であり、且つＲ９が５位のフッ素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ８は同時に水素ではなく、
Ｒａが水素である場合、ｍは０ではなく、且つＲ７がフッ素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ８は同時に水素ではなく、
ｍはＲ７の数量であり、且つ０、１、２、３または４であり、
ｎはＲ９の数量であり、且つ０、１、２または３である。
本発明の一つの好ましい実施形態では、Ｒｂは水素または重水素である。
本発明の一つの好ましい実施形態では、上記の一般式Ｉで示される化合物の構造は以下の通りである：
ただし、Ｒａは、重水素、フッ素、または置換または非置換Ｃ１−６アルキル基から選択され、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｎは上記で定義した通りである。
本発明の一つの好ましい実施形態では、上記の一般式Ｉで示される化合物の構造は以下の通りである：
ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の中には、少なくとも１つの重水素またはフッ素が含まれ、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｎは上記で定義したとおりである。
本発明の一つの好ましい実施形態では、上記の一般式Ｉで示される化合物の構造は以下の通りである：
ただし、Ｒａは、重水素、フッ素、または置換または非置換のＣ１−６アルキル基から選択される。
本発明のいくつかの実施形態では、上記の一般式Ｉで示される化合物の構造は一般式Ｉ−４で示される化合物である：
ただし、Ｒａはメチル、フッ素または重水素であり、
Ｒ７ａ、Ｒ７ｂ、Ｒ８、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂおよびＲ９ｃは、それぞれ独立に、水素またはフッ素である。
上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒａはフッ素または重水素であってもよく、フッ素であってもよい。
上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒ７ｂは水素であってもよい。
上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒ８は水素であってもよい。
上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒ９ａは水素であってもよい。
上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒ９ｃは水素であってもよい。
本発明のいくつかの実施形態では、上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒａはメチル、フッ素または重水素であり、Ｒ７ａ、Ｒ７ｂ、Ｒ８、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂおよびＲ９ｃは、それぞれ独立に、水素またはフッ素であり、且つ多くても２つのフッ素がある。
本発明のいくつかの実施形態では、上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒａはメチル、フッ素または重水素であり、上記Ｒ８は水素であり；上記Ｒ７ｂ、Ｒ９ａおよびＲ９ｃは、それぞれ独立に、水素またはフッ素であり、且つ多くとも１つのフッ素のみがあり；上記Ｒ７ａおよびＲ９ｂは、それぞれ独立に、水素またはフッ素である。
本発明のいくつかの実施形態では、上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒａはフッ素または重水素であり、Ｒ８、Ｒ９ａおよびＲ９ｃは水素であり、上記Ｒ７ｂ、Ｒ７ａおよびＲ９ｂは、それぞれ独立に、水素またはフッ素であり、且つ上記Ｒ７ｂがフッ素である場合、上記Ｒ９ｂはフッ素である。
本発明のいくつかの実施形態では、上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒａはフッ素または重水素であり、上記Ｒ７ｂ、Ｒ８、Ｒ９ａおよびＲ９ｃは水素であり、上記Ｒ７ａおよびＲ９ｂはそれぞれ独立に、水素またはフッ素である。
本発明のいくつかの実施形態では、上記の一般式Ｉ−４で示される化合物において、上記Ｒａはフッ素であり、上記Ｒ７ｂ、Ｒ８、Ｒ９ａおよびＲ９ｃは水素であり、上記Ｒ７ａおよびＲ９ｂはそれぞれ独立に、水素またはフッ素である。
本発明の一つの好ましい実施形態では、上記の一般式Ｉで示される化合物は、以下の構造のいずれかから選択される。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、以下のキラル分離条件下で化合物１０１から得ることができる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１０．７分または１１．６分のＲＴで別々に収集して、上記の一般式（Ｉ）で示される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態では、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０１において以下の試験条件下で５．８分または７．７分のＲＴ値に対応するキラル化合物であってもいい。
上記検出条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ ４．６ｍｍ×２５０ｍｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍである。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０２から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１２．２分または１０．８分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０３から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１５．２分または１３．４分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０４から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１２．３分または１０．９分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０５から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンでであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝６０／４０であり、比は体積比であり；
流速は３．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
２０．５分または２３．８分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態では、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０５において以下の試験条件下で１５．０２分または１６．７１分のＲＴ値に対応するキラル化合物であってもいい。

上記検出条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝６０／４０であり、比は体積比であり；
流速は０．５ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍである。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉの化合物は、化合物１０６から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝６０／４０であり、比は体積比であり；
流速は３．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
２２．５分または２４．５分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉの化合物は、以下のキラル分離条件下で化合物１０７から得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＤ−Ｈ１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝６０／４０であり、比は体積比であり；
流速は３．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
２４．３分または２６．８分のＲＴで別々に収集して、式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０８から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝６０／４０であり、比は体積比であり；
流速は３．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
２１．３分または２３．３分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０９から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンでであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１３．６分または１５．８分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態では、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０９において以下の試験条件下で８．９分または１１．３分のＲＴ値に対応するキラル化合物であってもいい。
上記検出条件には以下のことが含まれる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ ４．６ｍｍ×２５０ｍｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンでであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍである。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１１０から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことを含むことができる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１６．７分または１４．２分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉの化合物は、化合物１１１から以下のキラル分離条件下で得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことを含むことができる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１８．７分または１６．９分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
本発明のいくつかの実施形態において、一般式Ｉの化合物は、以下のキラル分離条件下で化合物１１２から得ることができる。
上記キラル分離条件には以下のことを含むことができる。
キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり；
カラム温度は４０℃であり；
移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり；
移動相Ｂはエタノールであり；
勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり；
流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり；
検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
１５．８分または１４．２分のＲＴで別々に収集して、一般式（Ｉ）で表される化合物を得た。
他のキラル分離、精製方法または検出方法が使用される場合であっても、本発明に記載のキラル分離または検出方法において対応する保持時間でキラル単一化合物を得る限り、本発明の範囲内にある。
第２の態様において、本発明は、さらに一般式Ｉで示される化合物の調製方法を提供し、これは以下の工程を含む：
ａ１）塩基性および金属触媒条件下で一般式Ｉ−Ａで示される化合物と一般式Ｉ−Ｂで示される化合物をカップリング反応させ、一般式Ｉ−Ｃで示される化合物を得る。
ｂ１）酸性条件下で一般式Ｉ−Ｃで示される化合物を脱保護させ、一般式Ｉで示される化合物を得る；
ただし、Ｘはハロゲンであり、Ｒ０はアミン保護基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｎの定義は上記の通りである。
上記の式Ｉで表される化合物の調製方法において、上記Ｘは臭素であってもよい。
上記の式Ｉで表される化合物の調製方法において、上記Ｒ０はｔｅｒｔ−ブチル基であってもよい。
上記工程ａ１において、塩基性条件を提供するための試薬は、有機塩基類および無機塩基類を含む当該技術分野におけるそのような反応に通用な塩基性試薬であってもよい。上記有機塩基類は、リチウムヘキサメチルジシラジド、ナトリウムヘキサメチルジシラジド、カリウムヘキサメチルジシラジド、リチウムジイソプロピルアミド、ｎ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム、トリエチルアミン、ピリジン、２，６−ルチジン、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、リチウムｔ−ブトキシド、フッ化テトラブチルアンモニウムおよびＮ−メチルモルホリンのなかの一種又は多種であってもよい。上記無機塩基類は、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、フッ化セシウム、炭酸セシウム、炭酸リチウム、リン酸カリウム、水素化ナトリウムおよび水素化カリウムのうちの一種又は多種（例えば、炭酸カリウム）であってもよい。
上記工程ａ１において、上記金属触媒は、当該技術分野におけるそのような反応に通用な触媒であってよく、例えば、ヨウ化第一銅、臭化第一銅、塩化第一銅、銅粉、酸化第一銅、酸化銅、臭化銅、塩化銅、酢酸銅、酢酸第一銅、トリフルオロ酢酸銅、トリフルオロスルホン酸銅及び塩化第二鉄のうちの一種又は多種（例えば、ヨウ化第一銅）。
上記工程ｂ１において、酸性条件を提供するための試薬は、有機酸類および無機酸類を含む当該技術分野におけるそのような反応に通用な酸性試薬であってもよい。上記有機酸類は、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トリクロロ酢酸、ギ酸、酢酸及びシュウ酸のうちの一種又は多種であってもよい。上記無機酸類は、塩酸、硫酸、スルホン酸、リン酸およびメタリン酸のうちの一種又は多種であってもよい（例えば、メタンスルホン酸）。
第３の態様において、本発明は、有効量の上記の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、および多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
本発明はまた、上記の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または上記医薬組成物のＰＡＲＰ阻害剤により緩和され得る疾患を予防、緩和および／または治療するための薬剤の調製における応用を提供する。
本発明はまた、上記の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または上記上記医薬組成物のＰＡＲＰ阻害剤の調製における応用を提供する。
本発明はまた、一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または上記医薬組成物の癌、炎症性疾患、血管疾患、脳卒中、腎不全、糖尿病、パーキンソン病、敗血症性ショック、神経毒性、虚血性ショックまたは傷害、移植拒絶、再灌流傷害、網膜損傷、ＵＶ−誘発皮膚損傷、ウイルス感染または多発性硬化症を予防、軽減及び／または治療するための医薬の調製における応用を提供する。
本発明はまた、一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または上記医薬組成物のがん治療の補助医薬品の調製、または放射線治療および／または化学療法によるがん治療を強化するための医薬品の調製における応用を提供する。
本発明はまた、一般式Ｉで示される化合物、その医薬的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または上記医薬組成物の癌治療医薬品の調製における応用を提供し、上記癌が、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、メラノーマ、脳腫瘍（例えば、神経膠腫）、鼻咽頭癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸がん（例えば、結腸がん、直腸がんなど）、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平上皮がん、最終分化がんなど）、腎臓がん、皮膚がん、膠芽腫、神経芽腫、肉腫、脂肪肉腫、骨軟骨腫、骨がん、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮腫瘍（例えば、子宮頸がん、子宮内膜がんなど）、頭頸部腫瘍（例えば、喉頭がん、咽頭がん、舌がんなど）、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫（例えば、網状肉腫、溶解物リンパ肉腫、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫など）、真性赤血球増加症、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病など）、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱腫瘍、胆嚢がん、胆管がん、絨毛上皮がんまたは小児腫瘍（例えば、神経芽細胞腫瘍、胚精巣がん、網膜芽細胞腫など）から選択される。
本発明はまた、上記の一般式Ｉで示される化合物、その医薬的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または上記医薬組成物の癌治療医薬品の調製における応用を提供し、上記癌は、固形腫瘍、急性または慢性白血病、リンパ腫、中枢神経系がん、脳がん、血液由来がん、腹膜がん、胃がん、肺がん、相同組換え依存性ＤＮＡ二本鎖切断修復活性を欠く癌、ＢＲＣＡ−１またはＢＲＣＡ２の欠陥または突然変異表現型癌（例えば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌）から選択される。
上記の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、またはその薬物組成物は、別の１つまたは複種の抗癌剤と組み合わせて使用することができる。上記抗癌剤は、アルキル化剤、白金系薬、トポイソメラーゼ阻害薬、代謝拮抗薬、アルカロイド、抗体薬、ホルモン抗がん剤、プロテアソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＣＤＫキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲまたはＥＧＦＲ阻害剤、ｍ−ＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害剤、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害剤、ＡＬＫキナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１モノクローナル抗体またはＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体から選択される。
本発明はまた、一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、その異性体またはその混合物、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または医薬組成物の癌治療医薬品の調製における応用を提供する。上記医薬品は、別の１つまたは複種の抗癌剤と組み合わせて使用することができる。上記抗癌剤は、アルキル化剤（シクロホスファミド、塩酸マスタード、ジブロモマンニトール、カルムスチン、ダカルバジン、メルファランなど）、白金系薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、シクロスルフォプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、ロバプラチンなど）、トポイソメラーゼ阻害薬（トポテカン、イリノテカン、ルピジン、エクセナチド、レチコン、ギマチルカン、ジフルトリン）、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ペメトレキセドなど）、アルカロイド（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチンなど）、抗体薬（トラスツズマブ、パルトロズマブ、ベバシズマブなど）、ホルモン系抗がん剤（例えば、ロイプロリド、デュタステリド、デキサメタゾンなど）、プロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ、イキサゾミブ、レナリドミドなど）、ＣＤＫキナーゼ阻害剤（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂなど）、ＶＥＧＦＲまたはＥＧＦＲ阻害剤（アファチニブ、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブなど）、ｍ−ＴＯＲ阻害剤（エベロリムス、シロリムスなど）、ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害剤（イデラリシブなど）、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤（ソラフェニブ、ベムラフェニブ、レゴラフェニブなど）、他のＰＡＲＰ阻害剤（ｏｌａｐａｒｉｂ、ｎｉｒａｐａｒｉｂなど）、ＨＤＡＣ阻害剤（チダミド、パノビノスタット、ボリノスタットなど）、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害剤（クリゾチニブ）、ＡＬＫキナーゼ阻害剤（セリチニブ、アレクチニブなど）、ＡＫＴ阻害剤（ペリホシンなど）、ＡＢＬ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１モノクローナル抗体（Ｏｐｄｉｖｏ、Ｋｅｙｔｒｕｄａなど）またはＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）から選択される。
それとは反対に述べられない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される以下の用語は以下の意味を有する：
「アルキル」という用語は、１〜２０個の炭素原子の直鎖または分岐鎖の基を含む飽和脂肪族炭化水素基を指す。１〜１０個の炭素原子のアルキル基が好ましく、より好ましくは１〜８個の炭素原子のアルキル基であり、非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、１，１，２−トリメチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、３，４−ジメチルペンチル、２−エチルブチル、３−エチルペンチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、およびそれらの様々な異性体などが含まれるが、これらに限定されない。アルキル基は置換または非置換であってもよく、置換された場合、任意の利用可能な結合点で置換されてもよく、上記置換基好ましくはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アルキルアミノ、ニトロ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ基、シクロアルキルフルオレニルチオル基、ヘテロシクロアルキルチオル基、オキソ基、アミノ基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシル基またはカルボキシレート基などから独立して選択される１つまたは複数の基である。「アルキル」およびその接頭辞が本明細書で使用される場合、直鎖および分岐の飽和炭素結合の両方が含まれる。
「シクロアルキル」という用語は、３〜２０個の炭素原子、好ましくは３〜１２個の炭素原子、より好ましくは３〜１０個の炭素原子、最も好ましくは３〜６個の炭素原子を含む飽和または部分不飽和の単環式または多環式環状置換基を指し、単環式シクロアルキル基の非限定的な例にはには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキシルジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどが含まれるが、これらに限定されない。多環式シクロアルキル基の非限定的な例には、スピロ、縮合、および架橋シクロアルキル基が含まれるが、これらに限定されない。シクロアルキル基は、置換または非置換であってもよく、置換された場合、上記置換基は、好ましくは、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ニトロ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシまたはカルボキシレート基などから独立して選択される１つ又は複数の基である。
用語「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード、好ましくはブロモまたはヨードを意味する。
「置換」とは、基中の１つ以上の水素または重水素原子、好ましくは１〜５個の水素または重水素原子が、対応する数量の置換基によって互いに独立して置換されたことを意味する。
「薬学的に許容される塩」とは、酸性基、塩基性基または両性基であり得る他の毒性副作用を持たせずに遊離塩基の生物有効性を保持できる基を指し、非限定的な例には以下が含まれるがこれらに限定されない：酸性塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、オクタン酸塩、ギ酸塩、アクリル酸塩、イソ酪酸塩、ヘキサン酸塩、ヘプタン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、安息香酸塩、安息香酸メチル、フタル酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、（Ｄ、Ｌ）−酒石酸、クエン酸塩、マレイン酸塩、（Ｄ、Ｌ−）リンゴ酸塩、フマル酸塩、ステアリン酸塩、オレイン酸塩、ケイ皮酸塩、ラウリン酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、トンシレート、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩など。本発明の化合物が酸性基を含む場合、その薬学的に許容される塩は、さらに、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩）、有機塩基塩（例えば、アルキル芳香族アミン類、アミノ酸など）を含んでもよい。
「溶媒和物」は、１つまたは複数の溶媒分子と本発明の化合物から形成された凝集体（または会合体）を意味する。形成される溶媒和物の溶媒には、水、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸などが含まれるが、これらに限定されない。
「多結晶形態」とは、２つ以上の異なる分子配列の存在により固体状態で生成される本発明の化合物の異なる固体結晶相を指し、単結晶または多結晶混合物として存在し得る。
「安定同位体誘導体」とは、本発明化合物の任意の水素原子を１〜５個重水素原子で置換した同位体置換誘導体、または任意の炭素原子を１〜３個のＣ１４原子で置換して得られた同位体置換誘導体、または任意の酸素原子を１〜３個のＯ１８原子で置換して得られた同位体置換誘導体を意味する。
「プロドラッグ」は、生理学的条件下（例えば、生体内）または加溶媒分解により本発明の生物学的に活性な化合物に変換することができる化合物を意味し、薬学的に許容される代謝前駆体であると理解されてもよい。プロドラッグは、不活性化合物であり、または活性親化合物より活性が低いが、生体内で急速に変換されて本発明の親化合物を生成することができ、これにより、動物への溶解性およびある代謝特性を改善することができ、例えばアミノ保護基、カルボキシル保護基、リン脂質など。
「医薬組成物」とは、本明細書に記載の１つ以上の化合物、またはその生理学的に薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ、および他の化学成分、ならびに生理学的に薬学的に許容される担体および賦形剤などの他の成分を含む混合物を意味する。医薬組成物の目的は、生物の投与を促進し、活性成分の吸収に有利であり、生物学的活性を発揮することである。
「異性体」は、鏡像異性体およびジアステレオマーを含む立体異性体を意味し、シス−トランス異性体はジアステレオマーの１つであり；本化合物の異性体は、それらの鏡像異性体、ジアステレオマー、およびそれらの混合物であってよく、遊離または塩形態を含む。
本発明で使用される任意の保護基、アミノ酸、および他の化合物の略語は、特に明記しない限り、通常使用される一般的に受け入れられている略語に準じ、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢＣ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９７２， １１， ９４２−９４４を参照）を参照する。
当該技術分野の通常知識から逸脱しない範囲で、上記の好ましい条件は、任意に組み合わせることができ、本発明の各好ましい実施例を得た。
本発明で使用される試薬および原材料は市販から入手できる。
本発明の積極的な進歩は、本発明の化合物が強力なＰＡＲＰ阻害活性を有し、癌、炎症性疾患などのＰＡＲＰに関連する疾患の治療に使用できることである。
図１は、ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞の腫瘍体積に対する対照群、化合物実施例２３およびＮｉｒａｐａｒｉｂの阻害効果を示す。
以下の実施例により本発明をさらに説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
本発明の実施例に特定の条件を特定しない実験方法は、一般に、従来の方法および条件に従うか、または原材料または商品製造業者によって推奨される条件に従う。具体的な出処を表明していない試薬は、市場から購入した通常的な試薬である。
本発明のすべての化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）または質量分析（ＭＳ）により確定することができる。ＮＭＲシフト（δ）は、１０−６（ｐｐｍ）を単位として記録された。ＮＭＲ測定機器は、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ−４００分光計で実行された。検定した重水素化溶媒は、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素化メタノール（ＭｅＯＤ）、重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）で、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。
低分解能質量スペクトル（ＭＳ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ ６１２０ ｑｕａｄｒｕｐｌｅ ＬＣＭＳ質量分析計によって検定された。
ＨＰＬＣ純度は、Ａｇｉｌｅｎｔ高速液体クロマトグラフＡｇｉｌｅｎｔ １２６０／１２２０クロマトグラフ（ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘ ＢｏｎｕｓＲＰ ３．５μｍ×４．６ｍｍ×１５０ｍｍまたはＢｏｓｔｏｎ ｐＨｌｅｘ ＯＤＳ ４．６ｍｍ×１５０ｍｍ×３μｍ）で検出された。
本発明の化合物およびそれらの中間体の精製は、従来の分取ＨＰＬＣ、シリカゲルプレート、カラムクロマトグラフィーまたはフラッシュセパレーターで分離精製が行われた。
薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートには、煙台黄海、煙台ＸｉｎｎｕｏＣｈｅｍｉｃａｌのＨＳＧＦ２５４、または青島のＧＦ２５４シリカゲルプレートが使用された。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に使用されたシリカゲルプレートは、２．５×５ｃｍ、０．２ｍｍ〜０．２５ｍｍの規格であり；薄層クロマトグラフィー（ｐｒｅ−ＴＬＣ）で製品を精製するのに使用された仕様は、１ｍｍまたは０．４ｍｍ〜０．５ｍｍおよび２０×２０ｃｍである。
カラムクロマトグラフィー（シリカゲルカラムクロマトグラフィー）は、一般に１００〜２００メッシュまたは２００〜３００メッシュまたは３００〜４００メッシュの仕様を使用した。
高速分離器で使用される機器はＡｇｅｌａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＭＰ２００であり、カラムの仕様は一般にＦｌａｓｈ ｃｏｌｕｍｎ ｓｉｌｉｃａ−ＣＳ （１２ｇ〜３３０ｇ）である。
分取ＨＰＬＣ（Ｐｒｅ−ＨＰＬＣ）に使用した機器は、ＧｉｌｓｏｎＧＸ−２８１、カラムタイプＷｅｌｃｈ ｕｌｔｉｍａｔｅＸＢ−Ｃ１８ ２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ×１０μｍである。
キラルテストカラムモデルは、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ、ＯＪ−ＨまたはＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ−Ｈ、ＡＳ−Ｈ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ、分取カラムタイプＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ、ＯＪ−ＨまたはＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ−Ｈ、ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍである。
本発明の既知の出発材料は、当該技術分野で既知の方法により、またはそれらに従って合成することができ、またはサプライヤーであるシグマ・アルドリッチ、アクロス、アルファ・エーザー、ＴＣＩ、ベリング、アン・ケミカル、スイユアン・ケミカル、マクリーン、シヤン・ケミカルなどの企業から購入し得る。
無水テトラヒドロフラン、無水ジクロロメタン、無水Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミドなどの無水溶媒は、すべて上記の化学会社から購入した。
実施例で特に明記しない限り、反応は一般に窒素またはアルゴン雰囲気下で実施され、窒素またはアルゴン雰囲気とは、反応フラスコが約１Ｌ容積の窒素またはアルゴンのバルーンに接続され、３回の抽気置換を行うことを意味する。
実施例には特に記載はなく、反応温度は室温であり、温度は１５〜２５℃である。
実施例の反応は、一般にＬＣＭＳまたはＴＬＣによって監視され、そのうち、ＬＣＭＳ機器は上記のとおりであり；ＴＬＣで使用される展開溶媒システムは、一般に、ジクロロメタンとメタノール、石油エーテルと酢酸エチル、ジクロロメタンと酢酸エチル、石油エーテルとジクロロメタン、酢酸エチルとメタノールの系であり、溶媒の体積比は、化合物の極性によって調製され、少量（０．１％〜１０％）の塩基（例えば、トリエチルアミンまたは３７％アンモニア水など）または酸（例えば、酢酸など）を入れて、調整を行ってもよい。
精製された化合物は、Ｐｒｅｐ−ＴＬＣ、カラムクロマトグラフィー、またはＡｇｅｌａ調製システムにより調製された。溶出溶媒系は一般的に：ジクロロメタンとメタノール、石油エーテルと酢酸エチル、ジクロロメタンと酢酸エチル、石油エーテルとジクロロメタン、酢酸エチルとメタノールなどの系であり、溶媒の体積比は、化合物の極性によって調節され、少量（０．１％〜１０％）の塩基（たとえば、トリエチルアミンまたは２８％アンモニア水など）または酸（たとえば、酢酸など）を添加し、調整を行ってもよい。
本発明の略語は以下の意味を有する。
ＤＭＡｃ：Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＰＥ：石油エーテル
ＥＡ：酢酸エチル
ＤＡＳＴ：三フッ化Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ硫黄
（Ｂｏｃ）２Ｏ：二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
ＮａＨＣＯ３：重炭酸ナトリウム
ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム
ＮａＨ：水素化ナトリウム
ＤＥＡ：ジエチルアミン
ヘキサン：ｎ−ヘキサン
ＲＴ：保持時間
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
Ｐｒｅｐ−ＴＬＣ：分取薄層クロマトグラフィー
Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ：分取高速液体クロマトグラフィー
実施例１：
２−（４−（３−ジュウテロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
ステップ１：エチル２−（４−ブロモフェニル）−５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン酸エチル
２−（４−ブロモフェニル）酢酸エチル（２４．３ｇ、０．１ｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（６０ｍＬ）に溶解し、６０％ＮａＨ（４．３ｇ、０．１０７ｍｏｌ）をバッチに加え、添加が完了した後、混合物を２０分間撹拌し、（３−ブロモプロピル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２１．４ｇ、０．０９ｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６０ｍＬ）溶液を滴下し、滴下完了後、混合物を４０〜４５℃に加熱し、且つ撹拌しながら２時間反応させた。ＴＬＣにより新しい物質が形成されたが、少量の原料（ＴＬＣ条件：ＥＡ：ＰＥ＝１：１０）が残っていることが分かった。反応系に塩化アンモニウム溶液１００ｍＬを入れ、反応をクエンチさせ、酢酸エチルで抽出（３００ｍＬ＋１００ｍＬ）し、有機相を乾燥させ、濃縮して３７．０ｇの粗生成物を得た。その粗生成物を混合して、１００〜２００メッシュのシリカゲルでカラムクロマトグラフィー（溶出条件：石油エーテル勾配で酢酸エチル：石油エーテル１：４まで溶出）、中間体として得られたエチル２−（４−ブロモフェニル）−５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタン酸エチルは１８．０ｇの油状物であり、収率は４５％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ３００．０ ［Ｍ−１００］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ （ｐｐｍ） ７．４８ − ７．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２２ − ７．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５２ （ｓ， １Ｈ）， ４．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．６， ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５２ （ｓ， １Ｈ）， ３．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ２．０７ （ｓ， １Ｈ）， １．８７ − １．７３ （ｍ， １Ｈ）， １．４７ − １．３７ （ｍ， ４Ｈ）， １．２２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）．
ステップ２：３−（４−ブロモフェニル）ピペリジン−２−オン
エチル２−（４−ブロモフェニル）−５−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタノエート（４５．０ｇ、０．１１ｍｏｌ）の２００ｍＬのエタノールに、２Ｍ塩酸エタノール溶液（２００ｍＬ）を滴下した。滴下完了後、撹拌しながら３０分間反応させた。ＬＣ−ＭＳで、出発物質の消失が示され、濃縮を行った得た残渣を炭酸カリウム（２３．０ ｇ、０．１５ｍｏｌ）と混合し、混合物をエタノール（５００ ｍＬ）で１８時間加熱還流し、ＬＣ−ＭＳでは、出発物質の消失が示され、濃縮を行った得た残渣を２００ ｍＬの水と混合し、６ Ｎ塩酸でｐＨを１〜２に調整し、酢酸エチル（５００ ｍＬ × ２）で抽出し、乾燥させ、濃縮し、残渣を石油エーテルで精製して白色固体を得、真空乾燥により、３−（４−ブロモフェニル）ピペリジン−２−オン、２３．７ｇを得た。収率は８３％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２５４．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ （ｐｐｍ） ７．５３ − ７．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３ − ７．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４９ − ３．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１９ （ｔｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ６．１， ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９６ − １．７５ （ｍ， ３Ｈ）．
ステップ３：３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン−２−オン
３−（４−ブロモフェニル）ピペリジン−２−オン（７．６ｇ、３０ｍｍｏｌ）をジュウテロメタノール（１００ｇ）に混合し、窒素ガスの保護で、４０〜４５℃まで加熱し、ナトリウムメトキシド（３．２ｇ、６０ｍｍｏｌ）を入れ、４０〜４５℃で１６時間反応させ、ＬＣＭＳ検出で９０％の重水素化率が示され、反応溶液を２０〜２５℃まで冷却し、塩化アンモニウム溶液１００ｍＬを加え、反応をクエンチさせ、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥し、濃縮して粗生成物を得、これを石油エーテルでスラリー化し、濾過して、白色固体である３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン−２−オン７．０ｇを得、収率は９２％であり、ＬＣＭＳ分析重水素化率は９２％であり、核磁気で重水素化率は９４％であると示された。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２５５．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ （ｐｐｍ） ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．６， ７．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９７ − １．７０ （ｍ， ３Ｈ）．
ステップ４：３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン
３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン−２−オン（７．０ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１４０ｍＬ）に溶解し、０〜５℃まで冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（３．１５ｇ、８２．９ｍｍｏｌ）をバッチに加え、撹拌しながら３０分間反応させ、エタノールを加え、撹拌しながら３０分間反応させ、三フッ化ホウ素エチルエーテル（１１．７ｇ、８２．９ｍｍｏｌ）を滴下し、添加完了後、温度を自然に２０〜２５℃に上昇し、撹拌しながら１８時間反応させ、ＬＣＭＳでは出発物質のほとんどが消失したことを示した。反応液を水１００ｍＬでクエンチさせ、酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、有機相を濃縮乾固させ、残渣を濃塩酸３０ｍＬおよびメタノール６０ｍＬと混合し、４０〜４５℃で３０分間反応させ、水を入れ反応液を希釈させ、さらに、２ＮのＮａＯＨ水溶液でｐＨ８〜９に中和し、酢酸エチルで抽出し、乾燥濃縮して、粗生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン６．０ｇを得、収率は９０％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２４１．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ５：３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
２０〜２５℃、３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン（１．１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、１Ｎ ＮａＯＨ（１０ｍＬ）のＭＴＢＥ（２０ ｍＬ）溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（０．７３ ｇ，３．３ ｍｍｏｌ）を入れ、添加完了後、混合物を１時間攪拌し、ＭＴＢＥの５０ｍＬを添加し、有機相を収集し、乾燥させ、濃縮して粗生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１．２２ｇを得、収率は９５％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２４１．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ６：３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
２０〜２５℃で、３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．０ｇ、３ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド（０．６５ ｇ 、３ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．２ｇ、９ｍｍｏｌ）、臭化第一銅（０．１ｇ、０．７ｍｍｏｌ）および８−ヒドロキシキノリン（０．１ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）をＤＭＡｃ（３０ ｍＬ）溶液に混合し、窒素ガスの雰囲気に置換して、保護を行い、１１０〜１２０℃、撹拌しながら１８時間反応させ、ＬＣＭＳは原料の一部が残り、生成物が形成されたことを示し、反応液を室温まで冷却し、５０ ｍＬの水を加えて反応をクエンチさせ、ＭＴＢＥ（２００ ｍＬ×２）で抽出し、有機相をクエン酸で洗浄し、乾燥濃縮して、泡状の粗生成物３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１．６ ｇを得、次のステップで、直接に使用した。
ステップ７：２−（４−（３−ジュウテロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをトルエン（３ｍＬ）に混合し、メタンスルホン酸（６ｍＬ）を室温で加えた。添加完了後、温度を４０〜４５℃に上げ、撹拌しながら３０分間反応させた。ＬＣＭＳは、出発物質が消失し、生成物が形成されたことが示し、水で希釈され、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨを８〜９に中和した。酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥濃縮して、粗生成物（１．１ｇ）を得た。上記粗生成物をＨＰＬＣにより分離し、調製液を得た。調製し得た約４００ｍＬの分離液を１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ８〜９までに中和し、次いで酢酸エチル（４００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥濃縮して、粗生成物である２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド１１４ｍｇを得た。上記粗生成物と６４ｍｇのｐ−トルエンスルホン酸がエタノールに完全に溶解するまで加熱することができ、エタノールを濃縮で除去した。残渣をテトラヒドロフランでスラリー化し、濾過し、乾燥して１１０ｍｇのｐ−トルエンスルホネートを得た。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ３２２．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ （ｐｐｍ） ９．００ （ｓ， １Ｈ）， ８．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．０， ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， ７．７４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３４ − ７．１７ （ｍ， ３Ｈ）， ３．４８ （ｄ， Ｊ ＝ １２．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．２２ − ３．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３７ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０９ （ｄ， Ｊ ＝ １０．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．９９ − １．８０ （ｍ， ２Ｈ）．
実施例２および３：
（ＲまたはＳ）−２−（４−（３−ジュウテロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
実施例１で得られたラセミ化合物をキラルカラムＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ （１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）により分離し、カラム温度は４０℃であり、移動相Ａは０．１％ＤＥＡ（ｖ／ｖ）のヘキサンであり、移動相Ｂはエタノールであり、実行時間は３０分間であり、勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ（５０／５０、ｖ／ｖ）であり、流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり、検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり、１０．７分（実施例２の化合物）と１１．６分（実施例３の化合物）のＲＴでそれぞれに収集して分離して、単一配置の２つの化合物を得、キラルカラムＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）によって検出して、カラム温度は４０℃であり、移動相Ａは０．１％ＤＥＡ（ｖ／ｖ）のヘキサンであり、移動相Ｂはエタノールであり、実行時間は２０分間であり、勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ（５０／５０）であり、流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであり、検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり、第一番目の単一配置化合物は実施例２であり、ＲＴは５．８ ｍｉｎであり、ｅｅ値は９９％であり、第二番目の単一配置化合物は実施例３であり、ＲＴは７．７ ｍｉｎであり、ｅｅ値は９９％であった。
実施例４〜２１：
実施例１〜３の合成方法に従っておよび対応する出発物質を採用して、以下の表のような実施例４〜２１の化合物を調製した：

実施例２２
２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
ステップ１： ３−（４−ブロモフェニル）−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃で１−ブロモ−４−ヨードベンゼン（２９．０ｇ、０．１０ｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）に溶解し、窒素ガスの保護で、−７８℃まで冷却し、反応系に２．５Ｍ ｎ−ブチルリチウム溶液（４５ｍＬ）を滴下し、滴下過程に温度が−７５℃を超えないようにコントロールし、滴下完了後１５分間攪拌し、反応系に３−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのテトラヒドロフラン溶液（１９．５ｇ、５０ｍＬ ＴＨＦ）を添加し、滴下過程に温度が−７５℃を超えないようにコントロールし、滴下完了後３０分間攪拌し、ＴＬＣは、ＴＬＣで出発物質の１−ブロモ−４−ヨードベンゼンがほとんど消失したことを示し（ＥＡ：ＰＥ＝１：４、２５４ｎｍ）、反応系に塩化アンモニウム水溶液１００ｍＬを加えることにより反応をクエンチさせた。酢酸エチル（３００ｍＬ×２）で抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥させ、粗生成物（３５ｇ）を得、カラムクロマトグラフィーにより生成物である１９．０ｇの３−（４−ブロモフェニル）−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得、収率は５１．９％であった（カラム分離条件：石油エーテルで石油エーテル：ＰＥ＝１：４まで溶出）。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２８３．０ ［Ｍ−７２］＋．
ステップ２：３−（４−ブロモフェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−ヒドロキシピペリジン−１−ｔｅｒｔ−ブチル（２６．０ｇ、０．０７４ｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（５００ｍＬ）に溶解し、窒素ガスの保護で、−７８℃まで冷却し、ＤＡＳＴ（５７．０ｇ、０．３５３ｍｏｌ）を反応系に滴下し、滴下過程に温度が−７５℃を超えないようにコントロールし、滴下完了後、２時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳで、原料が消失したことを示し、１００ｍＬの水を反応系に加え、反応をクエンチさせ、２Ｍ ａｑ．ＮａＯＨ水溶液でｐＨを７〜８に調整し、有機相を収集し、水相をジクロロメタン（３００ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を水で洗浄し、乾燥させて、粗生成物２１．５ｇを得、カラムクロマトグラフィーにより、生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１２．５ｇを得、収率は４７．８％であった（カラム分離条件：石油エーテルでＥＡ：ＰＥ＝１：１０まで溶出）。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２８３．０ ［Ｍ−７４］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ （ｐｐｍ） ７．５２ （ｔ， Ｊ ＝ １０．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３２ − ７．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２３．５， １６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３５ − ２．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２７ − １．８６ （ｍ， ３Ｈ）， １．５７ − １．３３ （ｍ， ９Ｈ）．
ステップ３：３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−フルオロピペリジン−２−オン（２．４５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド（１．５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．９５ｇ、２０．５ ｍｍｏｌ）、臭化第一銅（０．２ｇ、１．５ ｍｍｏｌ）および８−ヒドロキシキノリン（０．２ｇ、１．３６ ｍｍｏｌ）をＤＭＡｃ（６０ｍＬ）に混合し、窒素ガスで雰囲気を置換して、保護を行い、１１０〜１２０℃に加熱して１８時間撹拌し、ＬＣＭＳでは原料の一部が残っていることを示した。反応溶液を室温に冷却し、５０ｍＬの水を加えて反応をクエンチさせ、ＭＴＢＥ（５００ｍＬ×２）で抽出し、有機相をクエン酸水で洗浄し、乾燥濃縮して泡状の粗生成物（３．５ｇ）を得、および上記粗生成物からカラムクロマトグラフィー（ＰＥからＥＡ／ＰＥ＝３：２）により生成物である３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．５６ｇを得た。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２８３．０ ［Ｍ−４３］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ （ｐｐｍ） ９．３１ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｓ， １Ｈ）， ８．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３４．５， ８．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， ７．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３８ − ７．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３４ （ｄ， Ｊ ＝ ５８．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４６ − ２．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３３ − １．９５ （ｍ， ４Ｈ）， １．８４ − １．３７ （ｍ， ２１Ｈ）．
ステップ４：２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
２０〜２５℃の条件で、３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６８ｇ、１．４ｍｍｏｌ）をトルエン（１．５ｍＬ）に混合し、メタンスルホン酸（３ｍＬ）をゆっくり加え、添加完了後、温度を３０〜３５℃に上げ、反応物を撹拌しながら３０分間反応させた。反応溶液を水で希釈し、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ８〜９まで中和し、酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥し、濃縮し、粗生成物である２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド６００ｍｇを得、ｐｒｅ−ＨＰＬＣで分離して、生成物のトリフルオロ酢酸塩３７０ｍｇを得た。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ３３９．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ−ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ （ｐｐｍ） ９．０２ （ｓ， １Ｈ）， ８．２１ − ８．１２ （ｍ， ３Ｈ）， ８．０２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ０．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７５ − ３．３９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．２２ （ｔｄ， Ｊ ＝ １２．５， ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．２６ （ｓ， ４Ｈ）．
実施例２３および２４：
（ＲまたはＳ）−２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
実施例２２で得られたラセミ化合物を、キラルカラムＣｈｒｉａｌｐａｋ ＯＤＳ−Ｈ （１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）により分離し、カラム温度は４０℃であり、移動相Ａは０．１％ＤＥＡ（ｖ／ｖ）のヘキサンであり、移動相Ｂはエタノールであり、実行時間は３５分間であり、勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ（６０／４０、ｖ／ｖ）であり、流速は３．０ｍＬ／ｍｉｎであり、検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり、２０．５分（実施例２３の化合物）と２３．８分（実施例２４の化合物）のＲＴでそれぞれに収集して分離し、単一配置の２つの化合物を得、キラルカラムＣｈｒｉａｌｐａｋ ＯＤ−Ｈ （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）によって検出して、カラム温度が４０℃であり、移動相Ａは０．１％ＤＥＡ（ｖ／ｖ）のヘキサンであり、移動相Ｂはエタノールであり、実行時間は２５分間であり、勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ（６０／４０）であり、流速は０．５ｍＬ／ｍｉｎであり、検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり、第一番目の単一配置化合物は実施例２３であり、ＲＴは１５．０２ ｍｉｎであり、ｅｅ値は９９％であり、第二番目の単一配置化合物は実施例２４であり、ＲＴは１６．７１ ｍｉｎであり、ｅｅ値は９９％であった。
実施例２５〜４２：
実施例２２〜２４の合成方法に従っておよび対応する出発物質を採用して、以下の表のような実施例２５〜４２の化合物を調製した：
実施例４３
２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
ステップ１： ３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃で、３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５．０ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１８０ｍＬ）に溶解し、それぞれに６０％ＮａＨ（２．２ｇ、５５．０ ｍｍｏｌ）を添加し、添加完了後、４０〜４５℃までに昇温し、且つ３０分間撹拌し、次に、ヨードメタン（６．３ｇ、４４．４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）溶液を反応系に滴下し、添加完了後、４０〜４５℃で３０分間撹拌し続け、ＬＣＭＳでは出発物質の消失を示し、反応系に塩化アンモニウム水溶液（１５０ｍＬ）を入れて反応をクエンチさせ、酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、有機相を水で洗浄し（１００ｍＬ×２）、乾燥し、濃縮して、粗生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン１６．０ｇを得、収率は９９％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ３１４．０ ［Ｍ−５５］＋．
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ （ｐｐｍ） ７．５１ − ７．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２４ − ７．１８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １２．９， ８．５， ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４９ − ３．４０ （ｍ， １Ｈ）， ２．３９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １４．１， ４．８， ４．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １４．１， １１．０， ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８８ − １．６８ （ｍ， ２Ｈ）， １．５６ （ｓ， ９Ｈ）， １．５０ （ｓ， ３Ｈ）．
ステップ２：３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１６．０ｇ、０．０４４ｍｏｌ）をエタノール（２００ｍＬ）に混合し、塩酸エタノール（２００ｍＬ）をゆっくりと滴下し、添加完了後、撹拌しながら３０分間反応させ、反応系を濃縮乾固し、残渣を濃縮し、ａｑ． ＮａＨＣＯ３で遊離させ、酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で抽出し、有機相を乾燥し、濃縮して、生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン１．１ｇを得、収率は９５％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２６８．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ３：３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン
２０〜２５℃で、３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン（１１．５ｇ、４３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）に溶解し、０〜５℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（４．９ｇ、１３０ｍｍｏｌ）をバッチに添加し、且つ撹拌しながら３０分間反応させ、三フッ化ホウ素エチルエーテル（１９．０ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を滴下し、添加完了後、自然に２０〜２５℃まで昇温し、撹拌しながら１８時間反応させた。反応溶液に濃塩酸６０ｍＬを加え、且つ３０分間攪拌し、ＬＣＭＳでは、反応が完了したことを示し、５０ｍＬの水を反応溶液に添加し、２Ｍ ＮａＯＨ溶液を添加することによりｐＨを８〜９に調整し；酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で、有機相を水で洗浄し、乾燥し、濃縮して粗生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン１０．０ｇを得、収率は９１．７％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２５４．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ４：３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン（３．０ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）、１Ｎ ＮａＯＨ（１８ｍＬ）およびＭＴＢＥ（１００ｍＬ）を混合し、よく攪拌して、Ｂｏｃ２Ｏ（２．６ｇ、１１．９ ｍｍｏｌ）を加え、添加完了後、１時間攪拌し、反応溶液に１００ｍＬのＭＴＢＥを加え、有機相を収集し、乾燥し、濃縮して粗生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル３．６ｇを得、収率は８６．１％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ２９８．０ ［Ｍ−５５］＋．
ステップ５：３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−ジュウテロピペリジン（２．５６ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド（１．５６ｇ、７．２ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３．０ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）、臭化第一銅（０．２ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）および８−ヒドロキシキノリン（０．２ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）をＤＭＡｃ（６０ｍＬ）に混合し、窒素ガスで雰囲気を置換して、保護を行い、１１０〜１２０℃に加熱して１８時間撹拌し、ＬＣＭＳでは、出発物質の一部が残り、生成物が形成されたことを示し、反応溶液を室温まで冷却し、５０ｍＬの水を入れ、反応をクエンチさせ、ＭＴＢＥ（２００ｍＬ×２）で抽出し、有機相をクエン酸で洗浄し、乾燥し、濃縮して、３．５ｇの泡状の粗生成物を得、上記粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテルでＥＡ／ＰＥ＝３：２まで溶出）で分離し精製し、生成物である３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル））−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．８ｇを得、収率は４７％であった。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ４３５．０ ［Ｍ−１００］＋．
ステップ６：２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
２０〜２５℃の条件で、３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０ｇ、２ｍｍｏｌ）をトルエン（２ｍＬ）と混合し、メタンスルホン酸（４ｍＬ）をゆっくりと加え、添加完了後、３０〜３５℃まで昇温し、撹拌しながら３０分間反応させた。ＬＣＭＳでは、出発物質が消失し、生成物が形成されたことを示した。反応溶液を水で希釈し、ａｑ．ＮａＯＨでｐＨ８〜９に中和し、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥し、濃縮して７５０ｍｇの粗生成物を得、これをＨＰＬＣにより分離し精製して、生成物である２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミドのトリフルオロ酢酸塩４７０ｍｇを得た。
ＭＳ （ＥＳＩ）， ｍ／ｚ， ３３５．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ−ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ （ｐｐｍ） ８．９４ （ｓ， １Ｈ）， ８．２１ − ７．９６ （ｍ， ４Ｈ）， ７．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４ （ｄ， Ｊ ＝ １３．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５３ − ３．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２０ − ３．１７ （ｍ， １Ｈ）， ２．４１ （ｔ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９４ （ｄ， Ｊ ＝ １２．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．４２ （ｓ， ３Ｈ）．
実施例４４および４５：
（ＲまたはＳ）−２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−ホルムアミド
上記ラセミ化合物をキラルカラムにより分離し、単一配置のＲ配置生成物（実施例４４）およびＳ配置生成物（実施例４５）を得た。
実施例４３で得られたラセミ化合物を、キラルカラムＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ （１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）により分離し、カラム温度は４０℃であり、移動相Ａは０．１％ＤＥＡ（ｖ／ｖ）のヘキサンであり、移動相Ｂはエタノールであり、実行時間は３０分間であり、勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ（５０／５０、ｖ／ｖ）であり、流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり、検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり、１３．６分（実施例４４の化合物）と１５．８分（実施例４５の化合物）のＲＴでそれぞれに収集して分離し、単一配置の２つの化合物を得、キラルカラムＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）によって検出して、カラム温度は４０℃であり、移動相Ａは０．１％ＤＥＡ（ｖ／ｖ）のヘキサンであり、移動相Ｂはエタノールであり、実行時間は２０分間であり、勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ（５０／５０）であり、流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであり、検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり、第一番目の単一配置化合物は実施例４４であり、ＲＴは８．９ｍｉｎであり、ｅｅ値は９９％であり、第二番目の単一配置化合物は実施例４５であり、ＲＴは１１．３ ｍｉｎであり、ｅｅ値は９９％であった。
実施例４６〜６３：
実施例４３〜４５の合成方法に従っておよび対応する出発物質を採用して、以下の表のような実施例４３〜４５の化合物を調製した：
生物学的試験の実施形態：
実験例１ＰＡＲＰキナーゼ活性の測定
ＰＡＲＰ１キナーゼ活性は、次の方法で測定された。
この実験で使用した材料と機器：
多機能マイクロプレートリーダー ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）
ＰＡＲＰ１ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢＰＳ、Ｃａｔ＃８０５８０）
ＰＢＳ （Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃ ００３０００）
Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ、 Ｃａｔ＃Ｐ９４１６−１００ ｍＬ）
Ｈ２ＳＯ４ （Ｇｕｏｙａｏ、Ｃａｔ＃１００２１６１８）
実験方法と手順
１． ＰＡＲＰ１比色分析
１．１ 以下のものを含むＰＡＲＰ１ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ：
ＰＡＲＰ１ ５ μｇ
５ｘ ヒストン混合物（ｈｉｓｔｏｎｅ ｍｉｘｔｕｒｅ） １ ｍＬ
ビオチン化基質３００μＬを含む１０ｘアッセイ混合物
１０ｘ ＰＡＲＰ アッセイバッファー １ ｍＬ
ブロッキングバッファー２５ ｍＬ
活性化 ＤＮＡ ５００ μＬ
ストレプトアビジン−ＨＲＰ １００ μＬ
比色 ＨＲＰ 基質 １０ ｍＬ９６穴プレート一つ
１．２試薬の調製：
１×ＰＢＳ：一バッグのＰＢＳパウダーを取り、１Ｌの脱イオン水を加え完全に溶解させた。
ＰＢＳＴ： １×ＰＢＳにＴｗｅｅｎ−２０を入れ；
２Ｍ Ｈ２ＳＯ４：Ｈ２ＳＯ４を脱イオン水で２Ｍに希釈し；
１× ＰＡＲＰ Ｐアッセイバッファー：１０×ＰＡＲＰアッセイバッファーを脱イオン水で１：１０の比例で希釈し、１×ＰＡＲＰアッセイバッファーを得た。
１．３化合物の希釈
化合物をＤＭＳＯに溶解し、１００μＭに希釈し予備した。
試験の時、１００μＭ化合物ストック溶液を１×ＰＡＲＰアッセイバッファーで１０μＭに希釈し、１０％ＤＭＳＯを含む１×ＰＡＲＰアッセイバッファーで化合物を順次に３倍の勾配で希釈して、一連濃度の化合物を得た。各ウェルに５μＬの希釈された化合物（総容量５０μＬ）を加え、このようにして、化合物の最終濃度が１μＭから３倍希釈の一連濃度であった。
１．４反応ステップ
１．４．１コーティング
１）１×ＰＢＳで１：５の比率で５×ヒストン混合物を希釈して、１×コーティング溶液を得た。
２）各ウェルに５０μＬの希釈されたコーティング溶液を加え、４℃で一晩コーティングした。
３）コーティング溶液を廃棄し、ウェルあたり２００μＬＰＢＳＴバッファーで３回洗浄した。
４）２００μＬのブロッキングバッファーを各ウェルに加え、室温で９０分間インキュベートした。
５）ブロッキングバッファーを廃棄し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。
１．４．２ ＰＡＲＰ１反応実験
１）ウェルあたり２．５μＬの１０×ＰＡＲＰバッファー＋２．５μＬの１０×ＰＡＲＰアッセイ混合物＋５μＬの活性化ＤＮＡ＋１５μＬの脱イオン水の比率で反応溶液を調製し、２５μＬの反応溶液を各ウェルに入れた（表１を参照）。
２）５μＬの希釈された化合物をサンプルテストウェルに加え、１０％ＤＭＳＯを含む等量の１×ＰＡＲＰバッファーを全活コントロールウェルとブランクウェルに加えた。
３）２０μＬの１×ＰＡＲＰバッファーをブランクウェルに加えた。
４）ＰＡＲＰ１を氷上で解凍し、１×ＰＡＲＰバッファーで２．５ｎｇ／μＬに希釈し、２０μＬの希釈されたＰＡＲＰ１をブランクウェルを除くすべての反応ウェルに加え、よく混合し、室温で１時間反応させた
５）反応液を捨て、ＰＢＳＴで３回洗浄した。
１．４．３検出
１）ストレプトアビジン−ＨＲＰをブロッキングバッファーで１：５０に希釈し、５０μＬの希釈されたストレプトアビジン−ＨＲＰをすべてのウェルに加え、室温で３０分間インキュベートした。
３）ＨＲＰを廃棄し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。
４）１００μＬのｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ＨＲＰ ｓｕｂｓｔｒａｔｅを各ウェルに加え、室温で２０分間反応させた。
５）ウェルあたりに１００μＬの２Ｍ Ｈ２ＳＯ４を加えることにより、マイクロプレートリーダーでＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。
２．阻害率とＩＣ５０を計算した
阻害率は、次の式を使用して計算された。
阻害率＝（ＯＤｓａｍｐｌｅ−ＯＤ０％）／（ＯＤ１００％−ＯＤ０％）×１００％
ＯＤｓａｍｐｌｅ：サンプルテストウェルのＯＤ値；
ＯＤ０％：ブランクウェルのＯＤ値；
ＯＤ１００％：全活コントロールウェルのＯＤ値。
本発明の化合物のＰＡＲＰ−１キナーゼ阻害活性は、上記の実験方法により測定され、化合物のインビトロ酵素阻害活性（ＩＣ５０）は、以下の表２に示された：＋は１０〜１００、＋＋は１−１０μｍ、＋＋＋は０．５〜１μｍ、＋＋＋＋は０．１〜０．５μｍ、＋＋＋＋＋は＜０．１μｍをを表した。
実験例２ 実施例２、２３および２４の化合物のラット薬物動態学測定
１．実験概要
ＳＤラットを試験動物として使用し、実施例の化合物の静脈内投与および胃内投与後の異なる時点での血漿中の薬物濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により測定して、本発明の化合物のラット体内薬物動態学行為を研究し、その薬物動態学特性を評価した。
２．実験プログラム
２．１試験薬：
本発明の実施例３、２３、２４および陽性対照ニラパリブ（ｎｉｒａｐａｒｉｂ）化合物
２．２試験動物
試験化合物あたりＳｈａｎｇｈａｉ ＳｌａｃｋＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ Ｃｏ．、Ｌｔｄから購入された６〜９週齢で体重が２５０±５０ｇの健康な成体雄ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット３匹を使用した。
２．３試験薬の調製
適切な量のサンプルを秤量し、０．５％Ｍｅｔｈｏｃｅｌ／２％ｔｗｅｅｎ８０を最終体積まで入れ、胃内投与用に２ｍｇ／ｍＬを調製した。
２．４薬物投与
３つの試験化合物にそれぞれ雄のＳＤラット３匹を使い、１０ｍｇ／ｋｇの用量で絶食一晩後に胃内投与された。
３．実験操作
ラットは、投与の前後の０．０８３〜２４時間の異なる時点で頸静脈穿刺により採血された。Ｋ２−ＥＤＴＡで抗凝固処理し、遠心分離し、血漿が採取し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析まで−７０℃で保存された。
４．薬物動態学データの結果
本発明の化合物のラット薬物代謝パラメーターを以下の表３に示す。
結果に基づき、実施例３の化合物および実施例２４の化合物の曝露量が陽性化合物（ニラパリブ）の曝露量よりも有意に高く、実施例２３の化合物のＴ１／２が陽性化合物（ニラパリブ）よりも有意に大きいことが示された。
実施例３ 本発明の化合物２３のｉｎｖｉｔｒｏ代謝安定性評価
本発明の化合物のｉｎｖｉｔｒｏ肝臓ミクロソーム安定性の評価は、以下の方法により試験された：
試験化合物原液の調製：一定量の実施例化合物粉末を正確に秤量し、ＤＭＳＯで１０ｍＭに溶解し希釈した。
緩衝液：１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．４；１０ｎＭ ＭｇＣｌ２。
ＮＡＤＰＨ：β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸塩還元型、四ナトリウム塩、ＮＡＤＰＨ・４Ｎａ、サプライヤー：ｓｉｇｍａ、カタログ番号６１６。
肝ミクロソーム：ヒト肝ミクロソーム、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ Ｎｏ．４５２１１７；ラット肝ミクロソーム、Ｘｅｎｏｔｅｃｈ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｒ１０００；マウス肝臓ミクロソーム、Ｘｅｎｏｔｅｃｈ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｍ１０００；イヌ肝臓ミクロソーム、Ｘｅｎｏｔｅｃｈ Ｃａｔ Ｎｏ．Ｄ１０００；マカカ・ファシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の肝臓ミクロソーム、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ Ｎｏ．４５２４１３、０．５ｍｇタンパク質／ｍＬの濃度に最終製剤化された、
製剤停止溶液：内部標準として１００ｎｇ／ｍＬトルブタミドと１００ｎｇ／ｍＬラベタロールを含む冷アセトニトリル溶液。
化合物の希釈：
１．中間溶液：５μＬのストック溶液（１０ｍＭ）中の化合物またはコントロールを４９５μＬのメタノール（濃度：１００μＭ、９９％ＭｅＯＨ）で希釈した。
２．操作溶液：１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（濃度：１０μＭ、９．９％ＭｅＯＨ）４５０μＬで中間溶液を５０μＬに希釈された。
実験手順：
１．マトリックスブランクを除くすべてのプレート（Ｔ０、Ｔ５、Ｔ１０、Ｔ２０、Ｔ３０、Ｔ６０、ＮＣＦ６０）に１０μＬの化合物またはコントロールワーキング溶液／ウェルを加えた。
２．６８０μＬ／ウェルのミクロソーム溶液をＰｌａｔｅｍａｐに従って９６ウェルプレートに分注し、予備として、ミクロソーム溶液と化合物の混合物を３７℃で約１０分間インキュベートした。
３．１０μＬの１００ｍＭリン酸カリウムバッファー／ウェルをＮＣＦ６０に加え、３７℃でインキュベートしてタイマーを開始した。
４．予熱後、９０μＬ／ウェルのｄのＮＡＤＰＨ再生システムをＰｌａｔｅｍａｐに従って９６ウェルプレートに分注し、予備として、次に各プレートに１０μＬ／ウェルを加えて反応を開始した。インキュベーション培地中の各成分の最終濃度には、０．５ｍｇタンパク質／ｍＬミクロソーム、１μＭ試験化合物、１μＭ人参、０．９９％メタノールおよび０．０１％ＤＭＳＯが含まれた。
５．３７℃でインキュベートし、タイマーを開始した。
６．３００μＬ／ウェルの上記で調製した停止液を添加して（４℃冷却）、反応を終了させた。
７．サンプリングプレートを約１０分間振とうした。
８．サンプルを４℃で４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。
９．遠心分離の時点で、８つの新しい９６ウェルプレートに３００μＬのＨＰＬＣ水をロードし、その後、１００μＬの上清を移して混合し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで検出を行った。
１０．データ分析：対応する化合物と内部標準のピーク面積はＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムによって検出され、化合物のＴ１／２は次の式によって計算された。
。
本発明の実施例２３の化合物およびｎｉｒａｐａｒｉｂを上記手順に従って分析し、結果を以下の表４に示した。
１１．実験結果：表４に示すように、本発明の化合物２３は、ヒト肝ミクロソーム、イヌ肝ミクロソーム、およびマカカ・ファシキュラリス肝ミクロソーム実験において優れた代謝安定性を示した。
実施例４ マウスＭＤＡ−ＭＢ−４３６モデルでの本発明の化合物２３の薬力学的研究
４．１実験動物
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、６〜８週齢、体重１８〜２２ｇ、メス、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｘｉｐｕｅｒ−Ｂｅｉｋａｉ Ｅｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．から提供され、動物合格書番号：２０１３００１６００１９１４。
４．２飼育条件
動物が到着した後、実験環境で３〜７日飼育した後実験を開始した。動物は、ＳＰＦレベルの動物部屋で、ＩＶＣ（独立した空気供給システム）ケージに収容された（ケージあたり４匹）。各ケージ動物情報カードには、ケージ内の動物の数、性別、品系、受領日、投与スケジュール、実験番号、グループ、および実験の開始日が示された。すべてのケージ、パッド料、飲料水は使用前に滅菌され、ケージ、飼料、飲料水は週２回交換された。
４．３腫瘍細胞接種方法
ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス、カタログ番号ＡＴＣＣ−ＨＴＢ−１３０）をｉｎｖｉｔｒｏ単層培養し、培養条件はＲＰＭＩ１６４０培地に１０％ウシ胎児血清を入れ、３７℃５％ＣＯ２でインキュベートした。週に２回にトリプシン−ＥＤＴＡで通常の消化処理され継代培養した。セルの飽和度が８０％〜９０％の場合、数量が要件に達した後、セルを収集し、カウントし、接種した。０．２ｍＬ（１×１０７個）ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞（マトリゲルを入れ、体積比１：１）を各マウスの右背中に皮下接種し、平均腫瘍体積は１５７ｍｍ３に達した時、グループを分けて投薬を始めた。
４．４試験サンプルの調製
８０ｍＬの脱イオン水を秤量し適切な容器に入れ、２．５ｇのメチルセルロースを秤量し、攪拌しながらゆっくり脱イオン水に加え、均一になるまで攪拌し、１０ｍＬのＴｗｅｅｎ８０を吸い取り、溶液に加え、均一になるまで攪拌し、体積が５００ｍＬになるまで脱イオン水を加え続け、均一になるまで攪拌し、Ｖｅｈｉｃｌｅ溶媒を得た。適切な量の実施例２３のｐ−トルエンスルホネートを秤量し、適切な量の上記Ｖｅｈｉｃｌｅ溶媒を加え、均一になるまでボルテックスした。
４．５試験薬剤投与
投与量と投与スケジュールを表５に示した。
ヌードマウスの皮下の腫瘍体積を週に２〜３回測定し、ラットの体重を測定し、データを記録した。
４．６分析と評価
実験評価指標：腫瘍成長阻害率ＴＧＩ（％）または相対腫瘍成長率Ｔ／Ｃ（％）で、評価を行った。ここで、Ｔは実験群、Ｃは対照群であった。
相対腫瘍成長率Ｔ／Ｃ（％）の計算：Ｔ＞Ｔ０の場合、Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ−Ｔ０）／（Ｃ−Ｃ０）×１００％、Ｔ＜Ｔ０の場合、Ｔ／Ｃ（％＝（Ｔ−Ｔ０）／Ｔ０×１００％であり、ここで、ＴとＣは実験終了時の腫瘍体積、Ｔ０とＣ０は実験開始時の腫瘍体積であった。
腫瘍成長阻害率ＴＧＩ（％）の計算：ＴＧＩ（％）＝（１−Ｔ／Ｃ）×１００％。
評価基準：Ｔ／Ｃ（％）＞４０（即ち、ＴＧＩ（％）＜６０％）は無効であり；Ｔ／Ｃ（％）≦４０（即ち、ＴＧＩ（％）≧６０％）は有効であり、統計的に処理され、Ｐ＜０．０５場合に有効になった。
４．７薬力学的試験結果
ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞の腫瘍体積に対するコントロール群、実施例２３およびｎｉｒａｐａｒｉｂの阻害効果を表６および図１に示した。
結果に基づき、本発明の化合物実施例２３およびＮｉｒａｐａｒｉｂが、５０ｍｇ／ｋｇの用量で１８日間続けてＰＯ投与の場合、ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞ヌードマウスモデルの腫瘍成長に対して非常に強力な阻害効果を有し、且つ、本発明の化合物実施例２３の抗腫瘍活性は陽性対照ｎｉｒａｐａｒｉｂよりも強く、投与は１８日目で中止され、観察は３９日目まで継続され、化合物実施例２３およびｎｉｒａｐａｒｉｂは腫瘍の成長を阻害し続けることができることが見出され、および本発明の化合物実施例２３は、観察期間の抗腫瘍効果が、陽性対照のｎｉｒａｐａｒｉｂの抗腫瘍効果よりも著しく強く、本発明の化合物実施例２３は一部の動物の腫瘍を完全に退縮することができ、本発明の化合物実施例２３で腫瘍を完全に退縮した試験動物の比率は５０％であり、陽性対照のｎｉｒａｐａｒｉｂで腫瘍を完全に退縮した試験動物の比率は０であった。
実施例５ 本発明の化合物実施例２３によるヒト肝臓ミクロソームＣＹＰ４５０酵素の阻害効果の評価
６つのヒトサブタイプのＣＹＰ４５０酵素に対する本発明の化合物の阻害効果は、以下の実験方法により検定された。
各サブタイプ参照化合物：ＣＹＰ１Ａ２：α−ナフトフラボン；ＣＹＰ２Ｃ９：スルファフェナゾール；ＣＹＰ２Ｃ１９：オメプラゾール；ＣＹＰ３Ａ４：ケトコナゾール；ＣＹＰ２Ｄ６：キニジン。
基質濃度：ＣＹＰ１Ａ２：３０μＭのフェナセチン（Ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎ） ；ＣＹＰ２Ｃ９：１０μＭのジクロフェナク（Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）；ＣＹＰ２Ｃ１９：３５μＭのＳ−メフェニトイン（Ｓ−Ｍｅｐｈｅｎｙｔｏｉｎ）；ＣＹＰ３Ａ４：５μＭのミダゾラム（Ｍｉｄａｚｏｌａｍ）と８０μＭのテストステロン（Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）；ＣＹＰ２Ｄ６：１０μＭのブフラロール（Ｂｕｆｕｒａｌｏｌ）。
実験手順：
１．０．１Ｍリン酸カリウムバッファー（Ｋバッファー）を予熱し、ｐＨは７．４である；
１００ｍＭ Ｋバッファー：９．５ｍＬのストックＡと４０．５ｍＬのストックＢを混合し、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ超純水で５００ｍＬに希釈し、バッファーのｐＨが７．４になるまでＫＯＨまたはＨ３ＰＯ４を滴下した。
ストックＡ（１Ｍリン酸二水素カリウム）：１３６．５ｇのリン酸二水素カリウムを１ＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ超純水に溶解し；
ストックＢ（１Ｍリン酸水素二カリウム）：１７４．２ｇのリン酸水素二カリウムを１ＬのＭｉｌｌｉ−Ｑ超純水に溶解した。
２． ９６ウェルプレートに試験化合物と参照阻害剤の濃度勾配（４００×）を準備し；
２．１． １０ｍＭの試験化合物８μＬをアセトニトリル１２μＬに加えて、混合し；
２．２． ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、およびＣＹＰ２Ｄ６のために阻害剤標準溶液を調製した：１２μＬの１ｍＭα−ナフトフラボン＋１０μＬの４０ｍＭスルファフェナゾール＋１０μＬの１０ｍＭキニジン＋８μＬのＤＭＳＯ；
２．３． ＣＹＰ３Ａ４およびＣＹＰ２Ｃ１９のために個別の阻害剤標準溶液を調製した：８μＬ ＤＭＳＯ＋１２μＬ ＣＡＮ；
２．４． ＤＭＳＯ／ＡＣＮ（ｖ／ｖ：４０：６０）混合液に３倍勾配希釈を行い；
３． ４×ＮＡＤＰＨコエンザイムを準備し（６６．７ｍｇのＡＮＤＰＨを１０ｍＬの０．１ＭＫバッファーに溶解し、ｐＨ＝７．４）；
４． ４×基質濃度（各サブタイプに２ｍＬが必要）を準備し、ＨＬＭを添加する際に氷上で操作し；
５． 氷上で０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭ溶液（１０μＬ ２０ｍｇ／ｍＬから９９０μＬ ０．１ＭＫバッファー）を調製し；
６． ０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭを１ウェルあたり４００μＬでテストウェルに追加した後、勾配希釈した４００×試験化合物を対応するウェルに追加し；
７． ０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭを１ウェルあたり２００μＬでテストウェルに追加した後、勾配希釈した参照阻害剤を対応するウェルに追加し、ステップ６、７はすべて氷上で実行し；
８． ９６ウェルのテストプレートを氷上に置き、次の溶液（マルチウェル）をテストプレートに追加した；
８．１． ０．２ｍｇ／ｍＬのＨＬＭ溶液に３０μＬの試験化合物と参照化合物を混合し（ステップ６および７を参照）；
８．２． ４×基質溶液１５μＬを添加し（ステップ４を参照）；
９． ９６ウェルアッセイプレートとＮＡＤＰＨ溶液を３７℃で５分間プレインキュベートし；
１０． 予熱した８ｍＭ ＮＡＤＰＨ溶液（ステップ３を参照）を１５μＬ／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに追加して、反応を開始させ；
１１． テストプレートを３７℃でインキュベートした：３Ａ４を５分間、１Ａ２、２Ｃ９および２Ｄ６をそれぞれ１０分間、２Ｃ１９を４５分間インキュベートした；
１２． １２０μＬ／ウェルで内部参照を含むＡＣＮを添加して、反応を停止させ；
１３． クエンチングした後、プレートを振動機（ＩＫＡ、ＭＴＳ２／４）で１０分間（６００ｒｐｍ）振とうした後、１５分間遠心分離した（Ｔｈｅｒｍｏ Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅ×３Ｒ）。
１４．各ウェルからの上清液５０μＬを、５０μＬ超純水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＺＭＱＳ５０Ｆ０１）を含む９６ウェルサンプルプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ分析に使われた。
データ分析：ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０またはＸｌｆｉｔモデル２０５を使用して、データ計算に基づいて、以下の式を使用して曲線あてはめにより、ＩＣ５０を計算し；
Ｘは濃度の対数であり；Ｙは、高濃度から低濃度に相応する阻害剤濃度であった；
ヒト肝臓ミクロソームＣＹＰ４５０酵素の様々なサブタイプに対する本発明化合物のＩＣ５０を以下の表７に示した。
結果に基づき、本発明の化合物実施例２３のＣＹＰ４５０の６つの主なサブタイプに対する阻害半減期がすべて１０μＭを超えることが示され、化合物がＣＹＰ４５０酵素代謝において良好な安全性を有することが示された。
実施例６ 本発明の化合物実施例２３のｈＥＲＧカリウムチャネル阻害活性の測定
６つのヒトサブタイプのＣＹＰ４５０酵素に対する本発明の化合物の阻害効果に関する評価は、以下の実験方法により測定された：
６．１細胞の調製
ＣＨＯ−ｈＥＲＧ細胞を１７５ｃｍ２フラスコで培養し、細胞密度を６０〜８０％に増加させた時、培養液を除去し、７ｍＬ ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、リン酸塩緩衝液）で１回洗浄し、次に３ｍＬのＤｅｔａｃｈｉｎを加え、消化を行った。
消化完了後、７ｍＬの培養液を加えて中和し、そして遠心分離し、上清を吸引し、さらに５ｍＬの培養液を再懸濁して、細胞密度が２〜５×１０６／ｍＬになるようにした。
６．２ 溶液の調製（表８に示したとおり）
６．３電気生理学的記録プロセス
単一セルの高インピーダンスシーリングと全セルのパターニングはすべて、Ｑｐａｔｃｈ装置によって自動的に行われ、全細胞記録モードを取得した後、細胞を−８０ｍＶで固定し、５秒の＋４０ｍＶ脱分極刺激を与える前に、予め、５０ミリ秒の−５０ｍＶのプリアンプを与え、その後−５０ｍＶに再分極して５秒間保持してから、−８０ｍＶに戻した。この電圧刺激を１５秒ごとに印加し、２分間記録した後細胞外液を５分間記録し、そして、投与プロセスを開始し、化合物濃度は最低試験濃度から開始され、各試験濃度について２．５分間与えられ、すべての濃度が連続的に投与された後、陽性対照化合物３μＭ Ｃｉｓａｐｒｉｄｅの投与が行われた。各濃度で少なくとも３つのセルをテストした（ｎ≧３）。
６．４ 化合物の調製
２０ｍＭ化合物の母液を細胞外液で希釈し、５μＬの２０ｍＭ化合物の母液を２４９５μＬの細胞外液に加え、５００倍で４０μＭに希釈してから、０．２％ＤＭＳＯを含む細胞外液で３倍連続希釈を続けて、試験の最終濃度を得た。最高試験濃度は４０μＭで、それぞれ４０、１３．３３、４．４４、１．４８、０．４９、０．１６μＭの６つ濃度であった。最終試験濃度におけるＤＭＳＯ含有量は０．２％を超えず、この濃度のＤＭＳＯはｈＥＲＧカリウムチャネルに影響しなかった。
６．５データ分析
実験データはＸＬＦｉｔソフトウェアによって分析された。
６．６品質管理
環境：湿度２０〜５０％、温度２２〜２５℃；
試薬：使用した実験試薬はＳｉｇｍａから購入し、純度＞９８％であり；
レポートの実験データは、次の基準を満たす必要がある：
全体セルのシーリングインピーダンス＞１００ＭΩ
テール電流振幅＞４００ｐＡ
薬理学的パラメータ：ｈＥＲＧチャネルに対する多濃度Ｃｉｓａｐｒｉｄｅの阻害効果は、陽性対照として設定された。
６．７実験結果
本化合物の実施例２３によるｈＥＲＧ電流の阻害結果を以下の表９に示した。
結果に基づき、心臓ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対する本発明化合物の阻害半減期が４０μＭよりも大きいことが示され、実質的に阻害がないことが明らかであった。
本発明の好ましい実施形態を説明したが、当業者にとって、これらは単なる例であり、本発明の実施形態に対して本発明の原理と本質を逸脱しない範囲内で種々の変更或いは修正を行うことは明らかである。したがって、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって限定される。
実施例１：
２−（４−（３−ジュウテロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
ステップ７：２−（４−（３−ジュウテロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをトルエン（３ｍＬ）に混合し、メタンスルホン酸（６ｍＬ）を室温で加えた。添加完了後、温度を４０〜４５℃に上げ、撹拌しながら３０分間反応させた。ＬＣＭＳは、出発物質が消失し、生成物が形成されたことが示し、水で希釈され、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨを８〜９に中和した。酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥濃縮して、粗生成物（１．１ｇ）を得た。上記粗生成物をＨＰＬＣにより分離し、調製液を得た。調製し得た約４００ｍＬの分離液を１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ８〜９までに中和し、次いで酢酸エチル（４００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥濃縮して、粗生成物である２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド１１４ｍｇを得た。上記粗生成物と６４ｍｇのｐ−トルエンスルホン酸がエタノールに完全に溶解するまで加熱することができ、エタノールを濃縮で除去した。残渣をテトラヒドロフランでスラリー化し、濾過し、乾燥して１１０ｍｇのｐ−トルエンスルホネートを得た。
（ＲまたはＳ）−２−（４−（３−ジュウテロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
実施例４〜２１：
実施例１〜３の合成方法に従っておよび対応する出発物質を採用して、以下の表のような実施例４〜２１の化合物を調製した：
［表１］
実施例２２
２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−フルオロピペリジン−２−オン（２．４５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド（１．５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．９５ｇ、２０．５ ｍｍｏｌ）、臭化第一銅（０．２ｇ、１．５ ｍｍｏｌ）および８−ヒドロキシキノリン（０．２ｇ、１．３６ ｍｍｏｌ）をＤＭＡｃ（６０ｍＬ）に混合し、窒素ガスで雰囲気を置換して、保護を行い、１１０〜１２０℃に加熱して１８時間撹拌し、ＬＣＭＳでは原料の一部が残っていることを示した。反応溶液を室温に冷却し、５０ｍＬの水を加えて反応をクエンチさせ、ＭＴＢＥ（５００ｍＬ×２）で抽出し、有機相をクエン酸水で洗浄し、乾燥濃縮して泡状の粗生成物（３．５ｇ）を得、および上記粗生成物からカラムクロマトグラフィー（ＰＥからＥＡ／ＰＥ＝３：２）により生成物である３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．５６ｇを得た。
ステップ４：２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
２０〜２５℃の条件で、３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−フルオロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６８ｇ、１．４ｍｍｏｌ）をトルエン（１．５ｍＬ）に混合し、メタンスルホン酸（３ｍＬ）をゆっくり加え、添加完了後、温度を３０〜３５℃に上げ、反応物を撹拌しながら３０分間反応させた。反応溶液を水で希釈し、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ８〜９まで中和し、酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥し、濃縮し、粗生成物である２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド６００ｍｇを得、ｐｒｅ−ＨＰＬＣで分離して、生成物のトリフルオロ酢酸塩３７０ｍｇを得た。
（ＲまたはＳ）−２−（４−（３−フルオロピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
実施例２５〜４２：
実施例２２〜２４の合成方法に従っておよび対応する出発物質を採用して、以下の表のような実施例２５〜４２の化合物を調製した：
［表２］
実施例４３
２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
ステップ１： ３−（４−ブロモフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃で、３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５．０ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１８０ｍＬ）に溶解し、それぞれに６０％ＮａＨ（２．２ｇ、５５．０ ｍｍｏｌ）を添加し、添加完了後、４０〜４５℃までに昇温し、且つ３０分間撹拌し、次に、ヨードメタン（６．３ｇ、４４．４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）溶液を反応系に滴下し、添加完了後、４０〜４５℃で３０分間撹拌し続け、ＬＣＭＳでは出発物質の消失を示し、反応系に塩化アンモニウム水溶液（１５０ｍＬ）を入れて反応をクエンチさせ、酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、有機相を水で洗浄し（１００ｍＬ×２）、乾燥し、濃縮して、粗生成物である３−（４−ブロモフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１６．０ｇを得、収率は９９％であった。
ステップ５：３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
２０〜２５℃の条件で、３−（４−ブロモフェニル）−３−メチルピペリジン（２．５６ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド（１．５６ｇ、７．２ ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３．０ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）、臭化第一銅（０．２ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）および８−ヒドロキシキノリン（０．２ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）をＤＭＡｃ（６０ｍＬ）に混合し、窒素ガスで雰囲気を置換して、保護を行い、１１０〜１２０℃に加熱して１８時間撹拌し、ＬＣＭＳでは、出発物質の一部が残り、生成物が形成されたことを示し、反応溶液を室温まで冷却し、５０ｍＬの水を入れ、反応をクエンチさせ、ＭＴＢＥ（２００ｍＬ×２）で抽出し、有機相をクエン酸で洗浄し、乾燥し、濃縮して、３．５ｇの泡状の粗生成物を得、上記粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテルでＥＡ／ＰＥ＝３：２まで溶出）で分離し精製し、生成物である３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル））−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．８ｇを得、収率は４７％であった。
ステップ６：２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
２０〜２５℃の条件で、３−（４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−２Ｈ−インダゾール−２−イル）フェニル）−３−ジュウテロピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０ｇ、２ｍｍｏｌ）をトルエン（２ｍＬ）と混合し、メタンスルホン酸（４ｍＬ）をゆっくりと加え、添加完了後、３０〜３５℃まで昇温し、撹拌しながら３０分間反応させた。ＬＣＭＳでは、出発物質が消失し、生成物が形成されたことを示した。反応溶液を水で希釈し、ａｑ．ＮａＯＨでｐＨ８〜９に中和し、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、乾燥し、濃縮して７５０ｍｇの粗生成物を得、これをＨＰＬＣにより分離し精製して、生成物である２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミドのトリフルオロ酢酸塩４７０ｍｇを得た。
実施例４４および４５：
（ＲまたはＳ）−２−（４−（３−メチルピペリジン−３−イル）フェニル）−２Ｈ−インダゾール−７−カルボキサミド
実施例４６〜６３：
実施例４３〜４５の合成方法に従っておよび対応する出発物質を採用して、以下の表のような実施例４３〜４５の化合物を調製した：
［表３］
１）ウェルあたり２．５μＬの１０×ＰＡＲＰバッファー＋２．５μＬの１０×ＰＡＲＰアッセイ混合物＋５μＬの活性化ＤＮＡ＋１５μＬの脱イオン水の比率で反応溶液を調製し、２５μＬの反応溶液を各ウェルに入れた（表４を参照）。
２）５μＬの希釈された化合物をサンプルテストウェルに加え、１０％ＤＭＳＯを含む等量の１×ＰＡＲＰバッファーを全活コントロールウェルとブランクウェルに加えた。

本発明の化合物のＰＡＲＰ−１キナーゼ阻害活性は、上記の実験方法により測定され、化合物のインビトロ酵素阻害活性（ＩＣ５０）は、以下の表５に示された：＋は１０〜１００、＋＋は１−１０μｍ、＋＋＋は０．５〜１μｍ、＋＋＋＋は０．１〜０．５μｍ、＋＋＋＋＋は＜０．１μｍを表した。

４．薬物動態学データの結果
本発明の化合物のラット薬物代謝パラメーターを以下の表６に示す。

本発明の実施例２３の化合物およびｎｉｒａｐａｒｉｂを上記手順に従って分析し、結果を以下の表７に示した。

１１．実験結果：表７に示すように、本発明の化合物２３は、ヒト肝ミクロソーム、イヌ肝ミクロソーム、およびマカカ・ファシキュラリス肝ミクロソーム実験において優れた代謝安定性を示した。
４．５試験薬剤投与
投与量と投与スケジュールを表８に示した。

４．７薬力学的試験結果
ＭＤＡ−ＭＢ−４３６細胞の腫瘍体積に対するコントロール群、実施例２３およびｎｉｒａｐａｒｉｂの阻害効果を表９および図１に示した。

ヒト肝臓ミクロソームＣＹＰ４５０酵素の様々なサブタイプに対する本発明化合物のＩＣ５０を以下の表１０に示した。

６．２ 溶液の調製（表１１に示したとおり）

６．７実験結果
本化合物の実施例２３によるｈＥＲＧ電流の阻害結果を以下の表１２に示した。

Claims (16)

  1. 一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。

    ［ただし、
    Ｒａは、水素、重水素、フッ素、置換または非置換Ｃ１−６アルキル、または置換または非置換シクロアルキルから選択され、
    Ｒｂは、水素、重水素、置換または非置換Ｃ１−６アルキル、または置換または非置換シクロアルキルから選択され、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、それぞれ独立に、水素、重水素またはフッ素から選択され、且つ、Ｒａが水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９の少なくとも一つは重水素またはフッ素であり、
    Ｒａが水素である場合、ｎは１であり、且つＲ９は５位のフッ素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ８は同時に水素ではなく、
    Ｒａが水素である場合、ｍは０ではなく、且つＲ７はフッ素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ８は同時に水素ではなく、
    ｍはＲ７の数量であり、且つ０、１、２、３または４であり、
    ｎはＲ９の数量であり、且つ０、１、２または３である。］
  2. Ｒｂは水素または重水素であることを特徴とする請求項１に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。
  3. 以下の構造であることを特徴とする請求項１に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。

    ［ただし、Ｒａは、重水素、フッ素または置換または非置換Ｃ１−６アルキル基から選択され、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｎは請求項１で定義した通りである。］
  4. 前記一般式Ｉで示される化合物の構造は以下の通りであることを特徴とする請求項１に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。

    ［ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６において、少なくとも１つの重水素またはフッ素が含まれ、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｎは請求項１で定義したとおりである。］
  5. 前記一般式Ｉで示される化合物の構造は以下の通りであることを特徴とする請求項１に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。

    ［ただし、Ｒａは、重水素、フッ素、または置換または非置換のＣ１−６アルキル基から選択される。］
  6. 前記一般式Ｉで示される化合物の構造は以下の通りであることを特徴とする請求項１に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。

    ［ただし、Ｒａはメチル、フッ素または重水素であり、
    Ｒ７ａ、Ｒ７ｂ、Ｒ８、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂおよびＲ９ｃは、それぞれ独立に、水素またはフッ素である。］
  7. 前記Ｒａはフッ素または重水素であり；
    及び／或いは、前記Ｒ７ｂは水素であり；
    及び／或いは、前記Ｒ８は水素であり；
    及び／或いは、前記Ｒ９ａは水素であり；
    及び／或いは、前記Ｒ９ｃは水素であることを特徴とする請求項６に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。
  8. 前記一般式Ｉで示される化合物は、以下の構造のいずれかから選択されることを特徴とする請求項１に記載の一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ。











    。
  9. 一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０１をキラル分離条件１下で１０．７分または１１．６分のＲＴで別々に収集し得られたものであり、

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０２をキラル分離条件２下で１２．２分または１０．８分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０３をキラル分離条件１下で１５．２分または１３．４分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０４をキラル分離条件１下で１２．３分または１０．９分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０５をキラル分離条件１下で２０．５分または２３．８分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉの化合物は、化合物１０６をキラル分離条件２下で２２．５分または２４．５分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉの化合物は、化合物１０７をキラル分離条件２下で２４．３分または２６．８分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０８をキラル分離条件２下で２１．３分または２３．３分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１０９をキラル分離条件１下で１３．６分または１５．８分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉで示される化合物は、化合物１１０を以下のキラル分離条件１下で１６．７分または１４．２分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉの化合物は、化合物１１１をキラル分離条件１下で１８．７分または１６．９分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    或いは、一般式Ｉの化合物は、化合物１１２をキラル分離条件１下で１５．８分または１４．２分のＲＴで別々に収集して得られたものであり；

    前記キラル分離条件１には以下のものが含まれ：
    キラルカラムはＣｈｒｉａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり、
    カラム温度は４０℃であり、
    移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり、
    移動相Ｂはエタノールであり、
    勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝５０／５０であり、比は体積比であり、
    流速は６．０ｍＬ／ｍｉｎであり、
    検出波長はＵＶ２１０ｎｍであり；
    前記キラル分離条件２には以下のものが含まれ：
    キラルカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ １０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍであり、
    カラム温度は４０℃であり、
    移動相Ａは０．１％ＤＥＡのヘキサンであり、パーセントは体積パーセントであり、
    移動相Ｂはエタノールであり、
    勾配は移動相Ａ／移動相Ｂ＝６０／４０であり、比は体積比であり、
    流速は３．０ｍＬ／ｍｉｎであり、
    検出波長はＵＶ２１０ｎｍである。
  10. ａ１）塩基性および金属触媒条件下で一般式Ｉ−Ａで示される化合物と一般式Ｉ−Ｂで示される化合物をカップリング反応させ、一般式Ｉ−Ｃで示される化合物を得る；
    ｂ１）酸性条件下で一般式Ｉ−Ｃで示される化合物を脱保護させ、一般式Ｉで示される化合物を得る；
    工程を含むことを特徴とする一般式Ｉで示される化合物の調製方法。

    ［ただし、Ｘはハロゲンであり、Ｒ０はアミン保護基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｎの定義は請求項１〜９のいずれかに記載の通りである。］
  11. 有効量の請求項１〜９のいずれかに記載の前記一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、および多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物。
  12. ＰＡＲＰ阻害剤により緩和され得る疾患を予防、緩和および／または治療するための薬剤の調製における請求項１〜９のいずれかに記載の前記一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、或いは請求項１１に記載の医薬組成物の応用。
  13. 癌、炎症性疾患、血管疾患、脳卒中、腎不全、糖尿病、パーキンソン病、敗血症性ショック、神経毒性、虚血性ショックまたは傷害、移植拒絶、再灌流傷害、網膜損傷、ＵＶ−誘発皮膚損傷、ウイルス感染または多発性硬化症を予防、緩和及び／または治療するための医薬の調製における請求項１〜９のいずれかに記載の前記一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、或いは請求項１１に記載の前記医薬組成物の応用であるを特徴とする請求項１２に記載の応用。
  14. がん治療の補助医薬品の調製、または放射線治療および／または化学療法によるがん治療を強化するための医薬品の調製における請求項１〜９のいずれかに記載の前記一般式Ｉで示される化合物、その薬学的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、または請求項１１に記載の前記医薬組成物の応用であるを特徴とする請求項１２に記載の応用。
  15. 癌治療医薬品の調製における請求項１〜９のいずれかに記載の前記一般式Ｉで示される化合物、その医薬的に許容される塩、異性体またはその混合物形態、溶媒和物、多結晶形態、安定同位体誘導体またはプロドラッグ、或いは請求項１１に記載の前記医薬組成物の応用であって、前記癌は、固形腫瘍、急性または慢性白血病、リンパ腫、中枢神経系がん、脳がん、血液由来がん、腹膜がん、胃がん、肺がん、相同組換え依存性ＤＮＡ二本鎖切断修復活性を欠く癌、ＢＲＣＡ−１またはＢＲＣＡ２の欠陥または突然変異表現型癌から選択されることを特徴とする応用。
  16. 前記薬物を、別の１つまたは複種の抗癌剤と組み合わせて使用し、前記抗癌剤は、アルキル化剤、白金薬、トポイソメラーゼ阻害薬、代謝拮抗薬、アルカロイド、抗体薬、ホルモン抗がん剤、プロテアソーム阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＣＤＫキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦＲまたはＥＧＦＲ阻害剤、ｍ−ＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害剤、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ阻害剤、ＡＬＫキナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１モノクローナル抗体またはＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体から選択されることを特徴とする請求項１５に記載の応用。
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