JP2020097548A

JP2020097548A - オタネニンジン及び／又はその抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤

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Publication number: JP2020097548A
Application number: JP2018236946A
Authority: JP
Inventors: 大隅　和寿; Kazuhisa Osumi; 和寿大隅; 祐子村上; Yuko Murakami; 紘介深田; Kosuke Fukada; 坂井田　勉; Tsutomu Sakaida; 勉坂井田
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2018-12-19
Filing date: 2018-12-19
Publication date: 2020-06-25

Abstract

【目的】特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤を提供する。【構成】本発明のオタネニンジンの発芽した新芽は、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果が優れており、さらに、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物は、抗酸化効果及びＭＭＰ阻害効果がより優れていることを見出した。これらを含有する皮膚外用剤又は内用剤は特に有効である。【選択図】なし

Description

本発明は、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン生成促進効果等に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤に関する。

皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内には活性酸素消去酵素が存在しており、その能力を超える活性酸素が発生しないかぎり活性酸素の傷害から皮膚細胞を防衛している。ところが、皮膚細胞内の活性酸素消去酵素の活性は加齢とともに低下することが知られており、活性酸素による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。また、皮膚以外の臓器においても、その活性酸素消去能を越える活性酸素に曝されたとき、機能低下が起こり老化したり、ガンや心筋梗塞等様々な生活習慣病が発症したりすると考えられる。そこで、活性酸素による傷害からの防御を目的として活性酸素消去剤や抗酸化剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質等の活性酸素消去剤や抗酸化剤を配合した食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等が開発されている（特許文献１，２参照）。

皮膚は、紫外線、乾燥、寒冷、熱、薬物等の様々な物理的及び化学的ストレスに日々曝されている。その結果、皮膚の機能低下が引き起こされ、様々な皮膚の老化現象が顕在化する。皮膚の老化現象の一つに、しわがある。しわには、表皮性のしわと、真皮性のしわの二種類が存在することが知られている。表皮性のしわは小じわと呼ばれ、皮膚の乾燥により、表皮角質層中の水分量が低下することによって一時的に生じるしわである。小じわの改善方法としては、保湿効果を有する化粧品の使用が一般的である。一方、真皮性のしわは、太陽光線に含まれる紫外線や加齢によって形成されるしわである。その形成メカニズムとしては、紫外線や加齢による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン合成能の低下や、ＭＭＰの増加によるコラーゲンの分解促進が挙げられる。

乾燥に起因する表皮性のしわと真皮性のしわでは、組織学的形態、発症メカニズム、治療方法が異なり、紫外線や加齢により生じる真皮性のしわは、保湿効果を有する化粧品の使用によっては改善できない。

これまでに、紫外線によって生じる真皮性のしわを改善することを目的として、加水分解アーモンドを有効成分とする皮膚のしわ形成防止・改善剤（特許文献３）、ジョチョウケイ、テンキシ及びキセンウの抽出物を有効成分とする紫外線照射に起因するしわの改善剤（特許文献４）が報告されている。

また、真皮には線維芽細胞やコラーゲンが存在し、Ｉ型コラーゲンが全体の８０％を占める。Ｉ型コラーゲンのほかにはＩＩＩ、Ｖ、ＸＩＩ及びＸＩＶ型コラーゲンの存在が知られている。しわやたるみの原因の一つとして、Ｉ型コラーゲンの減少があげられる。従って、Ｉ型コラーゲンの生成を促進させることが、しわ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。また、Ｉ型コラーゲンの生成促進は皮膚の創傷治癒の改善にも有効である。

また、線維芽細胞はコラーゲン等のタンパク質を産生して真皮結合組織を形成し、皮膚のハリを保っている。この結合組織が収縮力を失い、さらに弾力性を失う結果として皮膚のしわやたるみが発生すると考えられている。

コラーゲンは、哺乳動物組織の約１/３を占める主要な構造タンパク質であり、軟骨、骨、腱、及び皮膚を含む多くのマトリックス組織の必須な成分である。ＭＭＰに属するコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）により１箇所を切断されると、通常の組織内では安定なコラーゲン分子は、変性して一本鎖のゼラチンとなり、他の様々なプロテアーゼにより分解されるようになる。その結果、マトリックス組織の構造の完全性が失われてしまう。

ＭＭＰに属するゼラチナーゼは、線維芽細胞や内皮細胞、ガン細胞等が産生する酵素であり、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン（動脈、腱、皮膚等、弾性組織の特殊成分をなす構造タンパク質）等の基質を分解する。従って、ゼラチナーゼに対して阻害活性を有する物質は、ガン組織における血管新生やガンの転移を抑制する効果が期待され、ガン疾患の予防、治療に有用であると考えられる。さらにＭＭＰはガン疾患のみならず、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等の種々の病態での細胞外基質の分解に関与していることが報告されている。よって、ＭＭＰの阻害活性を有すれば、ガンの転移、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等、ＭＭＰの亢進が原因で起こる各種疾患の治療及び改善に有用である。

角質層の保湿性に重要な役割を果たしているのが天然保湿因子（ＮＭＦ）であることは古くから知られており、これまでＮＭＦ成分は保湿剤の開発に応用されてきた。角質層におけるＮＭＦの減少は、その保湿性を低下させ乾燥を招く。その結果として乾燥性のカユミが引き起こされる。近年、ＮＭＦの主体をなすアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒の主成分であるフィラグリンというタンパク質の分解により産生されることが明らかとなった（非特許文献１）。すなわち、表皮顆粒層において合成されたプロフィラグリンはケラトヒアリン顆粒に蓄積された後、顆粒層上層から角質層に至る過程で脱リン酸、加水分解を経てフィラグリンに分解される。さらにフィラグリンは角質層上層に至る過程でアミノ酸に分解されＮＭＦの主体となる。一方、乾燥肌を呈する病態とフィラグリンに関する研究が進められ、老人性乾皮症やアトピー性皮膚炎等の角質層中ではアミノ酸が減少していることが知られているが、それらの皮膚ではフィラグリンの発現が低下していることが明らかにされている（非特許文献２）。したがって、角質層の保湿性維持の目的でＮＭＦの産生を高めるためにはケラチノサイトにおけるフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進が重要であると考えられるようになり、特許文献５、６等の植物成分を用いたフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進剤が報告されている。

オタネニンジンは、中国東北部又は朝鮮の原産で、その根を薬用に用い、加工法によって呼び方が異なる。例えば周皮をはいで乾燥したものを白参（はくじん）、せいろで２〜４時間蒸してから熱風乾燥したものを紅参（こうじん）と呼ぶ。漢方で不老長寿、強壮、強精薬あるいは賦活、精神安定薬として虚証の者に用いるが、新陳代謝機能を活発にさせ、かつ強心利尿作用を持っているので、胃衰弱に伴う新陳代謝の衰えた病弱者の胃食欲不振、消化不良、はきけ、下痢などにも使われる（非特許文献３）。

特開平９−１１８６３０号公報特開平９−２０８４８４号公報特開２０００−１１９１２５号公報特開２００６−１９９６１１号公報特開２００１−２６１５６８号公報特開２００２−２０１１２５号公報

ＳｃｏｔｔＩ．Ｒ．，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，Ｖｏｌ．７１９，ｐｐ１１０−１１７，１９８２ＳｅｇｕｃｈｉＴ．，ＡｒｃｈＤｅｒｍａｔｏｌＲｅｓ，Ｖｏｌ．２８８，ｐｐ４４２−４４６，１９９６木村康一（１９８４）「オタネニンジン」，『原色日本薬用植物図鑑』ｐ１５１，保育社．

本発明は、抗酸化効果、ＭＭＰ阻害効果、フィラグリン生成促進効果等に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤を提供することを課題とする。

本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、オタネニンジンの発芽した新芽は、抗酸化効果、ＭＭＰ阻害効果及びフィラグリン産生促進効果が優れており、さらに、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物は、抗酸化効果及びＭＭＰ阻害効果がより優れていることを見出した。また、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンは生育が向上することも発見し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、以下の（１）〜（９）からなる。

（１）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培したオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
（２）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が、３：１〜２：１であることを特徴とする（１）に記載の皮膚外用剤。
（３）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン。
（４）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
（５）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする食品。
（６）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
（７）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（８）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
（９）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。

本発明のオタネニンジン又はその抽出物は、優れた抗酸化効果、ＭＭＰ阻害効果、フィラグリン生成促進効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品の分野において貢献できるものである。

以下に、本発明について詳細に述べる。

本発明に用いるオタネニンジンとは、ウコギ科（学名Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ）に属しており、韓国、北朝鮮、中国北部や日本の各地で栽培されている植物である。一般的な市場では、主に、根を乾燥したものが生薬として扱われているが、本発明においては、発芽した新芽又は特定の波長域を有する２種の光を同時に照射して栽培したものを用いることができ、その一部又は全草を用いることができる。特に、効果や生産効率の面から、地上部を用いることが好ましい。

その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出や低温抽出したものであっても良い。また、本発明においては、抽出物の代わりに、植物体のまま使用することもでき、生のままでも、乾燥して用いることもでき、目的によって使い分けることができる。さらには、抽出物と植物体を併用することもできる。

本発明のオタネニンジンの「発芽した新芽」の栽培方法としては、オタネニンジンの芽切種子を湿らせたペーパータオル、バーミキュライト、スポンジ等の播種床に播種し、冷蔵０〜１０℃下で休眠打破することにより発芽させ、葉を展開させずに、１〜１５ｃｍ程度に伸長した植物体を用いることができる。照明はあってもよいが、強いと緑化し、葉が展開し、伸長が停止するので、発芽した新芽の収量を確保するためにはできる限り暗室が好ましい。芽切種子は、種子を湿った砂と混合して、３〜４ヶ月木陰に置いたものが好ましく、市販品を購入できる。

本発明の光を照射して栽培するオタネニンジンの栽培方法としては、病害虫予防の為、外界と隔離栽培し易いバーミキュライト等の人工培養土を用いた栽培や水耕栽培で行うことが好ましい。苗は、芽切種子を「発芽した新芽」と同様に低温下で休眠打破することにより栽培に供することができるが、市販苗を用いることもできる。栽培は、温度、光等が制御された施設で栽培することが好ましい。栽培温度は、１５〜３０℃、好ましくは２０〜２５℃である。栽培期間は、照射する光条件によって異なるが、概ね１０〜２００日で収穫でき、地上部の利用には１〜２ヶ月程度栽培することが効率的である。

光源は、植物の栽培施設で用いる光源等を使用することができ、発光ダイオード（ＬＥＤ）、レーザーダイオード等の光半導体素子が挙げられるが、特定の範囲の波長域が選択的に照射できる光源であれば光半導体素子に限らない。

照射する波長としては、波長域４００〜５１５ｎｍの青色光、５７０〜７３０ｎｍの赤色光であることが好ましく、それぞれ波長域４３０〜４６０ｎｍ、６３０〜６８０ｎｍの光がさらに好ましい。これらの光は、同時に照射することが最も好ましい。このときの波長は、照射スペクトルの極大波長（ピーク波長）のことをいう。このような波長のピークを有する光源であれば、独自に作成したものや市販のものを使用することもできる。また、上記波長を選択的に照射できるように、光学フィルタを用いても良い。上記の２種の範囲の光に加え、太陽光や蛍光灯等の光源を補助的に使用することもできる。

照射する光量としては、光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）として表される。発光体を２種組み合わせて照射する場合には、その合計の光量を意味する。その光量は、発芽後は１０〜２００μｍｏｌ・ｍ^−２ｓ^−１が好ましく、５０〜１５０μｍｏｌ・ｍ^−２ｓ^−１がさらに好ましい。この範囲外の光強度の場合は、生育障害、生育不良になる場合がある。照射は、オタネニンジンの上部１０〜５０ｃｍの位置から照射することが好ましい。照射時間は、植物の特性や目的に応じて適宜変更できるが、６時間以上が好ましく、１２〜２４時間がより好ましい。

赤色と青色の光量比においては、それぞれのＰＰＦＤの比を意味しており、収量や有効性の向上等、目的に応じて選択が可能である。

中でも、植物体の収量を高めるには、赤色と青色の光量比は２：１が最も優れていた。

活性酸素消去作用（フリーラジカル捕捉除去作用）を高めるには、赤色と青色の光量比は３：１〜１：１がよく、３：１〜２：１がさらに好ましい。

ＭＭＰ阻害作用を高めるには、赤色と青色の光量比が３：１〜１：１がよく、２：１がさらに好ましい。

以上のことを総じていえば、赤色と青色の光量比が３：１〜１：１が好ましく、３：１〜２：１がさらに好ましく、２：１が最も好ましい。

抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール）、液状多価アルコール類（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。さらには、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。また、サラダ等、生で食することもできる。

本発明の外用剤又は内用剤には、食品も含むものとし、これには、上記植物体及び／又は抽出物をそのまま使用しても良く、これらの効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を配合することもできる。

本発明は、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品等に用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料、ティーバッグ、スパイス等が挙げられる。

本発明に用いる上記抽出物の含有量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１〜１０重量％がより好ましい。さらに、０．０１〜５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて含有した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。一方、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ〜５ｇがより好ましい。さらに、１００ｍｇ〜１ｇが最も好ましい。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるオタネニンジンやオタネニンジンの発芽した新芽の栽培例、その抽出物の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す％とは重量％を示す。また、処方例に示す混合抽出物とは、各抽出物を等量混合したものである。

（１）実験材料及び生育条件
オタネニンジンの芽切り種子を、水分を含んだメッシュに包んで、遮光下で休眠打破して発芽させた。そのまま遮光下で栽培し、１〜３ｃｍに伸長した苗をスポンジに包み、水耕栽培装置を用いて、室温２１〜２３℃で１２時間、植物の真上３０ｃｍの位置から、赤色ＬＥＤ（ピーク波長６６０ｎｍ）及び青色ＬＥＤ（ピーク波長４５０ｎｍ）を同時に照射し、赤色と青色ＬＥＤの合計光合成光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ^−２ｓ^−１となるように、赤色と青色の光量比を３：１〜１：１にして、栽培を行った。また、比較栽培例１として光合成光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ^−２ｓ^−１となるように白色蛍光灯下で栽培を行い、なお、栽培中は光量比を変えなかった。４週間栽培した後、収穫し、生のオタネニンジンを得た。これを約６０℃で温風乾燥させることで、オタネニンジンの乾燥物を得た（表１）。なお、比較栽培例として、太陽光下でも実施したが、生育が悪くてサンプルが得られなかったため、比較製造例２のサンプルとして太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）を用いた。

栽培例４発芽した新芽の乾燥物
「（１）実験材料及び生育条件」において、１〜３ｃｍに伸長した苗を、一部、約６０℃で温風乾燥させることで、発芽した新芽の乾燥物を得た。

（２）抽出
製造例１Ａ地上部の熱水抽出物
栽培例１の地上部の乾燥物１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を得た（表２）。

製造例１Ｂ地上部の５０％エタノール抽出物
栽培例１の地上部の乾燥物１ｇに５０％エタノール水溶液２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物を得た（表２）。

製造例１Ｃ地上部のエタノール抽出物
栽培例１の地上部の乾燥物１ｇにエタノール２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物を得た（表２）。

製造例１Ｄ根の熱水抽出物
栽培例１の根の乾燥物１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を得た（表２）。

製造例１Ｅ根の５０％エタノール抽出物
栽培例１の根の乾燥物１ｇに５０％エタノール水溶液５ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物を得た（表２）。

製造例１Ｆ根のエタノール抽出物
栽培例１の根の乾燥物１０ｇにエタノール５０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物を得た（表２）。

栽培例２，３及び比較栽培例１のオタネニンジンを用いて、上記の製造例１Ａ〜１Ｆと同様に抽出し、製造例２Ａ〜３Ｆ、比較製造例１Ａ〜１Ｆとした（表２）。

製造例４Ａ発芽した新芽の熱水抽出物
栽培例４の発芽した新芽の乾燥物１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物０．３５ｇを得た。

製造例４Ｂ発芽した新芽の５０％エタノール抽出物
栽培例４の発芽した新芽の乾燥物１ｇに５０％エタノール水溶液２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物０．１４ｇを得た。

製造例４Ｃ発芽した新芽のエタノール抽出物
栽培例４の発芽した新芽の乾燥物１ｇにエタノール２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物０．１ｇを得た。

比較製造例２Ａ根（市販品）の熱水抽出物
太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物０．２６ｇを得た。

比較製造例２Ｂ根（市販品）の５０％エタノール抽出物
太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）１ｇに５０％エタノール水溶液５ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物０．２８ｇを得た。

比較製造例２Ｃ根（市販品）のエタノール抽出物
太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）１ｇにエタノール５ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物０．１４ｇを得た。

実験例１活性酸素消去作用
各種栽培条件で栽培したオタネニンジンの各試料について、フリーラジカルの一種であるα，α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、ＤＰＰＨラジカルの消去作用を測定した。
各試料を、最終濃度０．１ｍｇ／ｍＬとなるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）０．４ｍＬに無水エタノール０．４ｍＬ及び０．５ｍＭＤＰＰＨ無水エタノール溶液０．２ｍＬを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール０．４ｍＬに試料を加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度（Ｂ）を測定した。ＤＰＰＨラジカル消去率は、以下に示す式より算出した。
ＤＰＰＨラジカル消去率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００

これらの試験結果を表３に示した。本発明のオタネニンジンの抽出物は、優れたＤＰＰＨラジカル消去作用を有していることが認められた。特に、赤色と青色の光量比が３：１〜２：１のオタネニンジンの抽出物に高い効果が認められた。

実験例２ＭＭＰ阻害効果
ＭＭＰ−１ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を６０ｍｍｄｉｓｈに１×１０^５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、各試料を最終濃度１０μｇ／ｍＬを添加したＤＭＥＭ（−）培養液にて２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏＰｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡＫｉｔ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲＳｅｌｅｃｔＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＭＭＰ−１ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＭＭＰ−１発現抑制率は、コントロールのＭＭＰ−１ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＭＭＰ−１ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。

ＭＭＰ−１用のプライマーセット
ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣ（配列番号１）
ＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣ（配列番号２）
β―ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）

これらの実験結果を表４に示した。その結果、本発明のオタネニンジンの抽出物は、優れたＭＭＰ発現抑制効果（ＭＭＰ阻害効果）が認められた。特に、赤色と青色の光量比が３：１〜１：１のオタネニンジンの抽出物に高い効果が認められた。その中でも、赤色と青色の光量比が２：１のオタネニンジンの抽出物は特に優れていた。

実験例４フィラグリン（ＦＬＧ）生成促進試験
ＦＬＧｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒトケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を６０ｍｍｄｉｓｈに１×１０^５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、各試料を最終濃度１０μｇ／ｍＬを添加したＤＭＥＭ（−）培養液にて２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏＰｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡＫｉｔ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲＳｅｌｅｃｔＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＦＬＧｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＦＬＧ発現抑制率は、コントロールのＦＬＧｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＦＬＧｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。

ＦＬＧ用のプライマーセット
ＧＧＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＴＡＴＡＧＡＣＣＡＣＡＡＣＡ（配列番号５）
ＴＧＡＧＣＣＡＡＣＴＴＧＡＡＴＡＣＣＡＴＣＡＧＡ（配列番号６）
β―ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）

これらの試験結果を表５に示した。その結果、本発明のオタネニンジンの抽出物には優れたＦＬＧｍＲＮＡの発現促進効果（フィラグリン生成促進効果）が認められた。一方、市販品であるオタネニンジンの根の熱水抽出物（比較製造例２Ａ）には、本発明のオタネニンジンの抽出物とは反対に、ＦＬＧｍＲＮＡの発現を抑制する作用が確認された。

処方例１化粧水
処方含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物０．０５
２．１，３‐ブチレングリコール８．０
３．グリセリン２．０
４．キサンタンガム０．０２
５．クエン酸０．０１
６．クエン酸ナトリウム０．１
７．エタノール５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

処方例１において、製造例２Ａの抽出物を製造例１Ａの抽出物、製造例３Ａの抽出物及び製造例４Ａの抽出物に置き換えたものを、それぞれ処方例２、３及び４とした。

処方例５クリーム
処方含有量（％）
１．製造例１Ｂ、２Ｂ、３Ｂの混合抽出物０．１
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル０．２５
１２．１，３‐ブチレングリコール８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。

処方例６乳液
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａ、３Ａの混合抽出物０．５
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。

処方例７ゲル剤
処方含有量（％）
１．製造例１Ｃ、２Ｃ、３Ｃの混合抽出物０．０１
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）０．１
５．香料適量
６．１，３‐ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５と、成分６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例８パック
処方含有量（％）
１．製造例２Ｂの抽出物０．５
２．製造例２Ｅの抽出物０．５
３．ポリビニルアルコール１２．０
４．エタノール５．０
５．１，３‐ブチレングリコール８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
８．クエン酸０．１
９．クエン酸ナトリウム０．３
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。

処方例９ファンデーション
処方含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物０．０１
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１０．ベントナイト０．５
１１．プロピレングリコール４．０
１２．トリエタノールアミン１．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．二酸化チタン８．０
１５．タルク４．０
１６．ベンガラ１．０
１７．黄酸化鉄２．０
１８．香料適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例１０浴用剤１
処方含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物０．５
２．製造例２Ｂの抽出物０．５
３．炭酸水素ナトリウム５０．０
４．黄色２０２号（１）適量
５．香料適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。

処方例１１軟膏
処方含有量（％）
１．製造例２Ｂ、３Ｂの混合抽出物０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン１０．０
４．流動パラフィン５．０
５．セタノール６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．１
７．プロピレングリコール１０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例１２散剤
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ｄの混合抽出物２０．０
２．乾燥コーンスターチ３０．０
３．微結晶セルロース５０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。

処方例１３錠剤
処方含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物３．０
２．乾燥コーンスターチ２７．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム２０．０
４．微結晶セルロース４０．０
５．ポリビニルピロリドン７．０
６．タルク３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。

処方例１４錠菓
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａの混合抽出物０．５
２．乾燥コーンスターチ５０．０
３．エリスリトール４０．０
４．クエン酸５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル３．０
６．香料適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。

処方例１５飲料
処方含有量（％）
１．製造例２Ｅの抽出物１．０
２．果糖ブドウ糖液糖１２．５
３．クエン酸０．１
４．香料０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を混合し、飲料とする。

処方例１６粉末飲料
処方含有量（％）
１．製造例２Ａ、３Ａの混合抽出物１０．０
２．粉糖６５．０
３．粉末ピーチ果汁１５．０
４．Ｌ−アスコルビン酸８．０
５．結晶クエン酸１．２
６．クエン酸ナトリウム０．７５
７．アスパルテーム０．０２
８．粉末ピーチ香料０．０３
［製造方法］成分１〜８を混合し、粉末飲料とする。

処方例１７ハーブティー
処方含有量（％）
１．栽培例２の地上部の乾燥物５０．０
２．ペパーミント２５．０
３．ローズヒップ２５．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、ティーバッグに２ｇを封入してハーブティーとする。

処方例１８浴用剤２
処方含有量（％）
１．栽培例２の地上部の乾燥粉砕物の４２メッシュ篩過品１．０
２．栽培例２の根の乾燥粉砕物の４２メッシュ篩過品１．０
３．炭酸水素ナトリウム５０．０
４．黄色２０２号（１）適量
５．香料適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。

以上のことから、本発明のオタネニンジンの発芽した新芽は、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果が優れており、さらに、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物は、抗酸化効果及びＭＭＰ阻害効果がより優れている。これらを含有する皮膚外用剤又は内用剤は特に有効である。

Claims

波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培したオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が、３：１〜２：１であることを特徴とする請求項１記載の皮膚外用剤。
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン。
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする食品。
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。