JP2023075558A

JP2023075558A - トランスグルタミナーゼｉ産生促進剤及びインボルクリン産生促進剤

Info

Publication number: JP2023075558A
Application number: JP2021188531A
Authority: JP
Inventors: 寿吉岡; Hisashi Yoshioka; 大生堀場; Hiroki Horiba; 宏行山羽; Hiroyuki Yamaha
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2021-11-19
Filing date: 2021-11-19
Publication date: 2023-05-31

Abstract

【課題】波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、表皮角化促進剤及び皮膚バリア機能改善剤を提供する。【解決手段】本発明は波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとのＰＰＦＤ比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とする、表皮角化促進及び皮膚バリア機能改善を目的とする化粧品、医薬品、医薬部外品及び食品である。本発明の波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとのＰＰＦＤ比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物は、トランスグルタミナーゼＩ産生促進効果及びインボルクリン産生促進効果をもち、表皮角化促進及び皮膚バリア機能改善効果を示した。【選択図】なし

Description

本発明は、特定の波長域を有する光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、表皮角化促進剤及び皮膚バリア機能改善剤に関するものである。

皮膚は、紫外線や乾燥などの外界からの刺激を緩和したり、体内の水分の蒸散を防いだりする機能を有している。この機能は皮膚バリア機能と呼ばれ、機能の維持には表皮にある角層が重要な役割を担っている。

角層は角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から構成される。角質細胞はケラチン線維を主成分とし、細胞膜を裏打ちする構成物質であるコーニファイドエンベロープ（角化肥厚膜；ＣＥ）に覆われている。ＣＥは表皮細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリンやロリクリンなどのタンパク質からなり、タンパク質架橋化酵素であるトランスグルタミナーゼによって架橋され不溶化するとともに細胞膜直下に凝集される。ＣＥが不完全な状態で形成されると、不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角質のバリア機能が低下することで、肌の乾燥や肌荒れが生じる。

トランスグルタミナーゼは、タンパク質間のイソペプチド結合の形成を触媒する酵素である。トランスグルタミナーゼには数種類のアイソザイムが存在するが、表皮に特異的に存在するアイソザイムとしては、トランスグルタミナーゼＩ、ＩＩＩ、Ｖが知られており、トランスグルタミナーゼＩ及びＩＩＩはＣＥの形成に関与し、トランスグルタミナーゼＶは表皮の分化に関与している（非特許文献１）。中でも、トランスグルタミナーゼＩは表皮の顆粒層で発現し、細胞膜に移行してインボルクリンやロリクリンの架橋・重合に関与している。また、トランスグルタミナーゼＩの変異が病因である葉状魚鱗癬患者において、コーニファイドエンベロープの不全（非特許文献２）及びバリア機能の低下（非特許文献３）が確認されている。

インボルクリンは水溶性のタンパク質であり、トランスグルタミナーゼの作用を受け、互いに架橋し不溶化することでＣＥを形成する。更にセラミドなどと共有結合することにより、皮膚のバリア機能の恒常性を維持している。

レモンバーム（別名：メリッサ、学名：Ｍｅｌｉｓｓａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、シソ科コウスイハッカ属に属する多年草である。レモンバームは、民間的に発熱、頭痛、感冒、歯痛などの治療に用いられてきた。また、香り成分が含まれることから、ハーブティーの材料、スパイスとして用いられ、浴用剤や化粧品原料としても利用されている。レモンバームの有効成分としては、シトロネラール、シトラール、ゲラニアールなどが知られている。レモンバームの有効性としては、抗酸化、抗炎症、収斂作用が知られている。

即ち、トランスグルタミナーゼＩ及びインボルクリンの産生を促進することで、表皮の角化を促進し、正常なＣＥを形成し、バリア機能の低下を抑制することが可能であると考えられる。今までに、レモンバームの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ産生促進剤（特許文献１）、インボルクリン産生促進剤（特許文献２）等が知られている。しかしながら、これらの従来技術による働きは弱く、より高い効果を発揮する原料の開発が求められる。

一方で、植物の栽培方法によって植物の薬効を高める方法として、植物体内のビタミンやポリフェノール、ルチン等の機能性物質を特徴的に増加させる方法は、既に特許文献で報告されている。特許文献３には、大豆もやしに近紫外～青色領域波長の光を照射することにより、含有ビタミンＡ、ビタミンＥを増量させる方法が開示されており、特許文献４には、小松菜に対して、人工紫外線照射を１日５分間行うことで、機能性物質であるα－トコフェロールやビタミンＣを増加させる栽培方法が開示され、特許文献５には、人工光の青色光、赤色光及び遠赤色光の強度を調整することにより、小松菜、レタスのビタミンＣやビタミンＡを増加させる方法が開示されている。

レモンバームに特定の波長域を有する光を照射して栽培することにより、従来の太陽光や蛍光灯で栽培した植物よりもメラニン産生抑制効果、ＭＭＰ抑制効果、抗炎症効果、皮膚細胞増殖促進効果が高まることが報告されている（特許文献６）。しかしながら、効果の増強にはそれぞれ特異な照射条件を選択する必要があり、トランスグルタミナーゼＩ産生促進効果及びインボルクリン産生促進効果に関しては何ら知られていない。

特開２００８－７４１１特開２００８－７４１２特開平１１－１０３６８０特開２００４－３０５０４０特開平８－２０５６７７特開２０１７－１０１００３

ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａｔｏｌ．，１２４（３），４８１－４９２（２００５）ＪＤｅｒｍａｔｏｌＳｃｉ．，２４（２），１１９－１２５（２０００）ＥｘｐＤｅｒｍａｔｏｌ．，１１（３），２４８－２５６（２００２）

そこで、本発明が解決する課題は、優れたトランスグルタミナーゼＩ産生促進効果及びインボルクリン産生促進効果を有する新規な皮膚外用剤又は内用剤を提供することである。

本発明者らは、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、特定の波長域を有する２種の光を同時に照射して栽培したレモンバームの抽出物に、トランスグルタミナーゼＩ産生促進効果及びインボルクリン産生促進効果が優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、表皮角化促進剤及び皮膚バリア機能改善剤に関する。

本発明は、以下の発明を包含する。
（１）波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ産生促進剤。
（２）波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするインボルクリン産生促進剤。
（３）波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とする表皮角化促進剤。
（４）波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とする皮膚バリア機能改善剤。

本発明のレモンバームの抽出物は、トランスグルタミナーゼＩ及びインボルクリン産生促進効果に優れていた。また、この抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ及びインボルクリン産生促進剤は、皮膚の角化を促進し、皮膚バリア機能を改善する。本発明のトランスグルタミナーゼＩ及びインボルクリン産生促進剤は、作用が緩和な植物の抽出物を有効成分とすることから、副作用がなく安全性が高い。よって、医薬品、医薬部外品、化粧品、飲食品に安心して使用できる。

本発明におけるトランスグルタミナーゼＩは、タンパク質の架橋に働く酵素である。表皮では角化扁平上皮の最終分化時に発現し、インボルクリンやロリクリンの架橋・重合を介してＣＥの形成に働く。別名で、トランスグルタミナーゼ１、ＴＧａｓｅ１、ＴＧａｓｅＩ、ＴＧ１、ＴＧＭ１、ＬＩ、ＫＴＧ、ＬＩ１、ＴＧＫ、ＩＣＲ２、ＡＲＣＩ１、ＴＧＡＳＥとも呼ばれる。

本発明におけるインボルクリンは、表皮において基底上表皮層（有棘層及び顆粒層）に限定して発現しており、トランスグルタミナーゼＩの作用を受け、インボルクリン同士あるいはその他のタンパク質と結合し、ＣＥを形成する。

本発明における表皮角化とは、角化細胞（ケラチノサイト）が基底層で分裂し、有棘層、顆粒層と分化をしながら上層へ移行し、角質細胞となり角層へと至る過程を指す。この過程においてＣＥや細胞間脂質といった皮膚バリア機能が形成される。

本発明における皮膚バリア機能は、角層内側の水分の蒸散を防ぎ、外界からの異物（アレルゲン・細菌など）の侵入を防御する機能を指す。

本発明に用いるレモンバームは、シソ科コウスイハッカ属のレモンバーム（別名：メリッサ、学名：Ｍｅｌｉｓｓａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）のことである。葉はシトラールを含み、ハーバルでフローラルな、レモンを思わせる香りがする。晩夏には小さな白い花又は黄色い花をつける。

本発明のレモンバームの栽培方法としては、土を用いた栽培や水耕栽培などの方法で栽培することができるが、栽培管理が容易で収穫効率が良いことから水耕栽培が好ましい。水耕栽培で行う場合には、種子を播種後、出根した状態で、水耕栽培に供することができる。栽培は、温度、光、二酸化炭素濃度が制御された施設で栽培することが好ましい。栽培温度は、通常は１０～３０℃、好ましくは２０～２５℃である。栽培期間は、温度や光の照射条件によって異なるが、概ね１０～４０日が好ましく、２０～４０日が更に好ましい。播種床としては、土以外の不織布、ペーパータオル、スポンジ、バーミキュライト、パーライトなどが好ましく、そのまま水耕栽培に移行することが効率的である。播種量としては、栽培面積当たり、０．４～５粒／ｃｍ^２が好ましい。水耕栽培方法としては、密植された状態でも、根に対し効率的に、水分と併せて空気を供給できる方法が好ましく、例えば循環型水耕栽培やバブリングによる空気の供給が好ましい。

光源は、植物の栽培施設で用いる光源等を使用することができ、中でもＬＥＤ等の人工光が最も好ましい。人工光源は、発光ダイオード（ＬＥＤ）、レーザーダイオード等の光半導体素子が挙げられるが、特定の範囲の波長域が選択的に照射できる光源であれば良い。

照射する波長としては、波長域５７０～７３０ｎｍの赤色光、４００～５１５ｎｍの青色光であることが好ましく、波長域６３０～６８０ｎｍ、４３０～４６０ｎｍの光が更に好ましい。これらの光は、同時に照射することが最も好ましい。このときの波長は、照射スペクトルの極大波長（ピーク波長）のことをいう。このような波長のピークを有する光源であれば、独自に作製したものや市販のものを使用することもできる。また、上記波長を選択的に照射できるように、光学フィルタを用いても良い。上記の２種の範囲の光に加え、太陽光や蛍光灯等の光源も使用することもできる。

照射する光量としては、光合成有効光量子束密度（ＰＰＦＤ）として表される。発光体を２種組み合わせて照射する場合には、その合計の光量を意味する。その光量は、発芽後は１０～３００μｍｏｌ・ｍ^－２ｓ^－１が好ましく、５０～２００μｍｏｌ・ｍ^－２ｓ^－１が更に好ましい。この範囲外の光強度の場合は、生育障害、生育不良になる場合がある。照射は、レモンバームの上部１０～５０ｃｍの位置から照射することが好ましい。照射時間は、植物の特性や目的に応じて適宜変更できるが、１日当たり６時間以上が好ましく、１２～２４時間がより好ましい。

中でも、植物体の収量を高めるには、赤色と青色の光量比が１：０～２：１が好ましく、その中でも特に、赤色と青色の光量比が４：１～２：１に高い収量が得られた。

トランスグルタミナーゼＩ産生促進作用においては、赤色と青色の光量比が４：１～２：１が効果の面で好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が２：１が最も好ましい。

インボルクリン産生促進作用においては、赤色と青色の光量比が４：１～２：１が効果の面で好ましい。その中でも特に、赤色と青色の光量比が２：１が最も好ましい。

以上のことを総じていえば、赤色と青色の光量比４：１～２：１が好ましく、特に２：１が最も好ましい。

本発明に用いるレモンバームは、成体及び幼植物体（スプラウト）の全草又はその一部を用いてもよく、生の状態でも乾燥して用いてもよい。また、生や乾燥物のまま摂取しても良いし、抽出物を摂取することもできる。本発明に用いるレモンバームの抽出物を得るための抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。

抽出方法は、特に限定されないが、水もしくは熱水、又は水と有機溶媒の混合溶媒を用い、撹拌又はカラム抽出する方法等により行うことができる。抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３－ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。特に好ましい抽出溶媒としては、水、水－エタノールの混合極性溶媒又は水－１，３－ブチレングリコールの混合極性溶媒が挙げられる。溶媒の使用量については、特に限定はなく、例えばレモンバームの全草（乾燥重量）に対し、１０倍以上、好ましくは２０倍以上であれば良いが、抽出後に濃縮を行ったり、単離したりする場合の操作の便宜上１００倍以下であることが好ましい。また、抽出温度や時間は、用いる溶媒の種類や抽出時の圧力等によって適宜選択できる。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良いが、必要に応じて、本発明の効果を奏する範囲で、濃縮（減圧濃縮、膜濃縮等による濃縮）、希釈、濾過、活性炭等による脱色、脱臭、エタノール沈殿等の処理を行ってから用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。

本発明は、上記抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分が含有されていても良い。

本発明は、化粧品、医薬部外品、医薬品、食品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、錠菓、チョコレート、ガム、飴、飲料、ティーバック散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤、坐剤、注射用溶液等の他、スパイス、サラダ等の生鮮食品が挙げられる。

外用の場合、本発明に用いる上記抽出物の含有量は、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１～１０重量％がより好ましい。更に、０．０１～５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を超えると、効果の増強は認められにくく不経済である。

内用の場合、摂取量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なる。通常、成人１人当たりの１日の摂取量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ～１ｇがより好ましい。更に、２０ｍｇ～０．５ｇが最も好ましい。また、植物体そのものを使用する場合には、固形物の含量などを考慮して配合できる。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。製造例と処方例に示す％とは、重量％を示す。

（１）実験材料及び生育条件
水分を含んだ不織布にレモンバーム種子を播種し、温度２１℃で４８時間、蛍光灯下で栽培し、芽を出させた。この不織布を、十分に酸素を含む水耕液の液面近くに設置して、室温２１℃で２４時間、植物の真上３０ｃｍの位置から、赤色ＬＥＤ（ピーク波長６６０ｎｍ）及び青色ＬＥＤ（ピーク波長４５０ｎｍ）を同時に照射し、赤色と青色ＬＥＤの合計光合成有効光量子束密度が、１００μｍｏｌ・ｍ^－２ｓ^－１となるように、赤色と青色の光量比を１：０（赤色のみ）、８：１、４：１、３：１、２：１、１；１、１：２、０：１（青色のみ）にして栽培を行った。尚、栽培中は光量比を変えなかった。４週間栽培した後、収穫し、乾燥させることで、レモンバームの乾燥物を得た。栽培例の中で、生育速度と有効性に優れた４：１、３：１、２：１を選択し、それぞれ栽培例１～３とし、太陽光条件下で、任意の栽培方法にて約２か月栽培したレモンバームを比較栽培例１とした（表１）。

（２）抽出
製造例１Ａレモンバームの熱水抽出物
栽培例１のレモンバームの乾燥物１０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５～１００℃で１時間抽出した後、ろ過し、そのろ液を濃縮し、凍結乾燥してレモンバームの熱水抽出物を２．１ｇ得た。

製造例１Ｂレモンバームの５０％エタノール抽出物
栽培例１のレモンバームの乾燥物１０ｇに５０％エタノール水溶液２００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、ろ過し、そのろ液を濃縮乾固して、レモンバームの５０％エタノール抽出物を１．８ｇ得た。

製造例１Ｃレモンバームのエタノール抽出物
栽培例１のレモンバームの乾燥物１０ｇにエタノール２００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、ろ過し、そのろ液を濃縮乾固して、レモンバームのエタノール抽出物を０．５ｇ得た。

製造例１Ｄレモンバームの１，３－ブチレングリコール抽出物
栽培例１のレモンバームの乾燥物２０ｇに１，３－ブチレングリコール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、ろ過し、レモンバームの１，３－ブチレングリコール抽出物を３７０ｇ得た。

上記の栽培例１と同様に、栽培例２及び３の条件で栽培したレモンバームを用いて、上記の製造例１Ａ～１Ｄと同様に抽出し、栽培条件によりそれぞれ２Ａ～２Ｄ及び３Ａ～３Ｄとした。また、比較栽培例１の条件で栽培したレモンバームを用いて、上記の製造例１Ａ～１Ｄと同様に抽出し、比較製造例１Ａ～１Ｄとした（表２）。

（処方例１）パック
処方含有量（部）
１．製造例１Ａの抽出物０．１
２．ポリビニルアルコール１２．０
３．エタノール５．０
４．１，３－ブチレングリコール８．０
５．パラオキシ安息香酸メチル０．２
６．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
７．クエン酸０．１
８．クエン酸ナトリウム０．３
９．香料適量
１０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～１０を均一に溶解し製品とする。

（比較処方例１）従来のパック
処方例１において、製造例１Ａの抽出物を比較製造例１Ａの抽出物に置き換えたものを、従来のパックとした。

（処方例２）クリーム
処方含有量（部）
１．製造例１Ｂの抽出物０．１
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１２．１，３－ブチレングリコール８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

（処方例３）乳液
処方含有量（部）
１．製造例１Ｃの抽出物０．０１
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１０～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

（処方例４）化粧水
処方含有量（部）
１．製造例２Ａの抽出物０．１
２．１，３－ブチレングリコール８．０
３．グリセリン２．０
４．キサンタンガム０．０２
５．クエン酸０．０１
６．クエン酸ナトリウム０．１
７．エタノール５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～６及び１１と、成分７～１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

（処方例５）ゲル剤
処方含有量（部）
１．製造例２Ｂの抽出物０．１
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）０．１
５．香料適量
６．１，３－ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～５と、成分１及び６～１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

（処方例６）ファンデーション
処方含有量（部）
１．製造例２Ｃの抽出物０．１
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１０．ベントナイト０．５
１１．プロピレングリコール４．０
１２．トリエタノールアミン１．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．二酸化チタン８．０
１５．タルク４．０
１６．ベンガラ１．０
１７．黄酸化鉄２．０
１８．香料適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９を良く膨潤させ、続いて、成分１０～１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４～１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

（処方例７）浴用剤
処方含有量（部）
１．製造例２Ｄの抽出物０．１
２．炭酸水素ナトリウム５０．０
３．黄色２０２号（１）適量
４．香料適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１～５を均一に混合し製品とする。

（処方例８）軟膏
処方含有量（部）
１．製造例３Ｂの抽出物０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン１０．０
４．流動パラフィン５．０
５．セタノール６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．１
７．プロピレングリコール１０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６～８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

（処方例９）散剤
処方含有量（部）
１．製造例３Ｃの抽出物１．０
２．乾燥コーンスターチ３９．０
３．微結晶セルロース６０．０
［製造方法］成分１～３を混合し、散剤とする。

（処方例１０）錠剤
処方含有量（部）
１．製造例３Ｄの抽出物５．０
２．乾燥コーンスターチ２５．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム２０．０
４．微結晶セルロース４０．０
５．ポリビニルピロリドン７．０
６．タルク３．０
［製造方法］成分１～４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成型する。成型した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。

（処方例１１）錠菓
処方含有量（部）
１．製造例１Ｄの抽出物２．０
２．乾燥コーンスターチ４９．８
３．エリスリトール４０．０
４．クエン酸５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル３．０
６．香料０．１
７．精製水０．１
［製造方法］成分１～４及び７を混合し、顆粒成型する。成型した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。

（処方例１２）飲料
処方含有量（部）
１．製造例３Ａの抽出物０．０５
２．ステビア０．０５
３．リンゴ酸５．０
４．香料０．１
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１、４及び５を加えて混合する。

次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。尚、比較例としては太陽光条件下で栽培したものを用いた。

実験例１トランスグルタミナーゼＩ（ＴＧＭ１）産生促進効果、インボルクリン（ＩＶＬ）産生促進効果
ＴＧＭ１及びＩＶＬｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒト正常ケラチノサイトを６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに５×１０⁴個播種し、ＫＧ－２培地（クラボウ）にて、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。セミコンフルエントな状態になったところで、各試料を最終濃度１０及び３０μｇ／ｍＬとなるように添加したＫＧ－２培地にて７２時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏＰｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法には、ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙＲＮＡ－ｔｏ－ｃＤＮＡＫｉｔ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲＳｅｌｅｃｔＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。即ち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＴＧＭ１及びＩＶＬｍＲＮＡの発現量を、内部標準である１８ＳｒＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＴＧＭ１及びＩＶＬ発現促進率は、コントロール（試料未添加）群のＴＧＭ１及びＩＶＬｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＴＧＭ１及びＩＶＬｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。

ＴＧＭ１用のプライマーセット
ＣＡＣＣＴＧＡＡＣＣＡＴＧＡＴＴＣＴＧＴＣ（配列番号１）
ＡＧＡＡＧＡＴＧＣＣＡＣＴＧＣＴＡＧＴＣ（配列番号２）
ＩＶＬ用のプライマーセット
ＴＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧ（配列番号３）
ＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＣＴＴＴＧＴＧＴ（配列番号４）
１８ＳｒＲＮＡ用のプライマーセット
ＣＣＧＡＧＣＣＧＣＣＴＧＧＡＴＡＣ（配列番号５）
ＣＡＧＴＴＣＣＧＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＡＡＡＴＡＧＡ（配列番号６）

ＴＧＭ１ｍＲＮＡ発現に及ぼす実験結果を表３に示す。その結果、本発明の抽出物は、太陽光を照射して栽培したレモンバームの抽出物と比較して、ケラチノサイトに対してトランスグルタミナーゼＩ産生促進効果を示した。その中でも特に、赤色と青色の光量比が２：１に高い効果が認められた。また、５０％エタノール抽出物（製造例１Ｂ～３Ｂ）、エタノール抽出物（製造例１Ｃ～３Ｃ）、１，３－ブチレングリコール抽出物（製造例１Ｄ～３Ｄ）についても同様の効果が認められた。

ＩＶＬｍＲＮＡ発現に及ぼす実験結果を表４に示す。その結果、本発明の抽出物は、太陽光を照射して栽培したレモンバームの抽出物と比較して、ケラチノサイトに対してインボルクリン産生促進効果を示した。その中でも特に、赤色と青色の光量比が２：１に高い効果が認められた。また、５０％エタノール抽出物（製造例１Ｂ～３Ｂ）、エタノール抽出物（製造例１Ｃ～３Ｃ）、１，３－ブチレングリコール抽出物（製造例１Ｄ～３Ｄ）についても同様の効果が認められた。

以上のことから、本発明に関わる、波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、表皮角化促進剤及び皮膚バリア機能改善剤は、各剤の目的に対して優れた改善効果を発揮する。従って、表皮角化促進及び皮膚バリア機能改善を目的とする医薬品、医薬部外品、化粧品及び食品を提供することができる。

Claims

波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼＩ産生促進剤。
波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とするインボルクリン産生促進剤。
波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とする表皮角化促進剤。
波長域５７０～７３０ｎｍと４００～５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が４：１～２：１の光を照射して栽培したレモンバームの抽出物を含有することを特徴とする皮膚バリア機能改善剤。