JP2020020765A - Fc結合性タンパク質の抗体結合性測定方法 - Google Patents
Fc結合性タンパク質の抗体結合性測定方法 Download PDFInfo
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Abstract
Description
(1)溶離液
リン酸一ナトリウム・二水和物(和光純薬製)を5.9g、リン酸二ナトリウム・十二水和物(和光純薬製)を22.3g、硫酸ナトリウム(和光純薬製)を21.3g取り、900mLのミリQ水に溶解後、メスシリンダーで1000mLにメスアップした。
(2)抗体溶液
(1)のリン酸緩衝液を用いて、サングロポール(CSLベーリング製)を5倍希釈したものを抗体溶液とした。本溶液をさらに20倍希釈して280nmにおける吸光度を測定したところ、0.648であったため、抗体濃度を9g/L相当とした。
(3)Fc結合性タンパク質を含む溶液
(1)のリン酸緩衝液に溶解した2g/LのリコンビナントFcγRIIIA溶液を用意した。
表1に記載の通り、混合サンプルを作成した。
理論段数=5.54×(保持時間/50%高さにおけるピーク幅)^2
Fc結合性タンパク質を含む溶液として、リン酸緩衝液に溶解した2g/Lの高親和型リコンビナントFcγRIIIA溶液を用いて実施例1の手法に準じて抗体結合性分析を行った。カラムはLot2を使用し、3回繰り返し分析を行った。得られた結果を表4に示す。
Claims (4)
- Fc結合性タンパク質を含む溶液が分注された2以上の容器に、終濃度が異なるように抗体溶液を各容器に添加する工程と、
当該混合液を恒温条件におけるサイズ排除クロマトグラフィーにて分析する工程と、
得られたクロマトグラムにおける単量体Fc結合性タンパク質のピーク高さを抽出する工程と、
抗体量終濃度と抽出したピーク高さをもとに結合力の指標となる傾き値を得る工程と、を含む、
抗体結合性測定方法。 - 前記Fc結合性タンパク質が、FcγRI、FcγRII、FcγRIII及びそのアミノ酸変異体のいずれかであることを特徴とする、請求項1に記載の測定方法。
- 前記傾き値について、抗体を含まない一定量のFc結合性タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーで分析した際の単量体Fc結合性タンパク質のピーク高さで除した、補正値を用いることを特徴とする請求項1又は2に記載の測定方法。
- 前記傾き値について、抗体を含まない一定量のFc結合性タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーで分析した際のピークの理論段数で除した、補正値を用いることを特徴とする請求項1又は2に記載の測定方法。
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