JP2020012006A - 美容組成物 - Google Patents
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Abstract
【課題】 繊維芽細胞の保護及び血流の改善を同時に図ることにより、より高い美肌効果を奏する美容組成物を提供すること。【解決手段】 松樹皮抽出物と、長命草、黒ショウガ、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材などの特定の成分とを有効成分として含有することを特徴とする美容組成物である。【選択図】図１
Description
本発明は、美容組成物に係り、詳しくは、松樹皮抽出物及び特定の他の成分を有効成分とする美容組成物に関する。
近年、しわ等の皮膚の老化を防ぐアンチエイジングに対する研究が盛んに行われており、コラーゲンやヒアルロン酸が注目されている。このコラーゲンやヒアルロン酸は、皮膚の真皮を構成する繊維芽細胞により産生されることが知られている。
このようなコラーゲンやヒアルロン酸の産生に注目した組成物として、例えば、β１，３Ｄグルカンを含有するβグルカンを有してなることを特徴とするコラーゲン生成促進剤（特許文献１参照）や、カルダモンの抽出物を含むコラーゲン産生促進用美容組成物（特許文献２参照）や、ハマミズナ科の植物体から抽出した抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進用組成物（特許文献３参照）が提案されている。
他方、現代社会においては、運動不足やストレスによる自律神経失調等の様々な要因から、血液の循環（血流）の不調が問題となることが多い。この血流の不調（血流量の低下）は、肌のくすみ、むくみ等の症状を引き起こすため、健康上の観点だけでなく、美容上の観点からも、血流を改善する方策が求められている。
このような血流改善のための組成物として、例えば、ヒソップ抽出物（特許文献４参照）や、カシス濃縮物とアミノ酸または有機酸を含む組成物（特許文献５参照）や、カモミール抽出エキス（特許文献６参照）等が提案されている。
本発明の課題は、繊維芽細胞の保護及び血流の改善を同時に図ることにより、より高い美肌効果を奏する美容組成物を提供することにある。
本発明者らは、美容に関し、繊維芽細胞保護及び血流改善の両面から鋭意調査・研究したところ、松樹皮抽出物と特定の他の成分とを組み合わせることにより、高い繊維芽細胞保護効果が得られると同時に高い血流改善効果が得られることを見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、松樹皮抽出物と、繊維芽細胞保護能及び／又は血流改善能がほとんどないか、その能力が小さい特定の他の成分を組み合わせることにより、繊維芽細胞保護効果及び血流改善効果の両者を相乗的に向上させることができることを見いだした。
すなわち、本発明は、松樹皮抽出物と、下記（ａ）〜（ｅ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とを有効成分として含有することを特徴とする美容組成物に関する。
（ａ）長命草、黒ショウガ、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材
（ｂ）麦芽糖、トレハロース、還元パラチノース、及び還元麦芽糖から選ばれる少なくとも１種の甘味料
（ｃ）アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸
（ｄ）クロロゲン酸
（ｅ）ビタミンＣ、ナイアシン、葉酸、及び亜鉛から選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類
（ａ）長命草、黒ショウガ、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材
（ｂ）麦芽糖、トレハロース、還元パラチノース、及び還元麦芽糖から選ばれる少なくとも１種の甘味料
（ｃ）アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸
（ｄ）クロロゲン酸
（ｅ）ビタミンＣ、ナイアシン、葉酸、及び亜鉛から選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類
本発明の美容組成物は、美肌作用、皮膚保護作用、血流改善作用を有し、肌美容のために用いられる美肌剤となり得る。
本発明の美容組成物は、松樹皮抽出物と（ａ）〜（ｅ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とからなる有効成分を添加して得たものであってもよい。
また、本発明の美容組成物は、経口用であることが好ましく、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、又は液剤であることが好ましい。
また、本発明は、上記本発明の美容組成物を摂取させることを特徴とする美容方法（ただし、医療行為を除く）に関する。
本発明の美容組成物によれば、コラーゲンやヒアルロン酸の産生に寄与する繊維芽細胞を保護して、紫外線等のダメージから皮膚を保護することができ、しわ防止や老化防止（アンチエイジング）などの美容効果を得ることができると共に、血流量を増加させることができ、肌のくすみ、むくみ等の症状の予防ないし改善といった美容効果を得ることができる。また、血流改善作用により、繊維芽細胞保護作用成分を広く行き渡らせることが可能となり、より高い美肌効果を得ることが可能となる。
本発明の美容組成物は、松樹皮抽出物と、下記（ａ）〜（ｅ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分（以下、他成分ということがある）とを有効成分として含有することを特徴とする。すなわち、松樹皮抽出物と共に用いられる下記（ａ）〜（ｅ）の成分は、１種（例えば（ａ）成分）であってもよいし、２種以上組み合わせてもよい。他成分を２種以上組み合せて用いる場合、松樹皮抽出物と相乗効果の高い他成分同士を組み合わせることが好ましい。
本発明の美容組成物は、かかる有効成分の組合せの相乗効果により、酸化ストレスからより有効に繊維芽細胞を保護して、コラーゲンやヒアルロン酸の産生低下を抑制し、紫外線等による皮膚のダメージを低減して、しわや老化といった症状を効果的に予防ないしは改善することができる。また、本発明の美容組成物は、有効成分の組合せの相乗効果により、より有効に、血管周辺の筋肉を弛緩させて血管を拡張し、血流量を増加させることができ、肌のくすみ、むくみ等の症状を効果的に予防ないし改善することができる。また、この血流改善により、繊維芽細胞保護作用を身体の末端まで行き渡らせることが可能となり、より高い美肌効果を得ることができる。
本発明の美容組成物は、美肌作用、皮膚保護作用、血流改善作用を有する。本発明の美容組成物は、肌美容のために用いられる美肌剤、皮膚保護に用いられる皮膚保護剤、血流改善に用いられる血流改善剤となり得る。また、本発明の美容組成物は、コラーゲン産生促進剤やヒアルロン酸産生促進剤としても用いることができる。
［松樹皮抽出物］
本発明の美容組成物の有効成分となる松樹皮抽出物は、主な成分の一つとして、プロアントシアニジンを含有する。プロアントシアニジンは、フラバン−３−オールおよび／又はフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群である。
本発明の美容組成物の有効成分となる松樹皮抽出物は、主な成分の一つとして、プロアントシアニジンを含有する。プロアントシアニジンは、フラバン−３−オールおよび／又はフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群である。
本発明に用いられる松樹皮抽出物の原料としては、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ Ｍａｒｔｉｍａ）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツ等を挙げることができ、これらの中でも、フランス海岸松が好ましい。得られた抽出物は、必要に応じて濃縮又は乾燥して、液状、ペースト状、又は粉末としてもよい。また、松樹皮抽出物は、市販品を用いることができ、例えば、株式会社東洋新薬製の松樹皮抽出物を用いることができる。
また、本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンとして重合度が２以上の縮重合体が含有されていることが好ましい。特に、重合度が低い縮重合体が多く含まれるプロアントシアニジンが好ましい。重合度の低い縮重合体としては、例えば、重合度が２〜３０の縮重合体（２〜３０量体）であり、重合度が２〜１０の縮重合体（２〜１０量体）が好ましく、重合度が２〜４の縮重合体（２〜４量体）がさらに好ましい。本明細書では、重合度が２〜４の重合体を、ＯＰＣ（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）という。本発明に用いられる松樹皮抽出物は、ＯＰＣを２０質量％以上含有することが好ましく、３０質量％以上含有することがより好ましく、４０質量％以上含有することがさらに好ましい。
松樹皮抽出物は、松の樹皮を水又は有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には温水・熱水が好ましく用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ブタン、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール等の食品あるいは薬剤の製造に許容される有機溶媒が好ましく用いられる。これらの水、有機溶媒は単独で用いてもよいし、２種以上の溶媒を組み合わせて用いてもよい。特に、水、エタノール、含水エタノール等が好ましく用いられる。
松樹皮から松樹皮抽出物を抽出する方法としては、特に制限はないが、例えば、加温抽出法や超臨界流体抽出法等の抽出法が用いることができる。松樹皮抽出物の抽出方法においては、複数の抽出方法を組み合わせてもよい。
［他成分］
（ａ）植物素材
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、長命草、黒ショウガ、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材を用いることが好ましい。
（ａ）植物素材
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、長命草、黒ショウガ、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材を用いることが好ましい。
これらの植物素材は、葉、茎、根、花、実、幹、枝等、植物のいずれの部位であってもよく、植物素材そのもの（乾燥物を含む）の他、その粉砕物、搾汁、抽出物等の植物素材処理物を用いることができる。粉砕物としては、粉末、顆粒等が挙げられる。絞汁や抽出物は、液状であってもよいが、ペースト状や乾燥粉末として用いることもできる。抽出物は、適当な溶媒を用いて抽出することに得ることができ、溶媒としては、例えば、水（温水、熱水）、エタノール、含水エタノールを用いることができる。これらの植物素材は、市販されているものを使用することができる。
長命草は、セリ科カワラボウフウ属に属するボタンボウフウとも呼ばれる多年草植物である。本発明の植物素材として用いる部位としては、葉、根が好ましい。
黒ショウガは、学名をＫａｅｍｐｆｅｒｉａ Ｐａｒｖｉｆｌｏｒａといい、東南アジアに自生するショウガ科バンウコン属の植物である。本発明の植物素材として用いる部位としては、根茎が好ましい。
ココヤシは、ヤシ科の植物であり、本発明の植物素材として用いる部位としては、果実（胚乳）が好ましい。
（ｂ）甘味料
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、麦芽糖、トレハロース、還元パラチノース、及び還元麦芽糖から選ばれる少なくとも１種の甘味料を用いることが好ましい。本発明の甘味料とは、甘味を呈するものを意味し、甘味料としての使用目的に限定されない。
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、麦芽糖、トレハロース、還元パラチノース、及び還元麦芽糖から選ばれる少なくとも１種の甘味料を用いることが好ましい。本発明の甘味料とは、甘味を呈するものを意味し、甘味料としての使用目的に限定されない。
（ｃ）アミノ酸
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸（塩を含む）を用いることが好ましい。塩としては、例えば、ナトリウム塩、塩酸塩等を挙げることができる。
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸（塩を含む）を用いることが好ましい。塩としては、例えば、ナトリウム塩、塩酸塩等を挙げることができる。
（ｄ）クロロゲン酸
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、クロロゲン酸を用いることが好ましい。
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、クロロゲン酸を用いることが好ましい。
（ｅ）ビタミン・ミネラル類
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、ビタミンＣ、ナイアシン、葉酸、及び亜鉛から選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類を用いることが好ましい。なお、本発明のミネラル類としての亜鉛は、亜鉛を含む化合物の形態を含む。
本発明の美容組成物においては、松樹皮抽出物と共に、有効成分として、ビタミンＣ、ナイアシン、葉酸、及び亜鉛から選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類を用いることが好ましい。なお、本発明のミネラル類としての亜鉛は、亜鉛を含む化合物の形態を含む。
本発明の美容組成物は、松樹皮抽出物及び所定の他成分を含有し、美容に用いられる点において、製品として他の製品と区別することができるものであれば特に制限されるものではなく、例えば、本発明に係る製品の本体、包装、説明書、宣伝物のいずれかに美肌効果、皮膚保護効果、血流改善効果、コラーゲン産生促進効果、ヒアルロン酸産生促進効果等の美容効果の機能がある旨を表示したものが本発明の範囲に含まれる。例えば、医薬品（医薬部外品を含む）や、化粧品や、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等の所定機関より効能の表示が認められた機能性食品などのいわゆる健康食品等を挙げることができる。いわゆる健康食品においては、「肌をバリアする」、「肌を守る」、「しみが気になる方に」、「しわが気になる方に」、「ストレスに負けない肌に」、「紫外線に負けない肌に」、「美容にうれしい」、「肌にうれしい」等を表示したものや、「めぐりを良くする」、「肌の色が気になる方に」、「目のくまが気になる方に」等を表示したものを例示することができる。本発明の美容組成物は、上記の効果が気になる人であれば性別や年齢に関係なく摂取することができるが、本発明の美容組成物の効果をより有効に享受することができることから、女性が摂取することが望ましく、閉経後の女性が摂取することがより望ましい。
本発明の美容組成物は、経口用又は外用として使用することができる。外用剤としては、皮膚、頭皮等に塗布して用いるものであれば、特に制限はなく、その形態としては、軟膏剤、クリーム剤、ジェル剤、ローション剤、乳液剤、パック剤、湿布剤等の皮膚外用剤や、注射剤等の形態を挙げることができる。
また、本発明の美容組成物を経口剤として用いる場合、その形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液剤、粒状剤、棒状剤、板状剤、ブロック状剤、固形状剤、丸状剤、ペースト状剤、クリーム状剤、カプレット状剤、ゲル状剤、チュアブル状剤、スティック状剤等を挙げることができる。これらの中でも、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液剤の形態が特に好ましい。具体的には、サプリメントや、ペットボトル、缶、瓶等に充填された容器詰飲料や、水（湯）、牛乳、果汁、青汁等に溶解して飲むためのインスタント粉末飲料、インスタント顆粒飲料を例示することができる。これらは食事の際などに手軽に飲用しやすく、また嗜好性を高めることができるという点で好ましい。
本発明の美容組成物における松樹皮抽出物及び他成分（有効成分）の含有量としては、その効果の奏する範囲で適宜含有させればよい。
一般的には、本発明の美容組成物が医薬品やサプリメント（錠剤，カプセル剤）の場合には、有効成分が乾燥質量換算で全体の０．０１〜１００質量％含まれていることが好ましく、０．１〜８５質量％含まれていることがより好ましく、０．５〜７０質量％含まれていることがさらに好ましい。
本発明の美容組成物が容器詰飲料（液剤）である場合には、有効成分が乾燥質量換算で全体の０．０１〜１５質量％含まれていることが好ましく、０．０３〜１２．５質量％含まれていることがより好ましく、０．０５〜１０質量％含まれていることがさらに好ましい。
また、本発明の美容組成物がインスタント粉末飲料（粉末剤）、インスタント顆粒飲料（顆粒剤）である場合には、有効成分が乾燥質量換算で全体の０．１〜８０質量％含まれていることが好ましく、０．５〜７０質量％含まれていることがより好ましく、１〜６０質量％含まれていることがさらに好ましい。
本発明の効果をより有効に発揮させるためには、有効成分が乾燥質量換算で本発明の美容組成物全体（水分を除く）の８０質量％以上含まれていることが好ましく、９０質量％以上含まれていることがより好ましく、９５質量％以上含まれていることがさらに好ましく、１００質量％であることが特に好ましい。さらに、本発明の美容組成物が成分（ａ）〜（ｃ）のいずれかを含有する場合、その含有される成分は、本発明における有効成分のみで構成されることが好ましい。すなわち、本発明の美容組成物が例えば成分（ａ）（植物素材）を含む場合には、長命草、黒ショウガ、ココヤシ以外の植物素材を含まないように構成することが好ましい。
本発明の美容組成物の摂取量としては特に制限はないが、本発明の効果をより顕著に発揮させる観点から、１日当たりの有効成分の摂取量が、０．１ｍｇ／日以上となるように摂取することが好ましく、１ｍｇ／日以上となるように摂取することがより好ましく、１０ｍｇ／日以上となるように摂取することがさらに好ましく、４０ｍｇ／日以上となるように摂取することが特に好ましい。その上限は特に制限されないが、例えば、４ｇ／日であり、好ましくは２ｇ／日である。
本発明の美容組成物は、1日の摂取量が前記摂取量となるように、１つの容器に、又は例えば２〜３の複数の容器に分けて、1日分として収容することができる。
松樹皮抽出物及び他成分の配合質量比としては、乾燥質量換算で、０．５：１〜７０：１の範囲であることが好ましく、０．７５：１〜６０：１の範囲であることがより好ましく、１：１〜６０：１の範囲であることがさらに好ましく、１：１〜５０：１の範囲であることが特に好ましい。松樹皮抽出物及び他成分の配合比が、上記範囲であることにより、本発明の効果をより有効に発揮することができる。
本発明の美容組成物は、必要に応じて、経口剤又は外用剤として許容される有効成分以外の成分を添加して、公知の製剤方法によって製造することができる。
また、本発明の経口剤としての美容組成物としては、有効成分を含有する美容組成物の他、食品に対して有効成分を添加して得た美容組成物（美容食品）を挙げることができ、例えば、通常の食品（天然の食品を含む）に比して本発明の有効成分含有量を増加させた食品や、本発明の有効成分を通常含まない食品に対して有効成分を添加した食品を挙げることができる。有効成分の添加は、それぞれの成分を別々に添加してもよいし、同時に添加してもよく、また、有効成分以外の他の成分と共に添加してもよい。
本発明の美容食品としては、例えば、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料、スムージー、青汁等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳、ヨーグルト等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及びその加工食品；ソース、醤油等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、牛丼、ハヤシライス、オムライス、おでん、マーボドーフ、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール、各種ソース、各種スープ等のレトルトパウチ食品などを挙げることができる。
本発明の美容方法としては、上記説明した本発明の美容組成物を摂取させることを特徴とするが、医療行為は含まれない。本発明の美容組成物は、性別や年齢に関係なく摂取することができるが、本発明の美容組成物の効果をより有効に享受することができることから、女性に摂取させることが望ましく、閉経後の女性に摂取させることがより望ましい。本発明の方法としては、例えば、レストラン等の飲食店において、本発明の美容食品を提供することにより、美容効果を得る方法を挙げることができる。また、エステティックサロン等において、施術の一つとして、本発明の美容食品を提供する方法を挙げることができる。
以下、本発明を実施例に基づき説明する。
［実施例１］（皮膚保護効果の確認）
１．細胞培養
（１）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で、７５ｃｍ２フラスコを用いて、正常ヒト繊維芽細胞（ＮＨＤＦ）を１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭにより培養した。
（２）トリプシン処理により浮遊させた細胞を、７５ｃｍ２フラスコから９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに １．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した。
（３）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間前培養した。
（４）各ｗｅｌｌより培地を除去後、所定濃度に調製した被験物質含有培地を２００μＬずつ添加し、ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。
［実施例１］（皮膚保護効果の確認）
１．細胞培養
（１）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で、７５ｃｍ２フラスコを用いて、正常ヒト繊維芽細胞（ＮＨＤＦ）を１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭにより培養した。
（２）トリプシン処理により浮遊させた細胞を、７５ｃｍ２フラスコから９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに １．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した。
（３）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間前培養した。
（４）各ｗｅｌｌより培地を除去後、所定濃度に調製した被験物質含有培地を２００μＬずつ添加し、ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した。
なお、松樹皮抽出物と他成分の併用サンプルについては、それぞれ２倍濃度の被験物質含有培地を調製し、１００μＬずつ添加することで目的の濃度とした。また、ｃｏｎｔｒｏｌについては、被験物質をＤＭＳＯに溶解したものに対しては０．２５％ＤＭＳＯ含有１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭを用いて調製し、その他の被験物質に対しては１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭを用いて調製した。
松樹皮抽出物については、フランス海岸松の樹皮の熱水抽出物（乾燥粉末）を用いた。松樹皮抽出物と共に用いる他成分としては、表１〜表５に示す物質を用いた。
（５）２４時間培養後、無血清ＤＭＥＭで２．５ｍＭに調製した過酸化水素水を５０μＬ添加した（終濃度５００μＭ）。Ｃｏｎｔｒｏｌに過酸化水素を添加したものをｃｏｎｔｒｏｌ（＋）とした。
２．酸化ストレスに対する細胞生存率の測定
（１）過酸化水素水の添加から９０分後に、培養した細胞から培地を除去し、ＰＢＳ ２００μＬ／ｗｅｌｌで１回洗浄後、無血清ＤＭＥＭで３０倍に希釈したＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８溶液を１５０μＬ添加した。
（２）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内に静置し適度に発色させた後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
（３）得られたデータを元にｃｏｎｔｒｏｌ（＋）に対する細胞生存率(% of control)を算出した。
（１）過酸化水素水の添加から９０分後に、培養した細胞から培地を除去し、ＰＢＳ ２００μＬ／ｗｅｌｌで１回洗浄後、無血清ＤＭＥＭで３０倍に希釈したＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８溶液を１５０μＬ添加した。
（２）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内に静置し適度に発色させた後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
（３）得られたデータを元にｃｏｎｔｒｏｌ（＋）に対する細胞生存率(% of control)を算出した。
% of control ＝ (Data sample-Data blank)/(Data control-Data blank)×100
［実施例２］（血流改善効果の確認）
１．細胞培養
（１）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で、７５ｃｍ２フラスコを用いて、ブタ肺動脈血管内皮細胞（ＰＰＡＥＣ）を１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ １６４０により培養した。
（２）トリプシン処理により浮遊させた細胞を７５ｃｍ２フラスコから９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した。
（３）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で４８時間前培養した。
（４）各ｗｅｌｌより培地を除去後、４％ＦＢＳ−αＭＥＭにて所定濃度に調製した被験物質含有培地を１００μＬずつ添加し、ＣＯ２インキュベーター内で１６時間培養した。
１．細胞培養
（１）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で、７５ｃｍ２フラスコを用いて、ブタ肺動脈血管内皮細胞（ＰＰＡＥＣ）を１０％ＦＢＳ−ＲＰＭＩ １６４０により培養した。
（２）トリプシン処理により浮遊させた細胞を７５ｃｍ２フラスコから９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した。
（３）３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で４８時間前培養した。
（４）各ｗｅｌｌより培地を除去後、４％ＦＢＳ−αＭＥＭにて所定濃度に調製した被験物質含有培地を１００μＬずつ添加し、ＣＯ２インキュベーター内で１６時間培養した。
なお、松樹皮抽出物と他成分の併用サンプルについては、それぞれ２倍濃度の被験物質含有培地を５０μＬずつ添加することで目的の濃度とした。また、ｃｏｎｔｒｏｌについては、被験物質をＤＭＳＯに溶解したものに対しては０．２５％ＤＭＳＯ含有４％ＦＢＳ−αＭＥＭを用いて調製し、その他の被験物質に対しては４％ＦＢＳ−αＭＥＭを用いて調製した。
松樹皮抽出物については、フランス海岸松の樹皮の熱水抽出物（乾燥粉末）を用いた。松樹皮抽出物と共に用いる他成分としては、表１〜表５に示す物質を用いた。
２．ＮＯ産生量の評価
（１）１６時間培養後、培養上清５０μＬを１．５ｍＬサンプルチューブに回収し、Ｎ＝３のサンプルを混合した。
（２）４℃、２０００ｇで３分間遠心し、上清を別の１．５ｍＬエッペンチューブに移した。
（３）Ｎｉｔｒａｔｅ／Ｎｉｔｒｉｔｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ，Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ（Ｃａｙｍａｎ製）を用いて、（２）のサンプル中のＮＯ濃度（μＭ）を測定した。なお、血管内皮細胞から産生されるＮＯは、血管周辺の筋肉を弛緩させて血管を拡張する作用を有する。
（４）算出したＮＯ濃度をもとに「％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ」を算出した。
（１）１６時間培養後、培養上清５０μＬを１．５ｍＬサンプルチューブに回収し、Ｎ＝３のサンプルを混合した。
（２）４℃、２０００ｇで３分間遠心し、上清を別の１．５ｍＬエッペンチューブに移した。
（３）Ｎｉｔｒａｔｅ／Ｎｉｔｒｉｔｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ，Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ（Ｃａｙｍａｎ製）を用いて、（２）のサンプル中のＮＯ濃度（μＭ）を測定した。なお、血管内皮細胞から産生されるＮＯは、血管周辺の筋肉を弛緩させて血管を拡張する作用を有する。
（４）算出したＮＯ濃度をもとに「％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ」を算出した。
％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ
＝試料のＮＯ濃度（μＭ）／ｃｏｎｔｒｏｌのＮＯ濃度（μＭ）×１００
＝試料のＮＯ濃度（μＭ）／ｃｏｎｔｒｏｌのＮＯ濃度（μＭ）×１００
上記実施例１及び実施例２の結果を表１〜表５、及び図１〜図２２に示す。
各図の上図は、左から、「コントロール（過酸化水素添加）」、「松樹皮抽出物の単独添加」、「他成分の単独添加」、「松樹皮抽出物＋他成分添加」の結果を表す。各図の下図は、左から、「コントロール（添加なし）」、「松樹皮抽出物の単独添加」、「他成分の単独添加」、「松樹皮抽出物＋他成分添加」の結果を表す。また、グラフ下部の説明における数値は、サンプル濃度を示し、例えば、図１の上図のグラフの「松_１０」は、松樹皮抽出物１０（μｇ／ｍＬ）を示す。添加成分の濃度単位は、すべてのグラフにおいて、μｇ／ｍＬである。縦軸は「％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ」を示す。
長命草については、葉の乾燥粉砕末を用いた。
黒ショウガについては、黒ショウガの根茎の６０％エタノール抽出物（乾燥粉末）を用いた。
ココナッツについては、市販のココナッツミルクを乾燥後、油分を除いたものを用いた。
マキベリーについては、市販品の果実の乾燥粉末を用いた。
黒ショウガについては、黒ショウガの根茎の６０％エタノール抽出物（乾燥粉末）を用いた。
ココナッツについては、市販のココナッツミルクを乾燥後、油分を除いたものを用いた。
マキベリーについては、市販品の果実の乾燥粉末を用いた。
表１〜表５、及び図１〜図２２に示すように、松樹皮抽出物と、本発明の特定の他成分を組み合わせることにより、酸化ストレスに対する繊維芽細胞の細胞生存率（上図）、及び血管内皮細胞からのＮＯ産生量（下図）の両者が相乗的に増加した。したがって、本発明の美容組成物によれば、繊維芽細胞が保護されると共に血流が改善され、非常に優れた美容効果を得ることができる。
［実施例３］（錠剤の製造）
下記成分からなるタブレット（５００ｍｇ）を製造した。
還元麦芽糖 ５質量％
コラーゲンペプチド １５質量％
大豆タンパク質 １５質量％
でんぷん １５質量％
松樹皮抽出物 ８質量％
ビタミンＣ １質量％
ビタミンＢ１ １質量％
ビタミンＢ２ １質量％
ビタミンＢ６ １質量％
葉酸 １質量％
グルコン酸亜鉛 １質量％
セルロース ２質量％
塩化カルシウム ２質量％
ステアリン酸カルシウム １質量％
下記成分からなるタブレット（５００ｍｇ）を製造した。
還元麦芽糖 ５質量％
コラーゲンペプチド １５質量％
大豆タンパク質 １５質量％
でんぷん １５質量％
松樹皮抽出物 ８質量％
ビタミンＣ １質量％
ビタミンＢ１ １質量％
ビタミンＢ２ １質量％
ビタミンＢ６ １質量％
葉酸 １質量％
グルコン酸亜鉛 １質量％
セルロース ２質量％
塩化カルシウム ２質量％
ステアリン酸カルシウム １質量％
［実施例４］（カプセル剤の製造）
下記混合物をソフトカプセルに封入し、カプセル剤を製造した。
ヒアルロン酸 １５０ｍｇ
麦芽糖 ５０ｍｇ
還元麦芽糖 ５０ｍｇ
松樹皮抽出物 ２０ｍｇ
二酸化ケイ素 １０ｍｇ
ビタミンＥ ０．１ｍｇ
ナイアシン ０．５ｍｇ
アスパラギン ０．２５ｍｇ
アスパラギン酸 ０．２５ｍｇ
マグネシウム １ｍｇ
下記混合物をソフトカプセルに封入し、カプセル剤を製造した。
ヒアルロン酸 １５０ｍｇ
麦芽糖 ５０ｍｇ
還元麦芽糖 ５０ｍｇ
松樹皮抽出物 ２０ｍｇ
二酸化ケイ素 １０ｍｇ
ビタミンＥ ０．１ｍｇ
ナイアシン ０．５ｍｇ
アスパラギン ０．２５ｍｇ
アスパラギン酸 ０．２５ｍｇ
マグネシウム １ｍｇ
［実施例５］（顆粒剤の製造）
下記成分を混合して常法により顆粒剤を製造した。
フラクトオリゴ糖 ２０ｇ
イソマルトオリゴ糖 ２０ｇ
ステアリン酸カルシウム ２ｇ
二酸化ケイ素 １ｇ
松樹皮抽出物 ０．４ｇ
クロロゲン酸 ０．１ｇ
ナイアシン ０．０１ｇ
グルコン酸亜鉛 ０．００１ｇ
下記成分を混合して常法により顆粒剤を製造した。
フラクトオリゴ糖 ２０ｇ
イソマルトオリゴ糖 ２０ｇ
ステアリン酸カルシウム ２ｇ
二酸化ケイ素 １ｇ
松樹皮抽出物 ０．４ｇ
クロロゲン酸 ０．１ｇ
ナイアシン ０．０１ｇ
グルコン酸亜鉛 ０．００１ｇ
［実施例６］（インスタント粉末剤の製造）
下記成分を混合して常法によりインスタント粉末（１０ｇ）を製造した。
トレハロース ０．１ｇ
アスパルテーム ０．１ｇ
ショ糖脂肪酸エステル ２ｇ
松樹皮抽出物 ０．４ｇ
アラニン ０．０１ｇ
アルギニン ０．０２ｇ
グリシン ０．０１ｇ
イソロイシン ０．０１ｇ
メチオニン ０．０１ｇ
フェニルアラニン ０．０１ｇ
プロリン ０．０１ｇ
トリプトファン ０．０１ｇ
チロシン ０．０１ｇ
バリン ０．０２ｇ
グルタミン ０．０１ｇ
グルコン酸亜鉛 ０．００１ｇ
塩化鉄 ０．００１ｇ
香料 ０．００１ｇ
ステアリン酸カルシウム 残部
下記成分を混合して常法によりインスタント粉末（１０ｇ）を製造した。
トレハロース ０．１ｇ
アスパルテーム ０．１ｇ
ショ糖脂肪酸エステル ２ｇ
松樹皮抽出物 ０．４ｇ
アラニン ０．０１ｇ
アルギニン ０．０２ｇ
グリシン ０．０１ｇ
イソロイシン ０．０１ｇ
メチオニン ０．０１ｇ
フェニルアラニン ０．０１ｇ
プロリン ０．０１ｇ
トリプトファン ０．０１ｇ
チロシン ０．０１ｇ
バリン ０．０２ｇ
グルタミン ０．０１ｇ
グルコン酸亜鉛 ０．００１ｇ
塩化鉄 ０．００１ｇ
香料 ０．００１ｇ
ステアリン酸カルシウム 残部
［実施例７］（液剤の製造）
下記成分からなる液剤（５０ｍＬ）を製造した。
ブタ由来プラセンタ ２０００ｍｇ
松樹皮抽出物 ４００ｍｇ
麦芽糖 １５０ｍｇ
アスパラギン １５０ｍｇ
アスパラギン酸 １５０ｍｇ
イソロイシン ５０ｍｇ
プロリン ５０ｍｇ
トリプトファン ２５ｍｇ
ビタミンＣ ０．００１質量％
ビタミンＢ１ ０．００１質量％
ビタミンＢ６ ０．００１質量％
水 残量
下記成分からなる液剤（５０ｍＬ）を製造した。
ブタ由来プラセンタ ２０００ｍｇ
松樹皮抽出物 ４００ｍｇ
麦芽糖 １５０ｍｇ
アスパラギン １５０ｍｇ
アスパラギン酸 １５０ｍｇ
イソロイシン ５０ｍｇ
プロリン ５０ｍｇ
トリプトファン ２５ｍｇ
ビタミンＣ ０．００１質量％
ビタミンＢ１ ０．００１質量％
ビタミンＢ６ ０．００１質量％
水 残量
本発明の美容組成物は、高い美容効果を有し、経口剤又は外用剤として用いることができることから、本発明の産業上の有用性は高い。
Claims (9)
- 松樹皮抽出物と、下記（ａ）〜（ｅ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とを含有することを特徴とする美容組成物。
（ａ）長命草、黒ショウガ、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材
（ｂ）麦芽糖、トレハロース、還元パラチノース、及び還元麦芽糖から選ばれる少なくとも１種の甘味料
（ｃ）アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸
（ｄ）クロロゲン酸
（ｅ）ビタミンＣ、ナイアシン、葉酸、及び亜鉛から選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類 - 美肌作用を有することを特徴とする請求項１記載の美容組成物。
- 皮膚保護作用を有することを特徴とする請求項１又は２記載の美容組成物。
- 血流改善作用を有することを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載の美容組成物。
- 肌美容のために用いられる美肌剤であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載の美容組成物。
- 松樹皮抽出物と（ａ）〜（ｅ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分を添加して得たことを特徴とする請求項１〜５のいずれか記載の美容組成物。
- 経口用であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか記載の美容組成物。
- 錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、又は液剤であることを特徴とする請求項７記載の美容組成物。
- 請求項１〜８のいずれか記載の美容組成物を摂取させることを特徴とする美容方法（ただし、医療行為を除く）。
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| "News Release", ［ONLINE］, JPN6020023310, 19 January 2011 (2011-01-19), ISSN: 0004605493 * |
| "エイジングには高機能エイジングスキンケア！ラボルテ", @COSME（アットコスメ），［ONLINE］, JPN6020023312, 6 November 2011 (2011-11-06), ISSN: 0004605494 * |
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