JP2019535265A - 幹細胞由来シュワン細胞 - Google Patents

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Abstract

本明細書に開示される主題は、幹細胞の、シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞への分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法、ならびにそのような方法によって生成されたシュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を提供する。本明細書に開示される主題はまた、ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは修復のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害（例えば、末梢神経障害、例えば糖尿病性末梢神経障害）の予防および／もしくは処置のための、そのようなシュワン細胞前駆体およびシュワン細胞の使用も提供する。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０１６年１１月１４日に出願された米国出願番号第６２／４２１，８１６号に基づく優先権を主張しており、そしてその内容は、本明細書中にその全体が参考として本明細書によって援用され、そしてその内容の各々に優先権が主張される。
緒言
本明細書に開示される主題は、幹細胞（例えば、ヒト幹細胞）から誘導されたシュワン細胞前駆体およびシュワン細胞、ならびに末梢神経系（ＰＮＳ）および／もしくは中枢神経系（「ＣＮＳ」）の再生、ミエリン損傷の予防および／もしくは修復、ならびに／または末梢神経障害（例えば、糖尿病性末梢神経障害）の予防および／もしくは処置における細胞に基づく処置のためのその使用に関する。
背景
シュワン細胞（ＳＣ）は、末梢神経系（ＰＮＳ）のグリアであり、ＰＮＳ機能にとって重要である。これらは、神経堤（ＮＣ）からシュワン細胞前駆体（ＳＣＰ）中間体を介して発生する。ＳＣは、ＰＮＳの機能的調節、維持および修復において重要な役割を果たし、傷害後に神経修復を促進する優れた能力を示す（Jessenら、２０１５年；Lavdasら、２００８年）。ＳＣ欠損は、広範なヒト障害、例えば、神経鞘腫症、シャルコー・マリー・トゥース病、ギラン・バレー症候群、および糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）を含む種々の他の末梢神経障害に関与する。
真性糖尿病は、糖尿病患者の３０％（Callaghanら、２０１２年）〜６０％（Zochodne、２００７年）が罹患する末梢神経障害の主要原因である。これは、生活の質の低減ならびに罹患率および死亡率の増加を引き起こす主要な健康上の問題を提示する（La Fontaineら、２０１４年）。米国におけるＤＰＮに関連する医療費は、２００１年には１年間に４６億〜１３７億ドルと推定され、増加し続けている（Gordoisら、２００３年）。ＤＰＮの症状は多様であるが、感覚機能不全および疼痛ならびに自律神経およびＥＮＳの合併症が含まれる。
グルコースレベルを注意深くモニタリングおよび調整することによってさらなる損傷を予防するという主要な目標を追求すること以外、ＤＰＮに対する有効な処置は現在存在しない。対症的処置には、抗うつ薬、抗痙攣薬、ならびに神経障害性疼痛に対処するためのオピオイドの使用が含まれる。
ＤＰＮの病理発生には、末梢神経における細胞毒性および変性をもたらすいくつかの複雑な寄与因子が関与する可能性が高い（SimmonsおよびFeldman、２００２年）。糖尿病における高血糖、低酸素および酸化ストレスは、特に感覚神経においてＳＣの変性をもたらすという証拠がある（Eckersley、２００２年）。究極的症状はニューロンの機能不全から生じるが、感覚ニューロンまたはグリアがＤＰＮの病理発生において重要な役割を果たすかどうかは不明である。そのような機構を詳細に調べることは、疾患表現型に対する非細胞自立因子の複雑な寄与を考慮すれば、現在の動物モデルでは非常に難しい。
Jessen, K.R., Mirsky, R., and Lloyd, A.C. (2015). Schwann Cells: Development and Role in Nerve Repair. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 7, a020487. Lavdas, A.A., Papastefanaki, F., Thomaidou, D., and Matsas, R. (2008). Schwann cell transplantation for CNS repair. Curr. Med. Chem. 15, 151-160. Callaghan, B.C., Cheng, H.T., Stables, C.L., Smith, A.L., and Feldman, E.L. (2012). Diabetic neuropathy: clinical manifestations and current treatments. Lancet Neurol. 11, 521-534. Zochodne, D.W. (2007). Diabetes mellitus and the peripheral nervous system: manifestations and mechanisms. Muscle Nerve 36, 144-166. La Fontaine, J., Bhavan, K., Talal, T.K., and Lavery, L.A. (2014). Current concepts in the surgical management of acute diabetic foot infections. Foot Edinb. Scotl. 24, 123-127. Gordois, A., Scuffham, P., Shearer, A., Oglesby, A., and Tobian, J.A. (2003). The health care costs of diabetic peripheral neuropathy in the US. Diabetes care 26, 1790-1795.
これまでに確立されているｈＰＳＣ分化プロトコールによって、感覚ニューロンを系統的に入手することが可能であるが、ｈＰＳＣからＳＣを誘導する強力な方法はない。さらに、その後のＳＣ様細胞は、重要な系列マーカーの強力な発現を示さず、一般的にミエリン構造を産生することができない。したがって、ヒト幹細胞からＳＣ前駆体およびＳＣを生成するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法およびプロトコールがなおも必要である。
発明の要旨
本明細書に開示される主題は、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ分化によって幹細胞（例えば、ヒト幹細胞）から誘導したシュワン細胞前駆体およびシュワン細胞、ならびに前記細胞を作製および使用する方法に関する。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、神経堤系列細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１種または複数の活性化因子（「Ｗｎｔ活性化因子」と呼ぶ）、および線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）シグナル伝達の１種または複数の活性化因子（「ＦＧＦ活性化因子」と呼ぶ）と接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と、約５日間と約１５日間との間、または約１０日間と１５日間との間、接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、神経堤細胞である。ある特定の実施形態では、神経堤系列マーカーは、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、シュワン細胞の分化を誘導する１種または複数の分子（「ＳＣ分化誘導剤」と呼ぶ）と接触させるステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団をＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団をＳＣ分化誘導剤と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、ＳＣ分化誘導剤と約５日間と約１５日間との間、または約１０日間と１５日間との間、接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、およびＳＣ分化誘導剤と同時および／または同時並行に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供する。
ある特定の実施形態では、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法は、幹細胞の集団（「幹細胞集団」と呼ぶ）を、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団へとｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させるステップ、ならびに分化した細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、分化した細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と、約５日間と約１５日間との間、または約１０日間と１５日間との間、接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、ＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、ＳＣ分化誘導剤と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、ＳＣ分化誘導剤と約５日間と約１５日間との間、または約１０日間と１５日間との間、接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、およびＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、幹細胞の集団の、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団へのｉｎ ｖｉｔｒｏ分化は、ＳＭＡＤシグナル伝達の阻害およびＷｎｔシグナル伝達の活性化を含む。ある特定の実施形態では、幹細胞集団を１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団にｉｎ ｖｉｔｒｏ分化させることは、幹細胞集団をトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤、および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法は、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子とさらに接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、およびＳＣ分化誘導剤と同時および／または同時並行に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間にわたって接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と１４日間にわたって接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１５日間にわたって接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約５日後（例えば、約２０日以内）である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞集団とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触の約５後と約２０日後との間（例えば、約５日後、約６日後、約７日後、約８日後、約９日後、約１０日後、約１１日後、約１２日後、約１３日後、約１４日後、約１５日後、約１６日後、約１７日後、約１８日後、約１９日後、または約２０日後）である。
ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間にわたって接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１５日間にわたって接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含む。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触の少なくとも約５日後（例えば、約２０日以内）である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触の約５日後と約２０日後との間（例えば、約５日後、約６日後、約７日後、約８日後、約９日後、約１０日後、約１１日後、約１２日後、約１３日後、約１４日後、約１５日後、約１６日後、約１７日後、約１８日後、約１９日後、または約２０日後）である。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供する。ある特定の実施形態では、幹細胞の集団の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法は、幹細胞集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤、およびＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触させるステップ、ならびに細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子とさらに接触させるステップを含み、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞集団とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である。
ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含み、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である。ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時および／または同時並行に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触と同時に起こる。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、表１〜４に列挙される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、表１に列挙される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８およびＺＮＦ５０２からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、方法は、幹細胞をＳｍａｌｌ Ｍｏｔｈｅｒｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ（ＳＭＡＤ）シグナル伝達の１種または複数の阻害剤（「ＳＭＡＤ阻害剤」と呼ぶ）とさらに接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤およびＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、方法は、１種または複数のＳＣ前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を、分化した細胞の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現するシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップをさらに含む。シュワン細胞は、ミエリン形成性シュワン細胞または非ミエリン形成性シュワン細胞となり得る。
ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化した細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む。ある特定の実施形態では、条件は、分化した細胞の集団を、シュワン細胞の分化を増強する１種または複数の分子（「ＳＣ分化増強剤」と呼ぶ）と接触させることをさらに含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化した細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時および／または同時並行に接触させるステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化増強剤は、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１１日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させることを含む。
ある特定の実施形態では、条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたって接触させることをさらに含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１１日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させることを含む。
ある特定の実施形態では、方法は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のＳＣ分化誘導剤、および１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時および／または同時並行に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、分化したＳＣ前駆体細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞の集団を３Ｄスフェロイドに凝集させること、および３Ｄスフェロイドを、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることをさらに含む。ある特定の実施形態では、条件は、３Ｄスフェロイドを、１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させることをさらに含む。ある特定の実施形態では、条件は、３Ｄスフェロイドを、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時および／または同時並行に接触させることを含む。ある特定の実施形態では、方法は、３Ｄスフェロイドを浮遊培養で培養するステップをさらに含む。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーは、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＳＣマーカーは、表１〜４に記載される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣマーカーは、表２〜４に記載される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＳＣマーカーは、ＴＹＲＰ１、ＣＤ４４、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、およびＣＤＫＮ２Ａからなる群から選択される。
本明細書に開示される主題はまた、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を提供する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団は、本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏ分化方法によって幹細胞集団から誘導される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団は、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって（例えば、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間；約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間）さらに接触させるステップの後に幹細胞集団から誘導される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって（例えば、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間；約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間）さらに接触させるステップの後に幹細胞集団から誘導される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団は、幹細胞集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子とさらに接触させるステップの後に幹細胞集団から誘導され、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内（例えば、約１０日後と約１５日後との間、例えば１０日後または１１日後）である。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤とさらに接触させるステップ後に誘導され、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と細胞との最初の接触が、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内（例えば、約１０日後と約１５日後との間、例えば１０日後または１１日後）である。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団は、幹細胞集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時および／または同時並行にさらに接触させるステップの後に幹細胞集団から誘導される。
本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するそのような分化した細胞を含む組成物をさらに提供する。
本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団も提供する。ある特定の実施形態では、分化した細胞の集団は、本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏ分化方法によって、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団から誘導される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する分化した細胞の集団は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたって接触させるステップの後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団から誘導される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する分化した細胞の集団は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたってさらに接触させるステップの後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団から誘導される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する分化した細胞の集団は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のＳＣ分化誘導剤、および１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間さらに接触させるステップの後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団から誘導される。
本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現するそのような分化した細胞の集団を含む組成物をさらに提供する。
さらに、本明細書に開示される主題は、幹細胞の分化を誘導するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、および１種または複数のＦＧＦ活性化因子を含む。ある特定の実施形態では、キットは、幹細胞の、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団への分化を誘導するための説明書を含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって（例えば、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間；約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間）接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内（例えば、１０日後または１１日後）に、１種または複数のＦＧＦ活性化因子を細胞と最初に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、キットは、１種または複数のＳＣ分化誘導剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって（例えば、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間；約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間）接触させるステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時および／または同時並行に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、キットは、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤およびＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップをさらに含む。
ある特定の実施形態では、キットは、分化したシュワン細胞前駆体の集団の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書をさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１１日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と３５日間にわたって接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、分化したシュワン細胞前駆体の集団の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞の集団への成熟化を誘導するためのキットは、１種または複数のＳＣ分化増強剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、分化したシュワン細胞前駆体の集団の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたってさらに接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、分化したシュワン細胞前駆体の集団の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１１日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、分化したシュワン細胞前駆体の集団の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、分化したシュワン細胞前駆体の集団の、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書は、分化したシュワン細胞前駆体の集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時および／または同時並行に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、幹細胞の集団は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２５日後またはそれ以降に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団へと分化する。
ある特定の実施形態では、幹細胞集団は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約３５日後またはそれ以降に、シュワン細胞の集団へと分化する。
ある特定の実施形態では、分化したシュワン細胞前駆体の集団は、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する分化した細胞と、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤のうちの１つまたは両方との最初の接触から約１０日後またはそれ以降にシュワン細胞の集団へと分化する。
ある特定の実施形態では、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤は、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤はＳＢ４３１５４２である。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤は、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤はＬＤＮ１９３１８９である。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子は、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化のためにグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子は、ＣＨＩＲ９９０２１およびＷＮＴ３Ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子はＣＨＩＲ９９０２１である。
ある特定の実施形態では、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤は、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、ＦＢＳ、およびその組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、１つのシュワン細胞分化誘導剤は、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）である。
ある特定の実施形態では、ＳＣ分化増強剤は、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子は、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子はＦＧＦ２である。
ある特定の実施形態では、幹細胞はヒト幹細胞である。ある特定の実施形態では、ヒト幹細胞は、ヒト多能性幹細胞である。ある特定の実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、ヒト胚性幹細胞およびヒト誘導多能性幹細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、非ヒト幹細胞、例えば、哺乳動物幹細胞、霊長類幹細胞、または齧歯類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ等の幹細胞であるが、これらに限定されない。
本明細書に開示される主題は、末梢神経障害であるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置する方法をさらに提供する。ある特定の実施形態では、末梢神経障害は、糖尿病性末梢神経障害である。ある特定の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載される分化したシュワン細胞前駆体またはそれを含む組成物を、末梢神経障害に罹患している対象に投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載される分化したシュワン細胞またはそれを含む組成物を、末梢神経障害に罹患している対象に投与するステップを含む。
本明細書に開示される主題は、対象における末梢神経障害を処置するための、本明細書に記載される分化したシュワン細胞前駆体またはそれを含む組成物をさらに提供する。加えて、本明細書に開示される主題は、対象における末梢神経障害を処置するための、本明細書に記載される分化したシュワン細胞またはそれを含む組成物を提供する。
本明細書に開示される主題は、末梢神経障害を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載される分化したシュワン細胞前駆体またはそれを含む組成物の使用をさらに提供する。加えて、本明細書に開示される主題は、末梢神経障害を処置するための医薬の製造における、本明細書に記載される分化したシュワン細胞またはそれを含む組成物の使用を提供する。
Ａ．非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤、および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供する。
Ａ１。前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ２。前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である、Ａの先述の方法。
Ａ３。前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、Ａの先述の方法。
Ａ４。前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である、Ａの先述の方法。
Ａ５。前記細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む、Ａの先述の方法。
Ａ６。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ７。前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ８。前記細胞と前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、Ａの先述の方法。
Ａ９。前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に（concurrently）接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ１０。幹細胞の前記集団が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２５日後またはそれ以降に、前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団へと分化する、Ａの先述の方法。
Ａ１１。前記幹細胞を１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、Ａの先述の方法。
Ａ１２。前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ１３。前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、Ａの先述の方法。
Ａ１４。前記細胞とＷｎｔシグナル伝達の前記１種または複数の活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である、Ａの先述の方法。
Ａ１５。前記細胞とＷｎｔシグナル伝達の前記１種または複数の活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触と同じ日である、Ａの先述の方法。
Ａ１６。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ａの先述の方法。
Ａ１７。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、Ａの先述の方法。
Ａ１８。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ａの先述の方法。
Ａ１９。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、Ａの先述の方法。
Ａ２０。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、Ａの先述の方法。
Ａ２１。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、Ａの先述の方法。
Ａ２２。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、Ａの先述の方法。
Ａ２３。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、Ａの先述の方法。
Ａ２４。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、Ａの先述の方法。
Ａ２５。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、Ａの先述の方法。
Ａ２６。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、Ａの先述の方法。
Ａ２７。前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、Ａの先述の方法。
Ａ２８。前記幹細胞がヒト幹細胞である、Ａの先述の方法。
Ａ２９。前記ヒト幹細胞が、ヒト胚性幹細胞、ヒト誘導多能性幹細胞、ヒト単為生殖幹細胞、始原胚細胞様多能性幹細胞、エピブラスト幹細胞、Ｆクラス多能性幹細胞からなる群から選択される、Ａの先述の方法。
Ａ３０。分化した細胞の前記集団を、前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３１。前記分化した細胞のシュワン細胞の前記集団への成熟化を支持する前記条件が、前記分化した細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３２。分化したＳＣ前駆体細胞の集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３３。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３４。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３５。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させるステップをさらに含む、Ａの先述の方法。
Ａ３６。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３７。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３８。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ３９。分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させるステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ４０。前記分化した細胞のシュワン細胞の前記集団への成熟化を支持する前記条件が、前記分化した細胞を１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させることを含む、Ａの先述の方法。
Ａ４１。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、Ａの先述の方法。
Ａ４２。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、Ａの先述の方法。
Ａ４３。分化した細胞の前記集団を３Ｄスフェロイドへと凝集させるステップ；ならびに前記３Ｄスフェロイドを、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させステップを含む、Ａの先述の方法。
Ａ４４。前記３Ｄスフェロイドを接着培養で培養するステップをさらに含む、Ａの先述の方法。
Ａ４５。シュワン細胞の前記集団が、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する、Ａの先述の方法。
Ａ４６。前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択されるシュワン細胞マーカーからなる群から選択される、Ａの先述の方法。
Ｂ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の主題は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が
幹細胞の集団を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに
前記細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップ
の後に幹細胞の集団から誘導される、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を提供する。
Ｂ１。前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２。前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ３。前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ４。前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ５。前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤とさらに接触させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ６。前記細胞を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ７。前記細胞と前記前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ８。前記細胞を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時にさらに接触させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ９。幹細胞の前記集団が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２５日後またはそれ以降に、前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団へと分化する、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１０。前記幹細胞を、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤とさらに接触させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１１。前記幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１２。前記細胞とシグナル伝達の前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞の集団とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１３。前記細胞とシグナル伝達の前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞の集団とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１４。前記幹細胞の集団とシグナル伝達の前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触と同じ日である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１５。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１６。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１７。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１８。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ１９。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２０。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２１。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２２。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２３。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２４。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２５。前記１種のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２６。前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２７。前記幹細胞がヒト幹細胞である、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｂ２８。前記ヒト幹細胞が、ヒト胚性幹細胞、ヒト誘導多能性幹細胞、ヒト単為生殖幹細胞、始原胚細胞様多能性幹細胞、エピブラスト幹細胞およびＦクラス多能性幹細胞からなる群から選択される、Ｂの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する先述の細胞の集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させた後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する先述の細胞の集団から誘導される、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を提供する。
Ｃ１．前記分化した細胞の集団が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する先述の細胞の集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させた後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団から誘導される、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ２。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ３。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ４。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記先述の集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させる、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ５。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記先述の集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させる、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ６。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記先述の集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させる、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ７。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記先述の集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたって接触させる、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ８。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記先述の集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたって接触させる、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ９。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記先述の集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させる、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｃ１０。前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択されるシュワン細胞マーカーからなる群から選択される、Ｃの先述の分化した細胞の集団。
Ｄ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物を提供する。
Ｅ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、シュワン細胞の先述の集団を含む組成物を提供する。
Ｆ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置する方法であって、シュワン細胞関連障害に罹患している対象に有効量の以下：
（ａ）分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団；
（ｂ）分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物；
（ｃ）シュワン細胞の先述の集団；および
（ｄ）シュワン細胞の先述の集団を含む組成物
のうちの１つを投与するステップを含む、方法を提供する。
Ｆ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｆの先述の方法。
Ｆ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｆの先述の方法。
Ｇ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を提供する。
Ｇ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｇの分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団。
Ｇ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｇの分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団。
Ｈ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物を提供する。
Ｈ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｈの先述の組成物。
Ｈ２。前記末梢神経障害が、糖尿病性末梢神経障害である、Ｈの分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団。
Ｉ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するためのシュワン細胞の先述の集団を提供する。
Ｉ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｉのシュワン細胞の先述の集団。
Ｉ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｉのシュワン細胞の先述の集団。
Ｊ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するためのシュワン細胞の先述の集団を含む組成物を提供する。
Ｊ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｊの先述の組成物。
Ｊ２。前記末梢神経障害が、糖尿病性末梢神経障害である、Ｊの先述の組成物。
Ｋ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造における分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団の使用を提供する。
Ｋ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｋの先述の使用。
Ｋ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｋの先述の使用。
Ｌ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造における分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物の使用を提供する。
Ｌ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｌの先述の使用。
Ｌ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｌの先述の使用。
Ｍ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造におけるシュワン細胞の先述の集団の使用を提供する。
Ｍ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｍの先述の使用。
Ｍ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｍの先述の使用。
Ｎ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造におけるシュワン細胞の先述の集団を含む組成物の使用を提供する。
Ｎ１。前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、Ｎの先述の使用。
Ｎ２。前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、Ｎの先述の使用。
Ｐ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、幹細胞の分化を誘導するためのキットであって、
ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤
１種または複数のＷｎｔ活性化因子、および
１種または複数のＦＧＦ活性化因子
を含む、キットを提供する。
Ｐ１。前記幹細胞の、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団への分化を誘導するための説明書を含み、前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ２。前記説明書が、前記細胞を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３。前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞を前記１種または複数の１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最初に接触させることから約２０日以内である、Ｐの先述のキット。
Ｐ４。前記細胞と前記１種または複数の１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、Ｐの先述のキット。
Ｐ５。前記細胞と、前記１種または複数の１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記細胞と、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から約１１日後である、Ｐの先述のキット。
Ｐ６。１種または複数のＳＣ分化誘導剤をさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ７。前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ８。前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたってさらに接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ９。前記細胞と前記１種または複数の１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、Ｐの先述のキット。
Ｐ１０。前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１１。１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤をさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１２。前記説明書が、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１３。前記説明書が、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１４。前記説明書が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内に、前記細胞を前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子と最初に接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１５。前記説明書が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後に、前記細胞を前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子と最初に接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１６。前記説明書が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との前記最初の接触と同じ日に、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤と最初に接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ１７。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ｐの先述のキット。
Ｐ１８。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、Ｐの先述のキット。
Ｐ１９。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ｐの先述のキット。
Ｐ２０。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、Ｐの先述のキット。
Ｐ２１。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、Ｐの先述のキット。
Ｐ２２。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、Ｐの先述のキット。
Ｐ２３。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、Ｐの先述のキット。
Ｐ２４。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、Ｐの先述のキット。
Ｐ２５。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、Ｐの先述のキット。
Ｐ２６。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、Ｐの先述のキット。
Ｐ２７。前記１種のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、Ｐの先述のキット。
Ｐ２８。１種または複数のＳＣ分化増強剤、および前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書をさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ２９。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、Ｐの先述のキット。
Ｐ３０。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、Ｐの先述のキット。
Ｐ３１。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、前記分化した細胞を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３２。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３３。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３４。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３５。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させるステップをさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３６。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３７。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１４日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３８。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｐの先述のキット。
Ｐ３９。前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させるステップを含む、Ｐの先述のキット。
Ｑ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞の集団を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含み、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供する。
Ｑ１。前記細胞と、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、Ｑの先述の方法。
Ｑ２。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させる、ステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、Ｑの先述の方法。
Ｑ３。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と同時に少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞と、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、Ｑの先述の方法。
Ｒ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップの後に幹細胞の集団から誘導され、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤および前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を提供する。
Ｒ１。前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、Ｒの先述の分化した細胞の集団。
Ｒ２。前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、Ｒの先述の分化した細胞の集団。
Ｒ３。前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と同時に少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、Ｑの先述の方法。
Ｓ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、神経堤系列細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と接触させるステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を提供する。
Ｓ１。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ３。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約５日間と約１５日間との間、接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ４。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ５。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ６。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ７。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と最長約３０日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ８。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ９。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップをさらに含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ１０。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、Ｓの先述の方法。
Ｓ１１。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、Ｓの先述の方法。
Ｓ１２。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、Ｓの先述の方法。
Ｓ１３。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、Ｓの先述の方法。
Ｓ１４。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、Ｓの先述の方法。
Ｓ１５。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、Ｓの先述の方法。
Ｓ１６。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、Ｓの先述の方法。
Ｓ１７。前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、Ｓの先述の方法。
Ｓ１８。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ１９。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２０。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２１。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２２。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２３。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させることをさらに含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２４。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２５。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約１０日間にわたってさらに接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２６。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３５日間にわたってさらに接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２７。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させるステップを含む、Ｓの先述の方法。
Ｓ２８。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、Ｓの先述の方法。
Ｓ２９。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、Ｓの先述の方法。
Ｓ３０。シュワン細胞の前記集団が、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する、Ｓの先述の方法。
Ｓ３１。前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択されるシュワン細胞マーカーからなる群から選択される、Ｓの先述の方法。
Ｓ３２。前記神経堤系列マーカーが、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される、Ｓの先述の方法。
Ｔ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、最長約３０日間、または約５日間と約１５日間との間、接触させた後に神経堤系列細胞の集団から誘導される、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を提供する。
Ｔ１。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させる、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ２。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤とさらに接触させる、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ３。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、最長約３０日間、または約５日間と約１５日間との間、さらに接触させる、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ４。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたってさらに接触させる、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ５。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に（simultaneously）接触させる、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ６。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＷｎｔシグナル伝達を活性化するためにグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ７。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ８。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ９。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ１０。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ１１。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ１２。前記１種のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ１３。前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、Ｔの先述の分化した細胞の集団。
Ｔ１４。前記神経堤系列マーカーが、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される、Ｔの先述の方法。
Ｕ。ある特定の実施形態では、幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法は、幹細胞の集団を１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団にｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させるステップ、および１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、分化した細胞を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と接触させるステップを含む。
Ｕ１。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ３。前記分化した細胞を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約５日と約１５日間との間、または約１０日間と１５日間との間、接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ４。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ５。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ６。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ７。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と最長約３０日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ８。１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させるステップをさらに含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ９。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ１０。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達を活性化するためにグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、Ｕの先述の方法。
Ｕ１１。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、Ｕの先述の方法。
Ｕ１２。前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、Ｕの先述の方法。
Ｕ１３。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、Ｕの先述の方法。
Ｕ１４。前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、Ｕの先述の方法。
Ｕ１５。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、Ｕの先述の方法。
Ｕ１６。前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、Ｕの先述の方法。
Ｕ１７。前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、Ｕの先述の方法。
Ｕ１８。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ１９。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２０。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２１。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２２。１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２３。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させることを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２４。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させることを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２５。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたってさらに接触させることを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２６。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたってさらに接触させることを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２７。前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に（simultaneously）接触させることを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ２８。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、Ｕの先述の方法。
Ｕ２９。前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、Ｕの先述の方法。
Ｕ３０。シュワン細胞の前記集団が１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する、Ｕの先述の方法。
Ｕ３１。前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＧＦＡＰ、ＥＲＢＢ３、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される、Ｕの先述の方法。
Ｕ３２。前記幹細胞集団の、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団へのｉｎ ｖｉｔｒｏ分化が、ＳＭＡＤシグナル伝達を阻害するステップおよびＷｎｔシグナル伝達を活性化するステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ３３。前記幹細胞集団の、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団へのｉｎ ｖｉｔｒｏ分化が、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ３４。幹細胞の前記集団を１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ３５。幹細胞の前記集団を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む、Ｕの先述の方法。
Ｕ３６。前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、Ｕの先述の方法。
Ｕ３７。前記細胞とＷｎｔシグナル伝達の前記１種または複数の活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である、Ｕの先述の方法。
Ｕ３８。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ｕの先述の方法。
Ｕ３９。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、Ｕの先述の方法。
Ｕ４０。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、Ｕの先述の方法。
Ｕ４１。前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、Ｕの先述の方法。
Ｕ４２。前記神経堤系列マーカーが、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される、Ｕの先述の方法。
Ｖ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生する方法であって、対象に有効量の以下：
（ａ）分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団；
（ｂ）分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物；
（ｃ）シュワン細胞の先述の集団；および
（ｄ）シュワン細胞の先述の集団を含む組成物
のうちの１つを投与するステップを含む、方法を提供する。
Ｗ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を提供する。
Ｘ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物を提供する。
Ｙ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、シュワン細胞の先述の集団を提供する。
Ｚ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、シュワン細胞の先述の集団を含む組成物を提供する。
ＡＡ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団の使用を提供する。
ＡＢ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物の使用を提供する。
ＡＣ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、シュワン細胞の先述の集団の使用を提供する。
ＡＤ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、シュワン細胞の先述の集団を含む組成物の使用を提供する。
ＡＥ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置する方法であって、対象に有効量の以下：
（ａ）分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団；
（ｂ）分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物；
（ｃ）シュワン細胞の先述の集団；および
（ｄ）シュワン細胞の先述の集団を含む組成物
のうちの１つを投与するステップを含む、方法を提供する。
ＡＦ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を提供する。
ＡＧ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物を提供する。
ＡＨ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、シュワン細胞の先述の集団を提供する。
ＡＩ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、シュワン細胞の先述の集団を含む組成物を提供する。
ＡＪ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団の使用を提供する。
ＡＫ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、分化したシュワン細胞前駆体の先述の集団を含む組成物の使用を提供する。
ＡＬ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、シュワン細胞の先述の集団の使用を提供する。
ＡＭ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、シュワン細胞の先述の集団を含む組成物の使用を提供する。
ＡＵ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した細胞の集団を含む組成物であって、細胞の集団の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％）が、１種または複数のＳＣ前駆体マーカーを発現し、細胞の集団の約１５％未満（例えば、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、または約０．１％未満）が、幹細胞マーカー、ＣＮＳマーカー、神経細胞マーカー、および間葉前駆体マーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物を提供する。
ＡＵ１。前記１つまたは複数のＳＣ前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、ＡＵの先述の組成物。
ＡＵ２。前記幹細胞マーカーが、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＳＥＡ４、およびＳＳＥＡ３からなる群から選択される、ＡＵの先述の組成物。ＮＡＵ１。
ＡＵ３。前記ＣＮＳマーカーが、ＰＡＸ６、ＮＥＳＴＩＮ、およびＳＯＸ１からなる群から選択される、ＡＵの先述の組成物。
ＡＵ４。前記神経細胞マーカーが、ＴＵＪ１、ＭＡＰ２、ＮＦＨ、ＢＲＮ３Ａ、ＩＳＬ１、ＴＨ、ＡＳＣＬ１、ＣＨＡＴ、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＨＯＸ２Ａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、およびＴＲＫＣからなる群から選択される、ＡＵの先述の組成物。
ＡＵ５。前記間葉前駆体マーカーが、ＳＭＡおよびＣＤ７３からなる群から選択される、ＡＵの先述の組成物。
ＡＶ。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した細胞の集団を含む組成物であって、細胞の集団の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％）が、１種または複数のＳＣマーカーを発現し、細胞の約１５％未満（例えば、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、または約０．１％未満）が、ＳＣ前駆体マーカー、幹細胞マーカー、ＣＮＳマーカー、神経細胞マーカー、および間葉前駆体マーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物を提供する。
ＡＶ１。前記１つまたは複数のＳＣマーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＧＦＡＰ、ＥＲＢＢ３ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される、ＡＶの先述の組成物。
ＡＶ２。前記ＳＣ前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、ＡＶの先述の組成物。
ＡＶ３。前記幹細胞マーカーが、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＳＥＡ４、およびＳＳＥＡ３からなる群から選択される、ＡＶの先述の組成物。ＮＡＵ１。
ＡＶ４。前記ＣＮＳマーカーが、ＰＡＸ６、ＮＥＳＴＩＮ、およびＳＯＸ１からなる群から選択される、ＡＵの先述の組成物。
ＡＶ５。前記神経細胞マーカーが、ＴＵＪ１、ＭＡＰ２、ＮＦＨ、ＢＲＮ３Ａ、ＩＳＬ１、ＴＨ、ＡＳＣＬ１、ＣＨＡＴ、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＨＯＸ２Ａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、およびＴＲＫＣからなる群から選択される、ＡＶの先述の組成物。
ＡＶ６。前記間葉前駆体マーカーが、ＳＭＡおよびＣＤ７３からなる群から選択される、ＡＶの先述の組成物。
４．図面の簡単な説明
図１Ａ〜１Ｉは、ｈＥＳＣからのＳＣの誘導を示す図である。（１Ａ）シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を誘導するためのプロトコール（１１〜３５日目）の概略図表示。（１Ｂ）分化の１１日目、２５日目および３５日目におけるＳＯＸ１０：：ＧＦＰ発現。（１Ｃ、１Ｄ）シュワン細胞の分化およびミエリン形成（１Ｃ）ならびに神経の相互作用および支持（１Ｄ）に関与するシュワン系列マーカーのパネルについてのｑＲＴ−ＰＣＲ。ＳＯＸ１０についての、選別されていないおよびＣＤ４９Ｄ選別された分化したＮＣ細胞の免疫蛍光。（１Ｅ）６０日目における、シュワン系列マーカーについてのｈＥＳＣ由来ＳＣの代表的免疫蛍光イメージ。Ｆ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。（１Ｇ）ＣＮＳ前駆体と比較した、ＣＤ４９ｄ精製されたＮＣ、ＣＤ４９ｄ精製されたＳＣＰ、ヒト初代シュワン細胞、ならびに分化の５０日目および１００日目におけるＣＤ９８精製されたｈＥＳＣ由来ＳＣの主成分分析。（１Ｈ）２５日目のＳＣＰおよび１００日目のＳＣにおいて有意に上方調節された、上位１０（通常の書体）および選択されたさらなる（太字の書体）遺伝子。（１Ｉ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。スケールバー＝Ｂの左および中央のパネルでは１００μｍ、Ｂの右パネルおよびＥでは２５μｍ。 図１Ａ〜１Ｉは、ｈＥＳＣからのＳＣの誘導を示す図である。（１Ａ）シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を誘導するためのプロトコール（１１〜３５日目）の概略図表示。（１Ｂ）分化の１１日目、２５日目および３５日目におけるＳＯＸ１０：：ＧＦＰ発現。（１Ｃ、１Ｄ）シュワン細胞の分化およびミエリン形成（１Ｃ）ならびに神経の相互作用および支持（１Ｄ）に関与するシュワン系列マーカーのパネルについてのｑＲＴ−ＰＣＲ。ＳＯＸ１０についての、選別されていないおよびＣＤ４９Ｄ選別された分化したＮＣ細胞の免疫蛍光。（１Ｅ）６０日目における、シュワン系列マーカーについてのｈＥＳＣ由来ＳＣの代表的免疫蛍光イメージ。Ｆ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。（１Ｇ）ＣＮＳ前駆体と比較した、ＣＤ４９ｄ精製されたＮＣ、ＣＤ４９ｄ精製されたＳＣＰ、ヒト初代シュワン細胞、ならびに分化の５０日目および１００日目におけるＣＤ９８精製されたｈＥＳＣ由来ＳＣの主成分分析。（１Ｈ）２５日目のＳＣＰおよび１００日目のＳＣにおいて有意に上方調節された、上位１０（通常の書体）および選択されたさらなる（太字の書体）遺伝子。（１Ｉ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。スケールバー＝Ｂの左および中央のパネルでは１００μｍ、Ｂの右パネルおよびＥでは２５μｍ。 図１Ａ〜１Ｉは、ｈＥＳＣからのＳＣの誘導を示す図である。（１Ａ）シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を誘導するためのプロトコール（１１〜３５日目）の概略図表示。（１Ｂ）分化の１１日目、２５日目および３５日目におけるＳＯＸ１０：：ＧＦＰ発現。（１Ｃ、１Ｄ）シュワン細胞の分化およびミエリン形成（１Ｃ）ならびに神経の相互作用および支持（１Ｄ）に関与するシュワン系列マーカーのパネルについてのｑＲＴ−ＰＣＲ。ＳＯＸ１０についての、選別されていないおよびＣＤ４９Ｄ選別された分化したＮＣ細胞の免疫蛍光。（１Ｅ）６０日目における、シュワン系列マーカーについてのｈＥＳＣ由来ＳＣの代表的免疫蛍光イメージ。Ｆ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。（１Ｇ）ＣＮＳ前駆体と比較した、ＣＤ４９ｄ精製されたＮＣ、ＣＤ４９ｄ精製されたＳＣＰ、ヒト初代シュワン細胞、ならびに分化の５０日目および１００日目におけるＣＤ９８精製されたｈＥＳＣ由来ＳＣの主成分分析。（１Ｈ）２５日目のＳＣＰおよび１００日目のＳＣにおいて有意に上方調節された、上位１０（通常の書体）および選択されたさらなる（太字の書体）遺伝子。（１Ｉ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。スケールバー＝Ｂの左および中央のパネルでは１００μｍ、Ｂの右パネルおよびＥでは２５μｍ。 図１Ａ〜１Ｉは、ｈＥＳＣからのＳＣの誘導を示す図である。（１Ａ）シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を誘導するためのプロトコール（１１〜３５日目）の概略図表示。（１Ｂ）分化の１１日目、２５日目および３５日目におけるＳＯＸ１０：：ＧＦＰ発現。（１Ｃ、１Ｄ）シュワン細胞の分化およびミエリン形成（１Ｃ）ならびに神経の相互作用および支持（１Ｄ）に関与するシュワン系列マーカーのパネルについてのｑＲＴ−ＰＣＲ。ＳＯＸ１０についての、選別されていないおよびＣＤ４９Ｄ選別された分化したＮＣ細胞の免疫蛍光。（１Ｅ）６０日目における、シュワン系列マーカーについてのｈＥＳＣ由来ＳＣの代表的免疫蛍光イメージ。Ｆ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。（１Ｇ）ＣＮＳ前駆体と比較した、ＣＤ４９ｄ精製されたＮＣ、ＣＤ４９ｄ精製されたＳＣＰ、ヒト初代シュワン細胞、ならびに分化の５０日目および１００日目におけるＣＤ９８精製されたｈＥＳＣ由来ＳＣの主成分分析。（１Ｈ）２５日目のＳＣＰおよび１００日目のＳＣにおいて有意に上方調節された、上位１０（通常の書体）および選択されたさらなる（太字の書体）遺伝子。（１Ｉ）（１Ｅ）中のマーカーの定量化。スケールバー＝Ｂの左および中央のパネルでは１００μｍ、Ｂの右パネルおよびＥでは２５μｍ。
図２Ａ〜２Ｅは、ｈＥＳＣ由来感覚ニューロンに対してミエリン形成するｈＥＳＣ−ＳＣおよびｈＥＳＣ由来シュワン細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ機能的特徴付けである。（２Ａ）ｈＥＳＣ由来感覚または運動ニューロンとのｈＥＳＣ−ＳＣの同時培養の略図。（２Ｂ）ｈＥＳＣ−ＳＣとｈＥＳＣ感覚ニューロンとの物理的会合。（２Ｃ）透過型電子顕微鏡法により、ｈＥＳＣ−ＳＣとｈＥＳＣ感覚ニューロンとの長期間同時培養（８０週間のＳＣ分化に加えて４カ月間の同時培養）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏミエリン形成の証拠が示される。（２Ｄ）ｈＥＳＣ−ＳＣとｈＥＳＣ運動ニューロンとの物理的会合。（２Ｅ）ｈＥＳＣ−ＳＣおよびｈＥＳＣ運動ニューロンの同時培養の同時培養後４０日目および７０日目でのカルシウムイメージングの定量。スケールバー＝２Ｂの左のパネルでは１００μｍ、２Ｂの右のパネルでは２０μｍ、および２Ｃでは０．２μｍ。
図３Ａ〜３Ｅは、ｈＥＳＣ−ＳＣのｉｎ ｖｉｖｏ機能的特徴付けである。（３Ａ）成体ラット座骨神経におけるｈＥＳＣ−ＳＣ移植の略図。ＲＦＰ＋ｈＰＳＣ由来シュワン細胞を、神経挫滅後損傷部位に注射した（成体のシクロスポリン−Ａ処置ＳＤラット）。（３Ｂ）移植の８週間後でのヒト特異的核マーカーＳＣ１０１に関する移植した座骨神経の免疫蛍光染色。（３Ｃ）裂いた神経線維のＲＦＰ（移植したヒト細胞）、軸索マーカー（ＮＦＨ）、およびＤＡＰＩに関する共焦点分析。（３Ｄ）裂いた神経線維のＲＦＰ（移植したヒト細胞）、ミエリンマーカーＭＡＧ（上のパネル）、およびＰ０（下のパネル）、およびＤＡＰＩに関する共焦点分析。（３Ｅ）裂いた神経線維のＲＦＰおよび節マーカーＫｖ１．２（Ｋ＋チャネル、矢印の先、上のパネル）、ＣＡＳＰＲ（矢印の先、中央のパネル）、汎Ｎａ＋（ナトリウムチャネル、矢印の先、下のパネル）に関する共焦点分析。スケールバー＝Ｂでは１００μｍ、ＣおよびＤでは２０μｍ、ならびにＥでは１０μｍ。
図４Ａ〜４Ｂは、ｈＥＳＣ由来ＳＣＰおよびＳＣ系列の特徴付けを示す図である。（４Ａ）ｈＥＳＣ由来ＮＣ（１１日目）およびＳＣＰ（２５日目）におけるＳＯＸ１０：：ＧＦＰのフローサイトメトリー分析。（４Ｂ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ分化の間の異なる時点におけるｈＥＳＣ由来ＳＣにおけるＧＦＡＰのフローサイトメトリー分析。
図５Ａ〜５Ｃは、抗体スクリーニングがヒトＳＣについての新規表面マーカーを同定することを示す図である。（５Ａ）抗体スクリーニングパラダイムの概略図表示。（５Ｂ）一次スクリーニングは、ｈＥＳＣ−ＳＣについての新規表面マーカーを同定する。（５Ｃ）ＳＣ分化の異なる段階における表面マーカー発現の免疫細胞化学およびフローサイトメトリーベースの検証。 図５Ａ〜５Ｃは、抗体スクリーニングがヒトＳＣについての新規表面マーカーを同定することを示す図である。（５Ａ）抗体スクリーニングパラダイムの概略図表示。（５Ｂ）一次スクリーニングは、ｈＥＳＣ−ＳＣについての新規表面マーカーを同定する。（５Ｃ）ＳＣ分化の異なる段階における表面マーカー発現の免疫細胞化学およびフローサイトメトリーベースの検証。 図５Ａ〜５Ｃは、抗体スクリーニングがヒトＳＣについての新規表面マーカーを同定することを示す図である。（５Ａ）抗体スクリーニングパラダイムの概略図表示。（５Ｂ）一次スクリーニングは、ｈＥＳＣ−ＳＣについての新規表面マーカーを同定する。（５Ｃ）ＳＣ分化の異なる段階における表面マーカー発現の免疫細胞化学およびフローサイトメトリーベースの検証。
発明の詳細な説明
本明細書に開示される主題は、幹細胞（例えば、ヒト幹細胞）の、ｉｎ ｖｉｔｒｏでシュワン細胞（「ＳＣ」）へとさらに誘導することができる１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞（すなわち、シュワン細胞前駆体「ＳＣ前駆体」）への分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法、そのような方法によって産生された細胞（ＳＣ前駆体およびＳＣ）、およびそのような細胞を含む組成物に関する。ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは処置のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害、例えば末梢神経障害（例えば、糖尿病性末梢神経障害）の予防および／もしくは処置のための、ならびにＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生、ミエリン損傷の予防および／もしくは処置、および／またはシュワン細胞関連障害、例えば末梢神経障害（例えば、糖尿病性末梢神経障害）の予防および／もしくは処置に適した化合物をスクリーニングするためのそのような細胞の使用も提供される。
本開示を制限するためではなく明快にする目的のため、詳細な説明を以下のセクションに分ける：
１．定義
２．幹細胞を分化させる方法
３．シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を含む組成物
４．処置方法
５．キット
１．定義
本明細書で使用される用語は一般に、本発明の文脈内で、各用語が使用される具体的な文脈において、当該分野におけるその通常の意味を有する。ある特定の用語は、本発明の組成物および方法ならびにそれらをどのように作製および使用するかを記述するにあたり実務者にさらなるガイダンスを提供するために、以下または本明細書の他の箇所で議論される。
用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定され、その値がどのように測定または決定されるか、即ち、測定系の限界に一部依存する、特定の値について許容される誤差範囲内を意味する。例えば、「約」は、当該分野における実務に従い、３標準偏差以内または３標準偏差よりも大きいことを意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の最大で２０％、例えば、最大で１０％、最大で５％または最大で１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に、生物システムまたはプロセスに関して、この用語は、ある値の１オーダー以内、例えば、５分の１〜５倍以内または２分の１〜２倍以内を意味し得る。
本明細書で使用される場合、「シグナル伝達タンパク質」に関して、用語「シグナル伝達」とは、膜受容体タンパク質へのリガンド結合または一部の他の刺激によって活性化されるまたは他の方法で影響されるタンパク質を指す。シグナル伝達タンパク質の例には、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＳＭＡＤ、ベータ−カテニン（catnin）を含むウイングレス（Ｗｎｔ）複合タンパク質、ＮＯＴＣＨ、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）、アクチビン、ノーダルおよびグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３Ｐ）タンパク質が含まれるがこれらに限定されない。多くの細胞表面受容体または内部受容体タンパク質について、リガンド−受容体相互作用は、細胞の応答と直接関連するわけではない。リガンド活性化された受容体は、細胞の挙動に対するリガンドの究極的な生理学的影響が生じる前に、細胞の内側の他のタンパク質と最初に相互作用し得る。しばしば、いくつかの相互作用性細胞タンパク質の鎖の挙動は、受容体の活性化または阻害後に変更される。受容体活性化によって誘導される細胞変化のセット全体は、シグナル伝達機構またはシグナル伝達経路と呼ばれる。
本明細書で使用される場合、用語「シグナル」とは、細胞の構造および機能における変化を制御する内部および外部の因子を指す。これらは、性質が化学的または物理的であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「リガンド」とは、受容体に結合する分子およびタンパク質、例えば、ＴＦＧβ、アクチビン、ノーダル、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）などを指す。
「阻害剤」とは、本明細書で使用される場合、分子または経路のシグナル伝達機能を妨害する（例えば、低減、減少、抑制、排除または遮断する）化合物または分子（例えば、小分子、ペプチド、ペプチド模倣物、天然化合物、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、アプタマーまたは抗体）を指す。阻害剤は、一例として、ＳＭＡＤシグナル伝達に直接接触すること、ＳＭＡＤ ｍＲＮＡに接触すること、ＳＭＡＤのコンフォメーション変化を引き起こすこと、ＳＭＡＤタンパク質レベルを減少させること、またはＳＭＡＤとシグナル伝達パートナー（例えば、本明細書に記載されるものが含まれる）との相互作用を妨害すること、およびＳＭＡＤ標的遺伝子（例えば、本明細書に記載されるもの）の発現に影響を与えることを介して、指定されたタンパク質（シグナル伝達分子、指定されたシグナル伝達分子に関与する任意の分子、指定された関連する分子、例えば、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β））（例えば、本明細書に記載されるシグナル伝達分子が含まれるがこれらに限定されない）の任意の活性を変化させる任意の化合物または分子であり得る。阻害剤には、上流シグナル伝達分子（例えば、細胞外ドメイン内）を妨害することによって、ＳＭＡＤの生物活性を間接的に調節する分子も含まれ、シグナル伝達分子および効果の例には、骨形態形成タンパク質を隔離し、ＡＬＫ受容体１、２、３および６の活性化を阻害し、それによって下流ＳＭＡＤ活性化を防止するノギンが含まれる。同様に、コーディン、ケルベロス、フォリスタチンも同様に、ＳＭＡＤシグナル伝達の細胞外活性化因子を隔離する。膜貫通タンパク質であるバンビ（Bambi）もまた、細胞外ＴＧＦｂシグナル伝達分子を隔離する偽受容体として作用する。アクチビン、ノーダル、ＴＧＦｂおよびＢＭＰを遮断する抗体は、ＳＭＡＤシグナル伝達の細胞外活性化因子を中和するためなどの使用について企図される。阻害剤は、指定された分子の阻害を次に引き起こす、指定されたシグナル伝達分子から上流の分子に結合しそれに影響を与えることによって誘導される阻害に加えて、競合的阻害（別の公知の結合化合物の結合を除外または低減させる様式で活性部位に結合する）およびアロステリック阻害（そのタンパク質の活性部位への化合物の結合を妨害する様式でタンパク質コンフォメーションを変化させる様式でタンパク質に結合する）の観点から記載される。阻害剤は、シグナル伝達標的を実際に接触させることによってシグナル伝達標的またはシグナル伝達標的経路を阻害する「直接的阻害剤」であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「シュワン細胞前駆体」とは、本明細書に開示されるシュワン細胞前駆体マーカーが含まれるがこれらに限定されない１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞を指す。適切な成熟化条件下で、シュワン細胞前駆体はシュワン細胞になり得る。
本明細書で使用される場合、用語「シュワン細胞」とは、本明細書に開示されるシュワン細胞マーカーが含まれるがこれらに限定されない１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞を指す。シュワン細胞は、ミエリン形成性シュワン細胞または非ミエリン形成性シュワン細胞であり得る。ある特定の実施形態では、シュワン細胞は、末梢神経系においてニューロンの軸索を維持および再生することが可能である（例えば、健康な軸索の維持）。ある特定の実施形態では、シュワン細胞は、ミエリン鞘を形成することが可能である。ある特定の実施形態では、シュワン細胞は、Ｒｅｍａｋバンドル（Remak bundle）を形成することが可能である。
「活性化因子」とは、本明細書で使用される場合、分子または経路のシグナル伝達機能、例えば、Ｗｎｔシグナル伝達またはＦＧＦシグナル伝達を増加させる、誘導する、刺激する、活性化する、促進する、またはその活性化を増強する化合物を指す。
本明細書で使用される場合、用語「誘導体」とは、類似のコア構造を有する化学化合物を指す。
本明細書で使用される場合、用語「細胞の集団」または「細胞集団」とは、少なくとも２つの細胞の群を指す。非限定的な例では、細胞集団は、少なくとも約１０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３００、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、少なくとも約１０００個の細胞を含み得る。集団は、１つの細胞型を含む純粋な集団、例えば、ＳＣ前駆体の集団、ＳＣの集団、または未分化幹細胞の集団であり得る。あるいは、集団は、１つよりも多い細胞型、例えば、混合細胞集団、例えば、ＳＣ前駆体およびＳＣの混合集団を含み得る。
本明細書で使用される場合、用語「幹細胞」とは、培養物中で不確定の期間にわたって分裂し、特殊化された細胞を生じる能力を有する細胞を指す。ヒト幹細胞とは、ヒト由来の幹細胞を指す。
本明細書で使用される場合、用語「胚性幹細胞」とは、着床前段階の胚から誘導され、培養物中で長期間にわたって分化せずに分裂することが可能であり、３つの主な胚葉の細胞および組織へと発生することが公知の、原始的（未分化）細胞を指す。ヒト胚性幹細胞とは、ヒト由来の胚性幹細胞を指す。本明細書で使用される場合、用語「ヒト胚性幹細胞」または「ｈＥＳＣ」とは、胚盤胞段階までおよび胚盤胞段階を含む初期段階のヒト胚から誘導され、培養物中で長期間にわたって分化せずに分裂することが可能であり、３つの主な胚葉の細胞および組織へと発生することが公知の、多能性幹細胞（「ＰＳＣ」）の１つの型を指す。
本明細書で使用される場合、用語「胚性幹細胞系」とは、最大で数日間、数ヶ月〜数年間にわたって分化せずに増殖することを可能にするｉｎ ｖｉｔｒｏ条件下で培養された胚性幹細胞の集団を指す。
本明細書で使用される場合、用語「全能性」とは、身体の全ての細胞型＋胎盤などの胚外組織を構成する全ての細胞型を生じる能力を指す。
本明細書で使用される場合、用語「多分化能性」とは、身体の１つよりも多い細胞型へと発生する能力を指す。
本明細書で使用される場合、用語「多能性」とは、内胚葉、中胚葉および外胚葉を含む生物の３つの発生的胚葉へと発生する能力を指す。
本明細書で使用される場合、用語「誘導多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」とは、体細胞、例えば、ＣＩ４、Ｃ７２などの中へのある特定の胚性遺伝子（例えば、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２およびＫＬＦ４導入遺伝子）（例えば、参照によって本明細書に組み込まれるTakahashiおよびYamanaka Cell １２６巻、６６３〜６７６頁（２００６年）を参照のこと）の導入によって形成される、胚性幹細胞と類似の多能性幹細胞の１つの型を指す。
本明細書で使用される場合、用語「体細胞」とは、配偶子（卵または精子）以外の身体中の任意の細胞を指し、「成体」細胞と呼ばれる場合がある。
本明細書で使用される場合、用語「体性（成体）幹細胞」とは、自己再生（実験室中で）および分化の両方について限定的な能力を有する、多くの臓器および分化した組織において見出される比較的稀な未分化細胞を指す。かかる細胞は、その分化能が異なっているが、起源の臓器中の細胞型に通常は限定される。
本明細書で使用される場合、用語「ニューロン」とは、神経系の主要な機能的単位である神経細胞を指す。ニューロンは、細胞体およびその突起、即ち軸索、および１つまたは複数の樹状突起からなる。ニューロンは、シナプスにおいて神経伝達物質を放出することによって、他のニューロンまたは細胞に情報を伝達する。
本明細書で使用される場合、用語「増殖」とは、細胞数の増加を指す。
本明細書で使用される場合、用語「未分化」とは、特殊化された細胞型へと未だ発生していない細胞を指す。
本明細書で使用される場合、用語「分化」とは、特殊化されていない胚性細胞が、心臓、肝臓または筋肉細胞などの特殊化された細胞の特色を獲得するプロセスを指す。分化は、細胞表面中に包埋されたタンパク質が関与するシグナル伝達経路を通常は介した、細胞の遺伝子と細胞の外側の物理的および化学的条件との相互作用によって制御される。
本明細書で使用される場合、用語「方向付けられた分化」とは、特定の（例えば、所望の）細胞型、例えばＳＣ前駆体への分化を誘導するための幹細胞培養条件の操作を指す。
本明細書で使用される場合、幹細胞に関して、用語「方向付けられた分化」とは、多能性状態から、より成熟したまたは特殊化された細胞運命（例えば、ＳＣ前駆体、ＳＣなど）への幹細胞の移行を促進するための、小分子、増殖因子タンパク質および他の成長条件の使用を指す。
本明細書で使用される場合、細胞に関して、用語「分化を誘導する」とは、デフォルト細胞型（遺伝子型および／または表現型）を非デフォルト細胞型（遺伝子型および／または表現型）へと変化させることを指す。従って、「幹細胞において分化を誘導する」とは、幹細胞とは異なる特徴、例えば、遺伝子型（例えば、マイクロアレイなどの遺伝子分析によって決定される、遺伝子発現における変化）および／または表現型（例えば、ＳＣ前駆体マーカー（単数または複数）およびＳＣマーカー（単数または複数）などのタンパク質の発現における変化）を有する子孫細胞へと分裂するように幹細胞（例えば、ヒト幹細胞）を誘導することを指す。
本明細書で使用される場合、用語「細胞培養」とは、研究または医学的処置のための人工培地中でのｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞の成長を指す。
本明細書で使用される場合、用語「培養培地」とは、培養容器、例えば、ペトリプレート、マルチウェルプレートなどの中の細胞を覆う液体を指し、細胞に栄養を与え細胞を支持する栄養素を含む。培養培地は、細胞において所望の変化を生じさせるために添加される増殖因子もまた含み得る。
本明細書で使用される場合、細胞を化合物（例えば、１種または複数の阻害剤、活性化因子および／または誘導剤）と「接触させる」という用語は、それが細胞に触れるのを可能にする位置に化合物を配置することを指す。接触させることは、任意の適切な方法を使用して達成され得る。例えば、接触させることは、細胞の管に化合物を添加することによって達成され得る。接触させることは、細胞を含む培養培地に化合物を添加することによっても達成され得る。化合物（例えば、本明細書に開示される阻害剤、活性化因子および誘導剤）の各々は、細胞を含む培養培地に、溶液（例えば、濃縮溶液）として添加され得る。あるいはまたはさらに、化合物（例えば、本明細書に開示される阻害剤、活性化因子および誘導剤）ならびに細胞は、製剤化された細胞培養培地中に存在し得る。
本明細書で使用される場合、用語「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」とは、人工的環境、および人工的環境内で生じるプロセスまたは反応を指す。ｉｎ ｖｉｔｒｏ環境には、試験管および細胞培養物が例示されるがこれらに限定されない。
本明細書で使用される場合、用語「ｉｎ ｖｉｖｏ」とは、天然の環境（例えば、動物または細胞）、および天然の環境内で生じるプロセスまたは反応、例えば、胚発生、細胞分化、神経管形成などを指す。
本明細書で使用される場合、遺伝子またはタンパク質に関して、用語「発現する」とは、アッセイ、例えば、マイクロアレイアッセイ、抗体染色アッセイなどを使用して観察され得る、ｍＲＮＡまたはタンパク質を作製することを指す。
本明細書で使用される場合、用語「マーカー」または「細胞マーカー」とは、特定の細胞または細胞型を同定する遺伝子またはタンパク質を指す。細胞についてのマーカーは、１つのマーカーに限定されなくてもよく、マーカーとは、指定された群のマーカーがある細胞または細胞型を別の細胞または細胞型から同定できるような、マーカーの「パターン」を指し得る。
本明細書で使用される場合、用語「〜から誘導される」または「〜から樹立される」または「〜から分化させた」は、本明細書に開示される任意の細胞に関して用いられる場合、任意の操作、例えば、限定なしに、単細胞単離、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの培養、例えば、タンパク質、化学物質、照射、ウイルスによる感染、ＤＮＡ配列による、例えば、モルフォゲンなどによるトランスフェクション、培養された親細胞中に含まれる任意の細胞の選択（例えば、連続培養による）を使用する処理および／または変異誘発を使用して、細胞系、組織（例えば、解離された胚）または体液中の親細胞から得られた（例えば、単離された、精製されたなどの）細胞を指す。誘導された細胞は、増殖因子、サイトカイン、サイトカイン処理の選択された経過に対する応答、接着性、接着性の欠如、選別手順などによって、混合集団から選択され得る。
本明細書の「個体」または「対象」は、脊椎動物、例えば、ヒトまたは非ヒト動物、例えば、哺乳動物である。哺乳動物には、ヒト、霊長類、家畜、スポーツ動物（sport animal）、げっ歯類およびペットが含まれるがこれらに限定されない。非ヒト動物対象の非限定的な例には、げっ歯類、例えば、マウス、ラット、ハムスターおよびモルモット；ウサギ；イヌ；ネコ；ヒツジ；ブタ；ヤギ；ウシ；ウマ；ならびに非ヒト霊長類、例えば、類人猿およびサルが含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「疾患」とは、細胞、組織または臓器の正常な機能を損傷または妨害する任意の状態または障害を指す。
本明細書で使用される場合、用語「処置する」または「処置」とは、処置されている個体または細胞の疾患過程を変更することを試みた臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程の間に実施され得る。処置の治療効果には、限定なしに、疾患の出現または再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減殺、転移の予防、疾患進行の速度の減少、疾患状態の軽快または緩和、および寛解または改善された予後が含まれる。疾患または障害の進行を予防することによって、処置は、罹患したもしくは診断された対象、または障害を有すると疑われる対象における障害に起因する悪化を予防できるが、処置は、障害のリスクがある対象または障害を有すると疑われる対象における障害または障害の症状の開始もまた予防し得る。
２．幹細胞を分化させる方法
本明細書に開示される主題は、シュワン細胞は、幹細胞（例えば、ヒト幹細胞））の分化を誘導するためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法を提供する。ある特定の実施形態では、幹細胞はヒト幹細胞である。ヒト幹細胞の非限定的な例には、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）、ヒト多能性幹細胞（ｈＰＳＣ）、ヒト誘導多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）、ヒト単為生殖幹細胞、始原胚細胞様多能性幹細胞、エピブラスト幹細胞、Ｆクラス多能性幹細胞、体性幹細胞、がん幹細胞、または系列特異的分化が可能な任意の他の細胞が含まれる。ある特定の実施形態では、ヒト幹細胞はヒト多能性幹細胞である。ある特定の実施形態では、ヒト幹細胞はヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）である。ある特定の実施形態では、ヒト幹細胞はヒト誘導多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）である。ある特定の実施形態では、幹細胞は、哺乳動物幹細胞、霊長類幹細胞、またはげっ歯類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジなど由来の幹細胞が含まれるがこれらに限定されない非ヒト幹細胞である。
本発明者らは、以前に、１つの型の神経系列への幹細胞（例えば、ｈＰＳＣ）の分化を誘導するための二重ＳＭＡＤ阻害の使用を開示した（その全体が参照によって組み込まれるChambers（２００９年）。さらに、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の連続的阻害とその後のＷｎｔシグナル伝達の活性化によって、神経堤系列細胞（例えば、侵害受容器）へと分化させ得る（全て、その全体が参照によって組み込まれる、Chambers（２０１２年）；Mica（２０１３年）；ＷＯ２０１１／１４９７６２；Fattahi（２０１６年）；および２０１５年１２月２３日出願の米国特許仮出願番号６２／３８７，４６８号）。
本明細書に開示される主題は、幹細胞から誘導したシュワン細胞に関する。ある特定の実施形態では、ＳＣへの幹細胞の分化は、３つの相を含む：１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞（神経堤系列細胞）への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化、ＳＣ前駆体への神経堤系列細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化、およびＳＣへのＳＣ前駆体のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化または成熟化。Chambers（２０１２年）；Mica（２０１３年）；ＷＯ２０１１／１４９７６２；２０１５年１２月２３日出願の米国特許仮出願番号６２／３８７，４６８号；およびFattahi（２０１６年）に開示されるものが含まれるがこれらに限定されない、神経堤系列細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のための任意の適切な方法が、本明細書に開示される方法の第１の相において使用され得る。ある特定の実施形態では、幹細胞の集団を神経堤系列細胞の集団へとｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させ、神経堤系列細胞の集団をＳＣ前駆体の集団へとｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させ、ＳＣ前駆体の集団をＳＣの集団へとｉｎ ｖｉｔｒｏでさらに誘導する。
神経堤系列マーカーの非限定的な例には、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬおよびＳＬＵＧが含まれる。
ある特定の実施形態では、神経堤系列細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の阻害およびＷｎｔシグナル伝達の活性化によって、幹細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させる。ある特定の実施形態では、この方法は、幹細胞（例えば、ヒト幹細胞）の集団を、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣ分化を誘導することによって、神経堤系列細胞からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させる。ある特定の実施形態では、この方法は、神経堤系列細胞（例えば、ＳＭＡＤシグナル伝達の阻害およびＷｎｔシグナル伝達の活性化によって幹細胞から誘導された神経堤系列細胞）の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、神経堤系列細胞（例えば、ＳＭＡＤシグナル伝達の阻害およびＷｎｔシグナル伝達の活性化によって幹細胞から誘導された神経堤系列細胞）の集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、ＳＣは、ＳＣ分化を増強することによって、ＳＣ前駆体からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させる。ある特定の実施形態では、この方法は、ＳＣ前駆体（例えば、ＳＣ分化を誘導することによって神経堤系列細胞から誘導されたＳＣ前駆体細胞）の集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、ＳＣ前駆体（例えば、ＳＣ分化を誘導することによって神経堤系列細胞から誘導されたＳＣ前駆体細胞）の集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させるステップを含む。
１．１．神経堤系列細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞の分化をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導する方法は、幹細胞（例えば、ヒト幹細胞）の集団を、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤は、ＴＧＦβ、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、ノーダルおよびアクチビンを含むリガンドを中和し、または受容体および下流のエフェクターを遮断することを介して、そのシグナル経路を遮断する。ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤の非限定的な例は、その全体が参照によって組み込まれる、ＷＯ２０１１／１４９７６２、Chambers（２００９年）およびChambers（２０１２年）に開示されている。ある特定の実施形態では、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤は、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤はＳＢ４３１５４２である。
「ＳＢ４３１５４２」とは、ＣＡＳ番号３０１８３６−４１−９、Ｃ２２Ｈ１８Ｎ４Ｏ３の分子式、および４−［４−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−５−（２−ピリジニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ベンズアミドの名称を有する分子を指す。例えば、以下の構造：
を参照のこと。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞の分化をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導する方法は、幹細胞を、Ｓｍａｌｌ Ｍｏｔｈｅｒｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ（ＳＭＡＤ）シグナル伝達の１種または複数の阻害剤（「ＳＭＡＤ阻害剤」）と接触させるステップをさらに含む。ＳＭＡＤ阻害剤の非限定的な例は、その全体が参照によって組み込まれる、ＷＯ２０１１／１４９７６２、Chambers（２００９年）およびChambers（２０１２年）に開示されている。ある特定の実施形態では、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤は、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤はＬＤＮ１９３１８９である。
「ＬＤＮ１９３１８９」とは、Ｃ２５Ｈ２２Ｎ６の化学式を有し、以下の式
を有する小分子ＤＭ−３１８９、ＩＵＰＡＣ名４−（６−（４−（ピペラジン−１−イル）フェニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）キノリンを指す。
ＬＤＮ１９３１８９は、ＳＭＡＤシグナル伝達阻害剤として機能することが可能である。ＬＤＮ１９３１８９は、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３およびＡＬＫ６、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の高度に強力な小分子阻害剤でもあり、ＡＬＫ１およびＡＬＫ３ファミリーのＩ型ＴＧＦβ受容体のメンバーのシグナル伝達を阻害し、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、およびアクチビンサイトカインシグナルを含む複数の生物シグナルの伝達、ならびに引き続いてＳｍａｄ１、Ｓｍａｄ５およびＳｍａｄ８のＳＭＡＤリン酸化の阻害を生じる（参照によって本明細書に組み込まれる、Yuら（２００８年）Nat Med １４巻：１３６３〜１３６９頁；Cunyら（２００８年）Bioorg. Med. Chem. Lett. １８巻：４３８８〜４３９２頁）。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞の分化をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導する方法は、細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップをさらに含む。本明細書で使用される場合、リガンドに関して、用語「ＷＮＴ」または「ウイングレス」とは、ＷＮＴ受容体、例えば、ＦｒｉｚｚｌｅｄおよびＬＲＰＤｅｒａｉｌｅｄ／ＲＹＫ受容体ファミリー中の受容体と相互作用することが可能な一群の分泌タンパク質（即ち、ヒトではＩｎｔ１（組み込み１））を指す。本明細書で使用される場合、シグナル伝達経路に関して、用語「ＷＮＴ」または「ウイングレス」とは、β−カテニンで媒介されるまたは媒介されない、ＷｎｔファミリーリガンドおよびＷｎｔファミリー受容体、例えば、ＦｒｉｚｚｌｅｄおよびＬＲＰＤｅｒａｉｌｅｄ／ＲＹＫ受容体から構成されるシグナル経路を指す。ある特定の実施形態では、ＷＮＴシグナル伝達経路は、β−カテニン、例えば、ＷＮＴ／−カテニンによる媒介を含む。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子は、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化のためにグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる。従って、Ｗｎｔ活性化因子は、ＧＳＫ３β阻害剤であり得る。ＧＳＫ３Ｐ阻害剤は、ＷＮＴシグナル伝達経路を活性化することが可能である。例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Cadiganら、J Cell Sci. ２００６年；１１９巻：３９５〜４０２頁；Kikuchiら、Cell Signaling. ２００７年；１９巻：６５９〜６７１頁を参照のこと。本明細書で使用される場合、用語「グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β阻害剤」とは、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β酵素を阻害する化合物を指す。例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるDobleら、J Cell Sci. ２００３年；１１６巻：１１７５〜１１８６頁を参照のこと。
Ｗｎｔ活性化因子またはＧＳＫ３β阻害剤の非限定的な例は、その全体が参照によって組み込まれる、ＷＯ２０１１／１４９７６２、Chambers（２０１２年）およびCalderら、J Neurosci. ２０１５年８月１９日；３５巻（３３号）：１１４６２〜８１頁に開示されている。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ−１、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される小分子である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子はＣＨＩＲ９９０２１である。
「ＣＨＩＲ９９０２１」（「アミノピリミジン」または「３−［３−（２−カルボキシエチル）−４−メチルピロール−２−メチリデニル］−２−インドリノン」としても公知）とは、以下の式
を有する、ＩＵＰＡＣ名６−（２−（４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）エチルアミノ）ニコチノニトリルを指す。
ＣＨＩＲ９９０２１は高度に選択的であり、関連するキナーゼおよび関連しないキナーゼのパネルに対してほぼ１０００倍の選択性を示し、ヒトＧＳＫ３βに対してＩＣ５０＝６．７ｎＭ、げっ歯類ＧＳＫ３βホモログに対してナノモル濃度のＩＣ５０値である。
１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のために、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって接触され得る。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、最大で約３日間、最大で約４日間、最大で約５日間、最大で約６日間、最大で約７日間、最大で約８日間、最大で約９日間、最大で約１０日間、最大で約１１日間、最大で約１２日間、最大で約１３日間、最大で約１４日間、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、または最大で約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約４日間と約３０日間との間、約４日間〜約２７日間の間、約４日間と約２６日間との間、約４日間と約２５日間との間、約４日間と約２４日間との間、約４日間と約２０日間との間、約４日間と約１５日間との間、約４日間と約１０日間との間、約５日間と約１５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、１０日間と約１５日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約１０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約１１日間にわたって接触される。
１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のために、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって接触され得る。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、最大で約３日間、最大で約４日間、最大で約５日間、最大で約６日間、最大で約７日間、最大で約８日間、最大で約９日間、最大で約１０日間、最大で約１１日間、最大で約１２日間、最大で約１３日間、最大で約１４日間、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、または最大で約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約４日間と約３０日間との間、約４日間〜約２７日間の間、約４日間と約２６日間との間、約４日間と約２５日間との間、約４日間と約２４日間との間、約４日間と約２０日間との間、約４日間と約１５日間との間、約４日間と約１０日間との間、約５日間と約１５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、１０日間と約１５日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約１０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約１１日間にわたって接触される。
さらに、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間にわたって接触され得る。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、最大で約４日間、最大で約５日間、最大で約６日間、最大で約７日間、最大で約８日間、最大で約９日間、最大で約１０日間、最大で約１１日間、最大で約１２日間、最大で約１３日間、最大で約１４日間、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、または最大で約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約４日間と約３０日間との間、約４日間〜約２７日間の間、約４日間と約２６日間との間、約４日間と約２５日間との間、約４日間と約２４日間との間、約４日間と約２０日間との間、約４日間と約１５日間との間、約４日間と約１０日間との間、約５日間と約１５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、５日間と約１５日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約１１日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約１０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約９日間にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、幹細胞は、約１ｎＭ〜約３００ｎＭ、約５ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約８０ｎＭ〜約１２０ｎＭ、約９０ｎＭ〜約１１０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、または約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭの濃度のＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、約８０ｎＭ〜約１２０ｎＭの濃度のＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、約１００ｎＭの濃度のＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、上記濃度のいずれか１つのＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、約１００ｎＭの濃度のＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、幹細胞は、約１μＭ〜１００μＭ、約１μＭ〜２０μＭ、約１μＭ〜１５μＭ、約１μＭ〜１０μＭ、約１μＭ〜５μＭ、約５μＭ〜１０μＭ、約５μＭ〜１５μＭ、約１５μＭ〜２０μＭ、約２０μＭ〜３０μＭ、約３０μＭ〜４０μＭ、約４０μＭ〜５０μＭ、約５０μＭ〜６０μＭ、約６０μＭ〜７０μＭ、約７０μＭ〜８０μＭ、約８０μＭ〜９０μＭ、または約９０μＭ〜１００μＭの濃度のＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、約５μＭ〜１５μＭの濃度のＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、約１０μＭの濃度のＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、上記濃度のいずれか１つのＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、約１０μＭの濃度のＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、細胞は、約１μＭ〜１００μＭ、約１μＭ〜２０μＭ、約１μＭ〜１５μＭ、約１μＭ〜１０μＭ、約１μＭ〜５μＭ、約５μＭ〜１０μＭ、約５μＭ〜１５μＭ、約１５μＭ〜２０μＭ、約２０μＭ〜３０μＭ、約３０μＭ〜４０μＭ、約４０μＭ〜５０μＭ、約５０μＭ〜６０μＭ、約６０μＭ〜７０μＭ、約７０μＭ〜８０μＭ、約８０μＭ〜９０μＭ、または約９０μＭ〜１００μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、約１μＭ〜５μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、約３μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、上記濃度のいずれか１つのＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、約３μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日接触される。
１．２．シュワン細胞前駆体への神経堤系列細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化
神経堤系列細胞をシュワン細胞前駆体に直接分化させるための、本明細書に開示される分化方法は、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞、例えば、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および任意選択で１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップ、ならびに細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子とさらに接触させるステップの後に分化した細胞）を、本明細書に記載される１種または複数のＷｎｔ活性化因子およびＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子（「ＦＧＦ活性化因子」）と接触させて、ＳＣ前駆体の集団、例えば１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞、例えば、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および任意選択で１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップ、ならびに細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子とさらに接触させるステップの後に分化した細胞）を、シュワン細胞の分化を誘導する１種または複数の分子（「ＳＣ分化誘導剤」）と接触させて、ＳＣ前駆体の集団、例えば１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞を産生するステップを含む。
ＳＣ分化誘導剤の非限定的な例には、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβおよびＦＢＳが含まれる。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化誘導剤はニューレグリン１（ＮＲＧ１）である。
ＦＧＦシグナル伝達の活性化因子の非限定的な例には、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、誘導体、およびそれらの混合物が含まれる。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子はＦＧＦ２である。
ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触される。例えば、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤は全て、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）を含む細胞培養培地中に存在する。ある特定の実施形態では、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤は、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞、例えば、幹細胞の集団を１種または複数のＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達および任意選択で１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させ、それらの細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子とさらに接触させた後の、分化した細胞）を含む細胞培養培地に、毎日（または１日おきに、もしくは２日毎に）一緒に添加される。
１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間にわたって接触され得る。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、少なくとも約１０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、または最大で約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、約３日間と約５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、約１０日間と約１５日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、約１４日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と、約１５日間にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触され、神経堤系列細胞集団は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子とさらに接触される。従って、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、少なくとも約３１日間、少なくとも約３２日間、少なくとも約３３日間、少なくとも約３４日間、少なくとも約３５日間、少なくとも約３６日間、少なくとも約３７日間、少なくとも約３８日間、少なくとも約３９日間、または少なくとも約４０日間にわたって接触され得る。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、最大で約３０日間、最大で約３１日間、最大で約３２日間、最大で約３３日間、最大で約３４日間、最大で約３５日間、最大で約３６日間、最大で約３７日間、最大で約３８日間、最大で約３９日間、最大で約４０日間、最大で約４１日間、最大で約４２日間、最大で約４３日間、最大で約４４日間、最大で約４５日間、最大で約４６日間、最大で約４７日間、最大で約４８日間、最大で約４９日間、最大で約５０日間、最大で約５１日間、最大で約５２日間、最大で約５３日間、最大で約５４日間、最大で約５５日間、最大で約５６日間、最大で約５７日間、最大で約５８日間、最大で約５９日間、または最大で約６０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、約１４日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、約２５日間と約３０日間との間、約３０日間と約３５日間との間、約３５日間と約４０日間との間、約４０日間と約４５日間との間、約４５日間と約５０日間との間、約５０日間と約５５日間との間、または約５５日間と約６０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で２０日間と約３０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、合計で２０日間と約２５日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で２５日間と約３０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、合計で約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、約３０日間、約３１日間、約３２日間、約３３日間、約３４日間、約３５日間、約３６日間、約３７日間、約３８日間、約３９日間、約４０日間、約４１日間、約４２日間、約４３日間、約４４日間、約４５日間、約４６日間、約４７日間、約４８日間、約４９日間、約５０日間、約５１日間、約５２日間、約５３日間、約５４日間、約５５日間、約５６日間、約５７日間、約５８日間、約５９日間または約６０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で約２６日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、合計で約２５日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で約２４日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、細胞は、１種または複数のＷｎｔ活性化因子と、合計で約２３日間にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１ｎＭ〜１００ｎＭ、約１ｎＭ〜２０ｎＭ、約１ｎＭ〜１５ｎＭ、約１ｎＭ〜１０ｎＭ、約１ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１０ｎＭ、約５ｎＭ〜１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜２０ｎＭ、約２０ｎＭ〜３０ｎＭ、約３０ｎＭ〜４０ｎＭ、約４０ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜６０ｎＭ、約６０ｎＭ〜７０ｎＭ、約７０ｎＭ〜８０ｎＭ、約８０ｎＭ〜９０ｎＭ、または約９０ｎＭ〜１００ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約５ｎＭ〜１５ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１０ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、上記濃度のいずれか１つのＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１０ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ〜３０ｎｇ／ｍｌ、約３０ｎｇ／ｍｌ〜４０ｎｇ／ｍｌ、約４０ｎｇ／ｍｌ〜５０ｎｇ／ｍｌ、約５０ｎｇ／ｍｌ〜６０ｎｇ／ｍｌ、約６０ｎｇ／ｍｌ〜７０ｎｇ／ｍｌ、約７０ｎｇ／ｍｌ〜８０ｎｇ／ｍｌ、約８０ｎｇ／ｍｌ〜９０ｎｇ／ｍｌ、または約９０ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約５ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、上記濃度のいずれか１つのシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と、毎日接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１μＭ〜１００μＭ、約１μＭ〜２０μＭ、約１μＭ〜１５μＭ、約１μＭ〜１０μＭ、約１μＭ〜５μＭ、約５μＭ〜１０μＭ、約５μＭ〜１５μＭ、約１５μＭ〜２０μＭ、約２０μＭ〜３０μＭ、約３０μＭ〜４０μＭ、約４０μＭ〜５０μＭ、約５０μＭ〜６０μＭ、約６０μＭ〜７０μＭ、約７０μＭ〜８０μＭ、約８０μＭ〜９０μＭ、または約９０μＭ〜１００μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約１μＭ〜５μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、ＳＣ前駆体を産生するために、約３μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、上記濃度のいずれか１つのＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）は、約３μＭの濃度のＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞を少なくとも約５０％含む細胞集団は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞へと分化させ、細胞のこの集団は、１種のＷｎｔ活性化因子（例えば、ＣＨＩＲ９９０２１、例えば、３μＭ ＣＨＩＲ９９０２１）、１種のＦＧＦ活性化因子（例えば、ＦＧＦ２、例えば、１０ｎＭ ＦＧＦ２）および１種のＳＣ分化誘導剤（例えば、ＮＲＧ１、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ１）と、約１５日間（例えば、約１４日間または約１５日間）にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、幹細胞は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞へと分化させ、この細胞は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種の阻害剤（例えば、ＳＢ４３１５４２、例えば、１０μＭ ＳＢ４３１５４２）および任意選択で１種のＳＭＡＤ阻害剤（例えば、ＬＤＮ１９３１８９、例えば、１００ｎＭ ＬＤＮ１９３１８９）と約１０日間（例えば、約１０日間または約１１日間）にわたって；１種のＷｎｔ活性化因子（例えば、ＣＨＩＲ９９０２１、例えば、３μＭ ＣＨＩＲ９９０２１）と約２３日間（例えば、約２３日間または約２４日間）にわたって；ならびに１種のＦＧＦ活性化因子（例えば、ＦＧＦ２、例えば、１０ｎＭ ＦＧＦ２）および１種のＳＣ分化誘導剤（例えば、ＮＲＧ１、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ１）と約１５日間（例えば、約１４または１５日間）にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、細胞は、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）シグナル伝達の活性化因子には曝露されない。ＳＨＨシグナル伝達の活性化因子の非限定的な例には、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）、Ｃ２５ＩＩ、スムーズンド（ＳＭＯ）受容体小分子アゴニスト（例えば、プルモルファミン（purmorphamine））、それらの誘導体、およびそれらの混合物が含まれる。ある特定の実施形態では、細胞は、ＳＨＨには曝露されない。
１．３．シュワン細胞へのシュワン細胞前駆体のｉｎ ｖｉｔｒｏ誘導
シュワン細胞前駆体は、シュワン細胞へとｉｎ ｖｉｔｒｏでさらに誘導され得る。分化したＳＣ前駆体は、ＳＣ前駆体のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供され得る。シュワン細胞は、ミエリン形成性シュワン細胞または非ミエリン形成性シュワン細胞であり得る。
ある特定の実施形態では、シュワン細胞前駆体（ＳＣ前駆体）は、ＳＣの集団を産生するために、本明細書に記載される１種または複数のＦＧＦ活性化因子、本明細書に記載される１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触される。ある特定の実施形態では、シュワン細胞前駆体（ＳＣ前駆体）は、シュワン細胞分化を増強する１種または複数の分子（「ＳＣ分化増強剤」と呼ばれる）と接触される。ＳＣ分化増強剤の非限定的な例には、ニューレグリン、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦおよびＣＮＴＦが含まれる。ある特定の実施形態では、１種または複数のＳＣ分化増強剤は選択されたｃＡＭＰである。ある特定の実施形態では、シュワン細胞前駆体（ＳＣ前駆体）は、ＳＣの集団を産生するために、１種のＦＧＦ活性化因子および２種のシュワン細胞分化誘導剤と接触される。ある特定の実施形態では、２種のシュワン細胞分化誘導剤は、ｃＡＭＰおよびＮＲＧ１である。
ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、細胞培養培地中の１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触される。ある特定の実施形態では、細胞培養培地は、Ｌ−グルタミン（例えば、Ｇｉｂｃｏ製、２５０３０−１６４）、Ｎ２（例えば、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製、０７１５６）およびＢ２７（例えば、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製、１７５０４０４４）を補充したＮＢ培地である。
ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、約１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌ、約１ｎｇ／ｍｌ〜５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ〜１５ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ〜２０ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ〜３０ｎｇ／ｍｌ、約３０ｎｇ／ｍｌ〜４０ｎｇ／ｍｌ、約４０ｎｇ／ｍｌ〜５０ｎｇ／ｍｌ、約５０ｎｇ／ｍｌ〜６０ｎｇ／ｍｌ、約６０ｎｇ／ｍｌ〜７０ｎｇ／ｍｌ、約７０ｎｇ／ｍｌ〜８０ｎｇ／ｍｌ、約８０ｎｇ／ｍｌ〜９０ｎｇ／ｍｌ、または約９０ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、約１５ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、約２０ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、上記濃度のいずれか１つのシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度のシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、約３日間と約４０日間との間、約３日間と約３５日間との間、約３日間と約３０日間との間、約３日間と約２５日間との間、約３日間と約２０日間との間、約３日間と約１５日間との間、約１０日間と約４０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約４０日間との間、約２０日間と約３０日間との間、または約３０日間と約４０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、約３日間と約１５日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、約３０日間と約４０日間との間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、約１０日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、約１１日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と、約３５日間にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、約１ｎＭ〜１００ｎＭ、約１ｎＭ〜２０ｎＭ、約１ｎＭ〜１５ｎＭ、約１ｎＭ〜１０ｎＭ、約１ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１０ｎＭ、約５ｎＭ〜１５ｎＭ、約１５ｎＭ〜２０ｎＭ、約２０ｎＭ〜３０ｎＭ、約３０ｎＭ〜４０ｎＭ、約４０ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜６０ｎＭ、約６０ｎＭ〜７０ｎＭ、約７０ｎＭ〜８０ｎＭ、約８０ｎＭ〜９０ｎＭ、または約９０ｎＭ〜１００ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣ前駆体を産生するために、約５ｎＭ〜１５ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、ＳＣを産生するために、約１０ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、上記濃度のいずれか１つのＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日、１日おきに、または２日毎に接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、約１０ｎＭの濃度のＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、毎日接触される。
ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体からＳＣへの成熟化を支持する条件は、分化したＳＣ前駆体細胞を３Ｄスフェロイドへと凝集させること、ならびに前記３Ｄスフェロイドを、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させることを含む。ある特定の実施形態では、培養培地は、懸濁培養培地である。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞を少なくとも約５０％含む細胞集団は、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する細胞へと分化させ、細胞のこの集団は、１種のＦＧＦ活性化因子（例えば、ＦＧＦ２、例えば、１０ｎＭ ＦＧＦ２）、２種のＳＣ分化誘導剤（例えば、ＮＲＧ１（例えば、１０ｎｇ／ｍｌ ＮＲＧ１）およびｃＡＭＰ（例えば、１００ｍＭ ｃＡＭＰ））と、少なくとも約１０日間にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、細胞は、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）シグナル伝達の活性化因子には曝露されない。ＳＨＨシグナル伝達の活性化因子の非限定的な例には、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）、Ｃ２５ＩＩ、スムーズンド（ＳＭＯ）受容体小分子アゴニスト（例えば、プルモルファミン）、それらの誘導体、およびそれらの混合物が含まれる。ある特定の実施形態では、細胞は、ＳＨＨには曝露されない。
１．４．細胞培養培地
ある特定の実施形態では、上記阻害剤、活性化因子、誘導剤および増強剤は、細胞、例えば、幹細胞、１つもしくは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞、１つもしくは複数のＳＣ前駆体マーカーを発現する細胞、１つもしくは複数のＳＣマーカーを発現する細胞、またはそれらの組合せを含む細胞培養培地に添加される。適切な細胞培養培地には、Ｋｎｏｃｋｏｕｔ（登録商標）Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（「ＫＳＲ」）培地、Ｎ２培地、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ８（登録商標）／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ６（登録商標）（「Ｅ８／Ｅ６」）培地およびＮｅｕｒｏｂａｓａｌ（ＮＢ）培地（例えば、Ｎ２およびＢ−２７（登録商標）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔを補充したＮＢ培地）が含まれるがこれらに限定されない。ＫＳＲ培地、Ｎ２培地、Ｅ８／Ｅ６培地およびＮＢ培地は、市販されている。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のための培地は、ＫＳＲ培地、Ｎ２培地、およびそれらの組合せからなる群から選択される培地である。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のための培地は、Ｅ８／Ｅ６培地である。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＳＣ前駆体マーカーを発現する細胞への、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ誘導のための培地は、ＮＢ培地である。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＳＣマーカーを発現する細胞への、１つまたは複数のＳＣ前駆体マーカーを発現する細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ誘導のための培地は、ＮＢ培地である。
ＫＳＲ培地は、培養物中で未分化ｈＥＳＣ細胞を成長させ維持するために最適化された、規定された無血清製剤である。ＫＳＲ培地の構成成分は、ＷＯ２０１１／１４９７６２に開示されている。ある特定の実施形態では、ＫＳＲ培地は、Ｋｎｏｃｋｏｕｔ ＤＭＥＭ、Ｋｎｏｃｋｏｕｔ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ、Ｌ−グルタミン、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、ＭＥＭおよびβ−メルカプトエタノール（13-mercaptoethanol）を含む。ある特定の実施形態では、１リットルのＫＳＲ培地は、８２０ｍＬのＫｎｏｃｋｏｕｔ ＤＭＥＭ、１５０ｍＬのＫｎｏｃｋｏｕｔ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ、１０ｍＬの２００ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０ｍＬのＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１０ｍＬの１０ｍＭ ＭＥＭ、および５５μＭのβ−メルカプトエタノール（13-mercaptoethanol）を含み得る。
Ｅ８／Ｅ６培地は、ヒト多能性幹細胞の成長および拡大増殖を支持するフィーダーフリーかつゼノフリーの培地である。Ｅ８／Ｅ６培地は、体細胞初期化を支持することが証明されている。さらに、Ｅ８／Ｅ６培地は、ＰＳＣの培養のためのカスタム培地の製剤化のための基礎として使用され得る。一例のＥ８／Ｅ６培地は、その全体が参照によって組み込まれるChenら、Nat Methods. ２０１１年５月；８巻（５号）：４２４〜９頁に記載されている。一例のＥ８／Ｅ６培地は、その全体が参照によって組み込まれるＷＯ１５／０７７６４８に開示されている。ある特定の実施形態では、Ｅ８／Ｅ６細胞培養培地は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、アスコルビン酸、セレン、インスリン、ＮａＨＣＯ３、トランスフェリン、ＦＧＦ２およびＴＧＦβを含む。Ｅ８／Ｅ６培地は、Ｅ８／Ｅ６培地が活性なＢＭＰもＷｎｔ成分も含まないという点で、ＫＳＲ培地とは異なる。従って、ある特定の実施形態では、幹細胞を培養するためにＥ８／Ｅ６培地が使用される場合、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤（例えば、ＢＭＰを阻害するもの）がＥ８／Ｅ６培地に添加される必要はない。
Ｎ２ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔは、培養物中での未分化神経幹および前駆細胞の拡大増殖のために使用される、化学的に規定された動物フリーのサプリメントである。Ｎ２ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔは、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地との使用のために意図される。Ｎ２培地の構成成分は、ＷＯ２０１１／１４９７６２に開示されている。ある特定の実施形態では、Ｎ２培地は、グルコース、炭酸水素ナトリウム、プトレシン、プロゲステロン、亜セレン酸ナトリウム、トランスフェリンおよびインスリンを補充したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地を含む。ある特定の実施形態では、１リットルのＮ２培地は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２粉末、１．５５ｇのグルコース、２．００ｇの炭酸水素ナトリウム、プトレシン（１００ｍＬの蒸留水中に溶解された１．６１ｇの１００ｕＬアリコート）、プロゲステロン（１００ｍＬの１００％エタノール中に溶解された０．０３２ｇの２０ｕＬアリコート）、亜セレン酸ナトリウム（蒸留水中０．５ｍＭ溶液の６０ｕＬアリコート）、１００ｍｇのトランスフェリン、および１０ｍＬの５ｍＭ ＮａＯＨ中２５ｍｇのインスリンと共に、９８５ｍｌの蒸留Ｈ２Ｏを含む。
ある特定の実施形態では、幹細胞は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触の約１、約２、約３、約４、または約５、約６、約７、または約８日後から、幹細胞とＳＣ分化誘導剤およびＦＧＦ活性化因子との接触まで、漸増量のＮ２培地で漸進的に置き換えられるＫＳＲ培地中で最初に培養される。ある特定の実施形態では、幹細胞は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触後４日目〜１０日目に、漸増量のＮ２培地で漸進的に置き換えられるＫＳＲ培地中で最初に培養される。
本明細書に開示される幹細胞の集団を培養するために使用される細胞培養培地は、細胞と接触される阻害剤（単数または複数）、活性化因子（単数または複数）、誘導剤（単数または複数）および増強剤（単数または複数）を決定するだけでなく（例えば、ＫＳＲ培地については、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が必要とされる；Ｅ８／Ｅ６培地については、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤のみが必要とされる）、阻害剤（単数または複数）、活性化因子（単数または複数）、誘導剤（単数または複数）および増強剤（単数または複数）を細胞培養培地に添加する順序も決定する。
ある特定の実施形態では、細胞と１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内（例えば、同時に（同日に）、または約１日後と約４日後との間、例えば、約１日後、約２日後、約３日後もしくは約４日後）である。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のための細胞培養培地は、ＫＳＲ培地であり、細胞と１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である。ある特定の実施形態では、幹細胞と１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤との最初の接触は、例えば、ＳＭＡＤ阻害剤（単数または複数）およびＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤（単数または複数）を、幹細胞を含む細胞培養培地に同日に最初に添加することによって、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触と同日である。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞への幹細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化のための細胞培養培地は、Ｅ８／Ｅ６培地であり、細胞と１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触は、例えば、Ｗｎｔ活性化因子（単数または複数）およびＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤（単数または複数）を、幹細胞を含む細胞培養培地に同日に最初に添加することによって、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触と同日である。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ活性剤がＥ８／Ｅ６培地に添加される。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ活性剤は、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、または約１０日間の培養後に、培地から取り出される。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ活性剤は、約３日間の培養後に培地から取り出される。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ活性剤は、約０．５ｎｇ／ｍＬと約２０ｎｇ／ｍＬとの間、または約１ｎｇ／ｍｌと約１５ｎｇ／ｍｌとの間、または約２ｎｇ／ｍｌと約１０ｎｇ／ｍｌとの間、または約３ｎｇ／ｍｌと約５ｎｇ／ｍｌとの間の濃度で、培養培地中に存在する。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ活性剤は、約５ｎｇ／ｍｌの濃度で培養培地中に存在する。ＢＭＰ活性剤の非限定的な例には、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１、ＢＭＰ１５、それらの誘導体、およびそれらの混合物が含まれる。
ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤の細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤の細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約５日後である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤の細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約５日後と約２０日後との間（例えば、約５日後、約６日後、約７日後、約８日後、約９日後、約１０日後、約１１日後、約１２日後、約１３日後、約１４日後、約１５日後、約１６日後、約１７日後、約１８日後、約１９日後、または約２０日後）である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤の細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後である。ある特定の実施形態では、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤の細胞との最初の接触は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である。
ある特定の実施形態では、Ｗｎｔ活性化因子（単数または複数）、ＦＧＦ活性化因子（単数または複数）および任意選択でＳＣ分化誘導剤（単数または複数）は、ＳＣ前駆体を産生するために、Ｌ−グルタミン（例えば、Ｇｉｂｃｏ、２５０３０−１６４）、Ｎ２（例えば、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０７１５６）およびＢ２７（例えば、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１７５０４０４４）を補充したＮＢ培地に、（毎日、１日おきに、または２日毎に）添加される。
ある特定の実施形態では、ＳＣ分化誘導剤（単数または複数）、ＦＧＦ活性化因子（単数または複数）および任意選択でＳＣ分化増強剤（単数または複数）は、ＳＣ前駆体を産生するために、Ｌ−グルタミン（例えば、Ｇｉｂｃｏ、２５０３０−１６４）、Ｎ２（例えば、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０７１５６）およびＢ２７（例えば、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１７５０４０４４）を補充したＮＢ培地に、（毎日、１日おきに、または２日毎に）添加される。
ある特定の実施形態では、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤（単数または複数）、ＳＭＡＤ阻害剤（単数または複数）、Ｗｎｔ活性化因子（単数または複数）、ＳＣ分化誘導剤（単数または複数）、ＦＧＦ活性化因子（単数または複数）、および任意選択でＳＣ分化増強剤（単数または複数）は、幹細胞を含む細胞培養培地に、毎日（または１日おきに、もしくは２日毎に）添加される。
ある特定の実施形態では、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤との最初の接触は、０日目であり、細胞と１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触は、２日目であり、細胞と１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触は、１１日目であり、細胞と１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤との最初の接触は、２５日目である。ある特定の実施形態では、０日目〜１０日目についての細胞培養培地は、ＫＳＲ培地、Ｎ２培地、またはそれらの混合物である。ある特定の実施形態では、０日目〜３日目についての細胞培養培地は、ＫＳＲ培地である。ある特定の実施形態では、４日目〜１０日目についての細胞培養培地は、ＫＳＲ培地およびＮ２培地の組合せである。ある特定の実施形態では、１０日目についての細胞培養培地は、Ｎ２培地である。ある特定の実施形態では、１１日目およびそれ以降についての細胞培養培地は、Ｌ−グルタミン、Ｎ２およびＢ２７を補充したＮＢ培地である。
ある特定の実施形態では、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触は、０日目であり、細胞と１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触は、１１日目（または１日おきに、もしくは２日毎に）であり、細胞と１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤との最初の接触は、２５日目である。ある特定の実施形態では、０日目〜１０日目についての細胞培養培地は、Ｅ８／Ｅ６培地、Ｎ２培地、またはそれらの混合物である。ある特定の実施形態では、１１日目およびそれ以降についての細胞培養培地は、Ｌ−グルタミン、Ｎ２およびＢ２７を補充したＮＢ培地である。
ある特定の実施形態では、細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と約１０日間にわたって；１種または複数のＷｎｔ活性化因子と約２３日間にわたって；および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＳＣ分化誘導剤、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも８日間（例えば、１０日間または３５日間）にわたって接触される。
ある特定の実施形態では、細胞は、ＳＣ前駆体を産生するために、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と約１０日間にわたって；Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２５日間にわたって；およびＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約１４日間にわたって、ならびに任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触される。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＳＣを産生するために、１種または複数のＳＣ分化誘導剤、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも８日間（例えば、１０日間または３５日間）にわたって接触される。
シュワン細胞（ＳＣ）前駆体（例えば、１つまたは複数の初期シュワン細胞マーカーを発現する細胞）は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤（単数または複数）との最初の接触から約３５日未満、約３４日未満、約３３日未満、約３２日未満、約３１日未満、約３０日未満、約２９日未満、約２８日未満、約２７日未満、約２６日未満、約２５日未満、約２４日未満、約２３日未満、約２２日未満、約２１日未満、または約２０日未満で、幹細胞から分化し得る。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の阻害剤（単数または複数）との最初の接触から約２５日後またはそれ以降に、幹細胞から分化する。
１．５．マーカーおよびレポーター
分化したＳＣ前駆体は、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する。シュワン細胞前駆体マーカーの非限定的な例には、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ミエリンタンパク質ゼロ（ＭＰＺ）、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、ＳＬＣ１０Ａ４、ならびに表１〜４に列挙される遺伝子が含まれる。
ＳＣは、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する。シュワン細胞マーカーの非限定的な例には、ロイシンリッチリピート膜貫通ニューロン４（ＬＲＲＴＭ４）、カドヘリン１（ＣＤＨ１）、脂肪酸結合タンパク質７（ＦＡＢＰ７）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ＵＮＣＢ５、スクレロスチンドメイン含有１（ＳＯＳＴＤＣ１）、オリゴデンドロサイト転写因子１（ＯＬＩＧ１）、プラスミノーゲン活性化因子（ＰＬＡＴ）、カリウム内向き整流性チャネルサブファミリーＪメンバー１０（ＫＣＮＪ１０）、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）、ネトリン１（ＮＴＮ１）、グリア細胞系由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ｅｒｂ−ｂ２受容体チロシンキナーゼ３（ＥＲＢＢ３）、成長関連タンパク質４３（ＧＡＰ４３）、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、アクアポリン４（ＡＱＰ４）、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＭＰＺ、ＣＤ９、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４４、ＣＤ９８、およびＣＤ８１、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、ＣＤＨ１９、ならびに表１〜４に列挙される遺伝子が含まれる。
分化したＳＣ前駆体およびさらに成熟したＳＣは、１つまたは複数のレポーターをさらに発現し得る。レポーターの非限定的な例には、蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、ｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＣｙＰｅｔ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２）および黄色蛍光タンパク質誘導体（ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ、ＥＹＦＰ））、β−ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ｃａｔ）、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ｎｅｏ）、酵素（例えば、オキシダーゼおよびペルオキシダーゼ）；および抗原性分子が含まれる。本明細書で使用される場合、用語「レポーター遺伝子」または「レポーター構築物」とは、容易に検出可能なまたは容易にアッセイ可能なタンパク質、例えば、有色タンパク質、蛍光タンパク質、例えばＧＦＰ、または酵素、例えばベータ−ガラクトシダーゼ（ｌａｃＺ遺伝子）をコードする核酸を含む遺伝子構築物を指す。
分化したＳＣ前駆体およびさらに成熟したＳＣは、例えば、細胞培養培地中での分化後に精製され得る。本明細書で使用される場合、用語「精製された」、「精製する」、「精製」、「単離された」、「単離する」および「単離」とは、試料からの、少なくとも１つの夾雑物の量における低減を指す。例えば、所望の細胞型は、望ましくない細胞型の量における対応する低減により、少なくとも約１０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、および少なくとも約９０％＞精製される。用語「精製する」とは、試料からのある特定の細胞（例えば、望ましくない細胞）の除去を指し得る。望ましくない細胞の除去または選択は、試料中の所望のＳＣ前駆体またはＳＣのパーセントにおける増加を生じる。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体は、混合細胞集団を、少なくとも１つのシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞へと選別することによって精製される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、表１〜４に列挙される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、表１に列挙される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８およびＺＮＦ５０２からなる群から選択される。
本開示の主題は、本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏ方法によって産生されるＳＣ前駆体およびＳＣの集団、ならびにかかる細胞を含む組成物もまた提供する。
３．シュワン細胞前駆体およびシュワン細胞を含む組成物
本明細書に開示される主題は、本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏ分化方法によって産生された分化したＳＣ前駆体の集団を含む組成物を提供する。さらに、本明細書に開示される主題は、本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏの分化したＳＣ前駆体から成熟したＳＣの集団を含む組成物を提供する。
さらに、本明細書に開示される主題は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を含む組成物であって、細胞の集団の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％）が、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される１つまたは複数のＳＣ前駆体マーカーを発現し、細胞の集団の約２５％未満（例えば、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、または約０．１％未満）が、幹細胞マーカー、ＣＮＳマーカー、神経細胞マーカー、および間葉前駆体マーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物を提供する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、表１〜４に記載される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、表１に記載される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーは、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、およびＺＮＦ５０２からなる群から選択される。
さらに、本明細書に開示される主題は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化した細胞の集団を含む組成物であって、細胞の集団の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％）が、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される１つまたは複数のＳＣマーカーを発現し、細胞の約２５％未満（例えば、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、または約０．１％未満）が、ＳＣ前駆体マーカー、幹細胞マーカー、ＣＮＳマーカー、神経細胞マーカー、および間葉前駆体マーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物を提供する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＳＣマーカーは、表１〜４に記載される遺伝子から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＳＣマーカーは、ＴＹＲＰ１、ＣＤ４４、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、およびＣＤＫＮ２Ａからなる群から選択される。
幹細胞マーカーの非限定的な例には、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＳＥＡ４、およびＳＳＥＡ３が含まれる。ＣＮＳマーカーの非限定的な例には、ＰＡＸ６、ＮＥＳＴＩＮ、およびＳＯＸ１が含まれる。神経細胞マーカーの非限定的な例には、ＴＵＪ１、ＭＡＰ２、ＮＦＨ、ＢＲＮ３Ａ、ＩＳＬ１、ＴＨ、ＡＳＣＬ１、ＣＨＡＴ、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＨＯＸ２Ａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、およびＴＲＫＣが含まれる。間葉前駆体マーカーの非限定的な例は、ＳＭＡおよびＣＤ７３である。
ある特定の実施形態では、約１×１０４〜約１×１０１０個、約１×１０４〜約１×１０５個、約１×１０５〜約１×１０９個、約１×１０５〜約１×１０６個、約１×１０５〜約１×１０７個、約１×１０６〜約１×１０７個、約１×１０６〜約１×１０８個、約１×１０７〜約１×１０８個、約１×１０８〜約１×１０９個、約１×１０８〜約１×１０１０個、または約１×１０９〜約１×１０１０個の本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆細胞または成熟ＳＣの集団を含む組成物が対象に投与される。ある特定の実施形態では、約１×１０５〜約１×１０７個の本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体または成熟ＳＣが対象に投与される。
ある特定の実施形態では、前記組成物は凍結されている。ある特定の実施形態では、前記組成物は、１種または複数の凍結保護剤、例えば限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、ポリエチレングリコール、スクロース、トレハロース、デキストロース、またはその組合せをさらに含み得る。
ある特定の非限定的な実施形態では、組成物は、生体適合性の足場またはマトリックス、例えば、細胞を対象に植え込むまたは移植する場合に組織再生を促進する生体適合性の三次元足場をさらに含む。ある特定の非限定的な実施形態では、生体適合性の足場は、細胞外マトリックス材料、合成ポリマー、サイトカイン、コラーゲン、ポリペプチドまたタンパク質、フィブロネクチン、ラミニン、ケラチン、フィブリン、フィブリノーゲン、ヒアルロン酸、ヘパリン硫酸、コンドロイチン硫酸、アガロースもしくはゼラチンを含む多糖類、および／またはハイドロゲルを含む（例えば、その各々の内容の全体が参照により組み込まれている、米国公開第２０１５／０１５９１３５号、同第２０１１／０２９６５４２号、同第２００９／０１２３４３３号、および同第２００８／０２６８０１９号を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。組成物は、末梢神経系（以降、「ＰＮＳ」）および／もしくは中枢神経系（以降、「ＣＮＳ」）の再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは修復のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害、例えば末梢神経障害（例えば、糖尿病性末梢神経障害）の予防および／もしくは処置のために使用することができる。
本明細書に開示される主題はまた、本明細書に開示される分化した細胞またはそれを含む組成物を含む装置も提供する。装置の非限定的な例には、シリンジ、細いガラス管、定位針およびカニューレが含まれる。
４．処置方法
ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化したＳＣ前駆体およびＳＣを、末梢神経系（以降、「ＰＮＳ」）の再生のために使用することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化したＳＣ前駆体およびＳＣはまた、中枢神経系（以降、「ＣＮＳ」）の再生のためにも使用することができる。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化したＳＣ前駆体およびＳＣは、ミエリン損傷の予防および／または処置／修復のために使用することができる。ミエリンは、ＰＮＳミエリンまたはＣＮＳミエリンであり得る。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したＳＣ前駆体およびＳＣはまた、シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するためにも使用することができる。シュワン細胞関連障害の非限定的な例には、末梢神経障害、神経鞘腫症、シャルコー・マリー・トゥース病、ギラン・バレー症候群、異染性白質ジストロフィー、神経線維腫症、および多発性硬化症（ＭＳ）が含まれる。ある特定の実施形態では、末梢神経障害は、糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）である。
末梢のグリアは、ＰＮＳ生理学の多くの重要な側面を調節する。それらは、ニューロンの栄養支援を提供し、軸索に対してミエリン形成し、神経修復を促進する。後根神経節および自律神経節の衛星細胞、神経筋接合部のシナプス周囲シュワン細胞、ならびに末梢ニューロンの軸索を髄鞘化するミエリン形成性および非ミエリン形成性シュワン細胞を含む、末梢グリアの多くのサブタイプが存在する。これらのサブタイプは、胚発達の間にＮＣから生じることが知られているが、その詳細および機能的成熟化を調節する機構は十分に理解されていない。主要な供給源からこれらの胚系列を得る難しさのために、ヒトにおけるＳＣの形成およびミエリン形成または非ミエリン形成運命の獲得を支配する分子および細胞機構を詳細に調べる能力は限られている。本明細書に開示されるヒト多能性幹細胞からこれらの系列を誘導する方法により、これらの制限を回避することができ、これらの発達プロセスの厳密な研究が可能となる。ミエリン形成のｉｎ ｖｉｔｒｏモデルを利用できることにより、ヒトの系におけるミエリン形成プロセスの分子研究を促進することができるであろう。
これらの重要な基本的問題に対処することに加えて、本明細書に記載されるｈＰＳＣ由来ＳＣはまた、橋渡し研究においても利用することができる。ＳＣは、遺伝子変異、がん化学療法、および放射線により誘導される損傷、または糖尿病などの代謝問題を含む多様な要因によって引き起こされる多くのタイプの末梢神経障害に関係している。
ＳＣに影響を及ぼす最も一般的な遺伝的障害の１つは、シャルコー・マリー・トゥース病１Ａ型（ＣＭＴ１Ａ）である。この疾患は、ＰＭＰ２２遺伝子における重複または三重複によって引き起こされる（Lupski、１９９８年；Pareyson、１９９９年）。ＰＭＰ２２は、密集したミエリン構造の一部であり、ミエリン膜層の間の物理的接続の確立に関係している。ＣＭＴ１Ａにおける遺伝子量の増加によるＰＭＰ２２タンパク質レベルの上昇は、ＳＣ膜の脱安定化およびミエリンの脆弱性をもたらす（Lupski、１９９８年）。ＳＣのこの病態は、筋力低下および感覚障害などの症状をもたらす。ＣＭＴ１Ａ患者由来のｉＰＳＣからＳＣを生成することによって、またはｈＥＳＣにＰＭＰ２２変異を導入し、その後ミエリン形成性ＳＣに分化させることによって、病因および可能性がある処置選択肢に関する洞察を提供する、ヒトモデル系におけるこのミエリン形成欠損の包括的研究が可能となり得る。
化学療法および放射線療法は、ＳＣまたは末梢ニューロンに対するその関連する損傷により、がん患者におけるＰＮＳ損傷の最も一般的な原因の１つである（QuasthoffおよびHartung）。ＳＣが、ＰＮＳ修復の媒介において重要な役割を果たすことを考慮すると、ＳＣの移植は、これらの神経障害の有望な治療機会を提供することができる。移植されたＳＣの再生能は、脊髄損傷の状況でかなり広範囲に研究されている（WiliamsおよびBunge、２０１２年）。ＳＣは、脊髄に通常存在しないが、ｅｘ ｖｉｖｏで増大させたＳＣの自家移植は、脊髄の修復において有益であることが報告されている（Guestら、２０１３年）。しかし、移植されたＳＣが再生された軸索のミエリン形成に直接寄与するか否か、またはその作用が栄養支援を通して主に媒介されるか否かは明白ではない。これらの移植パラダイムにおける主要な障害は、ＳＣを大規模に得ること、および損傷領域における移植後のその遊走能が限定されることである（KocsisおよびWaxman、２００７年）。
ｈＰＳＣからのＳＣの分化は、規模の問題を克服することができ、ｈＰＳＣ由来系列の胎児性の性質は通常、遊走能の増強に関連する（Masterら、２００７年）。したがって、ｈＰＳＣ−ＳＣは、ＰＮＳおよびＣＮＳにおける再生を促進するための細胞治療試験にとって新たな可能性を開く。
末梢神経障害の主な原因は、真性糖尿病（MartynおよびHughes、１９９７年）である。糖尿病患者において症状を管理するためおよび基礎となる神経損傷を予防するための有効な介入に関して、非常に大きなアンメットニーズが存在する。広範な努力にもかかわらず、今日まで試験した全ての候補薬は、臨床試験の異なる段階で失敗している（Grewalら、２０１６年）。これは、主に、これらの薬物を当初同定または検証したモデル系が不適切であったためである（Callaghanら、２０１２年）。糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）における神経損傷を予防するための治療を合理的に設計するためには、基礎となる代謝および細胞機構のより良い理解が必要である。
本明細書に開示される主題は、ＰＮＳの再生方法を提供する。本明細書に開示される主題は、ＣＮＳの再生方法を提供する。本明細書に開示される主題は、ミエリン損傷を予防および／または処置または修復する方法を提供する。本明細書に開示される主題は、シュワン細胞関連障害を予防および／または処置する方法をさらに提供する。
ある特定の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に有効量の以下の１種または複数を投与するステップを含む：
（ａ）本明細書に記載される分化したシュワン細胞前駆体の集団；
（ｂ）そのような分化したシュワン細胞前駆体を含む組成物；
（ｃ）本明細書に記載されるシュワン細胞の集団；および
（ｄ）そのようなシュワン細胞を含む組成物。
さらに、本明細書に開示される主題は、ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のために、ミエリン損傷を予防および／もしくは処置もしくは修復するために、ならびに／またはシュワン細胞関連障害を予防および／もしくは処置するために、以下の１つまたは複数の使用を提供する：
（ａ）本明細書に記載される分化したシュワン細胞前駆体の集団；
（ｂ）そのような分化したシュワン細胞前駆体を含む組成物；
（ｃ）本明細書に記載されるシュワン細胞の集団；および
（ｄ）そのようなシュワン細胞を含む組成物。
ある特定の実施形態では、ミエリンはＰＮＳミエリンである。ある特定の実施形態では、ミエリンはＣＮＳミエリンである。
ある特定の実施形態では、シュワン細胞関連障害は、末梢神経障害、神経鞘腫症、シャルコー・マリー・トゥース病、ギラン・バレー症候群、異染性白質ジストロフィー、神経線維腫症、および多発性硬化症（ＭＳ）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、末梢神経障害は、糖尿病性末梢神経障害（ＤＰＮ）である。
本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体またはそれを含む組成物、成熟ＳＣまたはそれを含む組成物は、対象に、全身にまたは直接、投与または提供することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体またはそれを含む組成物、成熟ＳＣまたはそれを含む組成物は、目的の臓器（例えば、シュワン細胞欠損関連障害（例えば、末梢神経障害）に罹患している臓器）に直接注射される。本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体またはそれを含む組成物、成熟ＳＣまたはそれを含む組成物は、脳および脊髄を含むがこれらに限定されない有効な神経を有する対象の体の任意の部分に直接投与（注射）することができる。
本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体またはそれを含む組成物、成熟ＳＣまたはそれを含む組成物は、任意の生理的に許容される媒体中で投与することができる。薬学的に許容される担体と本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体または成熟ＳＣとを含む医薬組成物も提供される。本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体もしくはそれを含む組成物、成熟ＳＣもしくはそれを含む組成物、または薬学的に許容される担体は、局所注射、正所性（ＯＴ）注射、全身注射、静脈内注射、または非経口投与によって投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体またはそれを含む組成物、成熟ＳＣまたはそれを含む組成物は、局所注射を介して対象に投与される。
本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体またはそれを含む組成物、成熟ＳＣまたはそれを含む組成物は、選択されたｐＨに緩衝することができる滅菌液体調製物、例えば、等張水溶液、懸濁剤、乳剤、分散剤、または粘性の組成物として簡便に提供することができる。液体調製物は通常、ゲル、他の粘性組成物および固体組成物よりも調製が容易である。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するために、いくらかより簡便である。他方、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘性範囲内で製剤化され得る。液体または粘性組成物は、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る担体を含み得る。無菌の注射可能な溶液は、本開示の主題の組成物、例えば、本明細書に開示される幹細胞から誘導されたＳＣ前駆体または成熟したＳＣを含む組成物を、所望に応じて種々の量の他の成分と共に、必要な量の適切な溶媒中に取り込むことによって調製され得る。かかる組成物は、適切な担体、希釈剤または賦形剤、例えば、無菌水、生理学的食塩水、グルコース、デキストロースなどとの混合物中にあり得る。これらの組成物は、凍結乾燥もされ得る。これらの組成物は、所望の投与経路および調製物に依存して、補助物質、例えば、湿潤剤、分散剤または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化添加物または粘性増強添加物、防腐剤、調味剤、顔料などを含み得る。参照によって本明細書に組み込まれる「REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE」、第１７版、１９８５年などの標準的な教科書が、過度の実験なしに適切な調製物を調製するために参考にされ得る。
抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤および緩衝剤を含む、組成物の安定性および無菌性を増強する種々の添加物が添加され得る。微生物の作用の予防は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実にされ得る。注射可能な医薬品形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩アルミニウム（alum inurn monostearate）およびゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかし、本開示の主題によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤または添加物は、本明細書に開示される幹細胞から誘導されたＳＣ前駆体または成熟したＳＣまたはそれを含む組成物と適合性でなければならない。
当業者は、組成物の構成成分が、化学的に不活性であるように選択されるべきであり、本明細書に開示される幹細胞から誘導したＳＣ前駆体または成熟したＳＣの生存度にも有効性にも影響を与えないことを認識する。これは、化学および医薬品の原理における当業者にとって問題にはならず、または問題は、標準的な教科書を参照して、もしくは単純な実験によって（過度の実験を伴わずに）、本開示および本明細書で引用された文書から、容易に回避され得る。
ある特定の非限定的な実施形態では、本明細書に記載されるＳＣ前駆体およびＳＣは、生体適合性の足場またはマトリックス、例えば、細胞を対象に埋め込んだまたは移植した場合に組織再生を促進する生体適合性の三次元足場をさらに含む組成物中に含まれる。ある特定の非限定的な実施形態では、生体適合性の足場は、細胞外マトリックス材料、合成ポリマー、サイトカイン、コラーゲン、ポリペプチドまたはタンパク質、フィブロネクチン、ラミニン、ケラチン、フィブリン、フィブリノーゲン、ヒアルロン酸、ヘパリン硫酸、コンドロイチン硫酸、アガロースもしくはゼラチンを含む多糖類、および／またはハイドロゲルを含む（例えば、その各々の内容の全体が参照により組み込まれている、米国公開第２０１５／０１５９１３５号、同第２０１１／０２９６５４２号、同第２００９／０１２３４３３号、および同第２００８／０２６８０１９号を参照されたい）。
「有効量」（または「治療有効量」）は、処置の際に有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１つまたは複数の用量で対象に投与され得る。処置に関して、有効量は、シュワン細胞関連障害（例えば、ＤＰＮ）を緩和、軽快、安定化、反転するもしくはその進行を緩徐化する、またはシュワン細胞関連障害（例えば、ＤＰＮ）の病理学的結果を他の方法で低減させるのに十分な量である。有効量は一般に、ケースバイケースで医師によって決定され、当業者の技術範囲内である。典型的には、いくつかの因子が、有効量を達成するための適切な投薬量を決定する場合に考慮される。これらの因子には、対象の年齢、性別および体重、処置されている状態、状態の重症度、ならびに投与される細胞の形態および有効濃度が含まれる。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体、成熟ＳＣの有効量は、ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するのに十分な量、ミエリン損傷を予防するのに十分な量、ミエリン損傷を修復／処置するのに十分な量、シュワン細胞関連障害を予防するのに十分な量、および／またはシュワン細胞関連障害を処置する（例えば、その症状の進行を遅らせる、症状を軽減および／または低減させる）のに十分な量である。本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体または成熟ＳＣの投与量は、処置される対象に応じて変化する。ある特定の実施形態では、約１×１０４〜約１×１０１０個、約１×１０４〜約１×１０５個、約１×１０５〜約１×１０９個、約１×１０５〜約１×１０６個、約１×１０５〜約１×１０７個、約１×１０６〜約１×１０７個、約１×１０６〜約１×１０８個、約１×１０７〜約１×１０８個、約１×１０８〜約１×１０９個、約１×１０８〜約１×１０１０個、または約１×１０９〜約１×１０１０個の本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体または成熟ＳＣが対象に投与される。ある特定の実施形態では、約１×１０５〜約１×１０７個の本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体または成熟ＳＣが、対象、例えば末梢神経障害に罹患している対象、例えば、ＤＰＮに罹患している対象に投与される。有効用量であると考えられる量の正確な決定は、その特定の対象の体格、年齢、性別、体重、および状態を含む、各々の対象に対して個別の要因に基づき得る。投与量は、本開示からおよび当技術分野での知識から当業者が容易に確認することができる。
ある特定の実施形態では、ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは処置／修復のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害（例えば、末梢神経障害）の予防および／もしくは処置のために対象に投与される細胞は、本明細書に開示される幹細胞由来シュワン細胞前駆体から分化／成熟した成熟化シュワン細胞の集団である。
５．キット
本明細書に開示される主題は、神経堤系列細胞のＳＣ前駆体への分化を誘導するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、本明細書に記載される１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤を含む。ある特定の実施形態では、キットは、神経堤系列細胞（例えば、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞）の、ＳＣ前駆体（例えば、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞）への分化を誘導するための説明書をさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約１０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と最長約１５日間、最長約１６日間、最長約１７日間、最長約１８日間、最長約１９日間、最長約２０日間、最長約２１日間、最長約２２日間、最長約２３日間、最長約２４日間、最長約２５日間、最長約２６日間、最長約２７日間、最長約２８日間、最長約２９日間、または最長約３０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約３日間と約５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間、接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１０日間と約１５日間との間、接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と１４日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、神経堤系列細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と１５日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。
本明細書に開示される主題はまた、幹細胞の分化を誘導するためのキットも提供する。ある特定の実施形態では、キットは、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤、ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１種または複数の活性化因子、ＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子、および任意選択でシュワン細胞分化を誘導する１種または複数の分子を含む。ある特定の実施形態では、キットは、幹細胞の、分化したＳＣ前駆体の集団、例えば、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞への分化を誘導するための説明書をさらに含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を阻害剤（複数可）、活性化因子（複数可）、および誘導剤（複数可）と特定の順序で接触させるステップを含む。阻害剤（複数可）、活性化因子（複数可）、および誘導剤（複数可）と接触させる順序は、幹細胞を培養するために使用される細胞培養培地によって決定され得る。
ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と１５日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と１４日間にわたって接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内（例えば、同時に（同じ日に）、例えば約１日後と約４日後との間に、例えば、約１日後、約２日後、約３日後、または約４日後）に、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と最初に接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後／それ以降に、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と最初に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、キットは、Ｓｍａｌｌ Ｍｏｔｈｅｒｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ（ＳＭＡＤ）シグナル伝達の１種または複数の阻害剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤、およびＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と同時に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内に、ＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤を細胞と最初に接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約５日後に、ＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤を細胞と最初に接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約５日と約２０日後との間（例えば、約５日後、約６日後、約７日後、約８日後、約９日後、約１０日後、約１１日後、約１２日後、約１３日後、約１４日後、約１５日後、約１６日後、約１７日後、約１８日後、約１９日後、または約２０日後）、ＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤を細胞と最初に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から１０日後に、ＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤を細胞と最初に接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後に、ＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤を細胞と最初に接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって接触させ得ることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、最大で約３日間、最大で約４日間、最大で約５日間、最大で約６日間、最大で約７日間、最大で約８日間、最大で約９日間、最大で約１０日間、最大で約１１日間、最大で約１２日間、最大で約１３日間、最大で約１４日間、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、または最大で約３０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約４日間と約３０日間との間、約４日間〜約２７日間の間、約４日間と約２６日間との間、約４日間と約２５日間との間、約４日間と約２４日間との間、約４日間と約２０日間との間、約４日間と約１５日間との間、約４日間と約１０日間との間、約５日間と約１５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、１０日間と約１５日間との間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約１１日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と約１０日間にわたって接触させることを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、または少なくとも約３０日間にわたって接触させ得ることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、最大で約３日間、最大で約４日間、最大で約５日間、最大で約６日間、最大で約７日間、最大で約８日間、最大で約９日間、最大で約１０日間、最大で約１１日間、最大で約１２日間、最大で約１３日間、最大で約１４日間、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、または最大で約３０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約４日間と約３０日間との間、約４日間〜約２７日間の間、約４日間と約２６日間との間、約４日間と約２５日間との間、約４日間と約２４日間との間、約４日間と約２０日間との間、約４日間と約１５日間との間、約４日間と約１０日間との間、約５日間と約１５日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、１０日間と約１５日間との間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と、約１１日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、幹細胞をＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と約１０日間にわたって接触させることを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、Ｗｎｔシグナル伝達の１つまたは複数の活性化因子と、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間、少なくとも約２３日間、少なくとも約２４日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、または少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、少なくとも約３１日間、少なくとも約３２日間、少なくとも約３３日間、少なくとも約３４日間、少なくとも約３５日間、少なくとも約３６日間、少なくとも約３７日間、少なくとも約３８日間、少なくとも約３９日間、または少なくとも約４０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、最大で約１５日間、最大で約１６日間、最大で約１７日間、最大で約１８日間、最大で約１９日間、最大で約２０日間、最大で約２１日間、最大で約２２日間、最大で約２３日間、最大で約２４日間、最大で約２５日間、最大で約２６日間、最大で約２７日間、最大で約２８日間、最大で約２９日間、最大で約３０日間、最大で約３１日間、最大で約３２日間、最大で約３３日間、最大で約３４日間、最大で約３５日間、最大で約３６日間、最大で約３７日間、最大で約３８日間、最大で約３９日間、最大で約４０日間、最大で約４１日間、最大で約４２日間、最大で約４３日間、最大で約４４日間、最大で約４５日間、最大で約４６日間、最大で約４７日間、最大で約４８日間、最大で約４９日間、最大で約５０日間、最大で約５１日間、最大で約５２日間、最大で約５３日間、最大で約５４日間、最大で約５５日間、最大で約５６日間、最大で約５７日間、最大で約５８日間、最大で約５９日間、または最大で約６０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約１４日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、約２５日間と約３０日間との間、約３０日間と約３５日間との間、約３５日間と約４０日間との間、約４０日間と約４５日間との間、約４５日間と約５０日間との間、約５０日間と約５５日間との間、または約５５日間と約６０日間との間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と２０日間と約３０日間との間、接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と２５日間と約３０日間との間、接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、約３０日間、約３１日間、約３２日間、約３３日間、約３４日間、約３５日間、約３６日間、約３７日間、約３８日間、約３９日間、約４０日間、約４１日間、約４２日間、約４３日間、約４４日間、約４５日間、約４６日間、約４７日間、約４８日間、約４９日間、約５０日間、約５１日間、約５２日間、約５３日間、約５４日間、約５５日間、約５６日間、約５７日間、約５８日間、約５９日間または約６０日間にわたって接触させることを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２６日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２５日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２４日間にわたって接触させるステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＷｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２３日間にわたって接触させるステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、または少なくとも約２０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約１０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と最長約１５日間、最長約１６日間、最長約１７日間、最長約１８日間、最長約１９日間、最長約２０日間、最長約２１日間、最長約２２日間、最長約２３日間、最長約２４日間、最長約２５日間、最長約２６日間、最長約２７日間、最長約２８日間、最長約２９日間、または最長約３０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をシュワン細胞の分化を誘導する１種または複数の分子およびＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約３日間と約１０日間との間、約５日間と約１０日間との間、約１０日間と約１５日間との間、約１５日間と約２０日間との間、約２０日間と約２５日間との間、または約２５日間と約３０日間との間、接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１０日間と約１５日間との間、接触させて、ＳＣ前駆体を産生する。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、または約３０日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、説明書は、細胞をＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤およびＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と約１１日間にわたって；Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２３日間にわたって；ならびにＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。
ある特定の実施形態では、説明書は、細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤およびＳＭＡＤシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と約１１日間にわたって；Ｗｎｔシグナル伝達の１種または複数の活性化因子と約２５日間にわたって；ならびにＦＧＦシグナル伝達の１種または複数の活性化因子および任意選択で１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させて、ＳＣ前駆体を産生するステップを含む。
ある特定の実施形態では、キットは、ＳＣ分化を増強する１種または複数の分子（「ＳＣ分化増強剤」）およびＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書をさらに含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、または少なくとも約１５日間にわたって接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３日間と約４０日間との間、約３日間と約３５日間との間、約３日間と約３０日間との間、約３日間と約２５日間との間、約３日間と約２０日間との間、約３日間と約１５日間との間、約１０日間と約４０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、約２０日間と約４０日間との間、約２０日間と約３０日間との間、または約３０日間と約４０日間との間、接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３日間と約１５日間との間、接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３０日間と約４０日間との間、接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と１０日間にわたって接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１１日間にわたって接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＳＣ前駆体のＳＣへの成熟化を誘導するための説明書は、ＳＣ前駆体を１種または複数のＦＧＦ活性化因子、１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および任意選択で１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させて、ＳＣを産生するステップを含む。
さらに、本明細書に開示される主題は、ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは修復のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害（例えば、末梢神経障害、例えばＤＰＮ）の処置および／もしくは予防のためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、有効量の本明細書に開示される幹細胞由来ＳＣ前駆体の集団もしくはそれを含む組成物、または成熟ＳＣもしくはそれを含む組成物を、単位投与剤形で含む。ある特定の実施形態では、このキットは、治療的組成物を含む無菌コンテナを含む；かかるコンテナは、箱、アンプル、瓶、バイアル、管、バッグ、パウチ、ブリスターパック、または当該分野で公知の他の適切なコンテナ形態であり得る。かかるコンテナは、プラスチック、ガラス、ラミネート加工紙、金属箔、または医薬を保持するのに適切な他の材料で作製され得る。
ある特定の実施形態では、このキットは、本明細書に開示される幹細胞から誘導したＳＣ前駆体の集団もしくはそれを含む組成物、または成熟したＳＣもしくはそれを含む組成物を、対象、例えば、例えば、シュワン細胞関連障害（例えば、末梢神経障害、例えば、ＤＰＮ）に罹患している対象に投与するための使用説明書を含む。使用説明書は、ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは修復のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害（例えば、末梢神経障害、例えば、ＤＰＮ）を処置および／もしくは予防するための細胞または組成物の使用についての情報を含み得る。ある特定の実施形態では、使用説明書は、以下のうち少なくとも１つを含む：治療剤の説明；ＰＮＳおよび／もしくはＣＮＳの再生のため、ミエリン損傷の予防および／もしくは修復のため、ならびに／またはシュワン細胞関連障害（例えば、末梢神経障害、例えば、ＤＰＮ）もしくはその症状を処置および／もしくは予防するための投薬スケジュールおよび投与；事前注意；警告；適応症；禁忌（counter-indication）；過量投薬情報；有害反応；動物薬理学；臨床研究；ならびに／あるいは参考文献。使用説明書は、コンテナ上に直接（存在する場合）、またはコンテナに貼られた標識として、またはコンテナ中にもしくはコンテナと同梱された別々のシート、パンフレット、カードもしくはホルダーとして印刷され得る。
本開示の主題は、限定ではなく本開示の主題の例示として提供される以下の実施例を参照してより良く理解される。
（実施例１）
概要
本発明者らは、ヒト幹細胞（例えば、ｈＰＳＣ）から誘導されたシュワン細胞前駆体およびシュワン細胞の非常に効率的な生成および見込みのある単離方法を開発した。幹細胞由来ＳＣは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでｈＥＳＣ由来感覚ニューロンに対してミエリン形成することができ、ｈＥＳＣ由来運動ニューロンの成熟化を加速することができた。幹細胞由来ＳＣはまた、ｉｎ ｖｉｖｏでのＰＮＳ損傷のラットモデルにおいて効率的に定着することができた。ラットの損傷した座骨神経に移植された幹細胞由来ＳＣは、再生しつつある宿主軸索のミエリン形成に寄与し、新たにミエリン形成された線維における適切なイオンチャネル局在化を促進した。
方法および材料
未分化ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）の培養
ｈＥＳＣ系統Ｈ９（ＷＡ−０９）および誘導体（ＳＯＸ１０：：ＧＦＰ；ＳＹＮ：：ＣｈＲ２−ＹＦＰ；ＳＹＮ：：ＹＦＰ；ＰＨＯＸ２Ｂ：ＧＦＰ；ＥＦ１：：ＲＦＰ ＥＤＮＲＢ−／−）ならびに２つの独立したｈｉＰＳＣ系統（健康および家族性自律神経異常症、センダイベースのＯＭＳＫ（Ｃｙｔｏｔｕｎｅ））を、ｈＥＳＣを含むＫＳＲ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１０８２８−０２８）培地中のマウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ、Ｇｌｏｂａｌ Ｓｔｅｍ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）上で維持した（Chambersら、２００９年）。細胞を、１ヶ月間隔でマイコプラズマ試験に供し、ＳＴＲを、この研究の開始時にプロファイルして、細胞の種類を確認した。
ｈＥＳＣからの神経堤誘導ならびにシュワン細胞の誘導および拡大増殖
ｈＥＳＣを、１０ｎＭ ＦＧＦ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２３３−ＦＢ−００１ＭＧ／ＣＦ）を含むｈＥＳＣ培地中で、マトリゲル（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、３５４２３４）コーティングしたディッシュ上にプレートした（１０５細胞／ｃｍ２）。分化を、ＬＤＮ１９３１８９（１００ｎＭ、Ｓｔｅｍｇｅｎｔ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）およびＳＢ４３１５４２（１０μＭ、Ｔｏｃｒｉｓ、Ｅｌｌｉｓｖｉｌｌｅ、ＭＩ）を含むｋｎｏｃｋｏｕｔ ｓｅｒｕｍ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＫＳＲ）培地（ＫＯ ＤＭＥＭ＋１５％ＫＳＲ、Ｌ−グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２５０３０−０８１）、ＮＥＡＡ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１１１４０−０５０））中で開始させた。ＫＳＲ培地を、以前に記載されたように（Chambersら、２００９年）、４日目〜１０日目に、漸増量のＮ２培地で漸進的に置き換えた。頭蓋ＮＣ（ＣＮＣ）誘導のために、細胞を、２日目〜１１日目に、ＬＤＮおよびＳＢに加えて３μＭ ＣＨＩＲ９９０２１（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、４４２３）で処理する。ＣＮＳ前駆体対照細胞は、以前に記載されたように（Chambersら、２００９年）、０日目〜１１日目のＬＤＮおよびＳＢによる処理によって生成した。実施例を通じて、０日目は、培地を、ｈＥＳＣ培地からＬＤＮおよびＳＢ含有培地に切り替える日であった。本文および図面中の分化の日数は、多能性段階（０日目）以降の日数を指す。
１１日目に、ＮＣ細胞を、Ｕｌｔｒａ Ｌｏｗ Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ６ウェル培養プレート（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３４７１）中で３Ｄスフェロイド（５００万細胞／ウェル）へと凝集させ、ＣＨＩＲ（３ｕＭ、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、４４２３）およびＦＧＦ２（１０ｎＭ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２３３−ＦＢ−００１ＭＧ／ＣＦ）およびＮＲＧ１（１０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ ３７８−ＳＭ−０２５）を含むＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、２５０３０−１６４）、Ｎ２（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０７１５６）およびＢ２７（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１７５０４０４４）を補充したＮｅｕｒｏｂａｓａｌ（ＮＢ）培地中で培養した。１４日間の懸濁培養後、スフェロイドを、ＮＲＧ１（２０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ ３７８−ＳＭ−０２５）、ＦＧＦ２（１０ｎＭ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、２３３−ＦＢ−００１ＭＧ／ＣＦ）およびｃＡＭＰ（１００ｍＭ、Ｓｉｇｍａ、Ｄ０２６０）を含むＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、２５０３０−１６４）、Ｎ２（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０７１５６）およびＢ２７（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１７５０４０４４）を補充したＮｅｕｒｏｂａｓａｌ（ＮＢ）培地中で、ポリオルニチン／ラミニン／フィブロネクチン（ＰＯ／ＬＭ／ＦＮ）コーティングしたディッシュ（以前に記載されたように調製する）上にプレートする（Lee Gら、２００７年）。ＳＣ前駆体は、プレートしたスフェロイドの外に遊走し、１０日以内にＳＣへと分化する。長期拡大増殖のために、細胞を、ＰＯ／ＬＭ／ＦＮコーティングしたディッシュ上でシュワン細胞培地（Ｓｃｉｅｎｃｅｌｌ、１７０１）中で培養した。細胞を、免疫染色のために固定し、または分化の２５日目、３５日目、５０日目、６０日目および１００日目に、遺伝子発現分析のために収集した。
ＦＡＣＳおよび免疫蛍光（ＩＦ）分析
ＩＦのために、細胞を、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ−ＵＳＢ、１９９４３）で２０分間固定し、次いで、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、２３２０９）および０．３％ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ、Ｔ８７８７）を使用して、ブロッキングおよび透過処理した。次いで、細胞を、一次抗体溶液中で４℃（セルシウス）で一晩インキュベートし、フルオロフォアコンジュゲートした二次抗体でＲＴで１時間染色し、次いで、染色された細胞を、ＤＡＰＩ（１ｎｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ、Ｄ９５４２−５ＭＧ）と共にインキュベートし、数回洗浄し、その後イメージングした。フローサイトメトリー分析のために、細胞を、Ａｃｃｕｔａｓｅ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＡＴ１０４）を用いて解離させ、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、５５４７２２）溶液を使用して固定および透過処理し、次いで、ＢＤ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ緩衝剤（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、５５４７２３）を製造業者の使用説明書に従って使用して、洗浄、ブロッキングおよび透過処理した。次いで、細胞を、一次（４℃で一晩）および二次（室温で３０分間）抗体で染色し、フローサイトメーター（ＦｌｏｗＪｏ ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して分析する。一次抗体および希釈のリストは表５に提供される。
表面マーカースクリーニング
特異的表面抗原についてのスクリーニングを、分化の８０日目にｈＥＳＣ−ＳＣに対して、ＢＤ Ｌｙｏｐｌａｔｅ ｌｉｂｒａｒｙ（登録商標）（ＢＤ、５６０７４７）を使用して実施した。細胞を、９６ウェルプレート中にプレートし（１０，０００細胞／ウェル）、製造業者の使用説明書に従って、一次および二次抗体で染色した。染色された細胞を、プレート全体イメージングおよび定量化のために固定した。総ＧＦＡＰのうちの二重陽性細胞のパーセンテージを、各抗体について定量化した。上位ヒット（＞６０％二重陽性）を、フローサイトメトリーをさらに使用して検証した。
遺伝子発現分析
ＲＮＡ配列決定のために、総ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ＲＮＡ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ、７４１０６）を使用して抽出した。ｑＲＴ−ＰＣＲアッセイのために、総ＲＮＡ試料を、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１８０６４−０１４）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。ｑＲＴ−ＰＣＲ反応を、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲミックス（Ｑｉａｇｅｎ、２０４１４８）を使用して設定した。各データポイントは、３つの独立した生物学的反復を示す。ＲＮＡ−ｓｅｑ読み取りを、ＴｏｐＨａｔ ｖ２．０を使用して、ヒト参照ゲノム（ｈｇ１９）にマッピングした。ＴｏｐＨａｔを、カバー範囲検索に対する例外を伴って、デフォルトパラメーターで実行した。次いで、アラインメントを、ＨＴＳｅｑを使用して定量化し、差示的遺伝子発現を、頭蓋神経堤試料に対して標準化したＤＥＳｅｑを使用して計算した。
生存度アッセイ
ＳＣの生存度をモニタリングするために、細胞を、ＣｙｔｏＴｏｘ ９６細胞毒性アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ１７８０）を使用してＬＤＨ活性についてアッセイした。簡潔に述べると、細胞を、３０，０００細胞／ｃｍ２で９６ウェルプレート中にプレートする。上清および細胞溶解物を、２４時間後に収集し、プレートリーダー（４９０ｎｍ吸光度）を使用してＬＤＨ活性についてアッセイした。生存度を、溶解物のＬＤＨシグナルを総ＬＤＨシグナル（溶解物＋上清から）で除算することによって計算した。細胞を、アッセイの間、ＰＯ／ＬＭ／ＦＮコーティングしたディッシュ上でシュワン細胞培地（Ｓｃｉｅｎｃｅｌｌ、１７０１）中で培養した。
カルシウムイメージング
ＭＮ−ＳＣ同時培養物を、既に記載されているように（Barreto-ChangおよびDolmetsch、２００９年）培養後４０日目および７０日目にカルシウムイメージングに供した。簡単に説明すると、細胞を、５μＭのＦｌｕｏ−４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共に３７℃で３０分間インキュベートした後、イメージングした。カバーガラスをＦＣＳ２イメージングチャンバー（Ｂｉｏｐｔｅｃｈｓ）に載せ、細胞を、既に記載したように０．１重量／容積％のＢＳＡを添加した通常のタイロード食塩水溶液によって灌流した。活性化するために、細胞を、グルタメート（５０または１００μＭ）を含むタイロード液によって灌流した。画像を、４０×１．３開口数の油浸対物レンズ（Ｚｅｉｓｓ）を備えたＡｘｉｏｖｅｒｔ ２００Ｍ倒立顕微鏡を使用して３４０ｎｍおよび３８０ｎｍの波長で５秒毎に画像を獲得した。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、比率計測分析を行った。
ラット座骨神経におけるｈＥＳＣ−ＳＣの移植および組織学評価
全ての手順は、ＮＩＨのガイドラインに従って実施され、地域の施設内動物飼育使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ））によって承認された。ラットをイソフルランガスの麻酔下に置き、両方の座骨神経を座骨切痕より下で露出し、Ｄｕｍｏｎｔ ＃５鉗子を使用して同じ位置で３０秒間２回挫滅した。その後直ちに、３×１０４個のｈＥＳ細胞／μｌシュワン細胞の細胞浮遊液の約３〜４μｌを、ガラスマイクロピペットで挫滅部位に対して近位および遠位に注射することを通して移植した。生存期間は、２〜８週間の範囲であった。免疫組織化学用のラットを０．１Ｍ ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドの心臓内灌流によって固定した。座骨神経を、挫滅病変および移植の２、３、４、８週間後にラットから切断した。切断後、座骨神経を０．１Ｍ ＰＢＳ中の３０％スクロースに一晩入れて凍結切片のためにＯＣＴブロックにそれらを胞埋するか、または神経周膜を除去してそれらを冷０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で裂くことによって調製した。一部の神経を灌流後に裂いて免疫染色し、個々の軸索を調べた。挫滅部位に対して遠位の再生した軸索を分析した。
統計分析
データは、平均±ＳＥＭとして示され、少なくとも３回の独立した実験から導出した。反復（ｎ）に関するデータは、図の説明中に与えられる。統計分析を、スチューデントｔ検定（２つの群を比較する）、またはダネット検定（複数の群を対照に対して比較する）を用いるＡＮＯＶＡを使用して実施した。正規性について検定するために、十分な数の反復を有するデータについて、生データの分布を、正規分布で近似した（コルモゴロフ−スミルノフ正規性検定）。生存度分析を、ログランク（マンテル−コックス）検定を使用して実施した。一次ヒットについてのＺ−スコアを、Ｚ＝（ｘ−μ）／σとして計算した。Ｘは、移動スコア値であり、全てのヒット化合物について３である。μは、平均移動スコア値であり、σは、全ての化合物およびＤＭＳＯ対照についての標準偏差である。
結果
ｈＥＳＣからのＳＣ系列の誘導および前向き単離
ＤＰＮにおける感覚神経損傷の細胞型特異的機構を精査するために、ヒト感覚ニューロンおよびＳＣをｈＰＳＣから生成した。ｈＥＳＣからの感覚ニューロンの誘導のための方法は、Caiら、２０１６年；Chambersら、２０１２年に記載されているが、ＳＣの誘導は、依然として理解が進んでいない。従って、ＤＰＮのｈＥＳＣモデルを樹立することを目指した第１のステップとして、ｈＥＳＣをＳＣへと分化させるための有効な戦略を樹立した。
本発明者らのＳＣを誘導するこれまでの努力は、ＮＣ濃縮前駆細胞の長い２〜３カ月間の培養に依存したが、得られたグリア新生細胞の割合は小さかった（Leeら、２００７年）。より最近の研究は、ｈＰＳＣからのＳＣ様細胞の誘導について報告したが、ＳＯＸ１０などの重要な系列マーカーの発現を示さず、機能的ミエリン形成を実証できなかった（Liuら、２０１２年；Zieglerら、２０１１年）。胚発生の間に、ＳＣは、段階的プロセスでＳＯＸ１０＋ＮＣ細胞から生じると考えられた。マウスおよびニワトリ胚における研究に基づくと、ＮＣは、発達中の神経においてニューロンの束と関連するＳＣ前駆体を最初に生じる。関連するニューロンは、ＮＲＧ１を発現し、それらのＥＲＢＢ３受容体を活性化することによって、ＳＣ前駆体の生存およびさらなる分化を促進する（NewbernおよびBirchmeier、２０１０年）。マウス発生のＥ１３．５までに、ＳＣ前駆体は、ＳＯＸ１０の発現を維持しつつ、ＧＦＡＰ、Ｓ１００およびＰＯＵ３Ｆ１などの系列マーカーを上方調節する未熟なＳＣを生じる。ミエリン形成性運命および非ミエリン形成性運命へのＳＣの最終分化は、誕生後まで継続する（Jessenら、２０１５年）。
初期のｈＥＳＣベースのＮＣ分化プロトコールは、ｐ７５＋および／またはＨＮＫ１＋ＮＣ前駆体の前向き単離と組み合わせた、神経上皮系列からの推定ＮＣ細胞の離脱（delamination）に依存する（Bajpaiら、２０１０年；Leeら、２００７年）。これらのプロトコールは種々のＮＣ由来系列を生じるが、ＳＯＸ１０発現のレベルは一般に低い。対照的に、ＷＮＴシグナル伝達の活性化因子へのタイミングをとった曝露に基づく、より方向付けられたＮＣの誘導プロトコールは、分化の１１日目までに、細胞の大部分においてＳＯＸ１０のロバストな誘導を示す（Fattahiら、２０１６年；Menendezら、２０１１年；Micaら、２０１３年）。さらなる培養により、これらのｈＥＳＣ由来ＮＣ細胞は、ＳＯＸ１０＋メラニン細胞へと方向付けられ得るが（Micaら、２０１３年）、ＳＯＸ１０−の間充織およびニューロン前駆体もまた生じる（Micaら、２０１３年）。ＳＯＸ１０発現は、発生を通じてＳＣ系列において保持される重要なマーカーであるので、本発明者らは、グリア運命に向けてそれらを指示する前に、培養物中でＳＯＸ１０＋前駆体を維持するための条件を樹立することに最初に焦点を当てた。本発明者らは、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＷＮＴ、Ｎｏｔｃｈ、ＴＧＦβ、ＢＭＰ、ＮＲＧおよびエンドセリン３シグナル伝達のモジュレーターの存在下で、２Ｄまたは３ＤのＮＣ培養物中のＳＯＸ１０＋細胞のパーセンテージを決定した。ＦＧＦ２およびＮＲＧ１処理に加えた、３Ｄ凝集ステップとＣＨＩＲ９９０２１によるＷｎｔシグナル伝達の活性化との組合せは、ＳＯＸ１０発現の維持（図４Ａ）ならびに２５日目までのＳ１００および他の初期ＳＣマーカーの誘導（図１Ａ〜１Ｃ）を生じた。この段階で、さらに１０日間にわたるＦＧＦ２、ＮＲＧ１およびｃＡＭＰによる２５日目培養物前駆体の処理は、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺなどのいくつかのＳＣマーカーのロバストな誘導、ならびにとりわけＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３およびＧＡＰ４３が含まれる、ニューロンの相互作用および支持に関与する遺伝子の上方調節を促進する（図１Ａ〜１Ｄ）。より長期の培養は、ＧＦＡＰ＋細胞の富化を生じ、Ｓ１００、ＭＢＰおよびＧＦＡＰの発現（図１Ｅ、１Ｆおよび１Ｉ）に基づいて、６０〜９０日目までにＳＣのほぼ均質な集団を生じた（図４Ｂ）。これらのｈＥＳＣ由来集団は、Ｓ１００、ＭＢＰおよびＧＦＡＰを発現するＳＣの高いパーセンテージを維持したまま、さらに数週間にわたって増殖できる（図１Ｅ、１Ｆおよび１Ｉ）。
分化の間のｈＥＳＣ−ＳＣの前向き単離を可能にするために、本発明者らは、ＧＦＡＰ＋ＳＣを特異的にマークする表面抗原について、２４２の抗体のライブラリーをスクリーニングした（図５Ａ）。ＣＤ４４、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ８１およびＣＤ９８は、ＧＦＡＰ＋細胞集団を標識すると決定された（図５Ｂ）。さらなる検証により、ＣＤ９８は、６０日目のＳＣにおいて特異的に発現されるが、初期ＳＯＸ１０＋ＮＣ系列を標識することが以前に示されたマーカーであるＣＤ４９Ｄ（Fattahiら、２０１６年）を発現する１１日目のＮＣまたは２５日目のＳＣＰ細胞では発現されない（図５Ｃ）唯一のマーカーであることが明らかになった。精製された細胞のＲＮＡ配列決定により、２５日目のｈＥＳＣ由来ＳＣＰは、初期ＮＣ細胞と密接に関連するが、５０日目、および特に１００日目のＳＣは、初代成体ヒトＳＣと密接に整合する遺伝子発現パターンを示すことが実証された（図１Ｇ）。遺伝子発現データにより、２５日目および１００日目の細胞を１１日目のＮＣと比較することによって、新規候補ＳＣＰおよびＳＣマーカーもまた得られた（図１Ｈ）。各系列についての上位２００の富化された転写物のリストは、表１〜４に提供される。
ｈＥＳＣ−ＳＣは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでニューロン成熟化およびミエリン形成を促進し、ｉｎ ｖｉｖｏで損傷したラット座骨神経に定着する
グリアの重要な機能は、ニューロンと相互作用してその機能を調節し、ミエリンを産生することである。本発明者らは、ｈＥＳＣ由来感覚ニューロン（Chambersら、２０１２年）と既に報告された方法（Calderら、２０１５年）を使用して生成した運動ニューロンとの同時培養を確立することによって、ｈＥＳＣ−ＳＣにおけるその能力を試験した（図２Ａ）。６０日目のＲＦＰ標識ｈＥＳＣ−ＳＣを、５０日目のＧＦＰ標識ｈＥＳＣ感覚ニューロンと混合し、同時培養の開始後７２時間モニターした。ＳＣは、神経線維と密に会合して整列し、このことはそれらが、軸索膜上に発現されるシグナル伝達の合図に適切に応答するために必要な受容体を有することを示している（図２Ｂ）。
ｈＥＳＣ由来系列における機能的成熟化の冗長なプロセスは、現在の分化系における主要な障害である。グリア細胞は、ｈＥＳＣ由来ＣＮＳ系列の同時培養においてニューロンの機能的成熟化を促進することが示されている（Tangら、２０１３年）。ｈＥＳＣ−ＳＣが、この問題を克服するために寄与できるか否かを評価するために、運動ニューロンの機能的成熟化に及ぼすその影響を調べた。本発明者らは、６０日目のｈＥＳＣ−ＳＣと２５日目のｈＥＳＣ由来運動ニューロンの同時培養システムを設定した。感覚ニューロンとの同時培養と同様に、ｈＥＳＣ−ＳＣは、ニューロン線維と整列する強い傾向を示した（図２Ｄ）。ｈＥＳＣ由来系列におけるヒト細胞成熟化の長いプロセスは、この分野における主要な障害である。星状細胞などのグリア細胞は、ｈＥＳＣ由来ＣＮＳニューロンの機能的成熟化を促進することが示されている（Tangら、２０１３年）。同時培養した運動ニューロンの機能的成熟化をモニターするために、カルシウムイメージングを、運動ニューロン分化の４０日目および７０日目（同時培養の開始の１５および５５日後）に実施した。同時培養したｈＥＳＣ由来運動ニューロンは、４０日目もの早期にグルタメートおよびＫＣｌ刺激に応答する能力を示したが、運動ニューロン単独の培養は、同じ時点でそのようなカルシウム応答を示さなかった（図２Ｅ−左のパネル）。同時培養した運動ニューロンのグルタメートおよびＫＣｌ刺激に対する反応性は、７０日目ではさらに増大し、運動ニューロン単独培養と比較して顕著に高かった（図２Ｅ−右のパネル）。
ｈＥＳＣ由来ＳＣがミエリンを形成することができるか否かを評価するために、本発明者らは、ｈＥＳＣ−ＳＣとｈＥＳＣ感覚ニューロンとの長期同時培養を確立し、特徴的なミエリン形成構造を、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）によって観察した（図２Ｃ）。これらの知見は、ｈＥＳＣ−ＳＣがミエリンを産生し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでニューロンの挙動を調節する能力を検証した。ＳＣはまた、損傷に応答した神経修復の促進においても重要な役割を果たすことが知られている（JessenおよびMirsky、２０１６年；Jessenら、２０１５年；Webberら、２０１１年）。これは主として、それらが損傷を受けた軸索における修復プロセスを誘導する栄養因子を分泌できることによる（Arthur-Farrajら、２０１２年；Bunge、１９９４年；Webberら、２０１１年）。ＳＣの移植は、脊髄挫傷モデルなどのいくつかの実験系において神経再生を増強することが証明されており（Lavdasら、２００８年；Rodriguesら、２０１２年；WiliamsおよびBunge、２０１２年；KocsisおよびBunge、２０１４年）；自家ＳＣがＳＣＩ患者において現在試験中である（ＮＣＴ０１７３９０２３；ＮＣＴ０２３５４６２５）。そのような細胞治療アプローチにおける主な障害は、表現型的に安定な初代ＳＣを大規模で得ることには限界があることである。ｈＥＳＣは、これらの再生応用のためにヒトＳＣの無限の代替供給源を提供する。ｈＥＳＣ−ＳＣの再生能の評価に向けての最初のステップとして、本発明者らは、座骨神経損傷のラットモデルに移植後にこれらの細胞が生存して定着することができるか否かを調べた。
このモデルにおいて、座骨神経を機械的に挫滅して、ｈＥＳＣ−ＳＣを損傷部位に直ちに注射した（図３Ａ）。移植したｈＥＳＣ−ＳＣは、ヒト特異的核マーカーＳＣ１０１に関して染色することによって、移植した神経において注射の８週間後に容易に検出可能であった（図３Ｂ）。移植したｈＥＳＣ−ＳＣは、宿主ニューロン線維と密に接触しており（図３Ｃ）、ＭＡＧおよびＰ０などのミエリンマーカーを発現した（図３Ｄ）。成熟ミエリン形成線維において、ナトリウムチャネルはランヴィエ絞輪に局在する。この領域は、軸索膜がＣＡＳＰＲと呼ばれる特定のタンパク質によってミエリン膜に結合しているドメインに隣接する。ＣＡＳＰＲ発現領域の隣には、カリウムチャネルを含む膜ドメインが存在する。ＲＦＰ標識ｈＥＳＣ−ＳＣに包まれた軸索におけるこれらのマーカーの発現を評価し、それらがその適切な膜ドメインに局在することを確認した（図３Ｅ）。これらの試験は、ｈＥＳＣ−ＳＣが、損傷した成体末梢神経において定着し、神経線維およびランヴィエ絞輪と適切に会合したミエリンを産生する能力を証明する。
併せて考慮すると、ｈＰＳＣ−ＳＣに関するこれらのｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ試験は、そのＳＣの同一性および機能を確認する。
考察
ＳＣは、末梢神経の発生、機能および修復において重要な役割を果たす。しかし、それらの発生および機能は、初代組織から実行可能な数でそれらを得ることにおける限界に起因して、ヒトではあまり理解されていない。他の研究者が、Ｐ７５＋／ＨＮＫ１＋ＮＣ前駆体の長期維持後のｈＰＳＣ由来のシュワン様細胞を以前に報告しているが（Leeら、２００７年）、これらの研究は、低い誘導効率、および数ヶ月間のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養、長引く分化、限定的なＳＣ成熟化、およびミエリン形成データの欠如という限界を有する（Leeら、２００７年；Liuら、２０１２年；Zieglerら、２０１１年）。他の研究者によるヒトＳＣを誘導するための試みもまた、低い収量、限定的な表現型の特徴付け、およびｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏミエリン形成の欠如を生じた（Liら、２０１５年；Micaら、２０１３年）。ヒトＳＣの十分特徴付けられた純粋な集団の生成のための高度に効率的なアプローチを樹立したが、これは、将来の徹底的な発生研究、および疾患モデル化などの橋渡し適用、ならびに細胞治療のためのお膳立てとなる。
本発明者らのｈＥＳＣベースのプラットフォームの重要な特色は、得られたＳＣの拡張性および純度、ならびにＳＣ特性を喪失することなしに延長された期間にわたって細胞を培養する能力である。対照的に、初代ＳＣは、延長された培養の際にそれらの特性を迅速に喪失する傾向があり、線維芽細胞様細胞によるシュワン細胞培養物の夾雑が増加していくことになる。この新規分化テクノロジーを使用してここで到達可能な重要な発生上の疑問には、多分化能性ＮＣ幹細胞から傾倒したＳＣへの移行を制御する機構、ならびにメラニン細胞および副交感ニューロンの両方が初期ＳＣ系列から誘導できることを示唆するマウスにおける最近のデータを考慮したヒトＳＣ可塑性の研究が含まれる（Adameykoら、２００９年；Espinosa-Medinaら、２０１４年）。傾倒したＳＣの前向き単離のための表面マーカーとしてのＣＤ９８の同定は、かかる研究のための強力なツールを提示する。本明細書に示すデータに基づき、ＳＣ媒介ニューロン成熟化およびミエリン形成に関する試験は、他の重点領域であるべきである。ＰＮＳ病理のモデル化は特に関心の対象となり得る。培養ｈＥＳＣ由来シュワン細胞の驚くべき特色は、シュワン細胞であることを確認するだけでなく、多能性由来細胞が成体シュワン細胞の発現パターンと整合することを示唆する、それらの遺伝子発現パターンである。これは、胎児段階のマーカーを発現するニューロンなどの、ほとんどの他のｉｎ ｖｉｔｒｏ誘導されたｈＰＳＣ系列とは対照的である（Studerら、２０１５年）。自家ＳＣは、ＰＮＳおよびＣＮＳ障害の両方を標的とする再生医療での応用に関して現在試験中である（Lavdasら、２００８年；Rodriguesら、２０１２年）。移植のデータは、外傷性神経損傷モデルにおけるｈＥＳＣ−ＳＣの強力な定着を証明する。本明細書に示す結果は、脊髄損傷を含む再生医療におけるｈＥＳＣ−ＳＣの応用に関して確固たる基礎を築く。
ＳＣの規模拡大可能な集団を利用できることは、初期神経新生前駆体から、分化方向が決定されたグリア新生相への移行およびミエリン形成細胞ステージへのさらなる進行などのヒトＳＣ発達における積年の問題を調べるための新たな道筋を開く。ｈＰＳＣ−ＳＣはまた、ＰＮＳにおける神経機能の調節および成熟化におけるグリアの役割を決定するために使用することができる。不良なニューロン成熟化は、最新のｈＰＳＣに基づく分化プロトコールの限界である。ＳＣはまた、ＰＮＳおよびＣＮＳにおける再生医療において様々な応用のために利用されている（Lavdasら、２００８年；Rodriguesら、２０１２年）。ヒトＳＣの大規模産生および成体損傷神経におけるその定着能は、再生医療におけるその応用の基礎を確立する。
結論として、この研究は、健康および疾患におけるそれらの生物学を探索し、ＤＰＮに対する新規治療を開発するためにヒトＳＣ系列を入手するための有効な枠組みを提示する。ｈＰＳＣの方向付けられた分化は、基礎研究および橋渡し研究において広い意義を有する、ヒトＳＣの大規模誘導のための有効なアプローチを提示する。この枠組みは、ＰＮＳの生物学および疾患におけるグリアの役割の徹底的な研究のための新たな可能性を提供し、将来的な末梢神経障害に対する新規治療剤の開発に寄与する。本研究によって、再生医療およびヒト疾患モデリングにおける応用に関してヒトＳＣに基づく試験が日常的となるはずである。
参考文献
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Claims (287)

  1. 幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
  2. 前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である、請求項４に記載の方法。
  6. 前記細胞を１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  7. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項６に記載の方法。
  8. 前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、請求項７に記載の方法。
  9. 前記細胞と前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、請求項６から８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップを含む、請求項６から９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 幹細胞の前記集団が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２５日後またはそれ以降に、前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団へと分化する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記幹細胞を１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記細胞とＷｎｔシグナル伝達の前記１種または複数の活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記細胞とＷｎｔシグナル伝達の前記１種または複数の活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触と同じ日である、請求項１４に記載の方法。
  17. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、請求項６から２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記ヒト幹細胞が、ヒト胚性幹細胞、ヒト誘導多能性幹細胞、ヒト単為生殖幹細胞、始原胚細胞様多能性幹細胞、エピブラスト幹細胞、Ｆクラス多能性幹細胞からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
  31. 分化した細胞の前記集団を、前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップを含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記分化した細胞のシュワン細胞の前記集団への成熟化を支持する前記条件が、前記分化した細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む、請求項３１に記載の方法。
  33. 分化したＳＣ前駆体細胞の集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項３２に記載の方法。
  34. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、請求項３３に記載の方法。
  36. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させるステップをさらに含む、請求項３１から３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項３６に記載の方法。
  38. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項３７に記載の方法。
  39. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、請求項３７に記載の方法。
  40. 分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させるステップを含む、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記分化した細胞のシュワン細胞の前記集団への成熟化を支持する前記条件が、前記分化した細胞を１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させることを含む、請求項３１から４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、請求項３６から４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、請求項４２に記載の方法。
  44. 分化した細胞の前記集団を３Ｄスフェロイドへと凝集させるステップ；ならびに前記３Ｄスフェロイドを、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させステップを含む、請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記３Ｄスフェロイドを接着培養で培養するステップをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
  46. シュワン細胞の前記集団が、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する、請求項３１から４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される１つまたは複数のシュワン細胞マーカーである、請求項４６に記載の方法。
  48. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が
    幹細胞の集団を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤および１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、ならびに
    幹細胞の前記集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップ
    の後に幹細胞の集団から誘導される、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団。
  49. 前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させる、請求項４８に記載の分化した細胞の集団。
  50. 前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である、請求項４８または４９に記載の分化した細胞の集団。
  51. 細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、請求項４９に記載の分化した細胞の集団。
  52. 前記細胞と前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１１日後である、請求項４９に記載の分化した細胞の集団。
  53. 前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤とさらに接触させる、請求項４８から５２のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  54. 前記細胞を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させる、請求項５３に記載の分化した細胞の集団。
  55. 前記細胞と前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、請求項５３または５４に記載の分化した細胞の集団。
  56. 前記細胞を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時にさらに接触させる、請求項５３から５５のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  57. 幹細胞の前記集団が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２５日後またはそれ以降に、前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団へと分化する、請求項４８から５６のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  58. 幹細胞の前記集団を、１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤とさらに接触させる、請求項４８から５７のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  59. 幹細胞の前記集団を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させる、請求項５８に記載の分化した細胞の集団。
  60. 前記細胞とシグナル伝達の前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、請求項４８から５９のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  61. 細胞とシグナル伝達の前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である、請求項６０に記載の分化した細胞の集団。
  62. 細胞とシグナル伝達の前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触と同じ日である、請求項６０に記載の分化した細胞の集団。
  63. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項４８から６３のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  64. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、請求項６３に記載の分化した細胞の集団。
  65. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項５８から６４のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  66. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、請求項６５に記載の分化した細胞の集団。
  67. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、請求項４８から６６のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  68. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、請求項６７に記載の分化した細胞の集団。
  69. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項６８に記載の分化した細胞の集団。
  70. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、請求項５３から６９のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  71. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、請求項７０に記載の分化した細胞の集団。
  72. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項４８から７１のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  73. 前記１種のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、請求項７２に記載の分化した細胞の集団。
  74. 前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項４８から７３のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  75. 前記幹細胞がヒト幹細胞である、請求項４８から７４のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  76. 前記ヒト幹細胞が、ヒト多能性幹細胞である、請求項７５に記載の分化した細胞の集団。
  77. 前記ヒト幹細胞が、ヒト胚性幹細胞、ヒト誘導多能性幹細胞、ヒト単為生殖幹細胞、始原胚細胞様多能性幹細胞、エピブラスト幹細胞およびＦクラス多能性幹細胞からなる群から選択される、請求項７５に記載の分化した細胞の集団。
  78. １つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させた後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の集団から誘導される、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団。
  79. 前記分化した細胞の集団が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させた後に、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団から誘導される、請求項７８に記載の分化した細胞の集団。
  80. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、請求項７８または７９に記載の分化した細胞の集団。
  81. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、請求項８０に記載の分化した細胞の集団。
  82. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させる、請求項７８から８１のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  83. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させる、請求項８２に記載の分化した細胞の集団。
  84. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させる、請求項８２に記載の分化した細胞の集団。
  85. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたって接触させる、請求項７８から８４のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  86. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたって接触させる、請求項８５に記載の分化した細胞の集団。
  87. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する請求項４８から７７のいずれか一項に記載の細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させる、請求項８５に記載の分化した細胞の集団。
  88. 前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される１つまたは複数のシュワン細胞マーカーである、請求項７７から８７のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  89. 請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物。
  90. 請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物。
  91. 対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置する方法であって、シュワン細胞関連障害に罹患している対象に有効量の以下：
    （ａ）請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団；
    （ｂ）請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物；
    （ｃ）請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団；および
    （ｄ）請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物
    のうちの１つを投与するステップを含む、方法。
  92. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項９１に記載の方法。
  93. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項９１または９２に記載の方法。
  94. 対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団。
  95. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項９４に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団。
  96. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項９５に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団。
  97. 対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物。
  98. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項９７に記載の組成物。
  99. 前記末梢神経障害が、糖尿病性末梢神経障害である、請求項９８に記載の組成物。
  100. 対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団。
  101. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項１００に記載のシュワン細胞の集団。
  102. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項１０１に記載のシュワン細胞の集団。
  103. 対象におけるシュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物。
  104. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項１０３に記載の組成物。
  105. 前記末梢神経障害が、糖尿病性末梢神経障害である、請求項１０４に記載の組成物。
  106. シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造における請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団の使用。
  107. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項１０６に記載の使用。
  108. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項１０７に記載の使用。
  109. シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造における請求項４８から７７のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物の使用。
  110. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項１０９に記載の使用。
  111. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項１１０に記載の使用。
  112. シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造における請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団の使用。
  113. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項１１２に記載の使用。
  114. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項１１３に記載の使用。
  115. シュワン細胞関連障害を予防および／または処置するための医薬の製造における請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物の使用。
  116. 前記シュワン細胞関連障害が末梢神経障害である、請求項１１５に記載の使用。
  117. 前記末梢神経障害が糖尿病性末梢神経障害である、請求項１１６に記載の使用。
  118. 幹細胞の分化を誘導するためのキットであって、
    ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤
    １種または複数のＷｎｔ活性化因子、および
    １種または複数のＦＧＦ活性化因子
    を含む、キット。
  119. 前記幹細胞の、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団への分化を誘導するための説明書を含み、前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１１８に記載のキット。
  120. 前記説明書が、前記細胞を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１１９に記載のキット。
  121. 前記説明書が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から約２０日以内に、前記細胞を前記１種または複数の１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最初に接触させるステップを含む、請求項１１９から１２０のいずれか一項に記載のキット。
  122. 前記細胞と前記１種または複数の１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、請求項１２１に記載のキット。
  123. 前記細胞と、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子との最初の接触が、前記細胞と、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から１１日後である、請求項１２０２に記載のキット。
  124. １種または複数のＳＣ分化誘導剤をさらに含む、請求項１１８から１２３のいずれか一項に記載のキット。
  125. 前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップを含む、請求項１２４に記載のキット。
  126. 前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたってさらに接触させるステップを含む、請求項１２５に記載のキット。
  127. 前記細胞と前記１種または複数の１種または複数のＳＣ分化誘導剤との最初の接触が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触から約１０日後と約１５日後との間である、請求項１２４から１２６のいずれか一項に記載のキット。
  128. 前記説明書が、前記細胞を前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップを含む、請求項１２４から１２７のいずれか一項に記載のキット。
  129. １種または複数のＳＭＡＤ阻害剤をさらに含む、請求項１１８から１２８のいずれか一項に記載のキット。
  130. 前記説明書が、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、請求項１２９に記載のキット。
  131. 前記説明書が、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む、請求項１３０に記載のキット。
  132. 前記説明書が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内に、前記細胞を前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子と最初に接触させるステップを含む、請求項１１８から１３１のいずれか一項に記載のキット。
  133. 前記説明書が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後に、前記細胞を前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子と最初に接触させるステップを含む、請求項１３２に記載のキット。
  134. 前記説明書が、前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触と同じ日に、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤と最初に接触させるステップを含む、請求項１３２に記載のキット。
  135. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項１１８から１３４のいずれか一項に記載のキット。
  136. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、請求項１３５に記載のキット。
  137. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項１２９から１３６のいずれか一項に記載のキット。
  138. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、請求項１３７に記載のキット。
  139. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、請求項１１８から１３８のいずれか一項に記載のキット。
  140. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、請求項１３９に記載のキット。
  141. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項１４０に記載のキット。
  142. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、請求項１２４から１４１のいずれか一項に記載のキット。
  143. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、請求項１４２に記載のキット。
  144. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１１８から１４３のいずれか一項に記載のキット。
  145. 前記１種のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、請求項１４４に記載のキット。
  146. １種または複数のＳＣ分化増強剤、および前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための説明書をさらに含む、請求項１１８から１４５のいずれか一項に記載のキット。
  147. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、請求項１４６に記載のキット。
  148. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、請求項１４７に記載のキット。
  149. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、前記分化した細胞を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させるステップを含む、請求項１４６から１４８のいずれか一項に記載のキット。
  150. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１４９に記載のキット。
  151. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１４９に記載のキット。
  152. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１５０に記載のキット。
  153. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させるステップをさらに含む、請求項１４６から１５１のいずれか一項に記載のキット。
  154. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項１５３に記載のキット。
  155. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１４日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項１５４に記載のキット。
  156. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項１５４に記載のキット。
  157. 前記分化した細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を誘導するための前記説明書が、分化したＳＣ前駆体細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させるステップを含む、請求項１５３から１５６のいずれか一項に記載のキット。
  158. 幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞の集団を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、および幹細胞の前記集団を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させて、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するステップを含み、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
  159. 前記細胞と、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、請求項１５８に記載の方法。
  160. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させる、ステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、請求項１５８または１５９に記載の方法。
  161. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する分化した細胞の集団を産生するために、前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と同時に少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞と、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、請求項１６０に記載の方法。
  162. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が、幹細胞の集団をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップの後に幹細胞の集団から誘導され、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤および前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２０日以内である、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団。
  163. 前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、請求項１６２に記載の分化した細胞の集団。
  164. 前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、請求項１６２または１６３に記載の分化した細胞の集団。
  165. 前記細胞を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と同時に少なくとも約３日間、約３日間と約２０日間との間、約１０日間と約２０日間との間、または約１０日間と約１５日間との間、さらに接触させるステップをさらに含み、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と前記細胞との最初の接触が、前記幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約１０日以内である、請求項１６４に記載の方法。
  166. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、神経堤系列細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と接触させるステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
  167. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間接触させるステップを含む、請求項１６６に記載の方法。
  168. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１６６または１６７に記載の方法。
  169. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約５日間と約１５日間との間、接触させるステップを含む、請求項１６６から１６８のいずれか一項に記載の方法。
  170. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１６９に記載の方法。
  171. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む、請求項１６６から１７０のいずれか一項に記載の方法。
  172. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項１７１に記載の方法。
  173. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と最長約３０日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項１７１または１７２に記載の方法。
  174. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項１７１から１７３のいずれか一項に記載の方法。
  175. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップをさらに含む、請求項１７１から１７４のいずれか一項に記載の方法。
  176. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達の活性化に関してグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、請求項１６６から１７５のいずれか一項に記載の方法。
  177. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、請求項１７６に記載の方法。
  178. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項１７７に記載の方法。
  179. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、請求項１７１から１７８のいずれか一項に記載の方法。
  180. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、請求項１７９に記載の方法。
  181. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１６６から１８０のいずれか一項に記載の方法。
  182. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、請求項１８１に記載の方法。
  183. 前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項１６６から１８２のいずれか一項に記載の方法。
  184. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップを含む、請求項１６６から１８３のいずれか一項に記載の方法。
  185. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む、請求項１８４に記載の方法。
  186. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１８５に記載の方法。
  187. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１８６に記載の方法。
  188. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、請求項１８６に記載の方法。
  189. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と接触させることをさらに含む、請求項１８４から１８８のいずれか一項に記載の方法。
  190. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させるステップを含む、請求項１８９に記載の方法。
  191. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約１０日間にわたってさらに接触させるステップを含む、請求項１９０に記載の方法。
  192. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３５日間にわたってさらに接触させるステップを含む、請求項１９１に記載の方法。
  193. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させるステップを含む、請求項１８９から１９２のいずれか一項に記載の方法。
  194. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、請求項１８９から１９３のいずれか一項に記載の方法。
  195. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、請求項１９４に記載の方法。
  196. シュワン細胞の前記集団が、１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する、請求項１８４から１９５のいずれか一項に記載の方法。
  197. 前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＥＲＢＢ３、ＧＡＰ４３、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択されるシュワン細胞マーカーからなる群から選択される、請求項１９６に記載の方法。
  198. 前記神経堤系列マーカーが、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される、請求項１６６から１９７のいずれか一項に記載の方法。
  199. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現するｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団であって、前記分化した細胞の集団が、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間、最長約３０日間、または約５日間と約１５日間との間、接触させた後に神経堤系列細胞の集団から誘導される、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団。
  200. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と１４日間にわたって接触させる、請求項１９９に記載の分化した細胞の集団。
  201. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤とさらに接触させる、請求項１９９または２００に記載の分化した細胞の集団。
  202. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間、最長約３０日間、または約５日間と約１５日間との間、さらに接触させる、請求項２０１に記載の分化した細胞の集団。
  203. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたってさらに接触させる、請求項２０２に記載の分化した細胞の集団。
  204. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させる、請求項１９９から２０３のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  205. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＷｎｔシグナル伝達を活性化するためにグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、請求項１９９から２０４のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  206. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、請求項２０５に記載の分化した細胞の集団。
  207. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項２０６に記載の分化した細胞の集団。
  208. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、請求項２０１から２０７のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  209. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、請求項２０８に記載の分化した細胞の集団。
  210. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１９９から２０９のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  211. 前記１種のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、請求項２１０に記載の分化した細胞の集団。
  212. 前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項１９９から２１１のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  213. 前記神経堤系列マーカーが、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される、請求項１９９から２１２のいずれか一項に記載の分化した細胞の集団。
  214. 幹細胞の分化を誘導するｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞の集団を１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団にｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させるステップ、および１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、分化した細胞を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と接触させるステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法。
  215. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項２１４に記載の方法。
  216. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と最長約３０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項２１５に記載の方法。
  217. 前記分化した細胞を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約５日と約１５日間との間、または約１０日間と１５日間との間、接触させるステップを含む、請求項２１６に記載の方法。
  218. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子および１種または複数のＦＧＦ活性化因子と約１４日間にわたって接触させるステップを含む、請求項２１７に記載の方法。
  219. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と接触させるステップをさらに含む、請求項２１４から２１８のいずれか一項に記載の方法。
  220. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項２１９に記載の方法。
  221. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と最長約３０日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項２２０に記載の方法。
  222. １つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化誘導剤と約１４日間にわたって接触させるステップをさらに含む、請求項２２１に記載の方法。
  223. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の集団を産生するために、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＷｎｔ活性化因子、１種または複数のＦＧＦ活性化因子、および１種または複数のＳＣ分化誘導剤と同時に接触させるステップを含む、請求項２１４から２２２のいずれか一項に記載の方法。
  224. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、Ｗｎｔシグナル伝達を活性化するためにグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）を低下させる、請求項２１４から２２３のいずれか一項に記載の方法。
  225. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される低分子である、請求項２２４に記載の方法。
  226. 前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子がＣＨＩＲ９９０２１である、請求項２２５に記載の方法。
  227. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤が、ニューレグリン、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、フォルスコリン、ＴＧＦβ、およびＦＢＳからなる群から選択される、請求項２１９から２２６のいずれか一項に記載の方法。
  228. 前記１種または複数のＳＣ分化誘導剤がＮＲＧ１である、請求項２２７に記載の方法。
  229. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、それらの誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２１４から２２８のいずれか一項に記載の方法。
  230. 前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子がＦＧＦ２である、２２９に記載の方法。
  231. 前記１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項２１４から２３０のいずれか一項に記載の方法。
  232. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記細胞のシュワン細胞の集団への成熟化を支持する条件に供するステップを含む、請求項２１４から２３１のいずれか一項に記載の方法。
  233. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＦＧＦ活性化因子および１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と接触させることを含む、請求項２３２に記載の方法。
  234. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と少なくとも約３日間にわたって接触させるステップを含む、請求項２３３に記載の方法。
  235. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約１０日間にわたって接触させるステップを含む、請求項２３４に記載の方法。
  236. １つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子および前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤と約３５日間にわたって接触させるステップを含む、請求項２３４に記載の方法。
  237. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤とさらに接触させることを含む、請求項２３２から２３６のいずれか一項に記載の方法。
  238. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、１種または複数のＳＣ分化増強剤と少なくとも約３日間にわたってさらに接触させることを含む、請求項２３７に記載の方法。
  239. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約１０日間にわたってさらに接触させることを含む、請求項２３８に記載の方法。
  240. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を１種または複数のＳＣ分化増強剤と約３５日間にわたってさらに接触させることを含む、請求項２３８に記載の方法。
  241. 前記条件が、１つまたは複数のシュワン細胞前駆体マーカーを発現する細胞の前記集団を、前記１種または複数のＦＧＦ活性化因子、前記１種または複数のシュワン細胞分化誘導剤、および前記１種または複数のＳＣ分化増強剤と同時に接触させることを含む、請求項２３７から２４０のいずれか一項に記載の方法。
  242. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤が、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）、フォルスコリン、ＬＩＦ、およびＣＮＴＦからなる群から選択される、請求項２３７から２４１のいずれか一項に記載の方法。
  243. 前記１種または複数のＳＣ分化増強剤がｃＡＭＰである、請求項２４２に記載の方法。
  244. シュワン細胞の前記集団が１つまたは複数のシュワン細胞マーカーを発現する、請求項２３２から２４３のいずれか一項に記載の方法。
  245. 前記１つまたは複数のシュワン細胞マーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＧＦＡＰ、ＥＲＢＢ３、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される、請求項２４４に記載の方法。
  246. 前記幹細胞集団の、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団へのｉｎ ｖｉｔｒｏ分化が、ＳＭＡＤシグナル伝達を阻害するステップおよびＷｎｔシグナル伝達を活性化するステップを含む、請求項２１３から２４５のいずれか一項に記載の方法。
  247. 前記幹細胞集団の、１つまたは複数の神経堤系列マーカーを発現する細胞の集団へのｉｎ ｖｉｔｒｏ分化が、前記幹細胞をＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の１種または複数の阻害剤と接触させるステップ、および前記細胞を１種または複数のＷｎｔ活性化因子と接触させるステップを含む、請求項２１４から２４６のいずれか一項に記載の方法。
  248. 幹細胞の前記集団を１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、請求項２４７に記載の方法。
  249. 前記幹細胞を、ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤および前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤と同時に接触させるステップを含む、請求項２４８に記載の方法。
  250. 前記細胞と前記１種または複数のＷｎｔ活性化因子との最初の接触が、幹細胞の前記集団とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約４日以内である、請求項２４７から２４９のいずれか一項に記載の方法。
  251. 前記細胞とＷｎｔシグナル伝達の前記１種または複数の活性化因子との最初の接触が、幹細胞とＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤との最初の接触から約２日後である、請求項２５０に記載の方法。
  252. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項２４７から２５１のいずれか一項に記載の方法。
  253. ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナル伝達の前記１種または複数の阻害剤がＳＢ４３１５４２である、請求項２５２に記載の方法。
  254. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体、およびその混合物からなる群から選択される低分子である、請求項２４８から２５３のいずれか一項に記載の方法。
  255. 前記１種または複数のＳＭＡＤ阻害剤がＬＤＮ１９３１８９である、請求項２５４に記載の方法。
  256. 前記神経堤系列マーカーが、ＳＯＸ１０、ｐ７５、ＨＮＫ１、ＣＤ４９Ｄ、ＥＲＢＢ３、ＴＦＡＰ２、ＳＮＡＩＬ、およびＳＬＵＧからなる群から選択される、請求項２１４から２５５のいずれか一項に記載の方法。
  257. 対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生する方法であって、対象に有効量の以下：
    （ａ）請求項４８から７７および１９７から２１１のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団；
    （ｂ）請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物；
    （ｃ）請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団；および
    （ｄ）請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物
    のうちの１つを投与するステップを含む、方法。
  258. 対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団。
  259. 対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物。
  260. 対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団。
  261. 対象におけるＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物。
  262. ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団の使用。
  263. ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物の使用。
  264. ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団の使用。
  265. ＰＮＳおよび／またはＣＮＳを再生するための医薬の製造における、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物の使用。
  266. 対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置する方法であって、対象に有効量の以下：
    （ａ）請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団；
    （ｂ）請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物；
    （ｃ）請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団；および
    （ｄ）請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物
    のうちの１つを投与するステップを含む、方法。
  267. 対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団。
  268. 対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物。
  269. 対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団。
  270. 対象におけるミエリン損傷を予防および／または処置するための、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物。
  271. ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団の使用。
  272. ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、請求項４８から７７および１９９から２１３のいずれか一項に記載の分化したシュワン細胞前駆体の集団を含む組成物の使用。
  273. ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団の使用。
  274. ミエリン損傷を予防および／または処置するための医薬の製造における、請求項７８から８８のいずれか一項に記載のシュワン細胞の集団を含む組成物の使用。
  275. ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を含む組成物であって、細胞の前記集団の少なくとも約５０％が１つまたは複数のＳＣ前駆体マーカーを発現し、細胞の前記集団の約２５％未満が、幹細胞マーカー、ＣＮＳマーカー、神経細胞マーカー、および間葉前駆体マーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物。
  276. 前記１つまたは複数のＳＣ前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項２７５に記載の組成物。
  277. 前記幹細胞マーカーが、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＳＥＡ４、およびＳＳＥＡ３からなる群から選択される、請求項２７５または２７６に記載の組成物。
  278. 前記ＣＮＳマーカーが、ＰＡＸ６、ＮＥＳＴＩＮ、およびＳＯＸ１からなる群から選択される、請求項２７５から２７７のいずれか一項に記載の組成物。
  279. 前記神経細胞マーカーが、ＴＵＪ１、ＭＡＰ２、ＮＦＨ、ＢＲＮ３Ａ、ＩＳＬ１、ＴＨ、ＡＳＣＬ１、ＣＨＡＴ、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＨＯＸ２Ａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、およびＴＲＫＣからなる群から選択される、請求項２７５から２７８のいずれか一項に記載の組成物。
  280. 前記間葉前駆体マーカーが、ＳＭＡおよびＣＤ７３からなる群から選択される、請求項２７５から２７９のいずれか一項に記載の組成物。
  281. ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化した細胞の集団を含む組成物であって、細胞の前記集団の少なくとも約５０％が１つまたは複数のＳＣマーカーを発現し、細胞の約２５％未満が、ＳＣ前駆体マーカー、幹細胞マーカー、ＣＮＳマーカー、神経細胞マーカー、および間葉前駆体マーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物。
  282. 前記１つまたは複数のＳＣマーカーが、ＬＲＲＴＭ４、ＣＤＨ１、ＦＡＢＰ７、ＢＤＮＦ、ＵＮＣＢ５、ＳＯＳＴＤＣ１、ＯＬＩＧ１、ＰＬＡＴ、ＫＣＮＪ１０、ＳＨＨ、ＮＴＮ１、ＧＤＮＦ、ＳＯＸ１０、Ｓ１００、ＧＦＡＰ、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＭＰ２２、ＭＢＰ、ＡＱＰ４、ＭＰＺ、ＧＦＡＰ、ＥＲＢＢ３、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ９８、ＣＤ４９Ｅ、ＣＤ４９Ｄ、ＮＧＦＲ、ＮＦＡＴＣ４、ＭＯＧ、ＩＦＮＧ、ＭＡＬ、ＮＴＦ３、ＴＧＦＢ１、ＴＹＲＰ１、ＥＮＴＨＤ１、ＮＴ５Ｅ、ＨＴＲ２Ｂ、ＮＯＶ、ＩＬ８、ＳＬＣ１６Ａ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＬＰ２、Ｓ１００Ａ６、ＡＱＰ９、およびＣＤＨ１９からなる群から選択される、請求項２８１に記載の組成物。
  283. 前記ＳＣ前駆体マーカーが、ＳＯＸ１０、ＧＡＰ４３、ＢＬＢＰ、ＭＰＺ、Ｄｈｈ、Ｐ７５ＮＴＲ、ＣＤ４９Ｄ、ＴＦＡＰ２、ＣＤＨ１９、ＣＤ４４、ＥＲＢＢ３、ＰＯＵ３Ｆ１、ＧＦＡＰ、ＣＡＬＣＢ、ＧＲＰ１１６、ＴＳＰＹＬ５、ＩＴＰＫＡ、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＹＰＬ２、ＬＯＣ１００１２８２５２、ＡＮＧＰＴＬ７、ＬＯＣ７２８９７８、ＺＮＦ５０２、ＳＬＣ１６Ａ６、ＬＰＬ、ＳＬＣ３０Ａ２、およびＳＬＣ１０Ａ４からなる群から選択される、請求項２８１または２８２に記載の組成物。
  284. 前記幹細胞マーカーが、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＳＥＡ４、およびＳＳＥＡ３からなる群から選択される、請求項２８１から２８３のいずれか一項に記載の組成物。
  285. 前記ＣＮＳマーカーが、ＰＡＸ６、ＮＥＳＴＩＮ、およびＳＯＸ１からなる群から選択される、請求項２８１から２８４のいずれか一項に記載の組成物。
  286. 前記神経細胞マーカーが、ＴＵＪ１、ＭＡＰ２、ＮＦＨ、ＢＲＮ３Ａ、ＩＳＬ１、ＴＨ、ＡＳＣＬ１、ＣＨＡＴ、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＨＯＸ２Ａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、およびＴＲＫＣからなる群から選択される、請求項２８１から２８５のいずれか一項に記載の組成物。
  287. 前記間葉前駆体マーカーが、ＳＭＡおよびＣＤ７３からなる群から選択される、請求項２８１から２８６のいずれか一項に記載の組成物。
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