JP2019531743A5

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Publication number: JP2019531743A5
Application number: JP2019520742A
Authority: JP
Filing date: 2017-10-19
Publication date: 2020-11-12
Anticipated expiration: 2037-10-19

Claims

細胞免疫療法用の操作された免疫細胞を調製するための方法であって、
免疫細胞の集団を提供する工程；
該免疫細胞のある割合中に、
(i）該免疫細胞集団の治療的可能性を改善する少なくとも1種類の分子をコードするように、選択された内在性遺伝子座に組み込まれる、外来性のヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列を含む、少なくとも1種類の核酸；
(ii）該選択された内在性遺伝子座を特異的に標的とする、少なくとも1種類の配列特異的試薬
を導入する工程
を含み、該外来性のヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列が、該内在性遺伝子座に存在する内在性プロモーターの転写制御下に外来性コード配列を形成するように、該内在性遺伝子座中への標的指向遺伝子組込みによって挿入され、
前記内在性プロモーターの転写活性が、免疫細胞活性化時に上方制御される、前記方法。
前記配列特異的試薬が配列特異的エンドヌクレアーゼ試薬である、請求項1に記載の方法。
前記外来性コード配列によってコードされる前記分子が、RNAiなどのRNA転写物、または、機能的タンパク質などのポリペプチドである、請求項1または2に記載の方法。
前記免疫細胞の集団の治療的可能性活性を改善する前記分子が、薬物に対する免疫細胞の耐性を付与し、免疫細胞の残存性（インビボもしくはインビトロにおいて）またはその安全性を増加させる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
前記外来性配列が、
サイトカイン受容体、薬物に対する耐性を付与するタンパク質、または、阻害性ペプチドもしくはタンパク質に向けられる分泌型抗体、例えば抗IDO1、抗IL10、抗PD1、抗PDL1、抗IL6、もしくは抗PGE2抗体から選択される免疫細胞の残存性を増強する分子；
ケモカインまたはサイトカイン、例えば、IL-2、IL-12、およびIL-15；
腫瘍関連マクロファージ（TAM）の分泌型阻害物質、例えば、CCR2/CCL2中和物質；
キメラ抗原受容体（CAR）の構成要素、例えば、所与の細胞タイプに対する免疫細胞の改善された特異性に寄与する阻害性CAR；または
シクロホスファミドおよび／またはイソホスファミドなどの薬物に対する前記免疫細胞の高感受性を付与する、シトクロムP450、CYP2D6-1、CYP2D6-2、CYP2C9、CYP3A4、CYP2C19、またはCYP1A2
をコードする、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
前記内在性プロモーターがT細胞において誘導され、CCR7、CD2、CD3、CD4、CD8、CD28、CD45、CD96、CD229/SLAMF3、DNAM-1/CD226、CD25/IL-2 Rα、L-セレクチン/CD62L、およびTIGITの中で選択される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
前記内在性プロモーターがNK細胞において誘導され、CD161、CD229/SLAMF3、CD96、DNAM-1/CD226、FcγRII/CD32、FcγRII/RIII（CD32/CD16）、FcγRIII（CD16）、IL-2 Rβ、インテグリンα2/CD49b、KIR/CD158、NCAM-1/CD56、NKG2A/CD159a、NKG2C/CD159c、NKG2D/CD314、NKp30/NCR3、NKp44/NCR2、NKp46/NCR1、NKp80/KLRF1、Siglec-7/CD328、およびTIGITの中で選択される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
前記内在性プロモーターの前記転写活性が、免疫細胞活性化時に一過性である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
前記プロモーターが、
a) 免疫細胞活性化時に12時間未満にわたって上方制御され、前記遺伝子が、Spata6、Itga6、Rcbtb2、Cd1d1、St8sia4、Itgae、およびFam214aから選択される、
b) 免疫細胞活性化時に24時間未満にわたって上方制御され、前記遺伝子が、IL3、IL2、Ccl4、IL21、Gp49a、Nr4a3、Lilrb4、Cd200、Cdkn1a、Gzmc、Nr4a2、Cish、Ccr8、Lad1、およびCrabp2から選択される、または
c) 免疫細胞活性化時に24時間超にわたって上方制御され、前記遺伝子が、Gzmb、Tbx21、Plek、Chek1、Slamf7、Zbtb32、Tigit、Lag3、Gzma、Wee1、IL12rb2、Eea1、およびDtlから選択される、
請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
キメラ抗原受容体（CAR）または改変TCRが、トランスフェクトされた免疫細胞において独立して発現している、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
前記内在性プロモーター活性が、トランスフェクトされた免疫細胞中で発現する前記CARに依存している、請求項10に記載の方法。
免疫細胞中に導入される外来性配列の前または後に、前記内在性遺伝子の少なくとも一部と共に該外来性コード配列の転写を可能にするための2Aペプチドをコードする配列がある、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
外来性配列が、
TGFb、TGFbR、IL-10、IL-10R、GCN2、またはPRDM1から選択される抑制性サイトカイン、キナーゼ、またはそれらの受容体をコードする内在性ゲノム配列；
PD1、PDL1、CTLA4、TIM3、またはLAG3から選択される免疫チェックポイントとして作用するタンパク質をコードする内在性ゲノム配列；または
DCK、HPRT、またはGGHから選択されるプロドラッグを活性化する酵素をコードする内在性ゲノム配列、
などの、前記遺伝子中に最初に存在している少なくとも1種類の内在性ゲノム配列の発現を不活性化する効果を伴って導入される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
前記免疫細胞が、初代T細胞またはNK細胞である、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法によって取得可能である、操作された免疫細胞。
内在性遺伝子プロモーターの転写制御下に外来性コード配列を含む、操作された免疫細胞であって、前記内在性遺伝子プロモーターが、表6に列挙されるものの中で選択される、操作された免疫細胞。
前記免疫細胞が、初代T細胞またはNK細胞である、請求項15または16のいずれか一項に記載の操作された免疫細胞。
前記初代細胞がキメラ抗原受容体を与えられている、請求項15〜17のいずれか一項に記載の操作された免疫細胞。
少なくとも30％、好ましくは50％、より好ましくは80％の、請求項15〜18のいずれか一項に記載の細胞を含む、治療上有効な免疫細胞の集団。
請求項15〜19のいずれか一項に記載の操作された免疫細胞または免疫細胞集団を含む、薬学的組成物。
がんの処置のための医薬の製造における請求項15〜18のいずれか一項に記載の操作された免疫細胞または請求項19に記載の免疫細胞集の使用。