JP2019526258A

JP2019526258A - 脱毛症防止、発毛促進または性機能改善能を有するリューコノストック・ホルザプフェリイ菌株及びこれを含む組成物

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Publication number: JP2019526258A
Application number: JP2019511768A
Authority: JP
Inventors: キュジンヨム
Original assignee: コエンバイオカンパニーリミテッド
Priority date: 2016-08-30
Filing date: 2017-04-28
Publication date: 2019-09-19
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Also published as: CN110225969A; WO2018043864A1; EP3508568A4; EP3508568A1; EP3508568B1; KR101734960B1; JP6986067B2; CN110225969B; US20230167402A1

Abstract

【課題】本発明は、脱毛症防止、発毛促進または性機能改善能を有する、新規な菌株及びこれを含む組成物に関するものである。【選択図】図１

Description

本発明は、脱毛症防止、発毛促進または性機能改善能を持つ新規な菌株及びこれを含む組成物に関するものである。

牛乳が発酵して乳酸を生成する乳酸菌は、腸内有害菌の増殖を抑制して有益菌の増殖を促進し腸内のバランスを整えることで、人間の体の自然治癒力を高める役割をする。また、便秘や胃腸機能の改善、体内の免疫機能の活性化と抗がん効果、疲労回復、皮下脂肪の減少およびコレステロールの低下、ダイエット、アトピーなどの皮膚病の症状を緩和、老化抑制、二日酔いの解消など、乳酸菌に関する様々な先行研究などを通じて多数の効果が実証されてきた。

現代社会における脱毛症患者は急激に増加しており、脱毛症対策が必要な対象者の６割が２０〜３０代と、脱毛症になる年齢層が低くなりつつある。韓国では、脱毛症に苦しむ患者数が約一千万人に達すると推定され、それによる社会経済的な問題が台頭し、深刻度を増している。

脱毛症の症状が重くなればなるほどうつ病や不安になりやすく、ストレスを知覚しやすく、人間関係や異性とのお付き合いを苦手に思いやすく、家庭円満ではないことが多いと報告されており、保健学分野から注目されている。

脱毛症の原因は未だ解明されていないが、症状を引き起こす可能性があるものとして、遺伝的要因、ホルモン異常、免疫学的異常などによる原因が報告されている。

現在、脱毛症治療剤として、米国のＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）の承認を取得した経皮塗布用ミノキシジル（Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）と経口投与用のＦｉｎａｓｔｅｒｉｄｅが多く使用されているが、心血管系障害、皮膚刺激、性機能低下および奇形児のリスクなど副作用を伴うという限界がある。

一方、先行研究で生薬製剤を用いた脱毛症改善の効果について報告されているが、その結果は不十分なものである。最近、植物抽出物と何首烏（カシュウ）など漢方材料を熱水抽出して、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の乳酸菌で発酵させたものを利用した発毛促進の研究が始まり、それらの特許に関する報告もあるが、そのほとんどは実験マウスによる研究結果であり、実際、脱毛症の人や脱毛症が進行している人を対象にした研究は皆無である。

本発明は、脱毛症防止、発毛促進または性機能の改善に効果的である新規な乳酸菌株を提供する。

さらに、本発明は、副作用なく安全に使用できる脱毛症防止、発毛促進用または性機能改善用の組成物を提供する。

本発明の一態様は、新規なリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｈｏｌｚａｐｆｅｌｉｉＣｅｂ−ｋｃ−００３：ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株を提供する。前記菌株の形態学的特徴はグラム陽性菌であり、配列番号１の塩基配列を有し、１６ｓｒＲＮＡｐａｒｔｉａｌｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇによる分析の結果、リューコノストック・ホルザプフェリイシアーノと９９％の相同性を示す。
＜配列番号１の塩基配列＞

本発明者は、新規に分離したリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３を２０１６年４月１１日、韓国微生物保存センター（ＫｏｒｅａｎＣｕｌｔｕｒｅＣｅｎｔｅｒｏｆＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ、ソウル市西大門区弘済−２街−ギル１２０−８６１）に受託番号ＫＣＣＭ１１８３０Ｐとして寄託した。前記菌株は韓国の伝統食品であるキムチから分離されたものである。前記菌株は脱毛症防止、発毛促進、性機能改善、コレステロール低下、および／または脂肪分解に効果的である。

本発明のさらなる態様は、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の培養物、その濃縮物、またはその乾燥物に関するものである。

本発明において新規に分離した菌株は、通常のバチルスあるいはリューコノストック菌株の培養方法で培養することができる。培地としては、天然培地や合成培地を使用することができる。培地の炭素源としては、例えば、グルコース、スクロース、デキストリン、グリセロール、でん粉などを使用することができ、窒素源としては、ペプトン、肉抽出物、酵母抽出物、乾燥酵母、大豆、アンモニウム塩、ナイトレート、およびその他の有機または無機窒素含有化合物を使用することできるが、これらの成分に限定されない。培地に含まれる無機塩としては、マグネシウム、マンガン、カルシウム、鉄、カリウムなどを使用することができるが、これらに限定されない。前記炭素源、窒素源、無機塩の成分に加えて、アミノ酸、ビタミン、核酸、およびこれらに関連する化合物が培地に添加され得る。本出願の新規に分離した菌株の培養温度の条件は、２０〜４０℃の範囲で１２時間〜４日間培養することができる。一実施例において、培養培地に熟地黄、甘草、川▲きゅう▼（センキュウ）、杜仲（トチュウ）、桂皮（ケイヒ）、当帰（トウキ）、石菖蒲（セキショウブ）、赤何首烏、側柏葉（ソクハクヨウ）、生姜、柏子仁（ハクシジン）、茜草（アカネ）、升麻（ショウマ）、蔓荊子（マンケイシ）などの生薬製剤、その抽出物、またはこれらの混合物を添加して培養し、前記培養物を使用することにより、本発明における菌株の脱毛症防止、あるいは発毛促進の効果をより改善することができる。

新規に分離した菌株の培養物は、菌体を含む培養原液であり、または培養上澄み液を除去あるいは濃縮した菌体であり得る。前記培養物の組成は、通常のバチルスやリューコノストック菌株培養に必要な成分だけではなく、バチルスやリューコノストック菌株の生長に相乗的に作用する成分をさらに含むことができ、これによる組成物は、当業界の通常の技術を有する者によって容易に選択され得る。

また、菌株の状態は、液状状態または乾燥状態であり、乾燥方法は風乾燥、自然乾燥、噴霧乾燥、および凍結乾燥が可能であるが、これらに限定されるものではない。

本発明のさらなる態様は、新規に分離したリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）、その培養液、その濃縮物、またはその乾燥物を含む組成物に関するものである。前記組成物は、脱毛症防止、発毛促進、または性機能改善用の食品組成物または医薬組成物であることができ、さらに、脂肪分解効果および／またはコレステロール低下の効果がある。食品組成物の一態様は、食品、健康食品、健康補助食品、または健康機能性食品組成物であり得る。医薬組成物の一態様は、医薬外品または医薬的製剤であり得る。

一実施例において前記組成物は、熟地黄、甘草、川▲きゅう▼（センキュウ）、杜仲（トチュウ）、桂皮（ケイヒ）、当帰（トウキ）、石菖蒲（セキショウブ）、赤何首烏、側柏葉（ソクハクヨウ）、エゾウコギ、松葉、松花、蕎麦、知母、生姜、柏子仁（ハクシジン）、茜草（アカネ）、升麻（ショウマ）、蔓荊子（マンケイシ）などの生薬製剤、その抽出物、またはそれらの混合物などの脱毛症防止または発毛促進に効果的な生薬成分；またはミノキシジルやｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅなどの医薬成分をさらに含むことができる。

他の実施例において前記組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｕｃｃｕｓ属、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属などの菌株をさらに含むことができる。具体的には、リューコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）（例えば、ＫＣＣＭ１１８２７Ｐ）、ラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓａｋｅｉ）（例えば、ＫＣＣＭ１１８４１Ｐ）、またはその培養液、またはそれらの混合物をさらに含むことができる。具体的には、リューコノストック・メセンテロイデスＫＣＣＭ１１８２７Ｐ、ラクトバチルス・サケイＫＣＣＭ１１８４１Ｐ、またはその培養液、またはそれらの混合物をさらに含むことができる。また、前記組成物は、コラーゲンをさらに含むことができる。

本発明の組成物は、５×１０^４〜５×１０^１０ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株を含み、好ましくは、１×１０^６〜１×１０^９ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）を含む。

本発明の組成物は、薬学的あるいは食品学的に許容される担体をさらに含むことができ、担体と共に製剤化されて、食品または医薬品として提供され得る。

本発明における用語である「薬学的あるいは食品学的に許容される担体」は、生物体を刺激せず、投与菌株の生物学的活性及び特性を阻害しない担体または希釈剤のことを指す。

前記組成物は、経口または非経口の様々な剤形で製剤化され得るが、好ましくは液状経口溶液で剤形化され得る。

液状溶液で製剤化される場合には、許容される薬剤学的あるいは食品学的な許容担体は、滅菌および生体に適したものであり、食塩水、滅菌水、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、およびこれらの成分のうち、一つ以上を混合して使用することができ、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など、通常の他添加剤を添加することができる。また希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤を付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液などの液状剤形、丸薬、カプセル、顆粒または錠剤に製剤化することができる。また、組成物の品質低下を防止するために、結着剤、乳化剤、保存剤などをさらに添加することができ、また、アミノ酸剤、ビタミン剤、酵素剤、香味剤、非タンパク質態窒素化合物、ケイ酸塩剤、緩衝剤、抽出剤、オリゴ糖などをさらに含むことができる。液状形態で投与する場合の投与量は、５×１０^４〜５×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株、好ましくは１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり３０ｍｌ〜１００ｍｌを、１日１回〜４回投与することができる。一実施例において、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり５０ｍｌを１日２回〜４回投与することができる。より具体的には、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり５０ｍｌ〜１００ｍｌを、１日１回〜２回投与することができる。より一層具体的には、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）を朝食３０分前に５０ｍｌ〜１００ｍｌを１回投与し、夕食３０分前または就寝前に５０ｍｌ〜１００ｍｌを１回投与することができる。他の実施例において、前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の１日投与量は１．５×１０^５〜５×１０^１０ＣＦＵであり得る。

本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）を含む経口投与用剤形は、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、水溶性または油性懸濁液、調剤粉末または顆粒、エマルジョン、ハードまたはソフトカプセル、シロップまたはエリキシル剤などがある。錠剤やカプセルなどの剤形で製剤化するためには、ラクトース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、でん粉、アミロペクチン、セルロースまたはゼラチンなどの結合剤、ジカルシウムホスフェートなどの賦形剤、トウモロコシでん粉またはサツマイモでん粉などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウムまたはポリエチレングリコールワックスなどの潤滑剤を含むことができ、カプセル剤形の場合は前記物質の他にも脂肪油などの液体担体をさらに含むことができる。

前記組成物又は前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の１日投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、治療と予防、または改善しようとする主な症状、投与時間、投与方法、重症度に応じて異なるが、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇ、具体的には約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇであり、１日１回〜６回、例えば、１日１回〜４回投与、あるいは適用することができる。

前記組成物内のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）は液状または乾燥状態であり、好ましくは液状形態である。乾燥方法は、風乾燥、自然乾燥、噴霧乾燥、および凍結乾燥が可能であるが、これに限定されない。本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）は粉末形態で組成物の重量の０．０５〜８０重量％、例えば、０．１〜７０重量％、０．１〜５０重量％、または１〜３０重量％の量で混合する。

本発明における他の態様は、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養液、その濃縮液またはその乾燥物を含む、脱毛症防止、あるいは発毛促進用組成物に関するものである。または、本発明のさらなる態様は、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養液、その濃縮液またはその乾燥物の治療的または予防的有効量を脱毛症防止または発毛促進のために対象体に投与することを含む、脱毛症防止方法、あるいは治療方法に関するものである。前記の治療的または予防的有効量は前述したように、患者の体重、年齢、性別、健康状態、治療、予防、または改善しようとする主な症状、投与時間、投与方法、重症度に応じて異なるが、１日約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇ／ｋｇ、具体的には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇであることができ、１日１回〜６回、例えば、１日１回〜４回投与、あるいは適用する。または、５×１０^４〜５×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株、好ましくは１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり３０ｍｌ〜１００ｍｌを、１日１回〜４回投与する。一実施例において、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり５０ｍｌを１日２回〜４回投与する。より具体的には、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり５０ｍｌ〜１００ｍｌを、１日１回〜２回投与する。より一層具体的に、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）を朝食３０分前に５０ｍｌ〜１００ｍｌを１回投与し、夕食３０分前または就寝前に５０ｍｌ〜１００ｍｌを１回投与することができる。

本発明の一態様は、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養液、その濃縮液またはその乾燥物を含む、性機能障害改善用の組成物に関するものである。前記性機能障害の改善は、例えば、勃起不全の改善である。また、本発明のさらなる態様は、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養物、その濃縮液またはその乾燥物の治療的または予防的有効量を、性機能障害の予防または治療のために対象体に投与することを含む、性機能障害の予防または治療方法に関するものである。前記治療的または予防的有効量は、上述した内容と同様である。

本発明の一態様は、リューコノストック・ザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養物、その濃縮液またはその乾燥物を含む、コレステロール低下用組成物に関するものである。または、本発明のさらなる態様は、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養物、その濃縮液またはその乾燥物の治療的または予防的有効量を、コレステロール低下のために対象体に投与することを含む、高コレステロール血症の予防または治療方法に関するものである。前記治療的または予防的有効量は前述した内容と同様である。

本発明の一態様は、リューコノストック・ルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養液、その濃縮液またはその乾燥物を含む、脂肪分解用組成物に関するものである。また、本発明のさらなる態様は、リューコノストック・ルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはその培養物、その濃縮液またはその乾燥物の治療的または予防的有効量を高脂肪症の予防あるいは治療のために対象体に投与することを含む、高脂肪症の予防または治療方法に関するものである。前記治療的または予防的有効量は前述した内容と同様である。

本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株またはこれを含む組成物は、脱毛症防止、発毛促進または性機能の改善に効果的である。

リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）またはこれを含む組成物は、副作用がなく脱毛症防止、発毛促進または性機能の改善に安全な使用ができる。

リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株を服用する前後（約３．５ヶ月）の毛髪を比較した写真である。リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株を服用する前後（約２．５ヶ月と約３．５ヶ月）の毛髪を比較した写真である。リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株を服用する前後（約１．７ヶ月）の毛髪を比較した写真である。リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株を服用する前後（約３ヶ月）の毛髪を比較した写真である。リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株のコレステロール低下効果を他の乳酸菌株と比較して示すグラフである。リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の脂肪分解効果を他の乳酸菌株と比較して示すグラフである。リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株のＮＯ生成濃度を他の乳酸菌株と比較して示すグラフである。

以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は本発明の例示的説明であり、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１：リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の分離と同定
（１）試料の確保と菌株分離
韓国の伝統食品であるキムチを採取し、確保した試料を段階希釈して、３％塩化ナトリウムが添加したＢＨＩ固体培地（Ｄｉｆｃｏ、ＵＳＡ）に塗抹した後、３７℃の条件で２４時間培養した。前記試料から優占菌株を分離した。選別されたコロニーは、３回にわたって新しい培地に移して培養する方法で純粋分離し、純粋培養した菌を２０％グリセロールが添加された培地に入れて、零下７０℃以下で保存した。

（２）形態学的、分類学的特性調査
前記分離した菌株の同定のために、一次的に形態学的、生化学的調査を行った。形態的な特徴はグラム染色の結果グラム陽性であった。分類学的特性を分析するために１６ｓｒＲＮＡｐａｒｔｉａｌｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇによる分析を行い、その結果、配列番号１の塩基配列を有し、前記分離した菌株はリューコノストック・ホルザプフェリイと９９％の相同性を有することが確認された。

本発明者は、新規に分離したリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３を２０１６年４月１１日に韓国微生物保存センター（ＫｏｒｅａｎＣｕｌｔｕｒｅＣｅｎｔｅｒｏｆＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ、ソウル市西大門区弘済−２街−ギル１２０−８６１）に受託番号ＫＣＣＭ１１８３０Ｐで寄託した。

前記菌株を凍結乾燥して菌株粉末を製造した。

（３）菌株の培養液の製造
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３の培養液を下記の方法で製造した。

精製水１００リットルにＤｅｘｔｒｏｓｅ２ｋｇ、全脂粉乳１．５ｋｇ、酵母抽出液０．０５ｋｇをそれぞれ添加した後、１２１℃で５〜３０分間オートクレーブ滅菌し、３５℃前後で冷却した後、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３を無菌状態で０．２〜０．４リットル接種し、３５℃前後で２〜３日間培養してリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３の培養液を得た。

実施例２：リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の脱毛症防止効果
実施例１で得られたリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株培養液を、脱毛症状がある４０歳〜８５歳の男性５人と女性１人に１ヶ月〜４ヶ月の間、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量で一回当たり５０ｍｌ〜１００ｍｌを１日２回、毎日経口投与した。

前記菌株の投与前と服用１０日後、２０日後および３０日後において、１０日おきに、１回の頭髪洗浄後の抜け毛の本数を数えた。

前記実験結果は、下記表１のように示す。

また、本発明における菌株の投与前後の特定時点において、前記男性たちの毛髪の太さ、量、艶などの写真を撮影し、その一部の結果を図１〜図４に示す。

前記結果から、本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株が脱毛症防止に効果的であり、また、毛髪の太さと量、艶を顕著に改善し、脱毛症治療に効果的であることがわかる。

実施例３：リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株のコレステロール低下効果
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の粉末のコレステロール低下効果を検討するため、それぞれ１ｍｇ／ｍｌないし５ｍｇ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）粉末液、および対照群としてそれぞれ１ｍｇ／ｍｌないし５ｍｇ／ｍｌのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ粉末液を使用した。

＜コレステロール（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）除去能＞
本発明に規定するコレステロール（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）の除去能は、具体的に以下の方法で測定することができる。ＭＲＳ培地３０ｍｌを５０ｍｌのファルコンチューブ（ｆａｌｃｏｎｔｕｂｅ）に入れて被検菌（グリセロール（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）ストック（ｓｔｏｃｋ））を接種（１×１０^７個／ｍｌ）し、３０℃で２４時間培養する。得られた培養液３００ｕｌをコレステロール（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）培地（３５０ｍｇ／Ｌのコレステロール（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）（ＷａｋｏＰｕｒｅＣｈｅｍｉｃａｌ）、０．２％胆汁酸（ｗ／ｖ）を含むＭＲＳ培地３０ｍｌに添加する。３７℃で２４時間培養した後、４℃、８，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌｓｅｐａｒａｔｉｏｎ）を行い、上澄み液中のコレステロール濃度（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｌｅｖｅｌ）をＤｅｔｅｒｍｉｎｅｒＦＣ（ＫｙｏｗａＭｅｄｅｘＣｏ．Ｌｔｄ．）を用いて測定する。初期コレステロール（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）培地に含有されたコレステロール量（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）と培地から除去されたコレステロールの量（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）の割合（％）を算出する。

その結果は図５に示し、３回繰り返し処理で得られた平均値を表す。

前記結果から、本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株粉末が濃度に比例してコレステロールの低下に効果的であり、これは他の乳酸菌であるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍに比べて有意に改善効果が高いことが分かる。

実施例４：リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の脂肪分解効果
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の脂肪分解効果を検討するため、前記菌株の培養液２０ｍｌないし１００ｍｌを豚脂１０００ｃｃにそれぞれ処理した後、３７℃で２４時間振とうした。対照群としてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ菌株を前記と同じ方法で処理した。

その結果は図６に示した。

前記結果から本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株粉末が濃度に比例して脂肪分解に効果的であり、これは他の乳酸菌であるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍに比べて有意に改善効果が高いことが分かる
実施例５：リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株の性機能改善および予防効果
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株粉末を、性機能における異常な症状と喫煙の有無別の、４５歳〜７０歳の１０人の男性に、合計３ヶ月間、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍｌのリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の量を一回当たり５０ｍｌ〜１００ｍｌ、１日１回〜２回、毎日経口投与した。前記菌株の投与前後において、１ヶ月おきに、早朝勃起回数、勃起力、勃起持続力などを自己評価してもらった。

そのうち、服用１ヶ月から３ヶ月の間、アンケートに応じた人は４人であり、その結果は下記表２のように示す。

前記結果から、本発明のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株粉末を継続的に服用すると、性機能異常の予防効果があり、さらに、性機能障害の治療効果があることが確認された。

また、血流増加と毛細血管弛緩作用により勃起力の向上に資するＮＯの２４時間の生成濃度（Ｈａｃａｔ細胞から発生）をさらに評価した。本発明における新規な菌株とＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍとの比較テスト（３回繰り返して得られた平均値）の結果は、図７のように示す。

前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株に加えて、リューコノストック・メセンテロイデスＫＣＣＭ１１８２７Ｐ、ラクトバチルス・サケイＫＣＣＭ１１８４１Ｐを含む菌株培養液に前記と同様の脱毛症防止と治療及び性機能異常に対して前記記載の方法と同様に効能評価を実施した。その結果、リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）を単独で使用時に比べて改善された結果が得られた。

Claims

リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｈｏｌｚａｐｆｅｌｉｉＣｅｂ−ｋｃ−００３：ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株。
前記菌株は、脱毛防止、発毛促進、勃起不全改善、コレステロールの低下または脂肪分解能があることを特徴とする、請求項１に記載の菌株。
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の培養液、その濃縮物、またはその乾燥物。
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株、その培養液、その濃縮物、またはその乾燥物を含む、食品組成物。
前記食品組成物は、脱毛防止または発毛促進の作用があることを特徴とする、請求項４に記載の食品組成物。
前記食品組成物は、勃起不全改善能があることを特徴とする、請求項４に記載の食品組成物。
前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株の１日投与量は、１．５×１０^５〜５×１０^１０ＣＦＵであることを特徴とする、請求項４に記載の食品組成物。
５×１０^４〜５×１０^８ＣＦＵ／ｍｌ濃度のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株が、１回当たり３０ｍｌ〜１００ｍｌ、１日１回〜４回投与されることを特徴とする、請求項４に記載の食品組成物。
前記食品組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｕｃｃｕｓ属、またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の菌株をさらに含むことを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の食品組成物。
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株、その培養液、その濃縮物、またはその乾燥物を含む、脱毛予防または発毛促進用の医薬組成物。
リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株、その培養液、その濃縮物、またはその乾燥物を含む、勃起不全改善用の医薬組成物。
前記医薬組成物における前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）の菌株が１日当たり０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｇ／ｋｇの量で投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
５×１０^４〜５×１０^８ＣＦＵ／ｍｌ濃度のリューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株が、１回当たり３０ｍｌ〜１００ｍｌ、１日１回〜４回投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物は薬剤学的に許容される担体をさらに含むことを特徴とする、請求項１０ないし１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｕｃｃｕｓ属、またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の菌株をさらに含むことを特徴とする、請求項１０ないし１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物は、リューコノストック・メセンテロイデスＫＣＣＭ１１８２７Ｐ、ラクトバチルス・サケイＫＣＣＭ１１８４１Ｐ、その培養液、その濃縮物、その乾燥物またはそれらの混合物をさらに含むことを特徴とする、請求項１０ないし１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株は、キムチから分離されたものであることを特徴とする、請求項１０ないし１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記リューコノストック・ホルザプフェリイＣｅｂ−ｋｃ−００３（ＫＣＣＭ１１８３０Ｐ）菌株は、医薬組成物の質量に対して０．０５〜８０質量％で含まれることを特徴とする、請求項１０ないし１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。