JP2019524824A - 神経障害を処置するための間葉系細胞由来エキソソーム - Google Patents
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Abstract
Description
ここで、上の記載と一緒に非限定的に本発明のいくつかの実施形態を例示する次の実施例を参照する。
自閉症を処置するためのMSC由来エキソソーム
材料および方法
間葉系幹細胞(MSC)調製:ヒトMSCはLonza(Basel,Switzerland)から購入した。既に記載のように細胞を培養し、増殖させた(Sadanら、2012)。
培養液を採取し、それを300gで10分間遠心分離することによりエキソソームを精製した。上清を回収し、2000gで10分間遠心分離した。もう一度、上清を回収し、10000gで30分間遠心分離した。上清を採取し、0.22μmフィルターに通し、100000gで70分間遠心分離した。エキソソームおよびタンパク質を含有するペレットをPBS中で洗浄し、次いで100000gで70分間遠心分離した。精製エキソソームを含有するペレットを200μlの滅菌PBS中で再懸濁した。各遠心分離は4℃で行った。
投与粒子数/マウス=8.5x109 particies/ui
オープンフィールド:マウスを全部で20分間、45X45X45cmに置いた。Ethovision v10.11を使用して、移動した総距離および中心部で費やした時間量を測定した。
MSC−エキソソームの鼻腔内投与の高効率:PKH26染色エキソソームの静脈内、鼻腔内および定位投与間の比較を行った。補正された総細胞蛍光(CTCF)計算を使用して、異なる投与ストラテジーの効率を推定した(McCloyら、2014)。定位注射に対する蛍光定量から、鼻腔内投与エキソソームの68.5%が脳内で見出され、一方で静脈内エキソソームの11.2%が脳内で見出されたことが示された(図1)。免疫染色DAPIおよびNeuNから、エキソソームが細胞およびそれらの膜上で見出されたことが示された(図2A−B)。
統合失調症を処置するためのMSC由来エキソソーム
材料および方法
アンフェタミン誘導性の自発運動亢進活動に対する感受性:いくつかの相で実験を行った。第1相において、30匹のC54/blマウスを無作為に3つの群に割り当てた;食塩水処置群、PCP処置群およびPCP+エキソソーム処置群(処置群)。PCP群には、10mg/kgのPCPの皮下注射を14日間にわたり毎日行った。同時に、食塩水群には等体積の食塩水注射を行い、エキソソーム群には、PCP注射ならびに鼻腔内投与により2μlのエキソソームを投与した。他の群には、同じ技術を使用して2μlの食塩水を投与した。注射終了から1週間後、マウスに対して行動試験を行った。
1.食塩水群(n=19)、
2.PCP群(n=17)、
3.PCP+エキソソーム(n=18)
アンフェタミン誘導性自発運動亢進活動に対する感受性:アンフェタミン注射後、全てのアンフェタミン処置マウスの自発運動活性が向上し、注射から約40分後にピークとなった。測定時間全体を通じて、全身性アンフェタミンの効果促進は、PCP処置対象において有意により顕著であった。
自閉症BTBRモデルにおける、骨髄由来MSCからのエキソソーム対神経幹細胞からのエキソソームの比較
材料および方法
NSC由来エキソソーム:神経幹細胞株(CTX0E03)(ReNeuron)を使用した。
処置群:マウスに対して、1日おきに1日5μl(2.5μlx2)で12日間にわたりMSC−exo(N=5)、NSC−exo(N=5)または食塩水(N=7)の鼻腔内投与(全部でマウスあたり30μl)を行った。
図12A〜Bで例示されるように、MSC由来エキソソームの投与によって、食塩水処置群と比較して、社会的相互作用が向上し、反復行動が減少し、コミュニケーションが増加し、一方で神経幹細胞由来エキソソーム(NSC−exo)処置マウスは、食塩水処置群と比較して、同じ行動の相違を示さなかった(ANOVA1、F2,i4=4.28、p<0.05、ボンフェローニ)。
Claims (11)
- 対象において神経疾患を処置する方法であって、前記対象に治療的有効量の間葉系幹細胞(MSC)由来の粒子を投与することを含み、前記神経疾患がアルツハイマー病またはパーキンソン病ではなく、それによって前記対象において前記神経疾患を処置する、方法。
- 対象において自閉症スペクトラム障害(ASD)を処置する方法であって、前記対象に治療的有効量の間葉系幹細胞由来の微粒子を投与することを含み、それによって前記自閉症スペクトラム障害を処置する、方法。
- 脳卒中の処置を必要とする対象において脳卒中を処置する方法であって、前記対象に治療的有効量の間葉系幹細胞由来の粒子を鼻腔内投与することを含み、それによって前記対象における脳卒中を処置する、方法。
- 前記神経疾患が統合失調症である、請求項1に記載の方法。
- 前記投与が鼻腔内投与を含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記粒子が、エキソソーム、微小胞、膜粒子、膜小胞、エクトソームおよびエキソベシクル(exovesicle)からなる群から選択される、請求項1、2または3の何れか1項に記載の方法。
- 前記粒子がエキソソームである、請求項6に記載の方法。
- 前記粒子が微粒子である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記間葉系幹細胞が歯髄由来である、請求項1〜8の何れか1項に記載の方法。
- 前記間葉系幹細胞が骨髄由来である、請求項1〜8の何れか1項に記載の方法。
- 前記MSCがヒトMSCである、請求項1〜10の何れか1項に記載の方法。
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