JP2022046822A - 中枢神経系の疾患および障害を処置するための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明に至る作業は、贈与契約n°[[617162]]の下の第7次欧州研究開発フレームワーク計画(FP7/2007-2013)から、および契約n°GR-2011-02347261の下のイタリア保健省からの資金を受けた。
中枢神経系(CNS)障害(ニューロSD)を伴う貯蔵障害(SD)の大部分は、有効かつ治癒的処置がなく、患者は、最終的に、その破壊性疾患で死亡する。多くの場合、疾患の発症は、非常に早期の幼児期に起こり、わずかな兆候を特徴とし、そのため、進行性段階ではないとしても明確に症候性になった場合に診断が下されることになる。ニューロSDはまた、特に早期発症の変形体では、迅速な早期疾患進行を特徴とする。このような理由のため、例えば、クラッベ病および副腎白質ジストロフィーにおける造血細胞移植(HCT)、または異染性白質ジストロフィー(MLD)における造血幹細胞(HSC)遺伝子治療法(HSC GT)を含めた発症前ニューロSD児童において、ある程度の成功を伴う適用された治療的手法は、ニューロSD患者の大部分にとって利益をもたらさず、利益は、発症前または発症早期の患者において適用された手順にしかほとんど結びついていない。迅速な進行性SD脳疾患を改善するのにこれらのHSCに基づく手法が成功しない重要な理由の1つは、一次神経系疾患の迅速な進行と比べて、常在性CNS組織マクロファージ/組織球およびミクログリアが移植造血細胞子孫によって置き換えられる速度が遅いからである。実際に、ドナー由来細胞による内臓マクロファージの迅速再構成は、HCT後に明確に実証されているが、ドナー細胞による脳実質の一層限定された遅い浸潤が起こると予想されている。したがって、この現象を強化して、一層迅速にすることを試みる戦略が、大いに必要とされている。このような戦略はまた、成人期の後天性神経変性状態の一部にとって、治療上、適切である可能性を有しており、このことは、移植した造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)の子孫、ならびに/またはこれらの状態の大部分を特徴付ける活性化ミクログリア表現型のモジュレートにより、治療分子が血液脳関門を通って送達するという利益をもたらすことができる。例えば、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)およびパーキンソン病(PD)を含む、これらの障害は、神経炎症およびミクログリアの活性役割などのニューロLSDと、いくつかの共通した疾患/病原性機構を共有している。したがって、処置の新しい組成物および方法が、差し迫って必要とされている。
以下に記載される通り、本発明は、タンパク質送達または局所炎症などの調節などの様々な機構により疾患改善に寄与することができる、ドナー由来細胞または操作された(enginnered)細胞のどちらか一方を用いてCNS骨髄細胞/ミクログリアキメラ現象を確立することによって、中枢神経系の神経系疾患または障害(例えば、神経変性貯蔵障害、後天性神経変性疾患など)を処置または予防するための組成物および方法を特徴とする。本発明は、以下:(i)上に列挙した状態における治療的目的のために、ミクログリア再構成可能性に富む細胞を含めた、ミクログリア特徴を有するCNS細胞、またはミクログリア特徴を獲得するCNS細胞において、ミクログリア前駆細胞を効果的に生着させること、(ii)上で列挙した状態において、治療的目的のために、ミクログリア再構成可能性に富む細胞を含めた、ミクログリア特徴を有するCNS遺伝子組換え細胞、またはミクログリア特徴を獲得するCNS遺伝子組換え細胞において、ミクログリア前駆細胞を選択的かつ排他的に生着させること、および(iii)CNS選択的方法(これらの方法は、ミクログリアおよびまたはミクログリア前駆体を標的とするナノ粒子を含むことができる)によって、脳において、増殖能力(ablity)を有する細胞などの常在性骨髄集団をアブレーションすることのうちの1つまたは複数を行うための組成物および方法を提供する。この方法は、首尾よく、タイミング良く、かつCNS障害しかない場合、細胞のプールを一部更新する際に、治療分子を送達するおよび/または骨髄/ミクログリア特徴をモジュレートするために、脳における移植細胞の選択的CNS生着および骨髄/ミクログリア特徴の獲得を達成するために使用することができる。
別段の規定がない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されている意味を有する。以下の参照文献は、本発明において使用される用語の多数の一般定義を当業者に提示する:Singletonら、Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(第2版、1994年);The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker編、1988年);The Glossary of Genetics、第5版、R. Riegerら(編)、Springer Verlag(1991年);ならびにHaleおよびMarham、The Harper Collins Dictionary of Biology(1991年)。本明細書で使用する場合、以下の用語は、特に指定しない限り、以下にこれらの用語に帰属される意味を有する。
びS. L. Berger(1987年)Methods Enzymol. 152巻:399頁;Kimmel, A.
R.(1987年)Methods Enzymol. 152巻:507頁を参照されたい)。
61頁、1975年);Ausubelら(Current Protocols in Molecular Biology、Wiley Interscience、New York、2001年);BergerおよびKimmel(Guide to Molecular Cloning Techniques、1987年、Academic Press、New York);ならびにSambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory Press、New Yorkに記載されている。
本発明は、HSPCの移植に際しミクログリアを再構成するため、ならびに神経系疾患、または中枢神経系(例えば、リソソーム貯蔵障害、神経変性疾患などを含む貯蔵障害)の障害の処置および予防のために有用な組成物および方法を特徴とする。
物もしくは臍帯血の使用、または造血幹細胞および前駆細胞(CD34発現に選択的なHSPC)の使用を含む。ここで、ミクログリア再増殖活性に富む細胞集団は、これらの細胞源内で特定することができ、その使用は、移植後のドナーによるミクログリア再構成を最終的に改善することができる。さらに、脳室内注入(ICV)を使用して脳に直接送達された造血幹細胞、および前駆細胞(HSPC)、またはHSPCプールの画分により、移植したドナー細胞によるミクログリア再構成の速度および程度が改善され、単回静脈内(IV)移植手法と比べて、脳への治療用タンパク質送達が向上する。したがって、この手法は、大きな治療可能性をもたらし、移植細胞によって、造血組織ではなく専らミクログリアの置き換えを目的とする先進的戦略のための、ICV移植細胞のミクログリアへの広範な寄与を得るために最適化することができる。これは、神経炎症または神経変性刺激に応答する調節された治療的遺伝子発現のために、ミクログリアの分子工学操作を本明細書において開発する、新規な戦略と連携して大きく関連する。
・マウスおよびヒトの静脈内(IV)および脳室内(ICV)でのHSPC移植により、脳骨髄子孫が発生する。
・マウスおよびヒトHSPCのICV送達により、IVと比べて、一層迅速な速度およびより多くの量で、脳内に子孫骨髄細胞が発生する。
・ICV注入したHSPCは、脳内で生着して拡張する一方、それらは、造血臓器中では生着しない。
・脳骨髄キメラ現象へのHSPCのICV注入の寄与は、特定の条件において、IVを共注入したHSPCへの寄与よりも勝ることができる。
・脳骨髄キメラ現象にHSPCをIVおよびICV注入した寄与は、特定の条件では等価となり得る。
・IVとICV移植HSPCの両方の子孫細胞は、ミクログリアに一致する転写プロファイルを有する。
・脳中における、ICV注入されたHSPCの子孫細胞は、IV注入したHSPCの子孫よりもミクログリアに一層よく似ている。
・移植後マウスの脳実質に関連する造血細胞は、クローン形成および造血性再増殖可能性、ならびにミクログリア再構成可能性を有する。
・操作されたHSPCのICV+IV送達の組合せは、2つの代表的なLSDに治療的関連性を有する。
・HSPCのICV+IV送達の組合せは、同種異系移植状況において実現可能である。
・HSPCの鞘内(IT)送達は、コンビナトリアルHSPC移植戦略の文脈において、脳および造血キメラ現象に寄与することができる。
・特定のナノ粒子は、脳における目的領域において、c-kit+およびネスチン+骨髄増殖性細胞によりアップロードされ得る。
・ナノ粒子は、効率的にエトポシドを封入することができる。
・エトポシドは、NPに封入されると、標準製剤中よりむしろ、細胞死滅に有効である。
・Eto-NPは、ミクログリア前駆体の増殖の誘発時に、マウス脳において、c-kit+CD45+細胞により取り込まれる。
・Eto-NPは、ミクログリア前駆体の増殖の誘発時に、マウス脳において、c-kit+CD45+およびCD45+細胞の早期アポトーシスを誘発することができる。
・移植に際し、脳の骨髄のキメラ現象および転写依存性の新規ミクログリア発生させるために使用される、HSPCのプール内の、細胞の同定(「ミクログリア前駆体の機能的等価体」として定義)。
・持続性の脳および造血臓器のキメラ現象が、疾患の処置に必要となる場合、ミクログリア前駆体の機能的等価体の移植を行うために使用される最適経路および条件。
・選択的な脳のキメラ現象が疾患の処置に十分である、および/または必要となる場合、ミクログリア前駆体の機能時等価体の移植を行うために使用される最適経路および条件。
・ナノ担体を使用する、ミクログリア前駆体の局在化および標的化。
・選択的な脳の前処理のための、ミクログリア前駆体へのアブレーション薬物の標的送達。
・神経変性疾患に対する骨髄CNS細胞/ミクログリア再構成のための先進的HSC移植プロトコルの文脈における新規治療的戦略の実施。
・マウスおよびヒトLT-HSCは、IVとICV送達の両方の時に、脳骨髄子孫を発生させることができる。
・それほど成熟していないKSL画分は、ICV送達時に、脳骨髄子孫の発生に寄与する。
・HSPCプール内のμ前駆体の機能的等価体は、LT_HSC(マウス細胞とヒト細胞の両方)に含まれる。
・マウスのHSPCプールの内のμ前駆体の機能的等価体は、Fdg5+である。
・マウスのHSPCプールの内のμ前駆体の機能的等価体は、CD11b陰性である。
・マウスのHSPCプールの内のμ前駆体の機能的等価体は、CX3Cr1陰性である。
・μ前駆体の機能的等価体は、CD34+ヒトHSPC内に含まれる。
・μ前駆体の機能的等価体は、CD34+ヒトHSPCのCD38-画分内で濃縮される。
最近の前臨床的および臨床的証拠により、造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)、ならびに/またはそれらの子孫は、脳内における骨髄細胞集団の代謝回転に寄与することにより、治療分子が血液脳関門を通過して送達されるためのビヒクルとして働くことができることが示されている。しかし、移植後に再構成した細胞の分化および機能的特徴、特に、正真正銘のミクログリアが、評価される移植後のドナー細胞の子孫により再構成され得るかどうかは、依然として確立されていない。最近の30年間で、造血細胞移植(HCT)および造血幹細胞(HSC)に基づく遺伝子治療法は、ペルオキシソーム障害およびリソソーム蓄積症(LSD)(Cartierら、Science 326巻、818~823頁(2009年);Biffiら、Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら.Lancet 388巻、476~487頁(2016年))および神経変性疾患(Simardら、Neuron 49巻、489~502頁(2006年))などの、神経系に影響を及ぼす非血液学的および非オンコロジー疾患に罹患している患者にある程度の利益を伴って適用されてきた。これらの早期臨床的証拠は、臨床前の支持データと共に、造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)、ならびに/またはそれらの子孫は、治療分子が血液脳関門(BBB)を通過して送達されるためのビヒクルとして働くことができることを示唆している。実際に、HSPCおよび/またはそれらの子孫は、可能性として、ミクログリアであって、これらの障害の進行および転帰におけるその重要な役割が広範に記載されている、ミクログリアを含めた(Jeyakumarら Brain 126巻、974~987頁(2003年);Wadaら
Proc Natl Acad Sci USA 97巻、10954~10959頁(2000年);Ohmiら Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100巻、1902~1907頁(2003年);Eichlerら Ann Neurol 63巻、729~742頁(2008年))、脳における骨髄細胞集団の代謝回転(Ajamiら Nat Neurosci 10巻、1538~1543頁(2007年);Ajamiら Nat Neurosci 14巻、1142~1149頁(2011年);Biffiら J. Clin. Invest. 116巻、3070~3082頁(2006年);Mildnerら Nat Neurosci 10巻、1544~1553頁(2007年);Capotondoら Proc Natl Acad Sci USA. 109巻、15018~15023頁(2012年))に
寄与することができる。重要なことに、移植に由来する細胞は、罹患した組織に一旦組み込まれると、すなわち、移植マウスまたは患者の脳内に治療分子を放出することによって、局所環境に都合よく影響を及ぼすことが証明された。この概念は、HSC遺伝子治療法によって処置された、脱髄性のLSD異染性白質ジストロフィーに罹患した患者において実証された(Biffiら Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら
Lancet 388巻、476~487頁(2016年))。患者において欠損している、アリールスルファターゼA酵素の正常なまたは上記の正常な活性、およびその発現は、患者のHSCおよびそれらの子孫に組み込まれたレンチウイルスベクター(LV)によって誘発され、処置された児童の脳脊髄液(CSF)において、処置後の長い間、測定された(Biffiら Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら Lancet
388巻、476~487頁(2016年))。留意すべきことに、酵素は、BBBそれ自体を効率的に通過することができない(Biffiら J. Clin. Invest. 116巻、3
070~3082頁(2006年);Matznerら Human Molecular Genetics 14巻
、1139~1152頁(2005年))。発症前の段階において処置された患者における顕著な臨床的利益に関連するこれらの知見は、患者の脳が遺伝子により修正されたHSPC子孫細胞によって播種されることを正式に証明するものである。しかし、脳において、移植に由来する細胞の分化および機能的特徴、特に、正真正銘のミクログリアが、実証されるHCT後のドナー細胞の子孫により再構成され得るかどうかは、依然として確立されていない(Ajamiら Nat Neurosci 10巻、1538~1543頁(2007年);Capotondoら Proc Natl Acad Sci USA. 109巻、15018~15023頁(
2012年);Bennettら Proc Natl Acad Sci USA 113巻、E1738~17
46頁(2016年))。
109巻、15018~15023頁(2012年);Wilkinsonら Mol Ther 21巻、868~876頁(2013年))。この状況では、移植動物の脳中に見出されたドナー源の細胞は、移植の直後の脳に移動したHSPCの局所増殖および分化に由来することが示された。
貯蔵障害(SD)は、正常なリソソームの機能の破壊を特徴とする遺伝性疾患のクラスを含み、エンドサイトーシスまたはオートファジーの後の分解を標的とする、不完全に分解した基質の蓄積をもたらす。基質自体のその後の蓄積またはリソソームにおける代替的な代謝経路の産生物の蓄積は、細胞の構造および機能に影響を及ぼし、細胞の機能不全または死亡に至らしめる。さらに、一次欠損は、二次応答によって頻繁に悪化する。これは、神経炎症が起こり、ミクログリアおよび星状細胞内の基質蓄積への一次反応、および/または一次ニューロンもしくは希突起神経膠細胞の損傷への炎症応答を呈する中枢神経系(CNS)において特に関連性がある。
的なSDおよびそれらの関連する欠損タンパク質の非限定的なリストが、表1に提示されている。
アリールスルファターゼA(ARSA)遺伝子における変異のために脱髄したLSDである、異染性白質ジストロフィー(MLD)は、神経系および二次神経炎症および変性における、未分解基質の進行性蓄積を伴うLSDの原型例である。MLDの遺伝的伝播は、常染色体劣性であり、その全体的な出現率は、1:40.000~1:100.000と見積もられている。
植HSC形質導入するためのレンチウイルスベクター、および全身性ブスルファン前処理への曝露を使用するHSC遺伝子治療法は、最も重症なMLD変形体により影響を受けた児童、および症状の発症前に処置を受けた児童において、疾患の兆候の予防または弱化に有効であることが示された(Biffiら Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら Lancet 388巻、476~487頁(2016年))。
クラッベ病としても公知のグロボイド細胞白質ジストロフィー(GLD)は、重要なミエリン構成体である、ガラクトシルセラミド(GalCer)の異化作用を触媒する、リソソーム酵素ガラクトセレブロシダーゼ(GALC)の欠乏によって引き起こされる常染色体劣性LSDである。GLDは、100,000名の誕生に約1名で起こる。それは、通常、幼児の間に起こり、致死的な経路を迅速にとるが、発症が遅い希な形態も存在する。壊滅的な神経変性障害は、GALC欠乏症により引き起こされる糖スフィンゴ脂質異化作用における変質によるものである。その結果生じた不完全に代謝されたGalCerの蓄積は、CNSと末梢神経系(PNS)の両方に影響を及ぼす、進行性白質脳疾患に至る。ガラクトシルスフィンゴシン(または、サイコシン)もまた、GALCの基質であり、病因において重要な役割を果たすと考えられている。GLDの児童は、発症前および4歳未満の時に、疾患発症を遅延させて兆候を弱化する、健常な適合ドナーからのHCTによって、処置され得る(Escolarら N Engl J Med. 352巻、2069~2081頁
(2005年))。HSC遺伝子治療法はまた、GLD前臨床モデルにおいて、潜在的に有効であることが証明された(Gentnerら Sci Transl Med 2巻(2010年))。
ムコ多糖症(MPS)は、グリコサミノグリカンを分解するために必要なリソソーム酵素がない、または機能不全していることによって引き起こされるLSDの群である。MPS Iは、症状の重症度に基づいて、3つのサブタイプに分類される。3つのタイプは、酵素であるアルファ-L-イズロニダーゼが存在しない、またはそのレベルが不十分であることに起因している。MPS I H(ハーラー症候群またはα-L-イズロニダーゼ欠乏症とも呼ばれる)は、MPS Iサブタイプの最も重症なものである一方、MPS I S、すなわちシャイエ症候群は、MPS Iの最も軽度な形態である。MPS I H-S(ハーラー-シャイエ症候群)は、ハーラー症候群単独ほど重症ではない。MPS
II、ハンター症候群またはイズロン酸スルファターゼ欠乏症は、酵素であるイズロン酸スルファターゼの欠乏により引き起こされる。MPS IIIである、サンフィリポ症候群は、重症な神経学的な症状が特徴である。サンフィリポ症候群の4つの個別のタイプが存在し、それぞれは、硫酸ヘパリンの糖鎖を完全に分解するために必要な様々な酵素の変質によって引き起こされる。サンフィリポAは、MPS III障害の最も重症なものであり、酵素であるヘパランN-スルファターゼの喪失または改変により引き起こされる。サンフィリポAを有する児童は、MPS III障害を有するものの中で、生存率が最も低い。サンフィリポBは、酵素であるアルファ-Nアセチルグルコサミニナーゼの喪失または欠損により引き起こされる。サンフィリポCは、酵素である、アセチル-Coアルファ-グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼの喪失または改変に起因する。サンフィリポDは、酵素であるN-アセチルグルコサミン6-スルファターゼの喪失または欠損により引き起こされる。
ニューロンセロイド脂褐素症は、進行性神経学的変性に至る、遺伝性貯蔵障害のクラスである。乳児型NCL(INCL)などの一部の変形体は、リソソーム酵素の欠乏によって引き起こされる。INCLは、膜タンパク質の分解を担うリソソーム酵素である、PPT1の欠乏に至るCLN2遺伝子における変異により引き起こされる。同様に、幼児後期のNCL(LINCL)は、リソソーム酵素TPP1の欠乏による。ニューロンは、この貯蔵物質のリソソーム蓄積に特に敏感であり、INCLおよびLINCLを有する個体は、脳のすべての部分における広範な進行性神経変性を有しており、植物状態および8~12歳までに死亡する。
X連鎖性副腎白質ジストロフィー(X-ALD)は、脳における進行性の炎症性脱髄を特徴とする、1:17.000の頻度で男性である代謝性遺伝性疾患である。染色体Xq28に位置するABCD1遺伝子の変異が、関連ALDタンパク質の機能の喪失を決定し、これにより、ひいては、特に、脳および副腎皮質において、リソファチジルコリン(LPC)などのリン脂質画分内の非分岐状の超長鎖飽和脂肪酸(VLCFA)が蓄積する。X-ALDの表現型の変動は、ほとんどの場合は児童においてであるがX-ALDを有する成人でも進行性の神経学的減退を引き起こす脳炎症にリンクしているように思われる。脳の脱髄の開始は、複合体脂質におけるVLCFAの量、およびミクログリア細胞によるその不十分な分解に、直接リンクし得る。したがって、血管周囲マクロファージが、脱髄性病変の最先端部に密接に追随し、ミエリン遺残の除去に重要な役割を果たすことが示されているにもかかわらず、ミクログリア細胞が異なる挙動を示し、同一領域にほとんど存在せず、周辺領域ではアポトーシス性となる(Eichlerら Ann Neurol 63巻、729~742頁(2008年))。Eichlerらは、ミクログリアは、この領域において、VLCFAを分解することができず、ひいては、ミクログリア活性化およびアポトーシスを引き起こすことがあると推測した。ミクログリアの喪失および/またはミクログリア機能不全は、主に炎症誘発性サイトカイン(cytochine)(CCL2、CCL4、IL-
1a、CXCL8)の生成、および希突起神経膠細胞の欠失に対する神経保護性因子を供給する能力の改変のため、脱髄の早期段階において重要な役割を果たし得る。このシナリオでは、ミクログリア細胞は、大脳の脱髄の証拠を有するX-ALD患者における、介入に対する適切な標的となり得る。このような見方では、HSC移植(Aubourgら N Engl
J Med 322巻、1860~1866頁(1990年))、およびより最近には遺伝子治療法(Cartierら Science 326巻、818~823頁(2009年);Eichler
ら N Engl J Med doi:10.1056/NEJMoa1700554(2017年))は、X-A
LDに対する処置選択肢として調べられてきた。
神経変性疾患は、ニューロンの構造および/もしくは機能の進行性喪失、ならびに/またはニューロンの細胞死を特徴とする神経系疾患のクラスである。炎症は、いくつかの神経変性疾患における役割に関与している。運動および感覚ニューロン、ならびに精神能力の進行性喪失とは、様々な種類の神経変性疾患に影響を受ける、外部物体に対する感覚情報を指す。神経変性疾患の非限定例には、ALS、例えば、家族性ALSまたは散発性ALS、およびアルツハイマー病が含まれる。
本発明は、疾患および/もしくは障害、またはそれらの症状を処置する方法であって、対象(例えば、ヒトなどの哺乳動物)に、本明細書に記載されているミクログリア前駆体を含む治療有効量の医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。したがって、一実施形態は、疾患もしくは障害、またはそれらの症状に罹患しているか、あるいはこれらに罹患し易い対象を処置する方法である。本方法は、疾患または障害が処置されるような条件下で、疾患もしくは障害、またはそれらの症状を処置するのに十分となる、本明細書における細胞の治療量を哺乳動物に投与するステップを含む。
680頁(2012年);Garrettら J Biophotonics 5巻、458~468頁(2012年);Uchegbu、Expert Opin Drug Deliv 3巻、629~640頁(2006年);Uchegbuら Int J Pharm 224巻、185~199頁(2001年);Quら Biomacromolecules 7巻、3452~3459頁(2006年))。
vivoおよび/またはin vivo用途のいずれか向けの送達用の最適サイズの粒子をもたらす。ある特定の好ましい実施形態では、粒子寸法(例えば、直径)の特徴付けは、動的レーザー散乱(DLS)を使用した測定に基づく。
本明細書において報告されている通り、(例えば、ミクログリア細胞またはそのプレカーサーの)マーカーに特異的に結合する抗体は、治療的方法を含めた、本発明の方法に有用である。特定の実施形態では、本発明は、ミクログリアをアブレーションする方法であって、ミクログリア細胞のマーカーに特異的に結合する捕捉分子を有する、および細胞毒性剤(例えば、アルキル化剤)を含有するナノ粒子にミクログリアを接触させるステップを含む、方法を提供する。
York;Houstonら、1988年、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85巻:5879
~5883頁;Birdら、1988年、Science 242巻:423~426頁)。例えば
、無傷抗体のFc断片を欠くF(ab’)2およびFab断片は循環から一層迅速にクリアランスされ、無傷抗体ほど非特異的ではない組織結合を有することがある(Wahlら、J.
Nucl. Med. 24巻:316~325頁(1983年))。したがって、本発明の抗
体は、非限定的に、全自然抗体、二重特異性抗体;キメラ抗体;Fab、Fab’、単鎖V領域断片(scFv)、融合ポリペプチドおよび非慣用的抗体を含む。
35~50頁、2003年);およびWuら(Anti-carcinoembryonic antigen(CEA)diabody for rapid tumor targeting and imaging. Tumor Targeting、4巻、47~
58頁、1999年)を参照されたい。
44~6448頁、1993年)。単鎖Fv(sFv)ダイナの使用により二重特異的抗体断片を作製するための別の戦略が、Gruberらによって記載されている(J. Immunol. 152巻:5368頁、1994年)。三重特異的抗体は、Tuttらによって記載されている(J. Immunol. 147巻:60号、1991年)。単鎖Fvポリペプチド抗体は、Hustonら(Proc. Nat. Acad. Sci. USA、85巻:5879~5883頁、1988年
)によって記載されているペプチドをコードするリンカーによって直接結合している、またはこれにより結合しているVH-およびVL-コード配列を含めた、核酸から発現され得る、共有結合により連結されているVH::VLヘテロ二量体を含む。米国特許第5,091,513号、同第5,132,405号および同第4,956,778号;ならびに米国特許公開第20050196754号および同第20050196754号も参照されたい。
本発明のポリペプチドを発現するため、本明細書に記載されている方法のいずれか、または当技術分野で公知の方法によって得られたDNA分子は、当技術分野で周知の技法によって、適切な発現ベクターに挿入することができる。例えば、二本鎖DNAは、合成DNAリンカーの使用を含む制限酵素の連結によって、または平滑末端ライゲーションによって、好適なベクターにクローニングすることができる。DNAリガーゼは、DNA分子をライゲーションするために通常、使用され、望ましくない結合は、アルカリホスファターゼによる処置によって回避することができる。
組換えベクターは、調節配列、例えば本明細書で定義されている、プロモーター配列、ターミネータ配列などに操作可能に連結されている、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列またはその断片を含むことができる。それらに含まれる遺伝子または核酸の発現を可能にする組換えベクターは、「発現ベクター」と呼ばれる。
手法の1つでは、処置の効力は、例えば、処置された臓器の生物学的機能(例えば、ニューロンの機能)を測定することにより評価される。このような方法は、当技術分野において標準的なものであり、例えば、Textbook of Medical Physiology(第10版)(Guytonら、W.B. Saunders Co.、2000年)に記載されている。特に、本発明の方法は、組織または臓器の生物学的機能を、少なくとも、5%、10%、20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%向上させ、または300%、400%もしくは500%も高く向上させることさえある。好ましくは、組織は、ニューロン組織であり、好ましくは臓器は脳である。
Loose-leaf、John Wiley and Sons, Inc.、San Francisco、Calif.)に記載され
ている。例えば、細胞増殖のためのアッセイは、細胞複製中、DNA合成の測定を含むことがある。一実施形態では、DNA合成は、[3H]-チミジンまたは5-ブロモ-2*-デオキシウリジン[BrdU]などの標識DNAプレカーサーを使用して検出し、これらを細胞(または動物)に加えて、次に、細胞周期のS期(複製)の間に、ゲノムDNAへのこれらのプレカーサーへの取り込みを検出する(Ruefli-Brasseら、Science 302巻(5650号):1581~4頁、2003年;Guら、Science 302巻(5644
号):445~9頁、2003年)。
本発明は、神経系疾患、または中枢神経系(例えば、貯蔵障害、リソソーム貯蔵障害、神経変性疾患など)の障害の処置もしくは予防のためのキットを提供する。一実施形態では、キットは、治療ポリペプチドを発現する単離造血幹細胞を含有する組成物を含む。別の実施形態では、キットは、内因性ミクログリア細胞のアブレーション前処理のためのナノ粒子を含む。
Chain Reaction」(Mullis、1994年);「Current Protocols in Immunology
」(Coligan、1991年)などの文献において、十分に説明されている。これらの技法
は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用され、こうして、本発明を作製および実施する際に考慮されてもよい。特定の実施形態に関する特に有用な技法は、以下に続く、項目において記載されている。
マウスHSPCの脳室内注入により、脳内の迅速かつ強固な骨髄細胞生着がもたらされる。
最近の結果(Capotondoら、PNAS 2012年)により、HCT後の脳において骨髄細
胞の再構成を得るために、骨髄造血ニッチにおける生着および永続的なドナーキメラ現象が必ずしも必要とされないことが提唱されている。これらの知見に基づいて、骨髄およびミクログリア様細胞の再構成が、前処理マウスにおける脳室空間にHSPCの直接移植に際し起こるかどうかを評価した。マウス系統陰性(Lin-)HSPC(3×105個の細胞)を、GFPをコードするレンチウイルスベクター(LV)で標識し、骨髄アブレーション用ブスルファン用量または致死照射に曝露した後に、マウスにICV注入することにより移植した(図1A)。興味深いことに、移植により、ICV移植マウスのCD45+CD11b+脳骨髄コンパートメントにおいて、移植細胞の局所増殖に由来すると考えられる、GFPキメラ現象が高度に、かつ次第に増大した(図1B)。各時間点および状態に関して、GFP+HSPCをIV移植した対照マウスを比較条件として使用した。留意すべきことに、ミクログリア再構成の速度は一層迅速になり、GFP+ HSPCをICV移植した場合、IVと比べて、GFPキメラ現象の程度は高かった(図1B)(細胞投与の経路の有意な効果および時間は、二元配置ANOVA解析により示した)。これは、IVと比較して、細胞をICV移植する数が少なくなることを考慮すると驚くべきことである。IV注入の場合のように、ブスルファンにより事前処置されたレシピエントマウスは、ICV細胞移植すると、照射動物と比べて、より高い脳脊髄ドナーキメラ現象を示した。
ヒトHSPCの脳室内注入により、脳内の迅速かつ強固な骨髄細胞生着がもたらされる。
この現象の臨床的関連性に対する洞察を得るため、前処理した免疫不全動物モデルにおいて、ヒトHSPCがICV送達時にミクログリア様細胞を発生する能力を試験した。ICVまたはIVヒトCD34+細胞は、GFPをコードするLVを形質導入した臍帯血から単離して、NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1WjI/SzJ(NSG)マウスに注入した(図1E)。さらに、治療分子が脳に送達されるための移植の可能性の増大時の、ICV細胞移植の実際の役割を決定するため、免疫不全背景でアリールスルファターゼA(ARSA)欠乏症のために、リソソーム疾患である異染性白質ジストロフィー(MLD)を再現する、新しく生成したマウスモデルであるRag-/-γ-鎖-/-As2-/を使用した。これらのマウスは、IV注入単独もしくはICV注入単独によって、またはIV経路とICV経路との組合せによって、ARSAをコードするLVを形質導入したヒト臍帯血CD34+細胞の投与を受けた(Biffiら、Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら、Lancet 388巻、476~487頁(2
016年))(図1E)。
ICV注入したHSPCは、脳内で生着および拡張する一方、それらは、造血臓器中では生着しない。
GFP標識したLin- HSPCをIVまたはICV移植したマウスの短期間のフローサイトメトリーのモニタリングによって、レシピエント動物の脳中にICVにより送達された細胞の存在、持続性および適度な拡張が実証された(図2A)。反対に、ICV移植マウスの骨髄では、検出された無視できる量のGFP+細胞しか検出されなかった(<1%)(図2B)。GFP+細胞は、早期造血マーカー(図2C)を一過的に上方調節し、この後、CD11b、CX3CR1およびCD115ミクログリアマーカーを、内因性ミクログリアに類似するレベルまで上方調節した(図2D)。GFP-CD45+内因性細胞は、ブスルファン処置の可能な効果として、CD115を一過的に、およびわずかに下方調節した(図2D)。
コンビナトリアル移植プロトコルの最適化により、適切な臨床用途について、IV対ICV移植細胞の寄与をモジュレートすることが可能になる。
前処理したレシピエントにおいて、細胞および遺伝子治療法に関するICV細胞送達の開発は、様々な予想される標的疾患に従い、移植条件の最適化を必要とする。目的とする疾患による様々な目標により適合可能な様々な選択肢が適用可能となる。特に、以下の2つのシナリオを考えることができる:
A)ミクログリア再構成を効率的かつ迅速にすることを目標とするため、i)修正した自己移植遺伝子、またはii)全身性および神経性障害を伴うSDの処置のための健常ドナーの移植後HSCによる、造血組織(CNS外骨髄集団を含む)とミクログリア両方の再構成;この手法に適合可能な疾患の例には、MLD、GLD、MPSI、MPSIIおよびMPSIIIが含まれる。
B)専ら神経障害または神経変性疾患を有するSDを処置するため、移植後の自己移植遺伝子修正HSCによる、ミクログリアの再構成;この手法に適合可能な疾患の例には、INCL、GM1ガングリオシド蓄積症、PD、ALS、ADが含まれる。
A)脳骨髄キメラ現象へのIVおよびICV注入HSPCの寄与は、特定の条件において等しかった;特に、ICVとIVの細胞子孫の両方からなる、脳キメラ現象による脳およびBMのレベルにおける細胞のより大きなキメラ現象が、IVとICVの両方でLin- HSPCを組み合わせて、両方の部位において、同日に細胞を移植することによって実現された;類似した結果が、Lin- ICVを全BMのIVと組み合わせることにより得られた一方、すべての試験条件において、わずかに低いキメラ現象がKSL IVの使用に伴った;こうして、このプロトコルを、図6に記載されている、MLDまたはMPS IIなどの条件に適用することができた。移植細胞/その子孫の脳の生着を留める帯域を成長させる際に意図される組合せ/共移植手法としてのこのプロトコルの臨床移行に関して、本発明者らは、以下の選択肢を想定する:遺伝子治療法の場合、各疾患に対して目的の遺伝子をコードするベクターを形質導入した、自己移植CD34+細胞である、Lin-細胞のヒト等価体を、同日に、ICVとIVの両方で移植する。同種異型の健常ドナー細胞を使用した場合、ドナーCD34+細胞は、ICV投与される一方、未操作骨髄またはアフェレティック生成物のどちらか一方は、ICV移植の同日に、IV移植される。
B)ICV注入したHSPCの脳骨髄キメラ現象への寄与は、特定の条件における、IVで共注入したHSPCの寄与よりも勝る。特に、IV細胞子孫による脳キメラ現象への最低の寄与は、5日目に、ICV移植したLin-細胞とIV移植した全BM細胞との組合せにおける、高いキメラ現象の値の文脈において実現された;このプロトコルにより、ICV細胞子孫のキメラ現象をほとんど独占的に得ることができ、こうして、図7A~7Eに記載されている、INCLなどのCNS障害だけに関連する条件に適用される。移植した操作された細胞/その子孫の専ら脳への、多くのしっかりした生着を促すことを意図した組合せ/共移植手法として、このプロトコルの臨床移行に関して、本発明者らは、以下の選択肢を想定する:各疾患に対して、目的の遺伝子をコードするベクターを形質導入した自己移植CD34+細胞は、ICV移植される一方、未操作自己移植骨髄/アフェレティック生成物を、同日に、または理想的にはICV注入後の5日目のどちらかにIV注入し、ICV移植細胞との競合をさらに低下させる;本発明者らは、移植細胞の造血生着が、ドナーの耐容性の定着に必要となる、同種異型状況におけるこのプロトコルの使用を予期していない。
IVとICV移植したHSPCの両方の子孫細胞は、ミクログリアに一致する転写プロファイルを有する。
HCT後の脳骨髄細胞のドナー再構成は、早期脳のHSPC移入物の一部が局所拡張および分化して、骨髄アブレーションしたレシピエントの脳における都合のよい条件を見出す結果であることが示された(Capotondoら Proc Natl Acad Sci USA. 109巻、15018~15023頁(2012年))。移植後の脳骨髄細胞は、新生マウスの脳から単離された骨髄細胞と抗原特徴を共有する(図3Bおよび4B)。実際に、両方の状況において、ミクログリア(TAμ)を一過的に増幅するものとして、本発明者らにより既に記載された、CD45+CD11blow骨髄細胞が多量に存在する。興味深いことに、移植マウス脳に由来するTAμ細胞は、移植後フェーズの早期に、ドナー要素が高度にかつ優先的に濃縮される(図4B)一方、後期移植後段階においてのみ、抗原特徴および形態特徴に基づいてミクログリア(μ)として特定された、CD45+CD11b+/high細胞内で、類似の高いレベルのドナーキメラ現象が観察される(Capotondoら Proc Natl Acad Sci USA. 109巻、15018~15023頁(2012年))。興味深いことに、本発明者らは、ICV注入したHSPCのCD45+CD11bhighGFP+μ子孫は、TAμ細胞に対して、類似しているが、前者の全体的に一層高い寄与の存在下では、IV注入した細胞のμ子孫よりも多量であることを観察した(図4A)。これらの知見を解釈して、ドナー由来細胞をさらに特徴付けるため、本発明者らは、ブルスルファン前処理後にGFP+HSPCを90日間早くICVまたはIV移植したマウスから、ならびに成体およびp10対照動物からのμおよびTAμ細胞(合計集団および/またはGFP+対GFP-画分)(図4B)をFACSで分類した。先に特定したミクログリア遺伝子は、分類した脳骨髄細胞に対して、および対照の成体動物からの骨髄マクロファージに対して、リアルタイムPCR(Tmem119、Tgfbr1、P2ry13、Mertk、Olfml3)により増幅した(Bennetら、Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 113巻、E
1738~1746頁(2016年);Butovskyら、Nature neuroscience 17巻、131~143頁(2014年);Chiuら、Cell Rep 4巻、385~401頁(201
3年);Hickmanら、Nature neuroscience 16巻、1896~1905頁(2013
年);Grommesら、Journal of neuroimmune pharmacology 3巻、130~140頁
(2008年))。ICVおよびIV移植マウスの脳から単離された細胞を、ミクログリア遺伝子発現プロファイルと比較し、テューキーの事後検定によるANOVA P値を得た。興味深いことに、ICVおよびIV移植マウスの脳から単離した細胞は、マクロファージよりも、対照マウスから単離したμ細胞のレベルと同様のレベルで、これらの遺伝子の発現を示した(図4C)。さらに、μとTAμの画分内において、ICV移植したHSPCのGFP+子孫は、IV移植マウスからの成人対照μおよび(GFP-およびGFP+)μのそれとは非常に類似した発現レベルとなることを示した。選択された遺伝子は、IV移植マウス(特に、GFP+)のTAμ集団、およびp10マウスから単離したTAμにおいて、わずかに低いレベルで発現した。このことはすべて、i)IV移植とICV移植の両方のHSPCの子孫細胞は、ミクログリアと一致した転写プロファイルを有すること、およびii)脳におけるICV注入したHSPCの子孫細胞は、IV注入したHSPCの子孫よりも一層ミクログリアに類似していることを示している。
移植マウスの脳に由来する骨髄細胞は、成熟ミクログリアの機能的特徴との類似性を示す。
移植マウスからのμおよびTAμ細胞と、対照のナイーブな動物から回収した成熟μとの間のトランスクリプトーム差異を解析するため、ゲノムワイド発現解析を、GFPを発現するHSPCを3か月早く移植したマウスから、ならびに成体およびp10対照ナイーブマウスからの分類したμおよびTAμ集団に対して、Illumina RNA-Seqプラットフォームにより行った(図4Dおよび4E)。それらの遺伝子発現の差異を試験するため、得られた発現データセットを、Gosselinおよび共同研究者からのもの(Gosselinら、Cell 159巻、1327~1340頁(2014年))と一緒に単離し、Butovskyにより特定された239の遺伝子に特に着目した(Butovskyら、Nature neuroscience 17巻、131~143頁(2014年))(図4Dおよび4E)。興味深いことに、すべてのミクログリア試料は、互いに近いクラスター化させたこの解析に含み(図4Dおよび4E)、移植後に再構成されたμおよびTAμ細胞は、ミクログリアのそれと一致した遺伝子発現のパターンを共有することが確認された。GSEA事前ランク付けした解析(Subramanianら、Proc Natl Acad Sci USA 102巻、155
45~15550頁(2005年))に連携した差次的遺伝子発現を、RNA-Seqデータに対して行った(図5A~5F)。成体対照対μからのμ(図5A)、および移植マウスからのTAμ(図5C)に富む、生じた遺伝子のオンコロジー生物学的プロセスは、免疫細胞の分化、免疫応答、DNA/RNAプロセス、およびDNAのメチル化、対照μの成熟免疫機能への指定に関連した。一方、移植マウス(図5B)からのμ細胞に富むプロセスは、ニューロンの移動、分化およびシナプス可塑性の調節などのニューロン関連プロセスの範囲に及んだ(Colonna and Butovsky、Annu Rev Immunol、(2017年);Tayら、J Physiol 595巻、1929~1945頁(2017年))。濃縮される
プロセスの中で、本発明者らはまた、グリア細胞分化、グリオーシス、ならびに代謝および細胞呼吸を見出し、移植に由来するμ細胞は、ニューロン環境と相互作用する/これらに影響を及ぼす(これは、かなりの量のエネルギーを消費するプロセスである)傾向が一層強いという考えを支持している(Miyamotoら、Front Cell Neurosci 7巻、70頁
(2013年))。移植後TAμ濃縮プロセス(図5D)は、μ細胞に関する成熟の様々な推定上の段階の基礎をなす一層、強い神経機能シグネチャを提示し、ミクログリアが、その成熟状態に従い、様々な機能を必要とするという概念と一致する(Matcovitch-Natanら、Science 353巻、aad8670頁(2016年))。興味深いことに、移植マ
ウスからのμおよびTAμ細胞は、ミクログリアの発達の間に強固にモジュレートされることが示された遺伝子を発現する(Matcovitch-Natanら、Science 353巻、aad8
670頁(2016年))。留意すべきことに、移植動物からのμは、成熟ミクログリア機能に関連する5つの選択遺伝子のうちの4つの発現レベルに関して、対照μと一致した一方、異なる経路が、移植マウス(図5Eおよび表2)からのTAμにおいて、および新生段階(図5Fおよび表2)に関連する遺伝子において観察され、可能性として、異なるおよび動的な成熟段階に関連した。
ナイーブな、または移植後マウスの脳実質に関連する造血細胞は、クローン形成および造血性再増殖可能性、ならびにミクログリア再構成可能性を有する。
HSPCは、髄外組織内で特定され、それらの部位で一過的に局在化すると考えられ、局部的に増殖することができ、組織常在性骨髄細胞、優先的には樹状細胞を生じる。クローン形成可能性は、これらの細胞が脳内にも存在するためだとされたが、並体結合対の定着時、他の骨髄外組織に観察されるものと異なって、2種の動物間のキメラ現象は、脳中で観察されなかった。このことは、脳クローン形成活性が、ミクログリア前駆体の場合に仮説が立てられているように、並体結合対において、キメラ現象に適合可能ではない固定組織細胞に帰することができることを示唆する可能性がある。したがって、脳においてクローン形成可能性を有する細胞をよりよく特徴付けること、ならびに前処理マウスにおいて、これらが移植可能かどうか、ならびに前処理時のアブレーションおよびHSC移植時の置き換えに適合可能かどうかを評価することを試みた。さらなる研究はまた、これらの(hese)細胞が、実際に、ミクログリアの再増殖可能性を有するかどうかの判定時に意図される。単核細胞は、GFP-LVを形質導入した系統HSPCを添加しない、または添加した、ナイーブマウスおよび致死性骨髄アブレーションの投与を受けた動物(ブスルファンまたは照射の前処理による)の骨髄および脳(造血系統細胞のパーコール濃縮時)から単離した(図6A)。これらの細胞は、コロニー形成単位(CFU)を得るためにサイトカイン(citokyne)を補充したメチルセルロース中でプレート培養した。プレート培養して14日後に、予期されるように、離散性の造血コロニーを骨髄から、およびナイーブマウスに由来する脳培養物から回収した(図6B)。ブスルファンおよび照射前処理時に、骨髄と脳組織の両方からCFUアウトプットの劇的な低下が観察され、ブスルファンのより大きな効果が、脳のCFUアウトプットに関して記録された。重要なことに、CFUアウトプットは氷中で回復し、骨髄と脳の両方において、HSPC移植(図6C)時に前処理から回収した。両方の部位のGFP+コロニーにおいて、CFUアウトプットはキメラ度が高く、このことは、HSPC移植が、固定化された脳造血性クローン形成性前駆体に寄与し得ることを示している。一次移植レシピエントからの骨髄および脳のパーコール濃縮単核細胞もまた、ブスルファン前処理レシピエントへの二次移植に使用した(図6A)。驚くべきことに、一次レシピエントに由来するGFP+細胞は、移植後、長期の、二次レシピエントの造血組織および脳において特定された(図6D)。造血組織常在性GFP+細胞は、多系統マーカー発現を示した一方、脳常在性細胞は、ほとんどCD11b発現性であった。
操作されたHSPCのICV+IVの組合せ送達は、神経変性およびCNS外特徴を有する代表的なLSDである、異染性白質ジストロフィーに対する治療的妥当性を有する。
治療分子が脳に送達されるための移植の可能性の増大において、ICV細胞移植の実際の役割を決定するため、免疫不全背景で、ARSA欠乏のために、リソソーム疾患ML)を再現する、新しく生成したマウスモデルであるRag-/-γ-鎖-/-As2-/を使用した。これらのマウスは、ARSAをコードするレンチウイルス(LV)を形質導入したヒト臍帯血 CD34+細胞を、IV単独注入もしくはICV単独注入で、またはIV経路とICV経路との組合せにより投与を受けた(Biffiら、Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら、Lancet 388巻、476~487頁(201
6年))(図1Dおよび図6A)。興味深いことに、明確に定義されたヒト骨髄(CD45+CD11b+)細胞子孫が、IV移植とICV移植の両方の後で、長期間、移植マウスの脳内で特定された(図1D~1G)。ICV細胞の送達により、IV送達と比較して、脳中でのヒト細胞生着がより多くなった(図1G)。IVと組み合わせたICV細胞の送達により、脳中でさらに一層多くのヒト細胞が生着した(図1G)。次に、Rag-/-γ-鎖-/-As2-/-マウスの脳におけるより大きなヒト細胞骨髄キメラ現象が、脳へのARSA酵素のより大きな送達を決めるかどうかを評価した。重要なことに、ICV移植ヒトHSPCの脳骨髄キメラ現象への寄与の増大により、移植マウスの脳により大きなARSA酵素送達がもたらされた(図1G)。これは、特に、IV+ICVの組合せ送達の場合に顕著であり、この送達により、As2+/+対照とは区別が付かないレベルに到達した。移植の16週間後、同程度の、正常を超えるARSA活性レベルが、形質導入細胞をIV単独で、またはIV+ICV移植したマウスの骨髄において測定された(図6B)。興味深いことに、酵素活性の回復もまた、移植マウスの脳において測定され、IVおよびICVによる組み合わせで形質導入細胞の投与を受けた動物において、野生型レベルに近づく有利な増大傾向を伴った(図6B)。このデータにより、移植手法を組み合わせると、標準的なIV移植手法と比較して、脳への酵素送達が一層大きくなり、こうして、CNS障害を有するSDに対するHSC遺伝子治療法の総合的な治療的可能性を向上させる有望な戦略と思われることが実証される。さらに、HSPCのICV単独送達は、IV細胞送達としてMLD脳に同量の治療酵素を送達するのに十分であることが示されている。
巻、3070~3082頁(2006年);Biffiら、J. Clin. Invest. 113巻、
1118~1129頁(2004年))および患者(Biffiら、Science 341巻、1233158頁(2013年);Sessaら、Lancet 388巻、476~487頁(201
6年))、ならびに他のリソソーム蓄積症モデル(Gentnerら、Sci Transl Med 2巻
、58ra84(2010年);Visigalliら、Blood 116巻、5130~5139頁(2010年))に投与すると、用量効果の関係が存在し、造血細胞および脳において酵素活性の再構成が高まるほど、CNS疾患の兆候の制御に治療効力が向上することが実証される。したがって、ICV細胞の送達の使用は、遺伝子により修正されたHSPCの移植の治療的効力を増強する可能性を有する。
野生型HSPCの組合せICV+IV送達は、神経変性およびCNS外特徴を有する代表的なLSDである、II型ムコ多糖症における治療的関連性を有する。
これらの知見、特に脳に治療分子を送達するため、および脳と全身性障害の両方を有するLSDに対する利益を発揮するため、HSPC移植の可能性を増大する際のICV細胞移植の実際の役割を確認するため、II型ムコ多糖症(MPS II)のマウスモデルである、2か月齢の骨髄アブレーションしたイズロン酸スルファターゼ(IDS)-/-レシピエントに、Lin- HSPCおよび全BMを野生型ドナーから移植した(図6C)。IV単独のマウスは、野生型IDS+/+ドナーのIVから専ら全BMを受けた。対照は、未処置のままにした。180日後、処置マウスおよび対照マウスの挙動を、ロータロッドによって試験した。興味深いことに、両方の処置(tretament)により、4回の試行
にわたりマウスのロータロッド成績が改善し(図6D)、IVとICV+IVの両方で処置したマウスは、第1の試験と比べて、第4回目でロッド上で消費した時間が増加した(図6E)。しかし、ICV+IVで処置したマウスの成績は、IV単独の移植動物の成績を超えた。理論によって拘泥されることを意図するものではないが、このことは、ICV細胞の送達の使用は、MPS IIにおいて、野生型HSPCの移植の治療的効力を増強する可能性を有することを示している。
マウスにおけるHLAマイナーおよびMHC抗原不一致HSPC IV+ICV移植は、実現可能であり、高い脳ドナーキメラ現象に関連する。
患者における、同種異型移植の文脈におけるICV HSPC移植手法の適用可能性、特に、マイナー抗原とMCH不一致移植状況との両方の文脈におけるICVおよびIV移植の組合せを評価した。不一致ドナーからの造血細胞移植を受けたマウスにおける、全生存およびCNSミクログリア生着に及ぼす同種異型HSPCのICV送達の影響を試験した。MCH不一致(B6.SJL CD45.1レシピエントへはBALB/cJ CD45.2ドナー;1つの細胞のICV用量を試験した、3×105個の細胞/マウス)、およびマイナー抗原不一致(MHC一致;B6.SJL CD45.1レシピエントへのBALB_B CD45.2ドナー;2つのICV細胞用量を試験した、3×105および1×106/マウス)移植状況の文脈においてICV+IV HCTを適用した。-1日目に、レシピエントマウスの前処理に全身体照射(TBI)(1000Rad)を使用した。マウスは、新しい全骨髄(tBM)のみの投与を受けるか、またはICV注入したGFP形質導入Lin-細胞と一体にした(図8Aおよび9A)。移植後、それらのマウスを最大で9~10週間(マイナー抗原不一致)および16週間(MHC不一致)、追跡した。レシピエントにおいて、希なインターカレント死(inter-current death)(ICD)が観察され、特定の処置に関連するものではなかった(図8Bおよび9B)。生存動物はすべて、体重の安定な増加および総合的な良好な健康を有した。PB、BM、脾臓および胸腺(マイナー抗原不一致移植の場合、後者の胸腺)に関する、サイトフローメトリック解析により、ドナー細胞の生着の成功が実証された(図8Cおよび9C)。重要なことに、ICV移植したHSPCの子孫であるGFP+細胞は、試験した造血組織において検出されなかった(図8Dおよび9D)。IVのみのレシピエントと比べると、IV+ICVでのマイナー抗原不一致動物により、脳内のドナー由来細胞からの用量依存的生着が実証された。両方のマイナー抗原およびMHC不一致動物において、HSPCのICV送達は、IVのみの移植と比べて、CNSにおけるドナー由来ミクログリアキメラ現象に利点をもたらした。結論として、側脳室への同種異型造血幹細胞/前駆細胞の送達は、組合せ送達法で実現可能であり、マイナー不一致およびMHC不一致状況の両方において、脳内のドナー由来キメラ現象を増強することができる。このデータは、CNS関連利点を強めるために、同種異型の造血細胞移植手順の文脈において、ICV移植が適用可能であることを支持する。
HSPCの鞘内送達は、コンビナトリアルHSPC移植戦略の文脈において、脳および造血キメラ現象に寄与することができる。
HSPCのクモ膜下送達は、ICV細胞送達と同様に、CNSドナーキメラ現象に寄与することができるかどうかを評価した。Lin-HSPCは、CD45.2ドナーマウスから単離し、これに、GFPをコードするLVを形質導入した。形質導入後、細胞をCD45.1骨髄アブレーションしたレシピエントにIV(1.0×106個の細胞/マウス)で、ICV8(0.3×10^6個の細胞/マウス)またはクモ膜下(IT)(0.3×106個の細胞/マウス)で移植した。移植の5日後、ICVおよびIT移植マウスに、mCherryをコードするLVを形質導入したCD45.1ドナーからの全BM細胞を与えた(図10A)。マウスは、移植して45日目に犠牲にした。HSPC(CD45.2 GFP+)の高いおよび同等な生着が、IVおよびIT移植マウスのBMにおいて観察された一方、ICV移植マウスのBMでは、CD45.2 GFP+細胞はまったく(または、非常に低くしか)観察されなかった(図10B、左のグラフ)。ICV移植マウスは、mCherry+ CD45.1 BM移植細胞の良好なBM生着を示した一方、IT移植マウスでは、同じ細胞は、恐らく0日目に移植したCD45.2 GFP+ HSPCとの競合のために、ほとんど生着しないことを示した。すべての群の脳骨髄コンパートメントにおいて生着したCD45.2 GFP+ HSPCを解析し(図10Bの中央のグラフ)、ICV+IV注入マウスは、他の群と比べて、最高のドナーキメラ現象を示した。IV移植細胞のmCherry+ CD45.1細胞子孫が、ICV移植マウスにおいて観察された。すべての群の脊髄骨髄コンパートメントにおいて生着したドナー(GFP+mCherry)細胞を解析し(図10Bの右側グラフ)、ICV+IV注入マウスは、他の群と比べて、最低のGFPキメラ現象を示した。ITのマウスと比べて、ICV移植マウスでは、mCherry+ CD45.1 BM移植細胞の割合の増加が観察された。全体として、これらのデータにより、脳内および移植レシピエントの脊髄の両方において、骨髄細胞の再構成を達成するために、HSPCに関するさらなる投与経路として、ITを使用することができることが示される。ICVおよびIVのみの送達(deliveyr)はまた、ドナーによる顕著な脊髄キメラ現象に関連している。ドナー細胞を移植したITはまた、末梢血液および骨髄に専ら観察され、このことは、ITは、移植に際しCNSにおいて保持されないことを示している。したがって、この移植手順は、特に、CNSと全身性障害の両方を有するそのような疾患の場合に、考慮することができる。
早期造血幹細胞/前駆細胞に由来する、移植後脳骨髄細胞
HSPC内のc-kit+、Sca-1+、Lin-(KSL)画分は、IV移植に際しマウスの脳における、TAμおよびμを生じさせることができる一方、c-kitおよびSca-1(Not-KSL)に対する二重陽性ではないLin-前駆細胞は、そうではない(Capotondoら、Proc Natl Acad Sci USA 109巻、15018~1502
3頁(2012年))。この知見は、骨髄脳細胞代謝回転への移植細胞の差次的寄与の可能性を評価するため、IV(図11D)およびICV(図11E)経路の両方を使用して、個々の動物における、差次的に標識したKSLおよびnot-KSL細胞を共移植することによる厳密な競合状況でさらに調べた(図11A、11Dおよび11E)。KSL細胞は、not-KSLをIV注入した場合、CD45+CD11b+骨髄脳細胞;CD45+CD11bhighμ細胞;CD45+CD11b+/low一過性増幅μ-TAμ細胞;CD45highCD11bhigh CNS関連マクロファージ、CNSmacとして特定される、様々な脳骨髄細胞集団(図11D)にほとんど独占的に寄与した(Capotondoら、Proc Natl Acad Sci USA 109巻、15018~15023頁(20
12年))。KSLおよびnot-KSL細胞は、ICV注入した場合、代わりに、脳骨髄細胞再構成に同程度に寄与した(図11E)。脳骨髄細胞の生着に寄与するよう、SLAMマーカーであるCD150およびCD48の差次的発現により、KSLコンパートメント内で特定された、差次的に標識した部分集団の能力に取り組んだ(図11A、11B)。競合的IV移植に際し、CD48-/CD150+長期間HSC(LT-HSC)およびCD48-/CD150-多能性前駆体(MPP)に比べ、他の注入集団よりも、脳骨髄コンパートメントを再構成する能力が最高となることを示した(図11F)。対照的に、より強くコミットしたCD48+CD150-細胞もまた、マウス移植ICVの脳骨髄集団の再構成に寄与した(図11G)。移植マウスの造血再構成は、図11Cに示されている。IVおよびICV移植マウスからの脳の凍結スライスに関する組織学により、これらの結果が確認された(図11Hおよび11I)。これまでの知見に一致して、これらの状況においても、ドナー由来細胞は、薄いプロセスが細胞本体から出ている分岐形態を示し、骨髄マーカーIba-1およびCD11bを発現した(図11Hおよび11I)。
~975頁(2006年);Rettigら、Leukemia 26巻、34~53頁(2012年);Sugiyamaら、Immunity 25巻、977~988頁(2006年))を、KSL、not-KSL細胞および上記の4つのKSL部分集団に関して解析した(移植時の形質導入の終わりに細胞を解析した)。興味深いことに、IV注入状況における、ミクログリア様細胞の再構成可能性、すなわちKSL、LT-HSCおよびMPPにおいて濃縮した細胞は、not-KSLおよびHPC-1およびHPC-2と比べて、一層高いレベルでCXCR4を発現した(図11J)。理論によって拘泥されることを意図するものではないが、この知見は、高いレベルの細胞でCXCR4を発現する細胞は、IV注入時の脳への早期動員に有利となり得、したがって、脳骨髄細胞のキメラ現象に寄与する能力に有利となり得る。これは、異なるシグナルが重要となり得る場合、ICV送達に適用することはできない。
USA 109巻、15018~15023頁(2012年))。ドナー由来細胞は、C
D45およびCD11bを発現し、TAμ細胞コンパートメントの大部分に存在した(図12Dおよび12E)。
調節された治療的遺伝子発現のためのミクログリアの分子工学操作。
本明細書において記載した革新的なプロトコルの文脈における、IVまたはICVのどちらか一方で移植した細胞の分子工学操作は、治療的遺伝子発現の効力、安全性および特異性/調節という正確な要件に対処するために必要である。このことに関する限り、持続的ではあるが調節された導入遺伝子発現が必要となることがある特定の状況に適用することができる、組み込み用ベクターによる遺伝子移入および標的化された遺伝子付加に基づいて、2つの異なる戦略が開発されている。
(2009年);Turnerら Neurobiol Dis 15巻、601~609頁(2004年))。ミクログリア細胞は、TSPOシグナルの増加を担う主要な細胞タイプである。したがって、TSPOは、脳において、ミクログリア関連神経炎症をモニタリングするための有用かつ感受性の高いマーカーであり、そのプロモーター配列は、組織損傷および炎症に応答する新規に操作されたミクログリアによってマーカーまたは治療用タンパク質生成に対する最適調節配列として使用することができた。神経変性疾患およびニューロLSDにおける適用可能性を含めた、脳への治療分子の調節された送達のためのHSC誘導による、TSPOを標的とする、脳ミクログリアの工学的操作を可能にする革新的手段を開発している。特に、脳ミクログリアは、局所神経変性および上で詳述した先進的移植プロトコルを使用する神経炎症に応答して、細胞活性化に目的の遺伝子を発現するよう操作されている「センサー」細胞により、罹患した脳において再構成される(この状況はまた、μ前駆体に向かわせる前処理レジメンの使用に適合可能となる)。
ること、およびCRISPR-Cas技術を使用する標的化された遺伝子付加によってそのプロモーターを活用するTSPO遺伝子の第1のイントロン/エクソンの手前/その内部に治療的遺伝子を挿入することにより達成することができ、様々な戦略が試験されている。TSPOノックアウトマウスは、この後者の戦略の実現可能性に関する証明となる(Banatiら Nat Commun 5巻、5452頁(2014年))。第3世代のLVの文脈に
おけるマーカー遺伝子としてのGFPの手前に挿入された(図16B)選択されたTSPOプロモーター配列(Wangら、Cell Tissue Res 350巻、261~275頁(20
12年))(図16A)は、ナイーブ配列により予期されるように、ミクログリア細胞内(ミクログリア細胞系BV2内)の持続的な導入遺伝子発現を推進することが確認されており、細菌のLPSによる刺激に応答する(図16Cおよび16D)。形質導入されたおよび/または編集された細胞は、次に、先進的プロトコルにより、レシピエントマウスにおける脳骨髄細胞を専ら再構成するために使用される。
、491~503頁(2010年))およびグロボイド細胞白質ジストロフィー(GLD)の動物モデル(Visigalliら Neurobiol Dis 34巻、51~62頁(2009年)
)などの、ミクログリア活性化およびTSPO上方調節により特徴付けられる動物モデルにおいて検証されている。この手段は、その機能性について確認され、治療作用に対するその可能性は、利用可能な動物モデルにおいて検証されている。
ブスルファン毒性およびFgd5リポータマウスのγH2AXマーカーの使用によるミクログリア前駆体の同定。
これまでの検討により、i)脳に位置しており、ブスルファンに基づく前処理の投与時にアブレーションされ易い機能的に規定されたミクログリアプレカーサー集団であって、内因性CNS常在性ミクログリア前駆体(μP)と同時に発生し得る、ミクログリアプレカーサー集団の存在の証拠を提供する。リン酸化ヒストン2AX(γH2AX)は、脳内のブスルファンによって標的とされる細胞を追跡する高感度な特異的バイオマーカーである。したがって、機能的な脳常在性μPは、ブスルファン、およびこれらの細胞内のその細胞毒性の薬理学マーカーであるγH2AXを利用することにより特定することができる。γH2AXを、ブスルファン細胞毒性のバイオマーカーとして検討した。特に、γH2AXの存在、分布および細胞局在化を、全身性ブスルファン前処理により処置したマウスからの脳のスライスに対するフローサイトメトリー(FC)および免疫蛍光法(IF)により検討した。FCは、最後のブスルファン用量から1日目および5日目における、ブスルファン処置対対照の未処置動物において、特に生存CD45+細胞内で、γH2AXシグナルが向上することを示した(図15B)。同時に、ブスルファン処置後の早期アポトーシスはまた、特に、CD11b+およびc-kit+細胞において、CD45+脳細胞内でのアネキシンV染色により検出される(図15A)。IFによって、γH2AXは、主に海馬に位置する、ほとんど存在しないニューロン細胞中に見出される一部のγH2AX+病巣を除いて、対照マウスではほとんど検出されず(図16C、上の写真)、生理学的ニューロン活性とH2AXリン酸化との間の相関が、以前に示されている。対照的に、ブスルファン処置マウスでは、γH2AX+シグナルは、側脳室、脳室下(SVZ)および吻側移動流(RMS)をライニングする細胞の核において向上した(図15C、下部の写真)。γH2AX+病巣は、ニューロン(図15C挿入図)とグリア細胞、すなわちミクログリアと星状細胞(図15Cの挿入図)の両方で局在化していた。まとめると、これらのデータは、CNS幹細胞のニッチ領域を含めた脳の十分に規定された領域に局在化するニューロン細胞と非ニューロン細胞の両方が、ブスルファンに対して感受性が高いことを示している。したがって、これらの結果は、ミクログリア前駆細胞を特定する可能性を有する。同様の実験が、ブスルファン感受性細胞を一層良好に追跡するため、Fgd5またはCx3Cr1などの造血幹細胞およびミクログリア特異的遺伝子のマーカーのプロモーターにより発現されるリポータ遺伝子を発現するマウスにおいて行われている。
標的送達のためにナノ担体を使用する、ミクログリア前駆体を標的とする選択的脳前処理。
ブスルファンの全身性投与は、ドナー由来細胞を有する脳ミクログリアの効率的な代謝回転を発展させるのに役立つ。類似しているが、CNSに限定されるレジメンにより、骨髄アブレーションによる全身性前処理の副作用から、CNSに限定される疾患(例えば、INCL、PD、ALSなど)を有する患者が保護される。予備検討では、マウス中の側脳室内に埋め込まれたカニューレにより、ブスルファンの脳内投与の可能性を調べた。臨床的グレードのブスルファン製剤を含めた、ブスルファンの様々な薬物製剤を試験した。しかし、ICV投与は、全身性薬物投与によって達成されるものに匹敵するブスルファンレベルへの脳常在性μPの曝露を保証することはできず、移植したHSPC生着を有利にすることもできなかった(データは図示せず)。広範囲の神経毒性および局所炎症にむしろ関連した。したがって、ナノ粒子を使用する標的薬物送達戦略を実施した。理論によって拘泥されることを意図するものではないが、ナノ粒子は、機能的に規定されたμPにアブレーション薬物を効率よくかつ選択的に送達することを可能とする可能性を有することができる。
ーカーネスチンを時に発現した(図17H、右側の写真)。ローダミンシグナルのNPを注入した脳中での存在および分布は、興味深いことに、Eduシグナルの分布と一致しており、NPは、ミクログリア前駆体特徴を有する細胞を含み得る、増殖細胞中に優先的に起こっている(図17I)ことを示唆する。
巻(2号):380~397頁(2014年))の10日間の経口投与により事前処置した野生型の成体動物の脳にICV注入した(図19A、19C、19D)。NP注入の5日後に、動物を、脳ミクログリア前駆体のアブレーションの場合の参照として、ブスルファン標準処置(25mg/kgの4回用量)を使用する、ミクログリア細胞および/またはその前駆体のエトポシド媒介性死滅の発生について分析した。興味深いことに、エトポシドをロードしたNPは、標準のアブレーションによるブスルファン処置時に観察されたものと一致した、CD45+c-kit+およびCD45+CD11b+細胞内でアポトーシスを誘発した(フローサイトメトリーにおいて、アネキシンV陽性染色による)(図19Bおよび19E)。
造血幹細胞および前駆細胞からの転写により依存可能な新規ミクログリアを発生させるための新規な移植モダリティ
多角的手法を使用して、HCT後のドナーによる正真正銘の脳骨髄細胞の代謝回転を改善するため、新規戦略を特定し、この現象は、出生後の脳骨髄細胞の生理学的成熟を繰り返すことができるプロセスにより、転写により依存可能な新しいミクログリアの強固かつ迅速な生着をもたらすことができる。
ad8670頁(2016年))。それとは別に、移植動物および成体対照マウスに由来するμ集団は、免疫応答、細胞伝達および食菌作用に関連する遺伝子中で富み、これらの細胞は、成熟ミクログリアにより大部分、構成されていることを示している。したがって、これらのデータは、HCT後のミクログリア再構成は、移植後、短期間のドナー由来要素に通常、豊富な中間TAμ集団から、移植後の長期間で、ドナー要素に次第に一層豊富になるμ段階までの移行により起こるという仮説を支持し得る。この現象により、p10において特定された未成熟細胞から、成体対照動物から単離されたミクログリア細胞までの移行に沿って、出生後ミクログリアの発達が思い起こされ得る。この仮説の支持に際して、ミクログリア分化(Matcovitch-Natanら Science 353巻、aad8670頁(
2016年))に関連する選択遺伝子の発現をデータセットで検討し、HSPC由来細胞は、HCT時に、段階的な成熟プログラムに従うことが確認された。しかし、MAFBとして、成体ミクログリアの発達期に関与する転写因子を解析することにより(Matcovitch-Natanら Science 353巻、aad8670頁(2016年))、P10マウスと比
べて、HCTマウスから回収したTAμ細胞中にこの遺伝子が一層高く発現することが観察された。理論によって拘泥されることを意図するものではないが、成体の前処理マウスにおけるHSCP移植に際し発生する新しく形成されたTAμミクログリア細胞は、P10細胞と比べて、成熟段階へとより強くコミットしている。遺伝子発現のデータセットおよびこの移行中の関連変化の深い検討は、ミクログリア再構成をさらに改善するために使用することができる、ミクログリアの発達および維持に関与する重要因子の特定の一助となり得る。
C57BL6/JおよびC57BL/6-Ly5.1マウスは、Charles Riverによって提供を受けた。NOD.Cg-NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1WjI/SzJ(NSG)マウスは、Jackson実験室によって購入された。Rag-/-γ-鎖-/-As2-/-およびRag-/-γ-鎖-/-As2+/+マウスは、San Raffaele Scientific Instituteの動物施設で生成した(Meneghiniら、Stem Cells Transl Med、(2016年))。F
gd5ZsGr・ZsGr/+(Fgd5-ZsGreen)(The Jackson
Laboratory ストック番号027788)は、親切なことに、Derrick J.Rossi's laboratory、Harvard Universit
y/Boston Children's Hospitalによって提供を受けた(Gazitら、J Exp Med 211巻、1315~1331頁(2014年))。
若い成体マウス(5~8週)をCO2で殺傷し、大腿骨および脛骨を洗い流して、BMを得た。マウスHSPCを精製し、LVを形質導入し、記載の通り尾部静脈に注入することにより移植した(Capotondoら、Proc Natl Acad Sci USA 109巻、15018
~15023頁(2012年))。
Cell Depletionキット)/ストレプトアビジンPe-Cy5(BD Pharmingen)で染色した。次に、KSL画分の単離に関すると、細胞は、ラットのAPC-eFluor780抗マウスCD117(c-kit)(eBioscience)およびラットのPe-cy7抗マウスLy-6A/E Sca-1(Sca-1)(BD Bioscence)により染色した。CD150+/-CD48+/-細胞選択の場合、ハムスターPE抗マウスCD48(Biolegend)およびラットAPC抗マウスCD150(BioLegend)を加えた。細胞染色の終わりに、選択したマーカーの発現に従い、細胞をセルソータMOFLO XDP(Becton Dickinson)により単離した。リポータによるゲーティング戦略を図2Fに示す。単離したLin-、KSLまたはCD150+/-CD48+/-KSL細胞は、記載の通り、感染多重度(MOI)100で16時間、様々なレンチウイルスベクター(LV)を使用して形質導入した(Biffiら、J. Clin. Invest. 116巻、3070~3082頁(2
006年))。特に、以下のLVを使用した:
Lin-、KSLおよびCD150+CD48- KSL細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.GreenFluorescentProtein.Wpre(GFP-LV)(Dullら、J. Virol 72巻、8463~8471頁(1998
年));
not-KSL細胞およびCD150-CD48-KSL細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.DeletedNerveGrowthFactorReceptor.Wpre(ΔNGFR-LV)(Dullら、J. Virol 72巻、8463
~8471頁(1998年));
CD150-CD48+KSL細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.mCherryProtein.Wpre(mCherry-LV)(Biffiら、Science 341巻、1233158頁(2013年));CD150+CD48+KSL細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.Tag-BlueFluorescentProtein.Wpre(Tag-BFP-LV)。サイトフローメトリック解析によって導入遺伝子発現を評価するため、形質導入細胞の画分は、記載の通り、10日間、培養した(Biffiら、J. Clin. Invest. 116巻、3070~3082頁
(2006年))。形質導入細胞は、様々な実験状況に従い、様々な濃度で、照射(2×400cGy)または4回目のブスルファンの用量(25mg/kg×4日間)の24時間後に、7/8週齢の前処理済みC57BL6/J雌マウスに尾部静脈から注入した。
Lin-細胞:106個の細胞/マウス;KSL:0.3×105個の細胞/マウス;Not KSL:5×105個の細胞/マウス;HPC1≒0,12×104個の細胞/マウス;LT-HSC≒0,55×104個の細胞/マウス;HPC2≒1,8×104個の細胞/マウス;MPP≒0,55×104個の細胞/マウス。KSL細胞を移植して5日後に、マウスに、支持体としてCD45.1 C57マウスに由来する全骨髄(TBM)細胞を5×105個、投与した。マウスは滅菌条件に維持した。
Lin-細胞:0.3×106個の細胞/マウス;KSL:0.3×105個の細胞/マウス; Not KSL:3×105個の細胞/マウス;HPC1≒0,12×104個の細胞/マウス;LT-HSC≒0.55×104個の細胞/マウス;HPC2≒1,8×104個の細胞/マウス;MPP≒0,55×104個の細胞/マウス。移植して5日後に、マウスに、支持体としてCD45.1 C57マウスに由来する全骨髄(TBM)細胞を5×105個、投与した。
ヒト臍帯血(CB)由来のCD34+細胞は、Lonza(2C-101)から購入した。解凍時に、hIL-3[60ng/μL]、hTPO[100ng/μL]、hSCF[300ng/μL]、hFlt3-L[300ng/μL](それらはすべてPeprotech製、Hamburg、Germany)を補給した、CellGro培地(CellGenix、Freiburg、Germany)で、24時間、細胞を事前刺激し、記載の通り、MOI100で、1ラウンドのLV曝露によって、実験室グレードのLVをコードする、GFP-(Dullら、J Virol 72巻、8463~8471頁(1998年))またはARSA(Sessaら、Lancet 388巻、476~487頁(2016
年))を形質導入した(Biffiら、Science 341巻、1233158頁(2013年))。ゲーティング戦略は、図3M、3Nおよび3Oに示されている。単離後、細胞は、以前に記載されている通りに事前刺激し、様々なLVにより形質導入した。特に、以下のLV:
MPB CD38-およびCD38-CD90-細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.mOrangeFluorescentProtein.Wpre(Orange-LV);MPB CD38midおよびCD38+Cd90-細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.mCherryProtein.Wpre(mCherry-LV);
MPB CD38int細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.CyanFluorescentProtein.Wpre(Cyan-LV);MPB CD38high、CD38-CD90+細胞およびBM CD38-細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.GreenFluorescentProtein.Wpre(GFP-LV);MPB CD38+CD90+細胞およびBM CD38+細胞の場合、pCCLsin.cPPT.humanPGK.Tag-BlueFluorescentProtein.Wpre(Tag-BFP-LV)を使用した。サイトフローメトリック解析によって導入遺伝子発現を評価するため、形質導入細胞の画分を、記載の通り、10日間、培養した(Biffi、2013年)。形質導入後、細胞を洗浄して、7~9週齢の致死未満の照射(200cGy)、または骨髄アブレーションしたブスルファン処置(4日間、16.25mg/kg/日)した雌NSGマウスの尾部静脈に注入した。その生理学的割合に従い、様々に分類した細胞の混合物からなる、5×105個のhCD34+細胞または5×105個のhCD34+細胞を移植した。NSGマウスをブスルファンで事前処置した場合、雄のNSGマウスからの4×106個のTBMを支持体として移植した。NSGマウスにおけるhCD34+細胞のICV移植を、C57マウスにマウスのHSPCをICV移植する場合に記載されている通りに実施した。12週間後に、マウスを犠牲にして、ヒト造血細胞生着についてBMおよび脳を解析した。
1年))(0.75×105個の細胞/マウス)。移植して5週間後にマウスを犠牲にして、4-メチルウンベリフェリル-サルフェート基質を使用することによる細胞蛍光分析およびARSA活性によって、BMと脳のヒト造血細胞の生着を解析した(Martinoら、J
Biotechnol 117巻、243~251頁(2005年))。
マウスは、大腿骨をクランプした後、15分間、冷PBSを用いて、広範囲な心臓内潅流による深い麻酔下で安楽死させた。次に、臓器を採集して、異なる処理をした。記載の通り、クランプした大腿骨から骨髄(BM)細胞を採集した(Biffiら、J. Clin. Invest. 116巻、3070~3082頁(2006年))。脳を除去して、2つの脳半球
に異なる処理をした。免疫蛍光解析の場合、脳半球の1つを4% PFA中で24時間、固定化し、OCT化合物に埋包して、スクロースグラジエント(10~30%)の平衡後に-80℃で保管した。細胞蛍光解析に関すると、もう一方の脳半球からの細胞の凝集を機械的に解除し、20mlのGKN/BSA緩衝液(8g/L NaCl、0.4g/L
KCl、1.42g/L NaH2P04、0.93g/L Na2HP04、2g/L D+グルコース、pH7.4+0.002% BSA)中で単一細胞懸濁液を得た。
9巻、147頁(2012年))を使用して行った。
BMおよび脳からの細胞は、ブロッキング用溶液(PBS 5%FBS、1%BSA)に再懸濁してフローサイトメトリーにより解析し、以下の特異的抗体を用いて、15分間、4℃で標識した:ラットPE抗マウスCD45(BD Pharmingen)1:100;ラットAPC抗マウスCD45(BD Biosciences)1:150;ラットBrilliant Violet510抗マウスCD45(BioLegend)1:150;ラットPacific Blue抗マウスCD45.2(Bio Legend)1:100;マウスPE抗マウスCD45.1(BD bioscience)1:100;ラットAPC抗マウスCD11b(eBioscience)1:100;マウスAlexa Fluor 647抗ヒトCD271(NGF receptor)(BD Pharmingen)1:30;ラットAPC780抗マウスCD11b(eBioscience)1:100;ラットAPC780抗マウスCD117(c-kit)(eBioscience)1:100;ラットPE-Cy7抗マウスLy-6A/E
Sca-1(Sca-1)(BD Bioscence)1:150;ハムスターPE抗マウスCD48(Biolegend)1:100;ラットAPC抗マウスCD150(Biolegend)1:75;ラットPE抗マウスCD202b(Tie2)(eBioscence)1:150;ラットPE抗マウスCD184(CXCR4)(BD Bioscence)1:150;ラットPE抗マウスCD34(eBioscience)1:150;ラットPE-Cy7抗マウスCD93(AA4.1)(eBioscience)1:150;ラットビオチン抗マウスCD115(eBioscience)1:150;ヤギAPC抗マウスCX3CR1(R&D systems)1:75;APCストレプトアビジン(BD Pharmingen)1:500;ラットAPC-Cy7抗マウスB220(BD Bioscience)1:100;ハムスターAPC-Cy7抗マウスCD3e(eBiosciences)1:100;マウスAPC-Cy7抗ヒトCD45(BD Pharmingen);ラットPE-cy7抗ヒトCX3CR1(eBioscience)5:100。死滅細胞を排除するため、本発明者らは、死滅細胞を排除するため、膜非透過性色素である7-AAD(1mg/ml)(Sigma-Aldrich)をいずれか使用して、解析前に細胞に加えた。BMおよび脳細胞を、LSR Fortessa(Beckton Dickinson)によって解析した。
脳は、15μm片で、低温保持装置上で矢状平面に連続的に切り出した。組織スライドは、PBSにより2回、洗浄し、空気乾燥して、0.3% Triton、2% BSA、10% NGS(Vector Laboratories)により2時間、ブロッキングした。次に、以下の通り、4℃で、PBS、0.1% Triton、2% BSA、10% NGS中で希釈した一次抗体を用いて、一晩、インキュベートした:ラットAPC抗CD11b(eBioscience)1:50;ウサギ抗Iba1(Wako)1:100;ニワトリ抗GFP(Abcam)1:250;ウサギ抗GFP(Invitrogen)1:100;マウスPE抗ヒトCD271(NGF受容体)(BD Pharmingen)1:50;ウサギ抗cherry(Abcam)1:100。二次抗体ヤギIgG抗ニワトリAlexa Fluor 488、ヤギIgG抗ウサギAlexa
Fluor488、546または633、ヤギIgG抗ラットAlexa Fluor546または633、ヤギIgG抗マウスAlexa Fluor546(Molecular Probes、Invitrogen)を、一次抗体の染色に使用したものと同じブロッキング用溶液中、1:500に希釈し、室温で2時間、薄片と共にインキュベートした。核を、PBS中、1:1000のTO-PRO III(Molecular Probes、Invitrogen)で、またはPBS中、DAPI(Roche)1:30によって染色した。スライス片をPBS中で洗浄し、空気乾燥して、Fluorsafe試薬(Calbiochem)でマウントした。試料は、共焦点顕微鏡(Zeiss and Leica TCS SP2;Leica Microsystems Radiance 2100;Bio-Rad)(λ励起=488、586、660)を用いて解析した。蛍光シグナルは、Lasersharp2000ソフトウェアによって処理した。画像は、Adobe Photoshop CS8.0ソフトウェアにインポートし、自動化レベル補正を使用して処理した。脳薄片の再構築の場合、本発明者らは、画像の取得に蛍光顕微鏡Delta Vision Olympus Ix70を使用し、次に、この画像をSoft Work3.5.0ソフトウェアによって処理した。次に、画像をAdobe Photoshop CS 8.0ソフトウェアにインポートし、再構築した。
成体またはP10ナイーブ対照および移植マウスから以前に分類した以下の集団から、遺伝子発現解析のための全RNAを単離した:CD45、CD11bおよびGFP(HCT-マウスのみ)の発現により分類した全CD45+CD11b+、μおよびTAμ;CD45、CD11b、F4/80、Ly6CおよびGFP(のみHCT-マウス)の発現により分類したマクロファージ。RNA量は、QuantiFluor(登録商標)RNAシステムおよびQuantus(商標)蛍光光度計(Promega)を使用して決定した。cDNAを生成して、SuperScript VILOマスター混合物(Thermo Fisher Scientific)の使用により精製したmRNAを1ngから100ngまで始めた。次に、Custom Taqman(登録商標)PreAmp Pools(Thermo Fisher Scientific)を使用して、cDNAを予備増幅した。cDNA生成および事前増幅のための熱サイクルは、製造業者の指示書に従い、T100サーマルサイクラー(BIO-RAD)で行った。遺伝子発現解析は、カスタム設計のTaqManをベースとするマイクロ流体カード遺伝子発現アッセイ(Applied Biosystems)を使用して行い、選択した16個の遺伝子(13個の標的、2個の内因性ハウスキーピングおよび1個の内部対照)の発現を測定した。リアルタイムPCRは、以下の熱サイクル条件:50℃、2分間で1サイクル、95℃で10分間で1サイクル、95℃で15秒間で40サイクル、および60℃で1分間を使用して、Applied Biosystems(登録商標)ViiA(商標)7リアルタイムPCRシステム上で標準モードで実施した。(Applied Biosystems)。ViiA(商標)7ソフトウェアv1.2.2を使用して、未加工データを抽出した。各遺伝子の閾値サイクル(CT)と参照遺伝子の閾値サイクル(CT)(HPRTおよび18S CTの平均値)との間の差異(dCT)を使用して、遺伝子発現を決定した。ICV対IV移植マウスにおける選択したミクログリア遺伝子の発現の倍率変化を、2-ddCT方法(Livakら、Methods 25巻、402~408頁(2001年))により算出し、この場合、ddCTは、μおよびTAμ細胞に一致した、ICV移植マウスから回収した各試料のdCTとIV移植マウスから回収した試料のdCT平均値との間の差異を表す。
RNeasy Plus Microキット(Qiagen)使用して、分類した骨髄脳集団に由来するRNAを抽出した。特に、本発明者らは、以下から様々な骨髄脳部分集団を分類することにより回収した:GFP HSPC移植から3か月時点の、P10(n=4、二連)(TAμ細胞)、5か月齢C57bl6/j(n=3)マウス(μ細胞)およびBU処置マウス(n=3;本発明者らは、FACSにより解析した他の試料からのその多様性により、TAμの1つの試料を分析から除外した)(μおよびTAμ細胞)。分類前に、マウスは、大腿骨をクランプした後、冷PBSを用いて心臓内潅流による深い麻酔下で安楽死させた。脳を採集して、既に記載した通り、処理した。RNAを採集して、-80℃で保管した。少量の一定分量を使用して、Agilent RNA6000Picoキットを使用して抽出したRNAの量を確認した。
ラリシステムを使用して、配列決定ライブラリにライゲーションした。バーコードを付けた後に、RNAライブラリをプールして変性し、8pMの最終濃度に希釈した。クラスター形成は、フローセルv.3を使用して、cBot(Illumina)(シングルエンド)上で行った。SBS(合成による配列決定)は、50サイクルに設定したHiSeq2500(Illumina)に関するTruSeq SRプロトコル(Illumina)に従って行い、各試料について、平均で30×106個のクラスターを得た。未加工の配列(fastq)を、FastQCソフトウェアを使用して、良好な品質スコアとなるようフィルターにかけた。得られた配列は、STARアライナー(STAR_2.3.0e_r291)を使用して、マウスのゲノム(mm10リリース)にアラインした(Dobinら、Bioinformatics 29巻、15~21頁(2013年))。唯一独自にマッピン
グされた読み取り値を使用して、Python script 「HTSeq-count」(モデルタイプ-union、http://www-huber.embl.de/users/anders/HTSeq/)により、報告されているEnsembl gene annotations(v72)を使用して遺伝子数を見積もった(Andersら、Bioinformatics 31巻、166~169頁(2015年))。遺伝子数をマッピングした後、データをどこかに記載されている、「M値の加重トリミング平均値(weighted trimmed mean of M-values)」を使用して
正規化した(Robinsonら、Genome Biol 11巻、R25頁(2010年))。正規化後、差次的遺伝子発現は、Rの「limma」パッケージを使用して行った(Ritchieら、Nucleic Acids Res 43巻、e47頁(2015年))。
主要な構成要素の解析(PCA)。PCAは、limmaのvoom関数によって生成させたlog2正規化発現値に対して、RのmixOmicsライブラリ(Kim-Anh Le Cao、Florian Rohart、Ignacio Gonzalez、Sebastien Dejean、ならびに主要貢献者:Benoit Gautier、Francois Bartolo、貢献者:Pierre Monget、Jeff Coquery、FangZou YaoおよびBenoit Liquet(2016年)mixOmics: Omics Data Integration Project. R package version 6.0.0. https://CRAN.R- project.org/package=mixOmics)を使用して行った(Le Caoら、Bioinformatics 25巻、2855~2856頁
(2009年))。
59巻、1327~1340頁(2014年))。多様な起源の対照ミクログリアおよびマクロファージからの未加工発現データを、SRAアーカイブ(SRR1634675、SRR1634676、SRR1634677、SRR1634678、SRR1634708、SRR1634709、SRR1634710、SRR1634711、SRR1634712、SRR1634721)からのGEOデータセットGSE62826からダウンロードし、未加工配列を含むfastqファイルを得た。Gosselinのマクロファージおよびミクログリアからの読み取り値は、本明細書に記載されているμおよびTAμ細胞からの読み取り値と一緒に処理し、μおよびTAμ集団の発現と、Gosselinらの検討における成体ミクログリアとマクロファージの両方を比較するため、PCAおよびヒートマップを生成した(Gosselinら、Cell 159巻、1327~1340頁(2014年))。
5年)Venny. An interactive tool for comparing lists with Venn's diagrams. http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)を使用して作製した。
7~1340頁(2014年))。
材料:具体的に明記した場合を除いて、ヒドロキシエチルメタクリレート(HEMA、97%、Sigma Aldrich)、ε-カプロラクトン(CL、97%、Sigma Aldrich)、2-エチルヘキサン酸スズ(II)塩(Sn(Oct)2、約95%、Sigma-Aldrich)、ポリ(エチレングリコール)メチルエーテルメタクリレート(PEGMA950、Mn950Da、Sigma Aldrich)、3-スルホプロピルメタクリレートカリウム塩(SPMAK、98%、Sigma Aldrich)、4-シアノ-4-(フェニルカルボノチオイルチオ)-ペンタン酸(CPA、>97%、Sigma Aldrich)、4-4’アゾビス(シアノ吉草酸)(ACVA、98%、Sigma Aldrich)、過硫酸カリウム(KPS;>99%純度、ACS reagent)、ローダミンB(RhB、Sb感度<0.1μg mL-1、Carlo Erba reagents)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC;99%純度、Sigma Aldrich)、4-(ジメチルアミノ)-ピリジン(DMAP;>99%純度、Sigma Aldrich)は、受領したまま使用した。ポリ(エチレングリコール)メチルエーテルメタクリレート(PEGMA2000、Mn2000Da、H2O中50重量%、Sigma Aldrich)は、DCMにより抽出し、減圧下で乾燥した。使用される溶媒はすべて、分析グレードの純度であり、Sigma
Aldrichから購入した。
XGPC=Apol/Apol+Amon
に従い、ポリマー(Apol)およびモノマー(Amon)のRIシグナル曲線下面積により推定した。
統計学的検定は、すべて両側とした。RNA-Seqの結果以外の比較に関すると、スチューデントのt検定を2つの群の比較に使用した。2つを超える群を含む比較に関すると、テューキーの事後検定による一元配置ANOVAを使用した。差異は、P<1.5(*0)の値で統計学的に有意と見なした。**P<0.01、***P<0.001。エラーバーを含む図のすべてにおいて、グラフは、平均値±SDを図示している。
上述から、変形および修飾を、本明細書に記載されている本発明に行い、本発明を様々な利用および条件に適合することができることが明らかであろう。このような実施形態はまた、以下の特許請求の範囲内にある。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目1)
対象に造血幹細胞(HSC)を送達する方法であって、アブレーション前処理と組み合わせた脳室内注入(ICV)によって、前記HSCを投与するステップを含む、方法。
(項目2)
前記造血幹細胞(HSC)が、CD34+、CD38-のうちの1つまたは複数である、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記造血幹細胞(HSC)が、マウスのkit+、Lin-、Sca1+、CD150+、CD48-、Fgd5+、CX3CR1-およびCD11b-のうちの1つまたは複数である、項目1または2に記載の方法。
(項目4)
前記ヒト造血幹細胞(HSC)が、Fgd5+である、項目2に記載の方法。
(項目5)
前記造血幹細胞(HSC)が、移植に際し、ミクログリア前駆細胞と機能的に等価である、項目1から4のいずれか一項に記載の方法。
(項目6)
前記対象が、リソソーム貯蔵障害または神経変性疾患を発症するリスクの増大を有する、またはリスクの増大している、項目1から5のいずれか一項に記載の方法。
(項目7)
前記リソソーム貯蔵障害が、副腎白質ジストロフィー、アクチベーター欠損症/GM2ガングリオシドーシス、アルファ-マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステリルエステル貯蔵病、慢性ヘキソサミニダーゼA欠損症、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー病、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、GM1ガングリオシドーシス、I細胞病/ムコリピドーシスII、乳児遊離シアル酸貯蔵症/ISSD、若年型ヘキソサミニダーゼA欠損症、乳児型ニューロンセロイドリポフスチン症、クラッベ病、リソソーム酸リパーゼ欠乏症、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症障害、多発性スルファターゼ欠損症、ニーマン-ピック病、ニューロンセロイド脂褐素症、ポンペ病/II型糖原病、ピクノディスオストシス、サンドホフ病、シンドラー病、サラ病/シアル酸貯蔵病、テイ-サックス/GM2ガングリオシドーシスおよびウォルマン病から選択される、項目6に記載の方法。
(項目8)
前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン疾患およびアルツハイマー病から選択される、項目6に記載の方法。
(項目9)
前記アブレーション前処理が、前記HSCを投与する前に行われる、項目1から8のいずれか一項に記載の方法。
(項目10)
前記アブレーション前処理が、前記対象に細胞毒性剤を投与するステップを含む、項目1から9のいずれか一項に記載の方法。
(項目11)
アルキル化剤がブスルファンである、項目1から10のいずれか一項に記載の方法。
(項目12)
治療ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを発現するベクターを形質導入した単離造血幹細胞(HSC)であって、CD34+、CD38-およびFgd5+のうちの1つまたは複数である、単離造血幹細胞(HSC)。
(項目13)
治療ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを発現するベクターを形質導入した単離造血幹細胞(HSC)であって、CD34+、CD38-およびFgd5+のうちの1つまたは複数について選択される単離造血幹細胞(HSC)。
(項目14)
治療ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを発現するベクターを形質導入した単離造血幹細胞(HSC)であって、kit+、Lin-、Sca1+、CD150+、CD48-、Fdg5+、CX3CR1-およびCD11b-のうちの1つまたは複数である、単離造血幹細胞(HSC)。
(項目15)
前記治療ポリペプチドまたはポリヌクレオチドが、リソソーム酵素、ABCDタンパク質、miR155およびNOX2のうちの1つまたは複数を標的とする阻害性核酸またはshRNA;TREM2;APOE2;およびAPPアルファである、項目12から14のいずれか一項に記載の単離造血幹細胞(HSC)。
(項目16)
前記リソソーム酵素が、α-グルコシダーゼ;グルコセレブロシダーゼ;β-ガラクトシダーゼ;β-ヘキソサミニダーゼA;β-ヘキソサミニダーゼB;酸性スフィンゴミエリナーゼ;ガラクトセレブロシダーゼ;β-ガラクトセレブロシダーゼ;酸性セラミダーゼ;アリールスルファターゼA;α-L-イズロニダーゼ;イズロン酸-2-スルファターゼ;ヘパランN-スルファターゼ;α-N-アセチルグルコサミニダーゼ;アセチルCoA:α-グルコサミニドN-アセチルトランスフェラーゼ;N-アセチルグルコサミン-6-硫酸スルファターゼ;N-アセチルガラクトサミン-6-硫酸スルファターゼ;酸性β-ガラクトシダーゼ;アリールスルファターゼB;β-グルクロニダーゼ;酸性α-マンノシダーゼ;酸性β-マンノシダーゼ;酸性α-L-フコシダーゼ;シアリダーゼ;α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ;およびパルミトイルタンパク質-チオエステラーゼ-1のうちの1つまたは複数である、項目15に記載の単離造血幹細胞(HSC)。(項目17)
前記ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現が、TSPOプロモーターによる、項目12から16のいずれか一項に記載の単離造血幹細胞(HSC)。
(項目18)
前記ポリペプチドまたはポリヌクレオチドが、TSPO遺伝子座に挿入されたポリヌクレオチドから発現する、項目12から17のいずれか一項に記載の単離造血幹細胞(HSC)。
(項目19)
ミクログリア細胞に分化することができる、項目12から18のいずれか一項に記載の単離造血幹細胞(HSC)。
(項目20)
アブレーションされたミクログリア細胞を再構成することができる、項目12から19のいずれか一項に記載の単離造血幹細胞(HSC)。
(項目21)
リソソーム貯蔵障害または神経変性疾患を有する、またはそれを発症するリスクの増大している対象を処置する方法であって、CD34+、CD38-およびFgd5+のうちの1つまたは複数である造血幹細胞(HSC)を投与するステップを含み、前記HSCが、静脈内(IV)に、またはアブレーション前処理と組み合わせて脳室内注入(ICV)によって投与される、方法。
(項目22)
リソソーム貯蔵障害または神経変性疾患を有する、またはそれを発症するリスクの増大している対象を処置する方法であって、kit+、Lin-、Sca1+、CD150+、CD48-、Fdg5+、CX3CR1-およびCD11b-のうちの1つまたは複数である造血幹細胞(HSC)を投与するステップを含み、前記HSCが、静脈内(IV)に、またはアブレーション前処理と組み合わせて脳室内注入(ICV)によって投与される、方法。
(項目23)
ミクログリア細胞またはその前駆体を標的とすることができるナノ粒子。
(項目24)
細胞毒性剤をさらに含む、項目23に記載のナノ粒子。
(項目25)
前記細胞毒性剤が、ミクログリア細胞またはその前駆体に前記細胞毒性剤を送達のために固定用量で提供される、項目24に記載のナノ粒子。
(項目26)
アルキル化剤が、アルキル化剤、ブスルファン、エトポシドのうちの1つまたは複数である、項目25に記載のナノ粒子。
(項目27)
最適化した薬物負荷効率、最適化した薬物放出および最適化した安定性のうちの1つまたは複数を有する、項目23から26のいずれか一項に記載のナノ粒子。
(項目28)
対象にナノ粒子を送達する方法であって、前記対象に脳室内注入(ICV)によってナノ粒子を投与するステップを含む、方法。
(項目29)
前記ナノ粒子が、前記ナノ粒子の表面に共有結合により連結されている1つまたは複数の捕捉分子を含み、前記捕捉分子が、ミクログリア細胞またはその前駆体に発現する1つまたは複数のマーカーに特異的に結合する、項目28に記載の方法。
(項目30)
前記ナノ粒子が、細胞毒性剤をさらに含む、項目28または29に記載の方法。
(項目31)
前記細胞毒性剤が、アルキル化剤である、項目30に記載の方法。
(項目32)
前記アルキル化剤が、ブスルファン、エトポシドのうちの1つまたは複数である、項目31に記載の方法。
(項目33)
対象において、ミクログリア細胞またはその前駆体をアブレーションする方法であって、前記対象にナノ粒子を投与するステップを含み、前記ナノ粒子が、細胞毒性剤、および前記ナノ粒子の表面に共有結合により連結されている1つまたは複数の捕捉分子を含み、前記捕捉分子が、ミクログリア細胞またはその前駆体に発現する1つまたは複数のマーカーに特異的に結合する、方法。
(項目34)
前記細胞毒性剤がアルキル化剤である、項目33に記載の方法。
(項目35)
前記アルキル化剤が、ブスルファンおよびエトポシドのうちの1つまたは複数である、項目34に記載の方法。
(項目36)
前記ナノ粒子が、静脈内(IV)に、または脳室内注入(ICV)によって前記対象に投与される、項目33から35のいずれか一項に記載の方法。
(項目37)
対象において、HSCの生着により、内因性ミクログリアをアブレーションし、および前記ミクログリアを再構成する方法であって、
(a)前記対象にナノ粒子を投与するステップであって、前記ナノ粒子が、細胞毒性剤、および前記ナノ粒子の表面に共有結合により連結されている1つまたは複数の捕捉分子を含み、前記捕捉分子が、ミクログリア細胞またはその前駆体に発現する1つまたは複数のマーカーに特異的に結合する、ステップ、および
(b)前記対象に、静脈内(IV)に、または脳室内注入(ICV)によって、造血幹細胞(HSC)を投与するステップ
を含む、方法。
(項目38)
対象における、リソソーム貯蔵障害を処置する方法であって、
(a)前記対象にナノ粒子を投与するステップであって、前記ナノ粒子が、細胞毒性剤、および前記ナノ粒子の表面に共有結合により連結されている1つまたは複数の捕捉分子を含み、前記捕捉分子が、ミクログリア細胞またはその前駆体に発現する1つまたは複数のマーカーに特異的に結合するステップ、および
(b)前記対象に、静脈内(IV)に、または脳室内注入(ICV)によって、造血幹細胞(HSC)を投与するステップであって、前記HSCが、治療ポリペプチドを発現する、ステップ
を含む方法。
(項目39)
前記リソソーム貯蔵障害が、副腎白質ジストロフィー、アクチベーター欠損症/GM2ガングリオシドーシス、アルファ-マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステリルエステル貯蔵病、慢性ヘキソサミニダーゼA欠損症、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー病、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、GM1ガングリオシドーシス、I細胞病/ムコリピドーシスII、乳児遊離シアル酸貯蔵症/ISSD、若年型ヘキソサミニダーゼA欠損症、乳児型ニューロンセロイドリポフスチン症、クラッベ病、リソソーム酸リパーゼ欠乏症、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症障害、多発性スルファターゼ欠損症、ニーマン-ピック病、ニューロンセロイド脂褐素症、ポンペ病/II型糖原病、ピクノディスオストシス、サンドホフ病、シンドラー病、サラ病/シアル酸貯蔵病、テイ-サックス/GM2ガングリオシドーシスおよびウォルマン病から選択される、項目38に記載の方法。(項目40)
前記治療ポリペプチドが、リソソーム酵素またはABCDタンパク質である、項目39に記載の方法。
(項目41)
前記リソソーム酵素が、α-グルコシダーゼ;グルコセレブロシダーゼ;β-ガラクトシダーゼ;β-ヘキソサミニダーゼA;β-ヘキソサミニダーゼB;酸性スフィンゴミエリナーゼ;ガラクトセレブロシダーゼ;β-ガラクトセレブロシダーゼ;酸性セラミダーゼ;アリールスルファターゼA;α-L-イズロニダーゼ;イズロン酸-2-スルファターゼ;ヘパランN-スルファターゼ;α-N-アセチルグルコサミニダーゼ;アセチルCoA:α-グルコサミニドN-アセチルトランスフェラーゼ;N-アセチルグルコサミン-6-硫酸スルファターゼ;N-アセチルガラクトサミン-6-硫酸スルファターゼ;酸性β-ガラクトシダーゼ;アリールスルファターゼB;β-グルクロニダーゼ;酸性α-マンノシダーゼ;酸性β-マンノシダーゼ;酸性α-L-フコシダーゼ;シアリダーゼ;α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ;およびパルミトイルタンパク質-チオエステラーゼ-1のうちの1つまたは複数である、項目40に記載の方法。
(項目42)
対象における、神経変性疾患を処置する方法であって、
(a)前記対象にナノ粒子を投与するステップであって、前記ナノ粒子が、細胞毒性剤、および前記ナノ粒子の表面に共有結合により連結されている1つまたは複数の捕捉分子を含み、前記捕捉分子が、ミクログリア細胞またはその前駆体に発現する1つまたは複数のマーカーに特異的に結合するステップ、および
(b)前記対象に、静脈内(IV)に、または脳室内注入(ICV)によって、造血幹細胞(HSC)を投与するステップであって、前記HSCが、治療ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを発現する、ステップ
を含む方法。
(項目43)
前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症(ALS)およびアルツハイマー病から選択される、項目42に記載の方法。
(項目44)
前記治療ポリペプチドまたはポリヌクレオチドが、miR155およびNOX2のうちの1つまたは複数を標的とする阻害性核酸またはshRNA;TREM2;APOE2;ならびにAPPアルファのうちの1つまたは複数である、項目42または43に記載の方法。
(項目45)
前記ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現が、TSPOプロモーターによる、項目42から44のいずれか一項に記載の方法。
(項目46)
前記ポリペプチドまたはポリヌクレオチドが、TSPO遺伝子座に挿入されたポリヌクレオチドから発現する、項目42から45のいずれか一項に記載の方法。
(項目47)
ブスルファン骨髄アブレーションの0~5日後、HSPCをICV移植および全骨髄細胞をIV移植することによる、CNS外造血組織キメラ現象とは独立して、対象の脳にミクログリアキメラ現象を発生させる方法。
(項目48)
対象において、ブスルファン骨髄アブレーション後に、ICVおよびIV移植した外因性細胞により、短期間、脳およびCNS外組織中に、持続性の造血混合キメラ現象を発生させる方法。
(項目49)
前記外因性細胞が、HSPCであり、0日目に、ICVおよびIV移植される、項目48に記載の方法。
(項目50)
前記キメラ現象が、マイナーHLA不一致移植状況で発生する、項目47から49のいずれか一項に記載の方法。
(項目51)
操作されたミクログリア内の外因性遺伝子の発現調節を達成する方法であって、TSPOプロモーターの制御下、目的の遺伝子をコードするウイルスベクターによる、ミクログリア前駆体の造血性等価体の形質導入を含む、方法。
(項目52)
前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、項目51に記載の方法。
(項目53)
ミクログリア前駆体の造血性等価体におけるTSPO遺伝子座で、目的とする遺伝子の、標的化された付加の方法。
(項目54)
ミクログリア前駆体の、操作された自己移植集団を対象に投与するステップを含む、項目51から53のいずれか一項に記載の方法であって、前記対象が、選択的ミクログリア再構成するための脳のアブレーションICVの投与を受ける、方法。
(項目55)
未操作自己移植骨髄細胞を投与するステップをさらに含む、項目51から54のいずれか一項に記載の方法。
(項目56)
γH2AXシグナルを検出することによる、脳常在性ミクログリア前駆細胞の機能的同定を行うための方法であって、γH2AXシグナルの検出が、脳常在性ミクログリア前駆細胞の存在を示す方法。
(項目57)
項目12から20のいずれか一項に記載の単離造血幹細胞(HSC)または項目23から27のいずれか一項に記載のナノ粒子を含むキット。
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CN108707627A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-10-26 | 深圳市免疫基因治疗研究院 | 一种mld慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用 |
US20220143216A1 (en) * | 2019-03-04 | 2022-05-12 | Versitech Limited | Recombinant vectors comprising arylsulfatase a and their uses in stem cell therapy for the treatment of metachromatic leukodystrophy |
US20220152115A1 (en) * | 2019-03-13 | 2022-05-19 | The Broad Institute, Inc. | Microglial progenitors for regeneration of functional microglia in the central nervous system and therapeutics uses thereof |
US20220323503A1 (en) * | 2019-08-06 | 2022-10-13 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions for reconstituting microglia |
US20220348962A1 (en) * | 2019-10-01 | 2022-11-03 | Children's Medical Center Corporation | Microglia specific promoters and methods of use therefore |
KR20220153021A (ko) * | 2020-03-11 | 2022-11-17 | 리모터 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 중추신경계를 통한 단백질을 확산시키기 위한 방법 및 재료 |
WO2021221879A1 (en) * | 2020-05-01 | 2021-11-04 | Albert Einstein College Of Medicine | Compositions and methods for using transplanted microglia as a vehicle for widespread delivery of cells and other biologic agents to the brain |
WO2021224633A1 (en) | 2020-05-06 | 2021-11-11 | Orchard Therapeutics (Europe) Limited | Treatment for neurodegenerative diseases |
CN114642634A (zh) * | 2020-12-17 | 2022-06-21 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种透血脑屏障载药胶束及其制备方法和应用 |
IT202100011576A1 (it) * | 2021-05-06 | 2022-11-06 | Univ Degli Studi Padova | Nuova sequenza promotore per terapia genica |
WO2023150089A1 (en) * | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Bluerock Therapeutics Lp | Methods for treating inherited metabolic disorders |
CN116397020B (zh) * | 2023-02-28 | 2024-02-09 | 中国医学科学院医学实验动物研究所 | 生物标志物在预测磺酸类烷化剂诱导骨髓损伤敏感性中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008534529A (ja) * | 2005-03-29 | 2008-08-28 | メディテク・インダストリーズ・エルエルシー | 自家造血幹細胞の調製物、その製造方法、低温保存方法、および中枢神経系の外傷性疾患の治療のための使用 |
Family Cites Families (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5132405A (en) | 1987-05-21 | 1992-07-21 | Creative Biomolecules, Inc. | Biosynthetic antibody binding sites |
US5091513A (en) | 1987-05-21 | 1992-02-25 | Creative Biomolecules, Inc. | Biosynthetic antibody binding sites |
JPS6412935A (en) | 1987-07-02 | 1989-01-17 | Mitsubishi Electric Corp | Constant-speed travel device for vehicle |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
GB9414624D0 (en) | 1994-07-20 | 1994-09-07 | Smithkline Beecham Plc | Novel method |
US20030077641A1 (en) | 1998-03-11 | 2003-04-24 | Laskowitz Daniel T. | Methods of suppressing microglial activation and systemic inflammatory responses |
AU1618300A (en) | 1998-11-13 | 2000-06-05 | Curagen Corporation | Compositions and methods relating to the peroxisomal proliferator activated receptor-alpha mediated pathway |
CA2375123A1 (en) | 1999-05-28 | 2000-12-07 | Chiron Corporation | Use of recombinant gene delivery vectors for treating or preventing lysosomal storage disorders |
US7927587B2 (en) * | 1999-08-05 | 2011-04-19 | Regents Of The University Of Minnesota | MAPC administration for the treatment of lysosomal storage disorders |
US6537785B1 (en) | 1999-09-14 | 2003-03-25 | Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. | Methods of treating lysosomal storage diseases |
US6436703B1 (en) | 2000-03-31 | 2002-08-20 | Hyseq, Inc. | Nucleic acids and polypeptides |
US20010038836A1 (en) * | 2000-04-04 | 2001-11-08 | Matthew During | Application of myeloid-origin cells to the nervous system |
ES2180433B1 (es) | 2001-05-28 | 2004-05-16 | Universidad Miguel Hernandez De Elche. | Empleo de celulas madre hematopoyeticas en la generacion de celulas madre neurales. |
WO2004015089A2 (en) | 2002-08-12 | 2004-02-19 | Genteric, Inc. | Polyionic organic acid formulations |
JP2007051980A (ja) | 2005-08-19 | 2007-03-01 | Okayama Univ | 移植片対宿主病の検査方法、検査用試薬ならびに予防薬および/または治療薬のスクリーニング方法 |
US8053569B2 (en) * | 2005-10-07 | 2011-11-08 | Armagen Technologies, Inc. | Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins |
EP1989228B1 (en) | 2006-02-14 | 2015-04-29 | University Of Tasmania Through The Menzies Research Institute | Metallothionein-derived peptide fragments |
EP2007786A4 (en) | 2006-03-30 | 2009-11-11 | Harvard College | MODIFIED METALLOTHIONES AND METHOD FOR SCREENING AND TREATMENT OF DISEASES RELATED TO OXIDATIVE STRESS |
WO2008054544A2 (en) * | 2006-05-22 | 2008-05-08 | Immune Disease Institute, Inc. | Method for delivery across the blood brain barrier |
US20080254017A1 (en) | 2006-06-19 | 2008-10-16 | Bodybio, Inc. | Methods and compositions for treating symptomes of diseases related to imbalance of essential fatty acids |
EP2132309A4 (en) | 2007-02-23 | 2011-01-05 | Univ Florida | COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASES RELATED TO GLYCOGEN STORAGE |
EP2315832B1 (en) | 2008-08-01 | 2015-04-08 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Micro-rna mediated modulation of colony stimulating factors |
JP5965392B2 (ja) | 2010-05-28 | 2016-08-03 | オックスフォード バイオメディカ (ユーケー) リミテッド | 脳へのレンチウイルスベクターの送達 |
KR20240068752A (ko) | 2010-06-25 | 2024-05-17 | 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. | 치료제들의 cns 전달 |
GB201114909D0 (en) | 2011-08-30 | 2011-10-12 | San Raffaele Centro Fond | Biomarkers for lysosomal storage disorders |
BR112014008925A2 (pt) | 2011-10-11 | 2020-10-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | micro rnas em distúrbios de neurodegenerativos |
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---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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BRAIN PATHOLOGY, vol. 20, JPN6021041487, 2010, pages 857 - 862, ISSN: 0005150421 * |
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