JP2019509053A - 植物にトランスフェクトする方法及びランダム組込み事象の低減方法 - Google Patents
植物にトランスフェクトする方法及びランダム組込み事象の低減方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019509053A JP2019509053A JP2018549971A JP2018549971A JP2019509053A JP 2019509053 A JP2019509053 A JP 2019509053A JP 2018549971 A JP2018549971 A JP 2018549971A JP 2018549971 A JP2018549971 A JP 2018549971A JP 2019509053 A JP2019509053 A JP 2019509053A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plant
- plant cell
- polq
- nucleic acid
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8213—Targeted insertion of genes into the plant genome by homologous recombination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8218—Antisense, co-suppression, viral induced gene silencing [VIGS], post-transcriptional induced gene silencing [PTGS]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
コメOryza sativa: XP_015619406
ジャガイモSolanum tuberosum: XP_006356662
ダイズGlycine max: XP_003545584
サトウダイコンBeta vulgaris: XP_010667709
トマトSolanum lycopersum: XP_010325163
バナナMusa acuminata 配列番号: ref|XM_009385225.1|
リンゴMalus x domestica: 配列番号: ref|XM_008380001.1|
ブドウVitis vinifera 配列番号: ref|XM_010650232.1|
ナタネBrassica napus 配列番号: ref|XM_013882859.1|
オレンジCitrus x sinensis 配列番号: ref|XM_006476088.2|
トウモロコシZea mays 配列番号: AQK40086
本明細書において使用されるとき、「含む」及びその語形変化は、その単語に続く項目が含まれるが、具体的に述べられていない項目が排除されないことを意味するその非限定的な概念で使用される。更に、動詞「〜からなる」は、「本質的に〜からなる」と置き換えることができ、本明細書において定義されるような化合物又は付加的な化合物が具体的に同定されるもの以外の更なる成分を含むことができ、前記更なる成分が、本発明の独自の性質を改変することがないことを意味する。
本発明は以下の実施例において更に説明される。これらの実施例は、本発明の範囲を限定せず、単に本発明を明確にするために役立つ。
T-DNAトランスフェクション
背景
アグロバクテリウム・ツメファシエンス (Agrobacterium tumefaciens)は双子葉植物におけるクラウンゴール病の病因である。病原体のDNAの一片であるT-DNAは、植物細胞に輸送され、そこで、ゲノムに組み込み、これは生物界間の遺伝的伝達の例となる。T-DNA上に位置する遺伝子は、細菌が炭素と窒素の供給源として使うことができる栄養素を合成する腫瘍細胞に植物細胞を形質転換し、したがってそれ自体にとって生態学的なニッチを作り出す2。この病原体のDNAを伝送する能力は、外来遺伝子の植物への挿入手段として、バイオテクノロジーにおいて徹底的に研究されてきている。現在、アグロバクテリウムと植物細胞との間での相互作用、及びT-DNAの宿主ゲノムへの組込みを導くプロセスについて多くが知られているが、組込みの実際のメカニズムは未知のままである1。すでに20年前に、アグロバクテリウムが宿主の二重鎖切断(DSB)修復酵素を利用してT-DNA組込みを触媒すると仮説が立てられており、別のDSB修復経路の重要なタンパク質の遺伝的調査を導いた3。標準の非相同末端結合及び相同組換えの因子は、それらのT-DNA組込みへの関与について調査されてきたが、限定され、かつ変動する結果をもたらした4〜7。異なる経路を組み合せて機能しなくしたときでさえ、T-DNA組込みは可能なままであり8、9、未だ同定されていない未知の経路の関与を示唆した。
フィラー合成に使用されるテンプレートのすぐ上流の配列との間の配列同一性の度合いを可視化する。解釈における可能性があるあいまいさを避けるために、本発明者等は分析を、フィラーが隣接部中にたった一つの連続一致を有する事例(n=589)のみに限定した。本発明者等は実際に、マッチング塩基の広範な過剰存在を見出だす(図3e)。66%のフィラーは、少なくとも1つのヌクレオチドプライマーを有し、57%が少なくとも2つのプライマーとテンプレートとの間の一致を含有し、47%が3'末端における3つのプライミングヌクレオチドを有する。まとめると、これらの結果はi)フィラーDNAは、T-DNAの3'末端と最小限に塩基対形成するか、又はその逆である、ゲノム切断の3'末端を伸長するpolθ産物であること、及びii)このポリメラーゼのプライマー-テンプレートスイッチング能力が、フィラーの複合的な構成の原因であることを示唆する。
植物株及び成長条件
挿入変異の情報は、http://signal.salk.eduにおけるSIGnALウェブサイトから取得した。teb-5(SALK_018851)及びteb-2(SALK_035610)は、SALK T-DNAコレクション31より取得した。teb-5及びteb-2アレルは、以前に記載されてきている17。植物は土壌上で16時間明所/8時間暗所のサイクルにおいて20℃で成長した。
野生型(エコタイプCol-0)及び変異のシロイヌナズナ植物を、バイナリーベクターpCAMBIA1301を内部に持つ非病原化アグロバクテリウム株LBA110032を用いて、以前に記載されたフローラルディップ法33によって形質転換した。トランスジェニック種子を、スクロースを欠き、100μg/mLのニスタチン、100μg/mLのチメンチン(全ての残存するAgrobacteriumを殺傷し、感染を防ぐため)、及び組込み事象を選別するための15μg/mLのハイグロマイシンを補充したMA土壌培地上で選別した。代替的に、植物は、バイナリーベクターpSDM390035を内部に持つA. ツメファシエンス (A. tumefaciens)株、AglI34を用いて形質転換した。トランスジェニック種子を、スクロースを含まず、100μg/mLのニスタチン、100μg/mLのチメンチン(全ての残存するAgrobacteriumを殺傷し、感染を防ぐため)、及び組込み事象を選別するための15μg/mLのホスフィノトリシンを補充したMA土壌培地上で選別した。一過性の事象を検出するために、ACT11プロモーターを含有するCol-0ゲノムからの850bpのフラグメントを、安定的な組込みのマーカーとそのプロモーターを除去したバイナリーベクターpCAMBIA1301へとクローニングすることによって作製されたpCAMBIA1301_ACT11(配列は要望により入手可能である)を内部に持つアグロバクテリウム株AglIを用いて、顕花植物をフローラルディップに供した。6日後、花を採取し、1mMのK3Fe(CN)6及び1mMのK4Fe(CN)6、10mMのNa2EDTA、0.1%のSDS、0.1%のTriton X-100、並びに2mMのX-glucを含有するリン酸バッファー(pH=7.3)中で一晩染色した。後に、70%エタノールを用いて花を透明化した。
根の形質転換は、以前に記載されたとおり36に、バイナリーベクターpCAMBIA3301を内部に持つ非病原化A. ツメファシエンス 株LBA110032を用いて、野生型(Col-0)、及び変異のシロイヌナズナ植物において実施した。共培養の2日後、根の外植体の一部を1mMのK3Fe(CN)6及び1mMのK4Fe(CN)6、10mMのNa2EDTA、0.1%のSDS、0.1%のTriton X-100、並びに2mMのX-glucを含有するリン酸バッファー(pH=7.3)中ですぐに染色し、根の外植体の残りを、形質転換の選別のための10μg/mLのPPT、並びに残存するAgrobacteriumを殺傷するための500μg/mLのカルベニシリン及び100μg/mLのバンコマイシンを含有する土壌培地へと移した。
植物物質を液体N2のもと、TissueLyser (Retch社、Haan Germany)中で粉末へと破壊した。DNAを以前記載されるとおりに単離した37。1μLの単離したDNAを20μLの全容量でのPCRに使用した。Taqポリメラーゼ及びバッファーは社内で作製した。T-DNAゲノムジャンクションを、縮重プライマーAD2(NGTCGASWGANAWGAA)38、及び特異的なネステッドプライマーを用いて、TAIL-PCR38によって単離した。
全てのT-DNAの組込みの確認配列は、ENA/GenBank(受託番号LN484267〜LN515397)11よりダウンロードされた。T-DNA挿入ジャンクションを決定するために、各々の配列とシロイヌナズナ参照ゲノム(TAIR10)及び関連するバイナリープラスミドとの間でMegaBLAST検索を実施した。T-DNAが3'領域に存在する配列について、配列の逆相補性が更に分析された。高品質にシーケンシングされたジャンクションに焦点を当てるため、本発明者等は、T-DNAの3'末端、及び5'ゲノム領域が、その対応する最良のBLASTヒットと完全な一致(20bp以上、ミスマッチが全くない、ギャップがない)を示す配列のみを含めた。T-DNA及びゲノムBLASTのヒットが重複しない配列は、フィラーの組込みであるとして示したが、重複する又は繋ぎ合わされたBLASTヒットを有する配列は、非フィラーの組込みであるとして示した。情報価値を有さない塩基を含有するフィラーを除去した。これらのフィルターを適用した後、10,616のT-DNA挿入事象が更なる分析のために残された。
フィラーの起源を決定するために、本発明者等は最長共通部分文字列(LCS)アルゴリズムを用いた。アルゴリズムは、フィラー(クエリー)と別の配列(対象)との間の最長の共通の配列を決定する。各フィラー(6bp以上、及び40bp以下)について、本発明者等は、そのそれぞれの最良のBLASTヒットによって決定されたT-DNAゲノムジャンクションの位置と比較して、T-DNAとシロイヌナズナの参照ゲノムの両方において、両方の鎖の方向で、LCSを決定した。本発明者等は、T-DNAプラスミド配列と両方向でジャンクションから25〜6,400塩基離れた参照ゲノムとを検索した。見出されたLCSの長さの過剰存在を計算するために、本発明者等は、DNA配列における所与のフィラーのある長さのLCSを発見する疑似ランダム確率を決定した。この目的のために、本発明者等は各フィラーの対象のDNAをシャッフルし、LCSについて検索した(各フィラーについて10〜100回)。疑似ランダムのLCSの長さの確率分布は、各フィラーのサイズ(6bp以上及び40bp以下)について作製された。確率分布と実際に見出されたLCSのサイズとの間の過剰存在は、確率分布の右の尾部のLCSの長さを有するフィラーの画分マイナス予測されたフィラーの画分として計算される。本発明者等は、そのLCSの長さの実際の分布が、確率よりも少なくとも10倍大きかったとき、個別のフィラーを過剰存在するものとしてマークした。
相同組換え
実施例1は、T-DNAの安定的なランダム組込みには、機能的なPolθが必要であることを実証する。本実施例は、相同組換えを介する安定的な組込みは機能的なPolθが必要でないことを実証する。
線状化プラスミドのトランスフェクション
内在性のシロイヌナズナの座位、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(PPO)と相同の約6Kbを含有するプラスミドを調製する。相同領域は2つの点変異を含有し、それらはPPO座位での相同組換えを介する組込みの際に除草剤ブタフェニシルに対する抵抗性を与える(変異の説明について、Hanin等、Plant J 2001を参照)。更に、プラスミドはCas9酵素(シロイヌナズナコドン最適化Cas9-AteCas9(Fauser等、Plant J 79:348〜359頁(2014))、及びCas9酵素をPPO座位へと誘導するガイドRNAをコードする。Cas9の発現はユビキチンプロモーターの制御下にあり、ガイドRNAは、U6(AtU6)プロモーターの制御下にある。プラスミドはまた、独自の制限部位を含有する。プラスミドは適切な制限部位による消化によって線状化される。
トマト植物へのトランスフェクション
本実施例は、作物植物、すなわちトマト(Solanum lycopersum)におけるランダム組込みの低減を実証していく。トマト由来のPOLQ遺伝子は、Tebichi配列を用いるBLAST検索に基づいてNCBIデータベースから受託番号XP_010325163として同定された。
polQ欠損作物植物の作製
1つ又は複数のpolQ遺伝子における変異(例えば1つ又は複数の相同遺伝子において)を有する作物植物、例えばコムギ、ダイズ、コメ、ワタ、トウモロコシ、又はアブラナ属の植物が同定されるか、又は(ランダム)変異導入若しくは標的化ノックアウトを介して(例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、TALEN、Crispr/Cas9、Crispr/Cpf1等のような配列特異的ヌクレアーゼを用いて)作製される。PolQの発現及び/又は活性における低減は、Q-PCR、ウェスタンブロッティング等によって確認される。
polQ欠損作物植物への選別可能マーカー遺伝子のトランスフェクション
低減したPolQの発現を有する実施例5の植物、及び対応する野生型のpolQの発現を有する植物を、当該技術分野において周知の方法によって、アグロバクテリウムを用いて選別可能なマーカー遺伝子(例えば、bar、gus)で形質転換する。
polQ欠損作物植物における相同組換えを介した標的化挿入
実施例5のPolQ欠損植物、及び野生型polQの発現を有する対応する植物を、相同組換えを介した標的化組込みのための対象の核酸で形質転換する。対象の核酸は、ゲノムの標的部位におけるゲノムDNAに相同な配列を含む。任意選択で、植物を、相同組換えを増強するために標的部位におけるDNA切断を誘発することができる配列特異的ヌクレアーゼのための発現コンストラクトと共に共形質転換する。植物を、対象の核酸の組込みについて、例えばサザンブロッティング又はPCRによってスクリーニングする。野生型PolQの発現を有する植物は、対象の核酸のランダム挿入、及び標的部位における相同組換えを介した標的化挿入を示す。低減したpolQの発現を有する植物は、わずか又は全くない対象の核酸のランダム挿入を示すが、標的部位における対象の核酸の相同組換えを介する標的化挿入を確かに示す。
Claims (15)
- 植物細胞におけるトランスフェクトされた核酸分子のランダム組込みを低減する方法であって、植物細胞に核酸分子をトランスフェクトする工程であって、前記植物細胞においてPOLQの発現及び/又は活性が、野生型植物細胞と比較して低減している、工程を含む方法。
- 植物細胞に核酸分子をトランスフェクトする方法であって、植物細胞に核酸分子をトランスフェクトする工程であって、前記植物細胞においてPOLQの発現及び/又は活性が、野生型植物細胞と比較して低減している、工程を含む方法。
- 植物細胞においてRNA分子又はポリペプチドを発現させる方法であって、植物細胞に前記RNA分子又はポリペプチドをコードする核酸分子をトランスフェクトする工程であって、前記植物細胞においてPOLQの発現及び/又は活性が、野生型植物細胞と比較して低減している、工程を含む方法。
- RNA分子又はポリペプチドを発現する植物を作製する方法であって、前記RNA分子又はポリペプチドをコードする核酸分子を植物細胞にトランスフェクトする工程であって、前記植物細胞においてPOLQの発現及び/又は活性が、野生型植物細胞と比較して低減している、工程と、前記植物細胞から植物を作製する工程とを含む方法。
- 前記核酸分子が植物細胞に一過性にトランスフェクトされる、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸分子が、植物細胞の染色体における部位特異的遺伝的組換え又は相同組換えを介して組み込まれる、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物細胞が、POLQ遺伝子によってコードされるmRNA前駆体に対して特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド、又はPOLQ遺伝子によってコードされるmRNAに対して特異的な二重鎖RNAi分子を含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 植物細胞が、POLQの発現及び/又は活性が、野生型遺伝子と比較して少なくとも70%低減するように1個又は複数の変異POLQアレルを有する、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物細胞がシロイヌナズナではない、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記トランスフェクトされた核酸分子を含む、請求項4から9のいずれか一項に規定される方法によって作製される植物。
- 前記核酸分子を含む、請求項10に規定される植物の子孫。
- 植物又は植物細胞であって、前記植物又は植物細胞においてPOLQの発現及び/又は活性が、野生型植物細胞と比較して低減しており、前記植物又は植物細胞がシロイヌナズナではない、植物又は植物細胞。
- 請求項12に記載される植物又は植物細胞を作製する方法であって、植物若しくは植物細胞において1つ若しくは複数のPOLQアレルに変異導入する工程、又は植物若しくは植物細胞にPOLQ阻害性核酸分子若しくはPOLQ結合分子を提供する工程を含む方法。
- RNA分子又はポリペプチドを発現する植物を作製するための、請求項12に記載されるか、請求項13に規定されるように作製される植物又は植物細胞の使用であって、前記RNA分子又はポリペプチドをコードする核酸分子が植物細胞の染色体に組み込まれていない、植物又は植物細胞の使用。
- RNA分子又はポリペプチドを発現する植物を作製するための、請求項12に記載されるか、請求項13に規定されるように作製される植物又は植物細胞の使用であって、前記RNA分子又はポリペプチドをコードする核酸分子が、部位特異的遺伝的組換え又は相同組換えを介して植物細胞の染色体に組み込まれている、植物又は植物細胞の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP16162322.8 | 2016-03-24 | ||
EP16162322 | 2016-03-24 | ||
PCT/NL2017/050182 WO2017164738A1 (en) | 2016-03-24 | 2017-03-23 | Methods for transfecting plants and for reducing random integration events |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019509053A true JP2019509053A (ja) | 2019-04-04 |
Family
ID=55628927
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018549971A Pending JP2019509053A (ja) | 2016-03-24 | 2017-03-23 | 植物にトランスフェクトする方法及びランダム組込み事象の低減方法 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11525140B2 (ja) |
EP (1) | EP3433367B1 (ja) |
JP (1) | JP2019509053A (ja) |
KR (1) | KR20190003504A (ja) |
CN (1) | CN109196105B (ja) |
AR (1) | AR109117A1 (ja) |
AU (1) | AU2017237643B2 (ja) |
BR (1) | BR112018069506A2 (ja) |
CA (1) | CA3018306A1 (ja) |
EA (1) | EA039928B1 (ja) |
ES (1) | ES2892873T3 (ja) |
MX (1) | MX2018011534A (ja) |
UA (1) | UA127447C2 (ja) |
WO (1) | WO2017164738A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201806572B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021083095A (ja) * | 2017-03-29 | 2021-05-27 | パイオニア株式会社 | 移動体装置、端末装置、情報処理システム及び情報処理方法並びに移動体装置用プログラム及び端末装置用プログラム |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11525140B2 (en) | 2016-03-24 | 2022-12-13 | Universiteit Leiden | Methods for transfecting plants and for reducing random integration events |
CA3080864A1 (en) * | 2017-10-30 | 2019-05-09 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | New strategies for precision genome editing |
EP3502259A1 (en) * | 2017-12-19 | 2019-06-26 | Universiteit Leiden | A combinational strategy for reducing random integration events when transfecting plants |
WO2019234129A1 (en) * | 2018-06-05 | 2019-12-12 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Haploid induction with modified dna-repair |
WO2019234132A1 (en) * | 2018-06-05 | 2019-12-12 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Base editing in polymerase theta deficient plants |
EP3660164A1 (en) | 2018-11-30 | 2020-06-03 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Screening of germplasm for desired polymorphisms by assays tested on synthetic dna |
CN113881703B (zh) * | 2021-10-11 | 2022-06-21 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种提高cho细胞同源重组效率的方法及其相关产品和应用 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL8401780A (nl) | 1984-06-04 | 1986-01-02 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van planten. |
US5034323A (en) | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
HUT70467A (en) | 1992-07-27 | 1995-10-30 | Pioneer Hi Bred Int | An improved method of agrobactenium-mediated transformation of cultvred soyhean cells |
US6326527B1 (en) | 1993-08-25 | 2001-12-04 | Dekalb Genetics Corporation | Method for altering the nutritional content of plant seed |
EP0837624A1 (en) | 1995-06-30 | 1998-04-29 | DNA Plant Technology Corporation | Delayed ripening tomato plants |
GB9703146D0 (en) | 1997-02-14 | 1997-04-02 | Innes John Centre Innov Ltd | Methods and means for gene silencing in transgenic plants |
GB9710475D0 (en) | 1997-05-21 | 1997-07-16 | Zeneca Ltd | Gene silencing |
US6452067B1 (en) | 1997-09-19 | 2002-09-17 | Dna Plant Technology Corporation | Methods to assay for post-transcriptional suppression of gene expression |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
AUPP249298A0 (en) | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
US20040214330A1 (en) | 1999-04-07 | 2004-10-28 | Waterhouse Peter Michael | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
US6423885B1 (en) | 1999-08-13 | 2002-07-23 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) | Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells |
GB9925459D0 (en) | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
AU2001297906B2 (en) | 2000-10-31 | 2007-07-19 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Method and means for producing barley yellow dwarf virus resistant cereal plants |
WO2003027261A2 (en) | 2001-09-27 | 2003-04-03 | Functional Genetics, Inc. | Methods and compositions for gene targeting by homologous recombination |
CN1646687A (zh) | 2002-03-14 | 2005-07-27 | 联邦科学和工业研究组织 | 修饰的基因沉默rna及其用途 |
US7229829B2 (en) | 2002-03-14 | 2007-06-12 | Yale University | Tobacco rattle virus vectors and related compositions and methods |
DE60332820D1 (de) | 2002-03-14 | 2010-07-15 | Commw Scient Ind Res Org | Verfahren und mittel zur überwachung und modulation des gen-silencing |
US7846906B2 (en) | 2003-02-28 | 2010-12-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression |
CA2584960A1 (en) | 2004-10-21 | 2006-05-04 | Charles L. Niblett | Methods and materials for conferring resistance to pests and pathogens of plants |
MX2010005703A (es) | 2007-11-26 | 2010-06-11 | Enzon Pharmaceuticals Inc | Antagonistas de acido nucleico entrelazado que eligen como objetivo al receptor de androgeno. |
CA2963237C (en) * | 2014-10-04 | 2023-09-26 | Ocri B.V. | A method of preparing an emulsion, a device for preparing said emulsion, and a vehicle |
US11680268B2 (en) * | 2014-11-07 | 2023-06-20 | Editas Medicine, Inc. | Methods for improving CRISPR/Cas-mediated genome-editing |
US11525140B2 (en) | 2016-03-24 | 2022-12-13 | Universiteit Leiden | Methods for transfecting plants and for reducing random integration events |
-
2017
- 2017-03-23 US US16/087,199 patent/US11525140B2/en active Active
- 2017-03-23 CA CA3018306A patent/CA3018306A1/en active Pending
- 2017-03-23 MX MX2018011534A patent/MX2018011534A/es unknown
- 2017-03-23 KR KR1020187030387A patent/KR20190003504A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-03-23 WO PCT/NL2017/050182 patent/WO2017164738A1/en active Application Filing
- 2017-03-23 BR BR112018069506A patent/BR112018069506A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2017-03-23 EA EA201891919A patent/EA039928B1/ru unknown
- 2017-03-23 AU AU2017237643A patent/AU2017237643B2/en active Active
- 2017-03-23 JP JP2018549971A patent/JP2019509053A/ja active Pending
- 2017-03-23 UA UAA201809638A patent/UA127447C2/uk unknown
- 2017-03-23 EP EP17718137.7A patent/EP3433367B1/en active Active
- 2017-03-23 CN CN201780028985.0A patent/CN109196105B/zh active Active
- 2017-03-23 ES ES17718137T patent/ES2892873T3/es active Active
- 2017-07-20 AR ARP170102045A patent/AR109117A1/es unknown
-
2018
- 2018-10-03 ZA ZA2018/06572A patent/ZA201806572B/en unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021083095A (ja) * | 2017-03-29 | 2021-05-27 | パイオニア株式会社 | 移動体装置、端末装置、情報処理システム及び情報処理方法並びに移動体装置用プログラム及び端末装置用プログラム |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3018306A1 (en) | 2017-09-28 |
US20190390208A1 (en) | 2019-12-26 |
MX2018011534A (es) | 2019-07-04 |
AR109117A1 (es) | 2018-10-31 |
ES2892873T3 (es) | 2022-02-07 |
AU2017237643B2 (en) | 2023-06-22 |
WO2017164738A1 (en) | 2017-09-28 |
KR20190003504A (ko) | 2019-01-09 |
EA039928B1 (ru) | 2022-03-29 |
CN109196105B (zh) | 2022-08-05 |
ZA201806572B (en) | 2021-02-24 |
UA127447C2 (uk) | 2023-08-30 |
EP3433367A1 (en) | 2019-01-30 |
CN109196105A (zh) | 2019-01-11 |
US11525140B2 (en) | 2022-12-13 |
EA201891919A1 (ru) | 2019-04-30 |
BR112018069506A2 (pt) | 2019-01-29 |
EP3433367B1 (en) | 2021-07-14 |
AU2017237643A1 (en) | 2018-10-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109196105B (zh) | 转染植物和减少随机整合事件的方法 | |
Songstad et al. | Genome editing of plants | |
Gelvin | Integration of Agrobacterium T-DNA into the plant genome | |
US20170114351A1 (en) | TARGETED VIRAL-MEDIATED PLANT GENOME EDITING USING CRISPR /Cas9 | |
CN118374474A (zh) | 新型crispr相关转座酶及其用途 | |
JP6871260B2 (ja) | 改良された植物形質転換の方法および組成物 | |
US10988775B2 (en) | Wheat plants resistant to powdery mildew | |
JP2021510069A (ja) | 遺伝子改変された植物体の再生 | |
US20240182917A1 (en) | Compositions and methods for improving plastid transformation efficiency in higher plants | |
JP7282382B2 (ja) | ゲノム編集植物の生産方法 | |
US20200299713A1 (en) | Altering thermoresponsive growth in plants via genome editing of phytochrome interacting factor 4 (pif4) regulatory elements | |
US20200325487A1 (en) | A combinational strategy for reducing random integration events when transfecting plants | |
BR112017021903B1 (pt) | Promotor de planta para expressão de transgene | |
KR20120098681A (ko) | 유전적으로 개변된 식물세포의 제조방법 | |
Busov et al. | Transformation as a tool for genetic analysis in Populus | |
Jose et al. | Plant Biotechnology: Its Importance, Contribution to Agriculture and Environment, and Its Future Prospects | |
JP7518545B2 (ja) | 植物細胞のゲノム編集用核酸及びその用途 | |
BR112017021703B1 (pt) | Promotor de planta para expressão de transgene | |
Yamauchi et al. | Gene targeting in crop species with effective selection systems | |
WO2024158934A1 (en) | Compositions and methods for controlling t-dna copy number in transformed plants |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200120 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210301 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210531 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211011 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220107 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220530 |