JP2019503363A - 急性リンパ芽球性白血病を治療するための二重特異性の抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３抗体 - Google Patents

Abstract

本発明は、急性リンパ芽球性白血病を治療し、重症度を低減し、または増殖を阻害する方法を提供する。本発明の方法は、ＣＤ２０およびＣＤ３に特異的に結合する治療有効量の二重特異性の抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【選択図】図１

Description

関連出願の相互援用
本出願は、参照によりその全体においてそれぞれが具体的に本明細書に組み込まれる、２０１６年３月９日に出願された米国仮出願第６２／３０６，０３１号および２０１５年１２月２２日に出願された米国仮出願第６２／２７０，７４９号に対する、３５ＵＳＣ§１１９（ｅ）に基づく利益を主張する。

配列表への参照
本出願は、２０１６年１２月２１日に作成され、１２，１７９バイトを含む、ファイル１０２４１ＷＯ０１−Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｔｘｔとしてコンピュータで読み取り可能な形式にて提出された配列表を参照により組み込む。

本発明は、医学の分野に属し、それを必要とする対象に対する、ＣＤ２０およびＣＤ３に特異的に結合する治療有効量の抗体の投与を介して、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を治療するための方法に関する。

Ｂ細胞癌は、Ｂリンパ球として知られる白血球の異種の癌の群であり、白血病（血液中に位置する）およびリンパ腫（リンパ節に位置する）を含む。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は、早期リンパ前駆細胞が増殖し、骨髄の正常な造血細胞を置換する骨髄の悪性（クローン性）疾患である（Ｓｅｉｔｅｒ，Ｋ．“Ａｃｕｔｅ Ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ”．Ｍｅｄｓｃａｐｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．ＷｅｂＭＤ．Ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ Ｍａｒｃｈ ６，２０１６）。ＡＬＬは突発的で急速な進行を特徴とする攻撃的な悪性腫瘍である。ＡＬＬは、細胞系統（Ｂ細胞またはＴ細胞）、細胞型（前駆体または成熟）およびフィラデルフィア（Ｐｈ）染色体転座の有無によって分類され得る。成人における再発性または難治性（ｒ／ｒ）急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は、従来の治療法で治療した場合、予後不良である。これらの患者のうち７〜１２％のみが長期生存者になる。（Ｓａｌｔｍａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １５：７７１；Ｆｉｅｌｄｉｎｇ Ａ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００７；１０９：９４４−９５０，Ｆａｄｅｒｌ Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ２０１０；１１６：１１６５−１１７６）．）この患者集団の転帰を改善するためには、新しいアプローチが急務である。

ほとんどのＢ細胞癌は、成熟Ｂ細胞の細胞表面上にＣＤ２０を発現する。ＣＤ２０を標的とすることによって癌を治療する方法は、当技術分野で公知である。例えば、キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブは、ＮＨＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）などの癌を、単独療法としてであるが、より典型的には化学療法と組み合わせて治療おける使用について使用または示唆されている。抗ＣＤ２０腫瘍ターゲティング戦略は、臨床設定において大きな期待を示しているが、すべての患者が抗ＣＤ２０療法に応答するわけではなく、一部の患者は、十分に理解されていない理由のために（しかしながら、典型的にはＣＤ２０発現の喪失を含まない）、抗ＣＤ２０療法（例えば、末梢Ｂ細胞の部分枯渇）に対して耐性を発症するかまたは不完全な応答を示す。一部の患者は、より積極的な表現型または化学療法抵抗性疾患で再発する。侵襲性リンパ腫を有する多くの患者は予後不良であり、無再発生存率は５０％未満である。

再発または治療に難治性の患者の予後は、２〜８ヶ月のサルベージ療法後の生存期間中央値が暗く残る。さらに、高用量の化学療法は重大な有害な副作用を引き起こす。従って、有効であり、再発を予防し、Ｂ細胞癌の患者に対する副作用がより少ない療法に対する高い満たされていない必要性が存在する。

ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）と関連してＴ細胞上に発現されるホモ二量体またはヘテロ二量体抗原であり、Ｔ細胞活性化に必要とされる。ＣＤ３に対する抗体は、Ｔ細胞上でＣＤ３をクラスター化し、それによって、ペプチドが負荷されたＭＨＣ分子によるＴＣＲの関与と同様の様式でＴ細胞活性化を引き起こすことが示されている。細胞傷害性Ｔ細胞でＣＤ２０およびＣＤ３架橋ＣＤ２０発現細胞の両方を標的とするように設計された二重特異性モノクローナル抗体は、ＣＤ２０に特異的なポリクローナルＴ細胞殺傷をもたらす。

本発明の特定の実施形態によれば、本発明は、対象における急性リンパ芽球性白血病の少なくとも１つの症状または兆候を治療、改善する、または、増殖もしくは進行を阻害するための方法を提供する。本発明の本態様による方法は、それを必要とする対象に、ＣＤ２０およびＣＤ３を特異的に結合する、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。

本発明の特定の実施形態によれば、方法は、対象における癌の少なくとも１つの症状または兆候を治療、改善する、または、増殖を阻害するために提供される。本発明の特定の実施形態では、白血病性の細胞の増殖を遅らせ、白血病性の細胞の再発を防止するために、方法が提供される。本発明の本態様によれば、方法は、ＣＤ２０およびＣＤ３に特異的に結合する治療有効量の二重特異性の抗体の１回以上の用量を、それを必要とする対象に投与することを含む。

特定の実施形態では、癌は急性リンパ芽球性白血病である。特定の実施形態では、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性の抗体の各用量は、対象の体重１ｋｇあたり０．１〜１０ｍｇを含む。特定の実施形態では、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性の抗体の各用量は、対象の体重１ｋｇあたり４ｍｇを含む。二重特異性の抗体の各用量は、１０〜５０００マイクログラムを含む。

いくつかの場合では、二重特異性の抗体は、静脈内、皮下、または腹腔内に投与される。

特定の実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性の抗体の０〜５０の治療用量を投与することを含み、各用量は、直前の先の投与後０．５〜１２週間投与される。

特定の実施形態では、対象は、以前の治療に抵抗性であるか、または応答性不十分であるか、または再発性である。いくつかの場合では、治療は、白血病細胞数の減少の遅延、生存率の上昇、部分的な応答、および完全な応答からなる群から選択される治療効果を生じる。いくつかの実施形態では、治療効果は、治療されていない対象と比較した場合の生存率の上昇である。いくつかの実施形態では、白血病性の細胞数は、治療されていない対象と比較して、少なくとも５０％低減される。

特定の実施形態では、二重特異性の抗体は、第２の治療薬または療法と組み合わせて投与される。ある場合には、第２の治療薬または療法は、放射線、手術、化学療法薬、癌ワクチン、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、アンギオポエチン−２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、バチルスカルメット−ゲランワクチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、細胞毒、インターロイキン６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤、インターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒ）阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、抗体−薬物複合体、抗炎症薬、および栄養補助食品からなる群から選択される。

好ましい実施形態では、ＣＤ２０およびＣＤ３に結合する二重特異性の抗体は、（ｉ）配列番号１のＨＣＶＲ（Ａ−ＨＣＶＲ）の３つの重鎖ＣＤＲ（Ａ−ＨＣＤＲ１、Ａ−ＨＣＤＲ２、およびＡ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のＬＣＶＲの３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む第１の抗原結合性のアームと、（ｉｉ）配列番号３のＨＣＶＲ（Ｂ−ＨＣＶＲ）の３つの重鎖ＣＤＲ（Ｂ−ＨＣＤＲ１、Ｂ−ＨＣＤＲ２、およびＢ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のＬＣＶＲの３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む第２の抗原結合性のアームとを含む。

特定の実施形態によれば、Ａ−ＨＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、Ａ−ＨＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、Ａ−ＨＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号９のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態によれば、Ａ−ＨＣＶＲは配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む。

特定の実施形態によれば、二重特異性の抗体の第２の抗原結合性のアームは、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｂ−ＨＣＶＲ）の３つの重鎖ＣＤＲ（Ｂ−ＨＣＤＲ１、Ｂ−ＨＣＤＲ２、およびＢ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む。いくつかの場合には、Ｂ−ＨＣＤＲ１は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、Ｂ−ＨＣＤＲ２は配列番号１１のアミノ酸配列を含み、Ｂ−ＨＣＤＲ３は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号８のアミノ酸配列を含み、およびＬＣＤＲ３配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ−ＨＣＶＲは配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む。

上記または本明細書の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の実施形態のいずれかでは、代替的に、ＬＣＶＲは配列番号１５のアミノ酸配列を含み得る。

好ましい実施形態では、二重特異性の抗体はＲＥＧＮ１９７９である。

特定の実施形態では、対象は、フローサイトメトリーにより測定される、白血病リンパ芽球の１０％以上にＣＤ２０発現を有する。いくつかの実施形態では、対象は、フローサイトメトリーにより測定される、白血病リンパ芽球の１５％以上にＣＤ２０発現を有する。いくつかの実施形態では、対象は、フローサイトメトリーにより測定される、白血病リンパ芽球の２０％以上にＣＤ２０発現を有する。特定の実施形態では、二重特異性の抗体は、第１および第２の抗原結合ドメインのそれぞれにつながれたキメラＦｃドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＦｃドメインがキメラヒンジ（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｈｉｎｇｅ）を含む。

別の態様では、本発明は、ヒトを含む対象における、癌の増殖を阻害する、または、治療するための薬物の製造における、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性の抗体の使用を提供する。特定の実施形態では、癌はＢ細胞癌である。好ましい実施形態では、癌は急性リンパ芽球性白血病である。

本発明の他の実施形態は、以下の詳細な説明のレビューから明らかになるであろう。

図１は、Ｒａｊｉ腫瘍細胞とＰＢＭＣとの混合物を皮下に移植したＮＳＧマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ³）実験を示しており、本発明のＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性の抗体（Ａｂ１、ＲＥＧＮ１９７９としても知られる）を０．４ｍｇ／ｋｇで２×／週間（腹腔内投与）、関連性のない抗体対照Ａｂ６を０．４ｍｇ／ｋｇで２×／週間（腹腔内投与）、またはビヒクルは、リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体を８ｍｇ／ｋｇで５×／週間（腹腔内投与）、およびＣＤ１９×ＣＤ３ ＢｉＴＥを０．５ｍｇ／ｋｇで５×／週間（静脈投与）と比較された。（ＣＤ１９×ＣＤ３ ＢｉＴＥについては、Ｎａｇｏｒｓｅｎ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１２ Ｄｅｃ；１３６（３）：３３４−４２，２０１２を参照されたい。）確立された腫瘍（約１００〜５００ｍｍ³）を有するマウスに治療を施した。データを平均（ＳＥＭ）として表し、ＡＮＯＶＡ分析に供した。このインビボモデルで、１週間に２腹腔内投与されたＡｂ１は、静脈投与で５回投与されたＣＤ１９×ＣＤ３ ＢｉＴＥの効力に匹敵した。 図２は、Ａｂ１（別名ＲＥＧＮ１９７９）、対照Ａｂ６、リツキシマブおよびビヒクル対照についてＡＮＯＶＡ分析を行った、図１と同様に、Ｒａｊｉ／ＰＢＭＣ混合物を皮下に移植したＮＳＧマウスにおける腫瘍体積（ｍｍ³）実験を示す。確立されたＲａｊｉ腫瘍の抑制において、１週間に２回投与されたＡｂ１（ＲＥＧＮ１９７９としても知られている）は、リツキシマブ療法（８ｍｇ／ｋｇで投与；５×／週で腹腔内投与）よりも優れていた。 ＡＬＬについての臨床試験における、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性の抗体についての投薬レジメンを示す。

本発明が記載される前に、本発明は、そのような方法および条件が変わる可能性があるため、記載された特定の方法および実験条件に限定されないことを理解されたい。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、限定することを意図するものではないことも理解されたい。

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の列挙された数値に関して使用される場合、列挙された値から値が１％以下だけ変化し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される表現「約１００」は、９９および１０１ならびにその間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。

本明細書に記載されているものと類似または等価な任意の方法および材料を本発明の実施において使用することができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書中に言及された全ての刊行物は、その全体を記載するために参照により本明細書に組み込まれる。

ＡＬＬを治療する方法またはＡＬＬの進行を阻害する方法
本発明は、対象における急性リンパ芽球性白血病の少なくとも１つの症状または兆候の重症度を治療、改善、もしくは低減する、または、進行を阻害するための方法を含む。本発明の態様による方法は、治療有効量のＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性の抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用する「治療する」、「治療すること」などの用語は、症状を緩和する、一時的または永続的に症状の原因を取り除くこと、腫瘍細胞増殖を遅延または阻害すること、腫瘍細胞の負担もしくは腫瘍の負荷を軽減すること、腫瘍の退縮を促進すること、腫瘍の収縮、壊死および／または消失を引き起こし、腫瘍の再発を防止し、および／または対象の生存期間を延ばすことを意味する。

本明細書中で使用される表現「それを必要とする対象」は、癌の１つ以上の症状または徴候を示し、および／またはＡＬＬと診断され、かつそれらの治療を必要とするヒトまたは非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態において、用語「対象」は、用語「患者」と交換可能に使用され得る。例えば、ヒト対象は、原発性または転移性の腫瘍および／または拡大リンパ節、腫脹した腹部、胸部の痛み／圧力、説明できない体重減少、発熱、夜間の発汗、持続的な疲労、食欲不振、脾臓の肥大、かゆみを含むがこれらに限定されない１つ以上の症状または徴候で診断され得る。特定の実施形態では、発現には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療をしているおよび必要とするヒト対象が含まれる。他の特定の実施形態では、発現は、ＣＤ２０＋Ｂ−系列ＡＬＬ（例えば、白血病リンパ芽球の２０％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現として定義される）を有する対象を含む。

好ましい実施形態では、「それを必要とする対象」は、白血病性リンパ芽球の１５％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現として定義されるＣＤ２０＋Ｂ−系列ＡＬＬを有する対象を指す。より好ましい実施形態では、発現は、白血病性リンパ芽球の１０％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現として定義されるＣＤ２０＋Ｂ−系列ＡＬＬを有する対象を指す。

一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１９％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１８％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１７％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１６％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１５％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１４％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１３％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１２％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１１％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１０％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の９％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の８％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の７％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の６％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の５％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の４％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の３％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の２％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。一実施形態では、発現は、白血病リンパ芽球の１％以上でフローサイトメトリーによって測定されるＣＤ２０発現を有する対象を含む。

特定の実施形態において、表現「それを必要とする対象」は、以前の治療（例えば、従来の抗癌剤による治療）によって再発または難治性であるか、または制御不十分であるＡＬＬを有する患者を含む。例えば、この表現には、リツキシマブ、ブリナツモマブ、ＪＣＡＲ０１４／ＪＣＡＲ０１５、ＣＴＬ０１９、ＫＴＥ−Ｃ１９、イノツズマブ・オゾガマイシン（ＩＯ）、⁹⁰Ｙ−エプラツズマブ−テトラキセタン、化学療法薬、またはＣＴＬＡ、ＩＢＢ、ＬＡＧ３またはＯＸ−４０のブロッカーなどの免疫調節剤で治療された対象を含む。この発現には、例えば、毒性の副作用のために、従来の抗癌療法が推奨されないＡＬＬを有する対象も含まれる。例えば、この表現には、有毒な副作用を伴う化学療法の１回以上のサイクルを受けた患者が含まれる。特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という表現は、治療されているがその後に再発または転移したＡＬＬの患者を含む。例えば、腫瘍退縮をもたらす１つまたは複数の抗癌剤で治療を受けたかもしれないＡＬＬを有する患者；しかし、その後、１つまたは複数の抗癌剤（例えば、化学療法抵抗性癌）に対する癌耐性を伴って再発し、本発明の方法で治療される。特定の実施形態では、表現「それを必要とする対象」には、少なくとも１％のＣＤ２０＋Ｂ細胞系列白血病リンパ芽球を有するＡＬＬと診断された成人または小児が含まれる。特定の実施形態では、表現「それを必要とする対象」には、ＣＤ２０＋Ｂ細胞系列白血病リンパ芽球を少なくとも１％有し、従来の療法（例えば、従来の抗癌剤による治療）によって再発または難治性であるか、または制御不十分であるＡＬＬを有する、ＡＬＬと診断された成人または小児が含まれる。

「それを必要とする対象」という表現は、ＡＬＬを発症する危険性がある対象、例えばＡＬＬの家族歴を有する人、またはＨＩＶ感染または免疫抑制薬による免疫系の障害を有する人も含む。

特定の実施形態では、本発明の方法は、１つ以上の癌関連バイオマーカー（例えば、ＣＤ２０）のレベルの上昇を示す患者を治療するために使用され得る。例えば、本発明の方法は、高レベルのＣＤ２０を有する患者に二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を投与することを含む。特定の実施形態では、本発明の方法は、ＡＬＬを有する対象において使用される。用語「腫瘍」、「癌」および「悪性腫瘍」は、本明細書では互換的に使用される。本明細書で使用される「Ｂ細胞癌」という用語は、Ｂリンパ球として知られている白血球の腫瘍を指し、白血病（血液中に位置する）およびリンパ腫（リンパ節に位置する）を含む。本発明は、急性リンパ芽球性白血病を治療する方法を含む。特定の実施形態では、Ｂ細胞癌は急性リンパ芽球性白血病を含むがこれらに限定されない。

特定の実施形態によれば、本発明は、腫瘍の治療、または遅延または増殖の阻害方法を含む。ある実施形態では、本発明は、腫瘍退縮を促進する方法を含む。特定の実施形態では、本発明は、腫瘍細胞負荷を低減する方法または腫瘍負荷を軽減する方法を含む。特定の実施形態では、本発明は、腫瘍細胞の再発を予防する方法を含む。この方法は、本発明のこの態様によれば、治療有効量の二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体をそれを必要とする対象に連続的に投与することを含み、抗体は、例えば、特定の治療用投薬レジメンの一部として、対象に複数回投与される。例えば、治療投薬レジメンは、治療有効量の二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の１回以上の用量を投与することを含み、ここで二重特異性抗体の１回以上の用量は、約１日１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、またはより少ない頻度で対象に投与する。特定の実施形態では、二重特異性抗体の用量は、所定の投薬期間内に別々の投与のために２つ以上の画分に分割することができる。このような分画または分割投与は、「サイトカインストーム」または「サイトカイン放出症候群」としばしば呼ばれる二重特異性抗体の投与に応答してサイトカインの産生を低減または排除するために使用することができる。特定の実施形態において、各用量は、投与期間内に投与するために２〜５の画分に分割される。例えば、１週間に投与される１０００マイクログラム（ｍｃｇ）の用量は、１週間の投与スケジュール内の異なる時間に投与するために、２つの５００ｍｃｇ用量に分けることができる。特定の実施形態では、各用量は、２〜４画分、または２画分または３画分に分割することができる。特定の実施形態では、各用量は２つの画分に分割される。特定の実施形態では、各用量は３つの画分に分割される。特定の実施形態では、各用量は４つの画分に分割される。特定の実施形態では、各用量は５つの画分に分割される。そのような分割投与は、例えば、以下の段落００８８〜００９０で論じられる投与量に適用することができる。特定の実施形態では、二重特異性抗体の用量は２つ以上の画分に分割され、各画分は他の画分と等しい量の抗体を含む。例えば、１０００マイクログラムを含む抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の用量を１週間に１回投与してもよく、その用量は週内に２つの画分で投与され、各画分は５００マイクログラムを含む。特定の実施形態において、二重特異性抗体の用量は、２つ以上の画分に分割して投与され、ここで、画分は、抗体の等しくない量、例えば、第１画分よりも多いまたは少ない画分を含む。例えば、１０００マイクログラムを含む抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の用量を週に１回投与してもよく、ここで用量は１週間以内に２画分で投与され、第１の画分は７００マイクログラムを含み、第２の画分は３００マイクログラムを含む。別の例として、１０００マイクログラムを含む抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の用量を２週間に１回投与することができ、ここで用量は２週間の期間内に３画分で投与され、第１の画分は４００マイクログラムを含み、第２の画分は３００マイクログラムを含み、第３の画分は３００マイクログラムを含む。

特定の実施形態では、本発明は、腫瘍転移または末梢器官への腫瘍浸潤を阻害、遅延または停止させる方法を含む。この態様による方法は、治療有効量の二重特異性抗の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を投与することを含む。

特定の実施形態では、本発明は、抗腫瘍効力の増強または腫瘍阻害の上昇のための方法を提供する。本発明のこの態様による方法は、ＡＬＬを有する対象に治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を投与することを含む。

特定の実施形態では、本発明の方法は、治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体をＡＬＬを有する対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、以前の治療に反応しないか、または以前の治療後に再発している。

特定の実施形態では、本発明の方法は、治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体をＡＬＬを有する対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０剤による、またはブリナツモマブ、ＪＣＡＲ０１４／ＪＣＡＲ０１５、ＣＴＬ０１９、ＫＴＥ−Ｃ１９、イノツズマブ・オゾガマイシン（ＩＯ）もしくは⁹⁰Ｙ−エプラツズマブ−テトラキセタンによる）以前の治療に反応しないか、または以前の治療後に再発している。

特定の実施形態では、本発明の方法は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を、「第１選択」治療（例えば、初回治療）として、それを必要とする対象に投与することを含む。他の実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を、（例えば、以前の治療後の）「第２選択」治療として投与される。例えば、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、例えば化学療法、リツキシマブ、ブリナツモマブ、ＪＣＡＲ０１４／ＪＣＡＲ０１５、ＣＴＬ０１９、ＫＴＥ−Ｃ１９、イノツズマブ・オゾガマイシン（ＩＯ）、または⁹⁰Ｙ−エプラツズマブ−テトラキセタンによる先行治療後に再発した対象に「第２選択」治療として投与される。

特定の実施形態では、本発明の方法は、ＭＲＤ陽性疾患を有する患者を治療するために使用される。最小残存疾患（ＭＲＤ）は、治療中または治療後に患者に残る少数の癌細胞を指し、患者は疾患の症状または徴候を示してもしなくてもよい。このような残存癌細胞は、排除されなければ、しばしば疾患の再発をもたらす。本発明は、ＭＲＤ検査の際に患者の残存癌細胞を阻害および／または排除する方法を含む。ＭＲＤは、当該分野で公知の方法（例えば、ＭＲＤフローサイトメトリー）に従ってアッセイされ得る。本発明のこの態様による方法は、それを必要とする対象に二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を投与することを含む。

特定の実施形態によれば、本発明の方法は、治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を、第２の治療薬と組み合わせて、対象に投与することを含む。第２の治療薬は、例えば、放射線、化学療法、手術、癌ワクチン、ＰＤ−Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、ＬＡＧ３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、メラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍−Ｍ２−ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン−１、ＭＡＲＴ−１、およびＣＡ１９−９）、ワクチン（例えば、バチルスカルメット−ゲラン）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、細胞毒、化学療法薬、ＩＬ−６Ｒ阻害剤、ＩＬ−４Ｒ阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、およびＩＬ−１５、抗炎症薬、例えば、コルチコステロイド、および非ステロイド系の抗炎症薬、並びに、栄養補助食品、例えば、抗酸化剤からなる群から選択されることとしてもよい。特定の実施形態では、抗体は、化学療法薬、放射線および外科手術を含む治療と組み合わせて投与することができる。本明細書で使用する場合、「と組み合わせて」という語句は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体が、第２の治療薬の投与と同時に、直前に、または直後に対象に投与されることを意味する。特定の実施形態では、第２の治療薬は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体との共製剤として投与される。関連する実施形態では、本発明は、治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を、バックグラウンド抗癌治療レジメンにある対象に投与することを含む方法を含む。バックグラウンド抗癌治療レジメンは、例えば化学療法薬または放射線の投与コースを含むことができる。二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、バックグラウンド抗癌治療レジメンの上に加えられてもよい。いくつかの実施形態において、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、「バックグラウンドステップダウン」スキームの一部として加えられ、バックグラウンド抗癌療法は、時間の経過とともに徐々に（例えば、段階的に）対象から退き、一方、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、一定の用量で、または時間の経過とともに、漸増する用量で、または減少する用量で対象に投与される。

特定の実施形態では、本発明の方法は、治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を、それを必要とする対象に投与することを含み、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、腫瘍細胞の阻害の増強を導く。特定の実施形態において、腫瘍細胞集団の増殖は、治療されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％または約８０％阻害される。特定の実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、腫瘍退縮、腫瘍収縮および／または消失の増加をもたらす。特定の実施形態では、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、腫瘍増殖および発達の遅延をもたらし、例えば、腫瘍増殖は、治療されていない対象と比較して、約３日、３日超、約７日間、７週間超、１５日超、１ヶ月超、３ヶ月超、６ヶ月超、１年超、２年超または３年超遅延され得る。特定の実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、腫瘍の再発を防ぎ、および／または対象の生存期間を延長し、例えば、治療されていない対象よりも、生存期間を１５日超、１ヶ月超、６ヶ月超、１２ヶ月超、１８ヶ月超、２４ヶ月超、３６ヶ月超、４８ヶ月超延長する。特定の実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、無進行生存期間または全生存期間を増加させる。特定の実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、例えば、治療されていない対象よりも、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、２０％超、３０％超、４０％超または５０％超、対象における応答および応答期間を増加させる。特定の実施形態において、ＡＬＬを有する対象への二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、腫瘍細胞の全ての証拠の完全な消失をもたらす（「完全応答」）。特定の実施形態では、ＡＬＬを有する対象への二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、腫瘍細胞または腫瘍サイズの少なくとも３０％またはそれ以上の減少（「部分応答」）をもたらす。特定の実施形態では、ＡＬＬを有する対象への二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の投与は、新たな測定可能な病変を含む腫瘍細胞／病変の完全または部分的消失をもたらす。腫瘍縮小は、例えば、Ｘ線、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、細胞学、組織学、または分子遺伝学的分析などの当技術分野で公知の方法のいずれかによって測定することができる。

抗体およびその抗原結合フラグメント
本発明の特定の例示的な実施形態によれば、本方法は、治療有効量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。本明細書で使用する用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合によって相互連結された２つの重鎖（Ｈ）鎖および２つの軽鎖（Ｌ）、ならびにそれらの多量体（例えばＩｇＭ）を含む免疫グロブリン分子を含む。典型的な抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略す）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、より保護された、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。本発明の異なる実施形態では、抗ＩＬ−４Ｒ抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然または人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。

本明細書で使用する「抗体」という用語は、完全抗体分子の抗原結合フラグメントも含む。本明細書中で使用される抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」などの用語は、天然に存在する、酵素的に入手可能な、合成された、または遺伝子操作されたポリペプチド、または複合体を形成するために抗原に特異的に結合する糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質消化、または抗体可変および場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術などの任意の適切な標準技術を使用して完全抗体分子から誘導され得る。このようなＤＮＡは公知であり、および／または例えば商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えばファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、例えば、１つまたは複数の可変および／または定常ドメインを適切な配列に配置するため、またはコドンを導入するため、システイン残基を作製し、アミノ酸等を修飾、追加または削除するために、化学的に、または分子生物学技術を用いて操作および配列決定することができる。

抗原結合フラグメントの非限定的な例には、（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））または拘束ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディなどの他の人工分子（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインもまた、本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」という表現に包含される。

抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であり得、一般に、１つまたは複数のフレームワーク配列に隣接するか、またはフレーム内にある少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で互いに対して位置し得る。例えば、可変領域は二量体であり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含むことができる。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含み得る。

特定の実施形態では、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内に見出され得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な配列には、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが含まれる。上記の例示的な構成のいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されてもよく、または完全または部分的ヒンジまたはリンカー領域によって連結されてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子中の隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間で可撓性または半可撓性の結合をもたらす少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなり得る。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、互いに非共有的に会合している、および／または（例えば、ジスルフィド結合（単数または複数）によって）１つまたは複数の単量体ＶＨまたはＶＬドメインを有する、上記の任意の可変ドメインおよび定常ドメイン形状のホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。

本明細書で使用される用語「抗体」は、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体も含む。抗体の多重特異性抗体または抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。任意の多重特異性抗体フォーマットは、当技術分野で利用可能な日常的な技術を使用して、本発明の抗体または抗体の抗原結合フラグメントの状況での使用に適合させることができる。本発明の文脈において使用され得る典型的な二重特異性フォーマットには、限定されることなく、例えば、ｓｃＦｖベースまたはダイアボディ二重特異性フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、四倍体、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通の軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを有する共通の軽鎖等）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）本体、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ²二重特異性フォーマットが挙げられる（前述のフォーマットの総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ ４：６，１−１１およびその中に引用されている参考文献を参照されたい。）二重特異性抗体は、ペプチド／核酸結合を用いて構築することもでき、例えば直交化学反応性を有する非天然アミノ酸を用いて、所定の組成、価数および幾何学的構造を有する多量体複合体に自己集合する部位特異的抗体−オリゴヌクレオチド結合体を生成する。（例えば、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：Ｄｅｃ．４，２０１２］参照。）

本発明の方法において使用される抗体は、ヒト抗体であってもよい。本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことを意図する。それにもかかわらず、本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボでの体細胞突然変異により導入された変異）によってコードされないアミノ酸残基を、例えばＣＤＲで、特にＣＤＲ３で含む。しかしながら、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図するものではない。

本発明の方法において使用される抗体は、組換えヒト抗体であってもよい。用語「組換えヒト抗体」は、本明細書中で使用される場合、宿主細胞（以下にさらに記載する）にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体、組換え体から単離された抗体、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリー（以下にさらに記載する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５を参照されたい。）、または、他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製または単離された抗体
などの、組換え手段によって調製、発現、作成または単離されるすべてのヒト抗体を含むことを意図する。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物が使用される場合、インビトロ体細胞突然変異誘発）に供され、したがって組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しない配列である。

特定の実施形態によれば、本発明の方法において使用される抗体は、ＣＤ２０およびＣＤ３に特異的に結合する。「特異的に結合する」などの用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントが、生理的条件下で比較的安定な抗原と複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。例えば、本発明の文脈で使用されるＣＤ２０およびＣＤ３に「特異的に結合する」抗体には、表面プラズモン共鳴アッセイで測定された、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、または約０．５ｎＭ未満のＫＤでＣＤ２０およびＣＤ３またはその一部に結合する抗体が含まれる。しかしながら、ヒトＣＤ２０およびＣＤ３に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種由来のＣＤ２０およびＣＤ３分子のような他の抗原に対して交差反応性を有し得る。

特定の例示的な実施形態によれば、本発明の方法は、ＲＥＧＮ１９７９またはその生物学的同等物の使用を含む。本明細書で使用される「生物学的に同等」という用語は、医薬品同等物または医薬品代替物である、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体またはＣＤ２０および／またはＣＤ３結合タンパク質またはそれらのフラグメントであって、その速度および／または吸収の程度は、同様の実験条件下で、単回投与または複数回投与のいずれかで、同じモル投与量で投与した場合のＲＥＧＮ１９７９のそれとの有意差を示さない。本発明の文脈において、この用語は、それらの安全性、純度および／または効力においてＲＥＧＮ１９７９と臨床的に有意な差異を有さないＣＤ２０および／またはＣＤ３に結合する抗原結合タンパク質を指す。

本発明の方法に関連して使用される抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０二重特異性抗体は、ｐＨ依存性の結合特性を有し得る。例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでのＣＤ３への結合の低下を示し得る。あるいは、本発明の抗ＣＤ３抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでのＣＤ３への結合の増強を示し得る。例えば、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＣＤ３への結合の低下を示し得る。あるいは、本発明の抗ＣＤ２０抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＣＤ３への結合の増強を示し得る。「酸性ｐＨ」という表現は、約６．２未満のｐＨ値、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、またはそれ以下を含む。本明細書中で使用される表現「中性ｐＨ」は、約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値を含む。

特定の例では、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでの・・・結合の減少」は、酸性ｐＨでのその抗原に結合する抗体のＫ_D値と、中性ｐＨでのその抗原に結合する抗体のＫ_D値との比（またはその逆）で表される。例えば、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントが約３．０以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合、本発明の目的のために、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＣＤ３（またはＣＤ２０）への結合が低下している」と見なすことができる。特定の例示的な実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０またはそれ以上であり得る。

ｐＨ依存性結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで特定の抗原への結合を低減（または増強）する抗体の集団をスクリーニングすることによって得ることができる。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変は、ｐＨ依存性特性を有する抗体を生じ得る。例えば、抗原結合ドメインの１つ以上のアミノ酸（例えば、ＣＤＲ内）をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨに対して酸性ｐＨで抗原結合が低下した抗体を得ることができる。本明細書で使用される表現「酸性ｐＨ」は、６．０以下のｐＨを意味する。

二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体
本発明の特定の例示的な実施形態によれば、本方法は、ＣＤ３およびＣＤ２０に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体を投与することを含む。そのような抗体は、本明細書では、例えば、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３」または「抗ＣＤ２０×ＣＤ３」または「ＣＤ２０×ＣＤ３」二重特異性抗体、または他の同様の用語として言及することができる。

本明細書で使用される場合、表現「二重特異性抗体」は、少なくとも第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインを含む免疫グロブリンタンパク質を指す。本発明の文脈において、第１の抗原結合ドメインは第１の抗原（例えばＣＤ２０）に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメインは第２の異なる抗原（例えばＣＤ３）に特異的に結合する。二重特異性抗体の各抗原結合ドメインは、それぞれ３つのＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を含む。二重特異性抗体の文脈において、第一の抗原結合ドメインのＣＤＲは、接頭辞「Ａ」で指定され、第二の抗原結合ドメインのＣＤＲは、接頭辞「Ｂ」で指定され得る。したがって、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書ではＡ−ＨＣＤＲ１、Ａ−ＨＣＤＲ２、およびＡ−ＨＣＤＲ３と称することができ、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書ではＢ−ＨＣＤＲ１、Ｂ−ＨＣＤＲ２、およびＢ−ＨＣＤＲ３と呼ぶことができる。

第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは、それぞれ別個の多量体化ドメインに接続されている。本明細書中で使用される場合、「多量体化ドメイン」は、同一または類似の構造または構成の第２の多量体化ドメインと会合する能力を有する任意の巨大分子、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたはアミノ酸である。本発明の文脈において、多量体化成分は、免疫グロブリン（ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含む）のＦｃ部分、例えばアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、並びに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメインである。

本発明の二重特異性抗体は、典型的には、２つの多量体化ドメイン、例えばそれぞれ個別に別個の抗体重鎖の一部である２つのＦｃドメインを含む。第１および第２の多量体化ドメインは、例えばＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４などの同じＩｇＧアイソタイプのものであってもよい。あるいは、第１および第２の多量体化ドメインは、例えばＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４などの異なるＩｇＧアイソタイプのものであってもよい。

任意の二重特異性抗体の形式または技術を用いて、本発明の二重特異性抗原結合分子を作製することができる。例えば、第１の抗原結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントは、１つまたは複数の他の分子実体、例えば、第２の抗原結合特異性を有する別の抗体または抗体フラグメントと機能的に（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合または他の方法によって）結合され得、二重特異性抗原結合分子を産生する。本発明の文脈において使用され得る特定の例示的な二重特異性フォーマットには、限定されることなく、例えば、ｓｃＦｖベースまたは二重特異性二重特異性フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、四倍体、ノブ・イントゥ・ホール、共通の軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホール等を有する共通の軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディー、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、Ｍａｂ²二重特異性フォーマットが挙げられる（前述のフォーマットの総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ ４：６，１−１１およびその中に引用されている参考文献を参照されたい。）

本発明の二重特異性抗体に関して、Ｆｃドメインは、野生型の天然に存在するＦｃドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失または置換）を含み得る。例えば、本発明は、ＦｃとＦｃＲｎとの間の修飾された結合相互作用（例えば、増強または減少）を有する修飾されたＦｃドメインをもたらす、Ｆｃドメインにおける１つまたは複数の修飾を含む二重特異性抗原結合分子を含む。一実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、ＣＨ２またはＣＨ３領域に修飾を含み、改変は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲であるエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。このようなＦｃ修飾の非限定的な例は、米国特許公開公報第２０１５０２６６９６６号に開示されており、その全体が本明細書に組み込まれる。

本発明はまた、第１のＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇＣＨ３ドメインを含む二重特異性抗体を含み、第１および第２のＩｇＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸によって互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の違いにより、アミノ酸相違を欠く二重特異性抗体と比較して、プロテインＡに対する二重特異性抗体の結合を低減させる。一実施形態では、第１のＩｇＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇＣＨ３ドメインはＨ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエキソン番号付け；ＥＵ番号付けによるＨ４３５Ｒによる）のようなプロテインＡ結合を低減または破壊する突然変異を含む。
第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆによる）をさらに含み得る。第２のＣＨ３内に見出され得るさらなる修飾には、ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；Ｄ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２ＩのＥＵによる）；ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２ＩのＥＵによる）；ＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；Ｑ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２ＩのＥＵによる）が挙げられる。

特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプに由来するＦｃ配列を組み合わせている、キメラであり得る。例えば、キメラＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域に由来するＣＨ２配列の一部または全部、ならびにヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４に由来するＣＨ３配列の一部または全部を含み得る。キメラＦｃドメインはまた、キメラヒンジ領域を含み得る。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含み得る。本明細書に記載の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの特定の例は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、［ＩｇＧ４ ＣＨ１］−［ＩｇＧ４上部ヒンジ］−［ＩｇＧ２下部ヒンジ］−［ＩｇＧ４ ＣＨ２］−［ＩｇＧ４ ＣＨ３］を含む。本明細書に記載の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの別の例は、Ｎ末端からＣ末端にかけて［ＩｇＧ１ ＣＨ１］−［ＩｇＧ１上部ヒンジ］−［ＩｇＧ２下部ヒンジ］−［ＩｇＧ４ ＣＨ２］［ＩｇＧ１ ＣＨ３］を含む。本発明の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインのこれらおよび他の例は、その全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１４０２４３５０４号に記載されている。これらの一般的な構造配置およびその変異体を有するキメラＦｃドメインは、変化したＦｃ受容体結合を有することができ、これはＦｃエフェクター機能に影響を及ぼす。特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３または配列番号１４のアミノ酸配列を含むことができる。

本発明の特定の例示的な実施形態によれば、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（Ａ−ＨＣＶＲおよびＢ−ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および／または米国特許出願公開第２０１５０２６６９６６号に記載の二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列のいずれかを含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。特定の例示的な実施形態では、本発明の方法の文脈において使用することができる二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（Ａ−ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（Ａ−ＨＣＤＲ１、Ａ−ＨＣＤＲ２およびＡ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む第１の抗原結合アームと、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ（Ｂ−ＨＣＶＲ）の重鎖ＣＤＲ（Ｂ−ＨＣＤＲ１、Ｂ−ＨＣＤＲ２およびＢ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲの軽鎖ＣＤＲを含む第２の抗原結合アームとを含む。特定の実施形態によれば、Ａ−ＨＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、Ａ−ＨＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、Ａ−ＨＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２は配列番号８のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ３は配列番号９のアミノ酸配列を含み；Ｂ−ＨＣＤＲ１は配列番号１０のアミノ酸配列を含み；Ｂ−ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、Ｂ−ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号１を含むＨＣＶＲ（Ａ−ＨＣＶＲ）および配列番号２を含むＬＣＶＲを含む第１の抗原結合アームと、（ｂ）配列番号３を含むＨＣＶＲ（Ｂ−ＨＣＶＲ）および配列番号２を含むＬＣＶＲを含む第２の抗原結合アームとを含む。

本発明の方法の文脈において使用され得る他の二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体には、例えば、米国特許出願公開第２０１４００８８２９５号および第２０１５０１６６６６１号に記載される抗体のいずれかが含まれる。本発明の方法の文脈において使用され得る例示的な二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、ＲＥＧＮ１９７９またはｂｓＡＢ１として知られる二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体である。

併用療法
特定の実施形態では、本発明の方法は、第２の治療剤が抗癌剤である第２の治療剤の投与を含む。本明細書中で使用される場合、「抗癌剤」は、限定されることなく、細胞毒素および代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、抗有糸分裂剤、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’−（ＤＤＤ））、生物製剤（例えば、抗体およびインターフェロン）および放射性薬剤などの薬剤を含む、癌を治療するために有用なあらゆる薬剤を指す。本明細書中で使用される場合、「細胞毒または細胞傷害剤」は、化学療法薬をも指し、細胞に有害なあらゆる薬剤を意味する。例には、タキソール（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾラミド、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンバスタチン、コヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが挙げられる。

特定の実施形態では、本発明の方法は、放射線、手術、癌ワクチン、ＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）、ＰＤ−Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、ＬＡＧ−３阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたはリガンド（例えば、ＣＤ−２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０、またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、「ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ」例えば、アフリベルセプトまたはＵＳ７，０８７，４１１に記載の他のＶＥＧＦ−阻害融合タンパク、または抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ベバシズマブ、またはラニビズマブ）またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネズバクマブ）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、共刺激受容体に対するアゴニスト（例えば、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質に対するアゴニスト）、腫瘍特異的抗原に対する抗体（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、メラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍−Ｍ２−ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン−１、ＭＡＲＴ−１、およびＣＡ１９−９）、ワクチン（例えば、バチルスカルメット−ゲラン、癌ワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、細胞毒、化学療法薬（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、放射線療法、ＩＬ−６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ（ｓａｒｉｌｕｍａｂ））、ＩＬ−４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ−１０阻害剤、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、およびＩＬ−１５、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９−ＤＭ４ＡＤＣ、および抗ＤＳ６−ＤＭ４ＡＤＣ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（例えば、ＣＤ１９標的Ｔ細胞）、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、および非ステロイド系の抗炎症薬）、および栄養補助食品、例えば抗酸化剤からなる群から選択される第２の治療薬の投与を含む。

特定の実施形態では、本発明の方法は、長期の耐久性のある抗腫瘍応答を生成するために、および／または癌（例えば、ＡＬＬ）患者の生存を高めるために、放射線療法と組み合わせて抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与することを含む。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を癌患者に投与する前、同時、またはその後に放射線療法を施すことを含む。例えば、放射線療法は、抗体の１つ以上の用量の投与後に、腫瘍病変に１回以上の用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の全身投与後に、放射線療法を局所的に腫瘍病変に投与して、患者の腫瘍の局所免疫原性を増強する（アジュバント（ａｄｊｕｖｉｎａｔｉｎｇ）放射線）および／または腫瘍細胞を死滅させる（アブレーション放射線）こととしてもよい。特定の実施形態では、抗体は、放射線療法および化学療法薬（例えば、テモゾロミドまたはシクロホスファミド）またはＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベセプト）と組み合わせて投与され得る。

医薬組成物および投与
本発明の医薬組成物は、好適な担体、賦形剤、および適切な移動、送達、寛容などを提供する他の薬剤と共に処方され得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡでは、多くの適切な製剤がすべての製薬化学者に知られている処方で見出すことができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）を含む脂質（カチオン性またはアニオン性）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルション、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１についても参照されたい。

様々な送達系が知られており、本発明の医薬組成物を投与するために、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、突然変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシスにおけるカプセル化を使用することができる。（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照されたい。）投与方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、任意の好都合な経路、例えば、注入またはボーラス注入、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）による吸収によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与することができる。

本発明の医薬組成物は、標準針および注射器を用いて皮下または静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン送達装置は、本発明の医薬組成物を送達する用途を容易に有する。このようなペン送達装置は、再使用可能または使い捨て可能である。再使用可能なペン送達装置は、一般に、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを使用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは容易に廃棄され、医薬組成物を含む新しいカートリッジと容易に交換することができる。次いで、ペン送達装置を再使用することができる。使い捨てペン搬送装置には、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達デバイスには、デバイス内のリザーバに保持された医薬組成物が予め充填されている。リザーバが医薬組成物から空になると、装置全体が廃棄される。

特定の状況では、医薬組成物は制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近傍に配置することができ、したがって全身投与量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８を参照されたい。）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３の総説で議論されている。

注射可能な製剤は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射用の剤形、点滴剤などを含むことができる。これらの注射用製剤は、公知の方法により調製することができる。例えば、上記の抗体またはその塩を、慣用的に注射用に使用される滅菌水性媒体または油性媒体に溶解、懸濁または乳化させることにより、注射製剤を調製することができる。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース等の等張化剤、その他の補助剤等が挙げられ、これらは、適切な可溶化剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、塩化ナトリウム等の適当な可溶化剤、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン界面活性剤［例えばポリソルベート８０、水添ヒマシ油のＨＣＯ−５０（ポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］等と組み合わせて使用することができる。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、大豆油等が用いられ、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の可溶化剤と併用してもよい。このようにして調製された注射剤は、好ましくは適切なアンプルに充填される。

好都合には、上記の経口または非経口使用のための医薬組成物は、有効成分の用量に適合するのに適した単位用量の剤形に調製される。このような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。

投与レジメン
本発明は、週に約４回、週に２回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、またはそれ以下の投与頻度で、または治療応答が達成される限り、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を対象に投与することを含む方法を含む。

本発明の特定の実施形態によれば、複数の用量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を、所定の時間経過にわたって対象に投与することとしてもよい。本発明のこの態様による方法は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の１回以上の用量、を対象に、逐次投与することを含む。本明細書で使用される「順次投与する」は、抗体の各用量が異なる時点、例えば所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）で隔てられた異なる日に対象に投与されることを意味する。本発明は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の単一の初回用量、続いての二重特異性抗体の１回または複数回の２次用量、および場合によりその後の二重特異性抗体の１回または複数回の３次用量を患者に順次投与することを含む方法を含む。

用語「初回用量」、「２次用量」および「３次用量」は、投与の時間的順序を指す。したがって、「初回用量」は、治療レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも呼ばれる）であり、「２次用量」は、初回用量後に投与される用量であり、「３次用量」は、２次用量後に投与される用量である。初回用量、２次用量および３次用量はすべて、同量の二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を含み得る。しかしながら、特定の実施形態では、治療経過の間に、初回、２次および／または３次用量に含まれる量が互いに異なる（例えば、増減を適切に調整される）。特定の実施形態では、１回以上の（例えば、１、２、３、４、または５回）用量が、「負荷用量」として治療レジメンの開始時に投与され、それに続いてより低い頻度で投与される用量（例えば、「維持用量」）が続く。例えば、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、ＡＬＬを有する患者に、例えば約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの負荷投与量、続いて、例えば、患者の体重の１ｋｇあたり約０．１〜１０ｍｇの１回以上の維持投与量で投与することができる。

本発明の１つの例示的な実施形態では、各２次および／または３次用量は、直前の投与後の１／２〜１４（例えば、１／２、１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、またはそれ以上）週間で投与される。本明細書中で使用される「直前の用量」という語句は、介入しない投与の順序で、次の用量を投与する前に患者に投与される二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の用量を意味する。

本発明のこの態様による方法は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の任意の数の２次および／または３次用量を患者に投与することを含むことができる。例えば、特定の実施形態では、患者に単一の２次用量のみが投与される。他の実施形態では、２回以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の）２次用量が患者に投与される。同様に、特定の実施形態では、患者には単一の３次用量のみが投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の）の３次用量が患者に投与される。

複数の二次用量を含む実施形態では、各２次用量は、他の２次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各２次用量は、直前投与の１〜２週間後に患者に投与することができる。同様に、複数の３次用量を含む実施形態では、各３次用量は、他の３次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各３次用量は、直前投与の２〜４週間後に患者に投与することができる。あるいは、患者に２次および／または３次用量が投与される頻度は、治療レジメンの経過にわたって変化し得る。投与頻度は、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師による治療過程の間に調整することもできる。

特定の実施形態では、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の１つ以上の用量は、より頻繁な基準（週２回、週に１回または２週間に１回）での「誘導用量」として治療レジメンの開始時に投与され、より少ない頻度で（例えば、４〜１２週間に１回）投与されるその後の用量（「強化用量」または「維持用量」）が続く。

本発明は、ＡＬＬを治療するために患者に二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を投与することを含む方法を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の１回以上の用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの二重特異性の抗体の１回以上の用量は、ＡＬＬを有する対象において腫瘍増殖を阻害し、および／または腫瘍再発を予防する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、１回以上の用量で投与され、結果として、抗腫瘍効力の増加（例えば、治療されていない対象または単一療法としていずれかの抗体で投与された対象と比較して腫瘍増殖のより大きな阻害、腫瘍の再発予防の増強）をもたらす。

投薬量
本発明の方法による対象に投与される二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の量は、一般的に治療有効量である。本明細書中で使用される場合、「治療有効量」という語句は、以下の１つ以上をもたらす二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の量を意味し：治療されていない対象または単一療法としていずれかの抗体で投与された対象と比較して、（ａ）ＡＬＬの症状の重篤度または持続の減少；（ｂ）腫瘍増殖の阻害、または腫瘍壊死、腫瘍収縮および／または腫瘍消失の増加；（ｃ）腫瘍の成長および発達の遅延；（ｄ）腫瘍転移を阻害または遅延または停止；（ｅ）腫瘍増殖の再発の予防；（ｆ）ＡＬＬを有する対象の生存率の上昇；および／または（ｇ）従来の抗癌療法（例えば、化学療法薬または細胞毒性剤の使用の減少または排除）の使用または必要性の減少。

あるいは、患者のサイトカイン急増を予防、低減または緩和するために、単一の第１の用量を低用量、例えば１０μｇまたは３０μｇまたは１００μｇで投与し、その後一定期間後に第２の用量をより高い用量、例えば第１の用量より高く２または３回投与する。患者における「サイトカイン急増」を減少させることは、サイトカインカスケードまたは高サイトカイン血症の効果を低下させることを指し、このような負の免疫反応は、限定されないが、サイトカインと白血球との間の正のフィードバックループ、および／または高度に上昇した種々のサイトカインのレベルによって引き起こされ得る。

本明細書の実施例２によれば、本発明の二重特異性抗原結合分子（例えばＡｂ１、ｂｓＡＢ１またはＲＥＧＮ１９７９としても知られている）の第１の（初回）用量が投与され、ある期間の後に第２の用量が続き、第２の用量は第１の用量を上回る（より大きい）。いくつかの実施形態では、第２の用量は、第１の投与量の約２倍、または約３倍である。別の実施形態では、二重特異性の抗原結合分子は、連続した週、例えば４週間連続して週１回、第１の用量が投与される。別の実施形態では、第１の用量は毎週投与され、その後追加の期間（または指定された回数の月用量）の月用量が投与される。いくつかの実施形態では、第１の用量のための指定された投薬レジメンに続いて、第２の用量を毎週投与し、続いて追加の期間、毎月の投薬を行う。いくつかの実施形態では、第１の（初回）用量は１０μｇであり、第２の用量は３０μｇである。いくつかの実施形態では、第１の（初回）用量は３０μｇであり、第２の用量は１００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は１００μｇであり、第２の用量は３００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は３００μｇであり、第２の用量は１０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は１０００μｇであり、第２用量は２０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は１０００μｇであり、第２用量は３０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は１０００μｇであり、第２用量は４０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は１０００μｇであり、第２用量は５０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は２０００μｇであり、第２の用量は３０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は３０００μｇであり、第２の用量は４０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は４０００μｇであり、第２の用量は５０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は５０００μｇであり、第２の用量は６０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は６０００μｇであり、第２の用量は７０００μｇである。他の実施形態では、第１の（初回）用量は７０００μｇであり、第２の用量は８０００μｇである。

二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の場合、治療有効量は、約１０マイクログラム（ｍｃｇ）〜約８０００ｍｃｇ、例えば、約１０ｍｃｇ、約２０ｍｃｇ、約３０ｍｃｇ、約５０ｍｃｇ、約７０ｍｃｇ、約１００ｍｃｇ、約１２０ｍｃｇ、約１５０ｍｃｇ、約２００ｍｃｇ、約２５０ｍｃｇ、約３００ｍｃｇ、約３５０ｍｃｇ、約４００ｍｃｇ、約４５０ｍｃｇ、約５００ｍｃｇ、約５５０ｍｃｇ、約６００ｍｃｇ、約７００ｍｃｇ、約８００ｍｃｇ、約９００ｍｃｇ、約１０００ｍｃｇ、約１０５０ｍｃｇ、約１１００ｍｃｇ、約１５００ｍｃｇ、約１７００ｍｃｇ、約２０００ｍｃｇ、約２０５０ｍｃｇ、約２１００ｍｃｇ、約２２００ｍｃｇ、約２５００ｍｃｇ、約２７００ｍｃｇ、約２８００ｍｃｇ、約２９００ｍｃｇ、約３０００ｍｃｇ、約４０００ｍｃｇ、約５０００ｍｃｇ、約６０００ｍｃｇ、約７０００ｍｃｇ、または約８０００ｍｃｇの二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体であり得る。

個々の用量内に含まれる二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体の量は、対象の体重１ｋｇ当たり抗体のミリグラム（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）で表すことができる。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、対象の体重１ｋｇあたり約０．０００１〜約１００ｍｇの用量で対象に投与することができる。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、約１００ｍｇ／ｋｇの、約９０ｍｇ／ｋｇの、約８０ｍｇ／ｋｇの、約７０ｍｇ／ｋｇの、約６０ｍｇ／ｋｇの、約５０ｍｇ／ｋｇの、約４０ｍｇ／ｋｇの、約３０ｍｇ／ｋｇの、約２０ｍｇ／ｋｇの、約１０ｍｇ／ｋｇの、約９ｍｇ／ｋｇの、約８ｍｇ／ｋｇの、約７ｍｇ／ｋｇの、約６ｍｇ／ｋｇの、約５ｍｇ／ｋｇの、約４ｍｇ／ｋｇの、約３ｍｇ／ｋｇの、約２ｍｇ／ｋｇの、約１ｍｇ／ｋｇの、約０．９ｍｇ／ｋｇの、約０．８ｍｇ／ｋｇの、約０．７ｍｇ／ｋｇの、約０．６ｍｇ／ｋｇの、約０．５ｍｇ／ｋｇの、約０．４ｍｇ／ｋｇの、約０．３ｍｇ／ｋｇの、約０．２ｍｇ／ｋｇの、約０．１ｍｇ／ｋｇの、約０．０８ｍｇ／ｋｇの、約０．０６ｍｇ／ｋｇの、約０．０４ｍｇ／ｋｇの、約０．０３ｍｇ／ｋｇの、約０．０２ｍｇ／ｋｇの、約０．０１ｍｇ／ｋｇの、約０．００１ｍｇ／ｋｇの、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以下の用量で対象に投与され得る。例えば、二重特異性抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、患者の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。

以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのように作製および使用するかの完全な開示および記載を当業者に提供するために提示されており、発明者らが発明として考えるものの範囲を限定するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを保つための努力がなされているが、いくつかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。他に示さない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはそれに近い。

実施例１．確立されたＲａｊｉ腫瘍を有するＮＳＧマウスでは、抗ＣＤ２０＋抗体よりもＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体による治療が有効である
ＮＳＧマウスの確立された腫瘍を減少させる際の選択された抗ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体の効力を評価した。ＮＳＧマウス（ＮＯＤ／ＬｔＳｚ−ｓｃｉｄ ／ＩＬ２Ｒγｎｕｌｌマウス； Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）にＲａｊｉ腫瘍細胞（２×１０⁶）およびヒトＰＢＭＣ（５×１０⁵）を皮下に同時移植した（−１４日目）。腫瘍は治療の１４日前に宿主に定着させた。

ＣＤ２０×ＣＤ３二重特異性Ａｂ１（ｂｓＡＢ１およびＲＥＧＮ１９７９としても知られている）（０．４ｍｇ／ｋｇ、２×／週で腹腔内投与）は、定着したＲａｊｉ腫瘍を抑制することにおいて、ＣＤ１９×ＣＤ３ ＢｉＴＥ（０．５ｍｇ／ｋｇ、５×／週で静脈投与）（図１）と同等であり、リツキシマブ療法（８ｍｇ／ｋｇ、５×／週で腹腔内投与）（図２）よりも優れており、これにより、Ａｂ１（ｂｓＡＢ１およびＲＥＧＮ１９７９としても知られている）が０．５ｃｍ以上の体積の大きなリンパ腫塊を有する哺乳動物の治療に有効であることを実証している。

実施例２：急性リンパ芽球性白血病患者における抗ＣＤ２０×ＣＤ３抗体の臨床試験
この研究は、急性リンパ芽球性白血病の成人患者における抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の有効性、安全性および忍容性を調べるために、複数用量漸増および拡張群を用いたオープンラベルのマルチセンター用量漸増試験である。

この実施例で使用される例示的な二重特異性の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体はＲＥＧＮ１９７９（本明細書の実施例１に記載）である。

本試験の第一の目的は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の患者におけるＲＥＧＮ１９７９の安全性、耐容性および用量制限毒性（ＤＬＴ）を評価することである。

この試験の第２の目的は、（ｉ）ＡＬＬ患者のＲＥＧＮ１９７９に対する推奨用量を決定すること；（ｉｉ）ＲＥＧＮ１９７９の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを特徴づけること；（ｉｉｉ）ＲＥＧＮ１９７９の免疫原性を評価すること；（ｉｖ）総応答率、ベースラインにおける骨髄疾患患者の最小残存病変（ＭＲＤ）、応答期間、無増悪生存期間、メジアン、および速度を６ヶ月と１２ヶ月で測定されるＡＬＬにおけるＲＥＧＮ１９７９の予備的抗腫瘍活性を研究すること、である。

さらなる目的は、作用機序、観察された毒性、および潜在的な抗腫瘍活性と相関し得るバイオマーカーを評価することであり、サイトカインプロファイリング；末梢血Ｂ細胞およびＴ細胞サブセットおよび免疫表現型決定；末梢血における遺伝子発現の変化；血清免疫グロブリンを含むが、これらに限定されない。

調査対象母集団
対象集団には、ケアオプションの標準が存在しないＡＬＬ患者が含まれる。

急性リンパ芽球性白血病研究群のための包括的判断基準
患者は、研究に含める資格を得るために以下の基準を満たさなければならない：（１）少なくとも誘導および１サイクルの強化化学療法後の、再発性または難治性のＣＤ２０＋（白血病性リンパ芽球の２０％以上でフローサイトメトリーによるＣＤ２０発現と定義される）Ｂ−系統ＡＬＬが記録されるａ．フィラデルフィア染色体陽性ＡＬＬを有する患者は、少なくとも１つのチロシンキナーゼ阻害剤に不成功または不耐性であることが要求される、注記：包括基準１を満たしていれば、リンパ系表現型の慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）発症の危機にある患者は認められる；（２）年齢≧１８歳；（３）ＥＣＯＧ性能ステータス≦２；（４）研究薬物を投与してから２８日以内に腰椎穿刺により確認されたＣＮＳ陰性疾患；（５）適切な骨髄機能は、以下によって記録される：ａ．血小板数≧１０×１０⁹／Ｌ、ｂ．Ｈｂレベル≧７ｇ／ｄＬ、ｃ．絶対食細胞数≧０．５×１０⁹／Ｌ（貪食細胞：好中球、バンドおよび単球）；（６）適切な肝機能：

総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ（肝臓の関与があれば≦３×ＵＬＮ）ｂ．トランスアミナーゼ≦２．５×ＵＬＮ（肝臓の関与があれば≦５×ＵＬＮ）ｃ．アルカリホスファターゼ≦２．５×ＵＬＮ（肝臓病変があれば≦５×ＵＬＮ）（注：ギルバート症候群の患者は、それらの総ビリルビンがベースラインから変わらない限り、この要件を満たす必要はない。注記：研究者の意見では、異常な検査結果が現在の原発性悪性腫瘍によるものである場合、患者は登録について考慮される。そのような場合、研究者はスポンサーと適格性について協議し、書面で登録について承認を得る必要がある。）；（７）血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮまたは計算されたＣｏｃｋｃｒｏｆｔ−Ｇａｕｌｔによるクレアチニンクリアランス≧５０ｍＬ／ｍｉｎ（注記：基準を満たさないＣｏｃｋｃｒｏｆｔ−Ｇａｕｌｔによるクレアチニンクリアランスを有する患者は、測定されたクレアチニンクリアランス（２４時間尿または他の信頼できる方法に基づく）が５０ｍＬ／分以上である場合、登録について考慮される。注記：研究者の意見では、異常な検査結果が現在の原発性悪性腫瘍によるものである場合、患者は登録について考慮される。そのような場合、研究者はスポンサーと適格性について協議し、書面で登録について承認を得る必要がある。）；（８）研究薬物の開始前１４日以内に、急性または慢性移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）および抗ＧｖＨＤ投薬の徴候はない；（９）施設についての正常な値の範囲内で、登録前の４週間以内の前治療ＭＵＧＡまたは心エコーによる正常な心臓駆出分；（１０）診療所の訪問と研究に関連した手順に従う意思があり、可能である；（１１）サインしたインフォームドコンセントを提供すること。

急性リンパ芽球性白血病治療群の除外基準
以下の基準のいずれかを満たす患者は、研究から除外される：（１）ａ．てんかん、発作、麻痺、失語症、麻痺、重度脳損傷、小脳疾患、有機性脳症候群、精神病、またはｂ．スクリーニング中の脳ＭＲＩでの炎症性病変および／または血管炎の存在の証拠のようなＣＮＳ病理の既往歴または現在の状況；（２）バーキットの白血病；（３）現在の白血病の精巣関与；（４）進行中または最近（２年以内）に、全身免疫抑制治療による治療を必要とする重大な自己免疫疾患（ＧｖＨＤを除く）の証拠があり、これがｉＡＥのリスクを示唆している；（５）研究薬物の最初の投与の１４日前までの標準的な抗白血病化学療法（非生物学的）または放射線療法；（６）研究薬物の最初の投与の１４日前までの治験的な非生物学的薬剤による治療；（７）研究薬物の最初の投与の１４日前までのリツキシマブ、免疫調節剤または他の研究薬物または市販の生物学的薬剤による治療（免疫調節剤の例には、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＬＡＧ３、ＯＸ−４０、治療ワクチン、またはサイトカイン治療の遮断薬が挙げられる）；（８）研究薬物の最初の投与の１２週間前未満のアレムツズマブによる治療；（９）治療の３ヶ月以内に同種異系幹細胞移植を事前に行う；（１０）患者が治療を受けている同時進行性悪性腫瘍；（１１）研究の実施を妨げたり、重大な心血管疾患（例えば、ニューヨーク心臓協会クラスＩＩＩまたはＩＶ心臓病、スクリーニング前６ヶ月以内の心筋梗塞、不安定不整脈または不安定狭心症）および／または重大な肺疾患（例えば、閉塞性肺疾患および症候性気管支痙攣の病歴）を含むがこれに限定されない重大なリスクに患者がさらされたりする可能性がある、重大な併存疾患または病状の証拠；（１２）研究薬物の最初の投与の１４日前にＩＶ抗感染薬による入院または治療を必要とする既知の活動性細菌、ウイルス、真菌、マイコバクテリアもしくは他の感染症または感染の主要な出来事；（１３）ＨＩＶ感染またはＨＢＶもしくはＨＣＶによる能動感染；（１４）過去５年間以内の肺炎の病歴；（１５）研究薬物の類似の化学的または生物学的組成物の化合物に起因するアレルギー反応の履歴；（１６）テトラサイクリン系抗生物質群のいずれかの化合物に対する過敏症の病歴（試験薬物中に微量成分が存在する可能性があるため予防措置）；（１７）アロプリノールおよびラスブリカーゼの両方に対する既知の過敏症；（１８）妊婦または授乳中の女性；（１９）研究中および試験投薬中止後６ヵ月以内に適切な避妊薬を服用したくない、性的に活発な、男性または妊娠可能な可能性のある女性。

研究設計
これは、複数用量のエスカレーションおよび拡張群アームを備えたオープンラベル、マルチセンター、用量漸増試験である。

患者は以下のコホートの１つに割り当てられる：
・複数用量のエスカレーションコホート
・２つの拡張コホート：ａ）再発性／難治性ＡＬＬ、およびｂ）最小残存疾患陽性（ＭＲＤ＋）ＡＬＬ

ＡＬＬ患者のＲＥＧＮ１９７９
図３は、ＡＬＬ患者のＲＥＧＮ１９７９治療スケジュールを示す。最初の開始用量が許容されるならば、最初の開始用量とそれに続くより高い用量からなるＤＬを患者に割り当てる（表１）。

静脈内ＲＥＧＮ１９７９を週１回で１１回投与し、続く治療で第１３週に開始して４週間毎に（Ｑ４Ｗ）６回追加投与する。患者はＲＥＧＮ１９７９治療の完了後さらに６ヶ月間フォローされる。

開始用量
ＲＥＧＮ１９７９：ＡＬＬを有する患者におけるＲＥＧＮ１９７９の開始ＤＬは、観察された安全性に基づく。ＡＬＬを有する患者における初回ＤＬの開始用量は、安全性をクリアしたＤＬの初回用量よりも少なくとも１０倍低が、開始ＤＬはＤＬ１より低くならない。再発性／難治性ＡＬＬおよびＭＲＤ陽性ＡＬＬにおけるＲＥＧＮ１９７９の拡大は、ＡＬＬ用量漸増群において測定される。

用量漸増
すべてのアームおよびすべてのコホートにおいて、用量漸増規則は、コホートごとに３〜６人の患者を登録する伝統的な３＋３用量漸増設計に従う。

用量制限毒性（ＤＬＴ）の観察期間は、全ての群のすべてのコホートの治療の最初の２８日間と定義される。治療の最初の２８日間に起こった（そして研究者による研究治療に関連すると考えられる）以下の事象のいずれかが、ＤＬＴと考慮される：グレード≧２ブドウ膜炎、グレード４の好中球減少、グレード４の血小板減少、およびグレード≧３熱性好中球減少。

最大耐量（ＭＴＤ）は、ＤＬＴ観察期間中の観察された毒性に基づいて決定され、２人以上の患者においてＤＬＴの発生により投与が停止されるレベルのすぐ下の用量レベル（ＤＬ）として定義される。ＤＬＴの発生によりアームの線量増加部分が停止しない場合、ＭＴＤは決定されていないと考えられる。

最適な生物学的用量はまた、観察された安全性および忍容性、ＰＫ、ＰＤおよび予備的抗腫瘍活性に基づいて決定される。

拡張アームの推奨用量は、ＭＴＤおよび／または最適な生物学的用量を決定するために使用されるデータのレビューに基づいて決定される。

研究期間
研究治療期間は、個々の患者がどのように治療に応答するかに応じて、６ヶ月から１２ヶ月である。経過観察期間は全患者で６ヶ月である。

サンプルサイズ：登録された患者の正確な数は、プロトコル定義されたＤＬＴの発生および開かれるＤＬの数に依存する。ＡＬＬを有する患者におけるＲＥＧＮ１９７９のサンプルサイズは、４２人までである（このアームが開くＤＬに依存する）。各拡張コホートは２０人の患者を登録し、合計１８０人の患者を登録する。

研究治療と管理
ＲＥＧＮ１９７９は、滅菌した一回使用のバイアルに液体として供給される。各バイアルは、２ｍｇ／ｍＬの濃度で１ｍＬのＲＥＧＮ１９７９の回収可能な容量を含む。薬剤師または他の資格のある個人は、投与のためのＲＥＧＮ１９７９を調製するために各部分で識別される。受け取った用量は、用量レベルのコホート割り当てに従う。各用量レベルで投与される用量は、フラット用量であり、患者の体重または体表面積に依存しない。ＲＥＧＮ１９７９の各用量は、少なくとも６０分間にわたって静脈内（ＩＶ）注入によって投与される。医師の臨床的判断に従って、注入時間を最大４時間まで延長することができる。さらに、研究者は、２（好ましくは連続した）日に２回の別個の注入に分割することを選択することができる。

３００ｍｃｇ以上の用量でＲＥＧＮ１９７９を投与する前に、注入の少なくとも１時間前にデキサメタゾンによる前投薬が必要である。初回用量のＲＥＧＮ１９７９の投与およびその後の高用量（投与ステップ）の最初の投与で、少なくとも７．５ｍｇのデキサメタゾンが推奨される。患者が輸液関連反応またはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の徴候または症状なしに注入を許容する場合、研究者は、臨床的判断に基づいて必要に応じて、その後の注入の前に投与されるデキサメタゾン前投薬の用量を低下または除くこととしてもよい。抗ヒスタミン剤および／またはアセトアミノフェンによる前投薬も考慮され得る。ＲＥＧＮ１９７９の３００ｍｃｇより低い用量では、患者が輸液関連反応またはＲＥＧＮ１９７９の以前の注入を伴うグレード２以上のＣＲＳを経験していない限り、抗ヒスタミン、アセトアミノフェンおよび／またはコルチコステロイドによる実験的な前投与は推奨されない。

サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）および／またはＴＬＳ（骨髄中の５０％以上のリンパ芽球；乳酸デヒドロゲナーゼ［ＬＤＨ］≧５００Ｕ／Ｌ；または髄髄外関与によって定義される）の高いリスクを有するＡＬＬ患者は、デキサメタゾンプロフェーズを受けることが推奨される。デキサメタゾンプロフェーズは毎日１０ｍｇ／ｍ²（ＱＤ）で最低３日間、最高５日間である必要がある。デキサメタゾンプロフェーズは、研究薬物の開始前に７２時間以上中断しなければならない。

再発または進行の時に、患者は再治療についてについて考慮され得る。準最適応答を有する患者は、患者が既に受けている治療のより高い用量で再治療することも考慮され得る。再治療の全ての決定は、治験研究者とスポンサーの間の議論の後に行われるであろう。再治療は、再発または進行の時に安全で許容できるとされている最高のＤＬでなされるであろう。再治療の前に、患者はインフォームドコンセントを再署名し、再治療の適格基準を満たさす必要がある。

研究のエンドポイント
タイムフレームは第７２週までのベースラインである（研究の終了）。主要エンドポイントは、安全性（特に有害事象［ＡＥ］、ＤＬＴ、安全性試験所データ、および臨床所見）である。第２のエンドポイントは、（ｉ）ＲＥＧＮ１９７９のＰＫ；（ｉｉ）ＲＥＧＮ１９７９抗体の免疫原性；（ｉｉｉ）抗腫瘍活性：（ａ）兆候に関する適用可能な応答基準ごとの全体的な応答率；（ｂ）応答期間および６および１２ヶ月における無増悪生存期間；（ｃ）ベースラインで骨髄関与を有する患者のための微小残存病変（ＭＲＤ）評価；および（ｉｖ）サイトカインプロファイリング、末梢血Ｂ細胞およびＴ細胞サブセットならびに免疫表現型決定、循環Ｔ細胞のＰＤ−１占有率の分析、末梢血における遺伝子発現の変化および血清免疫グロブリンを含む薬力学的尺度、である。

標的腫瘍の大きさのベースラインからの変化率も記録され、概要が記載される。

手順と評価
実施されるスクリーニング手順には、心臓駆出画分および脳ＭＲＩが含まれる。安全性の手順には、病歴、身体検査、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、凝固、Ｂ症状の評価およびパフォーマンス状態の評価、臨床検査、有害事象および併用薬が含まれる。

腫瘍評価のために実施される有効性手順には、ＣＴまたはＭＲＩスキャン、１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース−ポジトロン放出断層撮影（ＦＤＧ−ＰＥＴ）スキャン、骨髄吸引および生検（ＢＭＡ／Ｂｘ）、腰椎穿刺、リンパ節および／または腫瘍生検が含まれる。

ＡＬＬを有する患者は、ＮＣＣＮガイドライン２０１４に従って評価される。

骨髄サンプル中のＭＲＤの存在についての評価は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって一元的に行われる。ＭＲＤ応答の決定は、ＡＬＬ患者において、Ｂｒuｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ（Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１０，２４：５２１−３５）によって行われる。

ＰＫおよび抗薬物抗体（ＡＤＡ）評価のための血液試料を採取する。サイトカイン産生、前炎症性サイトカインの血清レベル、およびリンパ球サブセットおよび活性化状態の変化をモニターするために、バイオマーカーサンプルを収集する。さらに、これらのサンプルは、基礎疾患の臨床経過に影響を及ぼすか、または、治療副作用を調節するバリエーションについて腫瘍または体細胞遺伝学的分析を可能にする。

安全性
研究薬物との因果関係があるかもしれないし、そうでないかもしれない研究薬物を投与された患者における有害事象（ＡＥ）、あらゆる不都合な医療事象。したがって、有害事象は、研究薬物に関連するとみなされるか否かに関わらず、研究薬物の使用に一時的に関連する好ましくないかつ意図しない徴候（異常な検査所所見を含む）、症状または疾患である。有害事象はまた、研究薬物の使用と一時的に関連する既存の状態のあらゆる悪化（すなわち、任意の臨床的に有意な頻度および／または強度の変化）を含む。原発性悪性腫瘍の進行は、原発癌の典型的な進行パターン（時間経過、罹患臓器などを含む）と明らかに一致する場合、有害事象とはみなされない。進行の臨床症状は、症状が原発性悪性腫瘍の進行のみによって決定できない場合、または研究中の疾患の進行の予測パターンに適合しない場合、有害事象として報告され得る。重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、任意の用量で死に至り、生命を脅かす、入院を必要とする、持続的または重大な障害をもたらす、および／または重要な医療事象である、任意の有害な医学的発生である。

患者はバイタルサイン、一般的安全性、サイトカイン放出症候群、Ｂ細胞枯渇、ＣＮＳ毒性および免疫介在性有害事象についてモニタリングされる。

統計計画
用量漸増コホート：研究設計は、ＤＬあたり３〜６人の患者を有する従来の３＋３デザインに基づいている。

拡張コホート：拡張コホートの推奨フェーズＩＩ用量（ＲＰ２Ｄ）の安全性をさらに検討する臨床的考察に基づいて、各拡張コホートについて２０人の患者のサンプルサイズを測定する。２０人の患者のサンプルサイズもまた、腫瘍応答に関する予備評価を提供する。

この研究で報告されたすべての有害事象は、現在利用可能な規定活動のための医学辞典（ＭｅｄＤＲＡ（登録商標））を用いてコード化されている。コード化は最低レベルの用語になる。逐語的テキスト、優先語（ＰＴ）、および主要な器官別大分類（ｓｙｓｔｅｍ ｏｒｇａｎ ｃｌａｓｓ、ＳＯＣ）が列挙されている。

治療群によるすべての治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）の概要は、（ｉ）ＳＯＣおよびＰＴによる少なくとも１回のＴＥＡＥを有する患者の数（ｎ）およびパーセンテージ（％）、（ｉｉ）ＳＯＣおよびＰＴによって示される重症度別のＴＥＡＥ、（ｉｉｉ）ＳＯＣおよびＰＴによって提示された、治療との関係（関連性あり、関連性なし）によるＴＥＡＥ、を含む。死亡およびその他の重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、治療群ことに列挙され、概要が記載される。恒久的な治療中止につながる治療中に発生した有害事象は、治療群ごとに列挙され、概要が記載される。

効能分析
疾患関連基準によって決定される客観的腫瘍応答の概要が記載される。必要に応じてＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒエスティメータによって、６ヶ月および１２ヶ月での応答期間および無増悪生存期間が列挙され、概要が記載される。最小残存病態が列挙され、概要が記載される。無増悪生存期間が列挙され、概要が記載される。標的腫瘍のサイズにおけるベースラインからの変化率も概要が記載される。

結果
ＲＥＧＮ１９７９抗体は安全であり、患者に耐容性があることが期待される。ＲＥＧＮ１９７９を投与されたＡＬＬ患者は、腫瘍増殖阻害および／または寛解を示すことが期待される。

本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。

Claims (28)

1. 急性リンパ芽球性白血病を患っている対象における白血病性の腫瘍細胞を治療または増殖を阻害する方法であって、ＣＤ２０に特異的に結合する第１の抗原結合性のアームおよびＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合性のアームを含む、治療有効量の二重特異性の抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
2. 前記治療有効量は、前記対象の体重１ｋｇあたり０．１〜１０ｍｇを含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記治療有効量は、前記対象の体重１ｋｇあたり４ｍｇを含む、請求項２に記載の方法。
4. 前記対象は、１回分以上の用量で、治療有効量の前記二重特異性の抗体が投与される、請求項１に記載の方法。
5. 前記二重特異性の抗体の各用量は、前記対象の体重１ｋｇあたり０．１〜１０ｍｇを含む、請求項４に記載の方法。
6. 前記二重特異性の抗体の各用量は、前記対象の体重１ｋｇあたりの４ｍｇを含む、請求項４に記載の方法。
7. 前記二重特異性の抗体の各用量は、１０〜５０００マイクログラムを含む、請求項４に記載の方法。
8. 前記二重特異性の抗体の各用量は、直前の先の投与後０．５〜１２週間投与される、請求項４〜７のいずれか１つに記載の方法。
9. 各用量は、用量期間内の投与のために２つ以上の画分に分割される、請求項４に記載の方法。
10. 前記用量は、２〜５の画分に分割される、請求項９に記載の方法。
11. 前記二重特異性の抗体は、静脈内、皮下、または腹腔内に投与される、請求項１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
12. 前記対象は、以前の治療後に、抵抗性もしくは応答不十分、または再発した、請求項１〜１１のいずれか１つに記載の方法。
13. 前記治療は、白血病性の細胞数の減少の遅延、生存率の上昇、部分的な応答、および完全な応答からなる群から選択される治療効果を産み出す、請求項１〜１２のいずれか１つに記載の方法。
14. 前記治療効果は、治療されていない対象と比較した場合の生存率の上昇である、請求項１３に記載の方法。
15. 前記白血病性の細胞数は、治療されていない対象と比較して、少なくとも５０％低減される、請求項１〜１４のいずれか１つに記載の方法。
16. 第２の治療薬または療法を前記対象に投与することをさらに含み、
    前記第２の治療薬または療法は、放射線、手術、化学療法薬、癌ワクチン、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＬＡＧ−３阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、アンギオポエチン−２（Ａｎｇ２）阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、バチルスカルメット−ゲランワクチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、細胞毒、インターロイキン６受容体（ＩＬ−６Ｒ）阻害剤、インターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒ）阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、抗体−薬物複合体、抗炎症薬、および栄養補助食品からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか１つに記載の方法。
17. 前記二重特異性の抗体の前記第１の抗原結合性のアームは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ａ−ＨＣＶＲ）の３つの重鎖ＣＤＲ（Ａ−ＨＣＤＲ１、Ａ−ＨＣＤＲ２、およびＡ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項１〜１６のいずれか１つに記載の方法。
18. Ａ−ＨＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、Ａ−ＨＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、Ａ−ＨＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の方法。
19. 前記Ａ−ＨＣＶＲは配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記二重特異性の抗体の前記第２の抗原結合性のアームは、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｂ−ＨＣＶＲ）の３つの重鎖ＣＤＲ（Ｂ−ＨＣＤＲ１、Ｂ−ＨＣＤＲ２、およびＢ−ＨＣＤＲ３）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
21. Ｂ−ＨＣＤＲ１は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、Ｂ−ＨＣＤＲ２は配列番号１１のアミノ酸配列を含み、Ｂ−ＨＣＤＲ３は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号８のアミノ酸配列を含み、およびＬＣＤＲ３配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の方法。
22. 前記Ｂ−ＨＣＶＲは配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＶＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の方法。
23. 前記二重特異性の抗体はＲＥＧＮ１９７９である、請求項２２に記載の方法。
24. 前記対象は、フローサイトメトリーにより測定される、白血病リンパ芽球の１０％以上にＣＤ２０発現を有する、請求項１〜２３のいずれか１つに記載の方法。
25. 前記対象は、フローサイトメトリーにより測定される、白血病リンパ芽球の１５％以上にＣＤ２０発現を有する、請求項２４に記載の方法。
26. 前記対象は、フローサイトメトリーにより測定される、白血病リンパ芽球の２０％以上にＣＤ２０発現を有する、請求項２５に記載の方法。
27. 前記二重特異性の抗体が、第１および第２の抗原結合ドメインのそれぞれにつながれたキメラＦｃドメインをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１つに記載の方法。
28. 前記キメラＦｃドメインがキメラヒンジを含む、請求項２７に記載の方法。

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