JP2019501657A5 - - Google Patents
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Claims (16)
- 食用バイオマスを製造するための方法であって、
CDKN2B遺伝子座への遺伝子改変および/またはTERTの異所性発現を有する、選択を受けた細胞集団を増殖させること;
増殖させた細胞集団をマスターセルバンクストックインベントリ内で凍結保存および貯蔵すること;
生体外環境でマスターセルバンクストックインベントリから細胞を播種および培養すること;並びに
培養された食用の細胞バイオマスを回収すること、
を含む方法。 - 前記選択を受けた細胞集団が、ニワトリ(Gallus gallus)またはウシ(Bos taurus)からの骨格筋細胞集団である、請求項1に記載の方法。
- 前記選択を受けた細胞集団が、海産物、家禽又は家畜の種からの骨格筋細胞集団である、請求項1に記載の方法。
- 前記選択を受けた細胞集団が、ニワトリ(Gallus gallus)、シチメンチョウ(Meleagris gallopavo)、マガモ(Anas platyrhynchos)、ウシ(Bos taurus)、イノシシ(Sus scrofa)、ヒツジ(Ovis aries)、タイセイヨウサケ(Salmo salar)、タイセイヨウクロマグロ(Thunnus thynnus)、タイセイヨウマダラ(Gadus morhua)、アメリカウミザリガニ(Homarus americanus)、シロエビ(Litopenaeus setiferus)、ニジマス(Oncorhynchus mykiss)およびナイルティラピア(Oreochromis niloticus)からなる群から選択される種からの骨格筋細胞集団である、請求項3に記載の方法。
- 前記選択を受けた細胞集団が、TERTの異所性発現を指示するための配列番号11、配列番号6または配列番号7の配列を含む遺伝子コンストラクトを含む、請求項1に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法により得られた培養された食用の細胞バイオマス。
- 後生動物の体細胞集団の複製能を拡張することにより食用の細胞バイオマスを培養するための方法であって、
遺伝子改変によりサイクリン依存性キナーゼ阻害因子(「CKI」)を介した後生動物の体細胞集団中の網膜芽細胞腫タンパク質の安定化を抑止することによって、網膜芽細胞腫タンパク質による複製老化中の細胞分裂周期の進行阻害を非干渉化すること;
機能的なテロメア逆転写酵素(「TERT」)タンパク質の異所性発現を指示する遺伝子コンストラクト(配列番号11)を後生動物体細胞集団に形質導入することで、テロメラーゼ活性を維持すること;
前記遺伝子改変および前記TERTタンパク質の異所性発現を有するマスターセルバンクとなるセルバンクを維持すること;
生体外環境で前記マスターセルバンクから細胞を培養し、培養された細胞バイオマスとすること;並びに、
食用に前記培養された細胞バイオマスを回収すること、
を含む方法。 - 前記機能的なTERTタンパク質の異所性発現を指示する遺伝子コンストラクトが配列番号11、配列番号6または配列番号7の配列を含む、請求項7に記載の方法。
- 前記遺伝子改変が、
i)前記後生動物の体細胞集団におけるCDKN2B遺伝子を遺伝子改変することにより、p15タンパク質を不活性化することで、網膜芽細胞腫タンパク質による複製老化時の細胞周期の阻害を無効にすること;
ii)前記後生動物の体細胞集団におけるCDKN2A遺伝子を遺伝子改変することにより、p16タンパク質を不活性化することで、網膜芽細胞腫タンパク質による複製老化時の細胞周期の阻害を無効にすること;または
iii)サイクリン依存性キナーゼ4(「CDK4」)タンパク質の異所性発現を指示する遺伝子コンストラクトで細胞集団を改変すること、
を含む、請求項7に記載の方法。 - 前記CDKN2B遺伝子がNCBI Gene ID:395076の配列を含むか;または前記CDKN2A遺伝子がNCBI Gene ID:616369の配列を含むか;または前記CDK4タンパク質の発現を指示する遺伝子コンストラクトが配列番号12の配列を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記遺伝子改変が、前記CDKN2B遺伝子のエクソン1内の保存ヌクレオチド配列の変異であるか;または前記遺伝子改変が、前記CDKN2B遺伝子のエクソン1を標的とするガイドRNA(配列番号1、2、3、4および5)からなる群から選択されるガイドRNAを用いてなされる挿入変異であり、且つ、clustered regularly−interspaced short palindromic repeats−Cas9(「CRISPR/Cas9」)を用いて作製されるか;または前記遺伝子改変が、前記CDKN2B遺伝子のエクソン1を標的とするガイドRNA(配列番号1、2、3、4および5)からなる群から選択されるガイドRNAを用いてなされる欠失変異であり、且つ、CRISPR/Cas9を用いて作製される、請求項9に記載の方法。
- 前記遺伝子改変が、請求項9に記載されたii)を含み、前記CDKN2A遺伝子のエクソン2内の保存ヌクレオチド配列の変異である、請求項9に記載の方法。
- 前記遺伝子改変が、前記CDKN2A遺伝子のエクソン2を標的とするガイドRNAを用いてなされる挿入変異であり、且つ、CRISPR/Cas9を用いて作製されるか;または前記遺伝子改変が、前記CDKN2Aのエクソン2を標的とするガイドRNA(配列番号8、9及び10)からなる群から選択されるガイドRNAを用いてなされる欠失変異であり、且つ、CRISPR/Cas9を用いて作製される、請求項12に記載の方法。
- 前記後生動物の体細胞集団が、海産物、家禽又は家畜の種からの骨格筋細胞集団である、請求項7に記載の方法。
- 前記骨格筋細胞集団が、ニワトリ(Gallus gallus)、シチメンチョウ(Meleagris gallopavo)、マガモ(Anas platyrhynchos)、ウシ(Bos taurus)、イノシシ(Sus scrofa)、ヒツジ(Ovis aries)、タイセイヨウサケ(Salmo salar)、タイセイヨウクロマグロ(Thunnus thynnus)、タイセイヨウマダラ(Gadus morhua)、アメリカウミザリガニ(Homarus americanus)、シロエビ(Litopenaeus setiferus)、ニジマス(Oncorhynchus mykiss)およびナイルティラピア(Oreochromis niloticus)からなる群から選択される種に由来する、請求項14に記載の方法。
- 以下を含む方法:
(a)後生動物体細胞集団中のサイクリン依存性キナーゼ4(「CDK4」)の阻害剤をコードする遺伝子を不活性化すること;および/または
(b)後生動物体細胞集団中のテロメア逆転写酵素(「TERT」)をコードするポリヌクレオチドを異所的に発現すること
により得られ、無限の複製能を有する、後生動物体細胞集団のクローン細胞株。
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