JP2019150052A - Ｃｄ２２に特異的な抗体およびその使用方法 - Google Patents

Ｃｄ２２に特異的な抗体およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】ＣＤ２２上に存在するエピトープに特異的な抗体の提供。【解決手段】ＣＤ２２のエピトープに特異的に結合する抗体であって、アミノ酸配列、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＸ１ＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＸ２ＬＹＬＱＭＸ３ＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（Ｘ１は、ＫまたはＲであり、Ｘ２は、ＳまたはＴであり、Ｘ３は、ＮまたはＳである）を有するＶＨ領域を含む免疫グロブリン重鎖と、免疫グロブリン軽鎖とを含む抗体。【選択図】図２Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１２年７月１９日に出
願された米国仮特許出願番号第６１／６７３，６３０号の優先利益を主張する。
序論
Ｉｇスーパーファミリーに属する系統限定Ｂ細胞抗原であるＣＤ２２は、多くの種類の
悪性Ｂ細胞の表面、および正常な成熟Ｂリンパ細胞上に発現される。
本開示は、ＣＤ２２に特異的な抗体を提供する。また、種々の治療、診断、および監視
用途に有用な抗体も提供される。
キメラまたはヒト化抗ＣＤ２２抗体の重鎖（図１Ａ）および軽鎖（図１Ｂ）をコードする構築物を示す。 同上。 ヒト化抗ＣＤ２２抗体とビオチン化親キメラ抗ＣＤ２２抗体との固定化ＣＤ２２への結合についての競合を示すグラフである。 同上。 同上。 同上。 同上。 抗体を試験するための健常ドナーのＴ細胞増殖応答を示す。 同上。 同上。 同上。 ヒト化抗ＣＤ２２抗体のＲａｊｉ細胞への結合、およびＲａｊｉ細胞による抗体の内在化を示す。 変異抗体のヒトＣＤ２２に対する結合親和性を示す。 ヒト化抗ＣＤ２２変異体の凝集を示す。 同上。 同上。 同上。 抗ＣＤ２２の重鎖（図７Ａ）および軽鎖（図７Ｂ）可変領域のアミノ酸配列を提供する。 同上。 抗ＣＤ２２抗体の変異抗体９〜２０のアミノ酸配列を提供する。 同上。 同上。 同上。 同上。 ＣＤ２２アイソフォームのアミノ酸配列を提供する（上から下へ：配列番号：３５〜３８）。 同上。 同上。
定義
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、任意のアイソタイプの抗体または免
疫グロブリン、抗原との特異的結合を保持する抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、お
よびＦｄ断片を含むがこれらに限定されない、）、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体
、ならびに抗体の抗原結合部分および非抗体タンパク質を含む融合タンパク質を含む。抗
体は、例えば、放射性同位体、検出可能な生成物を産生する酵素、蛍光タンパク質等を用
いて検出可能に標識されてもよい。抗体はさらに、特異的結合対のメンバー、例えばビオ
チン（ビオチン−アビジン特異的結合対のメンバー）等の他の部分にコンジュゲートされ
てもよい。抗体は、ポリスチレンプレートまたはビーズ等を含むがこれらに限定されない
固体支持体に結合してもよい。抗原との特異的結合を保持するＦａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ
’）２、および／または他の抗体断片、ならびにモノクローナル抗体も、これらの用語に
包含される。抗体は、一価または二価であり得る。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、例えば、インタクトな抗体の抗原結合領域
または可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およ
びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５））；一本鎖抗体分子；および抗体
断片から形成される多特異的抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗
原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶
化する能力を反映する名称である、残りの「Ｆｃ」断片とを産生する。ペプシン処理は、
２つの抗原結合部位を有し、なおも抗原と架橋結合することが可能な、Ｆ（ａｂ’）２断
片を生じる。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。こ
の領域は、緊密に非共有結合的に会合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメ
インとのダイマーからなる。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作
用して、ＶＨ−ＶＬダイマーの表面上の抗原結合部位を画定する。集合的に、６つのＣＤ
Ｒが、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、たとえ単一の可変ドメイン（ま
たは抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識して結
合する能力を有するが、その親和性は完全な結合部位よりも低い。
「Ｆａｂ」断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も
含む。Ｆａｂ断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に、抗体ヒンジ領域からの
１つ以上のシステインを含む数個の残基が付加していることによってＦａｂ’断片とは異
なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を
担持するＦａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間
にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学的
結合は既知である。
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメイン
のアミノ酸配列に基づいて、κ（カッパ）およびλ（ラムダ）と称される２つの明らかに
異なる種類の一方に割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配
列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリン
の５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これ
らのうちのいくつかは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、お
よびＩｇＡ２といったサブクラス（アイソタイプ）にさらに分割されてもよい。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、
これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在する。いくつかの実施形態において
、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさ
らに含み、ｓＦｖが抗原結合に所望される構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの概
説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ
Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ．１１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒ
ｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、
該断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続され
た重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成するには短か
過ぎるリンカーを用いることにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対形
成させ、２つの抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，
０９７号、国際公開第ＷＯ９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ
．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９
９３）に、より詳細に記載されている。
本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、２つの物質の可逆的結合の平衡
定数を指し、解離定数（Ｋｄ）として表される。親和性は、無関係のアミノ酸配列に対す
る抗体の親和性よりも、少なくとも１倍大きい、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍
大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なく
とも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大き
い、少なくとも２０倍大きい、少なくとも３０倍大きい、少なくとも４０倍大きい、少な
くとも５０倍大きい、少なくとも６０倍大きい、少なくとも７０倍大きい、少なくとも８
０倍大きい、少なくとも９０倍大きい、少なくとも１００倍大きいか、もしくは少なくと
も１０００倍大きい、またはそれ以上であり得る。標的タンパク質に対する抗体の親和性
は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル（
ｐＭ）、または約１００ｎＭ〜約１フェムトモル（ｆＭ）以上であり得る。本明細書で使
用される場合、「結合活性」という用語は、２つ以上の物質の複合体の希釈後の解離に対
する抵抗性を指す。「免疫反応性」および「優先的に結合する」という用語は、抗体およ
び／または抗原結合断片に関して、本明細書において同義に使用される。
「結合」という用語は、塩架橋および水架橋等の相互作用を含む、例えば、共有結合的
、静電的、疎水性、ならびにイオン性および／または水素結合性の相互作用に起因する２
つの分子間の直接的会合を指す。主題の抗ＣＤ２２は、ＣＤ−２２ポリペプチド内のエピ
トープに特異的に結合する。非特異的結合は、約１０−７Ｍ未満の親和性の結合、例えば
、１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍ等の親和性の結合を指す。
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖
ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部
位を意味することが意図される。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．
Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅ
ｒｅｓｔ”（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９
６：９０１−９１７（１９８７）；およびＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）に記載されており、その定義は、互
いに対して比較した時のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわら
ず、抗体または移植抗体またはその変異体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は
、本明細書において定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上に列
挙した参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として
下の表１に記載する。
Figure 2019150052
本明細書で使用される場合、抗体可変領域に言及して使用される場合の「フレームワー
ク」という用語は、抗体の可変領域内のＣＤＲ領域以外の全てのアミノ酸残基を意味する
ことが意図される。可変領域のフレームワークは、一般的に約１００〜１２０アミノ酸長
の不連続なアミノ酸配列であるが、ＣＤＲ以外のアミノ酸のみを指すことが意図される。
本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」という用語は、ＣＤＲによって分離
されたフレームワークの各ドメインを意味することが意図される。
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から同定および分離され、かつ／または回
収された抗体である。その天然環境の混入成分は、抗体の診断または治療上の使用を妨げ
る物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を
含み得る。いくつかの実施形態において、抗体は、（１）ローリー法によって決定した場
合に、抗体の９０重量％を上回るまで、９５重量％を上回るまで、もしくは９８重量％を
上回るまで、例えば９９重量％を上回るまで、（２）スピニングカップ配列決定装置の使
用によってＮ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程
度まで、または（３）クマシーブルー染色もしくは銀染色を用いた還元条件もしくは非還
元条件下でのラウリル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥ）によって均質になるまで、精製される。単離された抗体は、抗体の天然環境の少な
くとも１つの成分が存在しなくなるため、組換え細胞内にｉｎ ｓｉｔｕで抗体を含む。
場合によっては、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される
。
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療する」等の用語は、所望の薬理学的およ
び／または生理学的効果を得ることを指す。該効果は、疾患もしくはその症状を完全にも
しくは部分的に防止するという点において予防的であり得、かつ／または、疾患および／
もしくは疾患に起因する悪影響の部分的もしくは完全な治癒という点において治療的であ
り得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任
意の治療を包含し、（ａ）疾患にかかりやすい可能性があるが、まだそれを有すると診断
されていない対象において疾患の発症を予防すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すな
わち、その発生を停止すること、および（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、その疾患
の退行を引き起こすことを含む。
「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」という用語は、本明細書において同
義に使用され、ネズミ（ラット、マウス）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物
（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）等を含むがこれらに限定されない哺乳動物
を指す。
「治療的有効量」または「効果的な量」は、疾患を治療するために哺乳動物または他の
対象に投与された場合に、そのような疾患の治療を達成するのに十分な主題の抗ＣＤ２２
Ａｂの量を指す。「治療的有効量」は、抗ＣＤ２２Ａｂ、疾患およびその感受性、ならび
に治療を受ける対象の年齢、体重等に応じて変化する。
「生物試料」は、個人から得られる様々な試料の種類を包含し、診断アッセイまたはモ
ニタリングアッセイに使用することができる。この定義は、血液および他の生物学的起源
の液体試料、固体組織試料、例えば、生検標本もしくは組織培養物またはそれに由来する
細胞およびその子孫を包含する。この定義は、例えば、試薬による処理、可溶化、または
ポリヌクレオチド等の特定の成分の濃縮等により、それらの調達後にいずれかの方法で操
作された試料を包含する。「生物試料」という用語は、臨床試料を包含し、また、培養物
中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生物学的流体、および組織試料も包含す
る。場合によっては、生物試料はＢ細胞を含む。
本発明をさらに説明する前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されるも
のではなく、そのため、当然、変化し得ることを理解されたい。また、本発明の範囲は、
添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される専門用語は、
特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定的であることを意図しないこ
とも理解されたい。
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限値と下限値の間の各介在値（別途文脈が明
確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１まで）、ならびにその記載される範囲内
の任意の他の記載される値または介在値が本発明に包含されることを理解されたい。これ
らのより小さい範囲の上限値および下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよ
く、記載される範囲内の任意の具体的に除外された限度に従って本発明内にも包含される
。記載される範囲がそれらの限度のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含され
る限度のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた、本発明に包含される。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発
明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に
記載されるものと類似するかまたは同等の任意の方法および材料が、本発明の実施または
試験に用いられ得るが、好ましい方法および材料を次に記載する。本明細書に記載される
全ての刊行物は、その刊行物が引用されることに関連して方法および／または材料を開示
および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、
および「ｔｈｅ」は、文脈上、別途明確に指示されない限り、複数形の指示対象を含むこ
とに留意されたい。したがって、例えば、「抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」への言及
は、複数のそのような抗体を含み、「（ｔｈｅ）ＣＤＲ」への言及は、１つ以上のＣＤＲ
、および当該者に既知であるその均等物への言及を含む等である。さらに、特許請求の範
囲は、あらゆる任意選択的な要素を除外するように起草される場合があることに留意され
たい。そのため、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連して、「単独で」、「
のみ」等の排他的用語の使用、または「否定的」な限定の使用の先行詞としての役割を果
たすことが意図される。
本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日より前の開示についてのみ提供される
。本明細書中のいかなる記載も、本発明が、先行発明のために、そのような刊行物に先行
する権利を有しないことの許諾であると解釈されるべきではない。さらに、提供される公
開日は、実際の公開日とは異なる可能性があり、それらは個別に確認する必要があり得る
。
本開示は、ＣＤ２２に特異的な抗体を提供する。また、種々の治療、診断、および監視
用途に有用な抗体も提供される。
抗体
主題の抗体は、ＣＤ２２ポリペプチドに特異的に結合し、エピトープは、ＣＤ２２抗原
内のアミノ酸残基（例えば、図９Ａ〜Ｃに示されるＣＤ２２のアミノ酸配列のアミノ酸１
〜８４７内、アミノ酸１〜７５９内、アミノ酸１〜７５１、またはアミノ酸１〜６７０内
）を含む。
ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォーム４のアミノ
酸配列の約５００個のアミノ酸〜約６７０個のアミノ酸の連続的なストレッチに対して、
少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、
少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミ
ノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形成されてもよい。ＣＤ２２エピトープは
、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォーム３のアミノ酸配列の約５００個のア
ミノ酸〜約７５１個のアミノ酸の連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少
なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少
なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する
ポリペプチドによって形成されてもよい。ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示される
ヒトＣＤ２２アイソフォーム２のアミノ酸配列の約５００個のアミノ酸〜約７５９個のア
ミノ酸の連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少な
くとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少な
くとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形
成されてもよい。ＣＤ２２エピトープは、図９Ａ〜Ｃに示されるヒトＣＤ２２アイソフォ
ーム１のアミノ酸配列の約５００個のアミノ酸〜約８４７個のアミノ酸の連続的なストレ
ッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なく
とも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または
１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドによって形成されてもよい。
主題の抗体は、ＣＤ２２への高い親和性結合を示す。例えば、主題の抗体は、少なくと
も約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、少なくとも約１０
−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、もしくは少なくとも約１０−１２Ｍ、または１０
−１２Ｍを上回る親和性でＣＤ２２に結合する。主題の抗体は、ＣＤ２２上に存在するエ
ピトープに、約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍ、約１０−９Ｍ
〜約１０−１０Ｍ、約１０−１０Ｍ〜約１０−１１Ｍ、もしくは約１０−１１Ｍ〜約１０
−１２Ｍ、または１０−１２Ｍを上回る親和性で結合する。
本開示の抗ＣＤ２２抗体は、場合によっては、その細胞表面上にＣＤ２２を発現する細
胞においてアポトーシスを誘導することができる。
「ＣＤ２２抗原」または「ＣＤ２２ポリペプチド」は、図９Ａ〜Ｃに示されるＣＤ２２
アイソフォーム１、２、３、または４のアミノ酸配列の、約５００個のアミノ酸（ａａ）
から、約８４７個のａａ（アイソフォーム１）まで、約７５９個のａａ（アイソフォーム
２）まで、約７５１個のａａ（アイソフォーム３）まで、または約６７０個のａａ（アイ
ソフォーム４）までの連続的なストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約
８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約
９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる
。
「抗体」という用語は、エピトープに結合することが可能な１つ以上（例えば、１つも
しくは２つ）の重鎖可変領域（ＶＨ）および／または１つ以上（例えば、１つもしくは２
つ）の軽鎖可変領域（ＶＬ）、あるいはその細断片を含むタンパク質を指す。ＶＨおよび
ＶＬ領域は、「フレームワーク領域（ＦＲ）」と称される、より保存された領域が散在す
る「相補性決定領域（ＣＤＲ）」と称される超可変領域にさらに細分化することができる
。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は正確に画定されている（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９
１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏ
ｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ヒトＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．１９６：９０１−９１７を参照のこと）。ＶＨは、以下の順序でＮ末端からＣ末端に
配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含むことができる：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ
２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。同様に、ＶＬは、以下の順序でＮ末端からＣ
末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含むことができる：ＦＲ１、ＣＤＲ１
、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、重鎖定常領域または軽鎖定常領域の全部または一部をさ
らに含むことができ、それによって、それぞれ、重鎖または軽鎖免疫グロブリンを形成す
る。一実施形態において、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖の４量体であり、重鎖お
よび軽鎖は、例えば、ジスルフィド結合によって相互接続される。重鎖定常領域は、３つ
のドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイ
ンＣＬから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含
む。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の種々の細胞および補体系の第１の成分を含
む宿主の組織および因子への抗体の結合を媒介する。「抗体」という用語は、ＩｇＡ型、
ＩｇＧ型、ＩｇＥ型、ＩｇＤ型、ＩｇＭ型、およびそれらの亜型のインタクトな免疫グロ
ブリンを含む。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ＩｇＧアイソタイプである
。いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子
によって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。認識
されているヒト免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならび
に多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。全長免疫グロブリン軽鎖（約２５ｋＤま
たは２１４個のアミノ酸）は、Ｎ末端の可変領域遺伝子（約１１０個のアミノ酸）および
Ｃ末端のκまたはλ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン重鎖（約
５０ｋＤまたは４４６個のアミノ酸）は、Ｎ末端の可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ
酸）およびＣ末端の他の前述の定常領域遺伝子のうちの１つ、例えば、（約３３０個のア
ミノ酸をコードする）γによってコードされる。いくつかの実施形態において、主題の抗
体は、全長免疫グロブリン重鎖および全長免疫グロブリン軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、全長免疫グロブリン重鎖および全長免疫
グロブリン軽鎖を含まず、代わりに、全長免疫グロブリン重鎖および全長免疫グロブリン
軽鎖の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合断片は、別々のポリ
ペプチド鎖上に含まれており、他の実施形態において、抗原結合断片は、単一のポリペプ
チド鎖内に含まれる。「抗原結合断片」という用語は、上述のＣＤ２２に特異的に結合す
ることが可能な全長抗体の１つ以上の断片を指す。結合断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断
片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ
’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂ断片を含む
二価の断片）；（ｉｉｉ）（ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる）Ｆｄ断片；（
ｉｖ）（抗体の単一アームのＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる）Ｆｖ断片；（ｖ
）（ＶＨドメインからなる）ｄＡｂ断片；（ｖｉ）単離されたＣＤＲ；（ｖｉｉ）（ＶＨ
ドメインとＶＬドメインが対になって一価の分子を形成するような組換え手段を用いて、
合成リンカーによって結合される抗体の単一アームのＶＨドメインおよびＶＬドメインか
らなる）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）；（ｖｉｉｉ）（ＶＨドメインとＶＬドメインが、対に
ならないで一価の分子を形成するように結合し、ｓｃＦｖの各１つのＶＨが、他のｓｃＦ
ｖのＶＬドメインと対になって二価の分子を形成する、２つのｓｃＦｖからなる）ダイア
ボディ；（ｉｘ）（少なくとも２つの抗原結合領域からなり、各領域が異なるエピトープ
に結合している）二重特異性抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、主題の抗
体断片はＦａｂ断片である。いくつかの実施形態において、主題の抗体断片は一本鎖抗体
（ｓｃＦｖ）である。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、組換えまたは修飾抗体、例えば、キメラ
抗体、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体である。本明細書で
使用される「組換え」または「修飾」抗体という用語は、（ｉ）宿主細胞にトランスフェ
クトした組換え発現ベクターを用いて発現させる抗体；（ｉｉ）組換えコンビナトリアル
抗体ライブラリーから単離された抗体；（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリン遺伝子を遺伝子導
入した動物（例えば、マウス）から単離された抗体；または（ｉｖ）ヒト免疫グロブリン
遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む任意の他の手段によって調
製されたか、発現させたか、作製されたか、または単離された抗体等の、組換え手段によ
って調製されたか、発現させたか、作製されたか、または単離された全ての抗体を含むこ
とが意図される。そのような組換え抗体は、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、キメラ抗体、
脱免疫化抗体、およびｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体を含み、任意選択的に、ヒト生殖系列免
疫グロブリン配列に由来する定常領域を含むことができる。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶ
ＫＰＧＧＳＬＸ１ＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩ
ＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＸ２ＬＹＬＱＭＸ３ＳＬＲＡＥ
ＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１
）（Ｘ１は、Ｋ（Ｌｙｓ）またはＲ（Ａｒｇ）であり；Ｘ２は、Ｓ（Ｓｅｒ）またはＴ（
Ｔｈｒ）であり；Ｘ３は、Ｎ（Ａｓｎ）またはＳ（Ｓｅｒ）である）を有するＶＨ領域を
含む重鎖と、ｂ）免疫グロブリン軽鎖とを含む。
結果として得られる抗体がＣＤ２２に特異的に結合する限り、軽鎖は、任意の好適なＶ
Ｌアミノ酸配列を有することができる。
例示的なＶＬアミノ酸配列として、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ
ＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱ
ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１）、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ
ＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８；ＶＫ２）、お
よび
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ
ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９；ＶＫ４）が挙
げられる。
したがって、例えば、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１）に記載のアミノ酸配
列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ１のＶＬ領域を含む軽鎖とを含むことができる。
他の場合において、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１）に記載のアミノ酸配列
を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ２のＶＬ領域を含む軽鎖とを含むことができる。さ
らに他の場合において、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）配列番号１）に記載のアミノ酸配
列を有するＶＨ領域を含む重鎖と、ＶＫ４のＶＬ領域を含む軽鎖とを含むことができる。
場合によっては、主題の抗ＣＤ２２抗体は、ａ）アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＸ
１ＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＸ２ＫＬＬＩＹ
ＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＸ３ＥＤＦＡＴＹＦＣ
ＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）（Ｘ１は、Ｌ（Ｌｅｕ）または
Ｖ（Ｖａｌ）であり；Ｘ２は、Ｖ（Ｖａｌ）またはＰ（Ｐｒｏ）であり；Ｘ３は、Ｑ（Ｇ
ｌｎ）またはＰ（Ｐｒｏ）である）を含む免疫グロブリン軽鎖と、ｂ）免疫グロブリン重
鎖とを含む。重鎖は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹ
ＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳ （配列番号３；ＶＨ３）、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹ
ＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳ （配列番号４；ＶＨ４）、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹ
ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳ （配列番号５；ＶＨ５）、および
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹ
ＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳ（配列番号６；ＶＨ６）から選択されるアミノ酸配列を含むことができる。
主題の抗体を使用するのに好適なリンカーは、「可動性リンカー」を含む。存在する場
合、リンカー分子は、一般的に、結合された領域間のある程度の柔軟な動きを許容するの
に十分な長さである。リンカー分子は、一般的に、約６〜５０原子の長さである。またリ
ンカー分子は、例えば、アリールアセチレン、２〜１０単量体単位を含むエチレングリコ
ールオリゴマー、ジアミン、二酸、アミノ酸、またはそれらの組み合わせであってもよい
。ポリペプチドに結合することができる他のリンカー分子は、本開示を考慮して使用され
得る。
主題の抗体は、「ヒト化」抗体であってもよい。「ヒト化抗体」という用語は、実質的
にヒト抗体鎖に由来する可変領域フレームワーク残基（アクセプター免疫グロブリンまた
は抗体と称される）と、実質的にマウス抗体に由来する少なくとも１つのＣＤＲ（ドナー
免疫グロブリンまたは抗体と称される）とを含む少なくとも１つの鎖を含む抗体を指す。
Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１
００２９ １００３３（１９８９）、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，
５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、国際公開第ＷＯ９０／０７８６１
号、および米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。定常領域（複数可）は、存在
する場合、実質的にまたは完全に、ヒト免疫グロブリンにも由来し得る。ヒト化抗体の作
製方法は、当該技術分野で既知である。例えば、米国特許第７，２５６，２７３号を参照
のこと。
例えば、ヒト可変ドメインフレームワークが、ＣＤＲの起源であるマウス可変フレーム
ワークと同じかまたは同様の立体構造をとる場合、マウスＣＤＲをヒト可変ドメインフレ
ームワークに置換することにより、それらの正確な空間的配向を保持することができる。
これは、そのフレームワーク配列が、ＣＤＲが由来するマウス可変フレームワークドメイ
ンとの高度な配列同一性を示すヒト抗体からヒト可変ドメインを得ることによって達成す
ることができる。重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域は、同じかまたは異なるヒト抗
体配列に由来し得る。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であってもよいか
、またはいくつかのヒト抗体のコンセンサス配列であってもよい。Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏ
ｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３（１９９
１）；Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
６：９７１（１９９３）を参照のこと。
マウスドナー免疫グロブリンおよび適切なヒトアクセプター免疫グロブリンの相補性決
定領域を同定したら、次のステップは、結果として得られるヒト化抗体の特性を最適化す
るために、これらの成分のどの残基（存在する場合）を置換するべきかを決定することで
ある。一般に、マウス残基の導入は、ヒトにおいて抗体によるヒト抗マウス抗体（ＨＡＭ
Ａ）応答を誘発するリスクを増大させるため、マウスによるヒトアミノ酸残基の置換は最
小限に抑えられるべきである。当該技術分野で認識されている免疫応答を決定する方法は
、特定の患者においてまたは臨床試験の間にＨＡＭＡ応答を監視するために行うことがで
きる。ヒト化抗体を投与された患者には、前記治療薬の投与の開始時におよび全体を通し
て免疫原性の評価が行われてもよい。ＨＡＭＡ応答は、例えば、表面プラズモン共鳴技術
（ＢＩＡＣＯＲＥ）および／または固相ＥＬＩＳＡ分析を含む当業者に既知の方法を用い
て、患者由来の血清試料中でヒト化治療試薬に対する抗体を検出することによって測定さ
れる。多くの実施形態において、主題のヒト化抗体は、ヒト対象において実質的にＨＡＭ
Ａ応答を誘発しない。
ヒト可変領域フレームワーク残基からの特定のアミノ酸は、それらがＣＤＲ立体構造お
よび／または抗原への結合に及ぼすと考えられる影響に基づいて、置換のために選択され
る。ヒト可変フレームワーク領域を有するマウスＣＤＲ領域の不自然な並置は、不自然な
構造的な制約を生じる可能性があり、特定のアミノ酸残基の置換によって修正されない限
り、結合親和性の損失を引き起こす。
置換のためのアミノ酸残基の選択は、一部、コンピュータモデリングによって決定され
てもよい。免疫グロブリン分子の三次元画像を生成するためのコンピュータハードウェア
およびソフトウェアは、当該技術分野で既知である。一般に、分子モデルは、免疫グロブ
リン鎖またはそのドメインに関する解明済の構造から出発して生成される。モデル化され
る鎖は、アミノ酸配列類似性について解明済みの三次元構造の鎖またはドメインと比較さ
れ、最も高い配列類似性を示す鎖またはドメイン（単数または複数）が、分子モデルの構
築の出発点として選択される。少なくとも５０％の配列同一性を共有する鎖またはドメイ
ンが、モデリングのために選択され、好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、
９０％、またはそれ以上の配列同一性を共有する鎖またはドメインが、モデリングのため
に選択される。解明済みの出発構造は、モデル化されている免疫グロブリン鎖またはドメ
イン内の実際のアミノ酸と、出発構造内のアミノ酸との間の違いを許容するように修飾さ
れる。次いで、修飾された構造が、複合免疫グロブリンに組み立てられる。最後に、モデ
ルは、エネルギー最小化によって、また全ての原子が互いから適切な距離内にあること、
ならびに結合の長さおよび角度が化学的に許容される限度内にあることを検証することに
よって、精密化される。
ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７
ａｎｄ １９９１）によって定義される通りである。代替の構造の定義は、Ｃｈｏｔｈｉ
ａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）；Ｎａｔｕｒｅ
３４２：８７８（１９８９）；およびＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８
９）（集合的に「Ｃｈｏｔｈｉａ」と称される）によって提唱されている。上記Ｋａｂａ
ｔによって定義されるフレームワーク残基が、上記Ｃｈｏｔｈｉａによって定義されるよ
うな構造ループ残基を構成する場合、マウス抗体中に存在するアミノ酸が、ヒト化抗体へ
の置換のために選択されてもよい。「ＣＤＲ領域に隣接する」残基は、ヒト化免疫グロブ
リン鎖の一次配列内のＣＤＲのうちの１つ以上に直接隣接する位置、例えば、Ｋａｂａｔ
によって定義されるようなＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されるようなＣＤＲ
に直接隣接する位置にあるアミノ酸残基を含む（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅ
ｓｋ ＪＭＢ １９６：９０１（１９８７）を参照）。これらのアミノ酸は、ＣＤＲ内の
アミノ酸と相互作用する可能性が特に高く、アクセプターから選択された場合、ドナーＣ
ＤＲを歪め、親和性を低下させる。さらに、隣接するアミノ酸は、抗原と直接相互作用し
てもよく（Ａｍｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３：７４７（１９８６））、
ドナーからこれらのアミノ酸を選択することは、元の抗体において親和性を提供する全て
の抗原接触を維持するために望ましいかもしれない。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ｓｃＦｖ多量体を含む。例えば、いくつ
かの実施形態において、主題の抗体は、ｓｃＦｖ二量体（例えば、２つのタンデムｓｃＦ
ｖを含む（ｓｃＦｖ２））、ｓｃＦｖ三量体（例えば、３つのタンデムｓｃＦｖを含む（
ｓｃＦｖ３））、ｓｃＦｖ四両体（例えば、４つのタンデムｓｃＦｖを含む（ｓｃＦｖ４
））、または４つより多くのｓｃＦｖの多量体（例えば、タンデム）である。ｓｃＦｖ単
量体は、約２アミノ酸〜約１０アミノ酸長、例えば、２ａａ、３ａａ、４ａａ、５ａａ、
６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａの長さのリンカーを介して、タンデム
に結合することができる。好適なリンカーは、例えば、（Ｇｌｙ）ｘを含み、ｘは、２〜
１０の整数である。他の好適なリンカーは、上述したものである。いくつかの実施形態に
おいて、上述のように、主題のｓｃＦＶ多量体中のｓｃＦｖ単量体の各々がヒト化される
。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、免疫グロブリンの定常領域（例えば、Ｆ
ｃ領域）を含む。Ｆｃ領域は、存在する場合、ヒトＦｃ領域であってもよい。定常領域が
存在する場合、抗体は、軽鎖定常領域および重鎖定常領域の両方を含むことができる。好
適な重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含む。本明
細書に記載される抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む全種類の
定常領域と、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むあらゆるアイソタイ
プを有する抗体を含む。好適な重鎖Ｆｃ領域の例は、ヒトアイソタイプＩｇＧ１ Ｆｃで
ある。軽鎖定常領域は、λまたはκであり得る。主題の抗体（例えば、主題のヒト化抗体
）は、１つより多くのクラスまたはアイソタイプからの配列を含むことができる。抗体は
、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、
Ｆａｂ’ Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または軽鎖および軽鎖可変ドメインがス
ペーサーによって結合された一本鎖抗体として、発現させることができる。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、カルボキシル末端に遊離チオール（−Ｓ
Ｈ）基を含み、遊離チオール基は、抗体を第２のポリペプチド（例えば、主題の抗体を含
む別の抗体）、足場、担体等に付着させるために使用することができる。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、１つ以上の天然には存在しないアミノ酸
を含む。いくつかの実施形態において、天然にはコードされないアミノ酸は、カルボニル
基、アセチル基、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、セミカルバジド基、ア
ジド基、またはアルキン基を含む。好適な天然には存在しないアミノ酸については、例え
ば、米国特許第７，６３２，９２４号を参照のこと。天然には存在しないアミノ酸の包含
により、ポリマー、第２のポリペプチド、足場等への結合を提供することができる。例え
ば、水溶性ポリマーに結合された主題の抗体は、カルボニル基を含む水溶性ポリマー（例
えば、ＰＥＧ）を、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジド、またはセミカルバジド基を
含む天然にはコードされないアミノ酸を含む主題の抗体と反応させることにより作製する
ことができる。別の例として、水溶性ポリマーに結合された主題の抗体は、アルキン含有
アミノ酸を含む主題の抗体を、アジド部分を含む水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）と反
応させることにより作製することができる：いくつかの実施形態において、アジドまたは
アルキン基は、アミド結合を介してＰＥＧ分子と結合される。「天然にはコードされない
アミノ酸」は、２０の共通アミノ酸のうちの１つまたはピロリジンまたはセレノシステイ
ンではないアミノ酸を指す。「天然にはコードされないアミノ酸」と同義に用いられ得る
他の用語は、「天然ではないアミノ酸」、「非天然のアミノ酸」、「天然には存在しない
アミノ酸」、およびそれらの様々なハイフン付およびハイフンの付かない型である。「天
然にはコードされないアミノ酸」という用語は、天然にコードされたアミノ酸（２０の共
通アミノ酸またはピロリジンおよびセレノシステインを含むが、これらに限定されない）
の修飾（例えば、翻訳後修飾）によって生じるが、それら自体は、成長中のポリペプチド
鎖内に翻訳複合体によって天然の状態では組み込まれないアミノ酸も含むが、これらに限
定されない。そのような天然には存在しないアミノ酸の例として、限定されないが、Ｎ−
アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−スレオニン、
およびＯ−ホスホチロシンが挙げられる。
本開示はまた、対象となる付着部分、例えば、検出可能な標識、薬物、半減期延長部分
等を有する抗ＣＤ２２抗体も提供する。抗体の修飾は、様々な合成および／または組換え
方法によって達成することができる。抗体に付着する部分（単数または複数）は、多様な
機能または特徴おのうちの１つ以上を提供することができる。例示的な部分として、検出
可能な標識（例えば、色素標識（例えば、発色団、フルオロフォア）、生物物理学的プロ
ーブ（スピン標識、核磁気共鳴（ＮＭＲ）プローブ）、フェルスター共鳴エネルギー移動
（ＦＲＥＴ）型標識（例えば、フルオロフォア／消光剤対の少なくとも１つのメンバーを
含むＦＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ
）型標識（例えば、ＢＲＥＴ対の少なくとも１つのメンバー）、免疫検出可能なタグ（例
えば、ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ（６）等）；水溶性ポリマー（例えば、ペグ化）；精製用タグ（
例えば、アフィニティークロマトグラフィーによる単離を促進するため（例えば、ＦＬＡ
Ｇ エピトープの付着；膜局在化ドメイン（例えば、脂質またはグリコシルホスファチジ
ルイノシトール（ＧＰＩ）−型アンカー）；固定用タグ（例えば、選択可能な付着を含む
、ポリペプチドの表面への付着を促進するため）；薬物（例えば、例えば、薬物の抗体へ
の付着による、薬物標的化を促進するため）等が挙げられる。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ポリマー（例えば、ポリペプチド以外の
ポリマー）に結合される（例えば、共有結合）。好適なポリマーは、例えば、生体適合性
ポリマー、および水溶性生体適合性ポリマーを含む。好適なポリマーは、合成ポリマーお
よび天然に存在するポリマーを含む。好適なポリマーは、例えば、置換もしくは非置換の
直鎖もしくは分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、もしくはポリオキシアルキレ
ンポリマー、または分岐もしくは非分岐の多糖類、例えば、ホモもしくはヘテロ多糖を含
む。好適なポリマーは、例えば、エチレンビニルアルコールコポリマー（一般には、一般
名ＥＶＯＨまたは商品名ＥＶＡＬによって知られる）；ポリブチルメタクリレート；ポリ
（ヒドロキシバレレート）；ポリ（Ｌ−乳酸）；ポリカプロラクトン；ポリ（ラクチ°−
ｃｏ−グリコリド）；ポリ（ヒドロキシブチレート）；ポリ（ヒドロキシブチレート−ｃ
ｏ−バレレート）；ポリジオキサノン；ポリオルトエステル；ポリ酸無水物；ポリ（グリ
コール酸）；ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）；ポリ（グリコール酸−ｃｏ−トリメチレンカーボネ
ート）；ポリホスホエステル；ポリホスホエステルウレタン；ポリ（アミノ酸）；シアノ
アクリレート；ポリ（トリメチレンカーボネート）；ポリ（イミノカーボネート）；コポ
リ（エーテル−エステル）（例えば、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）（ＰＥＯ
／ＰＬＡ）コポリマー）；ポリアルキレンオキサレート；ポリホスファゼン；生体分子、
例えば、フィブリン、フィブリノゲン、セルロース、デンプン、コラーゲンおよびヒアル
ロン酸；ポリウレタン；ケイ素；ポリエステル；ポリオレフィン；ポリイソブチレンおよ
びエチレン−αオレフィンコポリマー；アクリルポリマーおよびコポリマー；ハロゲン化
ビニルポリマーおよびコポリマー、例えば、塩化ポリビニル；ポリビニルエーテル、例え
ば、ポリビニルメチルエーテル；ハロゲン化ポリビニリデン、例えば、フッ化ポリビニリ
デンおよび塩化ポリビニリデン；ポリアクリロニトリル；ポリビニルケトン；ポリビニル
芳香族、例えばポリスチレン；ポリビニルエステル、例えば、ポリ酢酸ビニル；ビニル単
量体同士のコポリマーおよびオレフィンとのコポリマー、例えば、エチレン−メチルメタ
クリレートコポリマー、アクリロニトリル−スチレンコポリマー、ＡＢＳ樹脂、およびエ
チレン−酢酸ビニルコポリマー；ポリアミド、例えば、Ｎｙｌｏｎ ６６およびポリカプ
ロラクタム；アルキド樹脂；ポリカーボネート；ポリオキシメチレン；ポリイミド；ポリ
エーテル；エポキシ樹脂；ポリウレタン；レーヨン；レーヨン−トリアセテート；セルロ
ース；酢酸セルロース；酪酸セルロース；酢酸酪酸セルロース；セロファン；硝酸セルロ
ース；プロピオン酸セルロース；セルロースエーテル；アモルファスＴｅｆｌｏｎ；ポリ
（エチレングリコール）；およびカルボキシメチルセルロースを含む。
好適な合成ポリマーは、非置換および置換の直鎖または分岐鎖ポリ（エチレングリコー
ル）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）、およびそれらの誘導体
、例えば、置換ポリ（エチレングリコール）、例えば、メトキシポリ（エチレングリコー
ル）、およびそれらの誘導体を含む。好適な天然に存在するポリマーは、例えば、アルブ
ミン、アミロース、デキストラン、グリコーゲンおよびそれらの誘導体を含む。
好適なポリマーは、５００Ｄａ〜５００００Ｄａ、例えば、５０００Ｄａ〜４００００
Ｄａ、または２５０００〜４００００Ｄａの範囲の平均分子量を有することができる。例
えば、いくつかの実施形態において、主題の抗体が、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥ
Ｇ）またはメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーを含む場合、ＰＥＧまたはメト
キシポリ（エチレングリコール）ポリマーは、約０．５キロダルトン（ｋＤａ）〜１ｋＤ
ａの範囲、約１ｋＤａ〜５ｋＤａ、５ｋＤａ〜１０ｋＤａ、１０ｋＤａ〜２５ｋＤａ、２
５ｋＤａ〜４０ｋＤａ、または４０ｋＤａ〜６０ｋＤａの範囲の分子量を有することがで
きる。
上述のように、いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ＰＥＧポリマーに共有結
合される。いくつかの実施形態において、主題のｓｃＦｖ多量体は、ＰＥＧポリマーに共
有結合される。タンパク質のペグ化に好適な方法および試薬は、当該技術分野で周知であ
り、例えば、米国特許第５，８４９，８６０号に見出だすことができる。タンパク質との
コンジュゲーションに好適なＰＥＧは、一般的に、室温で水溶性であり、一般式Ｒ（Ｏ−
ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒを有し、式中、Ｒは、水素、または、例えば、アルキルもしく
はアルカノール基等の保護基であり、ｎは、１〜１０００の整数である。Ｒは、保護基で
あり、一般的に１〜８個の炭素を有する。
主題の抗体にコンジュゲートされるＰＥＧは、直鎖である。主題のタンパク質にコンジ
ュゲートされるＰＥＧは、分岐鎖であってもよい。米国特許第５，６４３，５７５号に記
載されるような分岐鎖ＰＥＧ誘導体、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， Ｉｎ
ｃ．のカタログ「ポリエチレン Ｇｌｙｃｏｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ １９９７−１
９９８」に記載されるような「星形ＰＥＧ」および多アームＰＥＧ。星形ＰＥＧは、技術
分野に記載されている（例えば、米国特許第６，０４６，３０５号を含む）。
主題の抗体は、グリコシル化することができ、例えば、主題の抗体は、共有結合された
炭水化物または多糖部分を含むことができる。抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ結合
型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部
分の付着を指す。Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である、トリペプチド配列アスパラ
ギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化
物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリ
ペプチド配列のうちのいずれかの存在が、潜在的なグリコシル化部位を作成する。Ｏ結合
型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの、
Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースといった糖類のうちの１
つの付着を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも用いられ得る
。グリコシル化は、例えば、所望のグリコシル化機構を有する宿主細胞における組換え生
成によって、達成することができる。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、上記トリペプチド配列のうちの１つ以上を含むよ
うにアミノ酸配列を改変することにより、都合よく達成される（Ｎ結合型グリコシル化部
位の場合）。改変はまた、元の抗体の配列に対する１つ以上のセリンまたはスレオニン残
基の付加または置換によってなされてもよい（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。同様
に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然グリコシル化部位内のアミノ酸改変によって
達成されてもよい。
主題の抗体は、例えば、グルタルアルデヒド、ホモ二官能性架橋剤、またはヘテロ二官能
性架橋剤を用いて、第２の部分（例えば、脂質、主題の抗体以外のポリペプチド、合成ポ
リマー、炭水化物等）に共有結合することができる。グルタルアルデヒドは、それらのア
ミノ部分を介してポリペプチドに架橋する。ホモ二官能性架橋剤（例えば、ホモ二官能性
イミドエステル、ホモ二官能性Ｎ−ヒドロキシサクシニミジル（ＮＨＳ）エステル、また
はホモ二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤）は、２つ以上の反応性部分を含み、結合さ
れるポリペプチドの混合物を含む溶液に架橋剤が添加される一段階反応に用いることがで
きる。ホモ二官能性ＮＨＳエステルおよびイミドエステルは、アミノ含有ポリペプチドを
架橋する。穏かなアルカリ性のｐＨでは、イミドエステルが１級アミンのみと反応してイ
ミドアミドを形成し、架橋されたポリペプチドの全体的な電荷は影響を受けない。ホモ二
官能性スルフヒドリル反応性架橋剤は、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、１，５−ジ
フルオロ−２，４−ジニトロベンゼン（ＤＦＤＮＢ）、および１，４−ジ−（３’，２’
−ピリジルジチオ）プロピオンアミドブタン（ＤＰＤＰＢ）を含む。
ヘテロ二官能性架橋剤は、２つ以上の異なる反応性部分（例えば、アミン反応性部分お
よびスルフヒドリル反応性部分）を有し、アミンまたはスルフヒドリル反応性部分を介し
てポリペプチドのうちの一方に架橋され、次いで、未反応部分を介して他のポリペプチド
と反応させる。ピリジルジスルフィド架橋剤等の複数のヘテロ二官能性ハロアセチル架橋
剤が利用可能である。カルボジイミドは、カルボキシルをアミンとカップリングさせてア
ミド結合をもたらす、ヘテロ二官能性架橋試薬の古典的な例である。
主題の抗体は、固体支持体に固定化することができる。好適な支持体は、当該技術分野
で周知であり、とりわけ、市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、
磁気ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはケイ素のチップおよび表面、ニト
ロセルロースストリップ、ナイロン膜、シート、デュラサイト、反応トレーのウェル（例
えば、マルチウェルプレート）、プラスチックチューブ等を含む。固体支持体は、例えば
、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボ
ネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然および改質セルロース、ポリアクリ
ルアミド、アガロース、およびマグネタイトを含む、様々な物質のいずれを含んでもよい
。主題の抗体を固体支持体に固定化するための好適な方法は周知であり、イオン性、疎水
性、共有結合性の相互作用等を含むが、これらに限定されない。固体支持体は、例えば、
水溶液中で可溶性または不溶性であってもよい。いくつかの実施形態において、好適な固
体支持体は、一般的に水溶液中で不溶性である。
主題の抗体は、いくつかの実施形態において、検出可能な標識を含むことができる。好
適な検出可能な標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、
または化学的手段によって検出可能なあらゆる組成物を含む。好適な標識は、磁気ビーズ
（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオ
シアナート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、
黄色蛍光タンパク質等）、放射標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または
３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシ
フェラーゼ、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）で一般的に使用される他の酵
素）、コロイド金または色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロ
ピレン、ラテックス等）ビーズ等の比色標識を含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、造影剤または放射性同位体を含み、造影
剤または放射性同位体は、例えば、撮像において、例えば、ヒトに対して実行される撮像
手順において、検出可能な標識として使用するのに好適なものである。標識の非限定的な
例として、１２３１Ｉ（ヨウ素）、１８Ｆ（フッ素）、９９Ｔｃ（テクネチウム）、１１
１Ｉｎ（インジウム）、および６７Ｇａ（ガリウム）等の放射性同位体、ならびに、ガド
リニウム（Ｇｄ）、ジスプロシウム、および鉄等の造影剤が挙げられる。放射性Ｇｄ同位
体（１５３Ｇｄ）も利用可能であり、非ヒト哺乳動物における撮像手順に好適である。
主題の抗体は、標準的な技術を用いて標識することができる。例えば、主題の抗体は、
クロラミンＴまたは１，３，４，６−テトラクロロ−３α，６α−ジフェニルグリコルリ
ルを用いてヨウ素化することができる。フッ素付加のために、フッ化物イオン変位反応に
よる合成中にフッ素を主題の抗体に加える。そのような放射性同位体を有するタンパク質
の合成の検討については、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｇａｒｔｎｅｒ，Ｈ．，ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．，
１６：１２２−１３０（１９９８）およびＳａｊｉ，Ｈ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ
．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．，１６（２）：２０９−２４４（１９９９）を
参照のこと。主題の抗体はまた、標準的な技術によって造影剤で標識することもできる。
例えば、主題の抗体は、Ｇｄジエチレントリアミン五酢酸（ＧｄＤＴＰＡ）またはＧｄテ
トラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ＧｄＤＯＴＡ）等の低分子Ｇｄキレートを抗体にコ
ンジュゲートすることによりＧｄで標識することができる。Ｃａｒａｖａｎ ｅｔ ａｌ
．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９：２２９３−２３５２（１９９９）およびＬａｕｆｆｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇｉｎｇ，３：１１−１６（１９８５
）を参照のこと。主題の抗体は、例えば、ポリリジン−Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲ
ートすることによりＧｄで標識することができる。例えば、Ｃｕｒｔｅｔ ｅｔ ａｌ．
，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３３（１０）：７５２−７６１（１９９８）を参照の
こと。代替として、主題の抗体は、Ｇｄキレート剤脂質を含む常磁性の重合リポソームを
アビジンおよびビオチン化抗体とともにインキュベートすることによりＧｄで標識するこ
とができる。例えば、Ｓｉｐｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．，４：６
２３−６２６（１９９８）を参照のこと。
主題の抗体に結合することができる適切な蛍光タンパク質は、限定されないが、例えば
、米国特許第６，０６６，４７６号、同第６，０２０，１９２号、同第５，９８５，５７
７号、同第５，９７６，７９６号、同第５，９６８，７５０号、同第５，９６８，７３８
号、同第５，９５８，７１３号、同第５，９１９，４４５号、同第５，８７４，３０４号
に記載されるオワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質またはその変異体または誘導体；例
えば、改良型ＧＦＰ（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から市販されている多くのそ
のようなＧＦＰ）；赤色蛍光タンパク質；黄色蛍光タンパク質；例えば、Ｍａｔｚ ｅｔ
ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：９６９−９７３に記
載される花虫類種に由来する様々な蛍光タンパク質および有色タンパク質のいずれか等を
含む。
主題の抗体は、いくつかの実施形態において、「放射線不透過性」標識、例えば、Ｘ線
を用いて容易に可視化することができる標識を含む。放射線不透過性物質は、当業者に周
知である。最も一般的な放射線不透過性物質は、限定されないが、ヨウ化物、臭化物、ま
たはバリウム塩を含む。他の放射線不透過性物質も既知であり、有機ビスマス誘導体（例
えば、米国特許第５，９３９，０４５号を参照）、放射線不透過性マルチウレタン（米国
特許第５，３４６，９８１号を参照）、有機ビスマス複合材料（例えば、米国特許第５，
２５６，３３４号を参照）、放射線不透過性バリウム多量体複合体（例えば、米国特許第
４，８６６，１３２号を参照）等を含む。
主題の抗体を、いくつかの実施形態において、融合パートナー、例えば、リガンド；エ
ピトープタグ；ペプチド；および抗体以外のタンパク質等に結合（例えば、共有結合また
は非共有結合）させる。好適な融合パートナーは、ｉｎ ｖｉｖｏでの安定性の強化（例
えば、血清半減期の増加）を付与する；精製の容易さ等を提供する；細胞からの融合タン
パク質の分泌を提供する；エピトープタグ、例えば、（Ｈｉｓ）ｎ、例えば、６Ｈｉｓ等
を提供する；細胞からの融合タンパク質の分泌を提供する；エピトープタグ、例えば、Ｇ
ＳＴ、ヘマグルチニン（ＨＡ；例えば、ＣＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号１０）、ＦＬＡ
Ｇ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ；配列番号１１）、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＣＥＱＫＬＩＳ
ＥＥＤＬ；配列番号１２）等を提供する；検出可能なシグナル、例えば、検出可能な生成
物を産生する酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ）、またはそれ自体
が検出可能なタンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光
タンパク質等を提供する；多量体化、例えば、免疫グロブリンのＦｃ部等の多量体ドメイ
ン等を提供する、ペプチドおよびポリペプチドを含む。
融合はまた、例えば、同定または精製に有用な、固体支持体に固定化されたもの等の、
結合パートナーと相互作用することができるペプチド配列を含む親和性ドメインも含むこ
とができる。ヒスチジン等の連続した単一アミノ酸は、タンパク質と融合させると、ニッ
ケルセファロース等の樹脂カラムへの高い親和性結合によって、融合タンパク質の一段階
精製に用いることができる。親和性ドメインの例として、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列
番号１３）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号１４）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳ
ＥＥＤＬ）（配列番号１５）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号１６）、Ｓｔｒ
ｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号１７）、赤血球凝集素、例えば、ＨＡタグ（
ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ；配列番号１８）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ
）、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号１９）、Ｐｈｅ−
Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号２０）、キチン結合ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペ
プチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配
列番号２１）、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメイン、または、例えば、カルシ
ウム結合タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミ
オシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビジニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、
ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タ
ンパク質、パルブアルブミン、カルビンジンＤ９Ｋ、カルビンジンＤ２８Ｋ、およびカル
レチニン、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、ロイシンジッパー配
列、ならびにマルトース結合タンパク質に由来するドメイン等のカルシウム結合ドメイン
が挙げられる挙げられる。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、ポリアミン修飾を含む。主題の抗体は、
天然に存在するかまたは合成であるポリアミンで修飾することができる。例えば、米国特
許第５，６７０，４７７号を参照のこと。有用な天然に存在するポリアミンは、プトレシ
ン、スペルミジン、スペルミン、１，３−ジアミノプロパン、ノルスペルミジン、合成ホ
モスペルミジン、テルミン、テルモスペルミン、カルドペンタミン、ホモカルドペンタミ
ン、およびカナバルミンを含む。プトレシン、スペルミジン、およびスペルミンは、特に
有用である。合成ポリアミンは、実験式ＣＸＨＹＮＺで構成され、１〜６個のＮＲ部分ま
たはＮ（Ｒ）２部分（式中、Ｒは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、フェニル、またはまた
はベンジルである）をさらに含む、環式または非環式の、分枝または非分枝の３〜１２炭
素原子の炭化水素鎖であり得る。ポリアミンは、任意の標準的な架橋法を用いて抗体に結
合させることができる。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、炭水化物部分を含むように修飾され、炭
水化物部分は、抗体に共有結合することができる。いくつかの実施形態において、主題の
抗体は、脂質部分を含むように修飾され、脂質部分は、抗体に共有結合することができる
。好適な脂質部分は、例えば、Ｎ−ラウロイル、Ｎ−オレオイル等のＮ−脂肪族アシル基
；ドデシルアミン、オレオイルアミン等の脂肪族アミン；Ｃ３〜Ｃ１６長鎖の脂肪族脂質
等を含む。例えば、米国特許第６，６３８，５１３を参照のこと。いくつかの実施形態に
おいて、主題の抗体は、リポソームに組み込まれる。
本開示の抗ＣＤ２２抗体が共有結合された異種部分を含む場合、異種部分を直接的にま
たはリンカーを介して抗ＣＤ２２の重鎖および／または軽鎖に結合することができる。好
適なリンカーは容易に選択することができ、１アミノ酸長（例えば、Ｇｌｙ）〜２０アミ
ノ酸長、２アミノ酸長〜１５アミノ酸長、３アミノ酸長〜１２アミノ酸長（４アミノ酸長
〜１０アミノ酸長、５アミノ酸長〜９アミノ酸長、６アミノ酸長〜８アミノ酸長、または
７アミノ酸長〜８アミノ酸長を含む）等の任意の好適な異なる長さであってもよく、１、
２、３、４、５、６、または７アミノ酸長であってもよい。
可動性リンカーの例として、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（
例えば、（ＧＳ）ｎ、ＧＳＧＧＳｎ（配列番号２２）、およびＧＧＧＳｎ（配列番号２３
）を含み、式中、ｎは、少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、ア
ラニン−セリンポリマー、および当該分野で既知の他の可動性リンカーが挙げられる。グ
リシンおよびグリシン−セリンポリマーは、これらのアミノ酸のどちらも比較的構造化さ
れておらず、したがって成分間の中立的なテザーとしての役割を果たし得るため、興味深
い。グリシンポリマーは、グリシンが、アラニンよりも有意に大きなΦ‐Ψ空間に到達し
、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ないため、特に興味深い（Ｓｃｈｅ
ｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９
９２）を参照のこと）。例示的な可動性リンカーとして、限定されないが、ＧＧＳＧ（配
列番号２４）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２５）、ＧＳＧＳＧ（配列番号２６）、ＧＳＧＧＧ
（配列番号２７）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２８）、ＧＳＳＳＧ（配列番号２９）等が挙げ
られる。当業者は、上述の任意の要素にコンジュゲートしたポリペプチドの設計が、全て
または部分的に可動性であるリンカーを含むことができ、そのため、リンカーが、可動性
リンカーだけでなく、可動性の低い構造を付与する１つ以上の部分も含むことができるこ
とを認識するであろう。
抗体の修飾のための方法
抗体は、様々な方法のいずれかの使用により、共有結合的に付着した異種部分（例えば
、検出可能な標識、薬物等）を有するように修飾することができる。本開示は、対象とな
る部分にコンジュゲートされた抗ＣＤ２２抗体を提供し、対象となる部分にコンジュゲー
トされた抗ＣＤ２２抗体は、「抗ＣＤ２２抗体コンジュゲート」と称される。本開示の抗
ＣＤ２２ 抗体コンジュゲートは、１）対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ重鎖
定常領域、および対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ軽鎖定常領域；２） 対象
となる部分にコンジュゲートされたＩｇ重鎖定常領域、および対象となる部分にコンジュ
ゲートされていないＩｇ軽鎖定常領域、または３）対象となる部分にコンジュゲートされ
ていないＩｇ重鎖定常領域、および対象となる部分にコンジュゲートされたＩｇ軽鎖定常
領域を含む。主題の抗ＣＤ２２抗体コンジュゲートは、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン
も含むことができる。
一例において、抗体は、異種部分の付着のための化学ハンドルとして機能することがで
きる２−ホルミルグリシン残基を含むように修飾することができる。例えば、本開示の抗
ＣＤ２２の重鎖および／または軽鎖定常領域は、２−ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ
）の作用によって２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）を含むように変換されることが可能
な、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含むように修飾することができる。そのよ
うなスルファターゼモチーフはまた、本明細書においてＦＧＥ修飾部位と称されてもよい
。ＦＧＥが免疫グロブリンポリペプチド内に位置するスルファターゼモチーフとして作用
するという点において、ＦＧＥの作用は、配列特異的な様式で誘導される。対象となる部
分は、タグ化Ｉｇポリペプチドの変換されたアルデヒドタグのＦＧｌｙ残基のアルデヒド
との反応のための反応パートナーの構成要素として提供される。対象となる部分の、アル
デヒドタグ化ＩｇポリペプチドのＦＧｌｙ残基への付着を達成するために、多様な市販の
試薬を使用することができる。例えば、多数の対象となる部分のアミノオキシ、ヒドラジ
ン、またはチオセミカルバジド誘導体が、好適な反応パートナーであり、容易に利用可能
であるか、または標準的な化学的方法を用いて作製することができる。
例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分をタグ化Ｉｇポリペプチドに付着
させるために、標準プロトコルを用いて、モノアミノ−ＰＥＧおよびアミノオキシグリシ
ンからアミノオキシ−ＰＥＧ を作製することができる。次いで、アミノオキシ−ＰＥＧ
を変換された（例えば、ＦＧｌｙ修飾）アルデヒドタグ化Ｉｇポリペプチドと反応させて
、ＰＥＧ部分の付着を提供することができる。変換されたアルデヒドタグ化ポリペプチド
へのビオチン部分の送達は、アミノオキシビオチン、ビオチンヒドラジド、または２，４
ジニトロフェニルヒドラジンを用いて達成することができる。
アルデヒドタグの最小スルファターゼモチーフは、通常、５または６アミノ酸残基長で
あり、通常、６アミノ酸残基長以下である。Ｉｇポリペプチド中に提供されるスルファタ
ーゼモチーフは、１６，１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７アミノ
酸残基長未満のスルファターゼモチーフを定義するために、少なくとも５または６アミノ
酸残基であり、例えば、５〜１６、６〜１６、５〜１５、６〜１５、５〜１４、６〜１４
、５〜１３、６〜１３、５〜１２、６〜１２、５〜１１、６〜１１、５〜１０、６〜１０
、５〜９、６〜９、５〜８、または６〜８アミノ酸残基長であってもよい。特定の実施形
態において、用いられるスルファターゼモチーフは、以下の式によって説明することがで
きる：
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３ （Ｉ）
式中、
Ｚ１は、システインまたはセリンであり（（Ｃ／Ｓ）によっても表すことができる）；
Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり（（Ｐ／Ａ）によっても表すこ
とができる）；
Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、かつリジン（Ｋ）もしく
はヒスチジン（Ｈ）であってもよく、通常はリジンである）、または脂肪族アミノ酸（ア
ラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、
もしくはプロリン（Ｐ）、通常、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、もしくはＩであり；
Ｘ１は、存在するかまたは存在せず、存在する場合は任意のアミノ酸であってもよいが
、通常、脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性の非荷電アミノ酸（すなわち、
芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）であり、通常、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＳまたはＴ、より
一般的にはＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであるが、但し、スルファターゼモチーフが標的ポリペ
プチドのＮ末端にある場合はＸ１が存在し、
Ｘ２およびＸ３は、独立して任意のアミノ酸であってもよいが、通常、脂肪族アミノ酸
、極性の非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷
電アミノ酸以外）であり、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣ、例えば、Ｓ、Ｔ、Ａ、
ＶまたはＧである。一例において、アルデヒドタグは、式Ｌ（Ｃ／Ｓ）ＴＰＳＲ（配列番
号３０）、例えば、ＬＣＴＰＳＲ（配列番号３１）またはＬＳＴＰＳＲ（配列番号３２）
のタグである。したがって、本開示は、アルデヒドタグ化Ｉｇ重鎖および／またはアルデ
ヒドタグ化Ｉｇ軽鎖を含む抗体を提供し、アルデヒドタグ化Ｉｇ抗体は、そのようなスル
ファターゼモチーフを含む重鎖および／または軽鎖のＩｇ定常領域のアミノ酸配列を含む
。
一般に、標的ポリペプチドのアルデヒドタグのスルファターゼモチーフ中のシステイン
またはセリンのＦＧｌｙへの変換を促進するために用いられるＦＧＥは、アルデヒドタグ
に存在するスルファターゼモチーフに応じて選択される。ＦＧＥは、アルデヒドタグ化ポ
リペプチドが発現される宿主細胞に固有であってもよいか、または宿主細胞を遺伝子操作
して適切なＦＧＥを発現させてもよい。いくつかの実施形態において、ヒトＦＧＥに適合
性のスルファターゼモチーフを使用して、ＦＧＥを発現するヒト細胞または宿主細胞（通
常、ヒトＦＧＥを発現するように遺伝子操作された哺乳類細胞）でアルデヒドタグ化タン
パク質を発現させることが望ましい場合もある。一般に、ＦＧｌｙ修飾抗体の作製に使用
するのに好適なＦＧＥは、天然に存在する源から得られてもよいか、または合成的に生成
されてもよい。例えば、適切なＦＧＥは、ＦＧＥを天然に産生するか、またはＦＧＥをコ
ードする組換え遺伝子を発現するように遺伝子操作された生物学的源から得ることができ
る。多数のＦＧＥをコードする核酸が、当該技術分野で既知であり、手軽である。
ＦＧＥがスルファターゼモチーフに作用すると、Ｚ１が酸化されて２−ホルミルグリシ
ン（ＦＧｌｙ）残基を生成する。さらに、ＦＧＥが媒介する変換、および対象となる部分
を含む反応パートナーとの反応の両方に続いて、上述の式のＺ１に位置するＦＧｌｙが対
象となる部分（例えば、検出可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチド、薬物等）に共
有結合される。したがって、本開示は、ＦＧｌｙ部分を含むように修飾された抗ＣＤ２２
抗体を提供し、抗ＣＤ２２抗体は、以下の式のＦＧｌｙ変換スルファターゼモチーフを含
む：
Ｘ１（ＦＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３
式中、
Ｘ１は、存在するかまたは存在せず、存在する場合は任意のアミノ酸であるが、但し、
スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ末端にある場合はＸ１が存在し、
Ｘ２およびＸ３は、各々、独立して任意のアミノ酸であり、
Ｚ３は、塩基性アミノ酸であり、
ＦＧｌｙ修飾抗ＣＤ２２抗体は、折り畳まれた状態にある場合、溶媒接触可能表面上の
ＦＧｌｙ基を表す。いくつかの実施形態において、ＦＧｌｙ変換スルファターゼモチーフ
は、式Ｌ（ＦＧｌｙ）ＴＰＳＲ（配列番号３３）のモチーフである。
上述のように、ＦＧｌｙ 部分を含むように修飾された主題の抗ＣＤ２２抗体は、ＦＧ
ｌｙ 部分を介して抗ＣＤ２２抗体に共有結合された対象となる異種部分（例えば、検出
可能な標識、水溶性ポリマー、ポリペプチド、薬物等）を含むようにさらに修飾すること
ができる。したがって、本開示は、抗ＣＤ２２抗体コンジュゲート（本明細書において「
抗ＣＤ２２コンジュゲート」とも称される）を提供し、抗ＣＤ２２コンジュゲートは、以
下の式を含む：
Ｘ１（ＦＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３ （Ｉ’）
式中、
ＦＧｌｙ’は、共有結合的に付着した部分を有する２−ホルミルグリシン残基であり、
Ｚ２は、プロリンまたはアラニン残基のいずれかであり（（Ｐ／Ａ）によっても表すこ
とができる）；Ｚ３は、塩基性アミノ酸（例えば、アルギニン（Ｒ）であり、かつリジン
（Ｋ）もしくはヒスチジン（Ｈ）であってもよく、通常はリジンである）、または脂肪族
アミノ酸（アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、イソロイ
シン（Ｉ）、もしくはプロリン（Ｐ）、通常、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、もしくはＩであり；
Ｘ１は、存在してもまたは存在しなくてもよく、存在する場合は任意のアミノ酸であっ
てもよいが、通常、脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性の非荷電アミノ酸（
すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）であり、通常、Ｌ、Ｍ、Ｖ、Ｓまた
はＴ、より一般的にはＬ、Ｍ、またはＶであるが、但し、スルファターゼモチーフが標的
ポリペプチドのＮ末端にある場合はＸ１が存在し、
Ｘ２およびＸ３は、独立して任意のアミノ酸であってもよいが、通常、脂肪族アミノ酸
、硫黄含有アミノ酸、または極性の非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷
電アミノ酸以外）であり、通常、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｖ、ＧまたはＣであり、より一般的にはＳ
、Ｔ、Ａ、ＶまたはＧである。いくつかの実施形態において、モチーフは、式Ｌ（ＦＧｌ
ｙ’）ＴＰＳＲ（配列番号３４）のモチーフである。
薬物
場合によっては、本開示の抗ＣＤ２２抗体は、抗体の重鎖および／または軽鎖に共有結
合された薬物を含む。「薬物」は、低分子薬、ペプチド薬、毒素（例えば、細胞毒）等を
含む。
本明細書で使用される「低分子薬」は、化合物、例えば、対象となる薬学的活性を示し
、一般的に、約８００Ｄａ以下、または２０００Ｄａ以下の分子量であるが、最大５ｋＤ
ａまでの分子を包含してもよく、約１０ｋＤａまでの大きさであってもよい、有機化合物
を指す。小さい無機分子は、炭素原子を含まない分子を指し、小さい有機分子は、少なく
とも１つの炭素原子を含む化合物を指す。
本明細書で使用される「ペプチド薬」は、アミノ酸含有ポリマー化合物を指し、天然に
存在するおよび天然には存在しないペプチド、オリゴペプチド、環状ペプチド、ポリペプ
チド、およびタンパク質、ならびにペプチド模倣物を包含することを意味する。ペプチド
薬は、化学合成によって得られてもよいか、または遺伝子操作された源（例えば、組換え
源）から生成されてもよい。ペプチド薬は、分子量に幅があってもよく、２００Ｄａ〜１
０ｋＤａ以上の分子量であってもよい。
場合によっては、薬物は、毒素、例えば、細胞毒である。高等植物に遍在するタンパク
質のクラスであるリボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）は、そのような細胞毒の例で
ある。１型および２型に分割されるＲＩＰは、真核生物タンパク質合成の強力な阻害剤と
しての作用のために毒性である。１型ＲＩＰは、リボソーム不活性化作用を有する単一ペ
プチド鎖から構成され、２型タンパク質は、細胞結合特性を有するＢ鎖にジスルフィド結
合した、本質的に１型タンパク質と同等であるＡ鎖から構成される。特定のアデニン塩基
のＮ−グリコシド結合は、真核生物リボソームの２８Ｓ ｒＲＮＡの高度に保存されたル
ープ領域においてＲＩＰによって加水分解的に切断され、それによって真核細胞における
翻訳を不活性化する。例えば、米国特許第５，７４４，５８０号を参照のこと。ゲロニン
、ドデカンドリン、トリコサンチン、トリコキリン（ｔｒｉｃｏｋｉｒｉｎ）、ブリオジ
ン、オシロイバナ抗ウイルスタンパク質（ＭＡＰ）、オオムギリボソーム不活性化タンパ
ク質（ＢＲＩＰ）、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰS）、サポリン、ルフィン
、およびモモルジンは、１型ＲＩＰの例であり、リシンおよびアブリンは、２型ＲＩＰの
例である。好適な細胞毒の例として、これらに限定されないが、リシン、アブリン、ジフ
テリア毒素、シュードモナス外毒素（例えば、ＰＥ３５、ＰＥ３７、ＰＥ３８、ＰＥ４０
等）、サポリン、ゲロニン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、ボツリヌス毒
素、ブリオジン、モモルジン、およびブーガニンが挙げられる。
場合によっては、薬物は、癌化学療法剤である。癌化学療法剤は、癌細胞の増殖を低下
させる非ペプチド性（すなわち、非タンパク質性）化合物を含み、細胞傷害性薬剤および
細胞分裂阻害剤を包含する。化学療法剤の非限定的な例として、アルキル化剤、ニトロソ
ウレア、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、植物（ビンカ）アルカロイド、およびステロイ
ドホルモンが挙げられる。また、ペプチド化合物も使用することができる。
好適な癌化学療法剤は、ドラスタチンならびにその活性類似体および誘導体と、アウリ
スタチンならびにその活性類似体および誘導体を含む。例えば、国際公開第ＷＯ９６／３
３２１２号、同第ＷＯ９６／１４８５６号、およびＵＳＰＮ６，３２３，３１５号を参照
のこと。例えば、ドラスタチン１０またはアウリスタチンＰＥは、本開示の抗体−薬物コ
ンジュゲートに含めることができる。好適な癌化学療法剤はまた、マイタンシノイドなら
びにその活性類似体および誘導体（例えば、ＥＰ１３９１２１３；およびＬｉｕ ｅｔ
ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６
２３を参照）と、デュオカルマイシンならびにその活性類似体および誘導体（例えば、合
成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）を含む。
細胞増殖を減少させるように作用する薬剤は、当該技術分野で既知であり、広く使用さ
れている。そのような薬剤は、限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド（
Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、カルムスチン（ＢＣＮ
Ｕ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン、
クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル
、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファ
ン、ダカルバジン、およびテモゾロミドを含む、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェン
マスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、およびトリ
アゼンを含む。
代謝拮抗剤は、限定されないが、シタラビン（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ）、シトシンアラビ
ノシド、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（ＦｕｄＲ）、６−チオグア
ニン、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、ペントスタチン、５−フルオロウラシル（５
−ＦＵ）、メトトレキセート、１０−プロパルギル−５，８−ジデアザフォレート（ＰＤ
ＤＦ、ＣＢ３７１７）、５，８−ジデアザテトラヒドロ葉酸（ＤＤＡＴＨＦ）、ロイコボ
リン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチン、およびゲムシタビンを含む、葉酸類
似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む。
好適な天然の生成物およびそれらの誘導体、（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗
生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン）は、限定されないが、Ａ
ｒａ−Ｃ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒ
ｅ（登録商標））、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナー
ゼ、アザチオプリン；ブレキナル；アルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラス
チン、ビノレルビン、ビンデシン等；ポドフィロトキシン、例えば、エトポシド、テニポ
シド等；抗生物質、例えば、アントラサイクリン、塩酸ダウノルビシン（ダウノマイシン
、ルビドマイシン、セルビジン）、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、およ
びモルホリノ誘導体等．；フェノキシゾンビスシクロペプチド（ｐｈｅｎｏｘｉｚｏｎｅ
ｂｉｓｃｙｃｌｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）、例えば、ダクチノマイシン；塩基性糖ペプチド、
例えば、ブレオマイシン；アントラキノングリコシド、例えば、プリカマイシン（ミトラ
マイシン）；アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン；アジリノピロロインドー
ルジオン、例えば、マイトマイシン；大環状免疫抑制剤、例えば、サイクロスポリン、Ｆ
Ｋ−５０６（タクロリムス、Ｐｒｏｇｒａｆ）、ラパマイシン等を含む。
他の抗増殖性の細胞傷害性薬剤は、Ｎａｖｅｌｂｅｎｅ、ＣＰＴ−１１、アナストラゾ
ール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イホサミド
、およびドロロキサフィンを含む。
抗増殖性活性を有する微小管作用剤も使用に適しており、限定されないが、アロコルヒ
チン（ＮＳＣ ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ ６０９３９５）、コルヒチ
ン（ＮＳＣ ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ ３３４１０）、ドルスタチ
ン１０（ＮＳＣ ３７６１２８）、メイタンシン（ＮＳＣ １５３８５８）、リゾキシン
（ＮＳＣ ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、Ｔａｘｏｌ（
登録商標）誘導体、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、チオコルヒチン（
ＮＳＣ ３６１７９２）、トリチルシステリン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチ
ン、天然および合成のエポチロン（限定されないが、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ディ
スコデルモリド；エストラムスチン、ノコダゾール等を含む）を含む。
使用に適したホルモン調節物質およびステロイド（合成類似体を含む）は、限定されな
いが、アドレノコルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン等；エスト
ロゲンおよびプレゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロ
キシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、エストラジオール、クロミフェン、タモキシ
フェン等；ならびに副腎皮質抑制薬、例えば、アミノグルテチミド；１７α−エチニルエ
ストラジオール；ジエチルスチルベストロール、テストステロン、フルオキシメステロン
、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メチルプレドニゾロン、メチル−テ
ストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプ
ロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン
、ロイプロリド、フルタミド（Ｄｒｏｇｅｎｉｌ）、トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）
、およびＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）を含む。エストロゲンは、増殖および分化を刺激す
るため、エストロゲン受容体に結合する化合物が、この活性を遮断するために使用される
。
他の好適な化学療法剤は、金属複合体、例えば、シスプラチン（ｃｉｓ−ＤＤＰ）、カ
ルボプラチン等；尿素、例えば、ヒドロキシ尿素；およびヒドラジン、例えば、Ｎ−メチ
ルヒドラジン；エピドフィロトキシン；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミト
キサントロン；ロイコボリン；テガフール等を含む。対象となる他の抗増殖剤は、免疫抑
制薬、例えば、ミコフェノール酸、サリドマイド、デスオキシスパガリン、アザスポリン
，レフルノミド、ミゾリビン、アザスピラン（ＳＫＦ １０５６８５）；Ｉｒｅｓｓａ（
登録商標）（ＺＤ １８３９、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−
メトキシ−６−（３−（４−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン）等を含む。
タキサンは、使用に適している。「タキサン」は、パクリタキセル、および任意の活性
タキサン誘導体またはプロドラッグを含む。「パクリタキセル」（本明細書において、例
えば、ドセタキセル、ＴＡＸＯＬ□、ＴＡＸＯＴＥＲＥ□、（ドセタキセルの製剤）、パ
クリタキセルの１０−デスアセチル類似体、およびパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾ
イル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル類似体等の類似体、製剤、および、誘導体を含む
と理解されたい）は、当業者に公知である技術を用いて容易に調製されてもよいか（国際
公開第ＷＯ９４／０７８８２号、同第ＷＯ９４／０７８８１号、同第ＷＯ９４／０７８８
０号、同第ＷＯ９４／０７８７６号、同第ＷＯ９３／２３５５５号、同第ＷＯ９３／１０
０７６号；米国特許第５，２９４，６３７号、同第５，２８３，２５３号、同第５，２７
９，９４９号、同第５，２７４，１３７号、同第５，２０２，４４８号、同第５，２００
，５３４号、同第５，２２９，５２９号、および欧州特許第５９０，２６７号も参照のこ
と）、または例えば、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ
．（セイヨウイチイ由来のＴ７４０２；またはウンナンイチイ由来のＴ−１９１２）を含
む様々な商業供給源から得られてもよい。
パクリタキセルは、パクリタキセルの一般的な化学的に利用可能な形態だけではなく、
類似体および誘導体（例えば、上記のようなＴａｘｏｔｅｒｅ□、ドセタキセル）および
パクリタキセルコンジュゲート（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ、パクリタキセル−デ
キストラン、またはパクリタキセル−キシロース）も指すと理解されたい。
また、親水性誘導体および疎水性誘導体の両方を含む様々な既知の誘導体も、「タキサ
ン」という用語に含まれる。タキサン誘導体は、限定されないが、国際特許出願第ＷＯ９
９／１８１１３号に記載されるガラクトースおよびマンノース誘導体；国際公開第ＷＯ９
９／１４２０９号に記載されるピペラジノおよび他の誘導体；国際公開第ＷＯ９９／０９
０２１号、国際公開第ＷＯ９８／２２４５１号、および米国特許第５，８６９，６８０号
に記載されるタキサン誘導体；国際公開第ＷＯ９８／２８２８８号に記載される６−チオ
誘導体；米国特許第５，８２１，２６３号に記載されるスルフェンアミド誘導体；ならび
に米国特許第５，４１５，８６９号に記載されるタキソール誘導体を含む。限定されない
が、国際公開第ＷＯ９８／５８９２７号、国際公開第ＷＯ９８／１３０５９号、および米
国特許第５，８２４，７０１号に記載されるものを含むパクリタキセルのプロドラッグを
さらに含む。
抗体の生成方法
主題の抗体は、任意の既知の方法、例えば、タンパク質合成のための従来の合成法、組
換えＤＮＡ法等によって生成することができる。
主題の抗体が一本鎖ポリペプチドである場合、それは、標準的な化学的ペプチド合成技
術を用いて合成することができる。ポリペプチドが化学的に合成される場合、固相または
液相を介して合成を進めることができる。配列のＣ末端アミノ酸を不溶性の支持体に付着
させた後、配列中の残りのアミノ酸を連続的に付加する固相ポリペプチド合成（ＳＰＰＳ
）は、主題の抗体の化学合成のための好適な方法の一例である。ＦｍｏｃおよびＢｏｃ等
の種々の形態のＳＰＰＳが、主題の抗体を合成するために利用可能である。固相合成のた
めの技術は、Ｂａｒａｎｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｐｐ．３−２８４ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃ
ｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ Ａ．
，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ， ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４
９−２１５６（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．
，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ， Ｉｌｌ．（１９８４）；およびＧａｎｅｓａｎ Ａ．２００６
Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．６：３−１０、およびＣａｍａｒｅｒｏ ＪＡ
ｅｔ ａｌ．２００５ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｅｐｔ Ｌｅｔｔ．１２：７２３−８に記載
されている。端的に述べると、小さな不溶性の多孔質ビーズを、ペプチド鎖が構築された
機能単位で処理する。カップリング／脱保護のサイクルを繰り返した後、付着した固相の
遊離Ｎ末端アミンを、Ｎ保護アミノ酸単位にカップリングさせる。次いで、この単位を脱
保護し、さらなるアミノ酸を付着させ得る新しいＮ末端アミンを露出させる。ペプチドは
、固相上に固定化された状態に留まり、切断される前に濾過プロセスを経る。
主題の抗体の生成には標準的な組換え法を用いることができる。例えば、任意選択的に
定常領域に結合された軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸が、発現ベクターに挿入
される。軽鎖および重鎖は、同じかまたは異なる発現ベクターにクローニングすることが
できる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチ
ドの発現を確実にする発現ベクター（複数可）中の制御配列に作動可能に連結される。発
現制御配列は、限定されないが、プロモーター（例えば、天然に会合しているかまたは異
種のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント、および転写終止配列を含
む。発現制御配列は、真核生物宿主細胞（例えば、ＣＯＳまたはＣＨＯ細胞）を形質転換
するかまたはトランスフェクトすることが可能なベクター中の真核生物プロモーター系で
あってもよい。一旦、ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、高レベルのヌク
レオチド配列配列、ならびに抗体の収集および精製に好適な条件下に維持される。
コードの退縮のために、様々な核酸配列が、各免疫グロブリンアミノ酸配列をコードす
ることができる。望ましい核酸配列は、新規固相ＤＮＡ合成、または所望のポリヌクレオ
チドの早期に調製された変異体のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）変異誘発のいずれかに
よって生成することができる。オリゴヌクレオチド媒介性の変異誘発は、標的ポリペプチ
ドＤＮＡの置換、欠失、および挿入変異体を調製するための好適な方法の一例である。Ａ
ｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ２：１８３（１９８３）を参照のこと。端的に述べ
ると、標的ポリペプチドＤＮＡは、一本鎖ＤＮＡ鋳型に対して所望の突然変異をコードす
るオリゴヌクレオチドをハイブリダイズすることによって改変される。ハイブリダイゼー
ション後、ＤＮＡポリメラーゼを用いて、オリゴヌクレオチドプライマーを組み込み、標
的ポリペプチドＤＮＡ内の選択された改変をコードする鋳型の第２の相補性鎖全体を合成
する。
好適な発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡの不
可欠な部分としてのいずれかで、宿主生物において複製可能である。一般的に、発現ベク
ターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換した細胞の検出を可能にするための選択マーカー（
例えば、アンピシリン耐性ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン
耐性、またはネオマイシン耐性）を含む。
大腸菌は、主題の抗体をコードするポリヌクレオチドをクローニングするために使用で
きる原核生物宿主細胞の一例である。使用に適した他の微生物宿主は、バチルス・スブチ
リス等の桿菌、ならびにサルモネラ、セラチア、および種々のシュードモナス種等の他の
腸内細菌科を含む。これらの原核生物宿主において、典型的には宿主細胞と適合性の発現
制御配列（例えば、複製起点）を含む発現ベクターを作製することができる。さらに、乳
糖プロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、βラクタマーゼプロモー
ター系、またはファージλからのプロモーター系等の、任意の数の様々な周知のプロモー
ターが存在する。プロモーターは、典型的には、任意選択的にオペレーター配列を伴って
、発現を制御し、また、転写および翻訳を開始および終了させるためのリボソーム結合部
位配列等を有する。
酵母等の他の微生物もまた発現に有用である。サッカロミセス（例えば、サッカロミセ
ス・セレビシア）およびピキアは、好適な酵母宿主細胞の例であり、好適なベクターは、
所望に応じて発現制御配列（例えば、プロモーター）、複製起点、終止配列等を有する。
典型的なプロモーターは、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖酵素を含む。
誘導可能な酵母プロモーターは、中でも、アルコール脱水素酵素、イソチトクロームＣ、
ならびにマルトースおよびガラクトース利用を司る酵素からのプロモーターを含む。
微生物に加えて、哺乳動物組織（ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養で増殖させた哺乳動物細胞
）もまた、本発明のポリペプチド（例えば免疫グロブリンまたはその断片をコードするポ
リヌクレオチド）を発現させるおよび精製するために使用することができる。Ｗｉｎｎａ
ｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ
，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）を参照のこと。好適な哺乳動物宿主細胞は、ＣＨＯ細
胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、および形質転換Ｂ細胞または
ハイブリドーマを含む。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター
、およびエンハンサー等の発現制御配列（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．
Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、ならびにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライシン
グ部位、ポリアデニル化部位、および転写終止配列等の必要なプロセシング情報部位を含
むことができる。好適な発現制御配列の例は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノ
ウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルス等に由来するプロモーターで
ある。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照
のこと。
一旦合成されると（化学的にまたは組換え的にのいずれかで）、全抗体、それらの二量
体、個々の軽鎖および重鎖、または主題の抗体の他の形態（例えば、ｓｃＦｖ等）を、硫
酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動等を含む当該技術分野の標準的手順に従
って精製することができる（Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，（１９８２）を全般的に参照のこと）。
主題の抗体は、実質的に純粋であってもよく、例えば、少なくとも約８０％〜８５％純粋
、少なくとも約８５％〜９０％純粋、少なくとも約９０％〜９５％純粋、または９８％〜
９９％純粋、またはそれ以上純粋であってもよく、例えば、細胞片、主題の抗体以外の巨
大分子等の混入物を含まない等である。
組成物
本開示は、主題の抗体を含む組成物を提供する。主題の抗体組成物は、主題の抗体に加
えて、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４等；緩衝剤、例えば、Ｔ
ｒｉｓ緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピぺラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン
酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−
Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリ
ノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−ｔｒｉｓ［ヒドロキシメチル］メチル−３−
アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）等；可溶化剤；洗浄剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２
０等の非イオン性洗浄剤；プロテアーゼ阻害剤；グリコール等のうちの１つ以上を含むこ
とができる。
核酸
本開示は、主題の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。主題の抗
体をコードするヌクレオチド配列は、意図する標的細胞（例えば、コードされた抗体を合
成するように遺伝子操作された細胞）におけるヌクレオチド配列の発現を許容するプロモ
ーターおよびエンハンサー等の１つ以上の調節エレメントに作動可能に連結することがで
きる。
好適なプロモーターおよびエンハンサーエレメントは、当該技術分野で既知である。細
菌細胞における発現の場合、好適なプロモーターは、限定されないが、ｌａｃＩ、ｌａｃ
Ｚ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、λ、Ｐ、およびｔｒｃを含む。真核細胞の発現の場合、好適な
プロモーターは、限定されないが、軽鎖および／または重鎖の免疫グロブリン遺伝子プロ
モーターエレメントおよびエンハンサーエレメント；サイトメガウイルス最初期プロモー
ター；単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター；初期および後期ＳＶ４０プ
ロモーター；レトロウイルスからの長い末端反復に存在するプロモーター；マウスメタロ
チオネイン−Ｉプロモーター；ならびに種々の当該技術で既知の組織特異的プロモーター
を含む。
いくつかの実施形態において、例えば、酵母細胞における発現の場合、好適なプロモー
ターは、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＰＹＫ１
プロモーター等の構成的プロモーター；またはＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモ
ーター、ＡＤＨ２プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＧＡＬ
７プロモーター、ＭＥＴ２５プロモーター、ＭＥＴ３プロモーター、ＣＹＣ１プロモータ
ー、ＨＩＳ３プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰＤＨプ
ロモーター、ＡＤＣ１プロモーター、ＴＲＰ１プロモーター、ＵＲＡ３プロモーター、Ｌ
ＥＵ２プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＴＰ１プロモーター、およびＡＯＸ１（例え
ば、ピキアにおける使用のため）等の調節可能プロモーターである。適切なベクターおよ
びプロモーターの選択は、当業者の通常の技術の範囲内である。
原核生物宿主細胞において使用するのに好適なプロモーターは、限定されないが、バク
テリオファージＴ７ ＲＮＡポリメラーゼプロモーター；ｔｒｐプロモーター；ｌａｃオ
ペロンプロモーター；ハイブリッドプロモーター、例えば、ｌａｃ／ｔａｃハイブリッド
プロモーター、ｔａｃ／ｔｒｃハイブリッドプロモーター、ｔｒｐ／ｌａｃプロモーター
、Ｔ７／ｌａｃプロモーター；ｔｒｃプロモーター；ｔａｃプロモーター等；ａｒａＢＡ
Ｄプロモーター；ｓｓａＧプロモーターもしくは関連プロモーター等のｉｎ ｖｉｖｏ調
節プロモーター（例えば、米国特許公開第２００４０１３１６３７号を参照）、ｐａｇＣ
プロモーター（Ｐｕｌｋｋｉｎｅｎ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
，１９９１：１７３（１）：８６−９３；Ａｌｐｕｃｈｅ−Ａｒａｎｄａ ｅｔ ａｌ．
，ＰＮＡＳ，１９９２；８９（２１）：１００７９−８３）、ｎｉｒＢプロモーター（Ｈ
ａｒｂｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏ．６：２８０５−２８１
３）等（例えば、Ｄｕｎｓｔａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ
．６７：５１３３−５１４１；ＭｃＫｅｌｖｉｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｖａｃｃｉ
ｎｅ ２２：３２４３−３２５５；およびＣｈａｔｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９２
）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８８８−８９２を参照）；σ７０プロモーター、例えば
、コンセンサスσ７０プロモーター（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＸ７９８９８０
、ＡＸ７９８９６１、およびＡＸ７９８１８３を参照）；定常期プロモーター、例えば、
ｄｐｓプロモーター、ｓｐｖプロモーター等；病原性アイランドＳＰＩ−２に由来するプ
ロモーター（例えば、ＷＯ９６／１７９５１を参照）；ａｃｔＡプロモーター（例えば、
Ｓｈｅｔｒｏｎ−Ｒａｍａ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０
：１０８７−１０９６を参照）；ｒｐｓＭプロモーター（例えば、Ｖａｌｄｉｖｉａ ａ
ｎｄ Ｆａｌｋｏｗ（１９９６）．Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：３６７を参照）
；ｔｅｔプロモーター（例えば、Ｈｉｌｌｅｎ，Ｗ．ａｎｄ Ｗｉｓｓｍａｎｎ，Ａ．（
１９８９）Ｉｎ Ｓａｅｎｇｅｒ，Ｗ．ａｎｄ Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，Ｕ．（ｅｄｓ），
Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ， Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｍａｃ
ｍｉｌｌａｎ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．１４３−１６２を参照）；Ｓ
Ｐ６プロモーター（例えば、Ｍｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ．１２：７０３５を参照）等が挙げられる。大腸菌等の原核生物において使
用するのに好適な強力なプロモーターは、限定されないが、Ｔｒｃ、Ｔａｃ、Ｔ５、Ｔ７
、およびＰＬａｍｂｄａを含む。細菌宿主細胞において使用するオペレータの非限定的な
例として、ラクトースプロモーターオペレーター（ＬａｃＩリプレッサータンパク質は、
ラクトースと接触させると立体構造を変化させ、それによってＬａｃＩリプレッサータン
パク質がオペレーターに結合するのを防止する）、トリプトファンプロモーターオペレー
ター（トリプトファンと複合体を形成した場合、ＴｒｐＲリプレッサータンパク質はオペ
レーターに結合する立体構造を有する；トリプトファンの非存在下では、ＴｒｐＲリプレ
ッサータンパク質は、オペレーターに結合しない立体構造を有する）、およびｔａｃプロ
モーターオペレーター（例えば、ｄｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１−２５を参照）が挙げられる。
主題の抗体をコードするヌクレオチド配列は、発現ベクターおよび／またはクローニン
グベクター内に存在し得る。主題の抗体が２つの別々のポリペプチドを含む場合、２つの
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を同じかまたは別々のベクター内でクローニ
ングすることができる。発現ベクターは、選択可能なマーカー、複製起点、ならびにベク
ターの複製および／または維持を提供する他の特徴を含む。
多数の好適なベクターおよびプロモーターが当業者に知られており、その多くは、主題
の組換え構築物を作製するために市販されている。以下のベクターを例として提供する。
細菌：ｐＢｓ、ＰｈａｇｅＳｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓ
Ｋ、ｐＢｓ ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２
２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、
Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核生物：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４
４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およ
びｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。
発現ベクターは、一般的に、異種タンパク質をコードする核酸配列の挿入を提供するた
めに、プロモーター配列の近くに位置する都合のよい制限酵素部位を有する。発現宿主に
おいて機能する選択可能なマーカーが存在してもよい。好適な発現ベクターは、限定され
ないが、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；アデノウイ
ルス（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃ
ｉ ３５：２５４３ ２５４９，１９９４；Ｂｏｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔ
ｈｅｒ ６：５１５ ５２４，１９９９；Ｌｉ ａｎｄ Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ
９２：７７００ ７７０４，１９９５；Ｓａｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ ５：１０８８ １０９７，１９９９；国際公開第ＷＯ９４／１２６４９号、
同第ＷＯ９３／０３７６９号；同第ＷＯ９３／１９１９１号；同第ＷＯ９４／２８９３８
号；同第ＷＯ９５／１１９８４号および同第ＷＯ９５／００６５５号を参照）；アデノ随
伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ９：８１
８６，１９９８，Ｆｌａｎｎｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９４：６９１６ ６９２
１，１９９７；Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖ
ｉｓ Ｓｃｉ ３８：２８５７ ２８６３，１９９７；Ｊｏｍａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇ
ｅｎｅ Ｔｈｅｒ ４：６８３ ６９０，１９９７，Ｒｏｌｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈ
ｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １０：６４１ ６４８，１９９９；Ａｌｉ ｅｔ ａｌ．，
Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ５：５９１ ５９４，１９９６；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ
ｉｎ ＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８
９）６３：３８２２−３８２８；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１
９８８）１６６：１５４−１６５；およびＦｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９
９３）９０：１０６１３−１０６１７を参照）；ＳＶ４０；単純ヘルペスウイルス；ヒト
免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９４：１０３１
９ ２３，１９９７；Ｔａｋａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７３：７８
１２ ７８１６，１９９９を参照）；レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウ
イルス、脾臓壊死ウイルス、ならびに、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、ト
リ白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイル
ス等のレトロウイルス由来のベクター）等を含む。
上述のように、主題の核酸は、主題の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。主題
の核酸は、上述のように抗ＣＤ２２重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む
。
細胞
本開示は、主題の核酸で遺伝子操作された、単離された遺伝子操作された宿主細胞（例
えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞）を提供する。いくつかの実施形態において、主題の単離さ
れた遺伝子操作された宿主細胞は、主題の抗体を生成することができる。
好適な宿主細胞は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞等の真核生物宿主細胞、および
細菌細胞等の原核生物細胞を含む。宿主細胞への主題の核酸の導入は、例えば、リン酸カ
ルシウム沈殿法、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トラ
ンスフェクション、電気穿孔法、または他の既知の方法によって実現することができる。
好適な哺乳動物細胞は、初代細胞および不死化細胞株を含む。好適な哺乳動物細胞株は
、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株等を含
む。好適な哺乳動物細胞株は、限定されないが、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）Ｎｏ．ＣＣＬ−２）
、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、
Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ
−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ細
胞ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、Ｒ
ＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）
２９３細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞等を含む。
好適な酵母細胞は、限定されないが、ピキア・パストリス、ピキア・フィンランディカ
、ピキア・トレハロフィラ、ピキア・コクラメ、ピキア・メンブラネファシエンス、ピキ
ア・オプンチエ、ピキア・サーモトレランス、ピキア・サリクタリア、ピキア・グエルク
ウム、ピキア・ピペリ、ピキア・スチプチス、ピキアメタノリカ、ピキア種、サッカロミ
セス・セレビシア、サッカロミセス種、ハンセヌラ・ポリモルファ、クルイベロミセス種
、クルイベロミセス・ラクチス、カンジダ・アルビカンス、アスペルギルス・ニデュラン
ス、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリゼ、トリコデルマ・リーセイ、クリ
ソスポリウム・ラクノウエンス、フザリウム種、フザリウム・グラミネウム、フザリウム
・ベネナツム、ニューロスポラ・クラッサ、クラミドモナスレインハルトチイ等を含む。
好適な原核生物細胞は、限定されないが、大腸菌、乳酸菌類、サルモネラ菌類、赤痢菌
類等の様々な実験株のいずれかを含む。例えば、Ｃａｒｒｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９
２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１７６−１１８１；米国特許第６，４４７，７８４
号；およびＳｉｚｅｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：２９
９−３０２を参照のこと。本発明に用いることのできるサルモネラ菌株の例は、限定され
ないが、サルモネラ・チフィおよびサルモネラ・チフィリウムを含む。好適な赤痢菌株は
、限定されないが、シゲラ・フレックスネリ、シゲラ・ソネイ、および志賀赤痢菌を含む
。典型的には、実験株は非病原性の株である。他の好適な細菌の非限定的な例として、限
定されないが、バチルス・スブチリス、シュードモナス・プジタ、シュードモナス・エル
ジノーサ、シュードモナス・メバロニイ、ロドバクター・スフェロイデス、ロドバクター
・カプスラータ、ロドスピリラム・ラブラム、ロドコッカス種等を含む。いくつかの実施
形態において、宿主細胞は大腸菌である。
薬学的組成物
本開示は、主題の抗体を含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。一般に、製剤は、
有効量の主題の抗体を含む。「有効量」とは、所望の結果、例えば、癌性Ｂ細胞数の減少
、自己反応性Ｂ細胞の数および／または活性の減少をもたらすのに十分な投与量を意味す
る。場合によっては、所望の結果は、少なくとも、Ｂ細胞悪性腫瘍の症状の対象と比較し
た軽減である。
製剤
主題の方法において、所望の治療効果または診断効果をもたらすことができる任意の従
来の手段を用いて、主題の抗体を宿主に投与することができる。したがって、治療的投与
のために様々な製剤に薬剤を組み込むことができる。より具体的には、主題の抗体は、適
切な薬学的に許容される担体と組み合わせて薬学的組成物に製剤化することができ、錠剤
、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏、溶剤、坐剤、注射剤、吸入剤、およびエアロゾル剤
等の固体、半固体、液体、または気体形状の調製物に製剤化することができる。
医薬剤形中で、主題の抗体は、それらの薬学的に許容される塩の形態で投与されてもよ
いか、またはそれらは単独でもしくは適切な会合において、さらには他の薬学的に活性な
化合物と組み合わせて使用されてもよい。以下の方法および賦形剤は、例示であるに過ぎ
ず、決して限定的ではない。
経口調製物の場合、主題の抗体は、錠剤、散剤、顆粒剤、またはカプセル剤を作製する
ために、単独で、または適切な添加剤、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコ
シデンプン、またはジャガイモデンプン等の従来の添加剤；結晶セルロース、セルロース
誘導体、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチン等の結合剤；トウモロコシデ
ンプン、ジャガイモデンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウム等の崩壊剤
；タルクまたはステアリン酸マグネシウム等の滑剤、また必要に応じて、希釈剤、緩衝剤
、湿潤剤、防腐剤、および香味剤と組み合わせて使用することができる。
主題の抗体は、植物油または他の類似する油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸エス
テルもしくはプロピレングリコールのエステル等の水性溶媒または非水性溶媒中に、必要
に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、および防腐剤等の従来の添加剤
とともに、調製物を溶解、懸濁、または乳化することによって、注射用調製物に製剤化す
ることができる。
主題の抗体を含む薬学的組成物は、所望の純度を有する抗体を、任意選択的な生理学的
に許容される担体、賦形剤、安定剤、界面活性剤、緩衝剤、および／または等張化剤と混
合することによって調製される。許容される担体、賦形剤、および／または安定剤は、用
いられる投与量および濃度ではレシピエントに無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、お
よびその他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニ
ン、およびクエン酸を含む抗酸化剤；保存剤（エタノール、ベンジルアルコール、フェノ
ール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロル−ｍ−クレゾール、メチルもしくはプロピルパラベン
、塩化ベンザルコニウム、またはこれらの組み合わせ）；アミノ酸、例えば、アルギニン
、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロ
イシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニ
ン、セリン、プロリン、およびこれらの組み合わせ；単糖類、二糖類、および他の炭水化
物；低分子量（１０残基未満）ポリペプチド；ゼラチンまたは血清アルブミン等のタンパ
ク質；ＥＤＴＡ等のキレート化剤；トレハロース、ショ糖、ラクトース、グルコース、マ
ンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グル
コサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミン、およびノイラミン酸等の糖類；な
らびに／あるいは、Ｔｗｅｅｎ、Ｂｒｉｊ Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ、ま
たはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性表面活性剤を含む。
薬学的組成物は、液体形態、凍結乾燥形態、または凍結乾燥形態から再構成された液体
形態であってもよく、凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌溶液で再構成される。凍結乾燥組
成物を再構成するための標準的な手順は、ある体積の純水（典型的には凍結乾燥中に除去
された体積と同等である）を加え戻すことであるが、非経口投与用の薬学的組成物の生成
のために抗菌剤を含む溶液が使用されてもよい（Ｃｈｅｎ（１９９２）Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ
Ｉｎｄ Ｐｈａｒｍ １８，１３１１−５４も参照のこと）。
主題の薬学的組成物中の例示的な抗体濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、
または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍ
ｇ／ｍＬの範囲であり得る。
抗体の水性製剤は、ｐＨ緩衝溶液中で、例えば、約４．０〜約７．０、または約５．０
〜約６．０の範囲、または代替として約５．５のｐＨで調製されてもよい。この範囲内の
ｐＨに適した緩衝液の例として、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、コ
ハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、および他の有機酸緩衝液が挙げられる。緩衝液の濃度は、例
えば、緩衝液および製剤の所望の浸透圧に応じて、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約５
ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲であり得る。
等張化剤は、製剤の浸透圧を調節するために抗体製剤に含められてもよい。例示的な等
張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、およびアミノ酸グループのいず
れかの成分、糖類、ならびにこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、
水性製剤は等張であるが、高張液または低張液が好適である場合もある。「等張」という
用語は、生理食塩水または血清等の比較される特定の他の溶液と同じ浸透圧を有する溶液
を意味する。等張化剤は、約５ｍＭ〜約３５０ｍＭ、例えば、１００ｍＭ〜３５０ｎＭの
量で使用されてもよい。
製剤化した抗体の凝集を低減するため、および／または製剤中の微粒子の形成を最小限
に抑えるため、および／または吸着を低減するために、界面活性剤が抗体製剤に加えられ
てもよい。例示的な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗ
ｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオ
キシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレ
ンコポリマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、およびラウリル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）を含む。好適なポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの例は、ポリ
ソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０（商標）の商品名で販売）およびポリソルベート８０
（Ｔｗｅｅｎ ８０（商標）の商品名で販売）である。好適なポリエチレン−ポリプロピ
レンコポリマーの例は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８またはＰｏｌｏｘａｍｅｒ
１８８（商標）の名称で販売されているものである。好適なポリオキシエチレンアルキ
ルエーテルの例は、Ｂｒｉｊ（商標）の商品名で販売されているものである。界面活性剤
の例示的な濃度は、約０．００１％〜約１％ｗ／ｖの範囲であり得る。
凍結乾燥プロセスの間の不安定化条件から不安定な活性成分（例えば、タンパク質）を
保護するために、凍結保護剤が加えられてもよい。例えば、既知の凍結保護剤は、糖類（
グルコースおよびショ糖を含む）；ポリオール（マンニトール、ソルビトール、およびグ
リセロールを含む）；ならびにアミノ酸（アラニン、グリシン、およびグルタミン酸を含
む）を含む。凍結保護剤は、約１０ｍＭ〜５００ｎＭの量で含ませることができる。
いくつかの実施形態において、主題の製剤は、主題の抗体と、上で特定した成分（例え
ば、界面活性剤、緩衝剤、安定剤、等張化剤）のうちの１つ以上とを含み、エタノール、
ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロール−ｍ−クレゾール、メ
チルまたはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、またはこれらの組み合わせ等の１
つ以上の保存剤を本質的に含まない。他の実施形態において、保存剤は、例えば、約０．
００１〜約２％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で製剤に含まれる。
例えば、主題の製剤は、非経口投与に好適な液体または凍結乾燥製剤であり得、約１ｍ
ｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、約０．００１％〜約１％の少なくとも１つ
の界面活性剤、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝剤、任意選択的に約１０ｍＭ〜約５００ｍ
Ｍの安定剤、および約５ｍＭ〜約３０５ｍＭの等張化剤を含んでもよく、約４．０〜約７
．０のｐＨを有する。
別の例として、主題の非経口製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの主題の抗
体、０．０４％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍ
Ｍショ糖を含み、５．５のｐＨを有する、液体または凍結乾燥製剤である。
別の例として、主題の非経口製剤は、１）１５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ
／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、
５．５のｐＨを有するか、または２）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ／ｖ
Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、５．５
のｐＨを有するか、または３）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅ
ｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭショ糖を含み、５．５のｐＨ
を有するか、または４）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０４％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ
２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨ
を有するか、または６）７５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ
２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨ
を有する、凍結乾燥製剤を含む。
別の例として、主題の非経口製剤は、１）７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０２２
％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、１２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０ １２５ｍＭ
ショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、、または２）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体
、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、１０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍＭ
ショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、または３）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗体
、０．０１％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、１０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍＭ
ショ糖を含み、５．５のｐＨを有するか、、または４）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題の抗
体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、１０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および１２５ｍ
Ｍトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または５）３７．５ｍｇ／ｍＬの主題
の抗体、０．０１％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、１０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および１２
５ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または６）５ｍｇ／ｍＬの主題の
抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０
ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または７）７５ｍｇ／ｍＬの主題の
抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２５０
ｍＭマンニトールを含み、５．５のｐＨを有するか、または８）７５ｍｇ／ｍＬの主題の
抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および１４０
ｍＭ塩化ナトリウムを含み、５．５のｐＨを有するか、または９）１５０ｍｇ／ｍＬの主
題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および２
５０ｍＭトレハロースを含み、５．５のｐＨを有するか、または１０）１５０ｍｇ／ｍＬ
の主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、およ
び２５０ｍＭマンニトールを含み、５．５のｐＨを有するか、または１１）１５０ｍｇ／
ｍＬの主題の抗体、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、
および１４０ｍＭ 塩化ナトリウムを含み、５．５のｐＨを有するか、または１２）１０
ｍｇ／ｍＬの主題の抗体、０．０１％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチ
ジン、および４０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、５．５のｐＨを有する、液体製剤である。
主題の抗体は、吸入によって投与されるエアロゾル製剤中に用いることができる。主題
の抗体は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の許容される加圧噴霧剤に製剤
化することができる。
さらに、主題の抗体は、乳化塩基または水溶性塩基等の様々な塩基とともに混合するこ
とによって坐剤として作製することができる。主題の抗体は、坐剤によって直腸投与する
ことができる。坐剤は、体温では溶解するが室温では凝固する、ココアバター、カルボワ
ックス、およびポリエチレングリコール等のビヒクルを含むことができる。
シロップ剤、エリキシル剤、および懸濁剤等の経口または直腸投与のための単位剤形が
提供されてもよく、その場合、各投薬単位、例えば、茶さじ１杯、大さじ１杯、錠剤、ま
たは坐剤は、１つ以上の阻害剤を含む所定量組成物を含む。同様に、注入または静脈内投
与のための単位剤形は、滅菌水、生理食塩水、または別の薬学的に許容される担体中の溶
液として組成物中に主題の抗体を含んでもよい。
「単位剤形」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトおよび動物対象の単位用
量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、薬学的に許容される希釈剤、担体
、またはビヒクルと関連して所望の効果をもたらすのに十分な量で計算された本発明の化
合物を所定量含む。主題の抗体の詳細は、用いられる特定の抗体および達成されるべき効
果、ならびに宿主における各抗体に関連する薬力学に依存し得る。
他の投与様式も、主題の発明を用いる用途を見出す。例えば、主題の抗体は、坐剤、ま
た場合によっては、エアロゾル、および鼻腔内組成物に製剤化することができる。坐剤の
場合、ビヒクル組成物は、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリド等の従来の結
合剤および担体を含む。そのような坐剤は、約０．５％〜約１０％（ｗ／ｗ）、例えば、
約１％〜約２％の範囲で活性成分を含む混合物から形成されてもよい。
鼻腔内製剤は、通常、鼻粘膜に刺激を引き起こさないか、または毛様体の機能を著しく
妨害しないビヒクルを含む。水、食塩水、または他の既知の物質等の希釈剤が、主題の発
明とともに用いられてもよい。経鼻製剤はまた、限定されないが、クロロブタノールおよ
び塩化ベンザルコニウム等の保存剤も含み得る。鼻粘膜による主題のタンパク質の吸収を
促進するために、界面活性剤が存在してもよい。
主題の抗体は、注射用製剤として投与することができる。典型的には、注射用組成物は
、溶液または懸濁液として、注射が調製され得る前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液
に好適な固体形態として、調製される。調製物は、乳化してもよいか、またはリポソーム
ビヒクルに封入された抗体であってもよい。
好適な賦形剤ビヒクルは、例えば、水、食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノール
等、およびこれらの組み合わせである。さらに、必要に応じて、湿潤剤もしくは乳化剤ま
たはｐＨ緩衝剤等の微量の補助物質を含んでもよい。そのような剤形を調製する実際の方
法は、当業者に既知であるかまたは明白となるであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉ
ｏｎ，１９８５を参照のこと。投与される組成物または製剤は、いずれの場合も、治療を
受ける対象において所望の状態を達成するのに十分な量の主題の抗体を含む。
ビヒクル、アジュバント、担体、または希釈剤等の薬学的に許容される賦形剤は、公衆
が入手しやすい。さらに、ｐＨ調整剤およびｐＨ緩衝剤、浸透圧調整剤、安定剤、湿潤剤
等の薬学的に許容される補助物質は、公衆が入手しやすい。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、制御放出製剤に製剤化される。徐放調製
物は、当該技術分野で周知の技術を用いて調製されてもよい。徐放調製物の好適な例とし
て、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、該マトリックスは
、フィルムまたはマイクロカプセル等の成形品の形態である。徐放マトリックスの例とし
て、ポリエステル、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解
性エチレン−酢酸ビニル、ヒドロゲル、ポリ乳酸、分解性の乳酸−グリコール酸コポリマ
ー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。徐放調製物に含まれる
抗体の潜在的な生物活性の損失および潜在的な免疫原性の変化は、適切な添加剤を用いる
ことにより、含水量を調節することにより、および特定のポリマーマトリックス組成物を
開発することにより、回避することができる。
本発明の範囲内の制御放出は、多数の拡張放出剤形のうちのいずれか１つを意味すると
解釈することができる。以下の用語は、本発明の目的のために、制御放出と実質的に同等
であると見なされてもよい：連続放出、制御放出、遅延放出、デポー、漸進的放出、長期
間放出、プログラム化放出、長期放出、比例放出、遅延性放出、持続性、遅延、緩徐な放
出、間隔を開けた放出、徐放、タイムコート、時限放出、遅延作用、拡張作用、階層的時
間作用、長時間作用、長期作用、反復作用、緩徐作用、持続性作用、持続性作用薬物、お
よび拡張放出。これらの用語に関するさらなる考察は、Ｌｅｓｃｚｅｋ Ｋｒｏｗｃｚｙ
ｎｓｋｉ，Ｅｘｔｅｎｄｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，１９８７（
ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）に見出すことができる。
種々の制御放出技術が、非常に広範囲の薬物剤形を網羅する。制御放出技術は、限定さ
れないが、物理的システムおよび化学的システムを含む。
物理的システムは、限定されないが、マイクロカプセル化、マクロカプセル化、および
膜システム等の速度制御膜を用いた貯蔵システム；中空繊維、超微孔質三酢酸セルロース
、ならびに多孔質ポリマー基質および発泡体等の速度制御膜を用いない貯蔵システム；非
多孔質のポリマー性またはエラストマー性マトリックス（例えば、非侵食性、侵食性、環
境因子の侵入、および分解性）に物理的に溶解された系、ならびに非多孔質のポリマー性
またはエラストマー性マトリックス（例えば、非侵食性、侵食性、環境因子の侵入、およ
び分解性）に物理的に分散された材料を含むモノリシックシステム；外部制御層と化学的
に類似しているかまたは類似していない貯蔵層を含む積層構造；ならびに浸透圧ポンプ、
またはイオン交換樹脂への吸着等の他の物理的方法を含む。
化学的システムは、限定されないが、ポリマーマトリックスの化学的侵食（例えば、不
均質もしくは均質な侵食）、またはポリマーマトリックスの生物学的侵食（例えば、不均
質もしくは均質）を含む。制御放出システムの種類に関するさらなる考察は、Ａｇｉｓ
Ｆ．Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８０
（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）に見出すことができる。
経口投与のために開発された多数の制御放出製剤が存在する。これらは、限定されない
が、浸透圧制御による胃腸管送達システム；動圧制御による胃腸管送達システム；微多孔
膜透過制御による胃腸管送達デバイスを含む膜透過制御による胃腸管送達システム；胃液
抵抗性の腸管を標的とする制御放出胃腸管送達デバイス；ゲル拡散制御による胃腸管送達
システム；ならびに陽イオン性および陰イオン性薬物を含むイオン交換制御による胃腸管
送達システムを含む。制御放出薬物送達システムに関するさらなる情報は、Ｙｉｅ Ｗ．
Ｃｈｉｅｎ，Ｎｏｖｅｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９２（Ｍ
ａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）に見出すことができる。これらの情報のうちのい
くつかを、以下により詳細に記載する。
投与量
好適な投与量は、種々の臨床的要因に基づいて、担当医師または他の適格な医療従事者
によって決定され得る。医学分野において周知であるように、任意の１人の患者のための
投与量は、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、患者の性別、投与の
期間および経路、総体的健康、ならびに同時に投与される他の薬物を含む多くの要因に依
存する。主題の抗体は、１用量当たり１ｎｇ／体重１ｋｇ〜２０ｍｇ／体重１ｋｇ、例え
ば、０．１ｍｇ／体重１ｋｇ〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ、例えば、０．５ｍｇ／体重１ｋｇ
〜５ｍｇ／体重１ｋｇの量で投与されてもよいが、特に上記要因を考慮すると、この例示
的範囲を下回るかまたは上回る用量が想定される。投与計画が持続注入である場合、１μ
ｇ〜１０ｍｇ／体重１ｋｇ／分の範囲内でもあり得る。
当業者は、用量レベルが、特定の抗体、症状の重症度、および患者の副作用に対する感
受性の関数として異なり得ることを容易に認識するであろう。所与の化合物の好ましい投
与量は、当業者によって様々な手段により容易に決定される。
投与経路
主題の抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ法、ならびに全身および局所投与
経路を含む、薬物送達に好適な任意の利用可能な方法および経路を用いて個体に投与され
る。
従来の薬学的に許容される投与経路は、鼻腔内、筋肉内、気管内、皮下、皮内、局所適
用、静脈内、動脈内、直腸内、経鼻、経口、ならびに他の経腸および非経口投与経路を含
む。投与経路は、必要に応じて、組み合わされてもよいか、または抗体および／もしくは
所望の効果に応じて調節されてもよい。主題の抗体組成物は、単回または複数回用量で投
与され得る。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は経口投与される。いくつ
かの実施形態において、主題の抗体組成物は吸入経路を介して投与される。いくつかの実
施形態において、主題の抗体組成物は鼻腔内投与される。いくつかの実施形態において、
主題の抗体組成物は局所投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は
頭蓋内投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗体組成物は静脈内投与される
。
薬剤は、全身および局所経路を含む、従来の薬物の送達に好適な任意の利用可能な従来
の方法および経路を用いて宿主に投与することができる。一般に、本発明によって企図さ
れる投与経路は、経腸、非経口、または吸入経路を含むが、必ずしもこれらに限定されな
い。
吸入投与以外の非経口投与経路は、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、関節内、脊髄
内、胸骨内、および静脈内経路、すなわち、消化管を通る以外のあらゆる投与経路を含む
が、必ずしもこれらに限定されない。非経口投与は、主題の抗体の全身または局所送達を
実現するために行うことができる。全身送達が所望される場合、投与は、典型的には、薬
学的調製物の侵襲性または全身性に吸収される局所または粘膜投与を含む。
主題の抗体はまた、経腸投与によっても送達することができる。経腸投与経路は、経口
および直腸（例えば、坐剤を使用）送達を含むが、必ずしもこれらに限定されない。
治療とは、宿主を苦しめる病理学的状態に関連する症状の少なくとも改善を意味し、改
善は、パラメータ、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍またはＢ細胞媒介性自己免疫疾患等の治療さ
れる病理学的状態に関連する症状の規模における少なくとも減少を指すために広義で用い
られる。そのため、治療はまた、宿主が、病理学的状態または少なくとも該病理学的状態
を特徴付ける症状にそれ以上苦しまないように、病理学的状態または少なくともそれに関
連する症状が、完全に阻害される、例えば発症が予防されるか、または停止される、例え
ば終結される状況も含む。
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、例えば、全身送達のためにまたは局所部
位に、注射によって投与される（例えば、静脈内注入）。
様々な宿主（この場合、「宿主」という用語は、「対象」、「個体」、および「患者」
という用語と同義に用いられる）が、主題の方法に従って治療可能である。一般的に、そ
のような宿主は、「哺乳動物」または「哺乳類」であり、これらの用語は、食肉目（例え
ば、イヌおよびネコ）、げっ歯目（例えば、マウス、モルモット、およびラット）、なら
びに霊長目（例えば、ヒト、チンパンジー、およびサル）を含む哺乳綱に属する生物を説
明するために広義で用いられる。いくつかの実施形態において、宿主はヒトである。
主題の抗体の単位用量、例えば、経口用量または注射用量を含むキットが提供される。
そのようなキットには、単位用量を収容する容器に加えて、対象となる病理学的状態を治
療する際の抗体の使用法および付随する利益を記載する情報の添付文書が入っている。好
ましい化合物および単位用量は、本明細書に上述したものである。
治療方法
本開示は、ＣＤ２２陽性Ｂ細胞、例えば、癌性ＣＤ２２陽性Ｂ細胞、自己反応性ＣＤ２
２陽性Ｂ細胞と関連するかまたはそれによって引き起こされる疾患または障害を治療する
方法を提供する。
Ｂ細胞悪性腫瘍の治療
本開示は、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する方法を提供し、該方法は、一般的に、有効量の主
題の抗体を、それを必要とする個体（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する個体）に、単独で
（例えば、単剤療法において）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例え
ば、併用療法において）投与することを含む。
Ｂ細胞悪性腫瘍は例えば、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、
慢性リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、および前リンパ球性白血病を含む。
いくつかの実施形態において、主題の抗体の有効量は、単独で（例えば、単剤療法にお
いて）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例えば、併用療法において）
、１回以上の用量で投与された場合に、抗体を用いた治療が行われていない個体における
癌性Ｂ細胞の数と比較して、個体における癌性Ｂ細胞の数を少なくとも約５％、少なくと
も約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくと
も約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくと
も約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれ以上減少させるのに
効果的な量である。
併用療法
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療する主題の方法は、主題の抗体と
１つ以上のさらなる治療剤とを投与することを含む。好適なさらなる治療剤は、（上述の
ような） 癌化学療法剤を含むが、これに限定されない。
Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患の治療
本開示は、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を治療する方法を提供し、該方法は、一般的に、
有効量の主題の抗体を、それを必要とする個体（例えば、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を有
する個体）に、単独で（例えば、単剤療法において）、または１つ以上のさらなる治療剤
と組み合わせて（例えば、併用療法において）投与することを含む。Ｂ細胞媒介性自己免
疫疾患は、その病理が１つ以上の自己抗原に特異的な抗体の存在に主に起因する自己免疫
疾患である。そのため、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患はまた、抗体媒介性自己免疫疾患とも
称されてもよい。
Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患は、例えば、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、自己
免疫性心筋炎、関節リウマチ等を含む。
いくつかの実施形態において、主題の抗体の有効量は、単独で（例えば、単剤療法にお
いて）、または１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて（例えば、併用療法において）
、１回以上の用量で投与された場合に、抗体を用いた治療が行われていない個体における
自己反応性Ｂ細胞の数と比較して、個体における自己反応性Ｂ細胞の数を少なくとも約５
％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５
％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０
％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、またはそれ以上減
少させるのに効果的な量である。
併用療法
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患を治療する主題の方法は、主
題の抗体と１つ以上のさらなる治療剤とを投与することを含む。好適なさらなる治療剤は
、免疫抑制剤、抗炎症剤等を含むが、これらに限定されない。
治療に適した対象
様々な対象が主題の方法を用いた治療に好適である。好適な対象は、Ｂ細胞悪性腫瘍を
有する；Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患すると診断された；Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患したことがあり
、Ｂ細胞悪性腫瘍の再発のリスクがある；主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細
胞悪性腫瘍の治療を受けた（例えば、癌化学療法剤を用いて治療を受けた）ことがあり、
該薬剤に応答を示さなかった；または、主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞
悪性腫瘍の治療を受けた（例えば、癌化学療法剤を用いて治療を受けた）ことがあり、最
初は該薬剤に応答を示したが、その後応答を示さなくなった（例えば、再発した）、あら
ゆる個体、例えば、ヒトを含む。
主題の方法を用いたＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療に適した対象は、Ｂ細胞媒介性自
己免疫疾患を有する；Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患すると診断された；Ｂ細胞媒介性
自己免疫疾患に罹患したことがあり、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患の再発のリスクがある；
主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療を受けた（例
えば、免疫抑制剤を用いて治療を受けた）ことがあり、該薬剤に応答を示さなかった；ま
たは、主題の抗ＣＤ２２抗体以外の薬剤を用いてＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療を受け
た（例えば、免疫抑制剤を用いて治療を受けた）ことがあり、最初は該薬剤に応答を示し
たが、その後応答を示さなくなった（例えば、再発した）、あらゆる個体、例えば、ヒト
を含む。
検出方法
本開示は、主題の抗体の使用を伴う種々の検出方法を提供する。検出方法は、診断方法
、予後方法、および監視方法を含む。主題の検出方法は、一般的に、ＣＤ２２陽性細胞、
例えば、Ｂ細胞、例えば、癌性Ｂ細胞を検出することを含む。
いくつかの実施形態において、主題の方法は、例えば、個体がＢ細胞悪性腫瘍を有する
かどうかを決定するための、診断方法である。
いくつかの実施形態において、主題の方法は監視方法であり、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍
を有すると診断された個体が、該疾患の治療を受け、治療および／または疾患の進行／退
行に対する応答について監視される。
場合によっては、主題の検出方法は、検出可能に標識した本開示の抗ＣＤ２２抗体を個
体に投与し、個体の組織に対する抗体の結合を検出することを含む。検出は、例えば、磁
気共鳴画像または他の好適な撮像技術によって達成することができる。
他の場合において、主題の検出方法は、検出可能に標識した本開示の抗ＣＤ２２抗体を
、個体から採取した生物試料と接触させ、生物試料中の分子に対する抗体の結合を検出す
ることを含む。
抗ＣＤ２２抗体は、直接的にまたは間接的に標識することができる。間接的標識は、検
出可能な標識を含む二次抗体を含み、その場合、二次抗体が主題の抗ＣＤ２２抗体に結合
する。他の間接的標識はビオチンを含み、その場合、検出可能な標識を含むアビジンまた
はストレプトアビジンを用いてビオチン化抗ＣＤ２２抗体を検出することができる。
好適な検出可能な標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学
的、または化学的手段によって検出可能なあらゆる組成物を含む。好適なものは、磁気ビ
ーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソ
チオシアナート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク
質、黄色蛍光タンパク質等）、放射標識（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、ま
たは３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、
ルシフェラーゼ、および酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）で一般的に使用される他
の酵素）、コロイド金または色ガラスまたはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリ
プロピレン、ラテックス等）ビーズ等の比色標識を含むが、これらに限定されない。．
いくつかの実施形態において、主題の抗体は、造影剤または放射性同位体を含み、造影
剤または放射性同位体は、撮像において、例えば、ヒトに対して実行される撮像手順にお
ける使用に好適なものである。標識の非限定的な例として、１２３１Ｉ（ヨウ素）、１８
Ｆ（フッ素）、９９Ｔｃ（テクネチウム）、１１１Ｉｎ（インジウム）、および６７Ｇａ
（ガリウム）等の放射性同位体、ならびに、ガドリニウム（Ｇｄ）、ジスプロシウム、お
よび鉄等の造影剤が挙げられる。放射性Ｇｄ同位体（１５３Ｇｄ）も利用可能であり、非
ヒト哺乳動物における撮像手順に好適である。主題の抗体は、標準的な技術を用いて標識
することができる。例えば、主題の抗体は、クロラミンＴまたは１，３，４，６−テトラ
クロロ−３α，６α−ジフェニルグリコルリルを用いてヨウ素化することができる。フッ
素付加のために、フッ化物イオン変位反応による合成中にフッ素を主題の抗体に加える。
そのような放射性同位体を有するタンパク質の合成の検討については、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｇ
ａｒｔｎｅｒ，Ｈ．，ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．，１６：１２２−１３０（１９９８）およびＳ
ａｊｉ，Ｈ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．，
１６（２）：２０９−２４４（１９９９）を参照のこと。主題の抗体はまた、標準的な技
術によって造影剤で標識することもできる。例えば、主題の抗体は、Ｇｄジエチレントリ
アミン五酢酸（ＧｄＤＴＰＡ）またはＧｄテトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ＧｄＤ
ＯＴＡ）等の低分子Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲートすることによりＧｄで標識する
ことができる。Ｃａｒａｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９：２２９３−２
３５２（１９９９）およびＬａｕｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．
Ｉｍａｇｉｎｇ，３：１１−１６（１９８５）を参照のこと。主題の抗体は、例えば、ポ
リリジン−Ｇｄキレートを抗体にコンジュゲートすることによりＧｄで標識することがで
きる。例えば、Ｃｕｒｔｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３３（１
０）：７５２−７６１（１９９８）を参照のこと。代替として、主題の抗体は、Ｇｄキレ
ート剤脂質を含む常磁性の重合リポソームをアビジンおよびビオチン化抗体とともにイン
キュベートすることによりＧｄで標識することができる。例えば、Ｓｉｐｋｉｎｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．，４：６２３−６２６（１９９８）を参照のこと。
主題の抗体に結合することができる適切な蛍光タンパク質は、限定されないが、例えば
、米国特許第６，０６６，４７６号、同第６，０２０，１９２号、同第５，９８５，５７
７号、同第５，９７６，７９６号、同第５，９６８，７５０号、同第５，９６８，７３８
号、同第５，９５８，７１３号、同第５，９１９，４４５号、同第５，８７４，３０４号
に記載されるオワンクラゲ由来の緑色蛍光タンパク質またはその変異体または誘導体；例
えば、改良型ＧＦＰ（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から市販されている多くのそ
のようなＧＦＰ）；赤色蛍光タンパク質；黄色蛍光タンパク質；例えば、Ｍａｔｚ ｅｔ
ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：９６９−９７３に記
載される花虫類種に由来する様々な蛍光タンパク質および有色タンパク質のいずれか等を
含む。
キット
本開示は、主題の抗体を含むキット（例えば、試験キット）を提供する。主題のキット
は、主題の検出方法を実行する上で有用である。
主題のキットは、主題の抗体、主題の抗体をコードする核酸、または主題の核酸を含む
細胞のうちの１つ以上を含むことができる。主題のキット内の主題の抗体は、ヒト化する
ことができる。主題のキットは、抗体を標識するための試薬を含むことができる。いくつ
かの実施形態において、主題のキット内の抗体は、検出可能な標識を含む。
キットの他の任意選択的な構成要素は、緩衝剤、プロテアーゼ阻害剤、検出可能な標識
等を含む。主題のキットが主題の核酸を含む場合、該核酸はまた、制限部位、複数のクロ
ーニング部位、プライマー部位等も有し得る。キットの種々の構成要素が、別々の容器内
に存在してもよいか、または、必要に応じて、特定の適合性を示す構成要素が、単一容器
内で予め混合されてもよい。
上記構成要素に加えて、主題のキットは、主題の方法を実施するためにキットの構成要
素を使用するための指示を含むことができる。主題の方法を実施するための指示は、一般
的に、好適な記録媒体に記録される。例えば、指示は、紙またはプラスチック等の基板上
に印刷されてもよい。そのため、指示は、キットの容器の表示部に、またはその構成要素
に（すなわち、パッケージまたはサブパッケージに関連して）、添付文書としてキット内
に存在してもよい等である。他の実施形態において、指示は、好適なコンピュータ可読記
憶媒体、例えば、コンパクトディスクリードオンリーメモリー（ＣＤ−ＲＯＭ）、デジタ
ル多用途ディスク（ＤＶＤ）、ディスケット等に存在する電子記憶データファイルとして
存在する。さらに他の実施形態において、実際の指示はキット内には存在しないが、遠隔
源から、例えば、インターネットを介して指示を取得するための手段が提供される。この
実施形態の一例は、指示を閲覧することができ、かつ／またはそこから指示をダウンロー
ドすることができるウェブアドレスを含むキットである。指示と同様に、この指示を取得
するための手段は、好適な基盤上に記録される。
本発明は以下のものを含む。

１
ＣＤ２２のエピトープに特異的に結合する抗体であって、
ａ）アミノ酸配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＸ１ＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＸ２ＬＹＬＱＭＸ３ＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）（Ｘ１は、ＫまたはＲであり；Ｘ２は、ＳまたはＴであり；Ｘ３は、ＮまたはＳである）を有するＶＨ領域を含む免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗体。

２
前記免疫グロブリン軽鎖は、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７；ＶＫ１）を含む、項１に記載の抗体。

３
前記免疫グロブリン軽鎖は、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８；ＶＫ２）を含む、項１に記載の抗体。

４
前記免疫グロブリン軽鎖は、アミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９；ＶＫ４）を含む、項１に記載の抗体。

５
ＣＤ２２のエピトープに特異的に結合する抗体であって、
ａ）アミノ酸配列 ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＸ１ＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＸ２ＫＬＬＩＹＹＴＳＩＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＸ３ＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）（Ｘ１は、Ｌ（Ｌｅｕ）またはＶ（Ｖａｌ）であり；Ｘ２は、ＶまたはＰであり；Ｘ３は、ＱまたはＰである）を含む免疫グロブリン軽鎖と、
ｂ）免疫グロブリン重鎖と、を含む、抗体。

６
前記免疫グロブリン重鎖は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号３；ＶＨ３）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号４；ＶＨ４）；
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号５；ＶＨ５）；および
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＩＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＳＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＳＧＹＧＳＳＹＧＶＬＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号６；ＶＨ６）から選択されるアミノ酸配列を含む、項５に記載の抗体。

７
軽鎖領域および重鎖領域は、別々のポリペプチドに存在する、項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。

８
前記軽鎖領域および前記重鎖領域は、単一ポリペプチドに存在する、項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。

９
前記抗体は、約１０７Ｍ−１〜約１０１２Ｍ−１の親和性でエピトープに結合する、項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。

１０
前記重鎖領域は、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の領域である、項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。

１１
前記抗体は、検出可能に標識されている、項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。

１２
前記抗体は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦａｂ’である、項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。

１３
前記抗体は、共有結合された非ペプチド合成ポリマーを含む、項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体。

１４
前記合成ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）ポリマーである、項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。

１５
前記抗体は、共有結合された脂質または脂肪酸部分を含む、項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体。

１６
前記抗体は、共有結合された多糖または炭水化物部分を含む、項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体。

１７
前記抗体は、造影剤を含む、項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体。

１８
前記抗体は、親和性ドメインを含む、項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体。

１９
前記抗体は、固体支持体上に固定化される、項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体。

２０
前記抗体は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である、項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。

２１
前記ｓｃＦｖは、多量体化されている、項２０に記載の抗体。

２２
前記抗体は、共有結合された細胞毒を含む、項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体。

２３
前記抗体は、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含む定常領域のアミノ酸配列を含む、項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体。

２４
前記抗体は、スルファターゼモチーフのアミノ酸配列を含む定常領域のアミノ酸配列を含み、前記スルファターゼモチーフは、２−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）部分を含むように修飾されている、項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体。

２５
前記抗体は、前記ＦＧｌｙ部分を介して前記抗体に共有結合される異種部分を含む、項２４に記載の抗体。

２６
前記異種部分は、薬物、毒素、検出可能な標識、水溶性ポリマー、および合成ペプチドから選択される、項２５に記載の抗体。

２７
ヌクレオチド配列は、真核細胞中で活性な転写調節エレメントに作動可能に連結されている、項１に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクター。

２８

ａ）項１に記載の抗体と、
ｂ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。

２９
前記抗体は、リポソームに封入される、項２９に記載の薬学的組成物。

３０
対象におけるＢ細胞悪性腫瘍を治療する方法であって、
癌を有する対象に有効量の項２８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
以下の実施例は、本発明をどのように作製および使用するかの完全な開示および説明を
当業者に提供するために記載されるものであって、本発明者らが彼らの発明と見なすもの
の範囲を制限することを意図するものではなく、また以下の実験が全てのまたは唯一の行
われた実験であることを意味するものでもない。用いた数（例えば、量、温度等）に関し
て正確性を確保するための努力がなされてきたが、いくらかの実験誤差および偏差を考慮
に入れるべきである。別途指示のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量
であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはその近傍である。標準的な略語、例えば
、ｂｐ、塩基対（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｐｌ、ピコリットル（複数可
）；ｓまたはｓｅｃ、秒（複数可）；ｍｉｎ、分（複数可）；ｈまたはｈｒ、時間（複数
可）；ａａ、アミノ酸（複数可）；ｋｂ、キロベース（複数可）；ｂｐ、塩基対（複数可
）；ｎｔ、ヌクレオチド（ｓ）；ｉ．ｍ．、筋肉内；ｉ．ｐ．、腹腔内；ｓ．ｃ．、皮下
等が使用されてもよい。
実施例において言及される市販の試薬は、別途指示のない限り、製造者の指示に従って
使用した。実施例においておよび本明細書を通して、ＥＣＡＣＣ受入れ番号によって特定
される細胞の源は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｅｎｇｌａｎｄである。別途定義され
ない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術
分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例示的な方法および材
料を以下に記載するが、本明細書に記載されるものと類似するかまたは同等の方法および
材料もまた、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、およ
び実施例は、例示的であるに過ぎず、範囲を限定することを意図するものではない。
実施例１−キメラ抗体の作製
マウスＲＦＢ４モノクローナル抗体（Ｃａｍｐａｎａ．ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．，１３４，１５２４−１５３０．Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ（１９
９７）Ｂｌｏｏｄ，９０，２０２０−２０２６）の重鎖および軽鎖可変（Ｖ）領域配列を
合成し、ｐＡＮＴ抗体発現ベクターにサブクローニングした（図１）：重鎖Ｖ領域および
軽鎖Ｖ領域を、それぞれｐＡＮＴ１７およびｐＡＮＴ１３にクローニングした。重鎖Ｖ領
域遺伝子は、ヒトγ１重鎖遺伝子（Ｇ１ｍ３（Ｇ１ｍ（ｆ））アロタイプ）とインフレー
ムでＭｌｕＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位を介してｐＡＮＴ１７にクローニングし、軽鎖Ｖ
領域遺伝子は、ヒトκ軽鎖定常領域遺伝子（Ｋｍ３アロタイプ）とインフレームでＢｓｓ
ＨＩＩおよびＢａｍＨＩ部位を介してｐＡＮＴ１３にクローニングした。重鎖遺伝子およ
び軽鎖遺伝子の両方の転写は、ＣＭＶ Ｉ／Ｅプロモーター（ＵＳ５１６８０６２および
ＵＳ５３８５８３９、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｏｗａ）の制御下にあり、ｐＡＮ
Ｔ１７プラスミドは、ＳＶ４０プロモーターの制御下にある変異ｄｈｆｒミニ遺伝子（Ｓ
ｉｍｏｎｓｅｎ＆Ｌｅｖｉｎｓｏｎ １９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８０：２４９５−２４９９）と、真核細胞における選択のためのポリＡ配列と
を含んでいた。ｐＡＮＴ１７およびｐＡＮＴ１３の両方が、原核生物選択のためのβ−ラ
クタマーゼ（ＡｐＲ）遺伝子と、原核細胞における増殖のためのｐＭＢ１複製起点とを含
んでいた。全てのプラスミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５ ａｌｐｈａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎカタログ番号１８２６５−０１７）中で増殖させた。
その後、重鎖および軽鎖発現構築物を、リン酸カルシウムベースのトランスフェクショ
ンによりＨＥＫ２９３ ｃ１８に一過性にコトランスフェクトするか、または電気穿孔に
よりＮＳ０細胞に安定にトランスフェクトした。ＨＥＫ２９３ ｃ１８またはＮＳ０細胞
から分泌させて得られたキメラＲＦＢ４抗体を、プロテインＡクロマトグラフィーによっ
て細胞培養上清から精製し、ＰＤ−１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番
号１７−０８５１−０１）を使用してリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に脱塩した。各個々
の抗体のアミノ酸組成物に基づくモル吸光係数を用いて、２８０ｎｍのＵＶ吸光度で濃度
を決定した。
実施例２−ヒト化抗体の作製
ヒト化抗体は、欧州特許第１８４４０７４号（Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ）に記載され
る方法を用いて作製した。Ｓｗｉｓｓ ＰＤＢを用いてマウスＲＦＢ４Ｖ領域の構造モデ
ルを生成し、抗体のＣＤ２２結合特性にとって重要である可能性が高い重要なフレームワ
ークアミノ酸（「制限残基」（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅ））を同定す
るために分析した。ヒトＶ領域配列のデータベースは、ヒト化抗体の設計において用いら
れる制限残基の各々を含むヒトＶ領域配列のセグメントを同定するために使用された。Ｒ
ＦＢ４ ＣＤＲ配列は、設計されたヒト化抗体配列に保持した。好ましいＶ領域配列のセ
ットを設計し、Ｆｏｔｈｅｒｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（国際公開第ＷＯ９８５９２４４号
、譲受人：Ｅｃｌａｇｅｎ Ｌｔｄ）に記載されるｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析により、非生
殖系列主要組織適合抗原（ＭＨＣ）クラスＩＩペプチド結合の予測について分析し、また
「Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ」（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｉｍｍｕｎエピトープ（ｄｏ
ｔ）ｏｒｇ／）を含むデータベースを使用して、既知のＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープについ
ても分析した。予測された非生殖系列ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドを有するか、または
Ｔ細胞エピトープデータベースに著しくヒットしたＶ領域配列は排除した。こうしてＶ領
域配列のセットを減少させた。次いで、選択された重鎖および軽鎖Ｖ領域配列を組み合わ
せて、ヒト化重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を生成した。ヒト化ＲＦＢ４抗体の生
成に使用するために、６つの重鎖配列および４つの軽鎖配列（それぞれ、ＶＨ１〜ＶＨ６
、およびＶκ１〜Ｖκ４と表される）を選択した。ＶＨ配列ＶＨ３（配列番号３）、ＶＨ
４（配列番号４）、およびＶＨ５（配列番号５）、ＶＨ６（配列番号６）を含む重鎖を、
ＶＬ配列ＶＫ１（配列番号７）、ＶＫ２（配列番号８）、およびＶＫ４（配列番号９）を
含む軽鎖と対合した。
ヒト化ＶＨおよびＶＫ変異体をコードするＤＮＡを合成し、実施例１に記載されるよう
に発現ベクターｐＡＮＴ１７およびｐＡＮＴ１３（図１）にサブクローニングした。ヒト
化ＶＨ鎖およびＶκ鎖の全ての組み合わせをＨＥＫ２９３ ｃ１８細胞に一過性にトラン
スフェクトし、プロテインＡクロマトグラフィーにより培養上清から抗体を精製した後、
実施例１に記載されるように脱塩した。
実施例３−ヒト化抗体の分析
親キメラ抗体に対する競合酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）において、ＣＤ２２
抗原に対するＨＥＫ由来ＲＦＢ４ヒト化変異体の結合を評価した。親ＲＦＢ４キメラ抗体
は、Ｂｉｏｔｉｎ Ｔａｇ（商標）Ｍｉｃｒｏ Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（
Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用してビオチン化した。９６ウェルのＭａｘｉＳｏｒ
ｐプレート（Ｎｕｎｃ）を、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ（ＰＡＡ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、Ｙｅｏｖｉｌ，ＵＫ）中１．０μｇ／ｍｌのＣＤ２２−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓ
ｔｅｍｓカタログ番号１９６８ＳＬ）で、４℃で一晩コーティングした（最終体積６０μ
ｌ）。室温で１時間、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ−２％ ＢＳＡでプレートをブロッ
クした。洗浄緩衝液（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ−ＰＢＳ中０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で
プレートを３回洗浄した。種々の濃度の試験ヒト化抗体をビオチン化親キメラ抗体と予め
混合しておき（最終体積０．０４μｇ／ｍｌ）、次いで、ＣＤ２２−Ｆｃプレートに加え
た（最終体積６０μｌ）。全ての試料を２通り試験した。プレートを室温で１時間インキ
ュベートし、洗浄緩衝液で３回洗浄した。ストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダー
ゼ（ＨＲＰ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の１／１０００希釈液６０μｌを加え、室
温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、３，３’，５，５
’−テトラメチベンジジン（ＴＭＢ）基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）６０μｌを加え、暗
所にて室温でインキュベートして発色させた。５０μｌの３Ｍ ＨＣｌを加えることによ
り反応を停止させた。Ｄｙｎｅｘプレートリーダを使用して、４５０ｎｍでプレートを読
み取った。
図２に示すように、全てのリードヒト化ＲＦＢ４変異体は、親キメラ抗体と同様の競合
的な結合プロファイルを示した。野生型ＲＦＢ４ ＩｇＧ１抗体と比較したキメラＲＦＢ
４およびヒト化ＲＦＢ４ 抗体のＩＣ５０を、下の表２に示す。
Figure 2019150052
実施例４−ＣＤ４＋Ｔ細胞応答の分析
ＵＫ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ （
Ａｄｄｅｎｂｒｏｏｋｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から、Ａ
ｄｄｅｎｂｒｏｏｋｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｌｏｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｔｈ
ｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって与えられた承認に従って得られた健常なコミュニテ
ィドナーの軟膜（２４時間以内に採取した血液に由来）から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を
単離した。Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｘｉｓ−ｓｈｉｅｌｄ、Ｄｕｎｄｅｅ，ＵＫ）密度
遠心分離によりＰＢＭＣを軟膜から単離し、ＣＤ８＋ ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）（
ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ、Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）を使用し
てＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させた。ＨＬＡ単一特異的プライマーポリメラーゼ連鎖反応（Ｓ
ＳＰ−ＰＣＲ）ベースの組織適合試験キット（Ｂｉｏｔｅｓｔ、Ｓｏｌｉｈｕｌｌ，ＵＫ
）を使用してＨＬＡ−ＤＲハプロタイプを同定することにより、ドナーを特徴付けた。「
再現性」対照抗原（キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、Ｐｉｅｒｃｅ （Ｐ
ｅｒｂｉｏ）、Ｃｒａｍｌｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）だけでなく、インフルエンザＡ型および
エプスタイン・バーウイルスに由来する対照ペプチドに対するＴ細胞応答も決定した。次
いで、ＰＢＭＣを凍結し、必要になるまで液体窒素中に保存した。
プロテインＡクロマトグラフィーの後、１ｘＰＢＳ中で２６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ
Ｓ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するサイズ排除クロマトグラフ
ィーにより、一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３ ｃ１８細胞株からキメラおよ
びＶＨ４／ＶＫ１、ＶＨ５／ＶＫ１、ＶＨ６／ＶＫ４ヒト化抗体を精製した。単量体のピ
ーク画分を収集して定量化し、Ｅｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）−ＰＴＳ（商標）（Ｃｈａ
ｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、Ｍａｒｇａｔｅ，ＵＫ）システムを使用して全ての調製物につい
てエンドトキシンレベルを分析した。
世界人口において発現されたＨＬＡ−ＤＲアロタイプの数および頻度を最もよく表すた
めに、２０ドナーのコホートを選択した。世界人口において発現されたアロタイプに対す
る該コホートにおいて発現されたアロタイプの分析により、全ての主要なＨＬＡ−ＤＲ対
立遺伝子（世界人口において発現される頻度が＞５％の個々のアロタイプ）が十分に提示
されることが明らかとなった。各ドナー由来のＰＢＭＣをＡＩＭ−Ｖ（登録商標）培養培
地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）中で再生し、洗浄し、ＡＩＭ−Ｖ（
登録商標）に再懸濁して４〜６ｘ１０６ＰＢＭＣ／ｍｌとした。各ドナーについて、１ｍ
ｌの増殖細胞ストックを２４ウェルプレートの適切なウェルに加えて、バルク培養物を確
立した。０．５ｍｌの培養培地を、０．５ｍｌの各希釈試験試料と一緒にＰＢＭＣに加え
、最終濃度を試料当たり５０μｇ／ｍｌとした。各ドナーごとに、再現性対照（１００μ
ｇ／ｍｌのＫＬＨとともにインキュベートした細胞）と、培養培地のみのウェルも含めた
。合計８日間、５％ＣＯ２とともに培養物を３７℃でインキュベートした。５、６、７、
および８日目に、各ウェル内の細胞を穏やかに再懸濁し、３ｘ１００μｌアリコートを丸
底９６ウェルプレートの各ウェルに移した。１００μｌのＡＩＭ−Ｖ（登録商標）培養培
地中、０．７５μＣｉ［３Ｈ］−Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（登録
商標）、Ｂｅａｃｏｎｓｆｉｅｌｄ，ＵＫ）で培養物をパルス標識し、さらに１８時間イ
ンキュベートしてから、ＴｏｍＴｅｃ Ｍａｃｈ ＩＩＩ細胞収集器を使用してフィルタ
ーマット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（登録商標））上に収集した。Ｐａｒａｌｕｘ低バ
ックグラウンド計測で、１４５０ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｗａｌｌａｃ Ｔｒｉｌｕｘ
Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ （Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍ
ｅｒ（登録商標））上でＭｅｌｔｉｌｅｘ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（登録商
標））シンチレーションカウントすることにより、各ウェルについて１分当たりのカウン
ト（ｃｐｍ）を決定した。
増殖アッセイでは、２以上（ＳＩ≧２．０）の刺激指数（ＳＩ）の経験的な閾値が以前
に確立されており、この閾値を上回る増殖応答を誘導する試料が陽性であると見なされる
（含まれる場合、境界線ＳＩ≧１．９０が協調される）。増殖データセット（ｎ＝３）に
ついて、陽性応答は、統計的および経験的な閾値によって定義される：
１） 対合しない２つの試料のスチューデントｔ検定を用いて試験ウェルのｃ
ｐｍを培地対照ウェルに対して比較することによる応答の有意性（ｐ＜０．０５）
２） ２以上（ＳＩ≧２．０）のＳＩ
３） 基本ｃｐｍ＞１５０ｃｐｍ
さらに、複製培養物の原データのＣＶおよびＳＤを計算することにより、アッセイ内変
動を評価した。
図３Ａ〜Ｄは、試験抗体に対する健常ドナーのＴ細胞増殖応答を示す。バルク培養物か
らＰＢＭＣを試料採取し、３つの試験試料とともにインキュベートした後、５、６、７、
および８日目に増殖について評価した。対合しない２つの試料のスチューデントｔ検定を
用いて有意（ｐ＜０．０５）であった、破線で示したＳＩ≧２．０（ｐ＜０．０５）の増
殖応答を陽性と見なした。
データを図３Ａ〜Ｄに示し、下の表３に要約する。図３Ａ〜Ｄは、試験抗体の各々に対
するドナーのＳＩ応答を経時的に示す。完全ヒト化抗ＣＤ２２抗体（ＶＨ４／ＶＫ１、Ｖ
Ｈ５／ＶＫ１、ＶＨ６／ＶＫ４）は、ＳＩ≧２．０、ｐ＜０．０５閾値を用いた増殖アッ
セイのドナーのいずれにも陽性応答を誘導しなかったのに対し、キメラ抗ＣＤ２２抗体は
、ドナーの２５％に陽性Ｔ細胞増殖応答を誘導した。図３Ａ：キメラ抗体；図３Ｂ：ＶＨ
４／ＶＫ１；図３Ｃ：ＶＨ５／ＶＫ１；図３Ｄ：ＶＨ６／ＶＫ４
Figure 2019150052
実施例５−内在化の分析
約０．５ｘ１０６細胞／ｍＬに増殖させたＲａｊｉ細胞を試験当たり０．３５〜０．５
ｘ１０６細胞で使用した。リン酸緩衝食塩水＋１％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ；緩衝液Ａ）中
に１００μＬ／試験管で細胞を再懸濁した。対照は、抗体なしで、または二次抗体のみを
用いてインキュベートした、４℃のみ、または４℃および３７℃の両方に曝露した細胞を
含んでいた。一次抗体を１μｇ／試験管で加え、細胞を氷上で３０分間インキュベートし
た。次いで、細胞を洗浄した：１ｍＬの緩衝液Ａを加え、遠心分離により細胞を穏やかに
ペレット化し、上清を除去した。これを全部で２回洗浄分繰り返した。３７℃に曝露され
る細胞を、３７℃のＲＭＰＩ＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭグルタミン中に再
懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２で４５分間インキュベートした。次に、１ｍＬの氷冷緩衝液
Ａ中で細胞を１回洗浄した。二次抗体（フルオレセインとコンジュゲートしたヤギ抗ヒト
Ｆｃ；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）
を１：１００希釈で緩衝液Ａに加え、細胞を氷上で３０分間インキュベートした。最後に
、氷冷緩衝液Ａ中で細胞を２回洗浄し、３００μＬの緩衝液Ａに再懸濁した。細胞を４℃
で暗所に維持し、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用してＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎ
ｓｏｎ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ上でフローサイトメトリーにより１８時間以内に分析した。
データを次のように分析した：ＦＬ１チャネル（フルオレセインを検出するために使用
）上の二次抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、一次抗体が含まれた時に産生されたシグナ
ルのＭＦＩから差し引いた。結果として得られた値を、次いで、本実験のためのＭＦＩシ
グナルと名付けた。４℃に維持した細胞のＭＦＩ値は、細胞表面に対する抗体の結合を表
していた。３７℃に曝露された細胞のＭＦＩ値は、ＣＤ２２−Ａｂ複合体の内在化後に細
胞表面に残った抗体によって産生されたシグナルを表していた。４℃と３７℃のＭＦＩの
差は、結合抗体の内在化に対応する（図４）。異なる日に行われた実験間の比較を可能に
するために、結合および内在化の値を、時折、野生型抗体ＲＦＢ４に正規化した。
実施例６−ＣＤ２２の結合親和性の分析
ヒトＣＤ２２をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ｈｕＣＤ２２−Ｆｃ形態、カタログ番号１９
６８−ＳＬ−０５０）またはＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ（Ｈｉｓタグを有
するｈｕＣＤ２２、カタログ番号１１９５８−Ｈ０８Ｈ）のいずれかから入手し、ＬＣ−
ビオチンを用いてＬｙｓにビオチン化した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ機器を使用して、ｈｕＣＤ
２２に対する変異体１２〜２０の結合を測定した。ストレプトアビジン誘導体化Ｆｏｒｔ
ｅＢｉｏバイオセンサにビオチン化ｈｕＣＤ２２分子を充填した。Ａ２８０により対象と
なる抗体の濃度を確認し、濃度を上昇させた各々の抗体に充填されたバイオセンサを曝露
した。４〜５つの濃度（ｐＨ７．２５）でのｈｕＣＤ２２に対する動力学的な会合および
解離速度を決定し、ＫＤを決定した（図５）。
実施例７−凝集の分析
ＲＦＢ４変異体の凝集の程度を判定するために、サイズ排除高性能液体クロマトグラフ
ィーを使用して２０μｇの抗体を分析した（Ｔｏｓｏｈ番号０８５４１ Ｇ３００ ＳＷ
ＸＬ ７．８ｍｍｘ３０ｃｍ；移動相２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤、３００ｍＭ Ｎ
ａＣｌ、ｐＨ６．８；０．８ｍＬ／分；２２０ｎｍおよび２８０ｎｍで吸光度を監視）。
その結果を、図６Ａ〜６Ｄ中に示す。
本発明を、その特定の実施形態を参照して説明してきたが、当業者は、本発明の主旨お
よび範囲から逸脱することなく、種々の変更が行われ得ること、および均等物が置換され
得ることを理解されたい。さらに、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスステ
ップ（単数もしくは複数）を本発明の目的、主旨、および範囲に適応させるために、多く
の修正が行われてもよい。全てのそのような修正は、本明細書に添付される特許請求の範
囲の範囲内であることが意図される。

Claims (1)

  1. 発明の詳細な説明に記載された物。
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