JP2018518461A - 進行性骨化性線維異形成症の治療 - Google Patents

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Abstract

進行性骨化性線維異形成症(FOP)を患う被験者に、有効なレジメンのアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体を投与する、FOPを治療する方法が提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第119条(e)の定めにより、2015年4月29日に出願された米国仮特許出願第62/154,617号及び2015年4月30日に出願された同第62/155,427号の利益を主張し、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
進行性骨化性線維異形成症(FOP)は、早期発症、骨格筋及び関連する結合組織の偶発性かつ進行性の骨化を特徴とする常染色体優性遺伝疾患である。FOPは、ACVR1(ALK2)の細胞内ドメインにおける突然変異によって生じ、大部分においてアルギニン206をヒスチジン(R206H)に変化させる(Pignolo,R.J.et al.2011,Orphanet J.Rare Dis.6:80)。ACVR1は、骨形態形成タンパク質(BMP)のI型受容体である。特に、R206H突然変異は、活性化に対する受容体の感受性を増加させ、サイレンシングに対する耐性を向上させる。FOPに対して有効な内科的治療は判明していない。
Pignolo,R.J.et al.2011,Orphanet J.Rare Dis.6:80
本発明は、進行性骨化性線維異形成症(FOP)を患う被験者に、有効なレジメンのアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体を投与することを含む、FOPの治療方法を提供する。いくつかの方法では、この抗体は、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である。いくつかの方法では、この抗体は、インタクトな抗体である。いくつかの方法では、この抗体は、ヒトκIgG1抗体である。いくつかの方法では、アクチビンB、BMP9及びBMP10のうち2つ又はそれ以上に対する抗体の組み合わせが投与される。いくつかの方法では、抗体は、ACVR1、ACVR2A、若しくはACVR2Bの細胞外ドメイン−Fc融合タンパク質、又は、アクチビンAに対する抗体との併用療法で投与される。
本発明は、進行性骨化性線維異形成症(FOP)を治療するための薬剤の製造における、アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体の使用を更に提供する。任意選択的に、この抗体は、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である。任意選択的に、この抗体は、インタクトな抗体である。任意選択的に、この抗体は、ヒトκIgG1抗体である。任意選択的に、アクチビンB、BMP9及びBMP10のうち2つ又はそれ以上に対する抗体の組み合わせが投与される。任意選択的に、抗体は、ACVR1、ACVR2A、若しくはACVR2Bの細胞外ドメイン−Fc融合タンパク質、又は、アクチビンAに対する抗体との併用療法で投与される。
図1A〜Dは、非同族リガンドであるアクチビンB、及び同族のBMPリガンドによるACVR1 R206Hの活性化を示している模式図を示す。図1Aは、I型受容体ACVR1B/1C及びSmad2/3のリン酸化を介してシグナル伝達し、かつ、II型受容体(ACVR2A、ACVR2B、及びBMPR2)をBMPと共有しているアクチビンBを示す。図1Bは、BMPを認識し、Smad1/5/8のリン酸化を刺激する、ACVR1をII型受容体と共に示す。図1Cでは、ACVR1はII型受容体と共にアクチビンBに結合しているが、得られる複合体はSmad1/5/8のリン酸化を刺激せず、その代わりに、アクチビンBは、ACVR1による標準的なBMP媒介性シグナル伝達の拮抗阻害剤として作用する。図1Dでは、ACVR1のR206H変異型がアクチビンBに応答し、BMPと全く同様にSmad1/5/8のリン酸化を誘導し、「行き止まり」複合体のACVR2、ACVR1、アクチビン複合体を、シグナル伝達複合体に効率よく変換する。
アクチビンAがACVR1を介するBMP6シグナル伝達を阻害することを示す。
図3A〜Cは、未治療のAcvr1[R206H]FlEx/+;Gt(ROSA26)SorCreERT2/+マウスにおける、(A)胸骨、(B)尾椎及び(C)股関節の異所性骨形成を示す。図3Dは、タモキシフェン注射後2〜4週間に形成され、既存の骨格の遠位に起こり得る、異所性骨成長を示す。図3Eは、大腿骨から骨盤までの架橋を示している、背方から見た異所性骨病変のex−vivo μCT画像を示す。図3Fは、新たに形成された骨が皮質骨及び骨梁様の両方の構造を有していることを示している、異所性骨からの横断図を示す。図3Gは、皮質骨(c)及び骨梁(t)様構造、並びに骨髄(bm)を示している、H&E染色した異所性骨病変の組織切片を示す。
定義
抗体又はECD−Fc融合タンパク質などの治療薬は、典型的には単離形態で提供される。つまり、薬物は、通常、干渉タンパク質及びその産物又精製から生じた他の混入物質に対し少なくとも50w/w%純度であるが、薬物が過度の薬学的に許容可能な担体又はその使用を促進することを意図する他のビヒクルと組み合わされる可能性を排除しない。場合によっては、薬物は、干渉タンパク質及び産生又は精製から生じた混入物質に対し少なくとも60、70、80、90、95、又は99w/w%の純度である。
アミノ酸置換を保存的又は非保存的として分類する目的で、アミノ酸は、以下のように分類する。グループI(疎水性側鎖):met、ala、val、leu、ile;グループII(中性親水性側鎖):cys、ser、thr;グループIII(酸性側鎖):asp、glu;グループIV(塩基性側鎖):asn、gln、his、lys、arg;グループV(鎖方向に影響する残基):gly、pro;及びグループVI(芳香性側鎖):trp、tyr、phe。保存的置換には、同一クラスのアミノ酸間での置換が含まれる。非保存的置換は、これらのクラスのうちの1つのメンバーを、別のメンバーと交換することからなる。
配列同一性パーセントは、可変領域に関するKabat番号付与規則又は定常領域に関するEU番号付与規則によって最大限にアライメントした抗体配列で決定される。他のタンパク質の場合、配列同一性は、Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0(Genetics Computer Group,575 Science Dr.,Madison,WI)のBESTFI、FASTA、及びTFASTAなどアルゴリズムを使用してデフォルトのギャップパラメータで配列をアライメントすることによって、又はインスペクションと最適なアライメントによって決定され得る。アライメント後、被験者の抗体領域(例えば、重鎖又は軽鎖の成熟可変領域全体)を参照抗体の同じ領域と比較する場合、被験者と参照抗体領域との配列同一性パーセントは、ギャップを除外して、被験者及び参照抗体領域の両方において同一アミノ酸が占める位置の数を、両領域のアライメントした位置の総数で割って、100を乗じてパーセンテージに変換して得られる。
1つ又は2つ以上の列挙された要素を「含む」組成物又は方法は、明確に列挙されていない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、その抗体を単独で、又は他の成分と組み合わせて含有し得る。
ヒト化抗体は、遺伝子操作を受けた抗体であり、非ヒト「ドナー」抗体からのCDRは、ヒト「受容体」抗体配列に移植される(例えば、米国特許第5,530,101号及び同第5,585,089号(Queen);同第5,225,539号(Winter);同第6,407,213号(Carter);同第5,859,205号及び同第6,881,557号(Adair);同第6,881,557号(Foote)を参照)。受容体抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の合成体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、又は生殖細胞系領域配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、完全に又は実質的にドナー抗体及び可変領域フレームワーク配列からの一部又は全てのCDRと、存在する場合は、完全に又は実質的にヒト抗体配列からの定常領域と、を有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全に又は実質的にドナー抗体重鎖及び重鎖可変領域フレームワーク配列からの少なくとも1つ、2つ、通常、3つのCDRと、存在する場合は、完全に又は実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの重鎖定常領域と、を有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全に又は実質的にドナー抗体軽鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク配列からの少なくとも1つ、2つ、通常、3つ全てのCDRと、存在する場合は、完全に又は実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの軽鎖定常領域と、を有する。ナノボディ及びdAb以外では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖と、ヒト化軽鎖と、を含む。対応残基の少なくとも85%、90%、95%、又は100%(Kabatによって定義)がそれぞれのCDR間で一致するとき、ヒト化抗体のCDRは、実質的に非ヒト抗体の対応するCDRからのものである。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列又は抗体鎖の定常領域は、対応残基の少なくとも85、90、95、又は100%(Kabatによって定義)が同一であるとき、実質的にそれぞれヒト可変領域フレームワーク配列又はヒト定常領域からのものである。
ヒト化抗体は、多くの場合、マウス抗体からの6つのCDR(好ましくはKabatによって定義)を全て組み込むが、全てのCDRよりも少ないCDRで(例えば、少なくとも3つ、4つ、又は5つの、マウス抗体からのCDR)で構成され得る(例えば、Pascalis et al.,J.Immunol.169:3076,2002;Vajdos et al.,Journal of Molecular Biology,320:415−428,2002;Iwahashi et al.,Mol.Immunol.36:1079−1091,1999;Tamura et al.,Journal of Immunology,164:1432−1441,2000)。
キメラ抗体は、非ヒト抗体(例えば、マウス)の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖及び重鎖定常領域と組み合わされる抗体である。かかる抗体は、実質的に又は完全に、マウス抗体の結合特異性を保持し、約2/3ヒト配列である。
ベニヤ化抗体は、一部、及び通常、全てのCDRと非ヒト抗体の一部の非ヒト可変領域フレームワーク残基と、を保持するが、B細胞エピトープ又はT細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば、露出した残基(Padlan,Mol.Immunol.28:489,1991)を、ヒト抗体配列の対応位置からの残基で置換する、1種のヒト化抗体である。結果として、抗体は、CDRが完全に又は実質的に非ヒト抗体からのものであり、非ヒト抗体の可変領域フレームワークは、置換によってよりヒトに似せられている。
ヒト抗体は、ヒトから単離され得る、又は別の方法でヒト免疫グロブリン遺伝子の発現から生じる(例えば、トランスジェネリックマウス内で、in vitroで、又はファージディスプレイによって)。ヒト抗体の作製法としては、トリオーマ法(Oestberg et al.,Cys muoma 2:361〜367(1983);米国特許第4,634,664号(Oestberg);及び同4,634,666号(Engleman))、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用が挙げられる(参考:例えば、モノクローナル抗体はまた、Regeneron Pharmaceuticals,Inc.(Murphy,PNAS 111 no.14,5153〜5158(2014))からのVelocImmune(登録商標)マウス、Jakobovits(Nature Biotechnology 25,1134〜1143(2007))からのXenomouse、又はMedarex,Inc.(Lonberg,Handbook Exp.Pharmacol.181,69〜97(2008))からのHuMAbマウス;国際公開第93/12227号(Lonbergら、1993);米国特許第5,877,397号、同第5,874,299号、同第5,814,318号、同第5,789,650号、同第5,770,429号、同第5,661,016号、同第5,633,425号、同第5,625,126号、同第5,569,825号、同第5,545,806号、Nature 148,1547〜1553(1994)、Nature Biotechnology 14,826(1996)、国際公開第91/10741号(Kucherlapati、1991)などヒト免疫系遺伝子を有するトランスジェネリックマウスによって産生され得る)。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイ法によって産生され得る(例えば、国際公開第91/17271号(Dowerら)及び同第92/01047号(McCaffertyら)、米国特許第5,877,218号、同第5,871,907号、同第5,858,657号、同第5,837,242号、同第5,733,743号、及び同第5,565,332号を参照)。
アンタゴニストが、由来する親抗体の特性を保持すると言われるとき、完全保持又は部分的保持であり得る。活性の完全保持とは、アンタゴニストの活性が、実験誤差の範囲内で同一であるか、由来する分子の活性よりも大きいことを意味する。活性の部分的保持とは、活性が陰性対照の背景レベルよりも著しく高く(すなわち、実験誤差を超える)、由来する分子の対応する活性の好ましくは少なくとも50%であることを意味する。
2個の抗体は、一方の抗体の結合を低減するか、排除する抗体内の全てのアミノ酸突然変異が、他方の抗体の結合を低減するか、排除する場合、同一のエピトープを有する。2個の抗体は、一方の抗体の結合を低減するか、排除する一部のアミノ酸突然変異が、他方の抗体の結合を低減するか、排除する場合、重複エピトープを有する。
抗体間の競合は、試験下の抗体が共通抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって測定される(例えば、Junghans et al.,Cancer Res.50:1495,1990を参照)。試験抗体は、過剰な試験抗体(例えば、少なくとも2倍、5倍、10倍、20倍、又は100倍)が、参照抗体の結合を少なくとも50%だが、好ましくは75%、90%、又は99%(競合結合アッセイでの測定時)阻害する場合、参照抗体と競合する。競合アッセイによって識別される抗体(競合抗体)としては、参照抗体と同一のエピトープに結合する抗体、及び立体障害を生じさせるために、参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近位の隣接エピトープに結合する抗体が挙げられる。
詳細な説明
I.概要
本開示は、有効なレジメンのアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体を進行性骨化性線維異形成症(FOP)の症状を有する被験者に投与する、この疾患を治療する方法を提供する。本開示は、特にこれらのリガンドが、それぞれACVR1H206変異細胞において、FOPの異所性骨化を誘発できるという結果に一部基づいている。アクチビンBは野生型ACVR1のリガンドではないため、アクチビンBによる活性化は、特に驚きである。
本発明の実施はメカニズムの理解に依存しないが、アクチビンBによる、ACVR1ではなくACVR1H206の活性化について考えられる説明が、図1A〜Dに模式的に示されている。図1Aは、I型受容体ACVR1B/1C及びSmad2/3のリン酸化を介してシグナル伝達し、かつ、II型受容体(ACVR2A、ACVR2B、及びBMPR2)をBMPと共有しているアクチビンBを示す。図1Bは、BMPを認識し、Smad1/5/8のリン酸化を刺激する、ACVR1をII型受容体と共に示す。図1Cでは、ACVR1はII型受容体と共にアクチビンBに結合しているが、得られる複合体はSmad1/5/8のリン酸化を刺激せず、その代わりに、アクチビンBは、ACVR1による標準的なBMP媒介性シグナル伝達の拮抗阻害剤として作用する。図1Dでは、ACVR1のR206H変異型がアクチビンBに応答し、BMPと全く同様にSmad1/5/8のリン酸化を誘導し、「行き止まり」複合体のACVR2、ACVR1、アクチビン複合体を、シグナル伝達複合体に効率よく変換する。R206H変異型は、BMP9及びBMP10などの標準的なBMPにも応答できる。ACVR2・ACVR1・アクチビンB複合体は、ACVR1−ACVR1[R206H]のヘテロ二量体を含むものとしてここでは示されている。しかしながら、これは絶対的な構成ではなく、ACVR1[R206H]のホモ二量体もシグナルを伝達することが可能である。
II.ACVR1、ACVR2A、ACVR2B、アクチビンA、アクチビンB、BMP9及びBMP10
リガンドのトランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーとしては、例えば、骨形態形成タンパク質(BMP)及び成長分化因子(GDF)が挙げられる。これらのリガンドの受容体は、I型及びII型の膜貫通型セリン受容体/スレオニンキナーゼ受容体で構成される、異種受容体複合体である。I型受容体の例としては、アクチビン受容体I型A(ACTRIA、ACVR1、又はALK2)、BMP受容体I型A、及びBMP受容体I型Bが挙げられる。II型受容体の例としては、アクチビン受容体IIA型及びIIB型(ACTRIIA又はACVR2A、及びACTRIIB又はACVR2B)並びにBMP受容体II型が挙げられる。TGFβスーパーファミリーのリガンドは、異なるI型及びII型受容体に対してそれぞれ異なる親和性を有する。
I型及びII型受容体のどちらも、細胞外リガンド結合ドメイン(ECD)と、細胞内セリン/スレオニンキナーゼドメインと、を有する。加えて、I型受容体は、キナーゼドメイン及びキナーゼドメイン内のL45ループに先立ってグリシン/セリンリッチ領域(GSボックス)を有する。どちらの受容体も、リガンドが、Smad及び非Smadシグナル伝達経路など下流シグナル伝達経路を活性化させるように連携する。活性化としては、リガンド結合、リガンド−受容体オリゴマー形成、及びII型受容体キナーゼによるI型受容体のGSボックスのリン酸転移が挙げられる。II型受容体キナーゼは構成的に活性であり、リガンド結合及びI型受容体の活性化において役割を担う。
アクチビンA受容体I型としても知られるACVR1、ACVR1A、ACVRLK2、又はALK2は、リガンドのTGFβスーパーファミリーに対するI型受容体である。ACVR1は、セリン/スレオニンキナーゼ活性を有し、Smadタンパク質をリン酸化し、下流シグナル伝達経路を活性化する。ACVR1は、骨格筋及び軟骨など体の多くの組織に存在し、骨及び筋肉の成長及び発達を促進する。本明細書の他箇所に記載するように、ACVR1遺伝子における特定の突然変異によりFOPが生じる。ACVR1活性の例としては、リガンドに結合する能力、II型受容体と複合体を形成する能力、又はSmad経路など下流シグナル伝達経路を活性化させる能力が挙げられる。
アクチビン受容体II型としても知られるACVR2は、リガンドのTGFβスーパーファミリーに対するII型受容体である。少なくとも2種類のACVR2受容体、例えば、アクチビン受容体IIA型(ACVR2A又はACTRIIA)及びアクチビン受容体IIB型(ACVR2B又はACTRIIB)が存在する。ACVR2への言及は、ACVR2A及びACVR2Bのいずれか、又はその両方を含む。ACVR2A及びACVR2Bは、骨格筋、胃、心臓、子宮内膜、睾丸、前立腺、卵巣、及び神経組織など多数の組織で発現し得る。
リガンド結合時には、ACVR2受容体は、ACVR1などI型受容体と複合体を形成し、I型受容体のGSボックスをリン酸化し、したがって、I型受容体のキナーゼ活性を増強させる。ACVR2A及びACVR2B活性の例としては、リガンドに結合する能力、I型受容体と複合体を形成する能力、又はI型受容体をリン酸化する能力が挙げられる。
ヒトACVR2Aの例示的形態は、Swiss Protアクセッション番号P27037を有する。残基1〜19はシグナルペプチドであり、残基20〜135は細胞外ドメインであり、残基59〜116はアクチビンI型及びII型受容体ドメインであり、残基136〜161は膜貫通ドメインであり、残基162〜513は細胞質ドメインである。ヒトACVR2Bの例示的な形態には、Swiss Prot番号Q13705が割り当てられる。残基1〜18はシグナル配列であり、残基19〜137は細胞外ドメインであり、残基27〜117はアクチビンI型及びII型受容体ドメインであり、残基138〜158は膜貫通ドメインであり、残基159〜512は細胞質ドメインである。ヒトACVR1の例示的形態は、Swiss Protアクセッション番号Q04771を有する。残基1〜20はシグナル配列であり、残基21〜123は細胞外ドメインであり、残基33〜104はアクチビンI型及びII型受容体ドメインであり、残基124〜146は膜貫通ドメインであり、残基147〜509は細胞質ドメインである。ACVR1、ACVR2A、及びACVR2Bへの言及は、これらの例示的形態、既知のアイソフォーム及びその多型(Swiss Protデータベースに含まれているものなど)、他種からの同族形態、及び例示した形態と少なくとも90、95、96、97、98、又は99%の配列同一性を有する他の変種を含む。
上記で定めた、例示した配列以外のACVR2A、ACVR2B、及びACVR1の形態の残基は、対応する例示した配列との最大限のアライメントによって番号が付与され、したがって、アライメントされた残基には同一番号が割り当てられる。
ヒト内のアクチビンAは、ホモ二量体タンパク質又はヘテロ二量体タンパク質として存在し得る。ホモ二量体タンパク質は、ホモ二量体βAサブユニット対を含む。ヘテロ二量体タンパク質は、βAサブユニット及びβB、βC、又はβEサブユニット(すなわち、βA βB、βAβC、又はβAβE)を含む。これらのサブユニットは、シグナルペプチド、プロペプチド、及び成熟ポリペプチドなど前駆体ポリペプチドとしてそれぞれ発現する。ヒトβAサブユニット前駆体の例示的形態は、Swiss Prot P08476と称される長さ426のアミノ酸のポリペプチドであり、残基1〜20はシグナルペプチドであり、残基21〜310はプロペプチドであり、残基311〜426は成熟ポリペプチドである。βBサブユニット前駆体ポリペプチドの例示的形態はSwiss Prot P09529と称され、残基1〜28はシグナルペプチドであり、残基29〜292はプロペプチドであり、残基293〜407は成熟ポリペプチドである。βCサブユニットの例示的形態はSwiss Prot P55103と称され、残基1〜18はシグナルペプチドであり、残基19〜236はプロペプチドであり、残基237〜352は成熟ポリペプチドである。βEサブユニット前駆体の例示的形態は、Swiss Prot P58166と称され、残基1〜19はシグナルペプチドであり、残基20〜236はプロペプチドであり、残基237〜350は成熟ポリペプチドである。これらの配列のいくつかの変異体は、Swiss Protデータベースに含まれているものとして既知である。アクチビンAへの言及は、βAホモ二量体、βA βB、βA βC、及びβA βEヘテロ二量体形態、並びにこれらのサブユニット、並びにこれらの前駆体のいずれかを含み、サブユニットは提供された例示的Swiss Prot配列又はこれらの配列の他の天然由来のヒト形態によって定められたプロペプチド及び/又はシグナルペプチドに結合される。アクチビンAは、ACVR2A又はACVR2Bへの結合を介してシグナル伝達を行うが、ACVR1に対するリガンドであることは知られていない。
アクチビンBは、βBサブユニットのホモ二量体として存在する。アクチビンBは、ACVR2A及びACVR2Bへの結合を介してシグナル伝達を行うが、ACVRIのリガンドであることは知られていない。アクチビンBへの言及は、提供された例示的なSwiss Prot配列、又はこの配列の他の天然由来のヒト形態によって定められ、ペプチド及びプロペプチドを含まない、全長βBポリペプチド又はその成熟ポリペプチド部分であり得るホモ二量体、つまりβBサブユニットポリペプチドを指す。
ヒトBMP9の例示的形態には、Swiss Prot Q9UK05が割り当てられている。このタンパク質は、残基1〜22がシグナルペプチドであり、残基23〜319がプロペプチドであり、残基320〜429が成熟ポリペプチドである、429個のアミノ酸を有する。BMP9は、ジスルフィド結合されたホモ二量体として天然に存在している。これは、ACVRIと相互作用すると考えられる。BMP9への言及は、提供された例示的なSwiss Prot配列、又はこの配列の他の天然由来のヒト形態によって定められ、シグナルペプチド及びプロペプチドを含まない、全長BMP9ポリペプチド又はその成熟ポリペプチド部分であり得るホモ二量体、つまりそのサブユニットを指す。
ヒトBMP10の例示的形態にはSwiss−Prot O95393が割り当てられており、残基1〜21はシグナルペプチド、残基22〜316はプロペプチド、残基317〜424は成熟ペプチドである。BMP10は、ジスルフィド結合されたホモ二量体として存在している。これは、ACVRIと相互作用すると考えられる。BMP10への言及は、提供された例示的なSwiss Prot配列、又はこの配列の他の天然由来のヒト形態によって定められ、シグナルペプチド及びプロペプチドを含まない、全長BMP10ポリペプチド又はその成熟ポリペプチド部分であり得るホモ二量体、つまりそのサブユニットを指す。
III.アクチビンB、BMP9及びBMP10に対する抗体
アクチビンB、BMP9及びBMP10はそれぞれ、ホモ二量体として天然に存在している。これらの標的のうちの1つに対する抗体は、ホモ二量体が形成される単量体サブユニットに結合せずにホモ二量体に特異的に結合でき(すなわち、対になったサブユニットの両方がエピトープに寄与する)、又は、ホモ二量体両方及び単量体サブユニットに特異的に結合でき、又は、ホモ二量体に結合せずに単量体サブユニットに特異的に結合できる(別のサブユニットと関連する場合、サブユニット内のエピトープが不明瞭)。アクチビンBに対する一部の抗体は、アクチビンAB(βBサブユニット内のエピトープ)にも特異的に結合するが、一方別の抗体は、アクチビンABに結合せずにアクチビンBに特異的に結合する(βBサブユニットの両方がエピトープに寄与する)。アクチビンBに対する一部の抗体は、インヒビンBに特異的に結合するが、他のものは結合しない。BMP9又はBMP10に対する一部の抗体は、BMP10に特異的に結合せずにBMP9に特異的に結合し、逆もまた同様である。一部の抗体は、BMP9及びBMP10の両方に特異的に結合する。別途記載のない限り、抗体は、ヒト形態の標的に特異的に結合する。抗体は、非ヒト同族形態の標的にも結合しても、結合しなくてもよい。非ヒト細胞、各マウス細胞中での試験のため、抗体が、ヒト標的、及び、試験される種におけるその標的の同族形態に、交差反応することが好ましい。
好ましい抗体は、実施例1に記載するアッセイにおいて、ACVR1H206を介する標的リガンドのシグナル伝達を阻害する。一部の抗体は、4nM未満、時には400pM又は40pM未満のIC50で、標的リガンドのシグナル伝達を阻害する。一部の抗体は、4nM〜10pM、又は3.5nM〜35pMの範囲のIC50でシグナル伝達を阻害する。好ましい抗体は、実施例2に記載するように、動物モデルにおいてFOPの異所性骨化症状を阻害する。
BMP9に対するいくつかのモノクローナル抗体は市販されており、又は、科学文献若しくは特許文献に記載されている。これらとして、R & D Systems,Inc.から入手できる米国特許出願公開第20140227254号のMAB3209、Novus Biologicals,LLCの4D2、並びに、米国特許出願公開第20140056902に記載されている抗体6D10−1−1、10D5−2−3及び3B7−3−3が挙げられる。
市販のBMP10に対するモノクローナル抗体として、MAC106Hu22(USCN Life Science Inc.)、MM0113−5L26(Ab CAM PLC)、及びMAB 2926(R & D Systems,Inc.)が挙げられる。
市販又は特許文献に記載のアクチビンBに対するモノクローナル抗体として、Sigma Aldridge又はR & S Biosystems,Inc.のクローン146807、GeneTex,Inc.の9M29、及び、米国特許出願公開第20090317921号の46A/Fが挙げられる。
任意のこれらの抗体のヒト化、キメラ、及びベニヤ化形態は、これらとの結合を競合する、又は同じエピトープを共有する抗体として含まれる。他の抗体は、上記の抗体のいずれかの重鎖及び軽鎖をコードするcDNAの突然変異誘発によって得ることができる。本発明には、成熟重鎖及び/若しくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列内の上記の抗体のいずれかと少なくとも90%、95%、若しくは99%同一であり、その機能特性を維持するモノクローナル抗体、並びに/又は少数の機能的に重要ではないアミノ酸置換(例えば、保存的置換)、欠失、若しくは挿入によってそれぞれの抗体とは異なるモノクローナル抗体も含まれる。例示した抗体のいずれかの対応するCDRと90%、95%、99%、又は100%同一である、少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、及び好ましくは6つ全てのCDRを有するモノクローナル抗体も含まれる。CDRは、好ましくはKabatによって定義されるとおりであるが、Chothia、Kabat−Chothia併用、接触定義、又はAbM定義(world wide webのbioinf.org.uk/absを参照)など任意の従来の別の定義によっても定義され得る。
抗体又は融合タンパク質の、その標的抗原への特異的結合とは、少なくとも10、10、10、10、又は1010−1の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能により強く、少なくとも1つの無関係標的に対して生じる非特異的結合と区別できる。
抗体への言及は、2対の重鎖及び軽鎖を有するインタクトな抗体、並びに抗原を結合できる抗体フラグメント(例えば、Fab、F(ab’)、Fv、短鎖抗体、二重特異性抗体(diabodies)、キメラ抗体、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体(bispecific antibodies)、ヒト化抗体など)、並びに前述のものを含む組み換えペプチドを含む。抗体フラグメントは、インタクトな抗体の抗原結合部分を含むフラグメントを指す。抗体フラグメントの例としては、Fab、F(ab’)2、及びFvフラグメント;二重特異性抗体;線状抗体(linear antibodies)(Zapata et al.(1995)Protein Eng.10:1057〜1062);短鎖抗体分子;並びに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。
抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。モノクローナル抗体は、実質的に均質の抗体の集団から得た抗体である。つまり、この集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る、自然発生し得る突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、極めて特異的であることが多く、単一抗原部位に対する抗体である。更に、通常、様々な決定基(エピトープ)に対する様々な抗体を含む従来の(ポリクローナル)抗体の調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、通常、抗原上の単一決定基に対する抗体である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の特性が、B細胞のクローン集団によって産生された抗体であるなど、実質的に均質の抗体集団から得られたものであることを示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要としない。
モノクローナル抗体は、Kohler et al.(1975)Nature 256:495によって最初に説明されたハイブリドーマ法、又はその改良法によって作製され得る。典型的には、マウスなどの動物は、抗原(例えば、アクチビンB、BMP9若しくはBMP10ホモ二量体、又はそれらのサブユニット、又はそれらの一部)を含有する溶液で免疫化される。
免疫化は、食塩水、好ましくはフロイント完全アジュバントなどアジュバント中で、抗原含有溶液を混合又は乳化し、混合物又はエマルションを非経口で注入することによって実行できる。動物の免疫化後、脾臓(及び、任意選択的に、数個の大リンパ節)を除去し、単一細胞に解離する。脾臓細胞は、対象抗原でコーティングしたプレート又はウェルに細胞懸濁液を適用することによってスクリーニングできる。抗原に対して特異的な、B細胞発現膜結合型免疫グロブリンをプレートに結合させ、洗い流さない。得られたB細胞、つまり全ての解離した脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマを形成し、選択培地内で培養する。得られた細胞は、系列希釈によってめっきを施し、対照抗原に特異的に結合する(かつ、無関係の抗原には結合しない)抗体の産生を測定する。次いで、in vitro(例えば、組織培養瓶又は中空繊維反応器内)又はin vivo(マウスの腹水として)で選択したモノクローナル抗体(mAb)分泌ハイブリドーマを培養する。
あるいは、モノクローナル抗体は、組み換えDNA法(例えば、米国特許第4,816,567を参照)によって作製できる。モノクローナル抗体はまた、例えば、Clackson et al.(1991)Nature 352:624〜628;Marks et al.(1991)J.Mol.Biol.222:581〜597;及び米国特許第5,514,548号に記載の技法を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離できる。
本モノクローナル抗体は、様々な抗体のアイソタイプのうち任意のもの、つまりIgG、IgM、IgE、IgD、又はIgAのクラスであってよい。アイソタイプIgGのモノクローナル抗体が好ましい。アイソタイプは、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4のうち任意のもの、特にヒトIgG1、IgG2、IgG3又はIgG4であってよい。エフェクター機能が望ましい場合にヒトIgG1が好ましいことが多く、望ましくない場合はIgG2又はIgG4であるが、別の方法としては、エフェクター機能が望ましくない場合に、ヒトIgG1に変異導入し、その機能を減弱してもよい。
重鎖のC末端リジンなど軽鎖及び/又は重鎖のアミノ末端又はカルボキシ末端にある1個又は複数個のアミノ酸は、欠落し得る、又は分子の一部及び全てにおいて誘導体化され得る。置換は定常領域において行われ得、補体媒介性細胞障害又はADCCなどエフェクター機能を増減する(例えば、米国特許第5,624,821号(Winterら);同第5,834,597号(Tsoら);及びLazar et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:4005,2006を参照)、又はヒトで半減期を延長させる(例えば、Hinton et al.,J.Biol.Chem.279:6213,2004を参照)。例示的置換としては、抗体の半減期を増加させるための位置250におけるGln、及び/又は位置428(EU番号付与)におけるLeuが挙げられる。234、235、236、及び/又は237のいずれかの位置における置換は、Fcγ受容体、とりわけFcγRI受容体に対する親和性を低減させる(例えば、米国特許第6,624,821号を参照)。任意選択的に、ヒトIgG2における位置234、236、及び/又は237はアラニンで置換され、位置235はグルタミンで置換される(例えば、米国特許第5,624,821号を参照)。エフェクター機能はまた、位置232〜236のEFLGをPVAで置換することにより低減できる(国際公開第14/121087号を参照)。任意選択的に、位置428のSはPで置換でき、とりわけヒトIgG4において、内因性免疫グロブリンと外因性免疫グロブリンとの間での交換を低減する。他の変異は、N−X−S/TモチーフにおけるN−結合グリコシル化など翻訳後修飾部位を追加又は除去できる。変異はまた、瘤(すなわち、より大型のアミノ酸での1個又は2個以上のアミノ酸の置換)又は孔(すなわち、より小型のアミノ酸での1個又は2個以上のアミノ酸の置換)の導入を含んで、二重特異性抗体の産生のために異なる重鎖間でのヘテロ二量体の形成を促進し得る。瘤及び孔の対を形成する例示的置換は、それぞれT336Y及びY407Tである(Ridgeway et al.,Protein Engineering vol.9 no.7 pp.617〜621,1996)。変異はまた、EU番号付与体系におけるプロテインA相互作用(例えば、H435R及びY436F)を低減させる突然変異を含み得る。一方の重鎖はかかる突然変異を有し、他方は有さない二重特異性抗体は、プロテインAの親和クロマトグラフィーによって親抗体から分離し得る。
IV.進行性骨化性線維異形成症(FOP)
FOPは、異所性骨化によって結合組織など骨外性部位において組織学的かつ生物学的に「正常な」骨を形成する、稀な遺伝性疾患である。この疾患は、偶発性であるが、累積的であり、重篤度が増加する不可逆的障害をもたらす。
FOPの世界的有病率は、約1/2,000,000である。FOPには、民族的、人種的、性的、又は地理的傾向はない。極めて重大な障害をもたらす疾患であるだけではなく、著しく短い寿命の疾患でもある。
FOPの特徴としては、例えば、母趾の先天性奇形、頭部、頸部、及び/又は背中の疼痛及び炎症を伴う軟組織腫脹を特徴とするフレアアップ、並びに軟骨内骨化による、進行性の異所性骨形成が挙げられる。
FOPは、母趾の奇形の存在に基づいて臨床的に疑われ得る。X線又は骨のスキャンなど診断検査によって、母趾の異常を実証し、異所性骨化の存在を確認できる。FOP診断はまた、遺伝子検査によって、例えば、ACVR1遺伝子で617 G>A(R206H)突然変異を検出することによって確認できる。
FOPが他の異所性骨化の疾患など他のいくつかの疾患として誤診されることはよくある。FOPは、鑑別診断によって、例えば、孤立性先天性奇形、リンパ水腫、軟部組織肉腫、類腱腫、悪性若年性線維腫症、若年性外反母趾、孤立性短趾、進行性骨異形成、及び異所性骨化などから区別されるべきである。母趾の先天性奇形及び疼痛を伴う軟組織のフレアアップの存在は、FOPを他の疾患と区別するために使用できる。
FOPを患う患者は、母趾の先天性奇形を有するが、出生時には正常に見える。FOPに関連するフレアアップは、生後10年間に始まる。フレアアップは、例えば、軟組織の損傷、剥落、披露、ウイルス感染、又は筋肉注射によって引き起こされ得る。フレアアップの結果として、間膜、骨格筋、又は腱など軟組織が異所性骨に変えられる。
これまでは、FOPの治療法はなかった。FOPは、安全性及び戦略を向上させて負傷を最小限に留めること、筋肉注射を回避すること、及び歯科治療を受けるときは注意することなど予防対策によって管理された。フレアアップの最初の24時間以内に高用量のコルチコステロイド治療を開始すると、フレアアップに関連する炎症及び浮腫の低減に役立ち得る。異所性骨を除去するという手術戦略は逆効果であり、外傷によって誘発された新たな異所性骨化を引き起こすため、推奨されない。
FOPは、GSドメインと抑制分子FKBP12との相互作用を不安定化させると見られる、ACVR1(ALK2としても知られる)における突然変異によって生じる(Groppe,J.,et al.2011,Cells Tissues Organs,194:291〜295)。FKBP12は、ACVR1の負のモジュレーターであり、非活性コンフォメーションで受容体を安定化させるように機能する(Huse,M.,et al.1999,Cell,96:425〜436)。Kaplan,F.S.,et al.2012,Disease Models&Mechanisms,5:756〜762を参照されたい。FOPに関連するACVR1での突然変異の例は、細胞内ドメインにおけるアルギニン206>ヒスチジン(R206H)突然変異である。
FOPを発症するリスクのある被験者としては、FOPに関連するACVR1 R206H突然変異又は他の突然変異を有する全被験者、母趾の奇形を持って生まれた被験者、又は当該技術分野において承認されている基準によって定められたFOPの診断に十分なFOPの症状をまだ発症していない、FOPの家族歴を有する被験者が挙げられる。
V.治療方法
本発明は、FOPを患う被験者に、有効なレジメンのアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体を投与することを含む、FOPの治療方法を提供する。
「被験者」は、FOP治療を与えたいと欲する、ヒト、霊長類、マウス及びラットなど齧歯類、イヌ、ネコ、畜牛、ウマ、ブタ、ヒツジなど農業用動物及び家畜など任意の動物(すなわち、哺乳類)である。本発明のいずれの方法においても、被験者は、哺乳類、好ましくはヒトであり得る。
有効なレジメンのアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体とは、少なくとも1つのFOPの兆候又は症状において肯定的な反応をもたらすアンタゴニスト投与の用量、頻度、及び経路の組み合わせを意味する。肯定的な反応は、少なくとも1つのFOPの兆候又は症状の低減、排除、改善、悪化の抑制を含み得る。肯定的な反応の対象であり得るFOPの兆候又は症状としては、例えば、異所性(ectopic)、つまり異所性(heterotopic)骨形成、FOPフレアアップ、又はフレアアップに伴う疼痛及び腫脹が挙げられる。レジメンは、治療前後の兆候及び症状を比較することによって、単一の患者で評価できる。レジメンは、治療後に少なくとも1つの兆候又は症状が肯定的な反応を示すと、効果的とみなされる。あるいは、又は加えて、レジメンは、アンタゴニスト又は本発明のアンタゴニストで治療した被験者の集団の兆候及び症状を、治療を受けていない被験者の対照集団と比較することによって評価できる。かかる比較のための被験者は、動物モデル又は臨床治験中(例えば、フェーズI、フェーズII、IIa、IIb、又はIII)のヒト被験者であり得る。レジメンは、統計的に有意な肯定的な反応が少なくとも1つの兆候又は症状において集団間に存在すると、効果的とみなされる。
いくつかのFOP治療方法では、被験者は、アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体で治療可能な他の疾患を有さないか、これらのリスクがない。例えば、被験者は、II型糖尿病、筋ジストロフィ、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、及び骨粗鬆症のいずれか又は全てを有さない場合がある。
A.投与法
アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体は、通常、タンパク質又は小分子として直接投与するが、タンパク質の場合、かかるタンパク質をコードする核酸としても投与できる。かかるアンタゴニストは、細胞トランスフェクション、遺伝子治療、送達ビヒクル又は薬学的に許容可能な担体での直接投与など、様々な方法で投与できる。
様々な送達系を使用して、本明細書で提供するアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体を投与できる。例えば、リポソーム中でのカプセル化、微小粒子、マイクロカプセル、化合物を発現できる組み換え細胞、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス(例えば、Wu and Wu,1987,J.Biol.Chem.262:4429〜4432を参照)、レトロウイルス又は他のベクトルの一部としての核酸の構築などが挙げられる。
投与法は、腸内投与でも、非経口投与でもあり得、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、肺内、鼻腔内、眼球内、硬膜外、及び経口の各経路を含む。化合物は、任意の好適な経路によって、例えば、注入又はボーラス注射によって、上皮層又は皮膚粘膜層(例えば、口腔粘膜、直腸、及び腸粘膜など)からの吸収によって投与し得、他の生物学的活性剤と共に投与できる。投与は全身性でも、局所的でもあり得る。加えて、脳室内注射及び髄腔内注射など任意の好適な経路によって本発明の医薬組成物を中枢神経系に導入することが望ましくあり得、脳室内注射は、例えば、Omcanaリザーバなどリザーバに装着した脳室内カテーテルによって容易になり得る。例えば、吸入具又は噴霧器の使用及びエアロゾル化剤を含む配合物によって、肺内投与を用いることができる。
本発明の医薬組成物は、治療を必要とする領域に局所的に投与できる。これは、例えば、手術中の局所注入、局所適用によって、例えば、注射によって、カテーテルによって、又は植え込み物によって達成でき、前記植え込み物は、有孔、無孔、又はSilastic膜(sialastic membranes)などの膜、繊維、若しくは市販の皮膚代替物などゲル状物質である。
医薬組成物は、小胞、具体的にはリポソームに入れて送達することもできる(Langer(1990)Science 249:1527〜1533を参照)。医薬組成物は、制御放出系、ポンプ(Langer(1990)上記参照)内にあっても、又は、ポリマー物質(Howard et al.(1989)J.Neurosurg.71:105参照)と共にあってもよい。
B.併用療法
アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体を、単独療法として、又は併用療法として投与できる。例えば、アクチビンB、BMP9又はBMP10のうち2つ、又は3つ全てに対する抗体を併用療法で投与してよい。2015年4月1日出願の米国特許仮出願第62/141,775号に更に記載されるように、アクチビンB、BMP9又はBMP10のうち任意又は全てに対する抗体を、ACVR1アンタゴニスト、ACVR2Aアンタゴニスト若しくはACVR2Bアンタゴニスト、又は、アクチビンAに対する抗体のうち任意又は全てと組み合わせて投与してもよい。好ましいACVR1、ACVR2A及びACVR2Bアンタゴニストは、Fcドメインに連結された細胞外ドメインを含む、Fc融合タンパク質である。ACVR1の別の好ましいアンタゴニストは、Mohedas et al.,(2013)ACS Chem.Biol.8:1291〜1302に記載される、小分子阻害剤であるLDN−212854である。アクチビンAに対する好ましい抗体として、米国特許出願公開第2015037339号中のH4H10446P及びH4H10430P、並びに、米国特許第8,309,082号に記載されているA1が挙げられる。併用療法において、複数の薬物を同時に、又は連続して投与してよい。
C.医薬組成物
本発明はまた、アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体と、薬学的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物も提供する。薬学的に許容可能とは、動物、より具体的にはヒトで使用するために、連邦政府又は州政府の規制機関の承認を受けているか又は受けることが可能か、米国薬局方又は他の一般的に承認されている薬局方に記載されていることを意味する。担体は、投与される治療剤を伴う、希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルである。かかる医薬担体は、石油、動物、植物、又は合成起源(ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油など)を含む、水及び油など滅菌液であり得る。好適な薬学的に許容可能な賦形剤としては、澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。所望に応じて、組成物はまた、少量の湿潤剤、乳化剤、又はpH緩衝剤を含み得る。被経口投与向けの医薬組成物は、多くは滅菌され、実質的に等張であり(浸透圧は約250〜350mOsm/kg HO)、GMP条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形(すなわち、単回投与用量)で提供されてよい。
これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、徐放性製剤、凍結乾燥品などの形態を取り得る。組成物は、従来の結合剤及び担体、トリグリセリドなどを使用して、座薬として配合され得る。経口配合物は、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的担体を含み得る。好適な製薬担体は、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」(E.W.Martin)に記載されている。
組成物は、ヒトへの静脈内投与又は皮下投与に適するように処方されてよい。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位での疼痛を緩和するリドカインなど局所麻酔剤を含み得る。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌医薬品等級の水又は生理食塩水を含有する注入ビンを用いて分注することができる。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
本明細書に提供されるアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体は、中性形態又は塩形態として処方されてよい。薬学的に許容可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなど遊離型のアミノ基と共に形成されるもの、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなど遊離型のカルボキシル基と共に形成されるもの、が挙げられる。
FOPの治療に有効な特定の経路で投与される、アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体の量及び頻度(例えば、有効なレジメン)は、本明細書の記載に基づき、標準的臨床技術によって決定できる。加えて、in vitroアッセイ又は動物モデルを使用して、最適な用量範囲の同定に役立てることができる。配合物に使用する正確な用量はまた、投与経路、及び疾患の深刻度によって異なるため、担当医の判断及び各被験者の状況に従って決定するべきである。しかしながら、投与のための好適な用量範囲は、一般に、体重1キログラムあたり約20〜50000マイクログラムの活性化合物である。
上記又は以下で引用した全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号などは、あたかもそれぞれ個々のアイテムが参照により組み込まれると具体的かつ個別的に示されるように、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。異なるバージョンの配列がその時々においてアクセッション番号と関連付けられる場合、本願の有効出願日に当該アクセッション番号と関付けられたバージョンを意図する。有効出願日は、実際の出願日又は、該当する場合、アクセッション番号を参照する優先出願の出願日の早い方を意図する。同様に、異なるバージョンの刊行物、ウェブサイトなどがその時々に公開される場合、別途記載のない限り、本願の有効出願日の直近に公開されたバージョンを意図する。本発明の機構、工程、要素、実施形態、又は態様はいずれも、別途記載のない限り、組み合わせて使用することができる。
実施例1:この実施例では、AVCR1[R206H]変異を有する細胞において、異所性骨化を誘導するリガンドを同定する。
材料及び方法
HEK293細胞に、10回のタンデムリピートのGCに富むBMP応答配列(BRE;5’−GCCGCCGCagc−3’)、及び、マウスオステオカルシン遺伝子由来の168bpのミニマルプロモーターを含む、改変pFAベクター(Stratagene)をトランスフェクトした。BREを用いて、ホタルルシフェラーゼを発現させた。Lipofectamine 2000(Invitrogen)でトランスフェクトし、その後500μg/mLのG418で選択して、対応する安定発現株を作製した。特に明記しない限り、細胞は、10%(v/v)のウシ胎児血清、50単位/mLのペニシリン/ストレプトマイシン、及び2mMのL−グルタミンを含む、DMEM中で培養した。ヒトACVR1のcDNAを、pCMV発現ベクターにクローニングした(pCMV.ACVR1)。ACVR1[R206H]変異型をpCMV.ACVR1内に導入し、配列決定によって確認した。ACVR1野生型及びR206H過剰発現HEK293/BRE−Luc安定発現株を生じさせるため、TransIT−LT1トランスフェクション用試薬(Mirus)を取扱説明書に従って使用して、HEK293/BRE−Luc細胞にpCMV.ACVR1又はpCMV.ACVR1[R206H]をトランスフェクトした。100μg/mLのハイグロマイシンBで選択することによって、安定発現株を生じさせた。ほぼ同一レベルのACVR1及びACVR1[R206H]を発現している安定的にトランスフェクトされた細胞プールを、抗ACVR1抗体で表面染色した後、蛍光活性化細胞分類(FACS)によって生成させた(下記参照)。得られたプールをシグナル伝達アッセイに使用した。
ACVR1発現細胞を選択するためのFACS分類
生細胞染色のため、15×10個の細胞をTrypLE Express Enzyme(Life Technology)で処理した。回収した細胞を、2%FBSを含むPBSで洗浄し、5μμg/mLのモノクローナルマウス抗ヒトACVR1抗体(R&D SystemsのMAB637)を用いて、4℃で1時間染色した。続いて、細胞を、2% FBSを含むPBSで1回洗浄し、ヤギ抗マウスIgG Alexa Flour 647(Invitrogen)を検出に使用した。2% FBSを含むPBSで2回洗浄した後、70μmのセルストレーナーで細胞を濾過した。DAPI陽性の生細胞を、hACVR1の細胞表面発現について分類した。MoFlo XDP(Beckman Coulter)でプールを回収した。ACVR1の発現は、更に表面染色を行うことによって、FACS系細胞分類後に確認した。
HEK293/Bre−Lucレポーター株におけるシグナル伝達アッセイ
HEK293/BRE−Lucレポーター細胞株を、10,000個/0.33cmの細胞で96ウェルプレート(Thermo Scientific)にプレーティングし、37°℃で3時間インキュベートした。細胞を記載するように処理した。競合アッセイでは、rhアクチビンA及びrhBMP6(R&D Systems)を記載の濃度で予め混合し、その後細胞に加えた。アクチビンA抗体を含む実験では、レポーター細胞を上記のようにプレーティングし、アクチビンA抗体を組み換えアクチビンと共に30分間予めインキュベートした後、細胞に加えた。全てのレポーターアッセイでは、Bright−Glo Luciferase Assay System(Promega)で16時間処理した後、ルシフェラーゼ発現を測定した。
結果:
ACVR1又はACVR1[R206H]のいずれかをほぼ同一レベルで安定的に発現しているHEK293/BRE−Lucレポーター株を、BMP及びTGFβファミリーに属するリガンドパネルに対する応答について試験した。ACVR1[R206H]は、標準的リガンドの一部(全てではない)に応答するシグナル伝達の増加を示した。具体的には、BMP2、BMP4、BMP7、BMP9、及びBMP10への応答が増加し、一方、BMP2/7、BMP4/7、BMP5、及びBMP6への応答は変わらなかった(表1)。これらの実験も、ACVR1[R206H]の予想外の特性を対象としなかったが、野生型ACVR1が測定可能な応答を示さない、一連の「非標準的」リガンドであるアクチビンA、AB、AC、アクチビンB、及び恐らくはBMP15に応答するようになっている。
Figure 2018518461
−=EC50>1e−7又はCmaxなし
最大倍率変化=Cmaxにおける倍率変化
イタリック=シグナルがACVR1[R206H]発現細胞にのみ観察された
薄灰=同一のシグナルが両株に観察された
濃灰=ACVR1[R206H]発現細胞がより応答する
観察された結果が過剰発現のアーチファクトであったという可能性を排除するため、ACVR1[R206H]の変化したシグナル伝達特性が、ノックインAcvr1[R206H]FlEx/+;Gt(ROSA26)SorCreERT2/+ES細胞で再現されるかどうかを実験した。これらの実験中、Creによる活性化に先立ち、Acvr1[R206H]FlEx対立遺伝子が低形質性であり、エクソン5を欠損している転写物の約半分であることを発見した。したがって、機能的には、Acvr1[R206H]FlEx/+細胞は、Acvr1null/+とほぼ同等である。それにもかかわらず、HEK293細胞で得られたデータと一致して、Acvr1[R206H]FlEx/+;Gt(ROSA26)SorCreERT2/+ES細胞と、その「Cre活性化」物であるAcvr1[R206H]/+;Gt(ROSA26)SorCreERT2/+ES細胞との間を比較すると、後者は、アクチビンAに応答するようになっていた。この変化した応答性は、Acvr1[R206H]/null;Gt(ROSA26)SorCreERT2/+ES細胞にも観察され、このことは、Acvr1[R206H]の1つの対立遺伝子がシグナル伝達を変化させるのに十分であり、野生型対立遺伝子の存在により、この異常応答は顕著に改変されないが、シグナルの増加に寄与していることを示している。アクチビンA・Acvr1[R206H]を介するシグナル伝達の活性化は、Smad1/5/8を利用し、Smad2/3へのシグナル伝達の変換は関与しなかった。更に、これらの細胞中のAcvr1[R206H]変異型の存在により、標準的な受容体及びSmad2/3を介するアクチビンAのシグナル伝達を顕著に変化させるように思われない。
これらのデータは、I型BMP受容体の細胞内ドメイン中のアミノ酸変化が、この受容体の応答性を質的に変化させることができ、非標準的リガンドによる活性化を許容できる状態にすることを示す。このことがいかに起きたかという1つの説明としては、ACVR1[R206H]がFKBP12に対して示す親和性が低下していることにあるだろう(Groppe et al.,Clin Orthop Relat Res 462,87(Sep,2007)及びCells,Tissues,Organs 194,291(2011)。したがって、FKBP12の結合がFK506によって低下した場合に、野生型ACVR1がアクチビン応答性受容体に変換できるかどうかを試験した。FK506による唯一の影響は、標準的リガンドからのシグナル伝達を強化することであり、野生型ACVR1をアクチビンAに対して応答するようにできないことを示す。
また、非標準的リガンドに対する応答性が、それらに対する結合能をACVR1[R206H]が得ることによって単純に説明できるかどうかについても調べた。このことは、LacZで補完することによってI型とII型BMP受容体との間の会合を報告する人工融合受容体(DiscovRx(Fremont,CA))を利用するアッセイにおいて試験した。ACVR1は、これらの非標準的リガンドの存在下でACVR2Aと共にヘテロ二量体を形成することが示された。これらのデータは、ACVR1[R206H]の応答性の変化は、この受容体によって新たに獲得される結合特性に起因し得ないことを示している。更に、アクチビンの、ACVR1及びACVR2と非シグナル伝達複合体を形成する能力は、アクチビンが、ACVR1を介する標準的なBMPシグナル伝達の拮抗阻害剤としての機能を果たすことができないという証拠を示している。実際に、アクチビンAは、HEK293/BRE−Lucレポーター細胞を過剰発現している野生型ACVR1を用いる競合アッセイにおいて、BMP6誘発性シグナル伝達を阻害する(図2)。総合すれば、これらの結果は、野生型ACVR1に対するACVR1[R206H]の最も顕著かつ唯一の識別される能力は、非標準的リガンドからシグナルを伝達する形成能であることを示している。加えて、非標準的リガンドが、時に、標準的なACVR1媒介性シグナル伝達の拮抗阻害剤として機能し得るという証拠を示している。
実施例2:FOPのマウスモデルにおける異所性骨形成を抑制するためのアクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体の使用
ACVR1[R206H]をコードする条件付きの対立遺伝子を有するトランスジェネリックノックインマウスを作製する。これらのAcvr1[R206H]COIN/+マウスは、参照によりその全体が組み込まれる、米国特許出願第14/207,320号及び国際出願PCT/US2014/026582号に記載されている。この対立遺伝子は、Creリコンビナーゼによる活性化後にのみR206H変異体を発現する。これにより、異なる種類のCreドライバー株を使用することによって、特定の組織で、かつ特定の時間にACVR1[R206H]発現のCre依存性活性化が可能になる。このようにして、得られたマウスはまた、ACVR1[R206H]の未規制ノックイン対立遺伝子で見られる周産期致死性を回避する。若年又は成年マウスでのACVR1[R206H]発現の活性化は、異所性骨形成をもたらす。例えば、Acvr1[R206H]COIN/+;Gt(ROSA26)SorCreERt2/+マウス(CreERt2は、Gt(ROSA26)Sor遺伝子座内に導入されているが、構成的かつ網羅的に発現されるタモキシフェン調節性リコンビナーゼである(Feil et al.(1997)Biochem.Biophys.Res.Commun.237(3):752−7参照))は、タモキシフェン曝露後にFOPを発症する。つまり、タモキシフェンの不在下では、CreERt2は不活性である。タモキシフェンは、Creの発現を活性化させ、これが続いて、Acvr1[R206H]COIN/+に作用してAcvr1[R206H]/+に変換することによって、ACVR1[R206H]であるFOP患者の遺伝子型をミラーリングするようにマウスの遺伝子型を変換する。Acvr1[R206H]対立遺伝子はAcvr1[R206H]を発現し、このことは、Acvr1[R206H]/+;Gt(ROSA26)SorCreERt2/+マウスにおけるFOPの発症の促進に十分である。これにより、従来のAcvr1[R206H]ノックインマウスであるAcvr1tm1Emsh(http://www.informatics.jax.org/allele/key/828153)で経験される胚性致死性を回避する。
Acvr1[R206H]COIN/+;Gt(ROSA26)SorCreERt2/+マウスに、タモキシフェンを1mg/マウスの用量で8日間腹腔内投与する。マウスを、10mg/kgのアクチビンB、BMP9若しくはBMP10に対する抗体、又は、10mg/kgの無関係な対照抗体で、週2回、6週間治療する。マウスを、ベースライン時、タモキシフェン投与開始から2週間後、4週間後、及び6週間後に、in vivo μCTを使用して観察する。
図3A〜Gは、タモキシフェン投与6週間後、アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体による治療を受けなかったAcvr1[R206H]FlEx/+;Gt(ROSA26)SorCreERT2/+マウスにおける異所性骨形成を示す。異所性骨成長は、(A)胸骨、(B)尾椎及び(C)股関節中の既存の骨格の隣接部を含む、様々な異なる部位で見つかった。(D)異所性骨成長は、タモキシフェン注射後2〜4週間に形成され、既存の骨格の遠位に起こり得る。これらの異所性骨病変は、既存の骨格と融合し得る。背方から見た異所性骨病変の(E)ex−vivo μCT画像は、大腿骨から骨盤までの架橋を示している。(F)異所性骨からの横断図は、新たに形成された骨が皮質骨及び骨梁様の両方の構造を有していることを示す。異所性骨と内在性骨格の交差部位(矢じり)において、皮質骨の再形成の証拠はあるが、骨髄共有の証拠はない。(G)異所性骨病変の組織切片のH&E染色は、皮質骨(c)及び骨梁(t)様構造、並びに骨髄(bm)を示す。
6週間後、治療群よりも対照群のマウスにおいて、少なくとも1ヶ所における異所性骨がより多く発生する。

Claims (6)

  1. 進行性骨化性線維異形成症(FOP)を治療するための薬剤の製造における、アクチビンB、BMP9又はBMP10に対する抗体の使用。
  2. 前記抗体が、キメラ抗体、ベニヤ化抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体である、請求項1に記載の使用。
  3. 前記抗体がインタクトな抗体である、請求項1又は2に記載の使用。
  4. 前記抗体がヒトκIgG1抗体である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の使用。
  5. アクチビンB、BMP9及びBMP10のうち2つ又はそれ以上に対する抗体の組み合わせが投与される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用。
  6. 前記抗体が、ACVR1、ACVR2A、若しくはACVR2Bの細胞外ドメイン−Fc融合タンパク質、又は、アクチビンAに対する抗体との併用療法で投与される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021534430A (ja) * 2018-08-17 2021-12-09 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 心房細動の評価における循環bmp10(骨形成タンパク質10)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160075772A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Treatment of Fibrodysplasia Ossificans Progressiva

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011158924A1 (ja) * 2010-06-18 2011-12-22 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター 優性アレル発現抑制剤
WO2014051109A1 (ja) * 2012-09-28 2014-04-03 協和発酵キリン株式会社 抗ヒトbmp9抗体および該抗体を有効成分とする異所性骨化疾患の治療剤
WO2015152183A1 (ja) * 2014-03-31 2015-10-08 大日本住友製薬株式会社 進行性骨化性線維異形成症の予防剤及び治療剤

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH652145A5 (de) 1982-01-22 1985-10-31 Sandoz Ag Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4634666A (en) 1984-01-06 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Human-murine hybridoma fusion partner
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
DE69230142T2 (de) 1991-05-15 2000-03-09 Cambridge Antibody Tech Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
EP0746609A4 (en) 1991-12-17 1997-12-17 Genpharm Int NON-HUMAN TRANSGENIC ANIMALS CAPABLE OF PRODUCING HETEROLOGOUS ANTIBODIES
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
CA2115811A1 (en) 1993-02-17 1994-08-18 Claus Krebber A method for in vivo selection of ligand-binding proteins
US5914349A (en) 1994-01-10 1999-06-22 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
KR100483832B1 (ko) 1999-02-05 2005-04-20 삼성전자주식회사 영상 텍스쳐 기술자 추출 방법
EP2298809A3 (en) 2001-07-12 2012-02-15 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
CL2007002567A1 (es) 2006-09-08 2008-02-01 Amgen Inc Proteinas aisladas de enlace a activina a humana.
US8642031B2 (en) 2006-11-02 2014-02-04 Acceleron Pharma, Inc. Antagonists of BMP9, BMP10, ALK1 and other ALK1 ligands, and uses thereof
US8383351B2 (en) 2008-06-11 2013-02-26 Oxford Brookes University Antibody to inhibin/ activin β-B subunit
WO2013063536A1 (en) * 2011-10-27 2013-05-02 Acceleron Pharma, Inc. Actriib binding agents and uses thereof
CN104411720B (zh) 2012-07-02 2018-05-11 协和发酵麒麟株式会社 以抗bmp9抗体作为有效成分的、对肾性贫血、癌性贫血等贫血的治疗剂
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
TW201920262A (zh) 2013-07-30 2019-06-01 美商再生元醫藥公司 抗活化素a之抗體及其用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011158924A1 (ja) * 2010-06-18 2011-12-22 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター 優性アレル発現抑制剤
WO2014051109A1 (ja) * 2012-09-28 2014-04-03 協和発酵キリン株式会社 抗ヒトbmp9抗体および該抗体を有効成分とする異所性骨化疾患の治療剤
WO2015152183A1 (ja) * 2014-03-31 2015-10-08 大日本住友製薬株式会社 進行性骨化性線維異形成症の予防剤及び治療剤

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
日本未熟児新生児学会雑誌, vol. 22, no. 1, JPN6020010530, 2010, pages 30 - 32, ISSN: 0004437509 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021534430A (ja) * 2018-08-17 2021-12-09 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 心房細動の評価における循環bmp10(骨形成タンパク質10)
JP7232434B2 (ja) 2018-08-17 2023-03-03 エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー 心房細動の評価における循環bmp10(骨形成タンパク質10)

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