JP2018166419A - 細胞膜穿孔用容器およびこれを用いた細胞膜穿孔方法 - Google Patents
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Abstract
Description
第1の発明は、細胞膜穿孔用容器に関し、可撓性材料で形成される第1袋体と、可撓性材料で形成されるとともに前記第1袋体に積層される第2袋体と、を備え、前記第1袋体は、その内部と外部とを連通可能な第1連通口と、前記第2袋体に対向する第1内面と、その反対側に位置する第1外面と、前記第1内面に設けられた第1開口部とを有し、前記第2袋体は、その内部と外部とを連通可能な第2連通口と、前記第1袋体に対向する第2内面と、その反対側に位置する第2外面と、前記第2内面に設けられた第2開口部とを有し、前記第1袋体および前記第2袋体は、前記第1開口部および前記第2開口部に設けられるとともに、液体が透過可能であり、かつ、細胞が透過不能なメッシュサイズを有する細胞担持フィルタを介して連通し、前記第2外面の内側には、前記細胞担持フィルタに対向する位置に細胞に穿孔可能な穿孔体を備えることを特徴とする。
細胞膜穿孔用容器1は、重ねて配置される第1袋体10と第2袋体20とを含む。第1袋体10は、光透過性の可撓性材料で形成され、その内部と外部とを連通可能な第1連通口11と、第2袋体に対向する第1内面12と、その反対側に位置する第1外面13と、第1内面12の中央近傍に設けられた第1開口部14とを有する。第1内面12と第1外面13とは、その周囲において水密に固着される。
第2袋体20の第2外面23の内側には、細胞担持フィルタ3に対向する位置に細胞に穿孔可能な穿孔体4を備える。穿孔体4は、光透過性であり、より具体的には透明な材料により構成されることが望ましい。図4を併せて参照すれば、穿孔体4は、第2外面23に接合されるベース部41と、ベース部41から細胞担持フィルタ3に向かって突出する複数の突起部42とを備え、突起部42には細胞膜に対する酸化処理手段を備える。突起部42は、直径約0.3〜1μm、高さ約0.3〜2μm、ピッチ約0.3〜3μmに設定することができる。
以下の実験により、細胞膜穿孔用容器1を用いて細胞群に穿孔を形成した。細胞群として、神経系株化細胞PC12を用いた。この細胞の培養は、T.K. Saito, M. Takahashi, H. Muguruma, E. Niki and K. Mabuchi, “Phototoxic process after rapid photosensitive membrane damage of 5,5 ″ -bis(aminomethyl) -2,2 ′ :5 ′ ,2 ″ -terthiophene dihydrochloride”, J. Photochem. Photobiol., Vol.61, Issue 3, pp.114-121 (2001)の細胞培養に関する記述に準じておこなった。
1.透過像と蛍光像のファイルを読み込み、出力像ファイルを指定する。
2.透過像より細胞が存在する領域(細胞よりも小さな異物を排除判定)を自動算出し、蛍光像における同領域の輝度情報のみを有効とし、細胞が存在しないと判定された領域を輝度0とする。
3.このようにして、細胞領域由来の蛍光のみ自動認識した画像を出力像ファイルとして保存する。
4.その上で、細胞が存在する領域における平均輝度を計算および表示する。
3 細胞担持フィルタ
4 穿孔体
10 第1袋体
11 第1連通口
12 第1内面
13 第1外面
14 第1開口部
20 第2袋体
21 第2連通口
22 第2内面
23 第2外面
24 第2開口部
41 ベース部
42 突起部
Claims (7)
- 可撓性材料で形成される第1袋体と、
可撓性材料で形成されるとともに前記第1袋体に積層される第2袋体と、を備え、
前記第1袋体は、その内部と外部とを連通可能な第1連通口と、前記第2袋体に対向する第1内面と、その反対側に位置する第1外面と、前記第1内面に設けられた第1開口部とを有し、
前記第2袋体は、その内部と外部とを連通可能な第2連通口と、前記第1袋体に対向する第2内面と、その反対側に位置する第2外面と、前記第2内面に設けられた第2開口部とを有し、
前記第1袋体および前記第2袋体は、前記第1開口部および前記第2開口部に設けられるとともに、液体が透過可能であり、かつ、細胞が透過不能なメッシュサイズを有する細胞担持フィルタを介して連通し、
前記第2外面の内側には、前記細胞担持フィルタに対向する位置に細胞に穿孔可能な穿孔体を備えることを特徴とする細胞膜穿孔用容器。 - 前記穿孔体は、前記第2外面に接合されるベース部と、前記ベース部から前記細胞担持フィルタに向かって突出する複数の突起部とを備え、前記突起部には細胞膜に対する酸化処理手段を備えることを特徴とする請求項1記載の細胞膜穿孔用容器。
- 前記酸化処理手段は光増感剤であり、
前記第1袋体は、光透過性であることを特徴とする請求項2記載の細胞膜穿孔用容器。 - 前記穿孔体は、前記第2外面から前記細胞担持フィルタに向かって押圧されるとともに、前記細胞担持フィルタよりも前記1外面側に、押圧力を分散するための圧力分散手段を備えることを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の細胞膜穿孔用容器。
- 可撓性材料で形成される第1袋体と、
可撓性材料で形成されるとともに前記第1袋体に積層される第2袋体と、を備え、
前記第1袋体は、その内部と外部とを連通可能な第1連通口と、前記第2袋体に対向する第1内面と、その反対側に位置する第1外面と、前記第1内面に設けられた第1開口部とを有し、
前記第2袋体は、その内部と外部とを連通可能な第2連通口と、前記第1袋体に対向する第2内面と、その反対側に位置する第2外面と、前記第2内面に設けられた第2開口部とを有し、
前記第1袋体および前記第2袋体は、前記第1開口部および前記第2開口部に設けられるとともに、液体が透過可能であり、かつ、細胞が透過不能なメッシュサイズを有する細胞担持フィルタを介して連通し、
前記第2外面の内側には、前記細胞担持フィルタに対向する位置に細胞に穿孔可能な穿孔体を備える細胞膜穿孔用容器を用いた細胞膜穿孔方法であって、
複数の細胞を含む細胞培養液を前記第2袋体に前記第2連通口から注入する工程と、
前記第1袋体の前記第1連通口からその内部の気体または液体を吸引する工程と、
前記細胞担持フィルタに前記穿孔体を押圧する工程とを含むことを特徴とする細胞膜穿孔方法。 - 前記穿孔体は、前記第2外面に接合されるベース部と、前記ベース部から前記細胞担持フィルタに向かって突出する複数の突起部とを備え、前記突起部には光増感剤を備え、
前記細胞担持フィルタに前記穿孔体を押圧させた状態で前記穿孔体に光刺激を供給する工程を含むことを特徴とする請求項5記載の細胞膜穿孔方法。 - 前記穿孔体は、光透過性であり、
前記光刺激は、前記穿孔体を介して供給されることを特徴とする請求項6記載の細胞膜穿孔方法。
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橋本 孝博 他: "細胞集団を改変可能なナノインプリント技術による光化学細胞膜穿孔体の高機能化 Functional Improvement", ロボティクスメカトロニクス講演会2016講演会論文集, JPN6020026451, ISSN: 0004310138 * |
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