JP2018141797A5 - - Google Patents
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Claims (14)
- 下記のタンパク質（１）〜（３）を含むエンドトキシン測定剤であって、該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質である、測定剤。
（１）下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）であって、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ。
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。
（２）カブトガニのファクターＢ。
（３）カブトガニのプロクロッティングエンザイム。 - 前記ファクターＢが下記のタンパク質（Ｃ）または（Ｄ）であり、且つ、前記プロクロッティングエンザイムが下記のタンパク質（Ｅ）または（Ｆ）である、請求項１に記載の測定剤。
（Ｃ）配列番号４に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｄ）配列番号４に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＢの活性を有するタンパク質。
（Ｅ）配列番号６に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｆ）配列番号６に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、プロクロッティングエンザイムの活性を有するタンパク質。 - 前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞である、請求項１または２に記載の測定剤。
- 前記ファクターＣのＣ末端は、ペプチドが付加されていない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の測定剤。
- 下記の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、エンドトキシン測定剤の製造方法。
（ａ）下記のＤＮＡ（１）〜（３）の各々をベクターに組み込む工程。
（１）下記のＤＮＡ（Ａ’）または（Ｂ’）であって、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣをコードするＤＮＡ
（Ａ’）配列番号１に示す塩基配列を含むＤＮＡ。
（Ｂ’）配列番号１に示す塩基配列の全体または一部に対する相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
（２）カブトガニのファクターＢをコードするＤＮＡ
（３）カブトガニのプロクロッティングエンザイムをコードするＤＮＡ
（ｂ）前記各ＤＮＡが組み込まれたベクターを、各々昆虫細胞に導入し、昆虫細胞の染色体に前記各ＤＮＡを組み込む工程。
（ｃ）前記各ＤＮＡが組み込まれた昆虫細胞に、各々のＤＮＡにコードされるタンパク質を発現させる工程。 - 前記ファクターＢをコードするＤＮＡが下記のＤＮＡ（Ｃ’）または（Ｄ’）であり、且つ、前記プロクロッティングエンザイムをコードするＤＮＡが下記のＤＮＡ（Ｅ’）または（Ｆ’）である、請求項５に記載の製造方法。
（Ｃ’）配列番号３または８に示す塩基配列を含むＤＮＡ。
（Ｄ’）配列番号３または８に示す塩基配列の全体または一部に対する相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、ファクターＢの活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
（Ｅ’）配列番号５または９に示す塩基配列を含むＤＮＡ。
（Ｆ’）配列番号５または９に示す塩基配列の全体または一部に対する相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、プロクロッティングエンザイムの活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。 - 前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞である、請求項５または６に記載の製造方法。
- 前記ファクターＣのＣ末端は、ペプチドが付加されていない、請求項５〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
- 下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）であって、昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られ、且つ、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない、ファクターＣ。
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。 - 下記の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、ファクターＣの製造方法。
（ａ）下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）であってＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣをコードするＤＮＡを、ベクターに組み込む工程。
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。
（ｂ）前記ＤＮＡが組み込まれたベクターを、昆虫細胞に導入し、昆虫細胞の染色体に前記ＤＮＡを組み込む工程。
（ｃ）前記ＤＮＡが組み込まれた昆虫細胞に、当該ＤＮＡにコードされるタンパク質を発現させる工程。 - （ａ）前記ＤＮＡが、下記ＤＮＡ（Ａ’）または（Ｂ’）である、請求項１０に記載の製造方法。
（Ａ’）配列番号１に示す塩基配列を含むＤＮＡ。
（Ｂ’）配列番号１に示す塩基配列の全体または一部に対する相補配列とストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズし、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。 - 請求項１〜４のいずれか１項に記載の測定剤と被験試料とを混合する工程、およびカスケード反応の進行を測定する工程を含む、被験試料中のエンドトキシン測定法。
- カスケード反応の進行を検出するための基質を反応系に添加する工程を含む、請求項１２に記載の測定法。
- さらに、前記基質の反応に基づき、被験試料中のエンドトキシン量を算出する工程を含む、請求項１３に記載の測定法。
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