JP2018120184A - 画像校正色標及び画像校正色標製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】色標と病理標本との撮像環境の変化を抑制し、かつ色標のデジタル画像の撮像の工程における効率を上げることが可能な画像校正色標を提供する。【解決手段】画像校正色標１は、検査試料（病理標本）２００を載せる透明部材（スライドガラス）１００表面に顕微鏡の一視野に全体が含まれる大きさで形成され、透明部材１００上に載せる検査試料２００の撮像画像の色を校正するために用いられる、少なくとも３つの異なる色の色標パッチ１−１〜１−６を含んで構成されている。【選択図】図１

Description

本発明は、撮像画像の色の校正に用いる画像校正色標及び画像校正色標製造方法に関する。

病理診断医学は、病気の原因や発生機序の解明や病気の診断（病理診断）を目的とし、特に細胞、組織及び臓器の病理標本を、肉眼あるいは顕微鏡によって観察して診断を行なう医学の一分野である。
近年、上記病理診断医学において、デジタルカメラなどの撮像装置により、顕微鏡の視野範囲におけるスライドガラス上の病理標本の画像をデジタルカラー画像（以下、単にデジタル画像）として撮像し、表示装置の表示画面にこのデジタル画像を表示して、病理医師が病理診断を行なっている。

厚生労働省は、デジタル画像を用いた病理診断の検査において、診断の正確性を期すために、一人の病理医師の診断結果を採用するのではなく、他の病理医師も診断を行なうダブルチェックの必要性を求めている。
しかし、病理医師の数が全国的に少なく、一つの医療施設に２人以上の病理医師が常駐する病院数は、日本全体の病院の５％にも満たない（２０１５年度の厚生労働省データ）。そのため、現状においては、異なる医療施設の病理医師の間において、ダブルチェックが行なわれている。

このダブルチェックにおいて、病理診断を行なった病理医師は、ダブルチェックを行なう他の病理医師に対し、病理標本のデジタル画像を送信する。このとき、顕微鏡、撮像装置及び表示装置の各々の特性が、病理医師間の保有する装置間で異なる場合、病理標本のデジタル画像における画質や色再現の特性が均一に保てない。
このため、現状としては、ダブルチェックを行なう病理医師に対して、病理標本の現物を送付し、ダブルチェックとしての病理診断が行なわれている。

上述した問題を解決するため、病理標本のデジタル画像の色を校正するため、校正用の色標が作成されている（例えば、非特許文献１）。
この校正用の色標は、デジタル画像の色の校正に用いられる。この結果、病理標本のデジタル画像から予測する三刺激値は、実際の測定した三刺激値に対して、色差ΔＥ^＊ａｂを５から８の範囲内に抑制される。これにより、病理医師間における病理診断のダブルチェックを、病理標本のデジタル画像を用いて行なうことが可能となる。

Yuri Murakami, Hikaru Gunji, Fumikazu Kimura, Masahiro Yamaguchi, Yoshiko Yamashita, Akira Saito, Tokiya Abe, Michiie Sakamoto, Pinky A. Bautista, Yukako Yagi. "Color correction in whole slide digital pathology." 20th Color and Imaging Conference: Color Science and Engineering Systems, Technologies, and Applications, CIC 2012 - Los Angeles, CA, United States, 2012, Color and Imaging Conference Final Program and Proceedings:253-258.

しかしながら、上述した非特許文献１における色標は、カラーフィルムを用いて作成されているため、サイズが１４．８（ｍｍ）×１４．８（ｍｍ）と大きく、病理標本と同一のスライドガラス上に配置されているわけでなく、異なるスライドガラスに形成されている。このため、色標のデジタル画像を撮像した後、色標の形成されたスライドガラスを外し、病理標本が取り付けられたスライドガラスを顕微鏡にセットする処理が必要となる。
これにより、色標及び病理標本の各々の撮像における撮像環境（光源環境）が変化し、色標を用いた病理標本のデジタル画像における色の校正を正確に行なうことができなくなる。

また、非特許文献１における色標は、サイズが大きく、顕微鏡の一視野に色標の全体が入らないため、色標を構成する色標パッチを一つずつ別々に撮像する必要がある。また、色標と病理標本における撮像倍率を変化させる必要もあり、色標のデジタル画像の撮像に手間がかかり、色標のデジタル画像の撮像の工程における効率が低下する。

本発明は、このような状況に鑑みてなされたもので、色標と病理標本との撮像環境の変化を抑制し、かつ色標のデジタル画像の撮像の工程における効率を上げることが可能な画像校正色標及び画像校正色標製造方法を提供する。

上述した課題を解決するために、本発明の画像校正色標は、検査試料を載せる透明部材表面に顕微鏡の一視野に全体が含まれる大きさで形成され、当該透明部材上に載せる前記検査試料の撮像画像の色を校正するために用いられる、少なくとも３つの異なる色の色標パッチを含んで構成されていることを特徴とする。
本発明の画像校正色標は、前記３つの異なる色が、光の３原色である色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂであることを特徴とする。

本発明の画像校正色標は、前記顕微鏡の前記検査試料の観察の際の倍率に対応し、前記一視野に入る大きさで形成されていることを特徴とする。

本発明の画像校正色標は、前記色標パッチの色の各々が、前記検査試料の撮像画像における色度を包含する色度であることを特徴とする。

本発明の画像校正色標は、前記色標パッチの色の各々が、ｘｙ色度座標系における色度図の外周近傍の座標値となる色度を有することを特徴とする。

本発明の画像校正色標は、前記３つの異なる色の色標パッチに加え、前記検査試料の色度に対応した色の他の色標パッチを、前記透明部材表面に設けることを特徴とする。

本発明の画像校正色標は、前記他の色標パッチの色が、少なくとも前記３つの異なる色の各々の補色のいずれか、あるいは組合わせであることを特徴とする。

本発明の画像校正色標は、前記色標パッチに加え、前記撮像画像のガンマ補正に用いる、グレースケールにおける複数の階調のガンマ補正用パッチを、前記透明部材表面に設けることを特徴とする。

本発明の画像校正色標製造方法は、検査試料が載せられる透明部材表面に顕微鏡の一視野に全体が含まれる大きさで形成される画像校正色標を形成する画像校正色標製造方法であり、透明部材表面に少なくとも３つの異なる色に対応するカラーレジストを順次塗布し、フォトリソグラフィ法により、前記画像校正色標における前記異なる色の各々の色標パッチを順次形成することにより、前記画像校正色標を形成することを特徴とする。

以上説明したように、本発明によれば、色標と病理標本との撮像環境の変化を抑制し、かつ色標のデジタル画像の撮像の工程における効率を上げることが可能な画像校正色標及び画像校正色標製造方法を提供することができる。

本発明の一実施形態による画像校正色標の構成例を示す概念図である。 本実施形態による画像校正色標１における色標パッチ１−１から色標パッチ１−６の各々のＣＩＥｘｙＹ色度座標データを示すテーブルの図である。 本実施形態におけるガンマ補正用パッチの分光スペクトルデータを示す図である。 本実施形態の画像校正色標１の製造方法を説明する図である。 本実施形態による画像校正色標１とRosco社の校正用色標との予測精度について比較した結果を示すテーブルである。 本実施形態による画像校正色標１とRosco社の校正用色標との予測精度について比較した結果を示すテーブルである。 校正システムにおける撮像した標本画像の色の校正を説明する概念図である。

以下、本発明の一実施形態について、図面を参照して説明する。本発明の画像校正色標は、病理診断を行なう際に、病理標本（検査試料）が取り付けられる、透明部材としてのスライドガラス上あるいはフィルム上に形成される。図１は、本発明の一実施形態による画像校正色標の構成例を示す概念図である。
本実施形態においては、一例として、顕微鏡で病理標本を観察する際に用いられるスライドガラス１００上に形成された構成として、画像校正色標１を説明する。

図１（ａ）に示すように、本実施形態においては、スライドガラス１００表面に、画像校正色標１が形成されている。画像校正色標１が設けられたスライドガラス１００に対し、病理標本２００が取り付けられる。すなわち、本実施形態の場合、画像校正色標１と病理標本２００との各々は、同一のスライドガラス１００に配置された状態である。ここで、病理標本２００はスライドガラス１００に載せられて（乗せられて）配置され、画像校正色標１はスライドガラス１００に形成されて配置されている。この画像校正色標１を撮像したデジタル画像（以下、色標デジタル画像と示す）撮像により、撮像された病理標本２００のデジタル画像（以下、標本デジタル画像と示す）における色の校正を行なう（詳細は後述）。病理標本は、例えば、免疫組織化学染色法によって、染色されている。

画像校正色標１は、複数の色の色標１−１から色標パッチ１−６の各々から構成されている。本実施形態においては、色標パッチ１−１の色は、ＲＧＢ表色系の３原色における色成分Ｒ（red：赤）である。色標パッチ１−２の色は、ＲＧＢ表色系の３原色における色成分Ｇ（green：緑）である。色標パッチ１−３の色は、ＲＧＢ表色系の３原色における色成分Ｂ（blue：緑）である。色標パッチ１−４の色は、色成分Ｃ（cyan：シアン）であり、色成分Ｒの補色である。色標パッチ１−５の色は、色成分Ｍ（magenta:マゼンタ）であり、色成分Ｇの補色である。色標パッチ１−６の色は、色成分Ｙ（yellow：イエロー）であり、色成分Ｂの補色である。

本実施形態において、画像校正色標１としては、標本デジタル画像の色の校正に必須な色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの各々の色標パッチ１−１、色標パッチ１−２、色標パッチ１−３それぞれの他に、補色としての色成分Ｃ、色成分Ｍ及び色成分Ｙの色標パッチ１−４、色標パッチ１−５、色標パッチ１−６のそれぞれが設けられている。
上記色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３は、ＸＹＺ表色系の刺激値Ｘ、刺激値Ｙ、刺激値Ｚそれぞれを求めるために必ず必要となる。しかしながら、色標パッチ１−４、色標パッチ１−５及び色標パッチ１−６の各々は、刺激値Ｘ、刺激値Ｙ、刺激値Ｚそれぞれを求める際に、予測の精度を向上させるために追加する構成である。したがって、本発明の画像校正色標の最小構成としては、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３の各々のみの構成である。
本実施形態においては、色標の最小の構成としては、光の３原色である色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの３つの異なる色の色票パッチから色票を構成するとして説明している。しかしながら、上述した光の３原色である色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂに対して、色の３原色である色成分Ｃ、色成分Ｍ及び色成分Ｙとを含む６色から３色を選択して、この選択した３色を用いて、３つの異なる色の色票パッチを構成してもよい。
さらに、この光の３原色及び色の３原色の６色のみでなく、これらを混色して生成した色を、色標を構成する色標パッチの３つの異なる色として用いても良い。

また、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３に対して加える色標パッチとしては、病理標本が染色された色の色度（色度図における色度座標としての座標値）に対応していずれか一つを選択しても良い。
例えば、ヘトマキシリン-エオジン染色液で染色された病理標本の色は、色成分Ｍ（マゼンタ）系の（マゼンタに最も色度が近い）色である。このため、標本デジタル画像における色の校正を行なう際、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３に対し、色成分Ｍの色標パッチ１−５を加えることにより、校正の精度を向上させることができる。

例えば、撮像した標本デジタル画像の色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの数値から、測色値としての刺激値Ｘ、刺激値Ｙ、刺激値Ｚそれぞれを、以下の（１）式により予測することを考える。（１）式において、変換行列Ｍは、標本デジタル画像の色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの数値から、刺激値Ｘ、刺激値Ｙ、刺激値Ｚそれぞれを求める行列である。

上記（１）式の変換行列Ｍ（３×４行列）を求める際、画像校正色標１に対して標準光源（例えば、ＣＩＥ(国際照明委員会)やＪＩＳ（日本工業規格）などで定められている標準の光Ｄ６５）を、校正色標の背面から照射した透過光を測定した刺激値Ｘ，刺激値Ｙ及び刺激値Ｚの各々と、撮像された色標デジタル画像の色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの各々の数値とを教師データとしている。教師データである刺激値Ｘ，刺激値Ｙ及び刺激値Ｚの各々と、色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの各々の数値とにより、重回帰分析などの手法を用いて、変換行列Ｍを求める。

このとき、病理標本の色がマゼンタ系であれば、色成分Ｍの色標パッチ１−５を加えることにより、マゼンタ系の色の予測の精度を向上させる変換行列Ｍを求めることができるため、標本デジタル画像の色の校正の精度をより高くすることができる。
上述したように、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３に加え、病理標本が染色された色の色度に対応させ、染色された色に近い色度の色標パッチを、色成分Ｃ、色成分Ｍ及び色成分Ｙの色標パッチ１−４、色標パッチ１−５、色標パッチ１−６のそれぞれから選択する。また、色成分Ｍ及び色成分Ｙの中間に、染色の色の色度が存在する場合、色成分Ｍ及び色成分Ｙの色標パッチ１−５、色標パッチ１−６のそれぞれを、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３に付け加えて、画像校正色標１とする。

本実施形態においては、スライドガラス１００（もしくはフィルム）上に形成される色標パッチが、カラーレジストをフォトリソグラフィ法で形成している。このカラーレジストは、ＪＩＳ規格のＤ６５標準イルミナントを用いて計算されたＣＩＥ色度図のｘｙ座標系において、色成分Ｒの色度がｘ：０．６００以上、ｙ：０．３００〜０．３６０、ピークの立ち上がり半値波長：５７０ｎｍ〜６２０ｎｍであり、色成分Ｇの色度がｘ：０．１８０〜０．２４０、ｙ：０．６００以上、ピーク波長：５００ｎｍ〜５５０ｎｍであり、色成分Ｂの色度がｘ：０．１２０〜０．１６０、ｙ：０．１００以下、ピーク波長：４３０ｎｍ〜４８０ｎｍである。

また、組織診断、細胞診断、免疫組織化学診断等の病理学的検査における病理検体染色では、一般的にヘマトキシリン−エオジン染色液が用いられている。そして、ヘマトキシリン−エオジン染色液で染色された病理標本の色は、すでに述べたように、色成分Ｍ系の色である。このため、ヘマトキシリン−エオジン染色液で染色された標本デジタル画像の色の校正精度を高めるため、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３に対し、色成分Ｍの色標パッチ１−５を加える。本実施形態においては、色標パッチ１−５は、ピーク波長が４００ｎｍ〜５００ｎｍ および６００ｎｍ〜７００ｎｍの２つの波長領域にピークを持つマゼンタ系のカラーレジストを用いて形成する。

図１（ｂ）は、線分Ａ−Ａにおける線視断面図を示している。ブラックマトリクスを隔壁として、色標パッチ１−１、色標パッチ１−２及び色標パッチ１−３の各々が、スライドガラス１００の表面に形成されている。

図１（ｃ）は、スライドガラス１００表面に形成される画像校正色標１の大きさを示す概念図である。視野２５０は、病理診断を行なう顕微鏡の視野を示している。本実施形態においては、全体が一視野（例えば、視野２５０）の範囲に包含（平面視で含まれる）されるように、画像校正色標１の大きさが設定されている。すなわち、一度の撮像により、画像校正色標１の全体が撮像された色標デジタル画像を得ることができる。
また、病理標本を撮像する倍率は、病理標本によって異なる場合がある。このため、本実施形態においては、倍率毎に対応した面積の画像校正色標１をスライドガラス１００表面に形成する。すなわち、病理標本を観察する倍率に対応して、その倍率における視野２５０の枠内に包含される最大の大きさとなる外形で、画像校正色標１を形成する。

例えば、４０倍の倍率で顕微鏡の一視野に入る画像校正色標１を形成するには、視野が５００μｍ（φ）の視野に対応させるため、一つの色標パッチを２０μｍから５０μｍ程度の正方形パターンとして加工する必要がある。
このとき、上述した各色成分に対応する色のカラーレジストをフォトリソグラフィによりパターニングして、画像校正色標１を形成する場合、アライメント精度は、±３μｍ程度であれば、ブラックマトリクス１−０は、パターン幅を５μｍとして設けることにより、混色及び色抜けなどの発生を防止することができる。

後述する感光性着色組成物を用いて、フォトリソグラフィ法によりスライドガラス１００上に画像校正色標１における色標パッチの各々のパターンを形成した。すなわち、感光性着色組成物を塗布、乾燥後、露光機にてドット状の着色層を形成し、それらを必要とする色数（画像校正色標１における色標パッチの数）分繰り返した。そして、色標パッチそれぞれが重なり合わないように、ブラックマトリクスを介して隣接させて形成することにより、色成分Ｒ、色成分Ｇ、色成分Ｂ、色成分Ｙ、色成分Ｃ、色成分Ｍの各々の６色からなる規則周期を持った色標パッチを形成することができた。色成分Ｒ、色成分Ｇ、色成分Ｂの各色標パッチは、液晶ディスプレイのＡｄｏｂｅＲＧＢ規格に準拠したカラーレジストを用いている。色成分Ｙ及び色成分Ｃの各色標パッチには、多色カラーフィルタに用いられるカラーレジストを用いた。色成分Ｍの色標パッチは、山田化学工業株式会社の機能性色素染料「ＦＤＧ−００７」の所定量を、アクリル系透明樹脂に混入することで、専用のカラーレジストを調合して形成した。

図２は、本実施形態による画像校正色標１における色標パッチ１−１から色標パッチ１−６の各々のＣＩＥｘｙＹ色度座標データを示すテーブルの図である。図２のテーブルにおいて、形成した画像校正色標１における色標パッチ１−１から色標パッチ１−６の各々の色度座標が示されている。色度の測定には、大塚電子（株）製の分光光度計ＬＣＦ−１１００Ｍを使用した。このとき、色度の測定においては、画像校正色標１及び病理標本２００が表面に配置されているスライドガラス１００の後面から、画像校正色標１に対して測定のための光を照射した。この照射した光源は、標準光源のＤ６５を用いた。図２のテーブルにおいては、色成分Ｒ（Red）、色成分Ｇ（Green）、色成分Ｂ（Blue）、色成分Ｙ（Yellow）、色成分Ｃ（Cyan）及び色成分Ｍ（Magenta）の各々毎に、ＣＩＥｘｙＹ色度座標データと、透過される光の強度が最大となる波長（λ_ｍａｘ）とが示されている。

図１に戻り、画像校正色標１において、ガンマ補正用パッチ１−７、ガンマ補正用パッチ１−８及びガンマ補正用パッチ１−９の各々は、標本デジタル画像における各色標パッチの画像の色成分Ｒ、色成分Ｇ、色成分Ｂの階調度をγ（ガンマ）補正するγ補正チャートを生成するために用いる。すなわち、撮像装置の撮像したデジタル画像における画像の色成分Ｒ、色成分Ｇ、色成分Ｂの階調度の線形性（リニアリティ）の精度を上げるための中間のＯＤ（optical density：光学濃度）の情報を提供するチャートを生成するために用いる。
本実施形態における画像校正色標１は、校正の精度を向上させるために、すでに述べた色標パッチに上記ガンマ補正用パッチを加えた構成として形成しても良い。

上述したγ補正を行なうためには、少なくとも２階調分のＮＤ（Neutral Density）フィルタとしてのガンマ補正用パッチが必要となる（ＯＤ＝０を含めると３階調分）。本実施形態においては、ガンマ補正用パッチ１−７、ガンマ補正用パッチ１−８及びガンマ補正用パッチ１−９の各々を、ＯＤ＝２．０、１．０、０．３それぞれのＮＤフィルタとして形成している。ここで、ガンマ補正用パッチとしては、少なくとも１個の光学濃度をＯＤ≦０．５とし、もう一個の光学濃度をＯＤ≧２．０とする。本実施形態においては、光学濃度がＯＤ＝０のガンマ補正用パッチは、特に形成していない。光学濃度がＯＤ＝０の階調は、スライドガラス１００のクリア部分（画像校正色標１が形成されていない部分）の画像から取得する。すなわち、本実施形態におけるγ補正チャートは、ＯＤ＝２．０、１．０、０．３、０．０の４階調（グレースケール）にて作成されている。

本実施形態においては、ガンマ補正用パッチ１−７、ガンマ補正用パッチ１−８及びガンマ補正用パッチ１−９の各々は、黒色レジストがフォトリソグラフィ法によりパターニングして形成されている。黒色レジストは、カーボンブラック樹脂を所定の濃度で、透明なアクリル樹脂に混合することで生成される。光学濃度の調整は、黒色レジストの膜厚及びカーボンブラック樹脂の混合比のいずれか、あるいは組合わせにより行なう。
図３は、本実施形態におけるガンマ補正用パッチの分光スペクトルデータを示す図である。縦軸はガンマ補正用パッチを光の透過率（transmittance）を示し、横軸は透過する光の波長（wavelength）を示している。

図３において、光学濃度がＯＤ＝２．０のガンマ補正用パッチの測定曲線は実線で示されている。また、光学濃度がＯＤ＝１．０のガンマ補正用パッチの測定曲線は破線で示されている。光学濃度がＯＤ＝０．３のガンマ補正用パッチの測定曲線が点線で示されている。光学濃度がＯＤ＝２．０のガンマ補正用パッチのＣＩＥｘｙＹ色度におけるＹ（明度）座標がＹ＝０．６である。また、光学濃度がＯＤ＝１．０のガンマ補正用パッチのＣＩＥｘｙＹ色度におけるＹ座標がＹ＝１０である。光学濃度がＯＤ＝０．３のガンマ補正用パッチのＣＩＥｘｙＹ色度におけるＹ座標がＹ＝５０である。図３から判るように、低い光学濃度のＮＤフィルタとしてのガンマ補正用パッチが作成されている。

また、本実施形態においては、画像校正色標１における各々の色成分の色標パッチを、カラーレジストをフォトリソグラフィ法によりパターニングすることで形成している。しかしながら、スライドガラス上において、顕微鏡の一視野に包含される大きさで、画像校正色標１を形成することができれば、インクジェット法、印刷法、エッチング法、転写法、電着法など何れの方法、またはフォトリソグラフィ法を含めて、これらの手法を併用して作製してもかまわない。しかしながら、上述した各法において、高精細、分光特性の制御性及び再現性等を考慮すれば、透明な樹脂中に顔料を、光開始剤、重合性モノマーと共に適当な溶剤に分散させた着色組成物を透明基板上に塗布成膜して着色層を形成し、着色層をパターン露光、現像することで一色の画素を形成する工程を、各色毎に繰り返し行うフォトリソグラフィ法が好ましい。

図４は、本実施形態の画像校正色標１の製造方法を説明する図である。図４（ａ）から図４（ｈ）の各々は、製造工程におけるそれぞれの段階における画像校正色標１の断面図を示している（図１（ｂ）と同様の位置の断面図である）。

図４（ａ）の工程において、画像校正色標１を形成する前工程としてスライドガラス１００の洗浄を行なう。以下、スライドガラス１００の表面１００Ｓに対し、画像校正色標１を形成する工程として説明する。したがって、顕微鏡による病理標本２００の観察の際、裏面１００Ｂから表面１００Ｓに向かい、光源から光が照射される。

図４（ｂ）の工程において、ブラックマトリクス１−０のパターンを形成するため、表面１００Ｓに対して、樹脂ＢＭレジスト（ネガ型のフォトレジスト）３００を塗布する。
そして、所定の温度（例えば５０℃から１２０℃）により、表面１００Ｓ上の樹脂ＢＭレジスト３００のプリベーク（１分〜５分程度の加熱処理）を行う。

図４（ｃ）の工程において、フォトマスク５００を介して、高圧水銀灯などが発生する紫外線６００を、樹脂ＢＭレジスト３００に照射することで、パターン５０１で遮蔽される領域以外の樹脂ＢＭレジスト３００の露光を行なう。

図４（ｄ）の工程において、アルカリ性水溶液からなる現像液を用いて、露光された樹脂ＢＭレジスト３００の現像処理を行う。このアルカリ性水溶液からなる現像液の例としては、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、または両者の混合水溶液、さらに、この水溶液に適当な界面活性剤などを加えたものが用いられる。そして、現像により樹脂ＢＭレジスト３００のパターン３０１を、現像後、水洗及び乾燥させる。次に、パターン３０１のベークを行なって硬化させることにより、ブラックマトリクス１−０が、スライドガラス１００の表面１００Ｓに形成される。

図４（ｅ）の工程において、色成分Ｒの色標パッチ１−１を形成するため、表面１００Ｓ及びブラックマトリクス１−０の各々に対して、ＲＥＤカラーレジスト（ネガ型のフォトレジスト）３１０を塗布する。
そして、所定の温度（例えば５０℃から１２０℃）により、表面１００Ｓ上及びブラックマトリクス１−０上のＲＥＤレジスト３１０のプリベーク（１分〜５分程度の加熱処理）を行う。

図４（ｆ）の工程において、フォトマスク５１０を介して、上記紫外線６００を、ＲＥＤレジスト３１０に照射することで、パターン５１１で遮蔽される領域以外のＲＥＤレジスト３１０の露光を行なう。

図４（ｇ）の工程において、図４（ｄ）と同様の現像液を用いて、露光されたＲＥＤレジスト３１０の現像処理を行う。そして、現像によりＲＥＤレジスト３１０のパターン３１１を、現像後、水洗及び乾燥させる。次に、パターン３１１のベークを行なって硬化させることにより、色成分Ｒの色標パッチ１−１が、スライドガラス１００の表面１００Ｓの所定のブラックマトリクス１−０の枠内に形成される。

図４（ｈ）の工程において、 色成分Ｇの色標パッチ１−２及び色成分Ｂの色標パッチ１−３ の各々は、図４（ｅ）から図４（ｇ）の工程を、ＧＲＥＥＮカラーレジスト、ＢＬＵＥカラーレジストそれぞれで繰り返すことにより生成される。
また、必要であれば、色成分Ｙの色標パッチ１−６、色成分Ｃの色標パッチ１−４及び色成分Ｍの色標パッチ１−５も、それぞれのＹＥＬＬＯＷカラーレジスト、ＣＹＡＮカラーレジスト、ＭＡＧＥＮＴＡカラーレジストそれぞれで、図４（ｅ）から図４（ｇ）の工程を順次繰り返すことにより形成することができる。さらに、ガンマ補正用パッチ１−７からガンマ補正用パッチ１−９の各々も、階調に対応した黒色レジスト毎に、図４（ｅ）から図４（ｇ）の工程を順次繰り返すことにより形成できる。

次に、上述の画像校正色標１の製造方法で説明した各色成分のカラーレジスト（感光性着色組成物）の作製方法について説明する。
本実施形態において、画像校正色標１に用いられる色標パッチの各々は、感光性着色組成物を調製してフォトリソグラフィ法により形成している。このフォトリソグラフィ法により形成する場合は、例えば、以下に示す組成の感光性樹脂組成物を用いて形成することができる。この感光性樹脂組成物では、着色層（色標パッチ）の色成分となる顔料を透明な樹脂中に光開始剤、重合性モノマーと共に適当な溶剤に分散させる。分散させる方法はミルベース、３本ロール、ジェットミル等様々な方法があり、特に限定されるものではない。以下、その材料について説明する。

・有機顔料、無機顔料、染料
本実施形態における感光性着色組成物に用いることのできる有機顔料の具体例を、カラーインデックス番号で示す
色成分Ｒの色標パッチ１−１の赤色フィルタセグメント（画素）を形成するための赤色着色層組成物には、例えばＣ．Ｉ．Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｒｅｄ１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１４、１７、２２、２３、３１、３８、４１、４８：１、４８：２、４８：３、４８：４、４９、４９：１、４９：２、５２：１、５２：２、５３：１、５７：１、６０：１、６３：１、６６、６７、８１：１、８１：２、８１：３、８１：ｘ、８３、８８、９０、９７、１１２、１１９、１２２、１２３、１４６、１４９、１６６、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８４、１８５、１８７、１８８、１９０、１９２、２００、２０２、２０６、２０７、２０８、２０９．２１０、２１５、２１６、２１７、２２０、２２
３、２２４、２２６、２２７、２２８、２４０、２４６、２５４、２５５、２６４、２７２、２７９等の赤色顔料を用いることができる。また、赤色着色組成物には、黄色顔料、橙色顔料を併用することができる。

上記黄色顔料としてはＣ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｙｅｌｌｏｗ１、２、３、４、５、６、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２４、３１、３２、３４、３５、３５：１、３６、３６：１、３７、３７：１、４０、４２、４３、５３、５５、６０、６１、６２、６３、６５、７３、７４、７７、８１、８３、８６、９３、９４、９５、９７、９８、１００、１０１、１０４、１０６、１０８、１０９、１１０、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２３、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３７、１３８、１３９、１４４、１４６、１４７、１４８、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１６１、１６２、１６４、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７９、１８０、１８１、１８２、１８５、１８７、１８８、１９３、１９４、１９９、２１３、２１４等が挙げられる。

上記榿色顔料としてはＣ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｏｒａｎｇｅ ２、５、１３、１６、１７：１、３１、３４、３６、３８、４３、４６、４８、４９、５１、５２、５５、５９、６０、６１、６２、６４、７１、７３等が挙げられる。

色成分Ｇの色標パッチ１−２の緑色フィルタセグメントを形成するための緑色着色組成物には、例えばＣ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｇｒｅｅｎ １、１：ｘ、２、２：ｘ、４、７、１０、３６、３７等の緑色顔料を用いることができる。緑色着色組成物には赤色着色組成物と同様の黄色顔料を併用することができる。

色成分Ｂの色標パッチ１−３の青色フィルタセグメントを形成するための青色着色組成物には、例えばＣ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｂｌｕｅ １、１：２、１：ｘ、９：ｘ、１５、１５：１、１５：２、１５：３、１５：４、１５：６、１６、２２、２４、２４：ｘ、５６、６０、６１、６２、６４、８０等の着色顔料、好ましくはＣ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｂｌｕｅ１５：６を用いることができる。また、青色着色組成物には、Ｃ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ １、１：ｘ、３、３：３、３：ｘ、５：１、１９、２３、２７、２９、３０、３２、３７、４０、４２、５０等の紫色顔料、好ましくはＣ．Ｉ． Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ２３を併用することができる。

また、上記有機顔料と組み合わせて、彩度と明度のバランスを取りつつ良好な塗布性、感度、現像性等を確保するために、無機顔料を組み合わせて用いることも可能である。無機顔料としては、黄色鉛、亜鉛黄、べんがら（赤色酸化鉄（III）、カドミウム赤、群青、紺青、酸化クロム緑、コバルト緑等の金属酸化物粉、金属硫化物粉、金属粉等が挙げられる。さらに、耐熱性を低下させない範囲内で染料を含有させることができる。染料としてはポルフィリン系染料、フタロシアニン系染料等が挙げられる。

・分散剤
また、顔料を含有させる場合には、顔料を分散させるための分散剤を含有させる必要がある。分散剤としては、界面活性剤、顔料の中間体、染料の中間体、ソルスパース等が使用される。分散剤の添加量は特に限定されるものではないが、顔料の配合量１００質量％に対して、１〜１０質量％とすることが好ましい。

・透明樹脂
着色組成物に用いることの透明樹脂は、可視光領域の４００〜７００ｎｍの全波長領域において、透過率が８０％以上、好ましくは９５％以上の樹脂である。この透明樹脂には、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂、および感光性樹脂が含まれる。また、透明樹脂には、必要に応じて、その前躯体である、放射線照射により硬化して透明樹脂を生成するモノマーもしくはオリゴマーを単独で、または２種類以上混合して用いることができる。
熱可塑性樹脂としては、例えばブチラール樹脂、スチレン−（無水）マレイン酸共重合体、スチレン／スチレンスルホン酸共重合体、エチレン／（メタ）アクリル酸共重合体、イソブチレン／（無水）マレイン酸共重合体、塩素化ポリエチレン、塩素化ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、塩化ビニル−酢酸ビニル共重合体−ポリ酢酸ビニル、ポリウレタン系樹脂ポリエステル樹脂、アクリル系樹脂、アルキッド樹脂、ポリスチレン、ポリアミド樹脂、ゴム系樹脂、環化ゴム系樹脂、セルロース類、ポリエチレン、ポリブタジエン、及びポリイミド樹脂等が挙げられる。また、熱硬化性樹脂としては、例えばエポキシ樹脂、ベンゾグアナミン樹脂、ロジン変性マレイン酸樹脂、ロジン変性フマル酸樹脂、メラミン樹脂、尿素樹脂、及びフェノール樹脂等が挙げられる。
着色組成物に用いて好適な感光性樹脂とは、ラジカル架橋性を有する樹脂のことを意味しており、少なくとも１個のエチレン不飽和二重結合を有する質量平均分子量５０００〜１０万の樹脂が好適に用いられる。具体的には、水酸基、カルボキシル基、アミノ基等の反応性の置換基を有する線状高分子に、前記反応性官能基と反応可能なイソシアネート基、アルデヒド基、エポキシ基等の反応性置換基を有する（メタ）アクリル化合物やケイヒ酸を反応させて、（メタ）アクリロイル基、及びスチリル基等のエチレン不飽和二重結合を該線状高分子に導入した樹脂が用いられる。また、スチレン−無水マレイン醸共重合物やα−オレイン−無水マレイン酸共重合物等の酸無水物を含む線状高分子をヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート等の水酸基を有する（メタ）アクリル化合物によりハーフエステル化したものも用いられる。

・光重合性モノマー
光重合性モノマーとは、ラジカルにより重合が誘起されるモノマーのことであり、用いることのできる重合性モノマーおよびオリゴマーとしては、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、β−カルボキシエチル（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、グリセロールアクリレートメタクリレート、グリセロールジメタクリレート、１，６−ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、トリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、トリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシ−３−アクリロイルプロピルメタクリレート、トリメチロールプロパンジ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、ジトリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレート、１，６−ヘキサンジオルジグリシジルエテルジ（メタ）アクリレート、ビスフェノールＡジグリシジルエーテルジ（メタ）アクリレート、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテルジ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールペンタ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールヘキサ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールエチレンオキサイド変性ペンタ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールプロピレンオキサイド変性ペンタ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールカプロカラクトン変性ペンタ（メタ）アクリレート、トリシクロデカニル（メタ）アクリレート、エステルアクリレート、メチロール化メラミンの（メタ）アクリル酸エステル、エポキシ（メタ）アクリレート、ウレタンアクリレート等の各種アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステル、エポキシ基含有化合物とカルボキシ（メタ）アクリレートの反応物、水酸基含有ポリオールポリアクリレート等が挙げられる。
また、（メタ）アクリル酸、スチレン、酢酸ビニル、ヒドロキシエチルビニルエーテル、エチレングリコールジビニルエーテル、ペンタエリスリトールトリビニルエーテル、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ビニルホルムアミド、アクリロニトリル等も用いられる。これらは単独でまたは２種類以上混合して用いることができる。

・重合開始剤
着色組成物には、該組成物を紫外線照射により硬化する場合には、光重合開始剤等が添加される。光重合開始剤としては、４−フェノキシジクロロアセトフェノン、４−ｔ−ブチル−ジクロロアセトフェノン、ジエトキシアセトフェノン、１−（４−イソプロピルフェニル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−１−オン、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−ベンジル−２−ジメチルアミノ−１−（４−モルフオリノフェニル）−ブタン−１−オン等のアセトフェノン系化合物、ベンゾイン、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソプロピルエーテル、ベンジルジメチルケタール等のベンゾイン系化合物、ベンゾフェノン、ベンゾイル安息香酸、ベンゾイル安息香酸メチル、４−フェニルベンゾフェノン、ヒドロキシベンゾエノン、アクリル化ベンゾフェノン、４−ベンゾイル−４’−メチルジフェニルサルファイド、３，３’，４，４’−テトラ（ｔ−ブチルパーオキシカルボニル）ベンゾフェノン等のベンゾフェノン系化合物、チオキサントン、２−クロルチオキサントン、２−メチルチオキサントン、イソプロピルチオキサントン、２，４−ジイソプロピルチオキサントン、２，４−ジエチルチオキサントン等のチオキサントン系化合物、２，４，６−トリクロロ−ｓ−トリアジン、２−フェニル−４，６−ビス（トリクロロメチル）−ｓ−トリアジン、２−（ｐ−メトキシフェニル）−４，６−ビス（トリクロロメチル）−ｓ−トリアジン、２−（ｐ−トリル）−４，６−ビス（トリクロロメチル）−ｓ−トリアジン、２−ピペロニル−４，６−ビス（トリクロロメチル）−ｓ−トリアジン、２，４−ビス（トリクロロメチル）−６−スチリル）−ｓ−トリアジン、２−（ナフト−１−イル）−４，６−ビス（トリクロロメチル）−ｓ−トリアジン、２−（４−メトキシ−ナフト−１−イル）−４，６−ビス（トリクロロメチル）−ｓ−トリアジン、２，４−トリクロロメチル−（ピペロニル）−６−トリアジン、２，４−トリクロロメチル（４’−メトキシスチリル）−６−トリアジン等のトリアジン系化合物、１，２−オクタンジオン、１−〔４−（フェニルチオ）−、２−（Ｏ−ベンゾイルオキシム）〕、Ｏ−（アセチル）−Ｎ−（１−フェニル−２−オキソ−２−（４’−メトキシ−ナフチル）エチリデン）ヒドロキシルアミン等のオキシムエステ
ル系化合物、ビス（２，４，６−トリメチルベンゾイル）フェニルホスフィンオキサイド、２，４，６−トリメチルベンゾイルジフェニルホスフィンオキサイド等のホスフィン系化合物、９，１０−フェナンスレンキノン、カンファーキノン、エチルアントラキノン等のキノン系化合物、ボレート系化合物、カルバゾール系化合物、イミダゾール系化合物、チタノセン系化合物等が用いられる。これらの光重合開始剤は１種または２種以上混合して用いることができる。光重合開始剤の使用量は、着色組成物の全固形分量を基準として０．５〜５０重量％が好ましく、より好ましくは３〜３０重量％である。

・光増感剤
また、重合開始剤と光増感剤とを併用することが好ましい。増感剤として、α−アシロキシムエステル、アシルフォスフィンオキサイド、メチルフェニルグリオキシレート、ベンジル、９，１０−フェナンスレンキノン、カンファーキノン、エチルアンスラキノン、４，４’−ジエチルイソフタロフェノン、３，３’，４，４’−テトラ（ｔ−ブチルパーオキシカルボニル）ベンゾフェノン、トリエタノールアミン、メチルジエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン、４−ジメチルアミノ安息香酸メチル、４−ジメチルアミノ安息香酸エチル、４−ジメチルアミノ安息香酸イソアミル、安息香酸２−ジメチルレアミノエチル、４−ジメチルアミノ安息香酸２−エチルヘキシル、Ｎ，Ｎ’−ジメチルパラトルイジン、４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’−ビス（ジエチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’−ビス（エチルメチルアミノ）ベンゾフェノン等のアミン系化合物を併用することもできる。これらの増感剤は１種または２種以上混合して用いることができる。増感剤の使用量は、光重合開始剤と増感剤の合計量を基準として０．５〜６０重量％が好ましく、より好ましくは３〜４０重量％である。

・多官能チオール
さらに、着色組成物には、連鎖移動剤としての働きをする多官能チオールを含有させることができる。多官能チオールは、チオール基を２個以上存する化合物であればよく、例えば、ヘキサンジチオール、ヂカンジチオール、１，４−ブタンジオールビスチオプロピオネート、１，４−ブタンジオールビスチオグリコレート、エチレングリコールビスチオグリコレート、エチレングリコールビスチオプロピオネート、トリメチロールプロパントリスチオグリコレート、トリメチロールプロパントリスチオブロピオネート、トリメチロールプロパントリス（３−メルカプトブチレート）、ペンタエリスリトールテトラキスチオグリコレート、ペンタエリスリトールテトラキスチオプロピオネート、トリメルカプトプロピオン酸トリス（２−ヒドロキシエチル）イソシアヌレート、１，４−ジメチルメルカプトベンゼン、２，４，６−トリメルカプト−ｓ−トリアジン、２（Ｎ、Ｎ−ジブチルアミノ）−４，６−ジメルカプト−ｓ−トリアジン等が挙げられる。
これらの多官能チオールは、１種または２種以上混合して用いることができる。多官能チオールの使用量は、着色組成物の全固形分量を基準として０．１〜３０質量％が好ましく、より好ましくは１〜２０質量％である。０．１質量％未満では多官能チオールの添加効果が不充分であり、３０質量％を越えると感度が高すぎて逆に解像度が低下する。

・溶剤
着色組成物は、基板上への均一な塗布を可能とするために、必要に応じて有機溶剤を含有することができる。溶剤は、顔料を均一に分散させる機能も有する。用いて好適な有機溶剤としては、例えばシクロヘキサノン、エチルセロソルブアセテート、ブチルセロソルブアセテート、メトキシ−２−プロピルアセテート、ジエチレングリコールジメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、エチルベンゼン、エチレングリコールジエチルエーテル、キシレン、エチルセロソルブ、メチル−ｎアミルケトン、プロピレングリコールモノメチルエーテルトルエン、メチルエチルケトン、酢酸エチル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルケトン、石油系溶剤等が挙げられ、これらを単独でもしくは混合して用いる。

次に、本実施形態において作成した画像校正色標１の評価について説明する。
スライドガラス１００上に形成した画像校正色標１を用いて撮影対象物の測色値の予測を行った。実験方法として、簡易的に市販のデジタルカメラとカラービューワを用いて、暗室条件下で撮影を実施した。実験条件は以下に示す。
・実験条件
撮影基材 ：
デジタルカメラ ： EOS-5D(キヤノン株式会社製)
撮影条件 ： シャッタースピード 1/1000 秒、F2.0、ISO400
ビューワ光源 ： ハロゲンランプ
撮像環境 ： 暗室

また、撮影対象物は、引用文献１で用いられているRosco社の校正用色標(Color calibration slides)を対象物とし、この色標の測色値（刺激値ＸＹＺ）の推定を行なった。
すなわち、実際に、撮影対象物をデジタルカメラで撮像し、撮像された標本デジタル画像から抽出した色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの各々の数値から、測色値である刺激値ＸＹＺがどの程度の精度で得られるかという実験を行なった。
上述した一般的なデジタルカメラにより、カラービューワにおいて、スライドガラス１００の裏面１００Ｂから表面１００Ｓに向かい、表面１００Ｓ上に配置された撮影対象物（病理標本２００及び画像校正色標１）に対して光を照射し、透過した光の画像を撮像し、標本デジタル画像を得た。

すでに述べた（１）式は、得られた色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂの各々の数値に対して、変換行列Ｍを乗算することにより、刺激値ＸＹＺが推定できるというのが（１）式である。
この（１）式の変換行列Ｍは、以下のように求める。この（１）式における右辺の行列の「１」の項は、正規化を行なうためのオフセット項である。
まず、画像校正色標１において、各色標パッチの分光透過率を測定し、光源であるビューワにより照射される光の分光分布を乗ずる。これにより、教師データとしての画像校正色標１における各色成分の色標パッチそれぞれの刺激値ＸＹＺを算出する。
次に、画像校正色標１を撮像し、デジタル画像から各色成分の色標パッチそれぞれのＲＧＢ値を抽出する。

そして、色成分の色標パッチ毎で得られたＲＧＢ値に対し、乗算することにより対応する色成分の色標パッチの教師データとしての刺激値ＸＹＺ値となる変換行列Ｍを、重回帰分析などの手法を用いて求める。ここで、変換行列Ｍを求める際、各色標パッチのＲＧＢ値は、すでに述べたγ補正チャートを用いて、線形化したＲＧＢ値を用いている。すなわち、（１）式に代入するＲＧＢ値は、全てγチャートによりガンマ補正した数値である。

図５は、本実施形態による画像校正色標１とRosco社の校正用色標（Rosco社色標）との予測精度について比較した結果を示すテーブルである。
Rosco社色標の評価結果を求めるため、Rosco社色標から変換行列Ｍ’を求める際、各色成分の色標パッチの刺激値ＸＹＺ値が予め判っている。このため、上記Rosco社色標の各色成分の色標パッチの刺激値ＸＹＺを教師データとし、Rosco社色標を撮像したデジタル画像における各色成分の色標パッチの画像から抽出したＲＧＢ値を用い、重回帰分析を行ない、Rosco社色標における変換行列Ｍ’を求めた。
そして、変換行列Ｍ及び変換行列Ｍ’の各々を、Rosco社の校正用色標のデジタル画像における各色成分の色標パッチの画像から抽出したＲＧＢ値それぞれに乗算し、測色値としての刺激値ＸＹＺ値を予測した。

色差は、教師データのＸＹＺ値と、変換行列Ｍ（あるいは変換行列Ｍ’）から推定したＸＹＺ値との各々をＬ^＊ａｂ座標系に変換した際におけるΔＥ^＊ａｂである。
画像校正色標１から生成した変換行列Ｍによる色差ΔＥ^＊ａｂは、ガンマ補正の処理をした場合、Rosco社色標から生成した変換行列Ｍ’による色差ΔＥ^＊ａｂと遜色ない結果が得られた。また、Rosco社色標の各色成分の色標パッチの画像から抽出したＲＧＢ値それぞれをガンマ補正せずに、変換行列Ｍを乗算した際の色差ΔＥ^＊ａｂを、ガンマ補正なしとして示している。この結果、ガンマ補正をしない場合に比較し、ガンマ補正を行なった場合には、予測の精度が大幅に改善する効果が得られることが判る。
ここで、平均色差は、Rosco社色標の全ての色標パッチの色差ΔＥ^＊ａｂの平均値である。最大色差は、Rosco社色標の色標パッチにおける色差ΔＥ^＊ａｂの最大値である。

図６は、本実施形態による画像校正色標１とRosco社色標との予測精度について比較した結果を示すテーブルである。図６においては、撮影対象物を実際のヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色検体を用いて染色した病理標本を用い検討を行った。サンプルとしての病理標本は、豚の食道管、肝臓、腎臓からなる病理標本を使用した。
図５と同様に、画像校正色標１から生成した変換行列Ｍと、Rosco社色標から生成した変換行列Ｍ’との各々を用いて色差ΔＥ^＊ａｂの評価を行なった。
ただし、生体の病理標本は、色味が均一な場所が無いため、測色値（ＸＹＺ値）の測定位置と、実際に撮像した標本デジタル画像からＲＧＢ値を抽出した位置と一致しているか否かの判定が困難である。

このため、今回は、比較結果の正確性を期すため、実際に病理標本の所定の部分の分光透過率を測定した。そして、得られた分光透過率と、撮像する際の光源の分光スペクトルと、撮像装置の分光感度（レンズあるいはＣＣＤなどの特性により決まる）との各々が判れば、撮像装置にて撮像した画像から得られるＲＧＢ値を算出することができる。すなわち、撮像装置が有する分光感度により、スライドガラス１００の裏面１００Ｂから光が照射された際、透過する光の分光分布を求め、この分光分布の光を撮像装置で撮像するとＲＧＢ値がいくつになるかがシミュレーションできる。

上述して求めた病理標本の各箇所におけるＲＧＢ値の各々に対し、変換行列Ｍ、変換行列Ｍ’それぞれを乗算し、変換行列Ｍ（作成色標）における色差ΔＥ^＊ａｂ、変換行列Ｍ’（Rosco社色標）における色差ΔＥ^＊ａｂを求めた。
上述した病理標本の各箇所とは、病理標本とした組織の場所として、豚の食道管、肝臓、腎臓の組織それぞれにおける９ポイントにおいて、各ポイントにおける細胞の核、核の周りの部分などの濃度の異なる３カ所、すなわち３×９×３＝８１である。
ここで、平均色差は、病理標本の１箇所の各々における色差ΔＥ^＊ａｂの平均値である。最大色差は、病理標本の８１箇所における色差ΔＥ^＊ａｂの最大値である。図６のテーブルから判るように、本実施形態における画像校正色標１の変換行列Ｍは、Rosco社色標から生成した変換行列Ｍ’による色差ΔＥ^＊ａｂと遜色ない予測結果が得られることが判る。

上述したように、本実施形態によれば、病理標本が配置されるスライドガラスに、顕微鏡の一視野に包含されるサイズの画像校正色標を形成することができ、同一のスライドガラスに画像校正色標と病理標本との各々が配置され、倍率を変更せずとも、画像校正色標の色標デジタル画像と病理標本の標本デジタル画像との各々が撮像できるため、校正の精度を向上させ、かつデジタル画像の撮像の工程の効率を向上させることができる。
また、本実施形態によれば、撮像装置（スキャナなどの画像読取装置も含む）や表示装置の違いによって生じる色の違いを校正し、いずれの医療施設においても、均一な画質のデジタル画像を提供することができ、遠隔病理診断における病理標本デジタル画像のダブルチェックを実現することができる。
また、本実施形態によれば、校正に用いる色数を極力抑えることが可能であり、比較的安価に校正システムを構築することができ、かつ従来の構成用色標と同等以上の精度を達成することができる。

上述した校正システムを簡単に説明する。図７は、校正システムにおける撮像した標本画像の色の校正を説明する概念図である。
ステップＳ１において、撮像装置により、同一のスライドガラス１００上に配置された病理標本２００の標本デジタル画像と、画像校正色標１の色標デジタル画像（ＲＧＢ画像４００）との各々を撮像する。
ステップＳ２において、撮像時における顕微鏡の光源の分光スペクトル（分光分布）と、画像校正色標１の色標パッチの各々の分光透過率とから測色値としての刺激値ＸＹＺを算出する。
ステップＳ３において、すでに述べたように、算出した刺激値ＸＹＺを教師データとして、色標デジタル画像における各色標パッチから抽出したＲＧＢ値を用いた重回帰分析により、変換行列Ｍを求める。

ステップＳ４において、標本デジタル画像における各ピクセルのＲＧＢ値に対し、順次変換行列Ｍを乗算する。
ステップＳ５において、標本デジタル画像（検体側）におけるそれぞれのピクセルの刺激値ＸＹＺが求められ、ＸＹＺ画像４５０が生成される。
ステップＳ６において、表示装置（モニタ）８００に表示する場合、ＸＹＺ画像の各ピクセルを表示装置のモニタプロファイルに基づいて、ＲＧＢ画像に変換し、表示装置８００に表示する。

一方、ステップＳ６において、他の医療機関に標本デジタル画像を送信する際、ＸＹＺ画像４５０の各ピクセルの刺激値ＸＹＺを、標準のＲＧＢ空間（例えば、ｓＲＧＢ空間）にｓＲＧＢプロファイルにより変換し、変換したｓＲＧＢのＲＧＢ画像９００を送信する。
また、他の医療機関における色再現の精度を上げたい場合、標本デジタル画像と求めた変換行列Ｍとを送信するか、あるいは標本デジタル画像と色標デジタル画像とを送信するようにしても良い。

また、本実施形態においては、スライドガラスに取り付ける検査対象として、病理標本を例として説明したが、病理標本のみに限らず、植物の種、花びら、葉などの、石、鉱石、金属などの無機物などを検査試料として用いて、再現色の校正の精度を上げることができる。

１…画像校正色標
１−０…ブラックマトリクス
１−１，１−２，１−３，１−４，１−５，１−６…色標パッチ
１−７，１−８，１−９…ガンマ補正用パッチ
１００…スライドガラス
１００Ｓ…表面
１００Ｂ…裏面
２００…病理標本
２５０…視野

Claims (9)

1. 検査試料を載せる透明部材表面に顕微鏡の一視野に全体が含まれる大きさで形成され、当該透明部材上に載せる前記検査試料の撮像画像の色を校正するために用いられる、少なくとも３つの異なる色の色標パッチを含んで構成されている
   ことを特徴とする画像校正色標。
2. 前記３つの異なる色が、光の３原色である色成分Ｒ、色成分Ｇ及び色成分Ｂである
   ことを特徴とする請求項１に記載の画像校正色標。
3. 前記顕微鏡の前記検査試料の観察の際の倍率に対応し、前記一視野に入る大きさで形成されている
   ことを特徴とする請求項１または請求項２に記載の画像校正色標。
4. 前記色標パッチの色の各々が、前記検査試料の撮像画像における色度を包含する色度である
   ことを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の画像校正色標。
5. 前記色標パッチの色の各々が、ｘｙ色度座標系における色度図の外周近傍の座標値となる色度を有する
   ことを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の画像校正色標。
6. 前記３つの異なる色の色標パッチに加え、前記検査試料の色度に対応した色の他の色標パッチを、前記透明部材表面に設ける
   ことを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の画像校正色標。
7. 前記他の色標パッチの色が、少なくとも前記３つの異なる色の各々の補色のいずれか、あるいは組合わせである
   ことを特徴とする請求項６に記載の画像校正色標。
8. 前記色標パッチに加え、前記撮像画像のガンマ補正に用いる、グレースケールにおける複数の階調のガンマ補正用パッチを、前記透明部材表面に設ける
   ことを特徴とする請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の画像校正色標。
9. 検査試料が載せられる透明部材表面に顕微鏡の一視野に全体が含まれる大きさで形成される画像校正色標を形成する画像校正色標製造方法であり、
   透明部材表面に少なくとも３つの異なる色に対応するカラーレジストを順次塗布し、
   フォトリソグラフィ法により、前記画像校正色標における前記異なる色の各々の色標パッチを順次形成することにより、前記画像校正色標を形成する
   ことを特徴とする画像校正色標製造方法。

Images