JP2017536103A5

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Publication number: JP2017536103A5
Application number: JP2017520357A
Authority: JP
Filing date: 2015-10-06
Publication date: 2018-11-22
Anticipated expiration: 2035-10-06

Claims

分析物を膜中の膜貫通ポアに送達する方法であって、
（ａ）微粒子に付着している前記分析物を用意するステップと、
（ｂ）前記微粒子を前記膜へ送達し、それによって前記分析物を前記膜貫通ポアに送達するステップと
を含み、前記微粒子は、（ｉ）表面に沿って膜へ進み、（ｉｉ）膜に沿って進み、および／または（ｉｉｉ）膜と平行して進む、前記方法。
増加した濃度の分析物を膜中の膜貫通ポアに送達するためのものであり、前記膜貫通ポアに送達される前記分析物の濃度が、好ましくは少なくとも約１０倍増加される、請求項１に記載の方法。
（ａ）前記微粒子を電気化学的勾配、拡散勾配、親水性勾配または疎水性勾配に沿って移動させるステップと、（ｂ）前記微粒子を磁場内で移動させるステップと、（ｃ）前記微粒子を電場内で移動させるステップと、（ｄ）前記微粒子を圧力下で移動させるステップと、または（ｅ）前記微粒子を重力によって移動させるステップとを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、２０以上、３０以上、５０以上、１００以上、５００以上、１，０００以上、５，０００以上、１０，０００以上、１００，０００以上、１０００，０００以上、または５０００，０００以上の分析物が前記微粒子に付着される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
前記分析物が、前記膜とカップリングすることができる１つまたは複数のアンカーを含み、場合により、アンカーが、ポリペプチドアンカーおよび／または疎水性アンカーを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
前記分析物が前記微粒子に一時的に付着され、場合により、前記分析物がハイブリダイゼーションによって前記微粒子に付着され、および／または請求項５に依存したときに、前記１つまたは複数のアンカーが、ハイブリダイゼーションによって前記分析物に連結される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
前記微粒子が、微粒子が直径５００μｍ以下であり、セラミック、ガラス、シリカ、重合体または金属から形成される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
前記膜貫通ポアが膜貫通タンパク質ポアであり、場合により、膜貫通タンパク質ポアが、スメグマ菌（Mycobacterium smegmatis）ポリン（Ｍｓｐ）、α−ヘモリシン（α−ＨＬ）またはライセニンに由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
前記分析物が重合体であり、場合により、ポリヌクレオチドである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
増加した濃度のポリヌクレオチドを膜中の膜貫通ポアに送達するためのものである、請求項９に記載の方法。
ポリヌクレオチドを特性評価する方法であって、（ａ）請求項９または１０に記載の方法を行うステップと、（ｂ）前記ポリヌクレオチドが前記ポアを通るように前記ポリヌクレオチドを前記膜貫通ポアと相互作用させるステップと、（ｃ）前記ポリヌクレオチドが前記ポアに対して移動するときに、前記ポリヌクレオチドの１つまたは複数の特性を示す１つまたは複数の測定値を取り、それによって前記ポリヌクレオチドを特性評価するステップとを含む方法。
前記微粒子を前記膜から除去するステップをさらに含み、場合により、磁場またはフローベースの方法を使用する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
（ａ）第一の微粒子に付着している第一の試料中の第一の分析物を用意するステップと、
（ｂ）前記第一の微粒子を前記膜へ送達し、それによって前記第一の分析物を前記膜貫通ポアに送達するステップと、
（ｃ）前記第一の微粒子を前記膜から除去する、場合により前記第一の分析物を除去するステップと、
（ｄ）第二の微粒子に付着している第二の試料中の第二の分析物を用意するステップと、
（ｅ）前記第二の微粒子を膜へ送達し、それによって前記第二の分析物を前記膜貫通ポアに送達するステップと
を含む、請求項１１に記載の方法。
請求項１３に記載の方法であって、
（Ａ）（ｉ）ステップ（ｂ）と（ｃ）の間に、前記第一の分析物を前記膜貫通ポアと相互作用させ、前記第一の分析物の有無または１つもしくは複数の特性を示す１つまたは複数の測定値を相互作用中に取るステップ、および／または（ｉｉ）ステップ（ｅ）後に、前記第二の分析物を前記膜貫通ポアと相互作用させ、前記第二の分析物の有無または１つもしくは複数の特性を示す１つまたは複数の測定値を相互作用中に取るステップをさらに含む、あるいは、
（Ｂ）（ｉ）ステップ（ｂ）と（ｃ）の間に、前記第一のポリヌクレオチドが前記ポアを通って移動するように、前記第一のポリヌクレオチドを前記膜貫通ポアと相互作用させ、前記第一のポリヌクレオチドが前記ポアに対して移動するときに、前記第一のポリヌクレオチドの１つまたは複数の特性を示す１つまたは複数の測定値を取り、それによって前記第一のポリヌクレオチドを特性評価するステップ、および／または（ｉｉ）ステップ（ｅ）後に、前記第二のポリヌクレオチドが前記ポアを通って移動するように、前記第二のポリヌクレオチドを前記膜貫通ポアと相互作用させ、前記第二のポリヌクレオチドが前記ポアを通って移動するときに、前記第二のポリヌクレオチドの１つまたは複数の特性を示す１つまたは複数の測定値を取り、それによって前記第二のポリヌクレオチドを特性評価するステップをさらに含む、
前記方法。
膜貫通ポアを使用して分析物の有無または１つもしくは複数の特性を判定する方法であって、（ａ）請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法を行うステップと、（ｂ）前記分析物を前記膜貫通ポアと相互作用させるステップと、（ｃ）前記分析物の有無または１つもしくは複数の特性を示す１つまたは複数の測定値を相互作用中に取るステップとを含む方法。