JP2017534593A - オキシントモジュリン類似体 - Google Patents

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Abstract

本発明に係るオキシントモジュリン類似体は、ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲをダブルターゲットとしてアゴニスト活性を示し、安定性及び生体活性が高く、目立った副作用がない。また、本発明に係るオキシントモジュリン類似体は、過度摂食、肥満症及び糖尿病を対象とする治療薬の製造に応用可能である。【選択図】なし

Description

本発明は生化学の技術分野に属し、具体的にはオキシントモジュリン類似体のペプチドに関する。また、本発明は上記新規オキシントモジュリン類似体の治療用途に関する。
糖尿病（Ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ，ＤＭ）はインスリンの相対的不足又は絶対的不足を特徴とする代謝性疾患であり、インスリンの相対的又は絶対的不足に起因して高血糖症状を発症する結果、三大栄養素の代謝障害を引き起こし、最終的には患者の正常な生理機能を阻害して合併症を併発する場合がある。現在、各国で糖尿病患者が日増しに増え、２０歳〜７９歳の成人のうち糖尿病患者数が２０１３年の時点で３．８２億に達し、２０３０年には４．３９億に達する予測になっている。その中でも中国は世界一の糖尿病大国であり、糖尿病患者数が約１．１億であり、その規模が迅速に拡大しつつある。肥満症は糖尿病に繋がる一要因であり、約９０％の２型糖尿病の罹患者が肥満体質に帰属される。また、世界規模で２億４千６百万人という糖尿病患者が存在し、２０２５年には糖尿病患者が３億８千万人に達するとも言われ、そのうちの多くは更に高・異常ＬＤＬとトリグリセリド、低ＨＤＬ等といった心臓血管リスクを伴っている。糖尿病の根治が現時点で不可能であることから、患者は生涯に亘って薬物を使用せざるを得ない窮境に直面し、その一方で、従来の糖尿病治療薬はそれぞれ各自の問題を抱え、新しい糖尿病治療薬への期待が高まっている。
ペプチド類薬物は、低分子医薬品、並びにタンパク質医薬品に比べて以下の優勢がある。つまり、１）その多くが内因性ペプチド又は天然ペプチドであるため、その構造と作用機構が明確であり、２）一般の低分子薬物に比べてより高い活性を示すと共に、投与量及び副作用が低く、加えて代謝産物が副作用のないアミノ酸であり、３）外因性タンパク質に比べて免疫原性が抑えられ、且つ化学合成できることから製品純度が高く、品質制御も可能であり、４）経口投与で消化管によって消化されることが少なく、タンパク質分子が消化酵素によって分解されて経口投与が困難であるという欠点を解消することができる。
グルカゴン様ペプチド−１（Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１，ＧＬＰ−１）はインクレチン（Ｉｎｃｒｅｔｉｎ）の１種であり、主に小腸粘膜Ｌ細胞から分泌されるペプチドである。グルカゴン様ペプチド−１は、ＧＬＰ−１−（７−３７）とＧＬＰ−１−（７−３６）−アミドの２種類の活性タイプに分けられ、そのうち、ＧＬＰ−１は特異的受容体であるグルカゴン様ペプチド−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）に結合して抗糖尿病効果を示し、主な生理機能として膵臓β細胞の機能改善、インスリンの分泌促進と同時に、食後血糖値を下げて血糖恒常性を維持し、インスリンの生合成を促進し、グルカゴン分泌及び胃腸蠕動を抑制し、特に胃内容の排出を抑えて満腹感を増加させ、並びに食欲を抑えて体重調整を行うことが挙げられる。ＧＬＰ−１は、従来の糖尿病治療薬に比べて血糖恒常性を維持し、体重調整に効果的であるというメリットがある（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１ ａｇｏｎｉｓｔｓ，Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．２０１１；１０８：３３Ｂ−４１Ｂ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＤＰＰ−４ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｄｉａｂ Ｖａｓｃ Ｄｉｓ Ｒｅｓ．２０１２；９：１０９−１６．Ｉｎｃｒｅｔｉｎ ｍｉｍｅｔｉｃｓ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ，Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｔ．２００６；２６：１０１５−７．）。ＧＬＰ−１は半減期が極めて短く、分泌後に速やかにジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ−ｐｅｐｔｉｄａｓｅ−ＩＶ，ＤＰＰ−ＩＶ）又は中性エンドペプチダーゼ（Ｎｅｕｔｒａｌ ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ，ＮＥＰ）２４．１１によって分解されるため、ＧＬＰ−１の臨床応用に支障をきたし、酵素抵抗性を示すＧＬＰ−１受容体作動薬が期待されている。
ところで、臨床検証でＧＬＰ−１受容体作動薬が主に以下の幾つかの面で欠点があることが実証されている。
ＧＬＰ−１受容体作動薬は半減期が短いため注射頻度が高くなり、患者に不便を感じさせることがあり、更に、薬物動態学及び安全性が未だに完全に掌握できていないため、導入された外因性化学物質がどのような経路を介して分解・排出し、人体にどのような影響をもたらすかが何れも不明であり、なおさら検証する必要がある。最新の前臨床研究から、グルカゴン様ペプチド−１受容体及びグルカゴン受容体（ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲ）両者を均等に認識してダブルターゲットとする作動薬は、ＧＬＰ−１Ｒ特異的な作動薬に比べて肥満マウスの治療においてより効果的であり、且つより優れた安全性に加えて血糖制御においても改善効果があることが証明されている（Ａ ｎｅｗ ｇｌｕｃａｇｏｎ ａｎｄ ＧＬＰ−１ ｃｏ−ａｇｏｎｉｓｔ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ｏｂｅｓｉｔｙ ｉｎ ｒｏｄｅｎｔｓ，Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２００９；５：７４９−５７．）。これに関連してオキシントモジュリン（Ｏｘｙｎｔｏｍｏｄｕｌｉｎ，ＯＸＭ）についても研究が盛んに行われている。オキシントモジュリンは腸管上皮Ｌ細胞から分泌される低分子ペプチド類ホルモンであり、３７個のアミノ酸からなる内因性グルカゴン前駆体である。オキシントモジュリンはＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲ両者を均等に認識してダブルターゲットとする作動薬であり、ＧＬＰ−１受容体に比してグルカゴン受容体に対する親和性が２倍低く、且つ天然グルカゴンとＧＬＰ−１に比して両者の受容体に対して低い親和性を示している。天然オキシントモジュリンは生理活性がさほど高いものではないが、臨床研究から４週間連続して天然オキシントモジュリンを皮下注射した場合、患者体重が著しく低下し、摂食量も抑えられることが確認できている（Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｏｘｙｎｔｏｍｏｄｕｌｉｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎ ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｏｂｅｓｅ ｓｕｂｊｅｃｔｓ：ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００５，５４：２３９０−５．）。一方、オキシントモジュリンは半減期が短く、細胞表面に局在するジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）によって速やかに分解されるため、生体内での安定性において懸念が残される。
ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲコアゴニストが高脂肪食摂取ラット（ＤＩＯ ｒａｔ）の体重と脂肪量を著しく低下させ、その効果が現在知られているＧＬＰ−１Ｒ特異的な作動薬を上回り、更に血糖制御においても効果的であることが確認できているが、これらの効果は摂食制御と大量のエネルギー消費とも関連がある。また、プロテアーゼ抵抗性を示す長時間作用型のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲダブルターゲット作動薬は、同じ親和性を示す長時間作用型のＧＬＰ−１Ｒ作動薬に比して体重を著しく低下させ、同時にトリグリセリド低下効果と抗高血糖効果も兼ね備えている。それ以外、長時間作用型のＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲダブルターゲット作動薬は、例えば、血漿インスリン、レプチン及びアディポネクチン等といった代謝マーカーを改善することができる（Ｕｎｉｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｕａｌ ｉｎｃｒｅｔｉｎｓ ｍａｘｉｍｉｚｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｂｅｎｅｆｉｔｓ ｉｎ ｒｏｄｅｎｔｓ，ｍｏｎｋｅｙｓ，ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３；５：２０９．）。
以上のことから、ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲをダブルターゲットとした作動薬は抗糖尿病のペプチド薬品として注目されつつある。近年、化学変性手段を利用して、幾つかの潜在的な、１日１回注射及び１週間１回注射で済むオキシントモジュリン類似体が開発されている。こういった過程で最も頻繁に使われる変性剤としてメトキシポリエチレングリコール（ｍｅｔｈｏｘｙ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ，ｍＰＥＧ）が挙げられ、オキシントモジュリン分子の排除体積を増やして薬物分子の腎臓除去率を低減することで、ｍＰＥＧ変性薬物の血漿半減期を延ばし、週１回の注射で済むという目標を確実に実現している。このような方法ではペプチド薬物の半減期を著しく改善することができるが、多くのタンパク質は生理活性がある程度で下がってしまい、その欠点も目立っている。更に、ｍＰＥＧは体内で分解できない分子であるため、ｍＰＥＧ修飾のペプチド・タンパク質類医薬品が腎臓の液胞化を引き起こすおそれがある（Ｓｈｏｒｔ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ：ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌａｒ ｖａｃｕｏｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｇｌｙｃｏｌ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｓｃｉ．１９９８；４２：１５２−７，Ｓａｆｅｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｎ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌｓ（ＰＥＧｓ） ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｃｏｓｍｅｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００５；２１４：１−３８．）。一方、ｍＰＥＧで修飾された薬物分子はその多くが腫瘍治療に用いられ、臨床現場でＰＥＧ毒性が無視されている側面もある。そこで、ペプチド配列を最適化し、ペプチド薬物の生化学特性と生体作用を究明することは研究者の共通認識でもあり、ペプチド薬物の各特性と安定性を更に高めることが課題になっている。
本発明者は、オキシントモジュリン分子構造について鋭意研究を重ねた結果、オキシントモジュリン類似体がより長い半減期とインスリン分泌促進活性を示すと同時に、副作用がなく、糖尿病等の治療に有望であることを見出した。そこで、本発明の１つの目的は、オキシントモジュリン類似体を提供することである。
本発明に係るオキシントモジュリン類似体は、次世代の抗糖尿病薬として期待され、血糖降下及び体重低下効果を兼ね備えている。そこで、本発明のもう１つの目的は、上記オキシントモジュリン類似体の治療用途を提供することである。
本発明は、以下に示すオキシントモジュリン、グルカゴン様ペプチド−１、エキセナチド（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ,Ｅｘ−４）及びグルカゴンの親配列を改良することにより成し遂げたものである。
オキシントモジュリンの親配列（配列番号２５）：Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−ＯＨ、
グルカゴン様ペプチド−１の親配列（配列番号２６）：Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
エキセナチドの親配列（配列番号２７）：Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２、
グルカゴンの親配列（配列番号２８）：Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ。
本発明の一側面においてオキシントモジュリン類似体を提供し、該オキシントモジュリン類似体は、下記アミノ酸配列で表される親配列有する。
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
Ｒ１＝−ＯＨ又は−ＮＨ２、
Ｘａａ２＝Ａｉｂ、Ｓｅｒ又はＤ−Ｓｅｒ、
Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ又はＧｌｕ、
Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
Ｘａａ２３＝ＩＩｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ、
Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又は非存在、
Ｘａａ２８＝Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ又は非存在、
Ｘａａ２９＝Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在である。
前記アミノ酸配列において、Ｘａａ１０、Ｘａａ１６、Ｘａａ１７及びＸａａ２０のうち少なくとも１個のアミノ酸残基がＬｙｓであり、前記少なくとも１個のＬｙｓ又は前記配列における第１２位Ｌｙｓの側鎖は親油基に結合し、結合方式としては前記親油基のカルボキシル基が１つの架橋単位のアミノ基とアミド結合を形成し、架橋単位のアミノ酸残基におけるカルボキシル基と前記親配列におけるＬｙｓのＮ−末端残基とが１つのアミド結合を形成して前記親配列に連結され、
前記架橋単位はＧｌｕ、Ａｓｐ及び／又は（ＰＥＧ）ｍであり、そのうち、ｍが２〜１０の整数であり、前記親油基はＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｎＣＯ−からなる群より選ばれる１種のアシル基であり、そのうち、ｎが１０〜２４の整数である。
前記架橋単位は、下記化５に示す構造を有するＧｌｕ−（ＰＥＧ）ｍ、Ａｓｐ−（ＰＥＧ）ｍ又は（ＰＥＧ）ｍであることが好ましい。
本発明に係る化合物は、下記アミノ酸配列で表される親配列を有することが好ましい。
Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
Ｒ１＝−ＮＨ２、
Ｘａａ２＝Ａｉｂ又はＤ−Ｓｅｒ、
Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｇｌｕ又はＬｙｓ、
Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
Ｘａａ２３＝ＩＩｅ、Ｖａｌ、
Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ又はＬｅｕ、
Ｘａａ２８＝Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ａｓｐ又は非存在、
Ｘａａ２９＝Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在である。
より好ましくは、前記化合物は配列番号１〜２４に示すアミノ酸配列を有する化合物１〜２４である。
特に説明がない限り、本明細書において３文字コードで天然アミノ酸を表し、並びに当分野で通用の３文字コードで他のアミノ酸を表し、例えば、Ａｉｂはアミノイソ酪酸を表し、Ｏｒｎはオルニチンを表する。
本発明に係る化合物は、理論上分子内架橋によって安定な螺旋構造を形成し、ＧＬＰ−１Ｒ又はＧＣＧＲ受容体に対して高い親和性及び／又は特異性を示す。本発明に係る化合物は、その配列構成において１個又は数個の分子内架橋を含む。このような架橋は２つのアミノ酸残基の側鎖の間で形成され、前記２つのアミノ酸残基は、通常、直線状配列において３つのアミノ酸によって隔てられる。前記分子内架橋は、例えば、残基ペア１２と１６、１６と２０、１７と２１、或いは残基ペア２０と２４の側鎖の間で形成され、これらの２つの側鎖はイオン性相互作用又は共有結合を介して互いに連結される。したがって、これらの残基ペアは反対電荷を帯びる側鎖を含んでもよく、イオン性相互作用によって塩橋を形成することができる。例えば、片方の残基がＧｌｕ又はＡｓｐである場合、他方の残基がＬｙｓ又はＡｒｇであり、ＬｙｓとＧｌｕ、ＬｙｓとＡｓｐがそれぞれペアを形成し、ペア同士が結合してラクタム環を形成することができる。
本発明に係る化合物は、理論上において親油基が血液中のアルブミンに結合することにより、酵素によって分解されることなく、化合物の半減期を高めることができる。
本発明のもう１つの側面において、本発明のオキシントモジュリン類似体を含む薬物組成物を提供し、該薬物組成物は前記オキシントモジュリン類似体を活性成分とし、薬学的に許容可能な担体及び／又は添加剤を更に含んでなる。
また、本発明の他の側面において、本発明のオキシントモジュリン類似体の医薬品製造における用途を提供し、本発明のオキシントモジュリン類似体が細胞と動物実験において血糖降下効果を示し、糖尿病治療薬として有望である。また、本発明のオキシントモジュリン類似体は体重低下効果も兼ね備え、肥満症の治療薬としても有望である。
本発明で言うＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲダブルターゲット作動薬はホモログペプチドであり、本発明においてホモログペプチドとは、ペプチドが本来ならばＧＬＰ−１、オキシントモジュリン、グルカゴン又はエキセナチドのアミノ酸配列を有するが、そのうちの１個又は数個のアミノ酸残基が異なるアミノ酸残基によって保存的に置換されたものを指し、得られるペプチドは本発明に支障なく適用することができる。
本発明に係るペプチドは、体重を調整して体重低下を促すことができ、例えば、摂食量の減少及び／又はエネルギー消費を促し、体重変化に著しい影響を示す。体重低下とは別に、本発明に係る化合物は、更に血液中のコレステロール量を調整することができ、例えば、血液中のＬＤＬ量を低下させ、ＨＤＬ／ＬＤＬ比を高めることができる。したがって、本発明に係るペプチドは過度肥満又はそれを特徴とする任意疾患の治療に直接又は間接に利用でき、例えば、肥満症、病的肥満症、肥満関連の炎症、肥満関連の胆嚢疾患、肥満症に起因する睡眠時無呼吸症候群等の治療及び／又は予防に利用することができる。本発明に係る化合物は、更に代謝症候群、高血圧、アテローム性脂質異常血症、アテローム性動脈硬化、動脈硬化、冠動脈疾患及び脳卒中等の予防に利用することができる。本発明に係るペプチドは、これらの疾患に対して体重調整又は体重調整に関連した作用機構に基づき、或いは体重調整とは別の作用機構に基づきその役割を果たすものである。
当業者からすれば、本発明に係る薬物組成物の投与形態に特に制限がないのがよく理解でき、例えば、治療目的に応じて経口投与、経皮投与、静脈内投与、筋肉内投与、局所投与、鼻腔内投与等の投与形態を適宜選択することができる。また、投与形態にもよるが、本発明に係るペプチド薬物組成物を適切な製剤形態に調製し、そこに治療及び／又は予防効果を示す有効量で少なくとも１種の本発明のペプチドと、少なくとも１種の薬学的に許容可能な担体とを含むことができる。
具体的な製剤例としては、錠剤、カプセル、糖衣錠剤、粒剤、経口液剤又はシロップ剤が挙げられ、経皮投与では油脂性軟膏や貼付剤にすることができ、更に、エアゾール剤、鼻腔用スプレー、注射用無菌液剤にすることができる。
なお、非経口ルートで投与する場合には、まず本発明のペプチドを含む薬物組成物を溶液又は凍結乾燥粉末に調製した後、使用に先立って適切な溶媒又は薬用担体を加えて緩衝液、等浸透液又は水溶液に調製することができる。
本発明の薬物組成物に含まれるペプチド量は、当業者が疾患の種類、病状の深刻さ、患者体重、製剤形態、投与ルート等の客観的要素を考慮した上で適宜調整することができる。
本発明のペプチドは、天然オキシントモジュリンに比して同じ用量でより優れた生体活性を示し、同時に薬物動態学の実験においてもより長い半減期と安定性を示し、加えて高収率で合成することができ、安定性が高く、安価でもあり、大量製造が可能である。
ＧＬＰ−１Ｒに対するエキセナチド、化合物４、５、６及び７の刺激作用を示す図である。 ＧＣＧＲに対するグルカゴン、化合物４、５、６及び７の刺激作用を示す図である。 オスＣ５７Ｂ１／６Ｊマウスのブドウ糖摂取後のインスリン分泌に対するエキセナチド、化合物４、５、６及び７の影響を示す図であり、ＰＢＳコントロールに比べるときにｐ＜０．０５である。 オスＣ５７Ｂ１／６Ｊマウスのブドウ糖摂取後のインスリン分泌に対するエキセナチド、化合物１９、２０、２１、２２、２３及び２４の影響を示す図であり、ＰＢＳコントロールに比べるときにｐ＜０．０５である。 肥満マウスの体重に対するペプチド化合物４、５、６及び７の影響を示す図であり、生理食塩水コントロールに比べるときにｐ＜０．０５である。
以下、本発明の目的、方法及び効果をより深く理解できるように、図面を参照しながら本発明を詳述するが、本発明はこれらに制限されない。特に説明がない限り、実施例で行われた実験は通用の条件又はメーカー推奨の条件で行った。また、特に説明がない限り試薬と測定装置は、市販ルートで購入可能である。
また、実施例で取り上げたオキシントモジュリン類似体は、下記配列を有するものである。
化合物１（配列番号１）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
化合物２（配列番号２）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２
化合物３（配列番号３）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物４（配列番号４）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物５（配列番号５）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物６（配列番号６）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物７（配列番号７）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物８（配列番号８）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物９（配列番号９）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１０（配列番号１０）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１１（配列番号１１）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１２（配列番号１２）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１３（配列番号１３）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１４（配列番号１４）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１５（配列番号１５）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１６（配列番号１６）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１７（配列番号１７）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１８（配列番号１８）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物１９（配列番号１９）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物２０（配列番号２０）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物２１（配列番号２１）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物２２（配列番号２２）：Ｈｉｓ−Ａｉｂ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物２３（配列番号２３）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
化合物２４（配列番号２４）：Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２
上記配列において、Ｌｙｓ残基に対して以下に示す修飾を加えることができる。
また、上記親油基に連結されるＬｙｓ残基を、下記官能基に変えることができる。
また、本明細書で使われる略語は、具体的には以下のものを指す。すなわち、
Ｂｏｃ ｔ−ブトキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ フルオレニルメトキシカルボニル基、ｔ−Ｂｕ ｔ−ブチル基、ｉｖＤＤｅ １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチルの脱保護と親油基、ｒｅｓｉｎ 樹脂、ＴＦＡ トリフルオロ酢酸、ＥＤＴ １，２−エタンジチオール、フェノール フェノール、ＦＢＳ ウシ胎児血清、ＢＳＡ ウシ血清アルブミン、ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー、ＧＬＰ−１Ｒ グルカゴン様ペプチド−１受容体、ＧＣＧＲ グルカゴン受容体、ＧＬＰ−１ グルカゴン様ペプチド−１、ｍＰＥＧ モノメトキシポリエチレングリコール、ＯＸＭ オキシントモジュリン、Ｈｉｓ ヒスチジン、Ｓｅｒ セリン、Ｄ−Ｓｅｒ Ｄ−型セリン、Ｇｌｎ グルタミン、Ｇｌｙ グリシン、Ｇｌｕ グルタミン酸、Ａｌａ アラニン、Ｔｈｒ トレオニン、Ｌｙｓ リシン、Ａｒｇ アルギニン、Ｔｙｒ チロシン、Ａｓｐ アスパラギン酸、Ｔｒｐ トリプトファン、Ｐｈｅ フェニルアラニン、ＩＩｅ イソロイシン、Ｌｅｕ ロイシン、Ｃｙｓ システイン、Ｐｒｏ プロリン、Ｖａｌ バリン、Ｍｅｔ メチオニン、Ａｓｎ アスパラギン、ＨｏｍｏＬｙｓ ホモリシン、Ｏｒｎ オルニチン、Ｄａｐ ジアミノピメリン酸、Ｄａｂ ２，４−ジアミノ酪酸。
実施例１：オクタデカン二酸モノ−ｔ−ブチルエステルの合成
オクタデカン二酸（３１．４ｇ、１００ｍｍｏｌ）をトルエン２５０ｍＬに懸濁した後に混合物を加熱還流し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジ−ｔ−ブチルアセタール（５０．９ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を１滴ずつ４時間かけて滴下し、混合物を還流しながら一晩反応させた。溶媒を真空条件下で除去した後、５０℃で粗物質をＤＣＭ／酢酸エチルエステル（５００ｍＬ、１：１）に懸濁して１５分間攪拌した。固形物を濾過し、２００ｍＬのＤＣＭに回収して研磨を行い、濾過、真空蒸留して粗モノｔ−ブチルヘキサデカン２０ｇを得た。そして、ヘプタン２００ｍＬで再結晶することによりクタデカン二酸モノ−ｔ−ブチルエステル１２．９ｇを得、収率は３３％であった。再結晶以外でも、該モノエステルをＡｃＯＥｔ／ヘプタンを溶出溶媒とするシリカカラムで精製することができる。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：２．３５（ｔ，２Ｈ），２．２０（ｔ，２Ｈ），１．６５−１．５５（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３４−１．２０（ｍ，２２Ｈ）。
実施例２：ペプチド化合物の合成
ペプチド化合物１及びペプチド化合物５を以下の手順で合成した。
材料として、アミノ酸はＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社より購入した。特に説明がない限り、他の試薬は何れも分析用クラスで、Ｓｉｇｍａ社より購入した。ペプチド合成装置として、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のＰＲＥＬＵＤＥ Ｘ６チャンネルペプチド合成装置を用い、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社のＬｕｎａ Ｃ１８カラム（カラム規格：４６ｍｍｘ２５０ｍｍ）でペプチドを精製し、高速液体クロマトグラフィーはＷａｔｅｒｓ社製であり、マススペクトル解析はＡｇｉｌｅｎｔ社の質量分析計を用いて行った。
１．ペプチド化合物１の合成
ペプチド化合物１の配列構造は、Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２であった。
１ａ．主鎖の合成
Ｆｍｏｃ／ｔ−Ｂｕ法を利用し、ＣＳ３３６Ｘペプチド合成装置（米国ＣＳ Ｂｉｏ社製）を用いて０．２５ｍｏｌのスケールで下記ペプチド合成した。
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂
ステップ１：リンクアミド樹脂０．７５ｇをジクロロメタン中で膨張させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで樹脂を３回洗浄した。
ステップ２：リンクアミド樹脂を担体とし、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを１：１：１の割合で配合した混合液をカップリング剤として用い、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを溶媒として設定プログラムに従って縮合反応を行うことにより、順にＦｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを連結してＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂を得た。縮合反応１サイクルごとに、Ｆｍｏｃ−アミノ酸導入量と樹脂使用量の比は１：１〜６：１の範囲であり、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート量とＦｍｏｃ−アミノ酸導入量との比は３：１であった。
１ｂ．１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル基（ｉｖＤｄｅ）の除去と親油基の導入
Ｎ−メチルピロリドンとジクロロメタンとが体積比で１：１の溶液において、上記１ａ．で合成した保護基が付いているペプチド基樹脂を２回洗浄した後、新たに調製したヒドラジン水和物を２．０％含むＮ−メチルピロリドン溶液を加え、該反応物を室温下で１２分間振蕩し、濾過を行った。ヒドラジン処理を２回繰り返してＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂を得た。続いて、ジクロロメタンとＮ−メチルピロリドンを用いて樹脂を十分洗浄し、Ｎ−メチルピロリドンにＦｍｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ２−ＯＨ、ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール及びジイソプロピルエチルアミンを混合してなるカップリング溶液を加え、３時間振蕩してから濾過、洗浄した。ヒドラジン処理を２回繰り返し、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＯＨ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂を得た後、ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いてＦｍｏｃ基を除去した。そして、Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＯＨを用いる縮合反応を更に１回繰り返し、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＯＨ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂を得た。ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いてＦｍｏｃ基を除去し、通常の条件下で順にＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、ｔ−ブチルによって保護されているオクタデカン脂肪酸を縮合させ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂を得た。
１ｃ．ペプチドの脱保護
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ａｌａ−リンクアミド樹脂を丸底フラスコに入れ、氷浴の条件下でＴＦＡ／ＥＤＴ／フェノール／Ｈ２Ｏが体積比で８８／２／５／５の分解液を加え、分解液の温度を２５℃に保持しつつ１２０分間反応させた。濾過をした後、濾過ケーキを少量のトリフルオロ酢酸で３回洗浄し、濾液を集めて回収した。そして、濾液を攪拌しながらゆっくりと冷たいエテールに注ぎ、１時間以上静置した。沈降が十分行われると、上澄液を捨て、遠心して沈降物を回収し、冷たいエテールで６回洗浄して粗物質としてＨｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｇｌｕ−ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯ２Ｈ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２化合物を得た。
１ｄ．ペプチドの精製
上記１ｃで得られた粗物質を、アセトニトリルとＨ２Ｏとが体積比で１：１の溶液に酢酸を５．０％含む溶液に溶かし、５．０ｍ逆相Ｃ１８が充填されているカラム（カラム規格：５０ｍｍｘ２５０ｍｍ）で２回精製を行った。具体的には、試料を注入した後、３０〜６０％アセトニトリル‐０．１％トリフルオロ酢酸／Ｈ２Ｏの勾配、流速４０ｍＬ／分間で４５分間かけてカラムを洗い流し、ペプチドを含む画分を回収し、アセトニトリルを除去してから凍結乾燥させた。精製後のＨＰＬＣ純度は９５％を超え、精製済みの産物を液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）で分析したところ、プロトン化分子イオンピークのｍ／ｚ値が４１１６．０であり、理論値が４１１６．６であった。
２．ペプチド化合物５の合成
ペプチド化合物５の配列構造は、Ｈｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２であった。
２ａ．主鎖の合成
Ｆｍｏｃ／ｔ−Ｂｕ法を利用し、ＣＳ３３６Ｘペプチド合成装置（米国ＣＳ Ｂｉｏ社製）を用いて０．２５ｍｏｌのスケールで下記ペプチド合成した。
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂
ステップ１：リンクアミドＭＢＨＡ−ＬＬ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製、０．３４ｍｍｏｌ／ｇ）０．７５ｇをジクロロメタン中で１時間膨張させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで樹脂を３回洗浄した。
ステップ２：リンクアミド樹脂を担体とし、６−クロロベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートと、有機アルカリであるＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンとを１：１の割合で配合した混合液をカップリング剤として用い、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを溶媒とし、設定プログラムに従って縮合反応を実行することにより、順にＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（３ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（２ｘ）、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを連結させてＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
ここで敢えて説明するが、上記ステップ２の縮合反応において、第１サイクルのアミノ酸であるＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ導入量と樹脂使用量との比が１：１〜６：１の範囲であり、次のサイクルではＦｍｏｃ−アミノ酸、６−クロロベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、有機アルカリであるＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの使用量は何れも過量で２〜８倍の範囲となり、反応時間は１〜５時間の範囲であった。
２ｂ．１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）の除去と親油基の導入
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとジクロロメタンとが体積比で１：１の溶液において樹脂を２回洗浄した後、新たに調製したヒドラジン水合物が３．０％のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、該反応物溶液を室温下で１０〜３０分間振蕩し、濾過した。ヒドラジン処理を５回繰り返してＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。次に、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
そして、ＦｍｏｃＮＨ−ＰＥＧ２−ＯＨ（Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ社製）、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート及びジイソプロピルエチルアミンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに混合してなるカップリング溶液（何れも５倍過量である。）を加え、２時間振蕩してから濾過した。続いて、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄してＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。その後、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
ピペリジン含有量が２０％のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いて３０分間かけて除去操作を２回繰り返すことによりＦｍｏｃ基を除去し、Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＯＨ、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート及びジイソプロピルエチルアミンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに混合してなるカップリング溶液（何れも５倍過量である。）を加えて縮合反応を行うことにより、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−ＰＥＧ２）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。そして、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄した。
ピペリジン含有量が２０％のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を用いて３０分間かけて除去操作を２回繰り返すことによりＦｍｏｃ基を除去し、パルミチン酸、２−（７−アゾベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、ジイソプロピルエチルアミンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに混合してなるカップリング溶液（何れも５倍過量である。）を用いて縮合反応を行うことにより、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｃ１６）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂を得た。その後、順にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタンを用いて樹脂をそれぞれ３回洗浄し、真空蒸留して洗浄液を除去した。
２ｃ．ペプチドの脱保護
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｎ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−Ｃ１６）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｉｂ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ａｌａ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−リンクアミド樹脂に、ＴＦＡ、フェノール、チオアニソール、ＥＤＴ及び水が体積比で８２．５：５：５：２．５：５の分解液を加えた後、加熱して分解液の温度を２５℃にし、２．５時間反応させた。反応終了後に濾過し、濾過ケーキを少量の分解液で３回洗浄し、濾液を集めて回収した。濾液を攪拌しながらゆっくりと冷たいエテールに注ぎ、２時間以上静置して完全に沈降させ、遠心して沈降物を回収し、冷たいエテールで３回洗浄して粗物質としてＨｉｓ−（Ｄ−Ｓｅｒ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２−ＰＥＧ２−ＣＯ（ＣＨ２）１４ＣＨ３）−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｉｂ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−ＮＨ２化合物を得た。
２ｄ．ペプチドの精製
上記２ｃで得られる粗物質をアセトニトリルとＨ２Ｏとが体積比で１：２の混合液に溶かし、５．０ｍ逆相Ｃ１８が充填されているカラム（カラム規格：４６ｍｍｘ２５０ｍｍ）で精製した。具多的には、３０％アセトニトリル（トリフルオロ酢酸を０．０５％含む。）／水（トリフルオロ酢酸を０．０５％含む。）を開始溶出液とし、速度１．３３％／分間でアセトニトリルの割合を増やして勾配を構成し、流速１５ｍＬ／分間、３０分間の条件下でカラムを洗い流して、ペプチドを含む画分を回収して凍結乾燥させた。精製後のＨＰＬＣ純度は９５％を超え（純度が９５％未満の場合、更にＨＰＬＣ精製を１回繰り返してもよい。）、精製済みの産物を液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）で分析した。本発明において、以上の手順に従って下記表１〜表４に示すペプチド化合物を合成した。
実施例３：ＧＣＧＲとＧＬＰ−１Ｒ体外活性の測定
Ｃｉｓｂｏ社製のｃＡＭＰ測定キットを用いてグルカゴン様ペプチド−１受容体とグルカゴン受容体に対する刺激作用を測定し、グルカゴン様ペプチド−１、エキセナチド及びグルカゴンそれぞれの標準品を陽性コントロールとして用量反応曲線を作成した。
ＣＲＥ−ルシフェラーゼ系を利用可能で且つヒトＧＣＧＲ又はＧＬＰ−１Ｒを安定的に発現するＨＥＫ−２９３細胞を、１ウェルごとにＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ培基９８μＬ、細胞数５０００個となるようにして３８４ウェルプレートに接種した。測定サンプルを希釈して濃度勾配を構成し、接種後の２日目に各ウェルに測定サンプルを２μＬ加え、細胞と混ぜ合わせて１２時間反応させた。細胞と混ぜ合わせて用量反応曲線を作成し且つ該曲線からＥＣ５０値を算出するに先立って、測定サンプルを序列的に希釈して０．００５ｎＭ〜１００．０ｎＭの濃度範囲で希釈液１０個を調製し、並びに、エキセナチド標準品（杭州ペプチド生化学有限会社製、純度＞９８％、商品名 醋酸エキセナチド、Ｃａｓ番号１４１７３２−７６−５）を序列的に希釈して０．００５ｎＭ〜１００．０ｎＭの濃度範囲で標準品溶液１０個、グルカゴン標準品（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製、規格１２９４０３６−２Ｘ２．９４ＭＧ、Ｃａｓ番号１６９４１−３２−５）を序列的に希釈して０．０１ｎＭ〜１００ｎＭの濃度範囲で標準品溶液１０個をそれぞれ調製した。反応が終わった後、ルシフェラーゼ試薬１０μＬを各プレートに添加し、更に２分間かけて軽く混ぜあせた。プレートをＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製のプレートリーダーに入れて計測を行い、Ｐｒｉｓｍ５ソフトを用いて化合物の濃度曲線を作成し、それに基づいてＥＣ５０値を算出した。
オキシントモジュリン（上海盈公実業有限会社製、カタログ番号Ｅｓ−１２４０）に比べ、本発明に係る化合物はＧＬＰ−１Ｒに対してより優れた特異性を示し、グルカゴン受容体とＧＬＰ−１受容体に対してもより高い親和性を示した。
ＧＬＰ−１Ｒに対するエキセナチド、化合物４、５、６及び７の刺激作用の測定結果を図１に示し、ＧＣＧＲに対するグルカゴン、化合物４、５、６及び７の刺激作用の測定結果を図２に示す。
実施例４：化合物４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３、２４、及びＥｘ−４の薬物動態学的分析
オスＣＤ１マウス（南京大学モデル動物研究センターより購入）に対して、それぞれ上記実施例で得られた化合物４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３及び２４と、市販ルートで購入したエキセナチド標準品（Ｅｘ−４）を２５０μｇ／ｋｇの投与量で静脈内注射方式（ＩＶ）又は皮下注射方式（ＳＣ）にて投与し、比較試験を行った。投与後、０〜２４時間に亘って異なる時点で採血し、血漿サンプルを調製してＬＣ−ＭＳ／ＭＳ解析を行った。ＩＶ方式で得られたデータについてはモデル依存性の方法に基づき、ＳＣ方式で得られたデータについてはモデル非依存性の方法に基づいて薬物動態パラメーターを算出した。ＩＶ方式で投与した化合物４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３及び２４は半減期が約４〜６時間であり、濃度ピークに到達する時間（Ｔｍａｘ）が約１２時間であるのに対し、エキセナチドの半減期は約０．５時間であった。また、ＳＣ方式で投与した化合物４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３及び２４は濃度ピークに到達する時間（Ｔｍａｘ）が約１２時間以上であり、その一方、Ｅｘ−４の半減期が約２時間であった。ＩＶ方式又はＳＣ方式にて化合物４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３及び２４を投与した場合、何れも不良反応がなかった。
実施例５：経口ブドウ糖負荷に対する化合物４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３、２４、及びＥｘ−４の作用
１２〜１６週齢のオスＣ５７Ｂ１／６Ｊマウス（南京大学モデル動物研究センターより購入）の尻尾から末梢血を採取し、末梢血の血糖値に基づきマウスをランダムに数グループに分け、各グループは８匹ずつであった。禁食して６時間が経った後、動物に測定サンプルを投与し、更に約４時間経ってから最初の血液サンプルを採取し、空腹時の血中ブドウ糖値を測定した。そして、グルコースを経口投与してから動物を飼育箱に戻し（ｔ＝０）、更にｔ＝１５分、ｔ＝３０分、ｔ＝６０分、ｔ＝９０分及びｔ＝１２０分の時点で血液を採取して血糖値を測定した。そして、グルコースの経口投与を繰り返し、８時間かけて血糖値の経時的変化を観測した。ここで。２５０μｇ／ｋｇの基準でペプチド４、５、６、７、１９、２０、２１、２２、２３及び２４を投与した場合、経口ブドウ糖負荷が著しく低下することが分かった。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトで血糖変化曲線を作成し、曲線下面積（ＡＵＣ）を求めることで図３及び図４に示すようなＡＵＣ図が得られた。
エキセナチドを２５０μｇ／ｋｇの投与量で投与した場合、ＰＢＳブランクに比べ、最初のＯＧＴＴ曲線期間（１〜１２０分）でＡＵＣが著しく低下し（Ｐ＜０．０５）、後の３段階のＯＧＴＴ曲線期間（１２０〜４８０分）でＡＵＣがブランクコントロールに接近する結果となった（Ｐ＞０．０５）。ＰＢＳブランクに比べ、ペプチド４、ペプチド５、ペプチド６、ペプチド７、ペプチド１９、ペプチド２０、ペプチド２１、ペプチド２２、ペプチド２３及びペプチド２４は、４段階のＯＧＴＴ曲線期間（０〜４８０分）でＡＵＣが何れも著しく低下する結果となり（Ｐ＜０．０５）、ペプチド４、ペプチド５、ペプチド６、ペプチド７、ペプチド１９、ペプチド２０、ペプチド２１、ペプチド２２、ペプチド２３及びペプチド２４が長時間に亘って血糖降下効果を示すことが確認できた。
実施例６：肥満マウス体重に対する化合物４、５、６、７の影響と体重低下効果
２５週齢のＤＩＯマウス（南京大学モデル動物研究センターより購入）４０匹をランダムに５つのグループに分け（化合物４、５、６、７及び生理食塩水グループ）、各グループは８匹ずつであり、体重指数に顕著な差がないようにした。マウスに１日１回、皮下注射方式でそれぞれ化合物４、化合物５、化合物６、化合物７及び生理食塩水后を投与し、投与量は何れも２５０μｇ／ｋｇであり、投与後に体重を測定した。図５に示すように、化合物４、５、６、７を投与したグループは、１１日目から３０日目にかけて生理食塩水グループに比べてマウス体重が約２０％低下し、有意差を示した（Ｐ＜０．０５）。
以上は本発明を例示したに過ぎず、本発明の範囲を制限するものではない。したがって、本発明の趣旨から逸脱しない限り、本発明に対して種々の変形と変更を施すことが可能であり、これらの変形及び変更も本発明の範囲に含まれる。
本発明に係るオキシントモジュリン類似体は、ＧＬＰ−１Ｒ／ＧＣＧＲをダブルターゲットとしてアゴニスト活性を示し、半減期が長く且つ安定性、生体活性が高く、目立った副作用がない。また、本発明に係るペプチド化合物は高収率で製造することができ、安定性が高く且つ安価でもあり、過度摂食、肥満症、過体重、コレステロール異常及び糖尿病を対象とする治療薬の製造に応用可能である。

Claims (11)

  1. 下記アミノ酸配列で表される親配列からなるオキシントモジュリン類似体であって、
    Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
    Ｒ１＝−ＯＨ又は−ＮＨ２、
    Ｘａａ２＝Ａｉｂ、Ｓｅｒ又はＤ−Ｓｅｒ、
    Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
    Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
    Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｌｙｓ又はＧｌｕ、
    Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
    Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
    Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
    Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
    Ｘａａ２３＝ＩＩｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌ、
    Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
    Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ又は非存在、
    Ｘａａ２８＝Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ａｒｇ又は非存在、
    Ｘａａ２９＝Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
    Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
    Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
    Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
    Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
    Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
    Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
    Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在であり、
    前記アミノ酸配列において、Ｘａａ１０、Ｘａａ１６、Ｘａａ１７及びＸａａ２０のうち少なくとも１個のアミノ酸残基がＬｙｓであり、前記少なくとも１個のＬｙｓ又は前記配列における第１２位Ｌｙｓの側鎖は親油基と結合し、結合方式としては前記親油基のカルボキシル基が１個の架橋単位のアミノ基とアミド結合を形成し、架橋単位のアミノ酸残基におけるカルボキシル基と前記親配列におけるＬｙｓのＮ−末端残基とが１つのアミド結合を形成して前記親配列に連結され、
    前記架橋単位はＧｌｕ、Ａｓｐ及び／又は（ＰＥＧ）ｍであり、そのうち、ｍが２〜１０の整数であり、前記親油基はＣＨ３（ＣＨ２）ｎＣＯ−、ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｎＣＯ−からなる群より選ばれる１種のアシル基であり、そのうち、ｎが１０〜２４の整数であることを特徴とする、オキシントモジュリン類似体。
  2. 前記架橋単位は、Ｇｌｕ−（ＰＥＧ）ｍ、Ａｓｐ−（ＰＥＧ）ｍ及び（ＰＥＧ）ｍからなる群より選ばれる任意の１種である、請求項１記載のオキシントモジュリン類似体。
  3. 前記架橋単位は、前記アミノ酸配列の残基ペア１２と１６、１６と２０、１７と２１、或いは残基ペア２０と２４の側鎖の間で形成した分子架橋である、請求項１記載のオキシントモジュリン類似体。
  4. 前記親油基に結合するＬｙｓ残基は、ＨｏｍｏＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ又はＤａｂによって置換されている、請求項１記載のオキシントモジュリン類似体。
  5. 前記親配列は、下記アミノ酸配列であり、
    Ｈｉｓ−Ｘａａ２−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１０−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｘａａ１３−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ａｌａ−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｐｈｅ−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ２７−Ｘａａ２８−Ｘａａ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−ＣＯＲ１、そのうち、
    Ｒ１＝−ＮＨ２、
    Ｘａａ２＝Ａｉｂ又はＤ−Ｓｅｒ、
    Ｘａａ１０＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
    Ｘａａ１３＝Ｌｙｓ又はＴｙｒ、
    Ｘａａ１６＝Ｓｅｒ、Ａｉｂ、Ｇｌｕ又はＬｙｓ、
    Ｘａａ１７＝Ｌｙｓ又はＡｒｇ、
    Ｘａａ１８＝Ａｒｇ又はＡｌａ、
    Ｘａａ２０＝Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＬｙｓ、
    Ｘａａ２１＝Ａｓｐ又はＧｌｕ、
    Ｘａａ２３＝ＩＩｅ、Ｖａｌ、
    Ｘａａ２４＝Ｇｌｕ又はＧｌｎ、
    Ｘａａ２７＝Ｍｅｔ又はＬｅｕ、
    Ｘａａ２８＝Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ又は非存在、
    Ｘａａ２９＝Ｇｌｙ、Ｔｈｒ又は非存在、
    Ｘａａ３０＝Ｇｌｙ又は非存在、
    Ｘａａ３１＝Ｇｌｙ又は非存在、
    Ｘａａ３２＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ３３＝Ｓｅｒ又は非存在、
    Ｘａａ３４＝Ｓｅｒ又は非存在、
    Ｘａａ３５＝Ｇｌｙ又は非存在、
    Ｘａａ３６＝Ａｌａ又は非存在、
    Ｘａａ３７＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ３８＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ３９＝Ｐｒｏ又は非存在、
    Ｘａａ４０＝Ｓｅｒ又は非存在である、請求項１記載のオキシントモジュリン類似体。
  6. 前記親配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３及び配列番号２４からなる群より選ばれる任意の１種のアミノ酸配列である、請求項５に記載のオキシントモジュリン類似体。
  7. 前記アミノ酸配列において第１０位、第１２位、第１６位、第１７位又は第２０位のアミノ酸残基がＬｙｓである場合、前記Ｌｙｓの側鎖と結合する親油基は、下記化１〜化４の構造の官能基から選ばれる任意の１種である、請求項１又は５に記載のオキシントモジュリン類似体。
  8. 請求項１又は５に記載のオキシントモジュリン類似体を含んでなる薬物組成物。
  9. 請求項１に記載のオキシントモジュリン類似体の糖尿病治療薬の製造における用途。
  10. 請求項１に記載のオキシントモジュリン類似体の血糖降下薬の製造における用途。
  11. 請求項１に記載のオキシントモジュリン類似体の体重低下薬の製造における用途。
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