JP2017531442A - モノクローナル抗gpc−1抗体およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
2010: 9(3): 195−203)は、BLCA−38は、前立腺癌細胞に特異的なマウスモノクローナル抗体であると繰り返し言っていた。筆者は、BLCA−38はその抗原への結合ではインターナライズされないが、ウイルスとのコンジュゲーションにより、抗体のインターナリゼーションが促進され、レポーター遺伝子の発現の増加という結果が得られたことを明らかにしている。
ノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);SEQ ID
NO:4の位置70−76により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);SEQ ID NO:4の位置109−117により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
NO:4の位置70−76により規定されるアミノ酸配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%の相同性を有するアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);SEQ ID NO:4の位置109−117により規定されるアミノ酸配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%の配列相同性を有するアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
NO:3の位置138−461により規定されるアミノ酸配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%の相同性を有するアミノ酸
配列を含むまたはこれから構成される重鎖定常ドメイン配列;(b)SEQ ID NO:4の位置128−234により規定されるアミノ酸配列と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%の相同性を有するアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される軽鎖定常ドメイン配列;(c)ヒンジ領域。
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
6の残基122−131。
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
好適な条件下で培養し、よって、抗体またはその抗原結合性フラグメント、あるいは抗原結合性バリアントまたは誘導体を産生させることを含む。
にて寄託され得る。
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたは
これから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
実施形態1:第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントを含む単離抗体集団であって、
第1の抗体は、
(a)下記を含む重鎖可変領域:
SEQ ID NO:3の位置50−54により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:3の位置69−85により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:3の位置118−126により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3);ならびに
(b)下記を含む軽鎖可変領域:
SEQ ID NO:4の位置44−54により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:4の位置70−76により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:4の位置109−117により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3);
を含み、抗体集団は、下記を含む軽鎖可変領域を含む第2の抗体を含まない、単離抗体集団:
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
トのいずれか1つ以上である、実施形態1〜5のいずれか一つによる抗体集団。
(a)下記のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の重鎖可変領域FR(フレームワーク領域):SEQ ID NO:3の残基20−49、SEQ
ID NO:3の残基55−68、SEQ ID NO:3の残基86−117、SEQ ID NO:3の残基127−137;ならびに/または
(b)下記のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の軽鎖可変領域FR(フレームワーク領域):SEQ ID NO:4の残基21−43、SEQ
ID NO:4の残基55−69、SEQ ID NO:4の残基77−108、SEQ ID NO:4の残基118−127
をさらに含む、実施形態1〜6のいずれか一つによる抗体集団。
(a)SEQ ID NO:3の位置138−461により規定される重鎖定常ドメイン配列;
(b)SEQ ID NO:4の位置128−234により規定される軽鎖定常ドメイン配列;
(c)ヒンジ領域、
のいずれか1つ以上をさらに含む実施形態1〜7のいずれか一つによる抗体集団。
(a)細胞培養物は、実施形態10または実施形態12によるハイブリドーマ細胞を含み;ならびに
(b)細胞培養物は下記のいずれか1つ以上を含む軽鎖可変領域を含む抗体を産生するハイブリドーマ細胞を含まない、細胞培養物:
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。
リドーマ細胞を含まない、実施形態13による細胞培養物:SEQ ID NO:6の残基25−47、SEQ ID NO:6の残基59−73、SEQ ID NO:6の残基81−112、SEQ ID NO:6の残基122−131。
(a)SEQ ID NO:9の残基138−467で規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される重鎖定常領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:10の残基128−234で規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される軽鎖定常領域
を含むキメラ抗体である、実施形態5または実施形態30による抗体集団。
本出願では、単数形「1つの(a、an)」、および「その(the)」は、文脈で明確に別記されない限り、複数の言及物を含む。例えば、「1つの抗体」という句はまた、複数の抗体を含む。
は、二特異性抗体、アビボディ、ダイアボディ、トリボディ、テトラボディ、ナノボディ、シングルドメイン抗体、VHHドメイン、ヒト抗体、完全ヒト化抗体、部分ヒト化抗体、アンチカリン、アドネクチン、またはアフィボディであってもよい。
前立腺癌などの様々な形態の癌を診断および/または治療するためのより有効な方法および作用物質が必要とされ続けている。抗体は癌のための有用な診断および治療薬であり、血液系腫瘍および固形腫瘍を有する患者を診断および治療するための成功した重要なツールとなっている。腫瘍特異抗原を標的にする新しい関連抗体の同定は、癌患者のための診断および/または治療成績を改善する1つの可能性のある手段を提供する。これらの成績を増強させることができる別の手段は、既存の抗体に基づく診断法および/または療法の改善によるものである。
アメリカン組織タイプカルチャーコレクションで受入番号HB11785で寄託されている)はハイブリドーマ細胞のバイクローナル(モノクローナルではない)集団(2つの別個の抗体種の混合物を産生する)であるという本発明者らの決定に起因する。これらの抗体種のうちの1つのみが、前立腺癌細胞上の関連する抗原に結合することができ、一方、第2の種はできない。その上、この抗体が結合した抗原は、先行技術3−4で示される30kDaよりも著しく大きい。
本発明は、モノクローナル抗体、そのような抗体の誘導体、およびその抗原結合性フラグメントを提供する。
NO:4の残基109−117により規定されるアミノ酸配列を含み、またはこれから構成され得る。
酸配列を含み、またはこれから構成され得る。
本明細書で記載される抗体の「フラグメント」は、本発明の範囲内に含まれる。一般に、フラグメントは、それらが誘導され、または基にする親抗体と同じ抗原/エピトープ(例えばGPC−1)に特異的に結合することができるという意味では、「抗原結合性フラグメント」である。典型的には、抗原結合性フラグメントは、親抗体の抗原/エピトープ結合能の少なくとも10%、または、親抗体の抗原/エピトープ結合能の少なくとも25%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%もしくは100%(またはそれ以上)を保持する。本明細書で記載される抗体の抗原結合性フラグメントは、その抗原/エピトープ結合特異性/能力を実質的に変化させない(例えば、その抗原/エピトープ結合特異性/能力の少なくとも70%、80%、90%、95%、99%もしくは100%(またはそれ以上)が保持され得る)保存的アミノ酸置換を含み得ることも企図される。
されたモノクローナル抗体、ならびに化学発光剤(例えばアクリジンエステル)、生物発光剤(例えばルシフェラーゼ)、または蛍光剤(例えば、フィコビリンタンパク質)とコンジュゲートされたモノクローナル抗体が挙げられる。抗体誘導体のさらなる例としては、二機能性抗体、例えば、2つの異なる抗原基を認識する2つの別々の抗体の部分を組み合わせることにより(例えば、組換え技術または架橋により)作製される二重特異性抗体が挙げられる。
別の異なる種に由来する、または別の異なる抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である。例えば、本明細書で企図されるキメラ抗体は、本明細書で記載される抗GPC−1モノクローナル抗体に由来する可変領域、および第2の種に由来する定常領域を含み得る。キメラ抗体は、例えば、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントの遺伝子操作により、作製され得る。
ds in Enzymology 183, 63−98もまた参照されたい)の使用により決定することができる。
Enzymol. 11:928−936を参照されたい)を用いて、および高次構造依存モノクローナル抗体を用いた結合研究(Lewis et al. (1983) Biochem. 22:948−954を参照されたい)により達成され得る。保存的アミノ酸変更(複数可)は親抗体の1つ以上のCDRおよび/またはフレームワーク領域(複数可)において起こり得る(例えば、親抗体の1つ以上のCDRおよび/またはフレームワーク領域における1〜10、2〜5、または1、2、3、4、もしくは5つの保存的置換)。
in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc., New York, 第4版 1999); Harlow & Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999)を参照されたい)。
ダペスト条約の条項の下、214 Hawkesbury Road、Westmead
NSW2145、オーストラリアのオーストラリア細胞バンクで2014年8月22日に受入番号CBA20140026下にて提出されたハイブリドーマにより産生される抗体のバリアントは本発明の範囲内に特定的に含まれる。
本発明は、モノクローナル抗体、そのような抗体の誘導体およびバリアント、ならびにその抗原結合性フラグメントを産生することができるハイブリドーマ細胞を提供する。
in Methods In Molecular Biology (Humana
Press 1992);およびHarlow and LaneAntibodies: A Laboratory Manual, page 726 (Cold Spring Harbor Pub. 1988)を参照されたい)、ヒトモノクローナル抗体を産生するためのEBV−ハイブリドーマ方法(Cole, et al. 1985, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77−96を参照されたい)、ヒトB−細胞ハイブリドーマ技術(Kozboret al. 1983, Immunology Today 4:72を参照されたい)、およびトリオーマ(trioma)技術が挙げられる。
でき、その後、抗原コンストラクトの免疫原性が公知の技術を用いて(例えば、ELISAにより)決定される。このようにな免疫化により、動物において免疫応答が得られ得る。治療力価を有する動物は一般に、ELISAにより適切な希釈(例えば1:4000〜1:6000、1:4500〜1:5500、または1:5000)で肯定的な結果を提供するものである。治療力価を有するものは、それらの抗体産生細胞(B−リンパ球)の連続再生/不死細胞株(例えば、骨髄腫細胞株)との融合のために選択することができる。細胞は、ポリエチレングリコールなどの適切な作用物質を用いて融合するように誘導することができる。得られたハイブリッド細胞はその後、従来通りにクローン化することができ(例えば、限界希釈を用いて)、作製されたクローンは、所望の抗GPC−1モノクローナル抗体を培養中に産生する能力に対して試験することができる。ハイブリドーマは、細胞をヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン(HAT)を含む選択培地に蒔くことにより化学的に選択することができる。ハイブリドーマは、モノクローナル抗体を産生する能力についてスクリーニングすることができ、陽性ハイブリドーマはその後、クローン化し、増殖させ、保存することができる。
下記のいずれか1つ以上を含む軽鎖可変領域:
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3);
および/または
下記のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の軽鎖可変領域FR(フレームワーク領域):SEQ ID NO:6の残基25−47、SEQ ID NO:6の残基59−73、SEQ ID NO:6の残基81−112、SEQ ID
NO:6の残基122−131。
モノクローナル抗体、その誘導体およびバリアント、およびその抗原結合性フラグメントの調製のためのプロセスは当業者により容易に入手でき、難なく実施することができる。
and Dubel, 1999, Recombinant Antibodies, John Wiley & Sons, Inc., NY, pp. 119−132を参照されたい)。
Madison、Wis. 53711)および/またはプログラム「fasta20u66」(バージョン2.0u66、1998年9月、William R. PearsonおよびVirginia大学による;W. R. Pearson (1990), Methods in Enzymology 183, 63−98もまた参照されたい)の使用により決定することができる。バリアントポリヌクレオチドと参照/親ポリヌクレオチド間の配列相同性/同一性の程度は、例えば、少なくとも75%、80%、83%85%、88%、90%、93%、95%、96%、97%、98%または99%であってもよい。
本発明によるモノクローナル抗体、その誘導体およびバリアント、およびその抗原結合性フラグメント、例えば、「モノクローナル抗体」ならびに「抗体フラグメント、誘導体およびバリアント」と題する上記セクションで記載されるものはキットおよび/または組成物(例えば医薬組成物)の構成要素として含まれ得る。
of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.;
Avis et al. (編) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (編) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw−Hill,
New York, N.Y.; Lieberman, et al. (編) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NYを参照されたい)。
本発明は、被験体におけるGPC−1タンパク質の発現(例えば、被験体の細胞による)を検出および/または定量するための方法を提供する。方法は、被験体から細胞、組織試料、および/または体液試料を得ること、細胞、組織および/または体液試料を、本発明による抗体、抗体バリアント、抗体フラグメント、抗体誘導体、またはキメラ抗体(例えば、「モノクローナル抗体」および「抗体フラグメント、誘導体およびバリアント」と題する上記セクションで記載されるもの)と接触させること、ならびに前記抗体、抗体バリアント、抗体フラグメント、抗体誘導体、またはキメラ抗体の被験体の細胞、組織試料、または体液試料への結合を決定および/または定量することを含む。
40026にて寄託されたハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体である。
下記のいずれか1つ以上を含む軽鎖可変領域:
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3);
および/または
下記のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の軽鎖可変領域FR(フレームワーク領域):SEQ ID NO:6の残基25−47、SEQ ID NO:6の残基59−73、SEQ ID NO:6の残基81−112、SEQ ID
NO:6の残基122−131。
1.1材料および方法
−MIL−38抗体調製物
調製物MIL−38抗体ハイブリドーマを下記起源から取得した:
(i)BLCA−38ハイブリドーマのインハウス細胞ストックを使用して、16A、16B、16C、17B、23A−1、23A−2、24A、25A、25B、26B、30A、31A、31B、31C、31D、32B、32C、33A、33B、33C、33D、34A、34B、35A、35C、35D、40A、40Bと指定された一連のMIL−38抗体調製物を作製した。
(ii)インハウスストックからの細胞の1つのバッチを使用して、MIL−38ハイブリドーマ調製物AusMAb1および2(AM−1およびAM−2)を作製した。
(iii)BLCA−38ハイブリドーマのオリジナル寄託物のバイアルを、ATCCから回収した(受入番号HB11785:マウスハイブリドーマBLCA−38)。これを培養し、インハウス細胞ストックを調製した。このオリジナルストックからの抗体調製物を、「オリジナル」(1−O)および「オリジナルIIA」と指定した;
(iv)「オリジナル」細胞のバイアルを使用して、抗体調製物AusMAb3(AM−3)を、その後抗体調製物AusMAb4および5(AM−4、AM−5)を作製した。AusMAb3を作製するために使用した細胞ならびにAusMAb4および5を作製するために使用した細胞を別々に、2バッチで凍結させた。
(v)これらの凍結細胞から、「Alfio I」と呼ばれる調製物を、AM−4およびAM−5を調製するために使用される細胞ストックから作製し、「Alfio II」と呼ばれる調製物を、AM−3を作製するために使用される細胞ストックから作製させた。(vi)BLCA−38ハイブリドーマ(HB11785)のオリジナル寄託物からの細胞の初期継代(<6)凍結物を使用して、単細胞クローニングを実施し、キャラクタライズするために多くのクローンを提供した。MIL−38 1F5クローンを選択し、オーストラリア細胞バンクで、寄託番号CBA20140026にて寄託した。
タンパク質抽出:DU−145(MIL−38抗原陽性)またはC3(MIL−38抗原陰性)細胞を、標準組織培養技術に従い培養した。細胞膜タンパク質を、Merck Millipore ProteoExtract Native Membrane Protein Extraction Kit(MPEK)を用いて製造者の指示に従い、濃縮させた。
mini(GE Life Science)を用いて画像化することにより検出した。
IFA:細胞をカバーガラス上で、75%コンフルエントとなるまで成長させ、6つのウェルプレートに入れた。細胞を、PBSで洗浄し、続いてアセトンで固定した。細胞を再びPBSで洗浄し、続いてTBSと共にインキュベートし、その後、5%スキムミルクを含むPBSでブロックした。細胞をその後、暗闇で、MIL−38、キメラMIL−38またはセツキシマブと共にインキュベートし、続いて、FITCまたはAlexa488で標識したヤギ抗マウスまたはヤギ抗ヒト抗体と共にと共にインキュベートした。どちらの抗体も1%スキムミルクを含むPBS中で調製した。PBSでの洗浄を、一次抗体インキュベーションと二次抗体インキュベーションの間で実施した。二次インキュベーション後、細胞を、DAPIを含むPBSで洗浄し、緑色蛍光で可視化した(MIL−38陽性)。
SDS−PAGE:試料を非還元SDS含有試料バッファーと混合し、4−15%プレキャストポリアクリルアミドゲル(Criterion TGX;Biorad)上にロードした。ゲルを10分間80Vで、さらに50分間200Vで、トリスグリシン泳動用緩衝液中で泳動させた。
−ウエスタンブロット
下記起源に由来するMIL−38抗体の調製物一緒に比較した:
(i)ATCCからのハイブリドーマ細胞(調製物1−O、「オリジナル」);
(ii)出願人の会社により維持されたハイブリドーマ細胞から産生させた抗体の2つの別々の調製物(調製物37Aおよび40A);
様々な細胞株について使用された異なる抗体調製物(「1−オリジナル」(1−O)、40A、および37A)は等しいIFA反応性を提供した(表1)。
調製物AM−1−AM−5(AusMAb Pty Ltdにより作製)を起源とするMIL−38抗体調製物およびインハウスMIL−38抗体調製物33Aのサイズおよび反応性をSDS−PAGE(図2A)およびウエスタンブロット(図2B)により比較し
た。
SDS−PAGE電気泳動を使用して、BLCA−38ハイブリドーマストックから作製し、インハウスで保存した様々な他のMIL−38抗体調製物の重および軽鎖MWを分析した。重および軽鎖に対する二重バンドが全ての調製物において観察された(図3A)。対照的に、AusMab4(AM−4)抗体調製物は重および軽鎖の両方に対し単一バンドを示した。
これらの結果から、インハウスおよびATCCストックの両方からのMIL−38ハイブリドーマストックは、細胞の混合集団を含んでいたことが明らかである。2つの同定可能な集団(AusMab集団)のクローニングにより異なる分子量の2つの抗体が得られた。これらの2つの抗体種の1つはMIL−38抗原に非反応性であるが、もう一方は混合集団から産生されたMIL−38に等しい反応性を示す。
2.1材料および方法
−MIL−38抗体の調製物
AusMab3(AM−3)またはAusMab4(AM−4)およびAusMab5(AM−5)に由来する凍結ハイブリドーマ細胞集団の調製物を使用した。AM−3の誘導で使用される細胞は、「Alfio II」と呼ばれた。AM−3はDU−145 MPEK抽出物に対して非反応性であったことを示すスクリーニングに従い、初期継代ストックを調査して、陽性クローンを同定した。これらの初期継代細胞を使用して、AM−4を誘導し、「Alfio I」と呼んだ。両方の細胞ストックを保存のために維持し、MIL−38抗体のインハウス産生を可能とした。
抗体上清を、−80℃で必要となるまで保存した。抗体を、Pierce protein Gを用いて、製造者の推奨に従い精製した。
ウエスタンブロットおよびSyproゲルの調製を本質的に上記実施例1で設定される方法に従い実施した(セクション1.1を参照されたい)。
4−12%ビス−トリスゲル
ブロッキング:一晩
ウエスタンブロットレジーム:一次抗体1時間、10μg/メンブレン片、
洗浄3×10分、
二次抗体1時間、二次抗体1/2000ヤギ−マウスHRP
細胞:DU−145およびC3 MPEK抽出物に対して試験
免疫蛍光アッセイを本質的に上記実施例1で設定される方法に従い実施した(セクション1.1を参照されたい)。
−ウエスタンブロット
Alfio I、Alfio II、36A、AusMAbおよび「オリジナルIIA」(ATCC HB11785のハイブリドーマ細胞から調製したMIL−38調製物)のウエスタンブロット反応性を、DU−145およびC3 MPEK細胞抽出物について試験した。
分離した重鎖部分における二重バンドは、前に観察されたものほど明確ではなかったが、分離した軽鎖部分における二重バンドは明確に識別できた。オリジナルIIA、Alfio I、および36A MIL−38抗体調製物の分離した軽鎖部分は全て2つのバンドを含んだ。対照的に、Alfio IIの分離した軽鎖部分は、より高いMWを有する単一軽鎖種を含んだ(すなわち、AM−3 MIL−38抗体調製物の様であった)。軽鎖種についてよりブロードなバンドとなった他の抗体よりも、多くのAlfio II抗体がゲル上にロードされたことに注意されたい。AM−4 MIL−38抗体由来の分離した重および軽鎖部分は、バイクローナルまたはAM−3様形態のいずれかとは明確に異なっていた(図4B)。
ウエスタンブロット結果と一致して、DU−145細胞のIFA分析は、AM−4、Alfio IおよびオリジナルIIAは良好なIFA反応性を与えるが、Alfio II(ウエスタンブロットではAM−3に等しい)はIFAにおいて反応性を示さないことを示した(図5A)。いずれの調製物にも反応性がないことは、陰性対照細胞株C3で観察された(図5B)。
これらの分析から、Alfio Iは、バイクローナルMIL−38抗体集団であるが
、Alfio IIはAM−3様(モノクローナル)抗体集団であることが示され、さらに、MIL−38抗体調製物AM−4はノクローナル抗体集団であることが確認される。
3.1材料および方法
96ウェルプレートをMIL−38prepAM−3またはAM−4(1μg/ウェル)を含む炭酸塩バッファーpH9.5で一晩コートした。プレートを、5%スキムミルクを含むPBS−Tween(0.1%)で37℃にてブロックし、洗浄した。抗原(NS0細胞から産生された組換えヒトGPC−1)を、150mM NaClを添加したバッファーII(20mM HEPES pH7.5、0.5mM EDTA、0.5%トリトンX−100)で希釈し、一晩37℃でインキュベートした。検出を、ビオチン化AM−4を用いて実施し、続いてアビジンHRP(1μg/mL)を用いて検出した。TMB(Sigma cat no T0440)を添加し、TMB停止液(Sigma S5814)で停止させた。吸光度を450nmで読み取った。結果を、図6Aに示す。
上記で記載した第1のELISAは、組換えNS0産生GPC−1(すなわち、MIL−38抗原)を捕捉するようにMIL−38を使用して展開した。この実験は、捕捉のためのモノクローナルAM−3 MIL−38およびモノクローナルAM−4 MIL−38を比較した。AM−3は、サンドイッチELISAアッセイでは捕捉剤として機能しなかった(図6A)。
サンドイッチELISA結果により、モノクローナルMIL−38抗体のAM−4様形態のみが、捕捉試薬として抗原を検出するのに有用性を有すること、モノクローナル集団を含む捕捉剤は、混合集団からなるものより優れたELISAシグナルを提供することが証明される。
4.1材料および方法
−重および軽鎖配列決定(DNA)
3つの別々の配列決定実行を実施した。第1の実行(コード224945)は、1−O
調製物由来のバイクローナルハイブリドーマ細胞を使用した。第2の実行(コード449295−1)は、AM−4を作製するために使用されたAlfio I、ハイブリドーマストック由来の細胞を使用した。第3の実行(コード449295−5)は、Alfio
II由来の細胞、AM−3を作製するために使用されたハイブリドーマストックを使用した。
Systemの技術マニュアルに従い、ハイブリドーマ細胞から単離した。全RNAを、アガロースゲル電気泳動により分析した。
的プライマーを使用したCHの増幅を実施したが、標的PCR産物は得られなかった。全長重鎖(VH−CH)を、重鎖FR1縮重プライマーを使用して増幅した場合も、標的PCR産物は存在しなかった。
−配列要約表
下記表2は、研究した抗体の重および軽鎖核酸およびタンパク質配列の概観を提供し、様々な内部領域の位置を示す。
試料の単離全RNAを1.5%アガロース/GelRed(商標)ゲル上でDNAマーカー(Marker III−TIANGEN、Cat.No.:MD103)と同時に実行した。
標)ゲル上で、DNAマーカー(Marker III)と同時に実行した。PCR産物を精製し、−20℃でさらなる使用まで保存した。
ATGGCTTGGGTGTGGACCTTGCTATTCCTGATGGCTGCTGCCCAAAGTATCCAAGCACAGATCCAGTTGGTGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTATGCCTTCACAGACTATTCAATGAACTGGGTGAAGCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTAAGGTGGATGGGCTGGATAAACACTGAGACTGGTGAGCCAACATATACAGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTTTTTGCAGATCAACAACCTCAGAAATGAAGACACGGCTACATATTTCTGTGCTAGACACTATGATTACGGGGGGTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA
マウス重鎖コード配列の個々の領域は、交互の網掛け/網掛けなし文字列を用いて強調させる。位置:1−57=リーダー配列;58−147=フレームワーク領域(HFR1);148−162=相補性決定領域(HCDR1);163−204=HFR2;205−255=HCDR2;256−351=HFR3;352−378=HCDR3;379−411=HFR4;412−1383=定常領域(CH1−CH3);703−741=ヒンジ領域(下線付き);1384−1386=終止コドン。
ATGAGTGTGCTCACTCAGGTCCTGGCGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGGTGCCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGGGAATGTTCACAATTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAACTCCTGGTCTATACTGCAAAAACCTTAGCAGATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGAACACAATATTCTCTCAAGATCAATAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGACTTATTACTGTCAACATTTTTGGAGTAATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
マウス軽鎖コード配列の個々の領域は、交互の網掛け/網掛けなし文字列を用いて強調させる。位置:1−60=リーダー配列;61−129=フレームワーク領域(LFR1);130−162=相補性決定領域(LCDR1);163−207=LFR2;208−228=LCDR2;229−324=LFR3;325−351=LCDR3;352−381LFR4;382−702=定常領域(CΚ);703−705=終止コドン。
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYAFTDYSMNWVKQAPGKGLRWMGWINTETGEPTYTDDFKGRFAFSLETSASTAFLQINNLRNEDTATYFCARHYDYGGFPYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK*
マウスIgG1重鎖配列の個々の領域は上記アミノ酸配列において示される。位置1−19=リーダー配列;20−49=フレームワーク領域(HFR1);50−54=相補性決定領域1(HCD1);55−68=HFR2;69−85=HCDR2;86−117=HFR3;118−126=HCDR3;127−137=HFR4(連結領域またはJ−領域とも呼ばれる);138−461=IgG1鎖定常領域(CH1−CH3)&
終止コドン(*)。ヒンジ領域−上記配列において下線が付けられている。
MSVLTQVLALLLLWLTGARCDIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNVHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYTAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGTYYCQHFWSNPWTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC*
軽鎖アミノ酸配列の個々の領域は標識されて示される:位置1−20=リーダー配列;21−43=フレームワーク領域(LFR1);44−54=相補性決定領域1(LCDR1);55−69=LFR2;70−76=LCDR2;77−108=LFR3;109−117=LCDR3;118−127=LFR4;128−234=κ定常領域(CΚ)&終止コドン(*)
AM−3様Alfio II細胞からは一貫した重鎖配列を得ることはできなかった。配列決定実行449295−5(Alfio II)から得られた軽鎖配列は一貫して得られ、上記アライメントにおいて示されるように、他の2つの配列決定実行に対する配列
と比べて、フレームワーク領域および相補性決定領域の両方において明確な違いを示した(「1.上記軽鎖アライメント」を参照されたい)。
ATGGGCATCAAGATGGAGTCACAGACTCAGGTCTTTGTATACATGTTGCTGTGGTTGTCTGGTGTTGATGGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCAAAAGTTCATGTCCACATCAATAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTTCTCATGTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAATCTCCTAAAGCACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGCGGAGTCACTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGTCAGCAATATAACAGTTTTCCATTCACGTTCGGTTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG
*軽鎖コード配列の個々の領域は、交互の網掛け/網掛けなし文字列を用いて強調させる。位置:1−72=リーダー配列;73−141=フレームワーク領域(LFR1);142−174=相補性決定領域(LCDR1);175−219=LFR2;220−240=LCDR2;241−336=LFR3;337−363=LCDR3;364−393=LFR4;394−714=定常領域(CK);715−717=終止コドン
MGIKMESQTQVFVYMLLWLSGVDGDIVMTQSQKFMSTSIGDRVSVTCKASQNVGSHVAWFQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVTDRFTGSGSGTDFTLTINNVQSEDLAEYFCQQYNSFPFTFGSGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC*
軽鎖アミノ酸配列の個々の領域は標識されて示される:位置1−24=リーダー配列;25−47=フレームワーク領域(LFR1);48−58=相補性決定領域1(LCDR1);59−73=LFR2;74−80=LCDR2;81−112=LFR3;113−121=LCDR3;122−131=LFR4;132−238=κ定常領域(CK)&終止コドン(*)
5.1材料および方法
−キメラ抗体の調製
2つの最適化cDNA配列をクローニング目的で、開発した。これらは、上記実施例4で同定されたAM−4重鎖および軽鎖コンセンサス配列に基づいた。
ATGGCTTGGGTGTGGACACTGCTGTTCCTGATGGCTGCTGCCCAGAGTATTCAGGCTCAGATTCAGCTGGTCCAGAGCGGTCCCGAGCTGAAGAAGCCAGGCGAGACCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACGCTTTCACAGACTATTCTATGAACTGGGTGAAGCAGGCCCCAGGCAAGGGCCTGAGGTGGATGGGCTGGATCAATACCGAGACAGGCGAGCCCACCTACACAGACGATTTCAAGGGCCGGTTCGCTTTTTCCCTGGAGACCTCTGCCTCCACAGCTTTTCTGCAGATCAACAATCTGAGAAACGAGGACACCGCCACATACTTCTGCGCTAGGCACTACGATTATGGCGGCTTTCCTTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCAGCGCCTCTACCAAGGGCCCATCCGTGTTTCCACTGGCTCCCTCTTCCAAGAGCACCTCTGGCGGCACAGCCGCTCTGGGCTGTCTGGTGAAGGATTACTTCCCAGAGCCCGTGACAGTGTCTTGGAACTCCGGCGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACATTTCCCGCTGTGCTGCAGAGCTCTGGCCTGTACAGCCTGTCCAGCGTGGTGACCGTGCCTTCTTCCAGCCTGGGCACCCAGACATATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCATCCAATACAAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGATAAGACCCATACATGCCCCCCTTGTCCTGCTCCAGAGCTGCTGGGAGGACCTAGCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCTAGGACCCCCGAGGTGACATGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCTAAGACCAAGCCTAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTATCGGGTGGTGTCTGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGAGCAATAAGGCCCTGCCCGCTCCTATCGAGAAGACCATCTCTAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCACAGGTGTACACACTGCCTCCAAGCAGAGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCTCTGACATGTCTGGTGAAGGGCTTCTATCCTTCTGATATCGCTGTGGAGTGGGAGTCCAATGGCCAGCCAGAGAACAATTACAAGACCACACCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCTCTTTCTTTCTGTATTCCAAGCTGACCGTGGATAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGTAGCGTGATGCACGAGGCACTGCACAACCACTACACTCAGAAATCCCTGTCCCTGTCACCTGGCAAATGA
マウス−ヒトキメラ重鎖コード配列の個々の領域は、交互の網掛け/網掛けなし文字列を用いて強調させる。位置:1−57=リーダー配列;58−147=フレームワーク領域(FR1);148−162=相補性決定領域(CDR1);163−204=FR2;205−255=CDR2;256−351=FR3;352−378=CDR3;379−411=FR4;412−1401=ヒト定常領域(CH1−CH3);706−750=ヒンジ領域(下線付き);1402−1405=終止コドン。
CHOコドン最適化cDNA配列#2−マウス−ヒトキメラ軽鎖705bp(SEQ ID NO:8)
ATGAGCGTGCTGACCCAGGTGCTGGCCCTGCTGCTGCTGTGGCTGACCGGAGCCCGTTGCGACATCCAGATGACCCAGTCCCCTGCCTCTCTGTCCGCCAGCGTGGGCGAGACCGTGACA
ATCACCTGCAGAGCCTCTGGCAACGTGCACAATTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCAGGGCAAGTCCCCACAGCTGCTGGTGTACACAGCCAAGACCCTGGCTGACGGCGTGCCCAGCAGGTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGCACACAGTATAGCCTGAAGATCAACTCTCTGCAGCCTGAGGATTTTGGCACCTACTATTGCCAGCATTTCTGGTCTAATCCATGGACATTTGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAGAGGACAGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTTCCCCCTAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCTTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAATTTCTACCCTCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGATAACGCTCTGCAGTCTGGCAATTCCCAGGAGAGCGTGACAGAGCAGGACTCTAAGGATTCCACCTATAGCCTGTCCAGCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCTTGTGAGGTCACTCACCAGGGGCTGTCAAGTCCAGTCACAAAGTCCTTCAATAGGGGGGAATGCTGA
マウス−ヒトキメラ軽鎖コード配列の個々の領域は、交互の網掛け/網掛けなし文字列を用いて強調させる。位置:1−60=リーダー配列;61−129=フレームワーク領域(LFR1);130−162=相補性決定領域(LCDR1);163−207=LFR2;208−228=LCDR2;229−324=LFR3;325−351=LCDR3;352−381=LFR4;382−702=ヒト定常領域(CK);703−705=終止コドン。
CIPカラム(GenScript、Cat.No.L00433)上に3.0ml/分でロードした。洗浄および適切なバッファーによる溶離後、画分を収集し、1M Tris−HCl、pH9.0で中和した。精製タンパク質をSDS−PAGE、ウエスタンブロットにより、分子量、収率および純度測定のための標準プロトコルを使用することにより分析した。
MIL−38キメラ抗体を、DU−145細胞を用いる免疫蛍光アッセイにおいて使用した。マウスMIL−38 prep 33AをGPC−1抗原染色のための陽性対照として使用し、一方、セツキシマブ(EGFRを標的にするキメラ抗体)をヒトIgG定常領域の染色のための陽性対照として使用した。一次抗体を有さないスライドを陰性対照として使用した。染色は、二次抗体をAlexafluor488で標識したこと、抗ヒト抗体を使用してキメラおよびセツキシマブ試料を染色したことを除き、本質的にセクション1.1で記載されるように実施した。
キメラMIL−38およびマウスMIL−38のDU−145およびC3 MPEK抽出物ならびに組換えNS0産生GPC−1抗原に対する反応性をウエスタンブロットにより試験した。ウエスタンブロットをマウスMIL−38またはキメラMIL−38のいずれかによりプロービングした。キメラMIL−38を、ヤギ抗ヒト二次抗体、続いてヒツジ−抗ヤギHRP抗体により検出した。対照として、マウスMIL−38を、ヤギ抗マウス二次抗体、続いてヒツジ−抗ヤギHRP抗体により検出した。等しい条件下で検出した場合、等しい反応性がキメラMIL−38およびマウスMIL−38について観察された。図9AはマウスMIL−38、続いて抗マウスHRP二次抗体でプロービングしたウエスタンブロットを示す。図9BはキメラMIL−38、続いてヤギ抗ヒト二次抗体でプロービングしたウエスタンブロットを示す。複合体を、ヒツジ−抗ヤギHRP抗体を用いて検出した。図9Cは、マウスMIL−38、続いてヤギ抗ヒトマウス抗体でプロービングしたウエスタンブロットを示す。複合体を、ヒツジ−抗マウスHRP抗体を用いて検出した。
−キメラ抗体配列の発現
キメラMIL−38マウスヒトCH1−CH3鎖の重鎖および軽鎖をコードする組換えプラスミドを懸濁CHO−3E7細胞培養物中に一過性にトランスフェクトした。標的タンパク質を細胞培養上清からプロテインA CIP 5mlカラムにより捕捉させ、続いてバッファー交換を実施した。精製タンパク質を図7Aおよび7Bに示されるSDS−PAGEおよびウエスタンブロットにより分析した。3μgの試料をSDS−PAGE上にロードし、0.3μgの総タンパク質をウエスタンブロット上にロードした。ウエスタンブロットのための一次抗体はヤギ抗ヒトIgG−HRP(GenScript、Cat.No.A00166)とした。
最適化cDNA配列#1(SEQ ID NO:7)を使用して、下記アミノ酸配列を有するキメラMIL−38抗体重鎖を作製した:
キメラMIL−38マウスヒトCH1−CH3鎖配列マウスVH−ヒトCH1−CH3鎖(重鎖)(SEQ ID NO:9)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYAFTDYSMNWVKQAPGKGLRWMGWINTETGEPTYTDDFKGRFAFSLETSASTAFLQINNLRNEDTATYFCARHYDYGGFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK*
マウス−ヒトキメラ重鎖配列の個々の領域は上記アミノ酸配列において示される:位置1−19=リーダー配列;20−49=フレームワーク領域(HFR1);50−54=相補性決定領域1(HCD1);55−68=HFR2;69−85=HCDR2;86−117=HFR3;118−126=HCDR3;127−137=HFR4(連結領域またはJ−領域とも呼ばれる);138−467=IgG1鎖定常領域(CH1−CH3)、&終止コドン(*)。ヒンジ配列−ヒトIgG1重鎖ヒンジ配列は上記で下線が付けられている。
キメラMIL−38マウス−ヒトκ軽鎖配列:マウスVK−ヒトCK配列(SEQ ID
NO:10)
MSVLTQVLALLLLWLTGARCDIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNVHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYTAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGTYYCQHFWSNPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
マウス−ヒトキメラ軽鎖アミノ酸配列の個々の領域は標識されて示される:位置1−20=リーダー配列;21−43=フレームワーク領域(LFR1);44−54=相補性決定領域1(LCDR1);55−69=LFR2;70−76=LCDR2;77−108=LFR3;109−117=LCDR3;118−127=LFR4;128−234=κ定常領域(CK)&終止コドン(*)
図8A−Dは細胞の明視野画像を示す。図8Eは33A陽性対照の染色を示す。図8Fは、キメラMIL−38抗体の染色を示す。図8Gは市販のキメラ(マウス/ヒト)モノクローナル抗体(セツキシマブ)陽性対照を使用した染色を示し、図8Hは無一次抗体陰性対照染色を示す。強い染色が図8E、FおよびGで観察され、染色は図8Hでは観察されなかった。これらの結果により、キメラMIL−38抗体はIFAにおいてうまくDU−145細胞に結合することが証明され、親マウスMIL−38抗体の結合特異性が維持されたことが示される。
図9AはマウスMIL−38、続いて抗マウスHRP二次抗体でプロービングしたウエスタンブロットを示す。図9Aで示されるウエスタンブロットの曝露時間は30秒であった。図9BはキメラMIL−38、続いてヤギ抗ヒト二次抗体でプロービングしたウエスタンブロットを示す。複合体を、ヒツジ−抗ヤギHRP抗体を用いて検出した。図9Bで示されるウエスタンブロットの曝露時間は30分であった。図9CはマウスMIL−38、続いてヤギ抗マウス抗体でプロービングしたウエスタンブロットを示す。複合体を、ヒツジ−抗ヤギHRP抗体を用いて検出した。図9Cで示されるウエスタンブロットの曝露時間は30分であった。
キメラMIL−38抗体は、懸濁CHO−3E7細胞においてうまく発現され、精製された。標的抗体のHおよびL鎖は、SDS−PAGEおよびウエスタンブロット分析に基づき、約55kDaの推定分子量(Cal.M.W.約52kDa)および28kDa(Cal.M.W.約26kDa)で検出された。
Claims (32)
- 第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントを含む単離抗体集団であって、前記第1の抗体は、
(a)下記を含む重鎖可変領域:
SEQ ID NO:3の位置50−54により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:3の位置69−85により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:3の位置118−126により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3);ならびに
(b)下記を含む軽鎖可変領域:
SEQ ID NO:4の位置44−54により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:4の位置70−76により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:4の位置109−117により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3);
を含み、
前記抗体集団は下記を含む軽鎖可変領域を含む第2の抗体を含まない、単離抗体集団:
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。 - 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントはグリピカン−1ヘパラン硫酸プロテオグリカン(GPC−1)中に存在するエピトープに対する結合特異性を有する、請求項1に記載の抗体集団。
- 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントはアイソタイプIgG1である、請求項1または2に記載の抗体集団。
- 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントはモノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多量体抗体、および/または合成抗体のいずれか1つ以上である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体集団。
- 前記抗原結合性フラグメントは、単鎖可変フラグメント(scFv)、可変ドメイン(Fv)フラグメント、フラグメント抗原結合(Fab)フラグメント、F(ab)2フラグメント、ペプチド、またはエピトープ結合領域を含むタンパク質分解フラグメントのいずれか1つ以上である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の抗体集団。
- 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントは、
(a)SEQ ID NO:3の残基20−49、SEQ ID NO:3の残基55−68、SEQ ID NO:3の残基86−117、SEQ ID NO:3の残基127−137のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の重鎖可変領域FR(フレームワーク領域);ならびに/または
(b)SEQ ID NO:4の残基21−43、SEQ ID NO:4の残基55−69、SEQ ID NO:4の残基77−108、SEQ ID NO:4の残基1
18−127のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の軽鎖可変領域FR(フレームワーク領域)
をさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の抗体集団。 - 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントは、
(a)SEQ ID NO:3の位置138−461により規定される重鎖定常ドメイン配列;
(b)SEQ ID NO:4の位置128−234により規定される軽鎖定常ドメイン配列;
(c)ヒンジ領域
のいずれか1つ以上をさらに含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体集団。 - 前記第1の抗体は、SEQ ID NO:3の位置20−461により規定される重鎖配列およびSEQ ID NO:4の位置21−234により規定される軽鎖配列を含む、またはこれから構成される、請求項1〜7のいずれか一項に記載の抗体集団。
- 請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体集団を産生することができるハイブリドーマ細胞。
- 前記抗体集団は一種類のみの抗体および/またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体集団を産生することができる一種類のハイブリドーマ細胞を含む細胞培養物。
- 前記ハイブリドーマ細胞は、オーストラリア細胞バンクで受入番号CBA20140026にて寄託されている、請求項9に記載のハイブリドーマ細胞、または請求項10に記載の細胞培養物。
- 複数種のハイブリドーマ細胞を含む細胞培養物であって、
(a)前記細胞培養物は、請求項9または11に記載のハイブリドーマ細胞を含み;ならびに
(b)前記細胞培養物は、下記のいずれか1つ以上を含む軽鎖可変領域を含む抗体を産生するハイブリドーマ細胞を含まない、細胞培養物:
SEQ ID NO:6の位置48−58により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO:6の位置74−80により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO:6の位置113−121により規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される相補性決定領域3(CDR3)。 - 前記細胞培養物は、SEQ ID NO:6の残基25−47、SEQ ID NO:6の残基59−73、SEQ ID NO:6の残基81−112、SEQ ID NO:6の残基122−131のいずれか1つ以上から選択される配列により規定される1つ以上の軽鎖可変領域FR(フレームワーク領域)を含む抗体を産生するハイブリドーマ細胞を含まない、請求項12に記載の細胞培養物。
- 前記抗体集団は一種類のみの抗体および/またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体集団を含む組成物。
- 前記抗体集団は、複数種の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体集団を含む組成物。
- 前記複数種の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントはそれぞれ、グリピカン−1ヘパラン硫酸プロテオグリカン(GPC−1)中に存在するエピトープに対する結合特異性を有する、請求項15に記載の組成物。
- 請求項1〜8のいずれか一項に記載の第1の抗体またはその抗原結合性フラグメントの少なくとも1つをコードする核酸分子。
- 前記核酸分子は、SEQ ID NO:1で規定される配列を含む、またはこれから構成される、請求項17に記載の核酸分子。
- 前記核酸分子は、SEQ ID NO:2で規定される配列を含む、またはこれから構成される、請求項17または18に記載の核酸分子。
- 請求項17〜19のいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。
- 請求項20に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項9または11に記載のハイブリドーマ細胞、または請求項21に記載の宿主細胞を、培地中、好適な条件下で培養し、よって、抗体またはその抗原結合性フラグメントを産生させることを含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを産生させるためのプロセス。
- 請求項10〜13のいずれか一項に記載の細胞培養物を好適な条件下で培養し、よって抗体またはその抗原結合性フラグメントを産生させることを含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを産生させるためのプロセス。
- 前記抗体またはその抗原結合性フラグメンを前記培養物から単離することをさらに含む、請求項22または23に記載のプロセス。
- 請求項22〜24のいずれか一項に記載のプロセスから得られた、または得ることができる、抗体またはその抗原結合性フラグメント。
- ハイブリドーマ細胞の少なくとも一部分を混合ハイブリドーマ集団から単離することを含む、請求項9または11に記載のハイブリドーマ細胞を混合ハイブリドーマ集団から得るためのプロセス。
- 前記単離は、混合ハイブリドーマ集団の個々のハイブリドーマ細胞をクローニングし、クローン子孫が請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体集団を産生することができることを決定することを含む、請求項26に記載のプロセス。
- 前記混合ハイブリドーマ集団はアメリカン組織タイプカルチャーコレクション(ATCC)で受入番号HB11785にて寄託されている、請求項26または27に記載のプロセス。
- 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントはキメラである、請求項4に記載の抗体集団。
- 前記第1の抗体および/またはその抗原結合性フラグメントは、
(a)SEQ ID NO:9の残基138−467で規定されるアミノ酸配列を含む
またはこれから構成される重鎖定常領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:10の128−234の残基で規定されるアミノ酸配列を含むまたはこれから構成される軽鎖定常領域
を含むキメラ抗体である、請求項4または29に記載の抗体集団。 - 前記第1の抗体および/またはそのフラグメントは検出可能な標識を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体集団。
- 前記検出可能な標識は蛍光標識、放射標識、ビオチン、またはアビジンのいずれか1つ以上である、請求項31に記載の抗体集団。
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Cited By (2)
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JP2020007315A (ja) * | 2019-08-02 | 2020-01-16 | ミノミック インターナショナル リミティド | モノクローナル抗gpc−1抗体およびその使用 |
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05504466A (ja) * | 1989-05-24 | 1993-07-15 | ザ セントラル シドニー エリア ヘルス サービス | 膀胱癌からの悪性細胞を認識するモノクローナル抗体 |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05504466A (ja) * | 1989-05-24 | 1993-07-15 | ザ セントラル シドニー エリア ヘルス サービス | 膀胱癌からの悪性細胞を認識するモノクローナル抗体 |
US5622836A (en) * | 1989-05-24 | 1997-04-22 | The University Of Sydney | Monoclonal antibodies which recognize malignant cells from bladder carcinomas |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018518455A (ja) * | 2015-04-20 | 2018-07-12 | ミノミック インターナショナル リミティド | 治療用抗体およびその使用 |
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