JP7192092B2 - 抗ヒトclaudin18.2モノクローナル抗体及びその使用 - Google Patents
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Description
3つの重鎖相補性決定領域(重鎖CDR1、重鎖CDR2、重鎖CDR3)及び3つの軽鎖相補性決定領域(軽鎖CDR1、軽鎖CDR2、軽鎖CDR3)を有する抗ヒトclaudin18.2モノクローナル抗体であって、
重鎖CDR1は、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:73のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
重鎖CDR2は、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
重鎖CDR3は、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
軽鎖CDR1は、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
軽鎖CDR2は、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:77のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
軽鎖CDR3は、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:78のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択される。
好ましくは、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86;SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102又はSEQ ID NO:104のいずれかから選択される。
前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:79であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:80であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:81であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:82であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:83であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:84であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:85であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:86であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:87であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:88であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:89であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:90であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:91であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:92であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:93であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:94であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:95であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:96であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:97であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:98であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:99であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:100であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:101であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:102であり;
又は前記重鎖の可変領域は、SEQ ID NO:103であり、前記軽鎖の可変領域はSEQ ID NO:104である。
重鎖CDR及び/又は軽鎖CDRをコードすることができる核酸配列を含む核酸分子であって、重鎖CDR1は、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:73のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
重鎖CDR2は、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:74のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
重鎖CDR3は、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
軽鎖CDR1は、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
軽鎖CDR2は、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:77のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択され;
軽鎖CDR3は、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:78のいずれか、又はこれらの1つと相同性が50%を超える類似の配列から選択される。
軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86;SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:102 又はSEQ ID NO:104のいずれかから選択されることを特徴とする。
GST-ECDタンパク質の調製
ヒトクローディン18.2の最初の細胞外ドメインの部分配列をベクターpGEX-KG(抗原配列1)上に構築し、構築した発現ベクターをE.coli TG1菌株に移入し、LB培地とIPTG誘導法により抗原タンパク質を発現させる。回収したE.coli TG1菌体をホモジナイザーで破砕し、Glutathione Sepharose 4 Fast Flow(GE,Cat#17-5132-01)でアフィニティー精製し、HiTrap Capto Q(GE,Cat#11001302)カラムで二次精製を行うと共にタンパク質をPBS、pH7.4に透析して、純度>85%の抗原タンパク質を得た。
claudin18.2の最初の細胞外ドメインの部分配列又は完全長配列を免疫原(抗原配列2、抗原配列3)としてpcDNA3.1ベクター上に構築した。
human claudin18.1及びhuman claudin18.2の完全長配列をベクターpcDNA3.1(-)にクローニングし、LipofectamineTM 3000Transfection Reagent(Thermo,Cat#L3000150)試薬で構築した発現ベクターをHEK293F細胞に移入し、400μg/ml G418(Gibco,Cat#10131-027)でスクリーニングし、QPCR及びFACSのスクリーニング・検証を経た後、安定発現のHEK293F_human claudin18.1及びHEK293F_human claudin18.2細胞系を得た。
human claudin18.2に対する高い親和性と高い特異性の抗体を得るため、この実験では、いくつかのBalb/cマウス及びC57BL/6マウスを免疫する一連の抗原の組み合わせ(DNA免疫、タンパク質免疫及び細胞系全細胞性免疫)を設計した。古典的な免疫スケジュールを使用して免疫することで、マウスの免疫反応を誘発する。マウス血清を採取し、GST-ECDタンパク質細胞系を抗原として使用し、ELISA法又はCHO-K1_human claudin18.2細胞系を使用してFACSを実行して血清力価を測定し、高力価の対応するマウスを選択して融合に入った。
融合する前に、マウス骨髄腫のSP2/0状態を調整して、その増殖密度が1×106を超えないようにする。動物は3日前に最終免疫を行い、1日前にSP2/0細胞を培養し、プレーティングの数は2.0×104細胞/ウェルであり、電気融合装置を介して融合し、脾細胞又はリンパ節細胞とSP2/0細胞の比率が10:1~5:1であり、各ウェルの脾細胞の数が1×105 を超えないようにする。採取した上清をELISA結合法とフローサイトメーターで細胞結合活性を測定し、3回のスクリーニング実験で陽性であったハイブリドーマ細胞株を得た。
GST-ECDをPBSpH7.4コーティング溶液で0.5μg/mlに希釈して96ウェルプレートをコーティングし、各ウェルに100μlを加え、ブロッキング後にハイブリドーマ培養上清を加え、洗浄後、Peroxidase-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG,Fcγ Fragment Specific(minX Hu,Bov,HrsSrProt)を加え、洗浄後に発色基質を加えてインキュベートし、反応終了後にOD450の吸光度値を読み取った。
1×105細胞/ウェルの96ウェルプレートをCHO-K1_human claudin18.2細胞系でコーティングし、96ウェルプレートをブロッキングした後、一次抗体はハイブリドーマ上清、陽性抗体、アイソタイプコントロール及びPBSである。一次抗体をインキュベートした後、細胞を洗浄し、Peroxidase-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG、Fcγ Fragment Specific(min X Hu、Bov、Hrs Sr Prot)を二次抗体としてインキュベートし、洗浄後、発色基質を加えてインキュベートし、反応終了後にOD450の吸光度値を読み取った。
ハイブリドーマ上清を、HEK293F_human claudin18.1、HEK293F_human claudin18.2細胞系及びCHO-K1_human claudin18.2細胞系でフローサイトメトリー結合実験に供し、標的クローンとしてhuman claudin18.2で特異的にクローニングした。
A.マウス耐性遺伝子の獲得
ハイブリドーマ細胞株をTrizol(Ambion15596-026)キットで抽出してハイブリドーマ細胞のトータルRNAを抽出した後、Takara PrimeScript 1st Strand cDNA合成キットでトータルRNAを逆転写してcDNAを調製し、縮重プライマーを使用して、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域配列をそれぞれ増幅した。
マウス抗の軽鎖可変領域配列をヒトIgG kappa CL領域配列とスプライシングして、完全長の軽鎖配列を取得し、完全な遺伝子合成により、窒素末端シグナルペプチドを含むベクターpcDNA3.1に構築して軽鎖発現ベクターを得た。
軽鎖・重鎖の発現ベクターをコトランスフェクションによりHEK293F細胞に一過性にトランスフェクトし、トランスフェクトした293F細胞を7日間培養し、培養上清を回収した。次に、上清中のキメラ抗体をprotein Aアフィニティークロマトグラフィーカラムによって精製し、PBSpH7.4に透析した。A280法で濃度を測定し、SDS-PAGEで分析した。
ヒト/マウスキメラ抗体とHEK293F_human claudin18.1及びHEK293F_human claudin18.2 細胞系との結合能の測定
各反応に100μlの2.0×107cells/mlを使用し、一次抗体は、精製されたヒト/マウスキメラ抗体、陽性抗体(IMAB362及びAnti-Claudin18 antibody[34H14L15](abcam,Cat#ab203563))、アイソタイプコントロール、及び1% BSA in PBSである。一次抗体をインキュベートした後、細胞を洗浄し、Goat anti-human IgG Fc(FITC)(abcam,Cat#ab97224)及びヤギAnti-Rabbit IgG H&L(Alexa Fluor(登録商標) 488)(abcam,Cat#ab150077)を二次抗体としてインキュベートし、洗浄後フローサイトメーターで蛍光シグナルを読み取った。
各反応に100μlの1.0×107cells/mlを使用し、一次抗体は、ヒト/マウスキメラ抗体、陽性抗体(IMAB362)、アイソタイプコントロール及び1% BSA in PBSである。一次抗体をインキュベートした後、細胞を洗浄し、Goat anti-human IgG Fc(FITC)(abcam,Cat#ab97224)を二次抗体としてインキュベートし、洗浄後フローサイトメーターで蛍光シグナルを読み取った。
マウス抗体の可変領域配列を分析し、ヒト生殖細胞系列(germline)遺伝子とアラインメントし、マウス由来抗体フレームワーク領域配列と相同性の最も高いヒト軽鎖及び重鎖生殖細胞系列遺伝子フレームワーク領域配列を基本フレームワークとして選択するか、フレームワーク領域の特定のアミノ酸を選択して逆突然変異を行い、マウス由来抗体のCDR領域配列を選択したヒト生殖細胞系列遺伝子のフレームワーク領域配列と移植し、スプライシング後、ヒト化抗体の軽鎖・重鎖可変領域配列が遺伝子合成を通じてそれぞれヒトIgG4重鎖Fc及びヒトIgG kappa CLを含む発現ベクターに構築された。構築されたヒト化抗体の軽鎖・重鎖ベクターは、1対1のペアのHEK293Fの一過性発現を行った。一過性細胞の培養上清中の抗体がアフィニティー精製及び透析された後、A280法で濃度を測定し、SDSPAGEによって濃度及び純度を分析した後、FACS法でHEK293F_human claudin18.2細胞系との親和性を測定した。
HEK293F_human claudin18.2細胞系でFPLC精製後の本発明のヒト化抗体依存性細胞媒介性細胞毒性を測定した。
CLDN18A2を安定に発現するHEK293F_human claudin18.2細胞株を標的細胞として使用した。培地(RPMI1640 medium(Gibco,11835-030)+1%FBS(Gibco,10099-141))を使用して、被験抗体と対照抗体の濃度を最終濃度50ug/mLに希釈してから8つの勾配で5倍希釈し、補体(Quidel、A113)を最終濃度1:50(V/V)に希釈した。あらかじめ希釈した抗体40μl/ウェルを96ウェル細胞培養プレート(Corning,3917)に加えた。あらかじめ希釈した40μl/ウェルの標的細胞(1E4細胞/ウェル)を96ウェル培養プレートに加えた。96ウェルプレートに40μl/ウェルの希釈補体を加えた。エフェクター細胞と補体をコントロールとして培地を加え、よく混合し、37℃、5%CO2の条件下で6時間培養した。インキュベーション後、50μl/ウェルのCellTiter-Glo(登録商標) Luminescent Cell Viability Assay(Promega,G7571)を96ウェル細胞培養プレートに加えた。多機能マイクロプレートリーダー(BioTek、Synergy2)で化学発光値をテストし、細胞毒性のパーセントを下式で計算された。
本発明の抗体によって認識される抗原のエピトープマッピング法は、Johan Rockberg《分子生物学の方法》(ISBN978-1-4939-7839-7)の「エピトープマッピング法」に従って実施される。
ヒト化抗体の種結合特性は、実施例4の方法に従ってフローサイトメトリー検査を行った。pcDNA3.1(+)ベクターを使用して、マウス、ラット、ウサギ及びチンパンジー用のCLDN18A2発現ベクターを構築し、ExpiFectamineTM293 Transfection Kit(gibico,Cat#A14524)を使用して、上記の発現ベクターをHEK293F細胞に一過性にトランスフェクションし、トランスフェクション後48時間サンプリングして測定した。ブランクHEK293F細胞を陰性対照として使用し、ヒトCLDN18A1及びヒトCLDN18A2を安定に発現するHEK293F細胞系を陽性対照としてフローサイトメトリー分析を行った。
CLDN18A2を安定に発現するHEK293F_human claudin18.2細胞系を試験細胞として使用した。培地(FreeStyleTM293 Expression Medium(Gibco,12338-018))を使用して、被験抗体とアイソタイプコントロール抗体の濃度を15ug/mlの最終濃度に希釈し、次に3.16倍で8つの勾配に希釈した。あらかじめ希釈した抗体50μl/ウェルを96ウェル細胞培養プレートに加えた(Corning,3610)。あらかじめ希釈した細胞((5E3細胞/ウェル/))50μl/ウェルを96ウェル培養プレートに加えた。よく混合した後、37℃、5%CO2の条件下で7日間培養した。インキュベーション後、50μl/ウェルのCellTiter-Glo(登録商標) Luminescent Cell Viability Assay(Promega,G7571)を96ウェル細胞培養プレートに加えた。多機能マイクロプレートリーダー(BioTek、Synergy2)で化学発光値をテストした。細胞毒性のパーセントは下式で計算された。
CLDN18A2を安定に発現するHEK293F_human claudin18.2細胞系を検出細胞として使用した。培地(FreeStyleTM 293 Expression Medium (Gibco,12338-018))を使用して、被験抗体とアイソタイプコントロール抗体の濃度を40nM,120 ul Fab -ZAP(Advanced Targeting Systems,IT-51)+120uL抗体又はSaporin (Advanced Targeting Systems,PR-1)に希釈してよく混合し、37℃、5%CO2の条件下で1時間インキュベートした後、8つの勾配で2.5倍希釈した。あらかじめ希釈した抗体50μl/ウェルを96ウェル細胞培養プレートに加えた(Corning,3610)。あらかじめ希釈した細胞(5E3細胞/ウェル/)50μl/ウェルを96ウェル培養プレートに加えた。よく混合した後、37℃、5%CO2の条件下で7日間培養した。インキュベーション後、50μl/ウェルのCellTiter-Glo(登録商標) Luminescent Cell Viability Assay(Promega,G7571)を96ウェル細胞培養プレートに加えた。多機能マイクロプレートリーダー(BioTek、Synergy2)で化学発光値をテストし、4パラメーター方程式で曲線を適合させ、化学発光値Lumを使用して抗体濃度又は細胞毒性のパーセントをプロットし、下式で計算された。
12.マウスモデルにおける抗体の効果
A.マウスにおける遅発性・高発現のCLDN18A2腫瘍の治療
ヒト胃癌細胞NUGC-4の右腋窩に50匹の雌BALB/cヌードマウスを皮下接種し、腫瘍体積が適切なサイズに成長したとき、腫瘍体積が37.54~124.64mm3の36匹の担癌マウスを選別して1-陰性対照群、2-陽性対照群(0.2mg/マウス)、3-RB0011-FK-13群(0.2mg/マウス)、4-RB0011-FK-1群(0.2mg/マウス)、5-RB0011-FK-2群(0.2mg/マウス)及び6-186CG4-mut群(0.2mg /マウス)の6群にランダムに分け、1群につき6匹の動物となり、グループ化後に週2回、4週間静脈内投与した。最初の投与後、1日2回一般的な臨床観察を行い、週2回計量及び腫瘍径の測定を行い、D29で動物を安楽死させ、腫瘍組織を抽出及び秤量し、腫瘍体積、相対腫瘍体積(RTV)、及び相対腫瘍増殖率(T/C%)を計算した。
1.ヒト/マウスキメラ抗体の調製と活性の同定
a.フローサイトメーターによるヒト/マウスのキメラ抗体と細胞との結合能の測定
1つの弱陽性クローン(170B3)及び2つの強陽性クローン(180G8及び186F7)をスクリーニングして、HEK293F_humanクローディン18.2を特異的に標的とした。
スクリーニングされた2つの強陽性クローン(180G8及び186F7)は、NUGC-4に結合することができる。
2つのヒト化抗体とHEK293F_human claudin18.2細胞系は、ADCC効果を示し、EC50がそれぞれ0.019μg/mlと0.003μg/mlであった。図1を参照のこと。
2つのヒト化抗体とHEK293F_human claudin18.2細胞系は、明らかなCDC効果を示さなかった。図2を参照のこと。
2つのヒト化抗体は、HEK293F_human claudin18.2細胞系に対して明らかな増殖阻害効果を示さなかった。図3を参照のこと。
2つのヒト化抗体は、HEK293F_human claudin18.2細胞株に対して一定のエンドサイトーシス効果を示した。図4を参照のこと。
a.マウスにおける遅発性・高発現のCLDN18A2腫瘍の治療
この実験は、ヒト胃癌NUGC-4のBALB/cヌードマウスモデルの確立に成功した。この実験の条件下で、陽性対照物質、被験物質RB0011-FK-13、RB0011-FK-1、RB0011-FK-2及び186CG4-mutを2mg/マウスの用量で週2回投与した。合計静脈内投与4週間後、ヒト胃癌NUGC-4のBALB/cヌードマウスの増殖を阻害する効果がある。図5及び図6を参照のこと。
Claims (8)
- 3つの重鎖CDR及び3つの軽鎖CDRを有する抗ヒトclaudin18.2モノクローナル抗体であって、
重鎖の可変領域は、重鎖CDR1、CDR2及びCDR3を含み;軽鎖の可変領域は、軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3を含み、
重鎖CDR1は、SEQ ID NO:1で示されるアミノ酸配列であり;
重鎖CDR2は、SEQ ID NO:2で示されるアミノ酸配列であり;
重鎖CDR3は、SEQ ID NO:3で示されるアミノ酸配列であり;
軽鎖CDR1は、SEQ ID NO:4で示されるアミノ酸配列であり;
軽鎖CDR2は、SEQ ID NO:5で示されるアミノ酸配列であり;
軽鎖CDR3は、SEQ ID NO:6で示されるアミノ酸配列である、
ことを特徴とする、抗体。 - 前記重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、SEQ ID NO:79であり;
前記軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、SEQ ID NO:80である、
ことを特徴とする、請求項1に記載の抗体。 - 請求項1に記載の抗体をコードする、ことを特徴とする、核酸分子。
- 請求項3に記載の核酸分子を含有するベクター。
- 請求項1~2のいずれか一項に記載のアミノ酸配列、請求項3に記載の核酸分子又は請求項4に記載のベクターを含有する宿主細胞。
- 請求項1~2のいずれか一項に記載の抗体を含有するコンジュゲート。
- 疾患治療薬又は検出試薬の調製における請求項1~2のいずれか一項に記載の抗体、請求項3に記載の核酸分子、請求項4に記載のベクター、請求項5に記載の宿主細胞、又は請求項6に記載のコンジュゲートの使用。
- 疾患は、悪性腫瘍、心血管疾患または炎症性疾患であることを特徴とする、疾患治療薬又は検出試薬の調製における請求項1~2のいずれか一項に記載の抗体、請求項3に記載の核酸分子、請求項4に記載のベクター、請求項5に記載の宿主細胞、又は請求項6に記載のコンジュゲートの使用。
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