JP2017519820A - 高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用 - Google Patents

高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用 Download PDF

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Abstract

【課題】本発明は脂肪乳剤の分野に属し、特に高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用、及び凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤に関する。【解決手段】 前記高濃度グリセリンとは、乳剤の組成成分においてグリセリンの含有量が３ｗ／ｖ％以上であることを意味し、その最大使用量が乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％である。油溶液が乳剤の組成成分の総量の２％−３０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリンの使用量は乳剤中の油量の１／３以上である。本発明は、薬物を添加して薬物含有乳剤を調製してもよい。従来技術に比べて、本発明の提供する凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、低温・凍結融解に耐えられるため、乳剤製品の輸送、保存及び使用過程に発生する温度条件の変化による薬品安定性の低下等の問題を回避し、使用安全性を確保すると同時に輸送・保存条件への要求を低下させ、使用コストを大幅に削減させる。

Description

本発明は脂肪乳剤の分野に属し、特に高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用、及び凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤に関する。
１９６１年に、スウェーデンのＷｒｅｔｌｉｎｄ教授は、初めて、ダイズ油と卵黄レシチンを使用して静脈内投与可能な脂肪乳剤を開発するに至り、これが脂肪乳剤の非経口栄養への応用の始まりになっている。最初に使用される静脈栄養輸液製剤として、脂肪乳剤は約半世紀前から臨床的に使用され、摂食困難又は重度の栄養不足に陥る患者にカロリー及び必要な脂肪酸を提供する。現在、市販の脂肪乳注射剤は複数種があり、例えば、長鎖脂肪乳注射剤、中／長鎖脂肪乳剤注射剤及び構造化トリグリセリド注射剤などが挙げられ、中国国内では合計で１００個余りの製造ロット番号があり、生産許可を受けた企業は２０社余りある。また、脂肪乳剤は担体として薬物の生物学的利用能又は標的性を向上させ、毒性や刺激を低減させることができ、抗腫瘍薬、抗微生物薬及び心臓・脳血管疾患等を治療する薬物に幅広く適用されている。現在、国内外には、市販の乳剤製品は複数種あり、例えば、ジアゼパム注射乳剤、プロポフォール注射乳剤、パーフルオロカーボン注射剤、エトミデート注射乳剤、プロスタグランジンＥ１注射乳剤、複合脂溶性ビタミン注射乳剤やデキサメタゾンパルミテート注射乳剤などが挙げられる。実際に、すべての油性物質はいずれも乳剤に調製することができ、例えば、中国発明特許（ＺＬ ２００５１００４６５９２．１）では、複合乳化剤を使用して濾過・除菌可能な漢方薬、動物・植物揮発性油又は油脂乳剤を製造し、それによって揮発性物質の滅菌安定性を確保して、非イオン界面活性剤の添加量を増加する。薬物含有脂肪乳剤についての研究や報道が多く、例えば、ドセタキセル乳剤、アタンシ油複方乳剤、ジンセノサイドＣ−Ｋ乳剤、ガジュツ油乳剤、シノブファシン乳剤、ガーリックオイル乳剤、アシクロビル乳剤、パルミチン酸アジドチジン乳剤、クルクメノール乳剤、イトラコナゾール乳剤、ブチルフタリド乳剤、プロスタグランジンＥ１乳剤、ニモジピン乳剤、タンシノンＩＩＡ乳剤、プロポフォール複方サブミクロン乳剤、ケトプロフェンイソプロピルエステル乳剤、サイコ揮発油乳剤、ビタミンＥ乳剤、ビタミンＫ１乳剤、補酵素Ｑ１０乳剤などが挙げられる。
市販の脂肪乳剤の処方組成を全面的に検討したところ、興味深い結果が見出された。すなわち、市販の脂肪乳剤におけるリン脂質及びその使用量には、いずれも卵黄レシチン（ＥＰＣ）が使用され、かつ、個別の脂肪乳剤（Ｌｉｐｏｓｙｎ ＩＩＩ ３０ （ｃｏｎｔａｉｎｓ ３０％ ｓｏｙｂｅａｎ ｏｉｌ、 １．８％ ｅｇｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｅｓ ａｎｄ ２．５％ ｇｌｙｃｅｒｉｎ ｐＨ ８．４ （６．０ ｔｏ ９．０））以外、大部分のＥＰＣの使用量が１．２％であった。また、脂肪乳におけるグリセリンの使用量も２．５％以下であることが見出された。例えば、２０％脂肪乳剤注射剤（四川科倫薬業有限公司製）はグリセリン２．２％、３０％脂肪乳剤注射剤（西安力邦製薬有限公司製）はグリセリン１．６７％、中長鎖脂肪乳剤注射剤（ドイツＢ．ブラウン社（蘇州）製）ＬＭ−２０−２．５は、ＬＣＴ１０％、ＭＣＴ１０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．５％、構造化トリグリセリド剤注射剤（無錫華瑞製薬有限公司製）ＳＴＧ−２０−２．２はＳＴＧ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、魚油脂肪乳剤注射剤（ＯＭＥＧＡＶＥＮ、華瑞製薬有限公司製）はグリセリン２．５％である。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｘｌｉｓｔ．ｃｏｍ／にて検索すれば、静脈注射脂肪乳剤はＬｉｐｏｓｙｎ ＩＩ（２０％）（サフラワー油１０％、ダイズ油１０％、ＥＰＣ１．２％及びグリセリン２．５％を含む）、Ｌｉｐｏｓｙｎ ＩＩ（１０％）（サフラワー油５％、ダイズ油５％、ＥＰＣ１．２％及びグリセリン２．５％を含む）、Ｌｉｐｏｓｙｎ ＩＩＩ（１０％）（ダイズ油１０％、卵黄レシチン１．２％、グリセリン２．５％を含む）、ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤ(R)（２０％）（ダイズ油２０％、卵黄レシチン１．２％及びグリセリン２．２５％を含む）、ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤ(R)（１０％）（ダイズ油１０％、ＥＰＣ１．２％及びグリセリン２．２５％を含む）、ＣＬＩＮＯＬＩＰＩＤ（２０％）（オリーブオイル１６％、ダイズ油４％、ＥＰＣ１．２％、オレイン酸ナトリウム０．０３％及びグリセリン２．２５％を含む）を含み、これらの製品にも、グリセリンの含有量が２．５％以下である。薬物含有脂肪乳剤（薬物担持乳剤）の場合も、その処方組成が同様である。例えば、プロポフォール乳剤の処方組成はダイズ油１０％、卵黄レシチン１．２％、グリセリン２．２５％及びＥＤＴＡ−２Ｎａ０．００５％であり、クレビジピン乳剤（Ｃｌｅｖｉｐｒｅｘ）の処方組成はダイズ油２０％、卵黄レシチン１．２％、オレイン酸０．０３％、グリセリン２．２５％及びＥＤＴＡ−２Ｎａ０．００５％であり、成人用及び子供用ＶＩＴＡＬＩＰＩＤ Ｎ（ビタミンＡ等の活性成分のみが異なる）の処方組成はダイズ油１０％、ＥＰＣ１．２％及びグリセリン２．２％である。
以上から明らかなように、脂肪乳剤に関連する従来の製品において、リン脂質の使用量（１．２％、１．８％）とグリセリンの使用量（１．６７％、２．２％、２．２５％、２．５％）は定まっており、つまり、リン脂質の使用量は一般的に１．２％（例外として１．８％）であり、グリセリンの使用量は２．５％以下である。それは、研究者／生産者がこのような製品について綿密な研究を行わないと説明し、そのため、不可解な現象が生じることを回避することができない。例えば、西安力邦製の３０％ダイズ油脂肪乳剤では、グリセリンの使用量が１．６７％であるが、同様に３０％のダイズ油を含有するＬｉｐｏｓｙｎ ＩＩＩ３０脂肪乳剤では、グリセリンの使用量が２．５％である。さらに興味深い現象は、すべての脂肪乳剤製品におけるグリセリンの使用量が２．５％以下であり、つまり、製品の開発過程において、グリセリンはただ浸透圧調整剤として使用され、脂肪乳剤の浸透圧が臨床要求を満足すればよい。一般的に、臨床的には、大容量注射剤の浸透圧が１〜２浸透圧であることがよく見られ、例えば、５％グルコース注射剤（１浸透圧）と１０％グルコース注射剤（２浸透圧）では、グリセリンの等張濃度は約２．５％（１〜２浸透圧ではグリセリン濃度は２．５％〜５．０％である）であり、油相乳滴に生じた浸透圧の数を考慮に入れると、脂肪乳剤におけるグリセリンの添加量は２．５％以下であり、更に添加量についての厳格な制限がない。
更に、成分の一種としてのリン脂質についても再認識しなければならず、理論的には、乳剤の表面が乳化剤（リン脂質）分子に完全に被覆されると、乳剤は最も安定した状態になる。乳滴の表面を完全に被覆するのに必要なリン脂質（乳化剤）の使用量は、乳剤粒子の大きさ、油使用量や、リン脂質分子の頭部表面積に依存する。一般的に、リン脂質頭部基の表面積は約０．３〜０．５ｎｍ２（０．７５ｎｍ２であると報告した文献がある Ｃｏｌｌｏｉｄｓ ａｎｄ Ｓｕｒｆａｃｅｓ Ｂ： Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ ３７ （２００４） ４３-４７）であり、市販の脂肪乳剤の粒径を３００ｎｍ（多数の乳剤粒径は２００〜３００ｎｍである）として設定し、０．３ｎｍ２、０．４ｎｍ２及び０．５ｎｍ２で換算すると、１０％乳剤に必要なリン脂質量はそれぞれ０．９３８ｇ％（０．３ｎｍ２）、０．７０５ｇ％（０．４ｎｍ２）及び０．５６ｇ％（０．５ｎｍ２）であり、２０％乳剤に必要なリン脂質量はそれぞれ１．８８ｇ％（０．３ｎｍ２）、１．４ｇ％（０．４ｎｍ２）及び１．１ｇ％（０．５ｎｍ２）であり、３０％乳剤に必要なリン脂質量はそれぞれ２．８ｇ％（０．３ｎｍ２）、２．１ｇ％（０．４ｎｍ２）及び１．６ｇ％（０．５ｎｍ２）である。勿論、異なる頭部基の表面積に基づいて計算すれば、必要なリン脂質量も異なる。更に、リン脂質の使用量は油量によって異なり、現在、市販の脂肪乳剤のリン脂質ＥＰＣ濃度（リン脂質使用量）が全て１．２％であり、合理的とは言えない。リン脂質量が一定であれば、乳滴を乳化分散するのに消費されるリン脂質の量が油量の減少に伴って減少し、残りのリン脂質が水中にリポソームを形成する。Ｈａｕｍｏｎｔ Ｄらは、文献（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｌｉｐｉｄ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ｏｎ ｐｌａｓｍａ ｌｉｐｉｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｏｗ ｂｉｒｔｈ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎｆａｎｔｓ ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ． Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ．１９９２ Ｎｏｖ；１２１（５ Ｐｔ １）：７５９−６３．）において、市販の１０％脂肪乳剤に含まれるリポソームが２０％脂肪乳剤の二倍（注：１０％脂肪乳剤と２０％脂肪乳剤のいずれのリン脂質含有量も１．２％である）であるとし、それによって早産児の血漿中脂質を大幅に変化させるため、２０％脂肪乳剤の使用が推薦されている。
従来技術では、（普通／栄養型）脂肪乳剤注射剤でも、薬物含有脂肪乳剤でも、凍結後に構造が破壊されて、油浮又は油水成層の現象が発生して、乳剤が失効してしまい、すなわち、凍結融解に抵抗できず、従って、既存の市販乳剤に添付された取扱書の注意事項には「凍結したものは使用禁止」と明記されており、その保存温度は０℃以上である（一般に４℃−８℃）。中国のほとんどの地域では冬の気温が０℃以下で、一部の地域は−３０℃未満となるため、市販乳剤の輸送と保存時には「特殊なシステム」である「コールドチェーン」で保護しなければならない。中国発明特許（凍結融解抵抗性を有する乳剤プラットフォーム、出願番号：２０１２１０４５５７８２．９）では、複合乳化剤と凍結防止剤を併用することによって凍結融解試験に抵抗できる乳剤を製造しているが、提供する処方には、脂肪乳剤に一般的に使用される乳化剤であるリン脂質を含有する以外、非リン脂質乳化剤（例えばＨＳ１５）を含有し、更に凍結防止剤の添加が必要であるため、処方が十分に複雑であるだけでなく、非リン脂質乳化剤及び凍結防止剤の添加により、後続の品質研究の複雑性及び使用安全性に不利である。今まで、国内外では凍結融解抵抗性を有する栄養型脂肪乳剤、及び薬物担持脂肪乳剤製品がまた開発されていない。
従来技術において、３０％乳剤に補助乳化剤としてオレイン酸／オレイン酸ナトリウムを添加することによって、製剤の物理的安定性を向上させている。しかしながら、発明者は、オレイン酸ナトリウムを添加しても、凍結融解による破壊に抵抗できないことを見出した。研究（Ｌｉｐｉｄ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌｙｔｉｃ、ａｇｅｎｔｓ： ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ９ （２０００） ２８５−２９０）によれば、乳剤はオレイン酸に起因する溶血性問題（０．００５％のオレイン酸ナトリウムは１００％の溶血を引き起こす）を解消できるが、乳滴の表面がリン脂質とグリセリンに完全に被覆されないと、処方にオレイン酸／オレイン酸ナトリウムを添加する脂肪乳剤には溶血のリスクが存在する。なお、乳剤中の油濃度が高いほど破壊しやすくなり、例えば、１０％、２０％、３０％の脂肪乳剤の破壊程度は、順に増大する。
上記従来技術の欠陥、即ち、従来の脂肪乳剤に存在する、凍結融解に抵抗できないこと、配合変化、及び大粒子凝集などの問題に鑑み、本発明は、従来の脂肪乳剤に凍結融解抵抗性を付与する方法を提供し、それにより、凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤を提供することを目的とする。
本発明の目的を達成させるために、発明者は下記技術案を提供する。
乳剤の組成成分においてグリセリンの含有量が３ｗ／ｖ％以上である高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用を提供する。
今まで、乳剤において、グリセリンは浸透圧を調整するためのもののみであり、グリセリンの他の価値が無視されている。例えば凍結融解、配合、粒子凝集問題など、グリセリンに対する脂肪乳剤の一般的な問題に関して研究が行われず、これらの問題は臨床使用過程において必ず直面して解決しなければならない。本発明において、広範な研究をした結果、乳剤におけるグリセリンは、浸透圧調整作用以外、従来の一般的な使用量以上の量で使用されると、複数の予期しない効果を発揮し、上記問題を解決できることが見出された。従来の市販脂肪乳剤及び薬物担持乳剤におけるグリセリンの含有量を３ｗ／ｖ％／以上に増加することによって、凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤（注：病院から購買する脂肪乳剤はいずれも凍結融解破壊に抵抗できない）を調製できる。更に、グリセリンの使用量が高いほど好ましいとは言えず、製剤中のグリセリン使用量が４０％（ｗ／ｖ％）を超えると、体系における粒径の分布均一性が低下する。
本発明によれば、静脈注射投与又は経口投与用の、薬物含有又は薬物不含の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤を製造できる。
好適な実施形態としては、本発明に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用によれば、乳剤の組成成分において、前記高濃度グリセリンの含有量は３ｗ／ｖ％以上であり、最大使用量は乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％であり、好ましくは５−４０％、より好ましくは７．５−３０％、最も好ましくは７．５％−１５％である。
好適な実施形態としては、本発明に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用によれば、前記凍結融解抵抗性を有する乳剤の組成成分は、従来の一般的な乳剤処方の基礎で、主に油とグリセリンの割合に注目し、例えば、油溶液が乳剤の組成成分の総量の２％−１０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリンの使用量は乳剤中の油量の１／３以上である。
好適な実施形態としては、本発明に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用によれば、前記凍結融解抵抗性を有する乳剤の組成成分は、従来の一般的な乳剤処方の基礎で、主に油とグリセリンの割合に注目し、例えば、油溶液が乳剤の組成成分の総量の１０〜３０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリンの使用量は乳剤中の油量の１／３以上である。
本発明は、更に凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤を提供し、組成成分として、油溶液、グリセリン、リン脂質及び水を含み、乳剤の組成成分において、前記グリセリンの含有量は３ｗ／ｖ％以上である。
好適な実施形態としては、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤によれば、前記グリセリンの最大使用量は乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％、好ましくは５−４０％、より好ましくは７．５−３０％、最も好ましくは７．５％−１５％である。
好適な実施形態としては、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤によれば、前記油溶液が乳剤の組成成分の総量の２％−１０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリンの使用量は乳剤中の油量の１／３以上である。
好適な実施形態としては、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤によれば、前記油溶液が乳剤の組成成分の総量の１０〜３０ｗ／ｖ％である場合、グリセリンの使用量は乳剤中の油量の１／３以上である。
好適な実施形態としては、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤によれば、前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤的の組成成分は、さらに、前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤のｐＨ値を４．５〜１０．１に調整する使用量のｐＨ調整剤を含む。
好適な実施形態としては、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤によれば、前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤の組成成分には、更に酸化防止剤を含んでもよい。
本発明において、前記油溶液は、植物油、動物油、揮発油、合成油から選ばれる１種又は２種以上の混合物である。前記植物油は、ダイズ油、オリーブオイル、ヒマワリ油、サフラワー油、茶油、コーン油、綿実油、ピーナッツ油、精製アーモンドオイル、ゴマ油、アタンシ油、ヨクイニン油、シソ種子油、月見草油、サジー種子油を含み、揮発油は、ガジュツ油、エレメン、センキュウ油、ガーリックオイル、トウキ油、レイシ胞子油、セロリ種子油を含み、動物油は、魚油、アザラシ油、エビ油を含み、合成油は、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、構造化トリグリセリド（ＳＴＧ）などを含む。
本発明において、リン脂質は、天然リン脂質、半合成リン脂質及び全合成リン脂質を含む。そのうち、天然リン脂質はダイズリン脂質（ＳＰＣ）、レシチン（ＥＰＣ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）から選ばれ、好ましくはレシチン（ＥＰＣ）であり、半合成リン脂質は、水添ダイズレシチン（ＨＳＰＣ）と水添卵黄レシチン（ＨＥＰＣ）から選ばれ、全合成リン脂質はＤＯＰＣ、ＤＯＰＧ、ＤＰＰＣ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＣ、ＤＳＰＧ、ＤＭＰＣ及びＤＭＰＧなどから選ばれる。
本発明において、前記ｐＨ調整剤は、無機酸（塩酸、リン酸、炭酸）、有機酸（酢酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、シスチン、システイン、メチオニン、スレオニン、セリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、メチオニン、ヒドロキシプロリン）、無機塩基（水酸化ナトリウム）、有機塩基（アスパラギン、グルタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、ベタイン）及び対応したナトリウム塩（リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リンゴ酸ナトリウム、蓚酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、フマル酸ナトリウム、マレイン酸ナトリウム及びコハク酸ナトリウム）などから選ばれる。
本発明において、前記酸化防止剤は亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、ピロ亜硫酸塩、ジチオカーバメート、アスコルビン酸、アスコルビン酸パルミテート、シスチン、トコフェロール、ビタミンＥ、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ｐ−クレゾール、ＥＤＴＡ−２Ｎａ及びＥＤＴＡカルシウムナトリウムから選ばれる。
本発明において、前記水は、精製水、蒸留水、注射用水、滅菌注射用水などから選ばれる１種であり、使用量が油、グリセリン、リン脂質、ｐＨ調整剤、酸化防止剤以外の残量である。
本発明の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、凍結融解抵抗性を有する薬物含有脂肪乳剤であってもよく、前記薬物は、デキサメタゾンパルミテート、補酵素Ｑ１０、プロポフォール、アニソール、アサロン、エレメン、クルクミン、タンシノンＩＩＡ、プロスタグランジンＥ１、リマプロスト、ケトプロフェンイソプロピルエステル、マロチラート、ビタミンＫ１、ククルビタシンＥから選ばれる。凍結融解抵抗性を有する薬物含有脂肪乳剤において、グリセリンの使用量は４．５ｗ／ｖ％以上であり、最大量は乳剤の総量の４０％、好ましくは５％−４０％、より好ましくは５％−３０％、最も好ましくは５％−２０％である。
従来技術に比べて、本発明の有益な効果は以下のとおりである。
１、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、低温・凍結融解に耐えられるため、乳剤製品の輸送・保存過程において温度条件の変化により薬品の安定性が低下する問題を回避し、使用安全性を確保すると同時に、輸送・保存条件への要求を低下させ、使用コストを大幅に削減させる。
２、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、乳剤の振盪安定性を向上させることができる。
３、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、グリセリンの添加量を向上させることで、乳剤の滅菌前後のｐＨの変化を減少させて、乳剤のｐＨ値の制御性を向上させ、かつ、乳剤の金属イオン破壊に対する抵抗作用を向上させ、量産条件の制御に有利であるとともに、乳剤と金属イオンの配合安定性に寄与する。
４、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、特殊なグリセリン濃度を採用し、グリセリンの含有量を３％以上に増加することにより、薬物含有脂肪乳剤における薬物の化学安定性を向上させる。
５、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、ＰＦＡＴ５の、特にプラスチック材質容器との反応を減少させて、それによって、製品の品質や使用安全性、特に新生児／高齢者の使用安全性を向上させる（高齢者の血管の弾力性が低く、毛細血管が狭く又は一部に目詰りが発生するため、乳剤の大粒子（ＰＦＡＴ５）による影響を受けやすい）。
６、本発明に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤は、従来の脂肪乳剤の処方の基礎で、処方における既存成分であるグリセリンの使用量を増加するだけで、従来の処方以外の他の成分を追加する必要がなく、従って、操作しやすく、技術が成熟し、工業的生産が実現されやすい。
以下、実施例を利用して、本発明の内容を詳細に説明する。なお、本発明の実施は、以下の実施例に制限されず、本発明に対して行った、全ての形式的改良及び／又は変化は本発明の保護範囲に属すべきである。
本発明において、特に指摘しない限り、部、百分率はすべて重量単位であり、全ての装置や原料などは市販品として入手でき、又は本分野でよく使用されるものである。特に指摘しない限り、実施例に使用される方法は本分野の公知技術である。
なお、凍結融解試験において、発明者は凍結融解安定性定数ＫＦを評価指標として凍結融解安定性を判断する。式：
式中、ＫＦは乳剤の凍結融解安定性定数であり、ｎ＝ｍ＋１は凍結融解試験における粒径の全測定回数であり、
は凍結融解試験に測定した粒径を示し、
は凍結融解試験に測定した粒径の平均値を示す。ＫＦの値が小さいほど、経口投与型ククルビタシン含有脂質ナノ乳剤の凍結融解安定性は高く、逆には、凍結融解安定性は低い。
（実験例）
実験例１ 市販脂肪乳剤の凍結融解安定性及び振盪安定性
（１）凍結融解安定性
市販脂肪乳剤製品、２０％脂肪乳剤注射剤（ＬＣＴ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、四川科倫薬業有限公司製、Ｌ−２０−２．２とする）、３０％脂肪乳剤注射剤（ＬＣＴ３０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン１．６７％、西安力邦製薬有限公司製、Ｌ−３０−１．６７とする）、中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＬＣＴ１０％、ＭＣＴ１０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．５％、ドイツＢ．ブラウン社（蘇州）製、ＬＭ−２０−２．５とする）、構造化トリグリセリド剤注射剤（ＳＴＧ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、無錫華瑞製薬有限公司製、ＳＴＧ−２０−２．２とする）及び魚油脂肪乳剤注射剤（ＯＭＥＧＡＶＥＮ）（精製魚油（ｆｉｓｈ）１０％、グリセリン２．５％、卵黄レシチン１．２％、華瑞製薬有限公司製、Ｆ−１０−２．５とする）を取り、−２０℃の条件で１２〜２４ｈ凍結し、次に２０℃で３〜６ｈ放置して１サイクルを完了し、粒径を測定した。
凍結融解試験では、発明者は凍結融解安定性定数ＫＦを評価指標として凍結融解安定性を判断する。結果は表１に示される。
以上から明らかなように、市販脂肪乳剤は凍結融解に抵抗できない。
実験例２ 異なるグリセリン使用量による２０％脂肪乳剤注射剤の凍結融解安定性に対する改善
市販の２０％脂肪乳剤注射剤（Ｌ−２０−２．２、主成分：ＬＣＴ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、四川科倫薬業有限公司製）１本を準備して、１本に２ｍＬを充填するように、３ｍＬのバイアルに分包して合計１６本にする。外添法によって、製剤においてグリセリンが占める重量体積比が、それぞれ２．２％、５％、７．５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％になるように、それぞれに異なる量のグリセリンを添加し、比率ごとに２本準備し、室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌して、半分の製剤に対して直接凍結融解安定性試験を行った。外添したグリセリンが脂肪乳剤注射剤において均一に混合するために、グリセリンの使用量が異なる他の半分の脂肪乳剤注射剤に対して、１００℃で３０ｍｉｎ回転滅菌した後、凍結融解安定性試験を行い、結果を表２、表３に示す。
以上の結果によれば、市販２０％脂肪乳剤注射剤（Ｌ−２０）自体は凍結融解試験に抵抗できず、乳剤中のグリセリン含有量を５％〜５０％（ｗ／ｖ）に向上させると、得られた脂肪乳剤注射剤は少なくとも三回の凍結融解試験に耐えられるが、グリセリン濃度が５０％である場合、ＣＶが高過ぎ、すなわち粒径の分布が不均一になり、従って、後続研究ではグリセリン濃度の最高値を４０％（ｗ／ｖ％）にする。
滅菌前後の製剤の凍結融解安定性定数ＫＦには明らかな差異がないため、グリセリンを脂肪乳剤注射剤に均一に分散させるのに、グリセリンを外添法によって添加して、室温で２０ｍｉｎ撹拌するだけで十分であることが分かる。また、１００℃、３０ｍｉｎ回転滅菌しても脂肪乳剤注射剤の安定性に影響を与えないことが分かる。
実験例３ 異なるグリセリン使用量による３０％脂肪乳剤注射剤の凍結融解安定性に対する改善
「実験例２」と同様に、外添法によって、市販３０％脂肪乳剤注射剤（Ｌ−３０−１．６７、ＬＣＴ３０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン１．６７％、西安力邦製薬有限公司製）においてグリセリンが占める重量体積比がそれぞれ１．６７％、２．２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％になるようにグリセリンを添加し、次に室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌し、半分の製剤に対して凍結融解安定性試験を直接行い、他の製剤を１００℃で、３０ｍｉｎ回転滅菌した後、凍結融解安定性試験を行い、結果を表４、表５に示す。
以上の結果によれば、市販３０％脂肪乳剤注射剤（Ｌ−３０）自体は凍結融解試験に耐えられず、脂肪乳剤注射剤におけるグリセリン量が元の１．６７％（ｗ／ｖ）から２．５％（ｗ／ｖ）に上昇しても、凍結融解に抵抗できないという問題を解決できず、グリセリン量を７．５％（ｗ／ｖ）に増加した時のみ、得られた脂肪乳剤注射剤は少なくとも三回の凍結融解試験に抵抗できることがわかる。凍結融解安定性定数Ｋｆから見れば、脂肪乳剤注射剤におけるグリセリンの比率の増加に伴って、Ｋｆは先ず徐々に減少し、グリセリンの使用量が１５％（ｗ／ｖ）に達すると、Ｋｆ値は最低に低下し、即ち、その時の脂肪乳剤注射剤の凍結融解安定性が最適である。それ以降、グリセリンの使用量の更なる増加に伴って、Ｋｆ値はある程度に回復するが、製剤は依然として凍結融解試験に抵抗できる。
滅菌前後の製剤のＫｆ値を比較した結果、発明者は、異なるグリセリンの使用量で、滅菌後の製剤のＫｆ値は滅菌前の製剤のＫｆ値より高く、それは１００℃で、３０ｍｉｎ回転滅菌することでＬ−３０の凍結融解安定性へ影響を及ぼすことを示し、体系中の油量が高すぎて、対応した乳化剤リン脂質の含有量が比較的少ないので、体系が不安定になり、外界の条件で影響しやすくなるためである可能性があることを見出した。
実験例４ 異なるグリセリン使用量による市販中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＭＬ−２０）の凍結融解安定性に対する改善
「実施例２」と同様に、外添法によって、市販中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＬＭ−２０−２．５、ＬＣＴ１０％、ＭＣＴ１０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．５％、ドイツＢ．ブラウン社（蘇州）製）の製剤においてグリセリンが占める重量体積比がそれぞれ２．５％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％になるようにグリセリンを添加し、次に室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌し、半分の製剤に対して凍結融解安定性試験を直接行い、他の半分の製剤を１００℃で、３０ｍｉｎ回転滅菌した後、凍結融解安定性試験を行い、結果を表６、表７に示す。
以上の結果によれば、滅菌前後の市販中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＭＬ−２０）自体は凍結融解試験に抵抗できないことが分かる。
滅菌前のＭＬ−２０については、グリセリンの量が元の２．５％（ｗ／ｖ）から５％（ｗ／ｖ）に上昇すると、製剤は三回の凍結融解サイクルに抵抗できる。脂肪乳剤注射剤におけるグリセリンの比率の増加に従い、Ｋｆ値は徐々に減少した後に上昇するという傾向を示し、Ｌ−２０と同様に、グリセリンの使用量が１５％（ｗ／ｖ）に達すると、Ｋｆ値は最低に低下し、すなわち、その時の脂肪乳剤注射剤の凍結融解安定性が最高である。
滅菌後のＭＬ−２０については、５％（ｗ／ｖ）のグリセリン使用量の変化によって凍結融解安定性を解決することはできず、製剤は三回の凍結融解サイクルを経た後に成層し、それは、グリセリンの使用量が製剤の凍結融解安定性に影響を与える唯一な要素ではなく、乳化膜の安定度もその凍結融解安定性に直接影響を与えることを示し、それは、１００℃、３０ｍｉｎの回転滅菌条件によってＭＬ−２０の乳化膜が薄くなり、構造の緻密性が低下し、凍結融解に抵抗できないからである。しかし、グリセリン使用量の更なる増加に伴って、製剤は凍結融解安定性試験に抵抗できるようになるが、Ｋｆ値には、低下した後に向上する傾向が著しくなく、更にグリセリン使用量が３０％（ｗ／ｖ）である時にＫｆ値は大幅にリバウンドし、それは乳化膜が変化するからであると考えられる。
魚油脂肪乳剤注射剤（ＯＭＥＧＡＶＥＮ）（精製魚油（ｆｉｓｈ）１０％、グリセリン２．５％、卵黄レシチン１．２％、華瑞製薬有限公司製、Ｆ−１０−２．５とする）の実験結果も類似し、それはグリセリン含有量が５％より大きいことを示す。
実験例５ 異なるグリセリン使用量による市販構造化トリグリセリド剤注射剤の凍結融解安定性に対する改善の考察
「実験例２」と同様に、外添法によって、構造化トリグリセリド剤注射剤（ＳＴＧ−２０−２．２、ＳＴＧ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、無錫華瑞製薬有限公司製）においてグリセリンが占める重量体積比をそれぞれ２．２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％になるようにグリセリンを添加し、次に室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌し、半分の製剤に対して凍結融解安定性試験を直接行い、他の半分の製剤を１００℃で、３０ｍｉｎ回転滅菌した後、凍結融解安定性試験を行い（実験例１参考）、結果を表８、表９に示す。
以上の結果によれば、滅菌前後の市販構造化トリグリセリド剤注射剤（ＳＴＧ−２０）自体は凍結融解試験に抵抗できず、製剤中のグリセリン使用量を５％（ｗ／ｖ）に向上させても、滅菌前後の製剤は凍結融解試験に抵抗できないことがわかる。それは油相の組成も乳剤の凍結融解抵抗性に対して重要であることを示す。
前記Ｌ−１０、Ｌ−２０、Ｌ−３０及びＭＬ−２０との相違点として、それぞれのグリセリン使用量を有するＳＴＧ−２０乳剤は、２．２％−４０％（ｗ／ｖ）のグリセリン使用量範囲において、滅菌前後のＫｆ値は、低下した後に向上する傾向を示すことがなく、脂肪乳剤注射剤におけるグリセリンの比率の増加に伴って、Ｋｆ値は始終低下する傾向を示す。
要するに、グリセリン使用量が７．５％（ｗ／ｖ）より大きい時、得られた製剤は少なくとも三回の凍結融解安定性試験に抵抗できる。
実験例６ 振盪安定性
１００回／分の強度でそれぞれのグリセリン含有量を有する市販脂肪乳剤を破壊し、結果を表１０〜１４に示す。ここで、「−」は凝集が発生せず、外観が均一であることを示し、「＋」は凝集又は複数の小油滴が発生することを示し、「＋＋」は大油滴又は複数の小油滴が発生することを示し、「＋＋＋」は成層を示す。
実験例７ １０％ＬＣＴ脂肪乳剤注射剤（Ｌ−１０−２．５）の製造及びその凍結融解安定性の考察
一、１０％ＬＣＴ脂肪乳剤注射剤（Ｌ−１０）の製造
自作脂肪乳剤注射剤の処方は、表１５に示される。
プロセス：
１、油相の調製
処方量のＬＣＴとＥＰＣをそれぞれ秤量し、加熱して溶解し、使用に備える。
２、水相の調製
処方量のオレイン酸ナトリウム、グリセリン及び滅菌注射用水を混合して溶解し、使用に備える。
３、油相と水相をそれぞれ６５℃に加熱して、磁気攪拌しながら、水相を油相中に緩やかに加え、更に２０ｍｉｎ撹拌して、一次エマルションを得る。
４、一次エマルションのｐＨ値を１０ｍＭのＮａＯＨ溶液で８．５に調整し、マイクロフルイダイザーを使用して１４０００ｐｓｉの圧力下で５回均質化した後、滅菌注射用水で１００ｍＬになるまで希釈し、０．４５μｍの微多孔濾過膜を通過させて、乳剤を得る。１本に２ｍＬを充填するように、乳剤を３ｍＬのバイアルに分包して窒素ガスを導入し、栓を付け、アルミニウムキャップをプレスして密封し、１２１℃で１０ｍｉｎ滅菌し、冷水を吹き付けることでエマルジョンを迅速に室温まで降温して得る。
二、凍結融解安定性の考察
上記脂肪乳剤注射剤を６本取り、外添法によって、製剤においてグリセリンが占める重量体積比がそれぞれ３％、５％、１０％、２０％、３０％及び４０％になるように、それぞれに異なる量のグリセリンを添加し、次に室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌して得る。
それぞれのグリセリン使用量を有する自作脂肪乳剤注射剤に対して凍結融解安定性試験を行い、結果を表１６に示す。
その結果によれば、２．５％のグリセリンを含有する脂肪乳剤注射剤は凍結融解に抵抗できず、外添法によってグリセリンを３％、５％、１０％、２０％、３０％及び４０％になるまで添加した時、得られた脂肪乳剤注射剤はいずれも凍結融解に抵抗できることが分かる。（注：２年間放置した結果、グリセリン含有量が３０％、４０％の製剤は、その外観に極めて少量の成層が発生し、かつ４０％のグリセリンを含有する製剤は成層がさらに重度になるが、測定によれば粒径が大幅に増大しない。）
これに基づいて、異なる油濃度を有する脂肪乳剤（１０％、７．５％、５％、２．５％）（油／リン脂質の比率が一定である）の凍結融解安定性を考察し、処方組成は表１７に示される。
製造プロセスは以上の実験例と同様であり、凍結融解の考察結果によれば、製造された乳剤は複数回の凍結融解による破壊に抵抗できる。
実験例８ 異なるグリセリン使用量の異なるｐＨ値の脂肪乳剤の滅菌前後の製剤凍結融解安定性に対する影響結果
「実験例７」と同様に、ｐＨ値が異なる１０％ＬＣＴ脂肪乳剤注射剤を製造し、異なる使用量のグリセリンを添加し（実験例７の研究結果から、２．５％のグリセリンを含有する脂肪乳剤が凍結融解に抵抗できないことが証明されているため、本試験ではその場合を除く）、得られた製剤について凍結融解安定性の研究を行い、結果を表１８に示す。
以上から明らかなように、グリセリン量が３％より大きい場合、ｐＨ６．５〜８．５の範囲にある脂肪乳剤は、いずれも凍結融解による破壊に抵抗できる（注：ｐＨ６の脂肪乳剤は不安定である）。
実験例９ グリセリンを減少させる脂肪乳剤の滅菌前後のｐＨ値の変化程度
本実験の目的は凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤を製造することであるので、市販脂肪乳剤の処方の基礎で、グリセリン（Ｇｌｙ）の使用量を５％（ｗ／ｖ）に調整して、表１９に示される基本処方を得る。
プロセス：
処方量のＥ８０、ＬＣＴ及びオレイン酸を秤量して油相を調製し、処方量のグリセリンと８５％（ｖ／ｖ）の滅菌注射用水を油相して水相を得て、油相と水相をそれぞれ６５℃に加熱する。油相中の物質が完全に溶解した後、磁気攪拌しながら、水相を油相中に緩やかに添加し、更に２０ｍｉｎ撹拌して、一次エマルションを得る。マイクロフルイダイザーを使用して１４０００ｐｓｉで一次エマルションを５回均質化した後、滅菌注射用水で１０００ｍＬになるまで希釈し、０．２２μｍの微多孔濾過膜を通過させて、ｐＨ値を測定し、７つの部分に分け（グリセリン含有量を２．５％、５．０％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％に調整し）、１０ｍＭのＮａＯＨ溶液でそれぞれのグリセリン含有量を有する乳剤のｐＨ値を７．５、８．０及び８．５に調整し、それぞれＥｍ７．５、Ｅｍ８．０、Ｅｍ８．５とする。次に１本に４ｍＬを充填するように、７ｍＬのバイアルに分包して、均一に混合した後、窒素ガスを導入し、プラグを付け、アルミニウムキャップをプレスして密封し、半分の製剤を滅菌せずに滅菌前製剤とし、他の半分の製剤を１２１℃で１０ｍｉｎ滅菌して滅菌後製剤とし、冷水を吹き付けることでエマルジョンを迅速に室温に降温して得た。
明らかに、グリセリン使用量を向上させることによって乳剤の滅菌前後のｐＨを変えることができ、かつ、１０〜２０％のグリセリンを含有する乳剤はｐＨの変化が最小である。
予想外にも、グリセリンの添加量が増加すると、滅菌前後のｐＨ変化が減少し、量産の条件制御や、ロット間の均一性制御に有利であり、かつ、グリセリン量が高すぎると（２０％より大きい）、ｐＨ値の変化が逆に増加することが見出され、そのため、グリセリンの最適な範囲は５〜１５％である。
実験例１０ 金属イオンと脂肪乳剤の配合についての研究
「実験例２」と同様に、外添法によって、構造化トリグリセリド剤注射剤（ＳＴＧ−２０−２．２、ＳＴＧ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、無錫華瑞製薬有限公司製）においてグリセリンが占める重量体積比がそれぞれ２．２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％になるようにグリセリンを添加し、次に室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌し、半分の製剤に対して凍結融解安定性試験を直接行った。
ＣａＣｌ２の濃度の各Ｇｌｙ含有量を有する中長鎖脂肪乳剤の凍結融解安定性に対する影響
市販の２０％中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＭＬ−２０）の基礎で、外添法によって、グリセリンを添加して、グリセリンの濃度がそれぞれ２．５％、５．０％、１０．０％（ｗ／ｖ）の脂肪乳剤を調製し、異なるグリセリン含有量を有する脂肪乳剤に質量濃度がそれぞれ０．１ｇ／Ｌ、０．３ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、１．０ｇ／Ｌ、１．５ｇ／ＬのＣａＣｌ２溶液２００μＬを添加して、室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌した後に、凍結融解安定性試験を行い、結果を下表２１〜２５に示す。
上表から明らかなように、市販乳剤とカルシウムイオンの混合には問題が存在し、低濃度カルシウム塩は不安定を引き起こしやすく、脂肪乳剤と高濃度カルシウム塩を混合する場合の安定性は高いが、２．５％のグリセリンを含有する乳剤は１回の凍結融解に抵抗でき、５％のグリセリンを含有する乳剤は２回の凍結融解に抵抗でき、３回目の凍結融解時に大粒子が発生し、１０％のグリセリンはカルシウムイオンによる影響を完全に解消する。
発明者は更に脂肪乳剤と塩化マグネシウム（０．０５％、０．１％及び０．２％、ｇ／ｍＬ）を配合し、その結果、同様な問題が存在し、すなわち、低濃度塩化マグネシウムの場合は、粒子が成長し、高濃度塩化マグネシウムの場合は変化が小さく、１０％のグリセリンは塩化マグネシウムによる影響を完全に解消することを見出した。
実験例１１ 市販のデキサメタゾンパルミテート注射剤の凍結融解安定性の考察
市販のデキサメタゾンパルミテート注射剤（リメタソンＬＩＭＥＴＨＡＳＯＮ、三菱製薬（广州）有限公司製、製品ロット番号：Ｖ０９５、輸入薬品登録番号：Ｈ２０１２０４８０、分包ロット番号：ＬＩ１３１１０７）を４本準備し、それぞれ異なる量のグリセリンを、注射剤中のグリセリンの百分率含有量がそれぞれ２．２％（ｗ／ｖ、グリセリン外添量は０であり、すなわち元の市販製剤である）、３．０％（ｗ／ｖ、グリセリン外添量は０．８％である）、４．５％（ｗ／ｖ、グリセリン外添量は２．３％である）、６．０％（ｗ／ｖ、グリセリン外添量は３．８％である）になるように添加し、次に凍結融解安定性試験を行い、結果を表２６に示す。
その結果によれば、デキサメタゾンパルミテート乳剤は、グリセリン含有量が４．５％より大きい時に凍結融解試験に抵抗でき、含有量が３％の時は、凍結融解に抵抗できず、「実験例７」の１０％ＬＣＴ乳剤はグリセリン含有量が３％であれば、凍結融解による破壊に抵抗でき、すなわち、薬物は油相性質を変えて、乳剤の凍結融解破壊に対する感度を向上させることが分かる。この問題はグリセリン量を更に向上させることによって解決できる。
デキサメタゾンパルミテート注射剤は新生児Ｗｅｓｔ症候群（Ｗｅｓｔｓｙｎｄｒｏｍｅ、点頭てんかん）を治療することに用いられ（Ｊ Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌ ２０００；１５：７０２−７０４ 及び Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２００７、２９（７）：４２１〜４２４ ）、新生児は外界に敏感で、毛細血管が微細であるため、脂肪乳剤の品質に対する要求が高く、大粒子又は製剤の微小な品質変化によって深刻な問題を引き起こす恐れがある。
実験例１２ オレイン酸によるデキサメタゾンパルミテート注射剤の凍結融解抵抗能力の向上
市販のデキサメタゾンパルミテート注射剤の処方（１ｍｌあたり４．０ｍｇのデキサメタゾンパルミテート、１００ｍｇのダイズ油、１２ｍｇの卵黄レシチン及び２２．１ｍｇの高濃度グリセリンを含む）とクレビジピン乳剤（Ｃｌｅｖｉｐｒｅｘ）の処方（０．０３％のオレイン酸を含む）を参照し、オレイン酸を含有して異なるグリセリン使用量を有する処方を設計して表２７に示す。
実験例９のプロセスと同様に、ｐＨを８．５に調整して、乳剤を製造する。
異なるグリセリン使用量を有するデキサメタゾンパルミテート注射剤の凍結融解安定性の考察結果は表２８に示される。
「実験例１１」におけるオレイン酸を含まないデキサメタゾンパルミテート注射剤の凍結融解抵抗性試験の結果と比較した結果、オレイン酸は乳剤の凍結融解抵抗能力を増加でき、グリセリン使用量を３．０％にすれば、凍結融解による破壊作用に抵抗できることが分かる。
実験例１３ グリセリンによるデキサメタゾンパルミテート注射剤の安定性への影響
１、異なるグリセリン使用量を有するデキサメタゾンパルミテート注射剤の製造
市販のデキサメタゾンパルミテート注射剤の処方（１ｍｌあたり４．０ｍｇのデキサメタゾンパルミテート、１００ｍｇのダイズ油、１２ｍｇの卵黄レシチン及び２２．１ｍｇの高濃度グリセリンを含む）を参照して、異なるグリセリン使用量を有する処方を設計して、表２９に示す。
プロセスは「実験例７」と同様である。
実験例１１の処方組成を使用し、デキサメタゾンパルミテートにはエステル結合を有するため、アルカリ性条件で加水分解しやすく、滅菌後にｐＨが約１低下し、滅菌前のｐＨを約８．０６、８．５１、９．０３、９．５０、１０．１０に調整し、６０℃で１０日間考察した結果、分解生成物における関連物質の１０％以下は、含有量が低下する。結果は表３０に示される。
明らかに、デキサメタゾンパルミテート注射剤の分解生成物はｐＨの上昇と共に上昇し、ｐＨ１０の製剤は、グリセリン量を５％に向上させると、関連物質が１８．６％から１０．７％に減少し、グリセリンをさらに１０％に向上させると、関連物質が１８．６％から６．１％に減少し、それによって製剤の安定性を大幅に向上させる。
実験例１４ グリセリンによる脂肪乳剤のプラスチックボトルでのＰＦＡＴ５の減少、製剤の配合安全性向上
臨床上、脂肪乳剤を静脈内投する時にプラスチック製の輸液管（器）を使用し、また、脂肪乳剤の容器の中にもプラスチック材質のものがあり、特に複数の栄養素を供給する複室輸液袋の場合は、プラスチック材質が一般的であり、例えば、広州百特僑光医療用品有限公司製の即用式三室輸液袋入り経腸栄養剤のクリノメル（Ｃｌｉｎｏｍｅｌ）が挙げられる。そのため、ガラス材質とプラスチック材質を考察する必要がある。
前記「実験例２」と同様に（２０％脂肪乳剤注射剤、四川科倫薬業有限公司製）、外添法によって（クリーンベンチで実施する）、製剤においてグリセリンが占める重量体積比がそれぞれ３．０％、５．０％、１０．０％、１５．０％（微生物成長を防止するために、それぞれの製剤に０．００５％ＥＤＴＡ−２Ｎａを添加する）になるようにグリセリンを添加し、非ＰＶＣプラスチック袋に分包して、低速（１０ｒｐｍ）で１２時間振盪し、結果を３１に示す。
上表によれば、高濃度グリセリンはＰＦＡＴ（５）値を大幅に減少させる。米国薬局方ＵＳＰ＜７２９＞ではＰＦＡＴ（５）値について、５μｍより大きい大粒子が０．０５％未満であるように規定し、この標準に応じて、グリセリンの濃度が５％以上である時に、脂肪乳剤は合格し、振盪による破壊作用に抵抗できると判断する。
実験例１５ 凍結融解処理による製剤中のグリセリン含有量への影響
通常、グリセリンは乳剤の等浸透圧調整剤として使用され、かつ使用濃度が２．５％未満であった。周知のように、グリセリン水溶液の氷点は濃度によって異なり、濃度１０％、３０％、５０％、６６．７％、８０％、９０％のグリセリンの氷点はそれぞれ−１．６℃、−９．５℃、−２３．０℃、−４６．５℃、−２０．３℃及び−１．６℃である。このことから分かるように、脂肪乳剤におけるグリセリン含有量が３０％に達しても、その氷点は−９．５℃であり、凍結融解試験に使用される温度より遥かに低いため、必然的に氷結晶を発生させる。３％〜１０％のグリセリン（１０％のグリセリンの氷点は−１．６℃である）を添加するだけで凍結融解の問題を完全に解決するという課題について、グリセリンにより乳剤の凍結融解抵抗能力を向上させ、又はグリセリンにより脂肪乳剤に凍結融解抵抗特性を付与する原因について研究する時に、発明者はサンプルの凍結融解処理を行ってグリセリンの含有量を測定した。
グリセリン含有量の測定方法：高速液体クロマトグラフィー−蒸発型光散乱検出法（ＨＰＬＣ−ＥＬＳＤ）によって中／長鎖脂肪乳剤注射剤におけるグリセリン含有量を測定し、クロマトグラフィー条件は以下のとおりである：カラム、ＩｎｔｅｒｓｔｉｌＮＨ２（２５０ｍｍ＊４．６ｍｍ、５ｕｍ）；カラム温度、３０℃；移動相、アセトニトリル−水（９０：１０、Ｖ／Ｖ）；流速、１．０ｍＬ・ｍｉｎ−１；試料注入量、１００μＬ；ＥＬＳＤ検出器のドリフト管の温度、４０℃；ゲイン値、１．０；圧力、１．６Ｂａｒ。
試験研究：病院から市販脂肪乳剤として、それぞれ中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＭＬ−２０、ＬＣＴ１０％、ＭＣＴ１０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．５％、ドイツＢ．ブラウン社（蘇州）製（分包ロット番号３８１１２１４６、製品ロット番号１２２５３８０８４）、ＭＬ−２０−２．５％とする）、２０％脂肪乳剤注射剤（Ｌ−２０、ＬＣＴ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、四川科倫薬業有限公司製（製品ロット番号Ｂ１３０６１９０３−２）、Ｌ−２０−２．２％とする）、３０％脂肪乳剤注射剤（Ｌ３０、ＬＣＴ３０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン１．６７％、西安力邦製薬有限公司製（１３０９０２１１）、Ｌ−３０−１．６７％とする）、構造化トリグリセリド剤注射剤（ＳＴＧ２０％、ＥＰＣ１．２％、グリセリン２．２％、無錫華瑞製薬有限公司製（１０ＧＥ２８８３）、ＳＴＧ−２０−２．２％とする）を購入し、凍結融解処理を行った後、５万回転／分の低温高速遠心機で２ｈ遠心分離し、油と水を完全に分離した。水層を１００μＬ取り、液体クロマトグラフに注入して、グリセリンのピーク面積を記録し、凍結融解前後のグリセリン含有量の変化を計算して百分率で表示し、結果を表３２に示す。
その結果によれば、水相中のグリセリン含有量はいずれも低下し、つまり、グリセリンは乳化層に入り、特にＬ−３０−１．６７％製剤では、グリセリンの変化百分率が最大で、３回凍結融解を行った後、水相におけるグリセリンは３０％以上失われることが分かる。さらに、処方組成を分析すれば、グリセリンの変化百分率は油の種類と油含有量にも関わることが分かる。同じ油濃度（ＭＬ−２０−２．５％、Ｌ−２０−２．２％、ＳＴＧ−２０−２．２％）では、構造脂肪油ＳＴＧ乳剤におけるグリセリン含有量の減少量は長鎖脂肪油（ダイズ油）とＭＬ乳剤より多く、同じダイズ油（Ｌ−２０−２．２％、Ｌ−３０−１．６７％）では、３０％濃度乳剤におけるグリセリンの減少量は２０％乳剤より多い。
発明者はＭＬ−２０−２．５％製剤にグリセリンを添加して、含有量を３％、５％、１０％及び１５％に達させて、それぞれＭＬ−２０−３％、ＭＬ−２０−５％、ＭＬ−２０−１０％及びＭＬ−２０−１５％とし、同じ処理方法によって、凍結融解前後のグリセリン含有量の変化百分率を計算し、結果を表３３に示す。
明らかに、グリセリンの添加量が５％以上に達すると、凍結融解を３回行っても、乳剤におけるグリセリンが失われことはなく、逆に、それが増加する。
それに基づいて、発明者は、グリセリンが２．５％以下である時、脂肪乳剤の凍結により生じた氷結晶によってグリセリンが濃縮されて乳剤の表面に集まり、乳剤表面における隙間を埋め、グリセリン含有量が３％以上に達する時、乳剤表面におけるグリセリン分子が完全に被覆され、低温凍結により生じた氷結晶に起因するグリセリンの濃縮によって、水相におけるグリセリン含有量を減少させないと推定する。このほか、発明者は更に、グリセリンの調整浸透圧と逆に（例えば１０％脂肪乳剤は、グリセリンが２．５％、３０％脂肪乳剤は、グリセリンが１．６７％である）、油相の濃度が高いほど、必要なグリセリン量が大きくなることを見出した。それによって、水中のグリセリン分布と乳滴表面上のグリセリン分布が異なり、乳滴表面上のグリセリンの濃度が水相中のグリセリン濃度より大きいと推定される。
実験例１６ 異なるグリセリン使用量を有する２０％ＬＣＴ脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、異なるグリセリン使用量を有する２０％ＬＣＴ脂肪乳剤の製造
異なるグリセリン使用量を有する２０％ＬＣＴ脂肪乳剤の処方は表３４に示される。
プロセスは「実験例７」を参照する。
２、異なるグリセリン使用量を有する２０％ＬＣＴ脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
異なるグリセリン使用量を有する２０％ＬＣＴ脂肪乳剤をそれぞれ取り、低温凍結融解試験を行い、具体的な方法としては、製造した乳剤を複数本取り、−２０℃で４８ｈ凍結し、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、凍結融解の研究を行い、粒径を測定し、結果を表３５に示す。
その結果によれば、グリセリン使用量が２．２％と３．０％の２０％ＬＣＴ脂肪乳剤は低温凍結融解試験に抵抗できず、すなわち凍結融解に抵抗できず、グリセリン使用量が油溶液使用量の１／３（ｗ／ｗ）以上であり、すなわちグリセリン使用量が６．７％以上である時、製造した２０％ＬＣＴ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する２０％ＬＣＴ脂肪乳剤である。
実験例１７ 異なるグリセリン使用量を有する２０％ＭＣＴ脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
発明者は「実験例１６」におけるＬＣＴをＭＣＴに変更して、異なるグリセリン使用量を有する２０％ＭＣＴ脂肪乳剤を製造し、凍結融解安定性を考察して、結果を表３６に示す。
その結果によれば、グリセリン使用量が２．２％と３．０％の２０％ＭＣＴ脂肪乳剤は低温凍結融解試験に抵抗できず、すなわち凍結融解に抵抗できず、グリセリン使用量が油溶液使用量の１／３（ｗ／ｗ）以上であり、すなわちグリセリン使用量が６．０％以上である時、製造された２０％ＭＣＴ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する２０％ＭＣＴ脂肪乳剤である。
実験例１８ 異なるグリセリン使用量を有する２０％構造化トリグリセリド剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
発明者は「実験例１６」におけるＬＣＴを中長鎖脂肪酸構造化トリグリセリドに変更して、異なるグリセリン使用量を有する２０％構造化トリグリセリド剤を製造し、凍結融解安定性を考察して、結果を表３７に示す。
その結果によれば、グリセリン使用量が２．２％と５．０％の２０％構造化トリグリセリド剤は低温凍結融解試験に抵抗できず、すなわち凍結融解に抵抗できず、グリセリン使用量が油溶液使用量の１／３（ｗ／ｗ）以上であり、すなわちグリセリン使用量が６．７％以上である時、製造された２０％構造化トリグリセリド剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する２０％構造化トリグリセリド剤である。
実験例１９ 異なるグリセリン使用量を有する２０％中長鎖脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
発明者は「実験例１６」における２０％ＬＣＴを１０％ＬＣＴと１０％ＭＣＴに変更して、異なるグリセリン使用量を有する２０％Ｍ／Ｌ脂肪乳剤を製造し、凍結融解安定性を考察し、結果を表３８に示す。
その結果によれば、グリセリン使用量が２．５％と５．０％の２０％Ｍ／Ｌ脂肪乳剤は低温凍結融解試験に抵抗できず、グリセリン使用量が油溶液使用量の１／３（ｗ／ｗ）以上であり、すなわちグリセリン使用量が６．７％以上である時、製造された２０％Ｍ／Ｌ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する２０％Ｍ／Ｌ脂肪乳剤である。
１回凍結融解した脂肪乳剤を取り、マウスの尾静脈に０．２ｍＬ／１０ｇ注射して、２４時間後の死亡状況を記録した結果、２．５％、５％群の死亡率は８０％、６０％であるのに対して、グリセリン７．５％、１０％、１５％群は死亡対象がない。グリセリンが凍結融解による毒性を解消することが証明される。
実験例２０ 異なるグリセリン使用量を有する３０％ＬＣＴ脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、異なるグリセリン使用量を有する３０％ＬＣＴ脂肪乳剤の製造
異なるグリセリン使用量を有する３０％ＬＣＴ脂肪乳剤の処方は表３９に示される。
プロセスは実施例７のプロセスを参照する。
２、異なるグリセリン使用量を有する３０％ＬＣＴ脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
異なるグリセリン使用量を有する３０％ＬＣＴ脂肪乳剤をそれぞれ取り、低温凍結融解試験を行い、具体的な方法としては、製造された乳剤を複数本取り、−２０℃で４８ｈ凍結し、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、合計で３サイクル行い、１サイクルごとに粒径を測定し、結果を表４０に示す。
その結果によれば、グリセリン使用量が１．６７％と８％の３０％ＬＣＴ脂肪乳剤は低温凍結融解試験に抵抗できず、すなわち凍結融解に抵抗できず、グリセリン使用量が１０％以上である時、製造された３０％ＬＣＴ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する３０％ＬＣＴ脂肪乳剤である。
実験例２１ 異なるグリセリン使用量を有する１０％サジー種子油脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
発明者は「実施例８」において製造される、異なるグリセリン使用量を有する３０％ＭＣＴ脂肪乳剤に対して、凍結融解安定性を考察して、結果を表４１に示す。
その結果によれば、グリセリン使用量が１．６７％と８％の３０％ＭＣＴ脂肪乳剤は低温凍結融解試験に抵抗できず、すなわち凍結融解に抵抗できず、グリセリン使用量が１０％以上である時、製造された３０％ＭＣＴ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する３０％ＭＣＴ脂肪乳剤である。
実験例２２ ＮａＣｌの濃度による異なるグリセリン含有量を有する中長鎖脂肪乳剤の凍結融解安定性への影響
市販の２０％中長鎖脂肪乳剤注射剤（ＭＬ−２０）を適量で取り、二つの部分に分け、一つを０．９％のＮａＣｌ溶液で１倍希釈し、他の部分を１．８％のＮａＣｌ溶液で１倍希釈し、次に１本に２ｍＬを充填するように、３ｍＬのバイアルに分包して、合計１４本にする。外添法によって、製剤においてグリセリンが占める重量体積比がそれぞれ１．２５％、２．５％、３．６％、５％、７．５％、１０％、２０％になるように、それぞれに異なる量のグリセリンを添加し、比率ごとに２本とし、室温で２０ｍｉｎ磁気攪拌した後に、凍結融解安定性試験を行い、結果を表４２、表４３に示す。
明らかに、グリセリンを増加することによって、乳剤の電解質耐性を向上させ、脂肪乳剤と塩化ナトリウム注射剤の配合安定性を向上させる。
（実施例）
実施例１ 凍結融解抵抗性を有するタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤の製造
凍結融解抵抗性を有するタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤の処方
タンシノンＩＩＡ ０．１ｇ、ＭＣＴ １０ｇ、ＬＣＴ １０ｇ、ＥＰＣ １．４ｇ、グリセリン ８ｇ、オレイン酸ナトリウム ０．０２ｇ、リン酸水素二ナトリウム 適量、注射用水 １００ｍＬになるまで添加。
プロセス：
処方量のタンシノンＩＩＡ、ＥＰＣ、ＬＣＴ及びＭＣＴを秤量して油相を調製し、処方量のオレイン酸ナトリウム、グリセリン及び８５％（ｖ／ｖ）の注射用水を秤量して水相を調製し、油相と水相をそれぞれ６０℃に加熱する。油相中の物質が完全に溶解した後、磁気攪拌しながら、水相を油相中に緩やかに加え、更に２０ｍｉｎ撹拌して、一次エマルションを得る。一次エマルションを、マイクロフルイダイザーを使用して２００００ｐｓｉで５回均質化した後、滅菌注射用水で１００ｍＬになるまで希釈し、０．４５μｍの微多孔濾過膜を通過させ、１０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム溶液でｐＨ値を８．２に調整して、１本に１０ｍＬを充填するように、１０ｍＬのバイアルに分包して、次に窒素ガスを導入し、プラグを付け、アルミニウムキャップをプレスして密封し、１２１℃で１０ｍｉｎ滅菌し、冷水を吹き付けることでエマルジョンを迅速に室温に降温して得た。
２、凍結融解抵抗性を有するタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造したタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤を、−２０℃の条件で４８ｈ凍結し、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、１サイクルごとに粒径を測定し、結果を表４４に示す。
その結果によれば、製造されたタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するタンシノンＩＩＡ脂肪乳剤である。
実施例２ 凍結融解抵抗性を有するアタンシ油複方乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するアタンシ油複方乳剤の製造
処方組成：
アタンシ油 ５ｇ、ヨクイニン油 ５ｇ、ＥＰＣ １．２ｇ、グリセリン １０ｇ、クエン酸ナトリウム 適量、注射用水 １００ｍＬになるまで添加。
プロセス：
処方量のアタンシ油、ヨクイニン油及びＥＰＣを秤量して油相を調製し、処方量のグリセリンと８５％（ｖ／ｖ）の注射用水を秤量して水相を調製し、油相と水相をそれぞれ６０℃に加熱する。油相中の物質が完全に溶解した後、磁気攪拌しながら、水相を油相中に緩やかに加え、更に２０ｍｉｎ撹拌して、一次エマルションを得る。一次エマルションを、マイクロフルイダイザーを使用して１４０００ｐｓｉで５回均質化した後、滅菌注射用水で１００ｍＬになるまで希釈し、０．４５μｍの微多孔濾過膜を通過させ、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム溶液でｐＨ値を７．８に調整して、１本に２０ｍＬを充填するように、２０ｍＬのバイアルに分包して、次に窒素ガスを導入し、プラグを付け、アルミニウムキャップをプレスして密封し、１２１℃で１０ｍｉｎ滅菌し、冷水を吹き付けることでエマルジョンを迅速に室温に降温して得た。
２、凍結融解抵抗性を有するアタンシ油複方乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたアタンシ油複方乳剤を、−２０℃で１２ｈ凍結し、次に室温で３ｈ放置して１サイクルを完成し、１サイクルごとに粒径を測定し、結果を表４５に示す。
その結果によれば、製造されたアタンシ油複方乳剤は凍結融解試験に抵抗できる。
実施例３ 凍結融解抵抗性を有するクルクミン脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するクルクミン脂肪乳剤の製造
処方：
クルクミン ０．５ｇ、ＳＰＣ １．２ｇ、ＬＣＴ １５ｇ、グリセリン ２０ｇ、水酸化ナトリウム 適量、注射用水１００ｍＬになるまで添加。
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するクルクミン脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造したクルクミン脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、１サイクルごとに粒径を測定し、結果を表４６に示す。
その結果によれば、製造されたクルクミン脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するイトラコナゾール脂肪乳剤である。
実施例４ 凍結融解抵抗性を有するプロスタグランジンＥ１脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するプロスタグランジンＥ１脂肪乳剤の製造
処方：
プロスタグランジンＥ１ １ｍｇ、ＤＯＰＣ １．２ｇ、ＬＣＴ １０ｇ、グリセリン １５ｇ、水酸化ナトリウム 適量、注射用水１００ｍＬになるまで添加。
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するプロスタグランジンＥ１脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたプロスタグランジンＥ１脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、１サイクルごとに粒径を測定し、結果を表４７に示す。
その結果によれば、製造されたプロスタグランジンＥ１脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するプロスタグランジンＥ１脂肪乳剤である。
さらに重要なのは、発明者は研究時に、クエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液を乳剤に添加して最終濃度を０．５ｍＭにし、乳剤のｐＨを５．０に調整することを見出したことである。グリセリンを添加すると、水相の粘度を向上させて、濾過除菌乳剤の安定性を向上させることができ、ｐＨ範囲、例えば４．５〜６．０に拡大することができる。
プロスタグランジンに類似する薬物、例えばリマプロストは、この処方及びプロセスによれば同じ結果が得られる。
実施例５ 凍結融解抵抗性を有するプロポフォール複方脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するプロポフォール複方脂肪乳剤の製造
処方：
プロポフォール １ｇ、塩酸リドカイン １００ｍｇ、ＳＰＣ １．４ｇ、ＬＣＴ １０ｇ、グリセリン １０ｇ、水酸化ナトリウム 適量、注射用水 １００ｍＬになるまで添加。
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するプロポフォール複方脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたプロポフォール複方脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、１サイクルごとに粒径を測定し、結果を表４８に示す。
その結果によれば、製造されたプロポフォール複方脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するプロポフォール複方脂肪乳剤である。
実施例６ グリセリンによるプロポフォール脂肪乳剤の凍結融解破壊抵抗性への影響
プロポフォール脂肪乳剤の製造：
ＤＩＰＲＩＶＡＮ(R)処方（プロポフォール １０ｍｇ／ｍＬ、ダイズ油 １００ｍｇ／ｍＬ、グリセリン ２２．５ｍｇ／ｍＬ、卵黄レシチン １２ｍｇ／ｍＬ及びＥＤＴＡ−２Ｎａ（０．００５％） ｐＨ ｏｆ ７−８．５）を参照して、処方組成は表４９に示される。
プロセス：実施例１０のプロセスを参照して行う。
凍結融解試験の参照結果によれば、製造された乳剤は３回の凍結融解による破壊に抵抗でき、かつ５％、１０％のグリセリンを有する処方による乳剤は、５回の凍結融解による破壊に抵抗できる。
他の類似性質を有する薬物、例えばアニソール、アサロン、エレメンなどは、この処方及びプロセスによれば、同じ結果が得られる。
実施例７ グリセリンによるプロポフォール脂肪乳剤の刺激性低下
１、プロポフォール脂肪乳剤の製造：
ＤＩＰＲＩＶＡＮ(R)の処方（プロポフォール １０ｍｇ／ｍＬ、ダイズ油 １００ｍｇ／ｍＬ、グリセリン ２２．５ｍｇ／ｍＬ、卵黄レシチン １２ｍｇ／ｍＬ及びＥＤＴＡ−２Ｎａ（０．００５％） ｐＨ ｏｆ ７−８．５）を参照して、異なるグリセリン含有量（２．２５％、５．０％、１０．０％、１５．０％、３０．０％、５０．０％）を有する乳剤を製造して、それぞれ１％Ｐ−１０％Ｌ−２．２５、１％Ｐ−１０％Ｌ−５．０、１％Ｐ−１０％Ｌ−１０．０、１％Ｐ−１０％Ｌ−１５．０、１％Ｐ−１０％Ｌ−３０．０、１％Ｐ−１０％Ｌ−５０．０とし、処方は表５０に示される。
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。グリセリン含有量が３０％と５０％である時、製剤に油浮上が発生し、従って、後続研究を省略する。
得られた乳剤の粒径は表５１に示される。
明らかに、グリセリン含有量を向上させると、ＣＶ値は減少し、つまり、粒径分布が狭くなり、乳剤の粒径均一性が向上する。
２、プロポフォール脂肪乳剤の刺激性
５匹を１群として、ＳＤラット３０匹を６群に分ける。エーテルで麻酔して、仰向姿勢でラット固定装置に固定し、ラットの右後肢大腿動脈から、０．５ｍＬの投与量で投与して、筋電図レコーダーで記録して筋電図面積を計算する。１％Ｐ−１０％Ｌ−２．２５の筋電図面積を対照に、１％Ｐ−１０％Ｌ−５．０、１％Ｐ−１０％Ｌ−１０．０及び１％Ｐ−１０％Ｌ−１５．０の対応筋電図面積比を計算する。その結果、１％Ｐ−１０％Ｌ−５．０、１％Ｐ−１０％Ｌ−１０．０及び１％Ｐ−１０％Ｌ−１５．０の比はそれぞれ８６．２％、６３．５％及び５１．２％であり、つまり、高濃度グリセリンのプロポフォール乳剤の刺激性は約半分低下する。
グリセリンによりプロポフォールの刺激性を低下する原因としては、グリセリンは水素結合をもってプロポフォールと相互に作用することによってプロポフォールを取り囲み、同時に乳滴の表面にグリセリンが被覆することによってプロポフォール及び乳剤と血管壁の接触を減少させ、又は、プロポフォールとグリセリンの適合性に優れるため、ヒドロキシ基とヒドロキシ基が結合されて、骨格と骨格が結合され、又は、プロポフォールの水中の溶解性が小さいため、製剤が集まって、分子体積を増加して、血管壁との作用を強化させると考えられる。
バイアルとプレフィラブルシリンジ（プラスチック材質）にプロポフォール乳剤を充填して、シェーカーにおいて１０ｒｐｍで１週間振盪し、大粒子ＰＦＡＴ５を測定して、結果を表５２に示す。
明らかに、グリセリンの使用量を増加することにより、プレフィラブルシリンジでの乳剤の物理的安定性を向上させることができ、大粒子の形成を減少させることができる。
実施例８ 凍結融解抵抗性を有するケトプロフェンイソプロピルエステル脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するケトプロフェンイソプロピルエステル脂肪乳剤の製造
プロセス:実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するケトプロフェンイソプロピルエステル脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたケトプロフェンイソプロピルエステル脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、粒径を測定して結果を表５４に示す。
その結果によれば、製造されたケトプロフェンイソプロピルエステル脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するケトプロフェンイソプロピルエステル脂肪乳剤である。
実施例９ 凍結融解抵抗性を有するマロチラート脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するマロチラート脂肪乳剤の製造
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するマロチラート脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたマロチラート脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、１サイクルごとに粒径を測定して、結果を表５６に示す。
その結果によれば、製造されたマロチラート脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するマロチラート脂肪乳剤である。
実施例１０ 凍結融解抵抗性を有するサフラワー油／ＥＰＡ脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するサフラワー油／ＥＰＡ脂肪乳剤の製造
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するサフラワー油／ＥＰＡ脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたサフラワー油／ＥＰＡ脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、粒径を測定して、結果を表５８に示す。
その結果によれば、製造されたサフラワー油／ＥＰＡ脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するサフラワー油／ＥＰＡ脂肪乳剤である。
実施例１１ 低濃度補酵素Ｑ１０脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有する補酵素Ｑ１０脂肪乳剤の製造
市販Ｑ注射剤の規格（１ミリリットルに２．５ｍｇ）に応じて低濃度補酵素Ｑ１０脂肪乳剤を設計し、処方は表５９に示される。
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有する補酵素Ｑ１０脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造された補酵素Ｑ１０脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、粒径を測定して、結果を表６０に示す。
その結果によれば、製造された補酵素Ｑ１０脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する補酵素Ｑ１０脂肪乳剤である。
実施例１２ 薬物担持量の高い補酵素Ｑ１０脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有する薬物担持量の高い補酵素Ｑ１０脂肪乳剤の製造
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有する薬物担持量の高い補酵素Ｑ１０脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造された薬物担持量の高い補酵素Ｑ１０脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、粒径を測定して、結果を表６２に示す。
その結果によれば、製造された薬物担持量の高い補酵素Ｑ１０脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有する薬物担持量の高い補酵素Ｑ１０脂肪乳剤である。
実施例１３ 凍結融解抵抗性を有するガーリックオイル脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するガーリックオイル脂肪乳剤の製造
処方：
ガーリックオイル ０．５ｇ、ＥＰＣ １．３ｇ、ＬＣＴ １５ｇ、グリセリン ７．５ｇ、オレイン酸 ０．１ｇ、水酸化ナトリウム 適量、注射用水 １００ｍＬになるまで添加。
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するガーリックオイル脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたガーリックオイル脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、粒径を測定して、結果を表６３に示す。
その結果によれば、製造されたガーリックオイル脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するガーリックオイル脂肪乳剤である。
実施例１４ 凍結融解抵抗性を有するビタミンＫ１脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するビタミンＫ１脂肪乳剤の製造
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するビタミンＫ１脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたビタミンＫ１脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、粒径を測定して、結果を表６５に示す。
その結果によれば、製造されたビタミンＫ１脂肪乳剤は凍結融解試験に抵抗でき、すなわち凍結融解抵抗性を有するビタミンＫ１脂肪乳剤である。
実施例１５ 凍結融解抵抗性を有するククルビタシンＥ脂肪乳剤の製造及びその凍結融解安定性の考察
１、凍結融解抵抗性を有するククルビタシンＥ脂肪乳剤の製造
プロセス：実施例１のプロセスを参照して行う。
２、凍結融解抵抗性を有するククルビタシンＥ脂肪乳剤の凍結融解安定性の考察
具体的な方法：
製造されたククルビタシンＥ脂肪乳剤を取り、−２０℃で４８ｈ凍結して、次に４０℃の加速条件で４８ｈ放置して１サイクルを完成し、合計で３回サイクルし、１サイクルごとに粒径を測定する。その結果によれば、製造されたククルビタシンＥ脂肪乳剤は３回の凍結融解試験に抵抗でき、粒径が約２２０ｎｍである。
ジヒドロククルビタシンＢなどのククルビタシン系物質は、類似する処方及びプロセスによれば、同じ効果が得られる。
実施例１６ 凍結融解抵抗性を有するクレビジピン脂肪乳剤注射剤
Ｃｌｅｖｉｐｒｅｘ（クレビジピン乳剤、０．５ｍｇ／ｍＬ）の処方組成（ダイズ油２０％、卵黄レシチン１．２％、オレイン酸０．０３％、グリセリン２．２５％及びＥＤＴＡ−２Ｎａ ０．００５％）を参照して、異なるグリセリン含有量を有する乳剤処方を設計し、表６７に示す。
プロセス：
（１）水相の製造：
グリセリンとＥＤＴＡ−２Ｎａを注射用水に加えて溶解し、６０℃に加熱して使用に備える。
（２）油相の製造：
精製ダイズ油を６０℃に加熱して、クレビジピン、ＥＰＣ及びオレイン酸を加え、撹拌して溶解し、使用に備える。
（３）一次エマルションの製造：
ステップ「（２）」を「（１）」に加え、１００００ｒｐｍで高速揃断分散を２０分間行い、一次エマルションを形成する。
（４）高圧均質化：
２００００ｐｓｉの圧力でマイクロフルイダイザーを使用して、一次エマルションを２回高圧均質化し、水酸化ナトリウムでｐＨを８．０に調整する。
（５）濾過及び瓶詰め：
得た乳剤を０．８μｍの微多孔濾過膜で濾過して瓶詰めする。
（６）滅菌：
１２１±１℃で動的滅菌を１０分間行い、クレビジピン注射剤を得る。
ＨＰＬＣ方法（オクタデシルシラン結合シリカを充填剤とし、０．０５ｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素ナトリウム溶液（希リン酸でｐＨ値を４．０に調整する）−アセトニトリル−メタノール（５０：３０：２０）を移動相とし、検出波長を２２０ｎｍにする）によって関連物質を検出し、面積を正規化法によって計算して、結果を表６８に示す。
この表によれば、クレビジピン注射剤の関連物質／分解生成物は、グリセリン使用量の増加と共に低下するが、グリセリン使用量が４０％に達すると、関連物質／分解生成物が増加する。更に、この処方で製造された乳剤は、粘度が高すぎるので、クレビジピン注射剤には集まる傾向があり、かつ濾過が困難であることを見出した。
発明者は、本発明の技術案について例を挙げて詳細に説明したが、当業者であれば、本発明の実質的な主旨を脱逸せずに上記実施例に対する修正及び／又は変化、同等替代形態を使用することができ、本発明に使用される用語は本発明の技術案の説明や理解のために過ぎず、本発明を制限するものではない。
発明者は、本発明の技術案について例を挙げて詳細に説明したが、当業者であれば、本発明の実質的な主旨を脱逸せずに上記実施例に対する修正及び／又は変化、同等替代形態を使用することができ、本発明に使用される用語は本発明の技術案の説明や理解のために過ぎず、本発明を制限するものではない。
本出願は以下の発明の開示を包含する。
［１］高濃度グリセリンが、グリセリンの乳剤組成成分における含有量が３ｗ／ｖ％以上であることを意味することを特徴とする高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
［２］前記高濃度グリセリンの最大使用量が乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％であることを特徴とする［１］に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
［３］前記凍結融解抵抗性を有する乳剤において、油溶液が乳剤の組成成分の総量の２％−３０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリン使用量は乳剤の油量の１／３以上であることを特徴とする［１］に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
［４］前記グリセリン使用量は乳剤成分の総量の５−４０％、好ましくは７．５−３０％、より好ましくは７．５％−１５％であることを特徴とする［１］乃至［３］のいずれかに記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
［５］主な組成成分として、油溶液、グリセリン、リン脂質及び水を含む凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤であって、乳剤の組成成分において前記グリセリンの含有量が３ｗ／ｖ％以上であることを特徴とする脂肪乳剤。
［６］前記グリセリンの最大使用量が乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％であることを特徴とする［５］に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
［７］前記油溶液が乳剤の組成成分の総量の２ｗ／ｖ％−３０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリンの使用量は乳剤の油量の１／３以上であることを特徴とする［５］に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
［８］前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤の組成成分として、前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤のｐＨ値を４．５〜１０．１に調整する使用量のｐＨ調整剤を更に含むことを特徴とする［５］乃至［７］のいずれかに記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
［９］前記乳剤には、デキサメタゾンパルミテート、補酵素Ｑ１０、プロポフォール、アニソール、アサロン、エレメン、クルクミン、タンシノンＩＩＡ、プロスタグランジンＥ１、リマプロスト、ケトプロフェンイソプロピルエステル、マロチラート、ビタミンＫ１、ククルビタシンＥ、ジヒドロククルビタシンＢ、クレビジピンから選ばれる薬物を含むことを特徴とする［５］乃至［７］のいずれかに記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
［１０］乳剤の組成成分において、グリセリンの含有量は４．５％以上、好ましくは５％−４０％、より好ましくは５％−３０％、最も好ましくは５％−２０％であることを特徴とする［９］に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。

Claims (10)

  1. 高濃度グリセリンが、グリセリンの乳剤組成成分における含有量が３ｗ／ｖ％以上であることを意味することを特徴とする高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
  2. 前記高濃度グリセリンの最大使用量が乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項１に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
  3. 前記凍結融解抵抗性を有する乳剤において、油溶液が乳剤の組成成分の総量の２％−３０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリン使用量は乳剤の油量の１／３以上であることを特徴とする請求項１に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
  4. 前記グリセリン使用量は乳剤成分の総量の５−４０％、好ましくは７．５−３０％、より好ましくは７．５％−１５％であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の高濃度グリセリンの凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤における応用。
  5. 主な組成成分として、油溶液、グリセリン、リン脂質及び水を含む凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤であって、乳剤の組成成分において前記グリセリンの含有量が３ｗ／ｖ％以上であることを特徴とする脂肪乳剤。
  6. 前記グリセリンの最大使用量が乳剤の組成成分の総量の５０ｗ／ｖ％であることを特徴とする請求項５に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
  7. 前記油溶液が乳剤の組成成分の総量の２ｗ／ｖ％−３０ｗ／ｖ％を占める場合、グリセリンの使用量は乳剤の油量の１／３以上であることを特徴とする請求項５に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
  8. 前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤の組成成分として、前記凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤のｐＨ値を４．５〜１０．１に調整する使用量のｐＨ調整剤を更に含むことを特徴とする請求項５乃至７のいずれか１項に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
  9. 前記乳剤には、デキサメタゾンパルミテート、補酵素Ｑ１０、プロポフォール、アニソール、アサロン、エレメン、クルクミン、タンシノンＩＩＡ、プロスタグランジンＥ１、リマプロスト、ケトプロフェンイソプロピルエステル、マロチラート、ビタミンＫ１、ククルビタシンＥ、ジヒドロククルビタシンＢ、クレビジピンから選ばれる薬物を含むことを特徴とする請求項５乃至７のいずれか１項に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
  10. 乳剤の組成成分において、グリセリンの含有量は４．５％以上、好ましくは５％−４０％、より好ましくは５％−３０％、最も好ましくは５％−２０％であることを特徴とする請求項９に記載の凍結融解抵抗性を有する脂肪乳剤。
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