JP2017505620A5

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Publication number: JP2017505620A5
Application number: JP2016549077A
Authority: JP
Filing date: 2014-12-11
Publication date: 2017-11-30
Anticipated expiration: 2034-12-11

Claims

哺乳類細胞培養により産生される組換えタンパク質の高マンノース型グリコフォーム含量を低減させる方法であって、
Ｎ−グリコシル化経路に関与するタンパク質を過剰発現するように哺乳類宿主細胞をトランスフェクトすることと、ここで、前記Ｎ−グリコシル化経路に関与する前記タンパク質は、Ｎ−アセチル−グルコサミン転移酵素−１（Ｍｇａｔ１によりコードされる）；Ｎ−アセチル−グルコサミン転移酵素−２（Ｍｇａｔ２によりコードされる）；Ｓｌｃ３５ａ２によりコードされるＵＤＰ−ガラクトース輸送体；及びそれらの組み合わせからなる群より選択され、
前記哺乳類宿主細胞を培養して、哺乳類細胞培養を確立することと
を含み、
前記哺乳類宿主細胞は、少なくとも１つの組換えタンパク質を発現し、
前記組換えタンパク質の前記高マンノース型グリコフォーム含量は、Ｎ−グリコシル化経路に関与するタンパク質を過剰発現するようにトランスフェクトされる前の前記哺乳類宿主細胞により産生される前記組換えタンパク質と比較して、低減されており、
前記組換えタンパク質の前記高マンノース型グリコフォーム含量は、１０％以下である、方法。
前記Ｎ−グリコシル化経路に関与する２つ以上のタンパク質を発現するように前記哺乳類宿主細胞をトランスフェクトし、前記タンパク質が、Ｍｇａｔ１及びＭｇａｔ２；Ｍｇａｔ１及びＳｌｃ３５ａ２；Ｍｇａｔ２及びＳｌｃ３５ａ２；及びＭｇａｔ１、Ｍｇａｔ２及びＳｌｃ３５ａ２からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
前記哺乳類宿主細胞が、Ｍｇａｔ１及びＭｇａｔ２を発現するようトランスフェクトされている、請求項１又は２に記載の方法。
前記哺乳類宿主細胞が組換えタンパク質を発現するように予めトランスフェクトされており、Ｎ−グリコシル化経路に関与するタンパク質を発現するようにその後トランスフェクトされる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
前記哺乳類宿主細胞が最初にＮ−グリコシル化経路に関与するタンパク質でトランスフェクトされ、その後組換えタンパク質を発現するようにトランスフェクトされる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えタンパク質が、抗体Ｆｃ領域を含むタンパク質である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
前記組換えタンパク質が、Ｆｃ融合タンパク質、抗体、免疫グロブリン、及びペプチボディー（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）からなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
Ｎ結合型グリコシル化に関与するタンパク質を過剰発現するようにトランスフェクトされている前記細胞内で発現される前記組換えタンパク質の高マンノース型グリコフォーム含量が、Ｎ結合型グリコシル化に関与するタンパク質を過剰発現するようにトランスフェクトされる前の前記哺乳類宿主細胞により産生される組換えタンパク質の高マンノース型グリコフォーム含量と比較して低減されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
前記高マンノース型グリカン種が、マンノース５（Ｍａｎ５）；マンノース６（Ｍａｎ６）；マンノース７（Ｍａｎ７）；マンノース８（マンノース８ａ及び８ｂ（Ｍａｎ８ａ及び８ｂ）を含む）；Ｍａｎ８ａ及び８ｂ、及びマンノース９（Ｍａｎ９）；又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
前記組換えタンパク質の前記高マンノース型グリコフォーム含量が、５％以下である、請求項８又は９に記載の方法。
前記哺乳類細胞培養が、流加培養、灌流培養、又はそれらの組み合わせである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
前記培養が、交互接線流（ＡＴＦ）を用いて灌流される、請求項１１に記載の方法。
灌流が前記細胞培養の１日目又はその前後から９日目又はその前後に開始される、請求項１２に記載の方法。
灌流が前記細胞培養の３日目又はその前後から７日目又はその前後に開始される、請求項１２に記載の方法。
前記細胞が産生期に達したときに灌流が開始される、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
灌流が限外濾過膜又は精密濾過膜を用いる交互接線流により達成される、請求項１５に記載の方法。
前記細胞培養が流加により維持される、請求項１１に記載の方法。
前記培養が産生中に３回供給を受ける、請求項１７に記載の方法。
前記培養が、２日目と４日目の間の日、５日目と７日目の間の日、及び８日目と１０日目の間の日に供給を受ける、請求項１８に記載の方法。
前記培養が産生中に４回供給を受ける、請求項１７に記載の方法。
前記培養が、２日目と４日目の間の日、５日目と６日目の間の日、７日目と８日目の間の日、及び８日目と１０日目の間又はそれ以降に供給を受ける、請求項２０に記載の方法。
前記哺乳類細胞培養が、無血清培養培地中、少なくとも０．５×１０^６から３．０×１０^６細胞／ｍＬで前記バイオリアクターに播種することにより確立される、請求項１２〜２１のいずれか１項に記載の方法。
前記哺乳類細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
前記方法が、前記組換えタンパク質を回収することをさらに含む、請求項１２〜２３のいずれか１項に記載の方法。
前記回収された組換えタンパク質が精製され、医薬的に許容され得る製剤に製剤化される、請求項２４に記載の方法。
請求項２５に記載の方法により作成された組成物。
請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法により作成された組換えタンパク質。