JP2017501999A - Ｃｄ２８を介したシグナル伝達を阻害する短ペプチドによる炎症性疾病の症候の軽減 - Google Patents

Abstract

本開示は、必要としている対象における非病原体関連炎症性疾患の治療方法において、Ｔ細胞共刺激経路成員、特にＴ細胞共刺激経路成員ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４の二量体界面内部で１つのアミノ酸配列に特異的に結合する単離ペプチドを投与することを含む方法に関する。本開示は同様に、該単離ペプチドを含む医薬組成物ならびに非病原体関連炎症性疾患の治療における該ペプチドの使用にも関する。

Description

本開示は、概して、炎症性疾病及びそれに付随する症候を治療する方法に関する。詳細には、本開示は、ＣＤ２８を介したシグナル伝達を阻害する短ペプチドの使用に関する。

ここで開示する主題の背景として関連性あるとみなされる参考文献を以下に列挙する：
［１］ Ｆｒａｎｃｏｉｓ Ａ，Ｍｉｌｌｉａｔ Ｆ，Ｇｕｉｐａｕｄ Ｏ，Ｂｅｎｄｅｒｉｔｔｅｒ Ｍ， Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｄａｍａｇｅ ｔｏ ｔｈｅ ｇｕｔ ｍｕｃｏｓａ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ Ｉｎｔ．；２０１３：１２３２４１．
［２］ Ａｒａｄ Ｇ，Ｌｅｖｙ Ｒ，Ｈｉｌｌｍａｎ Ｄ，Ｋａｅｍｐｆｅｒ Ｒ． Ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｌｅｔｈａｌ ｓｈｏｃｋ ａｎｄ ｄｅｆｉｎｅｓ ａ ｎｅｗ ｄｏｍａｉｎ ｆｏｒ Ｔ−ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０００；６：４１４−２１．
［３］ Ａｒａｄ Ｇ，Ｌｅｖｙ Ｒ，Ｎａｓｉｅ Ｉ，Ｈｉｌｌｍａｎ Ｄ，Ｒｏｔｆｏｇｅｌ Ｚ，Ｂａｒａｓｈ Ｕ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ Ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ Ｔｏｘｉｎｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＣＤ２８ Ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｉｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈａｔ Ｍｅｄｉａｔｅ Ｌｅｔｈａｌ Ｓｈｏｃｋ．ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ．２０１１．ｐａｇｅ ｅｌ００１１４９．
［４］ Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ Ｇ，Ｔｕｌａｐｕｒｋａｒ ＭＥ，Ｈａｒｒｉｓ ＫＭ，Ａｒａｄ Ｇ，Ｓｈｉｒｖａｎ Ａ，Ｓｈｅｍｅｓｈ Ｒ，ｅｔ ａｌ． Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ＣＤ２８ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｔｏｘｉｃ ｓｈｏｃｋ ａｎｄ ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｓｏｆｔ−ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１３；２０７：１８６９−７７．
［５］ Ｋａｅｍｐｆｅｒ Ｒ，Ａｒａｄ Ｇ，Ｌｅｖｙ Ｒ，Ｈｉｌｌｍａｎ Ｄ，Ｎａｓｉｅ Ｉ，Ｒｏｔｆｏｇｅｌ Ｚ． ＣＤ２８：Ｄｉｒｅｃｔ ａｎｄ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ Ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ Ｔｏｘｉｎｓ． Ｔｏｘｉｎｓ（Ｂａｓｅｌ）．２０１３；５：１５３１−４２．
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［７］ Ｂｕｌｇｅｒ Ｅ，Ｍａｉｅｒ Ｒ，Ｓｐｅｒｒｙ Ｊ，Ｊｏｓｈｉ Ｍ，Ｈｅｎｒｙ Ｓ，Ｍｏｏｒｅ ＦＡ，ｅｔ ａｌ． Ａ ｎｏｖｅｌ ｄｒｕｇ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ Ｐｈａｓｅ ２ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ＡＢ１０３，ａ ＣＤ２８ ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．ＪＡＭＡ Ｊ Ａｍ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ Ｓｕｒｇ．２０１４；１４９，５２８−５３６．
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［９］ Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ Ｍ，Ｇｉｅｎａｐｐ ＩＥ，Ｓｔｕｃｋｍａｎ ＳＳ，Ｒｏｇｅｒｓ ＣＪ，Ｊｅｗｅｌｌ ＳＤ，Ｋａｕｍａｙａ ＰＴ，Ｗｈｉｔａｃｒｅ ＣＣ．（２００２） Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｕｓｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｉｃｓ ｏｆ ＣＤ２８．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：２１８０−２１８８．
［１０］ Ｋａｐｓｏｇｅｏｒｇｏｕ，Ｅ．Ｋ．，Ｍｏｕｔｓｏｐｏｕｌｏｓ，Ｈ．Ｍ． ＆ Ｍａｎｏｕｓｓａｋｉｓ，Ｍ．Ｎ． Ａ ｎｏｖｅｌ Ｂ７−２（ＣＤ８６） ｓｐｌｉｃｅ ｖａｒｉａｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｒｏｌｅ． Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０，３８１５−３８２３（２００８）．
［１１］ Ｅｖａｎｓ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎ（２００５） ６：２７１−２７９．
［１２］ Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＪＣ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ（２２０１）４１０：６０４−６０８

本明細書中における上述の参考文献の承認は、ここで開示される主題の特許性について、これらの参考文献が何らかの形で関連性を有することを意味するものとして推測されるべきではない。

炎症は、細胞傷害の初期原因ならびに原初の損傷原因の結果としてもたらされる壊死細胞及び組織を除去し、修復プロセスを開始するように意図された防御応答である。慢性炎症は、多くの疾病を導く可能性があり、したがって通常は、密に調節される。

リウマチ性関節炎（ＲＡ）及び多発性硬化症（ＭＳ）などの慢性炎症性疾病は、Ｔｈ１サイトカインが重要な役割を果たす異常サイトカイン発現パターンと関連する。これらの中でも、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及びインターロイキン−２（ＩＬ２）は、その免疫増強及び免疫調節作用において相乗効果を示し、炎症性疾病の症候に寄与する。

詳細には、電離放射線（ＩＲ）に対する曝露は、炎症性反応及び免疫系の不均衡の両方を促進する。放射線誘発性急性炎症性応答は、多数の炎症促進性サイトカインを活性化し、抗炎症性サイトカインを阻害することが示されてきた。こうして、サイトカインは多くの場合、ＩＲの効果を調節するために使用される。

放射線照射後に発生する過剰な胃腸（ＧＩ）炎症性応答は、ＩＲにより誘発される多臓器不全の促進要因の１つとみなされている（２、３）。例えば、肺傷害は、ＧＩ照射傷害の未照射部位への作用であるかもしれない。したがって、特にＧＩ管内の放射線誘発性炎症性応答を調節することは、照射を受けた体の他の部分に対しても有意な効果を有するかもしれない。

炎症性サイトカインシグナルは、抗原提示に依存するばかりでなく、分化クラスター２８（ＣＤ２８）が主要な機能を有する共刺激シグナル伝達に全面的に左右される。

ＣＤ２８抗原は、Ｔ細胞上で発現され、Ｔ細胞の活性ならびに末梢血Ｔ細胞の存続及び増殖のために必要とされる。ＣＤ２８を通した刺激は、共に組織傷害の進行に関与するＩＬ−６及びフィブリノゲンを含めた多数の炎症促進性メディエータの産生のためにＴ細胞に対し強力な共刺激性シグナルを提供することができる。短ペプチドは、スーパー抗原毒素により誘発されたＣＤ２８シグナル伝達（２、３及び８）または連鎖球菌感染（４）を防止できることが報告されてきた。具体的には、上述の短ペプチド、すなわちペプチドｐ２ＴＡの一成員であるＣＤ２８ホモ二量体のオクタペプチド模倣体が、生体内でスーパー抗原によるＣＤ２８の係合を妨げ、こうして、過剰炎症性応答によりひき起こされる致死的毒素ショックに対する防御を導くＴ細胞の活性化を回避させることが示されてきた（３、５）。同時に、ｐ２ＴＡは、Ｔｈ２サイトカインベースの体液性免疫応答を無傷の状態で残す（３、４）

本開示は、非病原体関連炎症性疾患の治療方法において使用するための、ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対し特異的に結合する単離ペプチド及びその官能的フラグメント及び誘導体、またはそれを含む医薬組成物を提供する。

前記単離ペプチドは、３０ミクロモルより低いＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる、ＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に対する結合親和力を有する。

前記単離ペプチドは、炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つのもののレベル低下及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害する。

前記単離ペプチドは、ヒトＣＤ２８（配列番号１）内またはヒトＣＴＬＡ４（配列番号２）内の６〜１４個の連続アミノ酸残基の領域に対応するアミノ酸配列を有することができ、この領域はヒトＣＤ２８またはヒトＣＴＬＡ４の結晶学的ホモ二量体界面の１つ以上のアミノ酸残基を内部に有し、前記ペプチド及びそのフラグメント及び官能的誘導体は、３０ミクロモルより低いＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる結合親和力で前記ＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に結合し、かつ炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つのもののレベル低下及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害する能力を維持する。ヒトＣＤ２８の前記領域は、配列番号１のアミノ酸残基１０〜１５または１１６〜１２１を含み、ＣＴＬＡ４の前記領域は配列番号２のアミノ酸残基１０〜１５及び１１５〜１２０を含む。

本開示に係る具体的に開示されたペプチドは、アミノ酸配列Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｐｒｏ（配列番号３と表示）、Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ（配列番号４と表示）、Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｖａｌ（配列番号５と表示）、Ｔｙｒ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｔｙｒ（配列番号６と表示）、Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ（配列番号７と表示）、Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｐｒｏ（配列番号８と表示）、Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ（配列番号９と表示）及びそれらの官能的誘導体からなるペプチドである。

同様に開示されているのは、アミノ酸配列Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ（配列番号１０と表示）、Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ（配列番号１１と表示）、Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ（配列番号１２と表示）、Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｉｌｅ（配列番号１４と表示）及びＴｒｐ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ（配列番号１３と表示）及びその任意の官能的誘導体からなる群から選択されるペプチドである。

具体的な一実施形態において、単離ペプチドは、配列番号４で表示されるアミノ酸配列Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐまたは配列番号４７で表示されるアミノ酸配列（Ｄ−Ａｌａ）Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ（Ｄ−Ａｌａ）を含む。

別の具体的実施形態において、前記ペプチドは、アミノ酸配列Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ（配列番号９と表示）、（Ｄ−Ａｌａ）ＰＡＶＶＬＡＳＳ（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４８と表示）及び（パルミトイル−リシン）Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号５０と表示）を含む。

本開示に係るさらなるペプチドは、アミノ酸配列Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ（配列番号１２と表示）、アミノ酸配列（Ｄ−Ａｌａ）Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４９と表示）及びアミノ酸配列（パルミトイル−リシン）Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｄ−Ａｌａ）（配列番号５１と表示）を含む。

本開示の全ての態様及び実施形態において、本開示に係るペプチドまたはそれを含む医薬組成物によって治療すべき前記炎症性疾患は、放射線誘発性炎症、炎症性大腸炎（ＩＢＤ）、放射線誘発性胃腸炎、薬剤誘発性炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、多発性硬化症、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、鼻炎、特発性肺線維症、腹膜炎、心血管炎症、心筋虚血、再灌流傷害、アテローム性動脈硬化症、心的外傷、２型糖尿病、網膜症、乾癬、胃腸炎、肝硬変、虫垂炎、滑液包炎、結膜炎、膀胱炎、皮膚炎、静脈炎、脈管炎、尋常性座瘡、及び骨盤内炎症性疾病のいずれか一つである。

より具体的には、前記薬剤誘発性炎症は、薬剤誘発性肝炎、薬剤誘発性眼炎、薬剤誘発性胃腸障害、薬剤誘発性急性潰瘍、薬剤誘発性腎不全、薬剤誘発性膵炎、薬剤誘発性腎炎、胃腸管内の化学療法誘発性炎症、及び脂漏性角化症のいずれか一つである。

具体的な一実施形態において、前記炎症性疾病または身体条件は、全身性及び／または照射部位におけるものであり得る放射線誘発性炎症である。前記放射線誘発性炎症は、胃腸管及び脾臓の炎症のうちの少なくとも１つに関連するものであり得る。

さらなる実施形態において、本開示は、放射線誘発性炎症の治療方法において使用するための、ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対し特異的に結合する単離ペプチド、または前記単離ペプチドを含む医薬組成物を提供する。

本発明の全ての態様及び実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、静脈内、筋内または腹腔内投与、髄腔内または皮下注入、経口、直腸内、経鼻、眼内及び局所投与からなる群から選択された経路で投与することができる。

本開示の全ての態様及び実施形態において、単離ペプチドは、それを必要としている対象の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約５．０ｍｇの量で投与することができる。

本開示の全ての態様及び実施形態において、前記単離ペプチドまたはそれを含む医薬組成物は、単離ペプチドを１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回という割合で１、２、３または４週という１つ以上の同一のまたは異なる治療期間で投与され、ここで前記治療期間は連続的であるかまたは、１日または数日または１週または数週または１カ月以上の非治療間隔により互いに離隔されている。単離ペプチドまたは医薬組成物は、単一用量で投与することができる。

本開示の全ての態様及び実施形態において、前記投与は、治療上有効な量の単離ペプチドを１日一回という割合で、１、２、３または４週の１つ以上の治療期間で行なうことができる。

ここで開示されている主題の実施形態において、前記単離ペプチドまたは医薬組成物は長期投与向けである。

本開示のさまざまな態様及び実施形態において、前記単離ペプチドまたはそれを含む医薬組成物は、１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回投与され得る。

放射線誘発性炎症の治療の実施形態において、前記単離ペプチドまたは医薬組成物は、照射から好適な時間だけ前及び／または後に投与することができる。したがって、前記単離ペプチドまたは医薬組成物は、放射線療法による治療の直後または、対象がなおも放射線療法を受けている間であるかまたは放射線療法による２回の治療の間またはその後にあるかに関わらず放射線療法から約３０分乃至は放射線誘発性炎症が持続している任意の時間以内に、それを必要としている対象に対して投与される。前記単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記放射線に対する曝露から約３０分後乃至は約６０分または９０分後、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、３６、４８、６０または７２時間後、４、５、６、７、１４、３２または２８日後に、それを必要としている対象に対して投与することができる。前記単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記放射線に対する曝露後２４時間以内に前記対象に対して投与することができる。

本開示のさまざまな態様または実施形態においては、前記単離ペプチドまたはそれを含む医薬組成物を、少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質と組合せて投与することができる。さまざまな実施形態において、前記追加の治療上活性な作用物質はステロイド、非ステロイド性抗炎症剤または免疫抑制剤であり得る。前記単離ペプチドまたはそれを含む医薬組成物及び前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は、同時にまたは異なる時点で、同一のまたは異なる頻度で投与することができる。例えば、前記単離ペプチドまたはそれを含む医薬組成物は、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質の投与に先立ってかまたはその後に投与することができる。さらに、前記単離ペプチドまたはそれを含む医薬組成物及び前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は、異なる継続時間で投与することができる。

例えばリウマチ性関節炎などの治療に関係する実施形態において、前記追加の治療上活性な作用物質はアバタセプト、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１ブロッカー、ＩＬ−６ブロッカー、及び抗ＣＤ２０剤またはこれらの組合せのいずれか１つであり得る。

例えば多発性硬化症などの治療に関係する実施形態において、前記追加の治療上活性な作用物質は、インターフェロンβ、コパキソン及びタイサブリまたはそれらの組合せであり得る。

例えば放射線誘発性胃腸炎などの治療に関係する実施形態において、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は化学療法剤であり得る。

本明細書中で開示されている主題をより良く理解し、実際にそれをいかに実施してよいかを例示する目的で、ここで、添付図面を参照しながら単に非限定的例として実施形態を説明する。

ペプチドは、ＣＤ３を介したシグナル伝達を阻害しない。αＣＤ３単独（○）かまたは１０μｇ／ｍｌの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（▲）、ｐ２ＴＢ（■）、またはｐｅｌ２（●）の存在下でαＣＤ３を用いて誘発されたヒトＰＢＭＣについての指示されたサイトカインのレベルを示すグラフ。指示された時点において、培地内に分泌されたＩＬ２（図１Ａ）及びＴＮＦ−α（図１Ｂ）のレベルを、ＥＬＩＳＡにより決定した（平均＋ＳＥＭ）。 ペプチドは、ＣＤ２８を介したシグナル伝達を阻害する。αＣＤ３（Ａ）またはαＣＤ３／αＣＤ２８（Ｂ〜Ｄ）単独（○）かまたは１０μｇ／ｍｌの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（▲）、ｐ２ＴＢ（■）、またはｐｅｌ２（●）の存在下でαＣＤ３（Ａ）またはαＣＤ３／αＣＤ２８（Ｂ〜Ｄ）を用いて誘発されたヒトＰＢＭＣについての指示されたサイトカインのレベルを示すグラフ。指示された時点において、培地内に分泌されたＩＦＮ−γ（図２Ａ、図２Ｂ）ＩＬ２（図２Ｃ）及びＴＮＦ−α（図２Ｄ）のレベルを、ＥＬＩＳＡにより決定した（平均±ＳＥＭ）。 ペプチドは、有意なＴｈ１サイトカイン応答を誘発しない。１０μｇ／ｍｌの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（▲）、ｐ２ＴＢ（■）、またはｐｅｌ２（●）と共に培養されたヒトＰＢＭＣについての指示されたサイトカインのレベルを示すグラフ。図示されている指示された時点において、培地内に分泌されたＩＦＮ−γ（図３Ａ）、ＩＬ２（図３Ｂ）及びＴＮＦ−α（図３Ｃ）のレベルを、ＥＬＩＳＡにより決定した。 ＣＤ２８に対するペプチドの結合。固定化した（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（７００共鳴単位（ｒＵ）、図４Ａ）、ｐ２ＴＢ（６００ｒＵ、図４Ｂ）及びｐｅｌ２（１．２６０ｒＵ、図４Ｃ）に対するＣＤ２８−Ｆｃの結合についての代表的ＳＰＲ応答を示すグラフ。被分析物濃度は、０．２μＭ（図４Ａ、図４Ｂ）及び０．１２５μＭ（図４Ｃ）から２倍増分で増大した。 ペプチドはＩｇＧに有意に結合しない。固定化したｐ２ＴＡ（図５Ａ）、ｐ２ＴＢ（図５Ｂ）及びｐｅｌ２（図５Ｃ）に対するヒトＩｇＧの結合についての代表的ＳＰＲ応答を示すグラフ。被分析物濃度は、０．２μＭ（図５Ａ、図５Ｂ）及び０．１２５μＭ（図５Ｃ）から２倍増分で増大した。 ＣＤ２８二量体界面模倣体ペプチドｐ２ＴＡは、共刺激性レセプタＢ７−２とＣＤ２８の間のシナプス形成を阻害する。 図６Ａ：細胞表面ＣＤ２８に対するＢ７−２の結合に対するｐ２ＴＡの効果。（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）の不在下または指示された濃度での存在下で可溶性Ｂ７−２と共にインキュベートされた細胞表面ＣＤ２８または空ベクター（ＥＶ）を発現するためにトランスフェクションを受けたＨＥＫ２９３Ｔ細胞のウェスタンブロット分析（上の図版）及びその定量化（下の棒グラフ）（エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ．：ｎ＝３）。右の図版は、実験的設計の図式的概要である。 図６Ｂ：細胞表面Ｂ７−２に対するＣＤ２８の結合に対するｐ２ＴＡの効果。ｐ２ＴＡの不在下または指示された濃度での存在下で可溶性ＣＤ２８と共にインキュベートされた細胞表面Ｂ７−２または空ベクターを発現するためにトランスフェクションを受けたＨＥＫ２９３Ｔ細胞のウェスタンブロット分析（上の図版）及びその定量化（下の棒グラフ）（エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ．：ｎ＝３）。右の図版は、実験的設計の図式的概要である。 図６Ｃ：ｐ２ＴＡは細胞間Ｂ７−２／ＣＤ２８シナプス形成を減衰させる。（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）の不在下または指示された濃度での存在下で、Ｂ７−２／Ｃｈｅｒｒｙ融合タンパク質を発現するためにトランスフェクションを受けたＨＥＫ２９３Ｔ細胞（赤色標識）と共にインキュベートされたＣＤ２８／ＧＦＰ融合タンパク質を発現するためにトランスフェクションを受けたＨＥＫ２９３Ｔ細胞（緑色標識）を用いて実施された検定において、２重標識された細胞の百分率を定量化するためにフローサイトメトリーを使用して評定された細胞間Ｂ７−２／ＣＤ２８シナプス形成を示す棒グラフ（エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ．ｎ＝３）。ＣＤ２８を結合する能力が欠如した負の対照としてＢ７−２Ｃ／Ｃｈｅｒｒｙが役立った。右の図版は、実験的設計の図式的概要である。 図６Ｄ〜Ｈ：代表的実験のための輪郭プロット。図６Ｃにおいて、Ｂ７−２／Ｃｈｅｒｒｙ（ｄ−ｇ）またはＢ７−２Ｃ／Ｃｈｅｒｒｙ（ｈ）を発現する細胞を伴うＣＤ２８／ＧＦＰを発現する細胞のインキュベーションの時点。インキュベーションは、ｐ２ＴＡの不在下（ｄ、ｈ）または、０．１（ｅ）、０．３（ｆ）または１μｇｍｌ^−１（ｇ）のｐ２ＴＡの存在下であった。右上象眼内に２重標識された細胞の百分率が示されている。 ｐ２ＴＡ配列のランダムスクランブリングが、Ｂ７−２／ＣＤ２８相互作用を阻害するその能力を無効にする。細胞表面Ｂ７−２を発現するためにトランスフェクションを受け、指示された濃度の（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）またはそのスクランブルされた形態ｐ２ＴＡｓｃ（（Ｄ−Ａ）ＡＳＭＤＹＰＶＬ（Ｄ−Ａ））の不在下または存在下で可溶性ＣＤ２８と共にインキュベートされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞のウェスタンブロット分析。細胞によるＣＤ２８の結合を示すために、同量の合計タンパク質（ブラッドフォード検定）を１０％のＰＡＧＥ及びウェスタンブロット法に付した。 ペプチドは、アジュバント関節炎の症候を軽減する。ラット（１グループあたりｎ＝５）において誘発された関節炎の関節炎スコアを示すグラフ。症候を１０日目から観測し、４本の脚上の１６の関節を評定した（■）。１０〜１５日目の間毎日、デキサメタゾン（ＤＥＸＡ）を注入した。１日目から１５日目までの毎日、ＰＢＳ（△）、１００μｇの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（●）（図８Ａ）またはｐｅｌ２（▲）（図８Ｂ）を注入した。治療を１５日目に終結し、症候を２９日目まで監視した（平均±ＳＥＭ）。（^*）Ｐ＜０．００１。（^**）Ｐ＝０．００４、ペプチドと未治療グループの間の差異。 ｐ２ＴＡの薬物動態。指示された時点におけるｐ２ＴＡの変動を示すグラフ。ゼロ時点でペプチド（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）を静脈内（ＩＶ）注入した；その後の時点で、マウス（ｎ＝３）を屠殺し、質量分析検出を伴う逆相液体クロマトグラフィーにより、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）の血清レベルを決定した。平均レベルが示されている。 ペプチドはコラーゲン誘発性関節炎の症候を軽減する。０日目及び２１日目に完全フロインドアジュバント中のウシＩＩ型コラーゲンを注入することによりマウス（１グループあたりｎ＝１０）において誘発された関節炎の関節炎スコアを示すグラフ。２５日目から症候を観察し、４本の脚の１６の関節を評定し（■）（平均±ＳＥＭ）、発病から毎日（２５〜３４日目）注入される１００μｇのデキサメタゾン（□）、ＰＢＳ（△）または１０μｇのｐ２ＴＡ（▲）によってかまたは、２５日目から始めて３日に一回注入される１００μｇのｐ２ＴＢ（●）またはｐ２ＴＢ−ｐａｌ（○）により、マウスを治療した。２５〜３５日目について、値が示されている（平均±ＳＥＭ）。（^*）Ｐ＜０．００１。（^**）Ｐ＝０．０１５、ペプチドと未治療グループの間の差異（図１０Ａ）。代替的には、発病から２日に一回注入される１００μｇのデキサメタゾン（□）；発病から３日に一回注入されるＰＢＳ（△）または１５０μｇのｐｅｌ２−ｐａｌ（●）；または発病から５日に一回注入される２００μｇのｐｅｌ２−ｐａｌ（▲）により、マウスを治療した（図１０Ｂ）。２５〜３５日目について値が示されている（平均±ＳＥＭ）。（^*）Ｐ＝０．００２、（^**）Ｐ＝０．０１２、ペプチドと未治療グループの間の差異。 ペプチドは、実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）の症候を軽減する。ＥＡＥを誘発させたマウスにおける脳炎スコアを示すグラフ。１０日目から症候を観察した（■）（平均±ＳＥＭ）。１日目から、以下の管理体制に従って、２０μｇ／ｋｇのソルメドロール（□）、ＰＢＳ（△）またはペプチドを注入した。 図１１Ａ：５０□ｇのｐ２ＴＢ（▲）または１００μｇのｐｅｌ２−ｐａｌ（●）の毎日の注入に付されたマウスについての脳炎スコアを示す。（^*）Ｐ≦０．００１、ペプチドと未治療グループの間の差異。 図１１−Ｂ〜Ｄ：５０μｇのｐ２ＴＢ（●）（図１１Ｂ）、１０μｇのｐ２ＴＢ−ｐａｌ（●）または５０μｇのｐ２ＴＢ−ｐａｌ（▲）（図１１Ｃ）または１００μｇのｐｅｌ２−ｐａｌ（●）（図１１Ｄ）を毎日注入したマウスについての脳炎スコアを示す。１００μｇｐ２ＴＢ（▲）（図１１Ｂ）、１００μｇのｐ２ＴＢ−ｐａｌ（◆）（図１１Ｃ）または１５０μｇのｐｅｌ２−ｐａｌ（▲）（図１１Ｄ）を３日に一回注入したマウスについての脳炎スコア。１０〜３２日目について、値が示されている（平均±ＳＥＭ）。（^*）Ｐ≦０．００３、（^**）Ｐ＝０．００７、（^***）Ｐ≦０．０１５、ペプチドと未治療グループの間の差異。 全身性炎症メディエータに対するｐ２ＴＡペプチドの効果。照射後７日目にマウスの体内で測定したＩＬ−６（図１２Ａ）またはフィブリノゲン（図１２Ｂ）の血漿レベルの棒グラフが示されている。略語：Ｃ、偽照射マウス；Ｐ、５ｍｇ／ｋｇのｐ（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを受けた偽照射マウス；Ｒ、８Ｇｙ照射マウス；ＲＰ、照射から２４時間後に５ｍｇ／ｋｇのｐ２ＴＡペプチドを受けた８Ｇｙ照射マウス。棒は、４〜５匹のマウスの平均＋ＳＥＭを表わす。アスタリスク（^*）は、ＲとＲＰグループの間の統計的に有意な差異を意味する（Ｐ＜０．０５）。 空腸陰窩に対するｐ２ＴＡペプチドの効果。照射から７日目にマウスから収集され、パラフィン内に包埋され、定着され、ヘマトキシリン及びエオシンで断面を染色することによって処理された空腸組織内で測定した、存続する陰窩（図１３Ａ）及び絨毛高（図１３Ｂ）の数を示す棒グラフ。棒は、各マウス及び各グループ内の４〜５匹のマウスについての４つの断面の平均＋ＳＥＭを表わす。アスタリスク（^*）は、ＲとＲＰグループの間の統計的に有意な差異を意味する（Ｐ＜０．０５）。 マウスの腸内の空腸陰窩におけるサイクリンＤ１発現に対するｐ２ＴＡペプチドの効果。照射から７日後にＢＡＬＢ／ｃ（図１４Ａ〜図１４Ｄ）及びＡ／Ｊ（図１４Ｅ〜図１４Ｈ）マウスから収集され、パラフィン内で包埋され、定着され、ヘマトキシリン及びエオシンで断面を染色することにより処理された空腸組織を示す顕微鏡写真。略語：Ｃ、偽照射マウス；Ｐ、５ｍｇ／ｋｇのｐ（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを受けた偽照射マウス；Ｒ、８Ｇｙ照射マウス；ＲＰ、照射から２４時間後に５ｍｇ／ｋｇのｐ２ＴＡペプチドを受けた８Ｇｙ照射マウス。 空腸組織の免疫組織化学。ＣＯＸ−２抗体で免疫染色された空腸組織由来の断面が示されている。照射から７日後にＢＡＬＢ／ｃ（図１５Ａ〜図１５Ｄ）及びＡ／Ｊ（図１５Ｅ〜図１５Ｈ）マウスから、組織を収集し、免疫組織化学染色のため、パラフィン内に包埋した。略語：Ｃ、偽照射マウス；Ｐ、５ｍｇ／ｋｇの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを受けたマウス；Ｒ、８Ｇｙ照射マウス；ＲＰ、照射から２４時間後に５ｍｇ／ｋｇのｐ２ＴＡペプチドを受けた８Ｇｙ照射マウス。 脾臓組織の免疫組織化学。ＣＯＸ−２抗体で免疫染色された脾臓組織由来の断面が示されている。照射から７日後にＢＡＬＢ／ｃ（図１６Ａ〜図１６Ｄ）及びＡ／Ｊ（図１６Ｅ〜図１６Ｈ）マウスから、組織を収集し、免疫組織化学染色のため、パラフィン内に包埋した。略語：Ｃ、偽照射マウス；Ｐ、５ｍｇ／ｋｇの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを受けたマウス；Ｒ、８Ｇｙ照射マウス；ＲＰ、照射から２４時間後に５ｍｇ／ｋｇのｐ２ＴＡペプチドを受けた８Ｇｙ照射マウス。 マウスの空腸内の活性化されたマクロファージマーカーＦ４／８０の免疫組織学。空腸組織内の１ｍｍ^２あたりのＦ４／８０陽性細胞を示す棒図表。略語：Ｃ、偽照射マウス；Ｐ、５ｍｇ／ｋｇの（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを受けたマウス；Ｒ、８Ｇｙ照射マウス；ＲＰ、照射から２４時間後に５ｍｇ／ｋｇのｐ２ＴＡペプチドを受けた８Ｇｙ照射マウス。棒は、各グループ内のマウスの組織切片についての平均ＳＥＭを表わす。^*Ｒ及びＲＰグループ間の統計的に有意な差異（Ｐ＜０．０５）。

本開示は、高い結合親和力で共刺激レセプタＣＤ２８のホモ二量体界面に特異的に結合できる例えば長さが約８アミノ酸残基である短ペプチドが、ＣＤ２８を介したシグナル伝達を阻害することができかつアジュバント関節炎及びコラーゲン誘発性関節炎から実験的自己免疫性脳炎に至るまでのさまざまな動物モデルにおける炎症性疾病の症候を軽減するという発見事実に基づいている。これらのペプチドは概して、［例えばＥｖａｎｏら、（１１）の図２中（薄青色残基）及びＡｒａｄら、２０１１（３）の図４Ａ中（青色残基）に記載の通りの］ホモ二量体接点を形成する残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を内部に含むＣＤ２８のアミノ酸配列内の領域から誘導される。ホモ二量体接点を形成する残基（配列番号１中の位置をカッコ内に記す）は、ヒトＣＤ２８のアミノ酸配列（配列番号１）の（９）にあるＰｒｏ、（１０）にあるＭｅｔ、（４１）にあるＬｅｕ、（８６）にあるＶａｌ、（８９）にあるＴｈｒ、（９１）にあるＩｌｅ、（１１１）にあるＡｓｎ、（１１２）にあるＧｌｙ、（１１４）にあるＩｌｅ及び（１１６）にあるＨｉｓであり、ヒトＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面を画定する。本発明において使用されるペプチドが由来するヒトＣＤ２８アミノ酸配列内の領域は、例えば配列番号１のアミノ酸１０〜１５及び１１６〜１２１であるが、同様に開示されているのは、これらの領域から特異的に誘導されないもののホモ二量体接点を形成するこれらのアミノ酸残基のうちの１つ以上のアミノ酸残基を含んでいるペプチドである。「結晶学的ホモ二量体界面」及び「ホモ二量体界面」という用語は、本明細書において互換的に使用されてよい。

同様に本開示に包含されその組成物及び方法において使用されているのは、ヒトＣＴＬＡ４の結晶学的ホモ二量体界面から誘導されるペプチドである。Ｓｃｈｗａｒｚら、（１２）の図２Ｃ内と同様Ａｒａｄら、２０１１（３）の図４Ａ中にも示されている（黒丸及び青色）通りのホモ二量体接点を形成するアミノ酸残基。これらは、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列（配列番号２）の１０、１２、１３及び１５位ならびに１１５〜１２０位にあるアミノ酸残基である。本発明中で使用されるペプチドが由来するヒトＣＴＬＡ４アミノ酸配列内の領域は、例えば、配列番号２のアミノ酸１０〜１５及び１１５〜１２０、概してＣＴＬＡ４配列内で結晶学的ホモ二量体界面を形成する残基のアミノ酸残基を含むペプチドである。

本開示によりさらに包含されその組成物及び方法中で使用されているのは、ＣＤ２８配列またはＣＴＬＡ４分子或いは上述の通りそれらの結晶学的ホモ二量体界面のアミノ酸を含むその内部領域と相同でなくまたはそれに由来せず、むしろＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に対する高い結合親和力を示しかつ非病原体誘発性炎症性応答の阻害における生物活性を示す異なるペプチドである、ＣＤ２８の細胞外ドメインに対するその親和力のためにファージ提示法により選択されたペプチドである。これらのペプチドについては、以下でより詳細に説明し例示する。

上記ペプチドは、ＣＤ２８に対し直接結合し、これらの動物モデルにおける疾病の症候を軽減する上で有効である。

さらに、本開示は、放射線誘発性炎症性傷害に対するＣＤ２８模倣体ペプチド、具体的には例示されたｐ２ＴＡ（配列４７）の意外な効果に基づくものである。この効果は、全身照射とそれに続く照射から２４時間後のＣＤ２８模倣体ペプチド投与及び、細胞増殖（サイクリンＤ１）及び炎症（ＣＯＸ−２）についての空腸組織病理学及び免疫組織学分析による胃腸組織損傷の評価に付されたマウスモデルにおいて検査された。

こうして、その態様の１つにおいて、本開示は、非病原体関連炎症性疾患の治療方法において使用するためのＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に特異的に結合する単離ペプチド、または前記単離ペプチドを含む医薬組成物を提供する。

本明細書中で使用される「ペプチド」という用語は、必要な場合、例えばマンノシル化、グリコシル化、アミド化（例えばＣ末端アミド）、カルボキシル化またはリン酸化などにより、そのアミノ酸残基の各々１つにおいて修飾され得るアミノ酸残基分子鎖を意味する。ペプチドは、遺伝子工学方法、宿主細胞内の発現または他の任意の好適な手段を通して合成により得ることができる。ペプチドの生産方法は、当該技術分野において周知である。

「単離（された）」という用語は、その天然の環境から取出され、単離または分離されたアミノ酸配列またはペプチドなどの分子を意味する。

本明細書中で使用される「アミノ酸」という用語は、天然に発生する及び合成のアミノ酸残基、ならびに天然に発生するアミノ酸と類似の要領で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を意味する。天然に発生するアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるアミノ酸、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸という用語は、同様に、炭素アルファにおけるキラリティが反転している、Ｌ−アミノ酸の鏡像であるＤ−アミノ酸をも包含する。

「アミノ酸配列」または「ペプチド配列」という用語は同様に、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基が、ペプチド及びタンパク質内の連鎖中で存在している順序にも関係する。配列は概して、遊離アミノ基を含むＮ末端から遊離カルボキシル基を含むＣ末端まで報告される。

本明細書中で使用される「単離ペプチド」という用語は、より長いアミノ酸配列の一部ではない単離ペプチド、すなわち、有限の長さまたは有限の数の連続するアミノ酸残基のペプチドを意味する。

本開示中の「〜の用途のための（〜で使用するための）ペプチド」、及びその官能的誘導体及びフラグメントとは、ヒトＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に特異的に結合する単離ペプチドである。ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面は、ヒトＣＤ２８のアミノ酸配列（配列番号１）の（９）にあるＰｒｏ、（１０）にあるＭｅｔ、（４１）にあるＬｅｕ、（８６）にあるＶａｌ、（８９）にあるＴｈｒ、（９１）にあるＩｌｅ、（１１１）にあるＡｓｎ、（１１２）にあるＧｌｙ、（１１４）にあるＩｌｅ及び（１１６）にあるＨｉｓにより決定される。

このようなペプチドは、ヒトＣＤ２８内の６〜１４個の連続するアミノ酸残基の領域に対応している可能性があり、この領域は、結晶学的ホモ二量体界面の１つ以上のアミノ酸残基（以上で列挙された通り）を内部に含む。ヒトＣＤ２８内のこのような領域の例としては、配列１の残基１０〜１５（ペプチドｐ２ＴＡ）または１１６〜１２１（ペプチドｐ１ＴＡ）を含む領域がある。以下で例示する本開示中で使用される他のペプチドが、ｐ３ＴＡ、ｐ４ＴＡ及びｐ５ＴＡ（３）などのヒトＣＤ２８内の他のこのような領域（配列１）から誘導される。本開示の方法及び組成物において使用される他のペプチドは、ヒトＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に特異的に結合しヒトＣＴＬＡ４内の６〜１４個の連続するアミノ酸残基のヒトＣＴＬＡ４内の領域（配列番号２）に対応する単離ペプチドであり、この領域は、ＣＴＬＡ４の結晶学的ホモ二量体界面の１つ以上のアミノ酸残基（以下に列挙）を内部に含む。このようなアミノ酸残基の例としては、配列番号２のアミノ酸残基１０〜１５（ペプチドｐ２ＴＢ）または１１５〜１２０（ペプチドｐ１ＴＢ）がある。さらにまた、本明細書中に開示されている方法及び組成物において使用するためのペプチドは、必ずしもヒトＣＤ２８またはヒトＣＴＬＡ４に対する相同を有していないものの、ヒトＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面には高い親和力で結合し非病原体誘発性炎症性応答を阻害するさまざまなペプチドである。

本発明中で使用される基準アミノ酸配列「に対応する」または「から誘導された（に由来する）」という用語は、対応する／誘導されたアミノ酸が本質的に基準アミノ酸配列と同一であるものの、本明細書において「誘導体」及び「フラグメント」について定義されている変形形態を含むことができるということを意味する。

本開示に係る用途のための単離ペプチドは、それがＣＤ２８を介して形質導入された場合にヒトＰＢＭＣにおける炎症性サイトカインのためのシグナル伝達を阻害すること（図２）、そしてさらには、各ペプチドが、ミクロモル範囲内にあると推定される親和力でＣＤ２８に直接結合することができること（図４）の直接的証拠が、添付の実施例中で提示されている。

したがって、一部の実施形態において、本発明に係る用途のための単離ペプチドは、３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄによって特徴づけられるヒトＣＤ２８のホモ二量体界面に対する結合親和力を有する。例えば、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）結合のＫ_Ｄは、２ミクロモルである。

したがって、本明細書中で定義されている用途のための単離ペプチドは、（ｉ）３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_ＤでヒトＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対して特異的に結合すること、及び（ｉｉ）炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つのもののレベル低下及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害することができること、の少なくとも１つによって特徴づけられる。炎症の重症度を表わす他の生物学的パラメータを使用してもよい。したがって、ＣＤ２８ホモ二量体界面に対する本発明が使用するペプチドの結合親和力は、３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄ、例えば約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、１０、１５、２０または２５から約３０ミクロモルのＫ_Ｄによって特徴づけられる。

一部の実施形態において、本発明に係る単離ペプチドは、３０ミクロモル未満の結合親和力でヒトＣＤ２８の前記ホモ二量体界面に結合する能力を維持する前記以上で定義づけしたペプチドの官能的フラグメントまたは誘導体である。

ヒト及びマウスＣＤ２８を整列させることにより、ｐ２ＴＡドメイン［配列番号１のアミノ酸残基８〜１５］の内部には、広範な配列変動が存在し、８個のアミノ酸のうち４個が異なる（ＳＰＭＬＶＡＹＬ対ＳＰＬＬＶＶＤＳ）ものの、それでもヒトペプチドは異なる関節炎げっ歯類モデルにおいて病状の症候を軽減したことがわかる。このドメイン（８個のうち５個のアミノ酸）の疎水性は、ヒト及びマウスのＣＤ２８間で保存されている。これはＣＤ２８ホモ二量体内のｐ２ＴＡドメインにより認識される部位を係合するというペプチドの要件を満たすかもしれない。一見したところ、ＣＤ２８と相互作用する能力を付与し、このレセプタを介したシグナル伝達を軽減し、疾病に対し防御する能力を付与するのは、特異的ペプチド配列ではなく、疎水性残基が支配的であるペプチドの全体的性質である。ファージ提示法によるその選択から予測されるｐｅｌ２（配列番号４９）及びｐ２ＴＢ（配列番号４８）は各々ＣＤ２８の細胞外ドメインを結合させ、ＣＤ２８シグナル伝達を軽減した。ヒトｐ２ＴＡペプチドが、配列の広範な変動にも関わらずマウスＣＤ２８内の二量体界面と整合する場合には、ｐ２ＴＢの同様に疎水性である配列は、それがヒト（図２Ｂ）由来かマウス由来のいずれであるかには関わらず、ＣＤ２８とのその相互作用をもたらすことができる。

一部の非限定的な実施形態において、本発明に係るＣＤ２８のホモ二量体界面に特異的に結合する単離ペプチドは、（ｉ）ホモ二量体接点を形成するアミノ酸残基を含むヒトＣＤ２８内の領域、例えば配列番号１のアミノ酸残基１０〜１５または１１６〜１２１の配列に由来するか、または（ｉｉ）ホモ二量体接点を形成するアミノ酸残基を含むヒトＣＴＬＡ４内の領域、例えば配列番号２のアミノ酸残基１０〜１５または１１５〜１２０に由来する。

細胞膜内へと疎水性尾部を通してペプチドを固定することで、ＣＤ２８と相互作用するその能力が増強されるかもしれないと推測して、Ｎ末端パルミトイル尾部が、ペプチドに付加された。しかしながら、この修飾は、コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）または実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）におけるｐ２ＴＢの効能を増強しなかった。それが修飾されたか否かに関わらず、検査されたペプチドの各々は、炎症性疾病の症候を軽減する上で有意な効果を有していた。したがって発明人らは、ペプチドを有効にするのはパルミトイル尾部ではなくアミノ酸配列自体であるという結論を下した。

さらなる実施形態において、本発明に係るヒトＣＤ２８のホモ二量体界面に特異的に結合する単離ペプチドは、以下のものである：
（ａ）（ｉ）本明細書においてｐ１ＴＡとも呼ばれている配列番号３で表示されるアミノ酸配列ＨＶＫＧＫＨＬＣＰ、または本明細書においてｐ２ＴＡとも呼ばれている配列番号４で表示されるアミノ酸配列ＳＰＭＬＶＡＹＤ、または本明細書においてｐ３ＴＡとも呼ばれているアミノ酸配列ＨＫＧＬＤＳＡＶ（配列番号５）、または本明細書においてｐ４ＴＡとも呼ばれているアミノ酸配列ＹＶＮＱＴＤＩＹ（配列番号６）、または本明細書においてｐ５ＴＡとも呼ばれているアミノ酸配列ＮＧＴＩＩＨＶＫＧ（配列番号７）からなるヒトＣＤ２８から誘導されたペプチド；
（ｉｉ）本明細書においてｐ１ＴＢとも呼ばれている配列番号８で表示されるアミノ酸配列ＹＶＩＤＰＥＰＣＰ、または本明細書においてｐ２ＴＢとも呼ばれている配列番号９で表示されるアミノ酸配列ＰＡＶＶＬＡＳＳからなるヒトＣＴＬＡ４から誘導されたペプチド；
（ｉｉｉ）ｐ１２Ａ（配列番号１０で表示）、ｐ１２Ｂ（配列番号１１で表示）、ｐｅ１２（配列番号１２で表示）、またはｐｅｌ２−Ｄ−Ａｌａ（配列番号４９で表示）またはｐａｌ−ｐｅｌ２−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号５１で表示）、ｐｄ７（配列番号１３で表示）及びｐｃ３（配列番号１４で表示）、ｐａ２（配列番号１５で表示）、ｐｂ４（配列番号１６で表示）、ｐｃ１１（配列番号１７で表示）、ｐｆ１１（配列番号１８で表示）、ｐｇ３（配列番号１９で表示）、ｐｂ１２（配列番号２０で表示）、ｐａ８．１（配列番号２１で表示）、ｐｂ３（配列番号２２で表示）、ｐｂ５（配列番号２３で表示）、ｐｃ５（配列番号２４で表示）、ｐｆ３（配列番号２５で表示）、ｐｆ８（配列番号２６で表示）、ｐｅ６（配列番号２７で表示）、ｐｆ４（配列番号２８で表示）、ｐａ８．２（配列番号２９で表示）、ｂ７（配列番号３０で表示）、ｐｂ２（配列番号３１で表示）、ｐｃ２（配列番号３２で表示）、ｐｃ８（配列番号３３で表示）、ｐｃ９（配列番号３４で表示）、ｐｆ１２（配列番号３５で表示）、ｐｃ４（配列番号３６で表示）、ｐｅｌ１（配列番号３７で表示）、ｐｂ５（配列番号３８で表示）、ｐｅ１３（配列番号３９で表示）、ｐｇ７（配列番号４０で表示）、ｐａｌ２（配列番号４１で表示）、ｐｂ８（配列番号４２で表示）、ｐｂ１２（配列番号４３で表示）、ｐｃ８（配列番号４４で表示）、ｐｄ８（配列番号４５で表示）、ｐｇ６（配列番号４６で表示）からなる群から選択されたペプチド；
（ｂ）上述の（ａ）と少なくとも８０％の相同性を有し（ここで（ｂ）の結果として得られるペプチドは、３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる結合で、ヒトＣＤ２８ホモ二量体界面に対し特異的に結合する能力を維持する）、炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つ及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害するペプチド；
（ｃ）Ｎ末端及び／またはＣ末端において、
（ｉ）Ｎ末端のラウリルシステイン及びＣ末端のシステインによって；または
（ｉｉ）天然に発生しない有機部分または合成アミノ酸残基によって；または
（ｉｉｉ）天然に発生し得る同一の疎水性アミノ酸残基（単複）または合成アミノ酸残基によって；または
（ｉｖ）パルミトイル−リシン尾部［ここで、前記尾部はＮ末端にあり、（ｃ）の結果として得られるペプチドは、ヒトＣＤ２８ホモ二量体界面に対し特異的に結合する能力を維持し、炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つ及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される炎症性応答を阻害する］によって、
延長された（ａ）または（ｂ）のペプチド；
（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の二量体または多量体（ここで（ｄ）の結果として得られるペプチドは、３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる結合親和力で、ヒトＣＤ２８ホモ二量体界面に対し特異的に結合する能力を維持し）、炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つ及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害する）。

本明細書に定義されている単離ペプチドのフラグメントまたは誘導体も同様に、本発明に包含される。フラグメントまた誘導体という用語は、配列全体の中で１つ以上のアミノ酸が異なっている、すなわち欠失、置換（例えば保存的置換による少なくとも１つのアミノ酸の別のアミノ酸による交換）、反転または付加を有するペプチドを含むように意図されている。この用語は同様に、配列全体の中の少なくとも１つのアミノ酸残基の、それぞれのＤアミノ酸残基による交換をも包含する。

アミノ酸「置換」は、１つのアミノ酸を類似の構造的及び／または化学的特性を有する別のアミノ酸で交換した結果、すなわち保存的アミノ酸交換である。アミノ酸置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性及び／または両親媒性の類似性に基づいて行なわれてよい。例えば、以下の８個の基の各々が、互いの保存的置換であるアミノ酸を含んでいる：
１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；
７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び
８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）。

本明細書中に定義されているペプチドのフラグメントも同様に本発明に含まれる。「フラグメント」という用語は、本発明に係るペプチドからの少なくとも１つのアミノ酸残基の欠失によって得られる本発明に係る単離ペプチドより短い少なくとも１つのアミノ酸である任意のペプチドを意味する。

一部の実施形態において、ペプチドはそのＮ末端を介してラウリルシステイン（ＬＣ）残基にそして／またはそのＣ末端を介してシステイン（Ｃ）残基に或いは免疫付与のためペプチドをアジュバント（単複）に連結するのに好適な他の残基（単複）に対してカップリングされ得る。

本開示のペプチドは全て正電荷を有するか負電荷を有するか、或いは中性であってよい。さらに、これらのペプチドは二量体、多量体の形をしているかまたは、内部ブリッジ、短範囲環化、延長または他の化学的修飾によって達成できる束縛された立体配座をとっていてよい。

さらに、ペプチドは、そのＮ末端及び／またはＣ末端において、さまざまな同一のまたは異なるアミノ酸残基により延長されてよい。このような延長の一例として、ペプチドは、そのＮ末端及び／またはＣ末端において、天然に発生するアミノ酸残基であっても合成のアミノ酸残基（単複）であってもよい同一のまたは異なる疎水性アミノ酸残基で延長されてよい。好ましい合成アミノ酸残基はＤ−アラニンである。このような延長についてのさらなる一例は、そのＮ末端及び／またはＣ末端の両方でシステイン残基により延長されているペプチドによって提供され得る。当然のことながら、このような延長は、ジスルフィド結合形成の結果としてのＣｙｓ−Ｃｙｓ環化に起因して束縛された立体配座を導く可能性がある。別の例は、Ｎ末端パルミトイル−リシン尾部の取込みであり、リシンはリンカーとして役立ち、パルミチン酸は疎水性アンカーとして役立つ。さらに、ペプチドは、天然に発生するかまたは合成のアミノ酸残基（単複）であり得る芳香族アミノ酸残基（単複）により延長されてよく、例えば、具体的芳香族アミノ酸残基はトリプトファンであってよい。ペプチドは、例えば天然に発生する配列の１つ、２つまたは３つの連続するアミノ酸残基である天然に発生するヒトＣＤ２８またはヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列の対応する隣接する位置に存在する１つ以上のアミノ酸により、そのＮ末端及び／またはＣ末端において延長されてよい。ペプチドは、天然に発生するまたは合成のアミノ酸ではないさまざまな同一のまたは異なる有機質部分により、そのＮ末端及び／またはＣ末端において延長されてよい。このような延長の一例として、ペプチドは、Ｎアセチル基により、そのＮ末端及び／またはＣ末端において延長されてよい。本発明により使用され本明細書中に開示されている全ての単一のペプチド配列について、本発明は、ペプチド鎖の方向が反転され全てのアミノ酸がＤ系に属する対応するレトロ−逆転配列を含む。塩基性配列が前記ペプチド（単複）のアミノ酸配列の一部または全てを含むかまたはこれらのペプチドのいずれか１つの塩基性ペプチド配列が約２〜約１００回反復されるより長いペプチドも、同様に企図されている。

これらのペプチドフラグメントまたは誘導体が、原初のペプチドの生物活性を改変してはならないということがわかる。「官能的」または「未修飾ペプチドに比べて修飾ペプチドの生物学的特性に有意な影響を及ぼすことなく」という用語は、修飾ペプチドが未修飾ペプチドの生物活性と質的に類似する生物活性を保持することを表現するように意図されている。

本発明の単離ペプチドに言及する場合の「生物活性特性」という用語は、炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つ及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少、及び他の任意の好適なパラメータによって決定される炎症性応答を阻害するペプチドを包含する。

こうして、ペプチド誘導体またはフラグメントが未修飾ペプチドのものと類似する生物学的特性を質的及び量的に保持しているか否かを決定するために、例えば、炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つ及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少の決定など、１つ以上の検定を、以下の実施例中に記載の要領で実施することができる。

具体的な一実施形態において、単離ペプチドは、配列番号４で表示されるアミノ酸配列ＳＰＭＬＶＡＹＤ（ペプチドｐ２ＴＡ）または配列番号４７で表示されるアミノ酸配列（Ｄ−Ａ）ＳＰＭＬＶＡＹＤ（Ｄ−Ａ）（ペプチド（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）で構成される。以下で規定する通り、ｐ２ＴＡ（ならびに他の全ての任意のペプチド名）は、本明細書において、コア配列（配列番号４）またはそのＤ−Ａｌａの接合誘導体（配列番号４７）の両方を呼称するために使用されることがある。

他の特異的ペプチドは、ｐ３ＴＡと呼称される配列番号５で表示されるアミノ酸配列からなるペプチド、ｐ４ＴＡと呼称される配列番号６で表示されるアミノ酸配列からなるペプチド、及びｐ５ＴＡと呼称される配列番号７で表示されるアミノ酸配列からなるペプチドである。これらのペプチドは、ｐ２ＴＡのものに類似する生物活性を示す（Ａｒａｄ ２０１１，（３））。Ｄ−Ａｌａ誘導体及びパルミトイル−リシン誘導体も同様に、本明細書に包含される。

別の実施形態において、単離ペプチドは、アミノ酸配列ＰＡＶＶＬＡＳＳ（配列番号９で表示、ペプチドｐ２ＴＢ）、（Ｄ−Ａ）ＰＡＶＶＬＡＳＳ（Ｄ−Ａ）（配列番号４８で表示、ペプチド（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＢ−（Ｄ−Ａ）及び（パルミトイル−リシン）ＰＡＶＶＬＡＳＳ（Ｄ−Ａ）（配列番号５０で表示、（ｐａｌ）−ｐ２ＴＢ−（Ｄ−Ａ））で構成される。

別の実施形態では、単離ペプチドは、アミノ酸配列ＳＨＦＴＨＮＲＨＧＨＳＴ（配列番号１２で表示、ペプチドｐｅｌ２）、（Ｄ−Ａ）ＳＨＦＴＨＮＲＨＧＨＳＴ（Ｄ−Ａ）（配列番号４９で表示、ペプチドｐｅｌ２−（Ｄ−Ａ））及び（パルミトイル−リシン）ＳＨＦＴＨＮＲＨＧＨＳＴ（Ｄ−Ａ）（配列番号５１で表示、ペプチドｐｅｌ２−ｐａｌ）で構成される。

以上で示されている通り、本開示は、（実施例４〜６に詳述される通り）、共刺激レセプタＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対して高い結合親和力で特異的に結合することのできる、例えば約８アミノ酸残基の長さの短ペプチド（例えば本明細書においてｐ２ＴＡと呼ばれるペプチド）が、ＣＤ２８を介したシグナル伝達を阻害でき、こうしてアジュバント関節炎及びコラーゲン誘発性関節炎から実験的自己免疫脳炎に至るまでのさまざまな動物モデルにおける炎症性疾病の症候を軽減するという発見事実に基づくものである。

さらに、以下で提示する結果は、ｐ２ＴＡペプチドによる全身ＩＲ曝露後の免疫系応答の調節が、ＩＲ損傷を強力に緩和するように作用することを示唆している。

これらの炎症性疾患または炎症性疾病の全てが有する共通の特徴は、それらが侵入病原体に関連しないこと、すなわち「非病原体関連炎症性疾患」と定義づけできるものであるという事実にある。「非病原体関連（ｎｏｎ−ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）炎症性疾患」、「非病原体誘発性（ｎｏｎ−ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｄｕｃｅｄ）炎症性疾患」、「非病原体関連（ｎｏｎ−ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｌａｔｅｄ）炎症性疾患」は、本明細書において互換的に使用されてよい。

したがって、以上で記した通り、本開示は、非病原体関連炎症性疾患の治療方法において使用するための、ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対し特異的に結合する単離ペプチドまたは前記単離ペプチドを含む医薬組成物を提供する。

「治療する」またはその複数の形態及び「和らげる」及び「緩和する」という用語は、本明細書中で定義される患者の疾病または身体条件を少なくとも部分的に改善するかまたは治癒させることを意味する。本発明中で使用される「治療する」とは、本明細書中で開示されているペプチドによる治療に対し支持療法を付加することを意味するようにも理解される。例えば、放射線誘発性炎症の場合、放射線支持療法を付加してよい。

したがって、本明細書で定義される「非病原体関連炎症性疾患」という用語は、病原体に関連しない炎症性疾病、炎症性疾患または身体条件を意味する。病原体は、ヒトを感染させることのできる細菌毒素、細菌、ウイルス、真菌、蠕虫、植物及び他の生体のいずれか１つであり得る。具体的なこのような病原体は、グラム陽性菌、グラム陰性菌、複数菌感染症を導くそれらの混合物、細菌毒素及び他の毒性細菌成分、例えば外毒素、スーパー抗原毒素、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ）、リポ多糖体、ペプチドグリカンまたはその毒性成分、先天性免疫系の細胞により認識される病原体の群に関連する分子、及びトール様レセプタ（ＴＬＲ）により認識される病原体の群に関連する分子であり得る。

一部の実施形態において、炎症性疾患は、放射線誘発性炎症、炎症性大腸炎（ＩＢＤ）、放射線誘発性胃腸炎、薬剤誘発性炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、多発性硬化症、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、鼻炎、特発性肺線維症、腹膜炎、心血管炎症、心筋虚血、再灌流傷害、アテローム性動脈硬化症、心的外傷、２型糖尿病、網膜症、乾癬、胃腸炎、肝硬変、虫垂炎、滑液包炎、結膜炎、膀胱炎、皮膚炎、静脈炎、脈管炎、尋常性座瘡、及び骨盤内炎症性疾病のいずれか一つである。

一部の実施形態において、炎症性疾病または身体条件は放射線誘発性炎症である。

本明細書中で定義されている「放射線誘発性炎症」という用語は、放射線療法に関連するかまたはその結果である炎症を意味する。特徴的には細胞核内のエネルギー蓄積の帰結と結びつけられる電離放射線の効果は、照射を受けた細胞の部位において、ならびに非照射細胞内で発生することが報告されており、これは損傷が持続する潜在性を伴う炎症性応答の特徴である放射線傷害に対する公知の遅延型及び長寿命組織反応とも整合性がある。これらの発見事実は、従来の放射線生物学的な定説及び疫学に基づくリスク推定の解釈に反して、電離放射線は、さらなる悪影響に寄与するかもしれないということを暗示している。

以下で詳述する通り、炎症促進性サイトカインＩＬ−６のレベルは、放射線曝露から、７日目にマウスの血漿中で著しく上昇した。意外にも、ｐ２ＴＡペプチドの投与は、ＩＬ−６の上昇及びフィブリノゲンの放射線誘発性産生を著しく減少させた。さらに、以下の実施例は、照射を受けたＲグループが、対照のＣグループに比べて著しく少ない腸陰窩細胞及びより短い絨毛を有していたことを実証している。全体として、ｐ２ＴＡペプチドは、放射線誘発性腸傷害に対する防御効果を有し、絨毛及び陰窩の形態の改善を誘発し、サイクリンＤ１発現を増大させ、ＣＯＸ−２染色を減少させた。これらの観察事実は、ＣＤ２８シグナル伝達の減衰が、放射線誘発性組織傷害の緩和のための将来性ある治療的アプローチであることを示唆している。

本明細書中で定義されている「放射線」または「電離放射線」という用語は、一般に悪性細胞を制御するかまたは殺すための癌治療の一部としての電離放射線の医療的用途である放射線療法（または「放射線治療法」）を意味する。放射線療法は、緩和医療または治療的処置として使用され得る。大部分の一般的なタイプの癌は何らかの形で放射線療法により治療でき、さまざまなタイプの放射線治療が用いられる。例えば、「全身照射法」（ＴＢＩ）は、骨髄移植を受けるために身体を準備するために使用される放射線療法技術である。

放射線療法は同様に、三叉神経痛、聴神経腫、重度の甲状腺眼症、翼状片、色素性絨毛結節性滑膜炎などの非悪性（非癌性）身体条件、及びケロイド瘢痕成長、血管再狭窄及び異所性骨化の予防においても利用されている。非悪性身体条件における放射線治療の使用は、一部には放射線誘発性癌のリスクに関する懸念のため限定されている。

以上で記した通り、放射線治療は、多様な疾患の治療において使用されてよい。放射線腫瘍学者は、放射線に対する曝露を最小限に抑えるため特に注意を払っている。それでもなお、放射線治療は、照射部位ならびにたとえ低レベルで遠隔の部位でさえ身体に対し傷害をひき起こす可能性がある。例えば、結腸及び直腸に対する放射線傷害の症候としては、急性炎症、粘液産生の減少及び腸の内膜下における流体の蓄積が含まれる。

本開示は、ＣＤ２８模倣体ペプチドｐ２ＴＡが、全身循環内及び胃腸（ＧＩ）管を含む複数の組織内の両方における生体内での電離放射線の効果の多くを緩和することを実証している。ＧＩ管の放射線誘発性炎症は、放射線曝露後の全身性合併症の重大な原因であり、多臓器不全を導くいくつかの作用を媒介し得ることが公知である。

例えば、高線量の電離照射に対する曝露は、空腸陰窩内の細胞喪失をひき起こす。陰窩細胞内のアポトーシスレベルは、１Ｇｙという少量のガンマ線に対する曝露ですら３〜６時間後に劇的に増大することが報告されている：ここで、８Ｇｙの曝露は、曝露後６０時間ほど経過した時点ですら観察される長時間にわたるアポトーシスを導くが、そのピークはより早い時点で起こっている。陰窩幹細胞に加えて、ＧＩ微小血管系由来の内皮細胞のアポトーシスは、放射線によりひき起こされたＧＩ毒性にとって極めて重要な意味をもつとも考えられている。

こうして、一部の実施形態において、放射線誘発性炎症は、全身性及び／または照射部位におけるものである。

換言すると、本発明に包含される放射線誘発性炎症は、全身性であり得る。すなわち、身体全てに及び／または照射部位において、すなわち特定の放射場所に影響が及ぶ可能性がある。

したがって、別の態様において、本開示は非病原体関連炎症性疾患の治療方法において使用するための、ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対し特異的に結合する単離ペプチド及びその官能的誘導体、またはそれを含む医薬組成物を提供している。前記単離ペプチド及びその官能的誘導体は、３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より特定的には約０．１〜３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる、ＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に対する結合親和力を有する。

前記単離ペプチドは、ホモ二量体接点を形成する１つ以上のアミノ酸残基を内部に含むヒトＣＤ２８の領域またはホモ二量体接点を形成する１つ以上のアミノ酸残基を内部に含むＣＴＬＡ４の領域に由来するアミノ酸配列、及び前記ペプチドの任意の官能的フラグメント及び誘導体を有することができ、ここで、前記官能的フラグメントまたは誘導体は、３０ミクロモル未満のＫ_Ｄ、より具体的には約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる結合親和力で前記ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に結合する能力を維持している。ホモ二量体接点を形成するヒトＣＤ２８及びＣＴＬＡ４内のアミノ酸残基は、以下に列挙されている。

具体的実施形態において、本開示は、放射線誘発性炎症の治療方法において使用するため配列番号４で表示されるアミノ酸配列ＳＰＭＬＶＡＹＤ（ペプチドｐ２ＴＡ）または配列番号４７で表示されるアミノ酸配列（Ｄ−Ａ）ＳＰＭＬＶＡＹＤ（Ｄ−Ａ）（ペプチド（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ））を含む単離ペプチドを提供する。

他の実施形態において、放射線誘発性炎症は、胃腸管及び脾臓炎症のうちの少なくとも１つに関連する。

胃腸毒性は、放射線治療（ＲＴ）の場の内部に正常な胃腸構造が置かれた場合つねに、胸部、腹部または骨盤内の悪性腫瘍の照射後に発生し得る。重要なことは、これらの毒性が、ＲＴ及び化学療法の最大用量を制限する可能性があり、したがって治療の効能を限定するかもしれないということである。ＲＴの胃腸レベルの副作用としては、１治療単位の最中または直後に悩まされる早期（急性）毒性、例えば下痢及び吐き気がある。さらに、ＲＴから数カ月乃至数年後に、遅発効果が見られる場合がある。これらの遅発反応としては、潰瘍、狭窄形成及び腸閉塞症がある。

さらなる実施形態において、炎症性疾患は、放射線誘発性胃腸炎である。

本発明中で使用される「放射線誘発性胃腸炎」または「放射線腸炎」という用語は、癌治療において適用される放射線治療により誘発される小腸内膜の腫張及び炎症を意味する。放射線腸炎は、糖尿病、アテローム性動脈硬化症または開腹手術の既往を有する患者において、通常、より重症である。放射線腸炎の症候としては、食欲不振、吐き気、嘔吐及び体重の減少が含まれるが、これらに限定されない。

本開示は、その別の態様によると、放射線誘発性血栓症のリスク低減方法において使用するための、ヒトＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対して特異的に結合する単離ペプチド、または前記単離ペプチドを含む医薬組成物を提供している。

放射線誘発性炎症は、例えば本明細書に例示されているような当該技術分野において公知の任意のマーカー及び方法を用いて、すなわち、細胞増殖（サイクリンＤ１）及び炎症（ＣＯＸ−２）マーカーについての組織分析によって、ならびに照射対象組織の形態を監視すること（例えば照射対象の腸組織内の絨毛及び陰窩の形態を監視すること）によって、検出され監視されてよい。さらに、炎症の特異的血漿マーカー、例えば（ただし非限定的に）サイトカインインターロイキン６（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子、インターフェロン−ガンマ、ＩＬ−１及びフィブリノゲンを使用してもよい。

以下で例示する通り、ＩＲ曝露と結びつけられる特徴のいずれがその存在下で調節され得るかを調査するため、ＩＲへの曝露から２４時間後に、照射対象マウスに対してペプチド（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４７）を与えた。重要なことは、この時点で、例えば、陰窩幹細胞がすでにそのピークに達していたという点である。

以下で示す通り、ペプチドｐ２ＴＡでの治療に応えて、ＩＬ−６及びフィブリノゲンの数量の統計的に有意な差異、ならびにＩＲにより誘発される空腸陰窩毒性の有意な減少が、指摘された。さらに、ＣＯＸ−２発現の減少が３つの組織全てに見られ、サイクリンＤ１の増加が陰窩細胞内に観察された。

理論により束縛されることは望まないものの、サイクリンＤ１を発現する陰窩細胞が、抗炎症糖質コルチコイドを産生し、これがＧＩ保護抗炎症性フィードバックループの発生を導くということを指摘しておくべきである。

これまでのところ、全身性またはＧＩ放射線傷害の生体内効果を調節するために、さまざまなサイトカイン及び成長因子を含めた多くの異なる作用物質が使用されてきており、その一部は腸幹細胞の成長を刺激し、他のものは微小血管系の内皮細胞を刺激する。考えられる放射線応答調節因子として、ＣＯＸ２の阻害も示唆された。より最近の研究作業は、放射線緩和剤としてのゲニステインナノ粒子の効果を検査した。しかしながら、重要なことは、各ケースにおいて、提案された緩和物質が、照射の前または直後のいずれかに投与されたか、または代替的には、連続した何日にもわたる照射後治療として投与されたということにある。本開示は、緩和剤の投与が一回だけ（すなわち単回投与によって）、かつ照射に対する曝露から２４時間という長い時間の後に行なわれたことを実証している。

したがって、一部の実施形態において、本明細書中で定義されている単離ペプチドまたはその任意の官能的誘導体またはフラグメントまたは前記単離ペプチドを含む医薬組成物は、前記対象に対して、照射の前及び／または後の、任意の好適な時点において投与される。

一部の実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、放射線療法による治療の直後または、対象がなおも放射線療法を受けている間であるかまたは放射線療法による２回の治療の間またはその後にあるかに関わらず放射線療法から約３０分乃至は放射線誘発性炎症が持続している任意の時間以内に、前記それを必要とする対象に対して投与するためのものである。

さらに具体的な実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記放射線に対する曝露から約３０分後乃至は約６０分または９０分後、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、３６、４８、６０または７２時間後、４、５、６、７、１４、３２または２８日後に、それを必要としている対象に対して投与するためのものである。

さらなる実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記放射線に対する曝露後２４時間以内に前記対象に対して投与するためのものである。

以上で記した通り、本開示は、（実施例４〜６で詳述される通り）例えばｐ２ＴＡなどの短ペプチドが、アジュバント関節炎及びコラーゲン誘発性関節炎から実験的自己免疫脳炎に至るまでのさまざまな動物モデルにおける炎症性疾病の症候を軽減できるという発見事実に基づいている。

したがって、一部の実施形態において、本明細書中で定義されている炎症性疾患は、リウマチ性関節炎、多発性硬化症及び重症筋無力症ならびに炎症性大腸炎（ＩＢＤ）のいずれか１つである。

本明細書中で定義されている「リウマチ性関節炎」（ＲＡ）という用語は、主として関節を襲う慢性で全身性の炎症性疾患を意味する。これは結果として、関節に変形と痛みをもたらし、機能喪失を導きかねない。この疾病は、関節以外の器官にも兆候及び症候を有する場合がある。

本明細書で定義されている播種性硬化症または播種性脳脊髄炎としても公知である「多発性硬化症」という用語は、脳及び脊髄内の神経細胞の絶縁性被覆が損傷を受ける炎症性疾病を意味する。この損傷は、神経系の各部分の情報交換能力を崩壊させ、肉体的、知的及び精神病理学的なものを含めた広範囲の兆候及び症候を結果としてもたらす。

本明細書中で定義される「重症筋無力症」という用語は、変動する筋脱力及び疲労を導く自己免疫または先天性の神経筋疾病を意味する。大部分の一般的症例において、筋脱力は、シナプス後神経筋接合部においてアセチルコリンレセプタを遮断して、神経筋接合部におけるニコチン性レセプタに対する神経伝達物質アセチルコリンの興奮効果を阻害する循環抗体によってひき起こされる。

一部の具体的実施形態において、炎症性疾患は、薬剤誘発性炎症である。

さらなる具体的実施形態において、前記薬剤誘発性炎症は、薬剤誘発性肝炎、薬剤誘発性眼炎、薬剤誘発性胃腸障害、薬剤誘発性急性潰瘍、薬剤誘発性腎不全、薬剤誘発性膵炎、薬剤誘発性腎炎、胃腸管内の化学療法誘発性炎症、及び脂漏性角化症のいずれか一つである。

本明細書中で定義されている単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは前記単離ペプチドを含む医薬組成物は、任意の投与経路で投与されてよい。

一部の実施形態において、単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、静脈内、筋内または腹腔内投与、髄腔内または皮下注入、経口、直腸内、経鼻、眼内及び局所投与からなる群から選択された経路で投与される。

本明細書中に定義されている目的のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントの「治療上有効な量」の計算は、炎症ならびに電離放射線に対する曝露によって誘発されるかまたはその結果として考えられる他の副作用を阻害、阻止または和らげるために当該技術分野において公知であるような考慮事項によって決定される。

例えば、以下で例示される通り、照射されたマウスは、５ｍｇ／ｋｇの単回投与でのｐ２ＴＡペプチドの注入を受け、ヒトの等価用量は０．４ｍｇ／ｋｇである。

こうして、一部の具体的実施形態において、本明細書中に定義されている用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、前記単離ペプチドが、それを必要としている対象の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約５．０ｍｇの量のペプチド、例えば対象の体重１ｋｇあたり０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０または５．０ｍｇのペプチドの量で投与されるものである。

本発明中で使用される「それを必要としている対象」という用語は、本明細書中に定義されている非病原体関連炎症性疾患を患う、例えばラット、マウス、イヌ、ネコ、モルモット、霊長類及びヒトなどの温血動物を意味する。それを必要としている対象という用語は、同様に、少なくとも１線量の電離放射線に曝露される前及び／または後の対象にも関係する。本明細書中に定義されているそれを必要とする対象は同様に、その生活の質を改善する目的で、放射線誘発性の副作用にすでに悩んでいるあらゆる対象をも包含している。

短ペプチドは、循環中の短い半減期を有し数分以内で消滅するという事実にも関わらず、添付の実施例で実証されている通り、長期にわたる効能を示した。この注目に値する結果は、ラットにおけるアジュバント関節炎モデルにおいて、ペプチドによる毎日の治療が終結した後２週の期間にわたり症候が逆戻りせず減退し続けさえしたが、一方ステロイドでの治療の終結は結果として最大臨床スコアに至るまでの即座のリバウンドをもたらしたという発見事実によって裏付けされている。

その上、２つのペプチドについても長期効能を調査すると、３日の間隔で投与した場合にコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）及び実験的自己免疫脳炎において、疾病症候の軽減が得られた。ファージ提示ペプチドｐｅｌ２−ｐａｌは、ＣＩＡにおける長期効能についても試験されたが、ここでそれは、５日の間隔で与えられた場合でさえ症候の軽減を示した。

したがって、一部の実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、前記単離ペプチドを１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回という割合で１、２、３または４週という１つ以上の同一のまたは異なる治療期間で投与され、ここで前記治療期間は連続的であるかまたは、１日または数日、例えば２、３、４、５または６日間、または１週または数週、例えば１、２、３または４週または１、２、３カ月以上の非治療間隔により互いに離隔されている。

他の実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、単一用量で投与される。

さらなる実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、治療上有効な量の単離ペプチドを１日一回という割合で、１、２、３または４週の１つ以上の治療期間で投与される。

さらなる実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は長期投与向けである。

なお、さらなる実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、前記投与が、１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回のものである。

投与の具体的用量、経路及び頻度は、優れた医療的実践方法に従って、主治医により決定される。

一部の実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたはそのいずれかの官能的誘導体またはフラグメントまたは医薬組成物は、少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質と組合せた投与向けである。

本明細書中に定義されている「追加の治療上活性な作用物質」という用語は、本明細書中に定義されている非病原体関連炎症性疾患のいずれかを患う、必要とする対象に対して投与される追加の標準治療作用物質を意味する。

例えば、追加の治療上活性な作用物質は、化学療法及び抗炎症剤（例えばステロイド及び非ステロイド性抗炎症薬）であってよいが、これらに限定されない。放射線誘発性腸炎の場合、追加の治療上活性な作用物質には、オンダンセトロン、ロペラミド、ジフェノキシレート及びアトロピン、コレスチラミン、スクラルファート及び外用副腎皮質ホルモン剤（ヒドロコルチゾン）が含まれてよいが、これらに限定されない。

したがって、一部の実施形態において、本明細書中に定義されている追加の治療上活性な作用物質は、ステロイド、非ステロイド性抗炎症剤または免疫抑制剤である。

他の一部の実施形態において、本開示に係る単離ペプチドまたは医薬組成物及び前記少なくとも１つの治療上活性な作用物質は、同時にまたは異なる時点で、同一のまたは異なる頻度で投与される。

さらなる実施形態において、本開示に係る単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質の投与に先立ってかまたはその後に投与される。

なお、さらなる実施形態において、本開示に係る単離ペプチドまたは医薬組成物及び本明細書中に定義されている少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は、異なる継続時間で投与される。

具体的な実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記炎症性疾病または身体条件がリウマチ性関節炎であり、前記追加の治療上活性な作用物質がアバタセプト、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１ブロッカー、ＩＬ−６ブロッカー、及び抗ＣＤ２０剤またはこれらを組合せたものである。

他の具体的実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記炎症性疾病または身体条件が多発性硬化症であり、前記追加の治療上活性な作用物質が、インターフェロンβ、コパキソン及びタイサブリまたはそれらの組合せから選択される。

さらなる具体的実施形態において、本開示に係る用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物は、前記炎症性疾患または身体条件が放射線誘発性胃腸炎であり、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は化学療法剤である。

本明細書中に定義されている「組成物」または「医薬組成物」という用語は、一般に、本開示に係るペプチドである活性作用物質及び、緩衝剤、そのオスモル濃度を調整する作用物質そして任意には当該技術分野において公知の１つ以上の薬学的に受容可能な担体、賦形剤及び／または添加剤のうちの少なくとも１つを含む。組成物中に補足的な活性成分を取込むことも可能である。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）、好適なそれらの混合物及び植物油などを含む分散媒質または溶媒であり得る。プロテアーゼ阻害物質を添加してもよい。

一部の実施形態において、本開示に係る用途のための医薬組成物は、少なくとも１つの生理学的に相容性ある添加剤、担体、希釈剤及び賦形剤を含む。

したがって、さらに本開示のさらなる一態様においては、例えばペプチドと前記添加剤、担体、希釈剤及び賦形剤の少なくとも１つとを混和させることによる、上述の非病原体誘発性炎症性疾患のいずれかの治療のための医薬組成物の調製における上述のペプチド及びその官能的誘導体のいずれか及び全ての使用が提供されている。

さらなる態様において、本開示は、それを必要とする対象における非病原体関連炎症性疾患の治療方法において、ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対して特異的に結合する単離ペプチドまたはその官能的誘導体、またはそれを含む医薬組成物を、治療上活性な量だけ前記対象に投与することを含む方法を提供している。

本開示のこの態様及び全ての態様において、前記ペプチドは本明細書中に開示されているペプチド及び本明細書中に定義されているその官能的誘導体のいずれか１つであり得る。

具体的ペプチドは、ｐ２ＴＡ（配列番号４）、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４７）、ｐ２ＴＢ（配列番号９）、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＢ−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４８）、ｐｅｌ２（配列番号１２）、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐｅｌ２−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４９）及びｐａｌ−ｐｅｌ２−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号５１）である。

同様にこの形態において開示されている方法は、放射線誘発性炎症、炎症性大腸炎（ＩＢＤ）、放射線誘発胃腸炎、薬剤誘発性炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、多発性硬化症、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、鼻炎、特発性肺線維症、腹膜炎、心血管炎症、心筋虚血、再灌流傷害、アテローム性動脈硬化症、心的外傷、２型糖尿病、網膜症、乾癬、胃腸炎、肝硬変、虫垂炎、滑液包炎、結膜炎、膀胱炎、皮膚炎、静脈炎、脈管炎、尋常性座瘡、及び骨盤内炎症性疾病の治療を意図されている。

前記薬剤誘発性炎症は、薬剤誘発性肝炎、薬剤誘発性眼炎、薬剤誘発性胃腸障害、薬剤誘発性急性潰瘍、薬剤誘発性腎不全、薬剤誘発性膵炎、薬剤誘発性腎炎、胃腸管内の化学療法誘発性炎症、及び脂漏性角化症のいずれか一つである。

本発明の方法により治療される具体的身体条件は、全身性及び／または照射部位におけるものであり得る放射線誘発性炎症である。前記放射線誘発性炎症は、胃腸管及び脾臓の炎症のうちの少なくとも１つに関連するものであり得る。

単離ペプチドまたはこれを含む医薬組成物の投与は、静脈内、筋内または腹腔内投与、髄腔内または皮下注入、経口、直腸内、経鼻、眼内及び局所投与からなる群から選択された経路によるものであり得る。

開示された方法によると、単離ペプチドは、それを必要としている対象の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約５．０ｍｇ、例えば、０．０５、０．１、０．ｌ５、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０または５．０ｍｇのペプチド量で投与され得る。前記単離ペプチドは、１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回という割合で１、２、３または４週という１つ以上の同一のまたは異なる治療期間で投与することができ、ここで前記治療期間は連続的であるかまたは、１日または数日または１週または数週または１カ月以上の非治療間隔により互いに離隔されている。前記ペプチドは同様に、単一用量で投与することができる。治療は、前記必要としている対象に対する、治療上有効な量の単離ペプチドを１日一回という割合で、１、２、３または４週の１つ以上の治療期間での投与によるものであり得る。開示されている方法は、急性炎症性身体条件のみならず、長期投与向けでもあり得る。

こうして、ペプチドまたはそれを含む医薬組成物の投与は、１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回であり得る。

放射線誘発性炎症を治療する場合、ペプチドまたはそれを含む医薬組成物は、前記対象に対して、照射から好適な時間だけ前及び／または後に投与することができる。前記ペプチドまたはそれを含む医薬組成物は、放射線療法による治療の直後または、対象がなおも放射線療法を受けている間であるかまたは放射線療法による２回の治療の間またはその後であるかに関わらず放射線療法から約３０分乃至は放射線誘発性炎症が持続している任意の時間以内に、前記対象に対して投与することができる。ペプチドまたはそれを含む医薬組成物は、前記放射線に対する曝露から約３０分後乃至は約６０分または９０分後、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、３６、４８、６０または７２時間後、４、５、６、７、１４、３２または２８日後に、前記必要としている対象に対して投与することができる。具体的には、前記対象に対する投与は、前記放射線に対する曝露後２４時間以内であり得る。

本開示によると、開示されたペプチドまたはそれを含む医薬組成物を、少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質と組合せて投与することができる。追加の治療上活性な作用物質はステロイド、非ステロイド性抗炎症剤または免疫抑制剤のうちの少なくとも１つであり得る。前記ペプチドまたは医薬組成物及び前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は、同時にまたは異なる時点で、同一のまたは異なる頻度で投与され得る。

例えばリウマチ性関節炎などの治療方法において、前記追加の治療上活性な作用物質はアバタセプト、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１ブロッカー、ＩＬ−６ブロッカー、及び抗ＣＤ２０剤またはこれらの組合せから選択される。

例えば多発性硬化症などの治療方法において、前記追加の治療上活性な作用物質は、インターフェロンβ、コパキソン及びタイサブリまたはそれらの組合せから選択される。

例えば放射線誘発性胃腸炎などの治療方法において、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質は化学療法剤である。

開示され説明されているものの、本発明が本明細書中に開示されている特定の実施例、方法ステップ及び組成物に限定されるものではなく、このような方法ステップ及び組成物は幾分か変動してよいということを理解すべきである。同様に、本明細書中に使用されている用語は、特定の実施形態のみを描写する目的で使用されており、限定的な意図のあるものではなく、本発明の範囲は、添付のクレーム及びその等価物によってのみ限定される、ということも理解すべきである。

本明細書及び添付されているクレームにおいて使用される単数形態「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、内容が明らかに別段の指示を行なっているのでないかぎり、複数の指示対象も含まれることを指摘しておかなければならない。

本明細書及びそれに続く実施例及びクレーム全体を通して、前後関係がそれを必要とするのでないかぎり、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びその変形形態，例えば「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」という用語は、表明された整数またはステップまたは一群の整数またはステップの包含を暗示し、他の任意の整数またはステップまたは一群の整数またはステップの除外を暗示するものではない。

以下の実施例は、本発明の態様を実施するにあたって発明人らが利用する技術を代表している。これらの技術は本発明の実践のための好ましい実施形態を例示するものの、当業者であれば、本開示に照らして、本発明の精神及び意図された範囲から逸脱することなく、多くの修正を加えることが可能であることを認識することになると理解すべきである。

さらなる詳細なく、当業者であれば、上述の説明を用いて、本開示を最大限に活用することができると考えられる。したがって、以下の好ましい具体的実施形態は、単なる例示であって、いかなる形であれ請求対象の発明を限定することはないとみなされるべきである。

一般的には、基本的にＳａｍｂｒｏｏｋ ＆ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１中に記載の通りに、本明細書中では具体的に説明されていない、当該技術分野において公知の標準的分子生物学プロトコルに従う。

一般的には、基本的にＰｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ刊のさまざまな著者及び編著による「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」シリーズ中にある、本明細書中では具体的に説明されていない、当該技術分野において公知の標準的医薬品化学方法に従う。

実験手順
ペプチド合成
本明細書中に記載のペプチドを、フルオロニル−メトキシカルボニル化学を用いて合成し、分割し、側鎖をトリフルオロ酢酸で脱保護した。高圧液体クロマトグラフィーにより、ペプチドの純度は９５％超であり、その分子量は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法で確認した。ペプチドには、生物学的検定におけるさらに大きいプロテアーゼ耐性のため両末端でＤ−アラニン（Ｄ−Ａｌａ）が接合され（５、６）、表面プラズモン共鳴分光法のためシステイン（Ｃｙｓ）が接合されていた。指示があった場合、Ｄ−Ａｌａの代りに、ペプチドのＮ末端に対しパルミトイル−リシン（ｐａｌ）が連結された。ｐｅｌ２のＣＤ２８親和力選択のために、Ｍ１３ＫＥのＰｈＤ−ｌ２組合せファージ提示ライブラリー（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）が、メーカーの指示事項に従って、固定化したＣＤ２８−Ｆｃ上にパンされた。４回のパニングの後、ファージをニトロセルロース膜上に固定化し、０．５□ｇ／ｍｌの西洋ワサビペルオキシダーゼ共役ＣＤ２８−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）共とインキュベートした。１０％超の選択されたファージがＣＤ２８−Ｆｃを密に結合させた。

ペプチド配列
ＣＤ２８の細胞外ドメインの残基８〜１５に対応するＳＰＭＬＶＡＹＤのアミノ酸配列（配列番号４で表示）を有するペプチドを、上述の通り、その両方の末端でＤ−Ａｌａアミノ酸残基と接合させ、これを本明細書中では配列番号４７で表示し「ｐ２ＴＡ」と呼ぶ。ＣＴＬＡ−４ホモ二量体界面の細胞外ドメインの残基８〜１５に対応するＰＡＶＶＬＡＳＳのアミノ酸配列（配列番号９で表示）を有するペプチドを、その両方の末端でＤ−Ａｌａアミノ酸残基と接合させ、これを本明細書中では配列番号４８で表示し、「ｐ２ＴＢ」と呼ぶ。配列番号１２で表示されるアミノ酸配列ＳＨＦＴＨＮＲＨＧＨＳＴを有するペプチドを、以下で詳述する通りＣＤ２８の細胞外ドメインに対する親和力のため、１２−ｍｅｒファージ提示ライブラリーから選択した。このペプチドを、その両方の末端でＤ−Ａｌａアミノ酸残基と接合させ、これを本明細書中では配列番号４９で表示し、「ｐｅｌ２」と呼ぶ。さまざまなペプチドを同様に、そのＮ末端でＤ−Ａｌａに代ってパルミトイル−リシン（ｐａｌ）と接合させた。配列番号５０及び配列番号５１は、それぞれペプチドｐ２ＴＢ及びｐｅｌ２のＮ末端のパルミトイル−リシンを表示し、これらのペプチドを本明細書中ではそれぞれｐ２ＴＢ−ｐａｌ及びｐｅｌ２−ｐａｌと呼ぶ。

サイトカイン発現の誘発
健康なヒトドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）上で分離し、５０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地で２回洗浄し、４×１０^６細胞／ｍｌの密度で再懸濁させ、２％のウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、１０ｍＭの最小必須培地（ＭＥＭ）非特異性アミノ酸、１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．２、５×１０^５Ｍの２−メルカプトエタノール、１００ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン及び５μｇ／ｍｌのナイスタチンを補足したこの培地内で培養した。誘発物質として、マウス抗ヒトモノクローナル抗体αＣＤ３（クローンＵＣＨＴ１；１００ｎｇ／ｍｌ）とαＣＤ２８（クローン３７４０７；２．５μｇ／ｍｌ）（両方共Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製）を使用した。培地中のサイトカインを、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてメーカーの指示事項に従って決定した。

表面プラズモン共鳴分光法
ｐＨ４．０の１０ｍＭの酢酸ナトリウム（Ｎａ）中で１０〜２００μｇ／ｍｌまでペプチドを希釈し、それぞれアミノ−チオールカップリングキット（ＢＩＡｃｏｒｅ）を用いて、ＣＭ５センサーチップ（ＢＩＡｃｏｒｅ）上で固定化した；固定化量は５００〜１０００共鳴単位であった。いかなるマストランスポート制限も示さない条件下で、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３．４ｍＭのＥＤＴＡ及び０．００５％の界面活性剤Ｐ２０中で２０μｌ／分で、分析物を注入した。再生には、５０ｍＭのリン酸を用いた。ＢＩＡｃｏｒｅ３０００計器の中において２５℃で速度論的分析を実施し、結合信号から、対照フローセル由来の信号を演繹した。分析物曲線は、デュプリケートで作成した；代表的結果が示されている。ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を対照として用いた。ＣＤ２８の１５２アミノ酸細胞外ドメインに対するＩｇＧ−Ｆｃドメインの融合は、以下で説明する通りに実施した。

Ｂ７−２発現ベクター
Ｂ７−２を発現するベクターを、Ｖｅｒｓｏ ＲＴ−ＰＣＲキット（ＡＢｇｅｎｅ）を用いて全ヒトＰＢＭＣ ＲＮＡからヒトＣＤ８６（ＮＭ＿１７５８６２）のｃＤＮＡ合成により生成した。ＣＤ８６ｃＤＮＡは、リン酸化ＰＣＲプライマー（５’−ＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＣＴＴＧＣＡＣＡＧＧＧＴ）（配列番号５３で表示）及び５’−ＣＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣＡＧＧＴＣＡＴＧＡＧＣＣＡＴＴＡＡＧＣ（配列番号５４で表示）で、ＫＯＤポリメラーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ）を用いて生成した。ＳａｌＩＩ及びＮｏｔＩで消化されＧＦＰ領域が欠如したｐＥＧＦＰ−Ｎ３ＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の中に、Ｆｏｓｔ−Ｌｉｎｋ ＤＮＡ Ｌｉｇａｔｉｏｎキット（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ）を用いてＰＣＲ産物を挿入した。Ｃ末端でＧＦＰまたはＣｈｅｒｒｙに融合したＢ７−２を発現するベクターを、リン酸化ＰＣＲプライマー５’−ＴＡＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＧＡＣＴＧＡＧＴＡＡＣＡＴＴＣ（配列番号５５で表示）及び５’−ＧＴＣＣＧＣＧＧＴＧＡＡＧＣＡＴＧＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＴＣＧ（配列番号５６で表示）を用いて、Ｂ７−２ｃＤＮＡベクター鋳型から生成し、Ｂ７−２終止コドンを欠失させた。ＸｈｏＩ及びＳａｃＩＩでの消化時点で、ＰＣＲ産物を、ｐＥＧＦＰ−Ｎ３ＤＮＡまたはｐｍＣｈｅｒｒｙ−Ｎ１ＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のいずれかの中に挿入した。Ｂ７−２Ｃ／Ｃｈｅｒｒｙベクターを、プライマー５’−ＧＴＣＴＣＴＣＧＴＣＣＴＴＣＣＧＧ（配列番号５７で表示）及び５’−ＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＴＣＡＡＣＣＴＧ（配列番号５８で表示）を用いて、Ｂ７−２／Ｃｈｅｒｒｙ鋳型から生成した。上述のプライマーを、下表２に列挙する。

ＣＤ２８／Ｂ７−２相互作用
細胞上でのＢ７−２のＣＤ２８への結合に対するｐ２ＴＡの効果を検定するために、Ａｒａｄら、２０１１（３）内に記載された通りに、またはＧＦＰを発現する空ベクターを用いて、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトして、細胞表面ＣＤ２８を発現させた。３６時間後に、（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）の不在下または存在下で０．２μｇ／ｍｌの可溶性Ｂ７−２と共に４５分間細胞をインキュベートした。低温リン酸緩衝生理食塩水で３回洗浄した後、細胞を溶解させた。（ブラッドフォード検定により決定される）全細胞タンパク質の等量を、１０％のＰＡＧＥ及びウェスタンブロット法に付して、細胞によるＢ７−２の結合及びＣＤ２８の発現を示した。逆に、細胞表面Ｂ７−２を発現させるためにＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクトすることによって、細胞上のＢ７−２へのＣＤ２８の結合に対するｐ２ＴＡの効果を検定した。３６時間後に、（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）の不在下または存在下で、０．２μｇ／ｍｌの可溶性ＣＤ２８と共に４５分間、細胞をインキュベートした。上述の通り３回洗浄した後、細胞を溶解させ、全細胞タンパク質の等量を、１０％のＰＡＧＥ及びウェスタンブロット法に付して、細胞によるＣＤ２８の結合及びＢ７−２の発現を示した。

フローサイトメトリー検定のためには、細胞外リガンド結合ドメインを無傷の状態に残すＣＤ２８／ＧＦＰ（３）及びＢ７−２／Ｃｈｅｒｒｙ融合タンパク質を発現するベクターを使用した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を別個にトランスフェクトしてＣＤ２８／ＧＦＰ（緑色）及びＢ７−２／ＣｈｅｒｒｙまたはＢ７−２Ｃ／Ｃｈｅｒｒｙ（赤色）を発現させ、１０ｍＭのＥＤＴＡを添加した後、各々１０^５細胞ｍｌ^−１の濃度で室温にて２時間（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）の不在下または存在下で同時インキュベートした。細胞集団間のシナプス形成をフローサイトメトリー（Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｏｎｙ）により分析して、ＦｌｏｗＪｏ ｖＸ．０．６ソフトウェアを用いて緑色及び赤色について陽性の事象の百分率を評定した。

可溶性Ｂ７−２及びＣＤ２８
マウス骨髄腫中で発現されたＢ７−２−Ｆｃ及びＣＤ２８−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、Ｃ末端ヒトＩｇＧ１ Ｆｃに融合された成熟ヒトリガンドの細胞外２０〜２３９及び１９〜１５２アミノ酸ドメインをそれぞれ含み、Ｆｃドメイン内でジスルフィド連結されたホモ二量体である。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより判断された可溶性リガンドの純度は９５％超であった。

アジュバント関節炎モデル
１日目に、アジュバント関節炎の誘発のための認められたモデルである、不完全フロインドアジュバント０．１ｍｌ中に懸濁した１ｍｇのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＭＴ）ＨＲ３７（ＤＩＦＣＯ−Ｃａｔ．Ｎｏ．２３１１４１）を、雌のルイスラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｓｒａｅｌ産、生後８週目）の尾の基部に皮下（ＳＣ）注射した。ペプチド、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）またはデキサメタゾンを静脈（ＩＶ）注射した。毎週ラットの体重を計り、全身健康状態を書き留めた。発病について毎日検査することによりラットを監視し、発病があれば記録した。一肢あたり１〜４の測度で関節の腫張により、臨床スコアを決定し、動物一匹あたりの最大合計スコアは１６に達した。

コラーゲン誘発性関節炎のモデル
雄のＤＢ１マウス（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｓｒａｅｌ産 生後８週目）を用いて、マウスの尾の基部内に、１．５ｍｇ／ｍｌの完全フロインドアジュバントエマルジョンと１：１で混合した０．１モルの酢酸中に溶解させた子牛の関節由来のＩＩ型コラーゲン０．５ｍｇを含む混合物０．０５ｍｌを０日目と２１日目にＳＣ注射することによりコラーゲン誘発性関節炎を惹起した。発病から終結まで毎日、ペプチド、ＰＢＳまたはデキサメタゾンを投与した。毎週マウスの体重を計り、その全身健康状態を書き留めた。発病について毎日検査することによりマウスを監視し、発病があれば記録した。一肢あたり１〜４の測度で関節の腫張により臨床スコアを決定し、動物一匹あたりの最大合計スコアは１６に達した。

実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）モデル
生後８週目の雌のＣ５７Ｂｌａｃｋ／６マウス（Ｈａｒｌａｎ）を使用した。死滅させたＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ＨＲ３７（ＤＩＦＣＯ−Ｃａｔ．Ｎｏ２３１１４１）を４ｍｇ／ｍｌの濃度で含む完全フロインドアジュバント懸濁液と混合した最終濃度２．５ｍｇ／ｍｌの溶液を達成するために、ＰＢＳ中に逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）精製済みの凍結乾燥された粉末を溶解させることによって、各接種セッションに先立ち、ＭＯＧペプチド３５−５５（Ｓｉｇｍａ）溶液を新たに調製した；０日目に、マウスの右脇腹にそして７日目に左脇腹に、この溶液を２００μｌ注射した。０日目と２日目に、百日咳毒素（２００ｎｇ）を、腹腔内（ＩＰ）注射した。マウスの背中にペプチドまたはＰＢＳをＳＣ注射した。ソルメドロール（ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ５００ｍｇ、Ｐｆｉｚｅｒ）をＩＶ注射した。毎週マウスの体重を計り、その全身健康状態を書き留めた。発病について毎日検査することによりマウスを監視し、発病があれば記録した。麻痺状態を観察することによって脳炎スコアを測定した：スコア１、尾部の麻痺；スコア２、後肢の麻痺；スコア３、前肢の麻痺；スコア４、全身の麻痺；スコア５、死亡。

薬物動態検定
質量分光学的検定と共に逆相液体クロマトグラフィーにより分析を実施した。温度制御型オートサンプラーを伴うＡｇｉｌｅｎｔ １１００ＭＳＤシステムを使用した。このシステムは、精製された（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）（分子量１，０３７．２ｇ／ｍｏｌ、Ｂａｃｈｅｍ）及びブランクマウス血漿（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｓｒａｅｌ）を基準として使用して較正された。

ＧＬＰ毒性学研究
医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）の指針に従って、マウス及びブタにおけるｐ２ＴＡでの非臨床毒性学、免疫毒性学及び神経毒性学研究を実施した。

統計的方法
各動物モデルについて、各ペプチド治療グループ及び未治療グループを比較するペアワイズ比較を実施した。経時的な傾向の有意性、研究グループ間の差異そして時間と治療の間の相互作用を査定するために、データに対して反復測定ＡＮＯＶＡモデルを適用した。傾向の有意性及び相互作用を査定するためには、グリーンハウス−ガイザー試験を使用した。試験は両側であった。Ｐ≦０．０５が統計的に有意であるとみなされた。

照射実験
マウス
Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から、生後８週目のＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊ系統の雄のマウスを得た。マウスには、げっ歯類用食餌（Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ，ＷＩ）及び水を不断で与えた。居住環境及び実験は、機関動物愛護及び使用委員会の承認を得て実施した。２つのマウス近交系ＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊは、その放射線感受性が生まれつき異なることを理由として、この研究のために選択された。具体的には、ＢＡＬＢ／ｃマウスの空腸陰窩細胞は、Ａ／Ｊ動物のものよりも放射線感受性が高いことが発見された。８匹の動物を８Ｇｙの全身照射に曝露し、ここでそのうち４匹に、照射から２４時間後に（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）ペプチドを注射して（「ＲＰ」と呼ばれるグループ）、（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）ペプチドが放射線の効果を緩和できるか否かを評価した。８Ｇｙの全身照射に曝露されペプチドでの治療を受けなかったマウスのグループを「Ｒ」と呼び、偽照射を受けたマウス（対照）を「Ｃ」と呼び、偽照射を受け（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）ペプチド５ｍｇ／ｋｇを受けたマウスを「Ｐ」と呼んだ。照射を受けたマウスの血漿及び組織中の顕著なＩＬ−６及びＣＯＸ−２の発現に関連する１つの時点である照射後７日目に、マウスを屠殺した。

照射手順
各系統の８匹のマウスに、９５、７ｃＧ／分の線量速度で、８Ｇｙのセシウム１３７（Ｃｓ−１３７）ガンマ線の単回全身放射線線量を与えた（Ｂｅｓｔ Ｔｈｅ ｒａｔｒｏｎｉｃｓ，Ｏｔｔａｗａ，Ｃａｎａｄａ）。偽照射動物は同じ要領で処置したが、放射線源には曝露せず、対照動物として用いた。２４時間後、偽照射マウス及び８Ｇｙ照射マウスに（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）ペプチド（５ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈注射を介して注入した。ＣＯ_２窒息とそれに続く頸椎脱臼により、照射から７日目（すなわちペプチド注射から６日後）に、動物を屠殺した。

照射されたマウスにおける炎症促進性メディエータの測定
屠殺直後に、心臓内穿刺により血液試料を収集した。希釈した血漿（１：３）中のインターロイキン６（ＩＬ−６）の濃度を、特異的ＥＬＩＳＡキット（ＩＬ−６，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて決定した。１：２０，０００希釈した血漿試料中のフィブリノゲン濃度を、特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｎｓｕｌｔａｎｔｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ）用いて決定した。標準として、組換えマウスＩＬ−６及びフィブリノゲンを使用した。

照射されたマウスにおける免疫組織化学
小腸の空腸中部（ｍｉｄ−ｊｅｊｕｎｕｍ）及び脾臓組織を切開し、１０％の緩衝ホルマリン中で定着させ、パラフィン中に包埋し、４μｍの薄い切片にした。ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）でスライドを染色し；ＣＯＸ−２、サイクリンＤ１及びマクロファージマーカーＦ４／８０に対して向けられた所内開発の抗体を用いて、Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｏｕｓｅ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙで免疫組織化学を実施した。ＴｉｓｓｕｅＧｎｏｓｔｉｃ顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ，Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、スライドを画像化した。免疫組織化学の結果の定量化は、ＨｉｓｔｏＱｕｅｓｔソフトウェアを用いて行なった。

照射されたマウス小腸の組織病理学的分析
Ｈ＆Ｅ染色された空腸スライドを用いた各周囲に存続する陰窩の数及び絨毛の高さの測定により、腸内損傷を査定した。陰窩の底面から陰窩−絨毛接合部までの絨毛の高さを測定した。存続する陰窩の数は、存続する陰窩が少なくとも１０個の上皮細胞、少なくとも１つのパネート細胞及び管腔を含んでいなければならないという基準を用いて決定した。各グループ内でマウス一匹につき４つの周囲を評定した。存続する陰窩の生存能力を、サイクリンＤ１の免疫組織化学検出によって確認した。

マウスの空腸における活性化されたマクロファージマーカーＦ４／８０の免疫組織化学
照射から７日後に、空腸組織を収集し、パラフィン内に包埋した。定着及び処理の後、Ｆ４／８０抗体で空腸の断面を免疫染色し、組織面積１ｍｍ^２あたりのＦ４／８０陽性細胞の数を、ＨｉｓｔｏＱｕｅｓｔ画像解析ソフトウェアを用いて計数した。棒は、各グループ内のマウスの組織切片についての平均±ＳＥＭを表わす。^*ＲグループとＲＰグループの間の統計的に有為な差異（＜０．０５）。

抗体
西洋ワサビペルオキシダーゼ共役ヤギ抗マウスＩｇＧまたはロバ抗ヤギ（ＫＰＬ）マウスモノクローナルαＣＤ２８（クローン３７４０７）、αＣＤ３（クローンＵＣＨＴ１）、ヤギポリクローナル抗ＣＤ２８及び抗Ｂ７−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）抗体を使用した。

データ分析
グループ内の全ての照射された（または偽照射された）動物から収集したデータをプールし、平均＋／−ＳＥＭとして提示した。分散分析及びｔ−検定により、統計的分析を実施した。０．０５未満のＰ値は、統計的有意性を示していた。

実施例１
ＣＤ２８シグナル伝達の阻害
上述の通り、短ペプチドは、例えば毒素及び細菌などの病原性外部刺激により誘発されるＣＤ２８シグナル伝達を防止できることが報告された。具体的には、ＣＤ２８ホモ二量体界面のオクタペプチド模倣体であるペプチドｐ２ＴＡが、生体内でスーパー抗原によるＣＤ２８の係合を防止することが示されてきた。したがって、以下で説明する通り、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４ホモ二量体界面のペプチド模倣体について、ＣＤ２８シグナル伝達の阻害が第１に検査された。

アミノ酸配列ＳＰＭＬＶＡＹＤ（配列番号４で表示）及びＰＡＶＶＬＡＳＳ（配列番号９で表示）を有するオクタペプチド及び上述の通りに調製したアミノ酸配列ＳＨＦＴＨＮＲＨＧＨＳＴ（配列番号１２で表示）を有するペプチドｐｅｌ２を、両端でＤ−Ａｌａの残基により接合させた。本明細書中、得られたペプチドを、配列番号４７（（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ））、配列番号４８（（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＢ−（Ｄ−Ａ））及び配列番号４９（（Ｄ−Ａ）−ｐｅｌ２−（Ｄ−Ａ））と表示する。

表１中に示されている通り、ヒトＰＢＭＣにおいて、ペプチドｐ２ＴＡ、ｐ２ＴＢ及びｐｅｌ２（それぞれ配列番号４７、４８、４９で表示）は、ＩＬ２及びＴＮＦ−αのαＣＤ３媒介誘発を阻害しなかった。さらに、これらのペプチドは、Ｔｈ１サイトカインＩＦＮ−γ（図２Ａ）のαＣＤ３媒介誘発を阻害せず、それらがＴ細胞レセプタを介したシグナル伝達を遮断しないことを示した。

しかしながら、これらのペプチドの各々は、それぞれ図２Ｂ、図２Ｃ及び図２Ｄに示されている通り、αＣＤ２８と共にαＣＤ３によってサイトカイン分泌が誘発された場合、ＩＦＮ−γ、ＩＬ２及びＩＮＦ−αの産生を強力に阻害した。図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃ中に示されている通り、これらのペプチドは、それ自体、それぞれＩＦＮ−γ、ＩＬ２またはＴＮＦ−αを有意なレベルで惹起しなかった。こうして、これらのペプチドは、ＣＤ２８を通して形質導入された場合、炎症性サイトカイン応答のためのシグナル伝達を阻害する。

実施例２
ＣＤ２８に対するペプチドの結合
上述されかつ図４に示されている通りに行なわれたプラズモン共鳴分光法分析によって示されるように、固定化したｐ２ＴＡ、ｐ２ＴＢ及びｐｅｌ２（それぞれ配列番号４７、４８、４９）は、各々、ＩｇＧ１−Ｆｃ二量体（ＣＤ２８−Ｆｃ）に融合したその１５２−アミノ酸細胞外ドメインで構成される可溶性ＣＤ２８に直接結合した。いずれのペプチドも並行して研究したＩｇＧに対する親和力を示さなかったことから、この結合は特異的であった（図５）。データは、ミクロモル範囲内でのＣＤ２８−Ｆｃに対するｐ２ＴＡ、ｐ２ＴＢ及びｐｅｌ２（それぞれ配列番号４７、４８、４９）の結合についての明らかなＫ_Ｄを生み出した。

実施例３
ｐ２ＴＡはＢ７−２及びＣＤ２８共刺激リガンド間の相互作用を減衰させる。
ＣＤ２８二量体界面模倣体ペプチドｐ２ＴＡは、スーパー抗原に結合することによってそれがＣＤ２８に対して結合することを妨げそれにより有害な病原体誘発性炎症性サイトカイン応答（３）の誘発を妨げるスーパー抗原毒素アンタゴニストとして設計された。したがって、図４Ａに提示されている結果、すなわちｐ２ＴＡがＣＤ２８に直接結合するという発見は予想外であった。

当該技術分野において公知である通り、Ｂ７−２／ＣＤ２８共刺激軸の形成は、炎症性サイトカイン応答を結果としてもたらす完全Ｔ細胞活性化にとって決定的に重要な意味をもつ。ｐ２ＴＡのＣＤ２８に対する結合がＢ７−２と相互作用するその能力に影響を及ぼし得る可能性を検討するために、ＣＤ２８及びＢ７−２を各々別個に細胞の細胞表面上で発現させ、Ｂ７−２及びＣＤ２８の結合に対するｐ２ＴＡの効果を研究した。この戦略により、Ｂ７−２／ＣＤ２８係合の寄与を隠すと思われる、ＭＨＣ−ＩＩ／ＴＣＲ相互作用のみならず多くの共刺激リガンド対（ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、Ｂ７−１、Ｂ７−２など）が関与する、抗原提示細胞とＴ細胞との間のシナプス形成の基礎をなす多数のリガンド−レセプタ相互作用の不在下でのＢ７−２／ＣＤ２８の相互作用を監視することができた。

意外にも、図６Ａに示されている通り、ｐ２ＴＡ（配列番号４７）は、細胞表面ＣＤ２８に対する可溶性Ｂ７−２の結合を強く阻害した。さらに図６Ｂに示される通り、細胞表面Ｂ７−２に対する可溶性ＣＤ２８の結合は、ｐ２ＴＡにより１桁分阻害された。ｐ２ＴＡのこの阻害活性は、ｐ２ＴＡのアミノ酸配列のスクランブリングによって確認される通り、配列特異的であった。スーパー抗原、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）に直接結合するｐ２ＴＡの能力を強く損ないマウスを致死的なＳＥＢ抗原投与から防御すること（３）が以前に示された、配列番号５２と表示される（Ｄ−Ａ）ＡＳＭＤＹＰＶＬ（Ｄ−Ａ）に対する配列番号４７と表示されるｐ２ＴＡ（すなわち（Ｄ−Ａ）ＳＰＭＬＶＡＹＤ（Ｄ−Ａ））のアミノ酸配列のランダムスクランブリングは同様に、細胞表面Ｂ７−２に対するＣＤ２８の結合を阻害する能力の喪失によって示される（図７）Ｂ７−２／ＣＤ２８の相互作用を阻害するｐ２ＴＡの能力も完全に無効にした。

次に、フローサイトメトリーを用いて、自らの表面上でそれぞれＢ７−２及びＣＤ２８を発現する細胞間で発生するＢ７−２／ＣＤ２８シナプス形成をｐ２ＴＡが減衰させることの有効性を確認した（図６Ｃ）。ＣＤ２８を結合できないＢ７−２のスプライス変異であるＢ７−２Ｃは、特異性を実証する有意な細胞間シナプス形成を裏付けることができなかった。注目すべきことに、フローサイトメトリーは単一の細胞間Ｂ７−２／ＣＤ２８対により形成されたシナプスと多数の対により支持されるシナプスとを区別せず、このためそれは可溶性コレセプタの結合ほど感応性が強くないものとなっているにせよ、ｐ２ＴＡは、すでに低いｐ２ＴＡ濃度でも観察された細胞間Ｂ７−２／ＣＤ２８シナプス形成に対する著しい阻害効果を有していた（図６Ｃ−図６Ｈ）。

実施例４
アジュバント関節炎に対するペプチドの効果
ＩＦＮ−γ、ＩＬ２及びＴＮＦ−αを含めた炎症性サイトカインの過剰産生によりひき起こされる炎症性疾病の症候を抑制するペプチドの能力を、以上で記述した通りＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対する曝露により関節炎を誘発させたラットアジュバント関節炎モデルにおいて検査した。

このモデルにおいて、症候は、約１０日後に出現し、最大の関節腫張は２０日目までに明らかとなる（図８）。図８Ａ及び図８Ｂに示されている通り、疾病の症候は、１０日目から１５日目までのデキサメタゾンによる毎日の治療により、ほぼ完全に抑制された。これとは対照的に、１日目から１５日目までのペプチド（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ）（配列番号４７で表示）または（Ｄ−Ａ）−ｐｅｌ２−（Ｄ−Ａ）（配列番号４９で表示）による毎日の治療は、１５日目までの時間的間隔にわたり、症候の阻害を示さなかった（それぞれ図８Ａ、図８Ｂ）。

しかしながら、主要な差異は、１５日目に療法を終結した時に明らかになった。最大の疾病症候に至るまでの本質的に完全かつ急速なリバウンドが、ステロイド治療された動物（すなわちデキサメタゾンにより治療された動物）において１５〜３４日目の間に発生したが、ペプチド（（Ｄ−Ａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａ））（配列番号４７で表示）または（Ｄ−Ａ）−ｐｅｌ２−（Ｄ−Ａ）（配列番号４９で表示）で治療された動物においては、症候は横ばい状態となり、漸進的なさらなる減退さえ示し、治療終結後２週間の期間にわたり持続した。各ケースにおいて、症候は、先にデキサメタゾンで治療された動物グループについて見られたものより低く減退した。

こうして、図８を見れば明らかであるように、１〜１５日目の間のペプチドｐ２ＴＡまたはｐｅｌ２（それぞれ配列番号４７または４９）による治療は、それぞれ５１％及び４１％の疾病症候の累積的軽減を生み出し、これは治療期間を超えて続いている。両方のペプチドについて、ペプチドグループと未治療グループの間の有意な差異ならびに時間と治療の間の有意な相互作用が実証された。

ペプチドの長期効能は、短ペプチドが腎臓による急速な分泌及びプロテアーゼによる攻撃のため循環中の半減期が短い（数分）ことから、意外なことであった。実際、マウスの血液循環内のｐ２ＴＡの薬物動態分析は、ペプチドが、注入１分後までに血清中で検出され、５分以内に検出不可能となることを示した（図９）。

実施例５
コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）に対するペプチドの効果
上述の通りに実施したコラーゲン曝露時点でマウスにおいて誘発された関節炎が、ヒトにおけるリウマチ性関節炎をより密に近似している。このモデルでは、症候がひとたび出現した（発病）時点で、すなわち２５日目に初めて治療を開始した。

図１０に示されている通り、疾病の臨床スコアは監視期間の終り（３３日目、すなわち発病後１１日目）でなおも増加し続けていたが、ペプチドｐ２ＴＡ（配列番号４７）は、発病から毎日与えられた場合疾病の兆候を著しく軽減し、累積的症候は、図１０Ａに示されているように、５９％減少した。

パルミトイル−リシン残渣がそのＮ末端（配列番号５０）において付加されたｐ２ＴＢ（配列番号９）及びｐ２ＴＢ−ｐａｌを３日に一度ずつだけ与えた場合のそのＣＩＡ軽減能力を次に検査した。図１０Ａに示す通り、この治療は、それぞれ３９％及び３４％だけ累積的疾病症候を軽減する結果となった。これらの結果は、極めて有意であった。

ペプチドの長期効能は、図１０Ｂに示された独立した実験により強化され、ここで（配列番号５１で表示されるアミノ酸配列パルミトイル−リシン−ＳＨＦＴＨＮＲＨＧＨＳＴを有する）ｐｅｌ２−ｐａｌペプチドが、３日に一回与えられた場合３１％だけ、５日もの間隔を置いて与えられた場合２７％だけ、疾病の症候を改善した。

ペプチドグループと未治療グループについての得られた結果の差異ならびに時間と治療の間の相互作用を共に考慮すると、図１０に報告されている結果は極めて有意であった。

実施例６
実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）に対するペプチドの効果
マウスにおけるＥＡＥは、多発性硬化症の実証済みのモデルである。このモデル系において、症候は、疾病誘発から約１０日後に出現し、３０日目まで増加する（例えば図１１Ａを参照のこと）。ＥＡＥを上述の通りにマウスにおいて誘発した。

ＥＡＥモデルにおけるペプチドの効果を調べるため、ペプチドまたはステロイドソルメドロールを上述の通りに１日目からＥＡＥ誘発されたマウスに対し毎日投与した。図１１に示されている通り、ソルメドロールは、累積的疾病症候を５０％軽減した。この標準に対して測定した場合、ペプチドｐ２ＴＢとｐｅｌ２−ｐａｌ（配列番号９及び配列番号５１で表示）は、疾病の症候に対する顕著な抑制効果を有し、累積的臨床スコアをそれぞれ５８％及び６３％だけ有意に軽減した（図１１Ａ）。

独立した実験において、図１１Ｂ、図１１Ｃ及び図１１Ｄに示されているように、ペプチドを１日一回またはより高い用量で、或いは３日に一回与えた。ソルメドロールはここでも再び累積的臨床スコアの５０％の軽減を生み出した。図１１Ｂに示されている通り、ペプチドｐ２ＴＢ（配列番号４８）は、毎日与えた場合３６％、そして３日の間隔で与えた場合３４％だけ、臨床スコアを軽減した。

ちなみに、同じ用量で投与したペプチドｐ２ＴＢ−ｐａｌ（配列番号５０で表示）は、毎日与えた場合４１％そして３日に一回与えた場合３１％だけ累積的臨床スコアを軽減した。興味深いことに、ｐ２ＴＢ−ｐａｌの１日用量を５分の１にしてもなお、図１１Ｃに示す通り３８％の軽減を生み出した。

最後に、３日の間隔で与えた場合、ペプチドｐｅｌ２−ｐａｌ（配列番号５１）は、累積的症候の４８％の軽減を生み出し、これは毎日投薬について見られる効能、すなわち４２％の軽減を上回りさえする効能であった（図１１Ｄ）。これらの結果は極めて有意であり、長期効能の強力な証拠を提供している。

実施例７
全身ガンマ照射の後の血漿タンパク質に対するｐ２ＴＡペプチドの効果
以上で示した通り、電離放射線（ＩＲ）に対する曝露は、炎症性反応を促進し、これは、例えば放射線に対する曝露後の過度の胃腸（ＧＩ）炎症性応答及び肺傷害として現われる可能性がある。

照射を受けたマウスに対するペプチド（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４７で表示）の効果を、こうしてさらに、上述の通り放射線誘発性炎症の動物モデルにおいて検査した。全て炎症促進性メディエータとみなされているＩＬ−６及びフィブリノゲンのレベルに基づいて、効果を査定した。

サイトカインインターロイキン６（ＩＬ−６）は、タンパク質発現及び造血細胞産生の急性期における重要なメディエータである。図１２Ａに示されている通り、放射線に対する曝露から７日後に測定した場合、ＩＬ−６は、上述の通りの放射線に対して曝露されたマウスの血漿中で有意に増加しており、これは先の報告と整合することであった。図１２Ａは、ＩＬ−６レベルが、それぞれＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊマウスにおいて、照射を受けたマウスの血漿中で６．９倍及び８．９倍増強されたことを示している（Ｐ＜０．０５、Ｒ対Ｃグループ）。偽照射マウスに（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを注入しても、ＩＬ−６レベルに影響はなかった（図１２Ａ）。しかしながら、図１２Ａに示されている通り、照射マウスを（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）で治療すると、ＢＡＬＢ／ｃでは４０．４％、Ａ／Ｊマウスでは３１．８％だけＩＬ−６が照射マウスに比べて有意に阻害される結果となった（Ｐ＜０．０５；ＰＲ対Ｒグループ）。

図１２Ｂに示されている通り、照射を受けたＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊマウスにおけるフィブリノゲンレベルは、偽照射動物と比べてそれぞれ１．６倍及び２．５倍増大した。偽照射マウスに（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４７）ペプチドを注入しても、フィブリノゲンレベルに有意な影響はなかった。しかしながら、照射を受けたマウスにおいて、図１２Ｂに実証されている通り、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドで治療したマウス内ではフィブリノゲン血漿レベルの有意な減少が観察された。照射され（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）で治療されたマウスのフィブリノゲンレベルは、照射を受けた相対物におけるフィブリノゲンレベルの６７．５％（ＢＡＬＢ／ｃ）及び６２．９％（Ａ／Ｊ）であった（Ｐ＜０．０５：ＰＲ対Ｒグループ）（図１２Ｂ）。

実施例８
ｐ２ＴＡペプチドは、小腸を放射線誘発性損傷から保護する
全身照射の後の空腸陰窩数が動物の生存と相関関係を有することは公知である。したがって、全身照射の後の空腸陰窩の数を、規定のプロトコルに従って、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色されたスライド上で計数した。図１３Ａに示されているように、陰窩微小コロニーの数は、照射を受けた（Ｒ）マウス由来の小腸に比べて、放射線と（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチド治療を受けた（ＰＲ）マウスの小腸において有意な形で増大した。具体的には、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、微小コロニーの数は、Ｒグループ中の６．５±１．３／μｍからＲＰグループ内の１２．４±３．２／μｍまで上昇した（Ｐ＜０．０５）。Ａ／Ｊマウスにおいて、微小コロニーの数は、Ｒグループ中の７．８±１．６／μｍからＲＰグループ中の１２．１±２．１／μｍまで上昇した（Ｐ＜０．０５）。

空腸断面内の絨毛の高さは、胃腸管（ＧＩ）傷害の別の特質である。図１３Ｂに示されている通り、平均絨毛高さは、対照ＢＡＬＢ／ｃマウスについて１９２±４１μｍであり、対照Ａ／Ｊマウスについては２０８±４５μｍであった。照射を受けたマウスにおいて、平均絨毛高さは、ＢＡＬＢ／ｃマウスについては８６±２５μｍまで、Ａ／Ｊマウスについては１２２±２２μｍまで減少した。興味深いことに、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドの投与は、この放射線誘発性の効果の一部を逆転させた。図１３Ｂに示されているように、照射され（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドの治療を受けたＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊマウスの平均絨毛高さは、それぞれ１４１±２７μｍ及び１７６±４２μｍまで上昇した。（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドは、偽照射マウスの絨毛の高さに対しほとんどまたは全く効果を示さなかった。

サイクリンＤ１発現は、空腸陰窩内の細胞増殖についてのマーカーであるが、組織の恒常性の維持のための極めて重要な意味をもつ。照射を受けたマウス由来の胃腸（ＧＩ）試料は、図１４に示されている通り、（上述の通りに決定された）サイクリンＤ１陽性細胞の数の顕著な減退を示したが、この減退は、８Ｇｙ照射から２４時間後に（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを受けたＢＡＬＢ／ｃとＡ／Ｊマウスの両方においては、無視できるものであった。図１４は、照射から２４時間後に（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドを５ｍｇ／ｋｇ受けたマウスのＲＰグループ内で復元される（すなわちＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊマウスについてそれぞれ図１４Ｄ及び図１４Ｈ）Ｒグループの組織内で観察された弱いサイクリンＤ１染色（すなわち、ＢＡＬＢ／ｃ及びＡ／Ｊマウスについてそれぞれ図１４Ｃ及び図１４Ｇ）を示している。

実施例９
ｐ２ＴＡペプチドは、空腸陰窩及び脾臓における炎症性マーカーｃｏｘ−２の放射線誘発性の過剰発現を阻害する。
シクロオキシグナーゼ−２（ＣＯＸ−２）は、プロスタグランジンの産生に関与する主要な誘導酵素である。それは概して、混乱を受けていない上皮組織内では検出不能であるが、電離放射線を含めた一定数の炎症性刺激により、強くアップレギュレートされ得る（１７）。図１５及び図１６は、ＣＯＸ−２タンパク質について免疫染色された空腸及び脾臓組織の代表的なマイクロ写真をそれぞれに示す。８Ｇｙの放射線に曝露されてから７日後に、空腸（図１５）及び脾臓（図１６）は、ＣＯＸ−２発現の著しい増加を示した。顕著にも、放射線曝露から２４時間後の（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）ペプチドの単回投与が、試験した３つの組織全てにおけるこの放射線の効果を改善した。

実施例１０
小腸に対するマクロファージの動員
照射された組織内におけるマクロファージの存在の増加が指摘され、電離放射線に対する組織の炎症性応答に関連していた。小腸断面の免疫組織化学染色のためには、活性化マクロファージマーカーＦ４／８０（２６）を使用した。図１７に示されている通り、照射を受けたマウス由来の試料が、対照における３．３９＋１．０８細胞／ｍｍ２から照射を受けたＢＡＬＢ／ｃマウスにおける６．６９＋３．２０細胞／ｍｍ２まで（有意な差異無し、Ｃ対Ｒグループ）、そして対照における１．０４＋０．５２細胞／ｍｍ２から照射を受けたＡ／Ｊマウスにおける３．６８＋１．８４細胞／ｍｍ２まで（Ｐ＜０．０５、Ｃ対Ｒグループ）の、Ｆ４／８０陽性細胞の存在の増加を提示した。しかしながら、（Ｄ−Ａｌａ）−ｐ２ＴＡ−（Ｄ−Ａｌａ）で治療された照射を受けた動物は、両方のマウス系統においてＦ４／８０陽性細胞数の減少を提示した。ＲＰグループにおけるマクロファージの数は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいては０．７７＋０．３１細胞／ｍｍ２（Ｐ＜０．０５、Ｒ対ＲＰグループ）そしてＡ／Ｊマウスにおいては１．３７＋０．６８細胞／ｍｍ２（Ｐ＜０．０５、Ｒ対ＲＰグループ）であった。したがって、放射線に対する曝露から２４時間後のｐ２ＴＡペプチドの単回投与が、マウスの腸に対するマクロファージの動員の放射線誘発性の増加を補償した。

Claims (36)

1. 非病原体関連炎症性疾患の治療方法において使用するための、ＣＤ２８の結晶学的ホモ二量体界面に対し特異的に結合する単離ペプチド及びその官能的誘導体、またはそれを含む医薬組成物。
2. 前記ＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に対する前記ペプチドの結合親和力が、約０．１〜３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる、請求項１に記載の単離ペプチド。
3. 炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つのもののレベル低下及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害する、請求項１または２に記載の単離ペプチド。
4. 前記単離ペプチドが、ヒトＣＤ２８（配列番号１）内またはヒトＣＴＬＡ４（配列番号２）内の６〜１４個の連続アミノ酸残基の領域に対応するアミノ酸配列を有しており、（この領域は前記ＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面の１つ以上のアミノ酸残基及び前記ペプチドの任意の官能的誘導体を内部に有し、ここで前記官能的誘導体は、約０．１〜約３０ミクロモルのＫ_Ｄにより特徴づけられる結合親和力で前記ＣＤ２８結晶学的ホモ二量体界面に結合する能力を維持する）、前記単離ペプチドが炎症性サイトカインＩＬ２、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のうちの少なくとも１つのもののレベル低下及び／またはシクロオキシゲナーゼ２（ｃｏｘ−２）のレベル低下及び／またはＦ４／８０−陽性細胞数の減少によって決定される非病原体誘発性炎症性応答を阻害する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
5. ヒトＣＤ２８の前記領域が、配列番号１のアミノ酸残基１０〜１５または１１６〜１２１を含み、ＣＴＬＡ４の前記領域が配列番号２のアミノ酸残基１０〜１５及び１１５〜１２０を含む、請求項２〜４のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
6. 前記単離ペプチドがアミノ酸配列Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｐｒｏ（配列番号３と表示）、Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ（配列番号４と表示）、Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｖａｌ（配列番号５と表示）、Ｔｙｒ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｔｙｒ（配列番号６と表示）、Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ（配列番号７と表示）、Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｐｒｏ（配列番号８と表示）、Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ（配列番号９と表示）及びその任意の官能的誘導体からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
7. 前記単離ペプチドがアミノ酸配列Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ（配列番号１０と表示）、Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ（配列番号１１と表示）、Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ（配列番号１２と表示）、Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｉｌｅ（配列番号１４と表示）及びＴｒｐ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ（配列番号１３と表示）及びその任意の官能的誘導体からなる群から選択される、請求項１または２に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
8. 前記単離ペプチドが配列番号４で表示される前記アミノ酸配列Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐまたは配列番号４７で表示されるアミノ酸配列（Ｄ−Ａｌａ）Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ（Ｄ−Ａｌａ）を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
9. 前記単離ペプチドが、アミノ酸配列Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ（配列番号９と表示）、（Ｄ−Ａｌａ）ＰＡＶＶＬＡＳＳ（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４８と表示）及び（パルミトイル−リシン）Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号５０と表示）を含む請求項１〜６のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
10. 前記単離ペプチドが、アミノ酸配列Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ（配列番号１２と表示）、（Ｄ−Ａｌａ）Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ（Ｄ−Ａｌａ）（配列番号４９と表示）及び（パルミトイル−リシン）Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｄ−Ａｌａ）（配列番号５１と表示）からなるペプチドである、請求項１及び２のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
11. 前記炎症性疾患が、放射線誘発性炎症、炎症性大腸炎（ＩＢＤ）、放射線誘発性胃腸炎、薬剤誘発性炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、骨関節炎、紅斑性狼瘡、重症筋無力症、多発性硬化症、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、鼻炎、特発性肺線維症、腹膜炎、心血管炎症、心筋虚血、再灌流傷害、アテローム性動脈硬化症、心的外傷、２型糖尿病、網膜症、乾癬、胃腸炎、肝硬変、虫垂炎、滑液包炎、結膜炎、膀胱炎、皮膚炎、静脈炎、脈管炎、尋常性座瘡、及び骨盤内炎症性疾病のいずれか一つである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
12. 前記薬剤誘発性炎症が、薬剤誘発性肝炎、薬剤誘発性眼炎、薬剤誘発性胃腸障害、薬剤誘発性急性潰瘍、薬剤誘発性腎不全、薬剤誘発性膵炎、薬剤誘発性腎炎、胃腸管内の化学療法誘発性炎症、及び脂漏性角化症のいずれか一つである、請求項１１に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
13. 前記炎症性疾病または身体条件が、放射線誘発性炎症である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
14. 前記放射線誘発性炎症が全身性及び／または照射部位におけるものである、請求項１１に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
15. 前記放射線誘発性炎症が、胃腸管及び脾臓の炎症のうちの少なくとも１つに関連する、請求項１２に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
16. 放射線誘発性炎症の治療方法において使用するための、ＣＤ２８のホモ二量体界面に対し特異的に結合する単離ペプチド、または前記単離ペプチドを含む医薬組成物。
17. 前記単離ペプチドが配列番号４で表示される前記アミノ酸配列Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐまたは配列番号４７で表示されるアミノ酸配列（Ｄ−Ａｌａ）Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ（Ｄ−Ａｌａ）を含む、請求項１６に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
18. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、静脈内、筋内または腹腔内投与、髄腔内または皮下注入、経口、直腸内、経鼻、眼内及び局所投与からなる群から選択された経路で投与される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
19. 前記単離ペプチドが、それを必要としている対象の体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約５．０ｍｇの量で投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
20. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、前記単離ペプチドを１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回という割合で１、２、３または４週という１つ以上の同一のまたは異なる治療期間で投与され、ここで前記治療期間が連続的であるかまたは、１日または数日または１週または数週または１カ月以上の非治療間隔により互いに離隔されている、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
21. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が単一用量で投与される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
22. 前記投与が、治療上有効な量の単離ペプチドを１日一回という割合で、１、２、３または４週の１つ以上の治療期間で行なわれる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
23. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が長期投与向けである、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
24. 前記投与が、１日一回、３日に一回、５日に一回または１週に一回である、請求項２３に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
25. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、照射から好適な時間だけ前及び／または後に、前記対象に対して投与するためのものである、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
26. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物は、放射線療法による治療の直後または、対象がなおも放射線療法を受けている間であるかまたは放射線療法による２回の治療の間またはその後にあるかに関わらず放射線療法から約３０分乃至は放射線誘発性炎症が持続している任意の時間以内に、前記対象に対して投与するためのものである、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
27. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、前記放射線に対する曝露から約３０分後乃至は約６０分または９０分後、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、３６、４８、６０または７２時間後、４、５、６、７、１４、３２または２８日後に、それを必要としている対象に対して投与するためのものである、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
28. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、前記放射線に対する曝露後２４時間以内に前記対象に対して投与するためのものである、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
29. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質と組合せて投与するためのものである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
30. 前記追加の治療上活性な作用物質がステロイド、非ステロイド性抗炎症剤または免疫抑制剤である、請求項２９に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
31. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物及び前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質が、同時にまたは異なる時点で、同一のまたは異なる頻度で投与される、請求項２９または３０に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
32. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物が、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質の投与に先立ってかまたはその後に投与される、請求項２９または３０に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
33. 前記単離ペプチドまたは医薬組成物及び前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質が、異なる継続時間で投与される、請求項２９〜３２のいずか一項に記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。
34. 前記炎症性疾病または身体条件がリウマチ性関節炎であり、前記追加の治療上活性な作用物質がアバタセプト、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１ブロッカー、ＩＬ−６ブロッカー、及び抗ＣＤ２０剤またはこれらの組合せである、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の単離ペプチドまたは医薬組成物。
35. 前記炎症性疾病または身体条件が多発性硬化症であり、前記追加の治療上活性な作用物質が、インターフェロンβ、コパキソン及びタイサブリまたはそれらの組合せから選択される、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の単離ペプチドまたは医薬組成物。
36. 前記炎症性疾病または身体条件が放射線誘発性胃腸炎であり、前記少なくとも１つの追加の治療上活性な作用物質が化学療法剤である、請求項２９〜３３のいずれかに記載の用途のための単離ペプチドまたは医薬組成物。