JP2017099379A - 抗ｃｘｃｌ１３抗体およびそれを用いる方法 - Google Patents

抗ｃｘｃｌ１３抗体およびそれを用いる方法 Download PDF

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Abstract

【課題】ある種の自己免疫疾患、炎症性疾患およびがんを含むＣＸＣＬ１３発現に関連する疾患を処置するための組成物及び方法の提供。
【解決手段】ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２および３Ｃ９からなる群から選択される基準モノクローナル抗体と同じＣＸＣＬ１３エピトープに特異的に結合する単離抗原結合分子。特に、ＣＸＣＬ１３を中和する抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体。
【選択図】なし

Description

［電子的に提出した配列表の参照］
本出願とともにファイルし、ＡＳＣＩＩテキストファイルで電子的に提出した配列表（
名称：「ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ＿ａｓｃｉｉ．ｔｘｔ」；サイズ：１６，９２
３バイト；および作成日時：２０１１年４月２８日）の内容は、その全体が参照により本
明細書に組み込まれる。
恒常性Ｂ細胞誘引性ケモカイン１（ＢＣＡ−１）（他にはＣＸＣＬ１３（またはＡＮＧ
ＩＥ、ＢＬＣ、ＢＬＲ１Ｌ、ＡＮＧＩＥ２もしくはＳｃｙｂ１３）として知られる）は、
２次リンパ器官（例えば脾臓、リンパ節およびパイエル板）において濾胞樹状細胞（ＦＤ
Ｃ）およびマクロファージにより構成的に発現される。Ｇｕｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３９１
：７９９〜８０３頁（１９９８）およびＣａｒｌｓｅｎら、Ｂｌｏｏｄ１０４（１０）：
３０２１〜３０２７頁（２００４）を参照されたい。ＣＸＣＬ１３は、主に、Ｇタンパク
質共役型ＣＸＣＲ５受容体（バーキットリンパ腫受容体１）を介して作用する。ＣＸＣＲ
５は、例えば成熟Ｂリンパ球、ＣＤ４＋濾胞ヘルパーＴ細胞（Ｔｈｆ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ
細胞のわずかな部分集合および活性化扁桃腺Ｔｒｅｇ細胞上で発現される。Ｌｅｇｌｅｒ
ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：６５５〜６６０頁（１９９８）；Ｆｏｒｓｔｅｒら、
Ｂｌｏｏｄ８４：８３０〜８４０頁（１９９４）；Ｆａｚｉｌｌｅａｕら、Ｉｍｍｕｎｉ
ｔｙ３０：３２４〜３３５頁（２００９）；Ａｎｓｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０
：１１２３〜１１３４頁（１９９９）；Ｌｉｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１４
（１１）：１６４０〜１６４９頁（２００４）；およびＲ．Ｆｏｒｓｔｅｒ、Ｃｈａｐｔ
ｅｒ ｉｎ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、
２０００年８月を参照されたい。
自己抗体（自己抗原に対する抗体）生成の可能性を有するＢ細胞が作られることは、正
常な生理条件下で通常のことである。しかし、このような天然自己抗体は、広範囲の反応
性と、細胞表面抗原よりも可溶性自己抗原について強い嗜好性を示す低親和性のＩｇＭ抗
体である（例えばＤｉｃｈｉｅｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４（２）：７６５〜７
７１頁（１９８５）；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ８３：２９５
９〜２９６３頁（１９８６）を参照されたい）。自己反応性低親和性Ｂ細胞はアポトーシ
スを受け、よって、健常生物に対して危険性を示す可能性は低い。
感染がなく、正常な免疫応答の間、ＣＸＣＬ１３とその受容体ＣＸＣＲ５は、リンパ節
および脾臓中の１次濾胞へのＢ細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞のホーミング、胚中心形
成、ならびにリンパ器官形成に関与する。例えばＦｏｒｓｔｅｒら、Ｃｅｌｌ８７：１０
３７〜１０４７頁（１９９６）を参照されたい。
ＣＸＣＬ１３およびＣＸＣＲ５欠損マウスでは、組織化された濾胞の欠如により、パイ
エル板およびリンパ節の発達が損なわれることが示された。Ａｎｓｅｌら、Ｎａｔｕｒｅ
４０６：３０９〜３１４頁（２０００）を参照されたい。さらに、ＣＸＣＬ１３ノックア
ウト表現型の関係におけるＴ細胞依存性抗原を用いる免疫化は、リンパ節および脾臓にお
ける誤って配置された異常に小さい胚中心の形成を導いた（Ａｎｓｅｌら）。
慢性炎症性の環境では、異所性胚中心が患部（頻繁に非リンパ系）組織内で形成される
。濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）、Ｂ細胞および濾胞Ｔｈ細胞の間の相互作用の調節不全を伴う
これらの胚中心におけるＦＤＣによるＣＸＣＬ１３過剰発現は、自己反応性Ｂ細胞の排除
と、その後の親和性が成熟した長命の形質細胞と高親和性ＩｇＧ自己抗体を生成するメモ
リーＢ細胞との抗原により駆動される生成とを低減した（これは、自己免疫炎症性障害の
発生をもたらし得る）。例えば、Ｖｉｎｕｅｓａら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ９：８４５〜
８５７頁（２００９）を参照されたい。さらに、ある種のがんにおけるＣＸＣＲ５受容体
の過剰発現は、ＣＸＣＬ１３依存性細胞増殖および転移を促進することが報告されている
。
ＣＸＣＬ１３（ＢＣＡ−１）およびその受容体ＣＸＣＲ５の高レベル発現が、Ｈ．ｐｙ
ｌｏｒｉ誘発性胃リンパ濾胞および粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫において検
察されている。例えば、Ｍａｚｚｕｃｃｈｅｌｌｉら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ１０
４：Ｒ４９〜Ｒ５４頁（１９９９）を参照されたい。さらに、ＣＸＣＬ１３（ＢＣＡ−１
）発現は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ誘発性胃炎の全ての試料において見出された。同著。Ｈ．ｈ
ｅｉｌｍａｎｎｉｉに感染した野生型マウスの胃粘膜において、リンパ組織（ＭＡＬＴを
含む）の器官形成に関与することが知られているＣＸＣＬ１３のｍＲＮＡ発現レベルは、
非感染マウスのものよりも著しくより高かった。Ｎｏｂｕｔａｎｉら、ＦＥＭＳ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ６０：１５６〜１６４頁（２０１０）を参照され
たい。
ＣＸＣＬ１３仲介シグナル伝達経路を標的にする治療に対する必要性が、近年、より明
確になっている。このような処置についての作用機序は、例えば、ＣＸＣＬ１３とその受
容体との相互作用の遮断を含み、これは、Ｂ細胞と濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に
移動することおよび胚中心形成（例えば自己免疫疾患の場合）に干渉し、がん細胞の増殖
および腫瘍学的障害に広がる能力を阻害する。
発明の分野
本発明は、ＣＸＣＬ１３中和結合分子、例えば抗体およびその抗原結合断片、例えばヒ
ト化モノクローナル抗体、該結合分子を用いる方法、ならびにＣＸＣＬ１３発現細胞に関
連する状態および疾患を処置するための方法に関する。
本発明の一態様は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７
６、３Ｄ２および３Ｃ９からなる群から選択される基準モノクローナル抗体と同じＣＸＣ
Ｌ１３エピトープに特異的に結合する単離抗原結合分子に関する。特定の実施形態では、
抗原結合分子は、ＭＡｂ５２６１およびＭＡｂ５３７８と同じＣＸＣＬ１３エピトープに
特異的に結合する。
別の態様では、本発明は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗原結合分子であって
、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２および３
Ｃ９からなる群から選択される基準モノクローナル抗体がＣＸＣＬ１３に特異的に結合す
ることを競合的に阻害する結合分子に関する。特定の実施形態では、抗原結合分子は、Ｍ
Ａｂ５２６１およびＭＡｂ５３７８を競合的に阻害する。別の実施形態では、抗体または
その断片は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ
２および３Ｃ９からなる群から選択される。
本発明の一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的
に結合し、上記の抗体またはその断片の重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１３および配
列番号３からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含
む。別の実施形態では、抗体またはその断片の軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１５、
配列番号１７および配列番号８からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一で
あるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合
し、前記抗体またはその断片のＶＨは、配列番号１３および配列番号３からなる群から選
択される配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、抗体またはその断片のＶＬは、配列番号１５、配列番号１７および配
列番号８からなる群から選択される配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一で
あるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結
合し、抗体またはその断片のＶＨおよびＶＬは、（ａ）それぞれ配列番号１３および配列
番号１５、（ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７、ならびに（ｃ）それぞれ配
列番号３および配列番号８からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列と少なくとも９
０％同一であるアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、単離抗体またはその抗原
結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し、前記抗体またはその断片のＶＨおよびＶＬ
は、（ａ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、（ｂ）それぞれ配列番号１３およ
び配列番号１７、ならびに（ｃ）それぞれ配列番号３および配列番号８からなる群から選
択されるＶＨおよびＶＬ配列とそれぞれ２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であ
るアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し
、前記抗体またはその断片のＶＨは、配列番号４と２以下のアミノ酸置換を除いて同一で
あるＣｈｏｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）アミノ酸配列
；配列番号５と４以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＫａｂａｔ重鎖相補性決定領域
２（ＶＨ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列；配列番号６と２以下のアミノ酸置換を除いて同一で
あるＫａｂａｔ重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列；配列番号１６ま
たは９と４以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＫａｂａｔ軽鎖相補性決定領域１（Ｖ
Ｌ−ＣＤＲ１）アミノ酸配列；配列番号１０と２以下のアミノ酸置換を除いて同一である
Ｋａｂａｔ軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列；または配列番号１１
と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＫａｂａｔ軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−Ｃ
ＤＲ３）アミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結
合し、前記抗体またはその断片のＶＨは、配列番号４、５および６をそれぞれ含むＶＨ−
ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を、前記ＶＨ−ＣＤＲの１
または複数における４以下のアミノ酸置換を除いて含む。別の実施形態では、単離抗体ま
たはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し、前記抗体またはその断片のＶ
Ｌは、配列番号１６または９、１０および１１をそれぞれ含むＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−Ｃ
ＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を、前記ＶＬ−ＣＤＲの１または複数における
４以下のアミノ酸置換を除いて含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＣＸＣＬ１３がＣＸＣＬ１
３受容体に結合することを阻害する。特定の実施形態では、ＣＸＣＬ１３受容体は、ＣＸ
ＣＲ５である。別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ヒト化、霊長類化ま
たはキメラである。
本発明の別の態様は、本発明の抗体またはその断片と担体とを含む組成物を対象とする
。
本発明のさらなる態様は、抗体ＶＨポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌク
レオチドであって、前記ＶＨポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１２および配列番
号２からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一である単離ポリヌクレオチド
を対象とする。別の態様では、本発明は、抗体ＶＬポリペプチドをコードする核酸を含む
単離ポリヌクレオチドであって、前記ＶＬポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号７お
よび配列番号１４からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であり、前記Ｖ
Ｌポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する
単離ポリヌクレオチドを対象とする。
一実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、抗体ＶＨポリペプチドをコードする核酸を
含み、ここで、ＶＨポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２および配列番号１２から
なる群から選択される配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一である。別の実
施形態では、単離ポリヌクレオチドは、抗体ＶＬポリペプチドをコードする核酸を含み、
ここで、ＶＬポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７、配列番号１４および配列番号
１８からなる群から選択される配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であり
、前記ＶＬポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片は、ＣＸＣＬ１３に特異的に
結合する。
本発明のさらなる態様は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを対象とする。別
の態様は、本発明のベクターを含む宿主細胞を対象とする。本発明は、ＣＸＣＬ１３に特
異的に結合する抗体またはその断片を生成する方法であって、本発明の宿主細胞を培養す
るステップと、前記抗体またはその断片を回収するステップとを含む方法も対象とする。
本発明の別の態様は、動物においてＣＸＣＬ１３を中和するための方法であって、前記
動物に、本発明の単離抗体もしくはその断片または組成物と薬学的に許容される担体とを
含む組成物を投与するステップを含む方法を対象とする。
本発明のさらなる実施形態は、処置を必要とする動物において自己免疫疾患または炎症
性疾患またはがんを処置するための方法であって、前記動物に、本発明の単離抗体もしく
はその断片または組成物と薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与するステップを
含む方法を対象とする。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または前記炎症性疾患は
、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）または関節炎、例えば関節リウマチ
である。
本発明のさらなる態様は、動物において胃リンパ濾胞を低減または阻害するための方法
であって、前記動物に、本発明の単離抗体またはその断片と薬学的に許容される担体とを
含む組成物を投与するステップを含む方法を対象とする。本発明のさらなる実施形態は、
予防または処置を必要とする動物において粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫また
は胃もしくは十二指腸潰瘍を予防または処置するための方法であって、前記動物に、本発
明の単離抗体またはその断片と薬学的に許容される担体とを含む組成物を投与するステッ
プを含む方法を対象とする。一実施形態では、動物は、ヘリコバクター細菌に感染してい
る。一実施形態では、ヘリコバクター細菌は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉまたはＨ．ｈｅｉｌｍａ
ｎｎｉｉである。
抗体対照（マウスＭＡｂ８０１および／またはラットＭＡｂ４７０）と比較した、マウス抗ヒトＣＸＣＬ１３抗体（３Ｄ２および３Ｃ９）と組換えヒトＣＸＣＬ１３（１Ａ）、組換えマウスＣＸＣＬ１３（１Ｂ）および組換えカニクイザルＣＸＣＬ１３（１Ｃ）との結合を示す特異的ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。ＥＣ５０値を示し、これは、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いて得た（曲線をグラフ上に示す；ＥＣ５０値を生成する曲線についてのＲ２は０．９９であった）。 競合物質なしまたはＭＡｂ８０１を用いた結果と比較した、マウス抗ヒトＣＸＣＬ１３抗体（３Ｃ９および３Ｄ２）についてのヒトＣＸＣＬ１３へのビオチン化３Ｄ２の結合のパーセント阻害を示すエピトープ競合ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 天然または組換えヒトＣＸＣＬ１３（３Ａ）とのビオチン−３Ｃ９の結合および天然または組換えマウスＣＸＣＬ１３（３Ｂ）とのビオチン−３Ｄ２の結合の３Ｄ２阻害を示す捕捉エピトープ競合ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９９）。ＥＣ５０値の差を、対応のないｔ検定により分析し、Ｐ＞０．０５であることが見出された。 ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５細胞のヒトＣＸＣＬ１３誘発性移動（４Ａ）およびプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ４細胞のヒトＳＤＦ−１アルファ誘発性移動（４Ｂ）に対する３Ｄ２および３Ｃ９の影響を示すＢ細胞移動の結果を示す図である。マウスＩｇＧを陰性対照として用いた。ＭＡｂ８０１をヒトＣＸＣＬ１３移動の阻害についての陽性対照として用い、ＭＡｂ８７ＡをヒトＳＤＦ−１アルファ誘発性移動についての陽性対照として用いた。 Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６における３Ｄ２、ＭＡｂ４７０、マウスＩｇＧ（対照）またはラットＩｇＧ（対照）（５Ａ）による、そしてＳＪＬ／Ｊにおける３Ｄ２、３Ｃ９、ＭＡｂ４７０またはマウスＩｇＧ（対照）（５Ｂ）による脾細胞移動のパーセント阻害を示す図である。結果を、２回（Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６移動）の独立した実験の平均＋／−ＳＤおよび３回（ＳＪＬ／Ｊ移動）の独立した実験の平均＋／−ＳＥＭとして表す。Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６およびＳＪＬ／Ｊ移動に対する３Ｄ２の影響の比較（５Ｃ）を、対応のないｔ検定により分析し、これによりＰ値＞０．０５が得られた。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９９）。 ３Ｄ２または対照（ＭＡｂ４７０および／またはマウスＩｇＧ）による、ヒトおよびマウスＣＸＣＲ５受容体のヒトＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシス（６Ａ）およびマウスＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシス（６Ｂ）についてのＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスの結果を示す図である。１（マウスエンドサイトーシス）および０．９９４（ヒトエンドサイトーシス）に等しいＲ２値でのシグモイド用量応答曲線から算出したヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスのＥＣ５０値の比較を示す（６Ｃ）。ヒトおよびマウス受容体エンドサイトーシスに対する３Ｄ２の影響を比較するデータを、対応のないｔ検定により分析し、これによりＰ値＞０．０５が得られた。 ３Ｄ２（０日目に開始）、３Ｄ２（スコア＞１にて開始）またはマウスＩｇＧ対照で処置したマウスにおけるＥＡＥ疾患の進行（ＲＲ−ＥＡＥ−１研究）を示す図である。各データ点は、９匹のマウスから得たスコアの平均を表す。群平均（ＧＭＳ）を、一元配置ＡＮＯＶＡとその後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較事後検定とを用いることにより比較した。 ３Ｄ２（０日目に開始）、３Ｄ２（６日目に開始）、３Ｄ２（＞２日目に開始）またはマウスＩｇＧ対照で処置したマウスにおけるＥＡＥ疾患の進行（ＲＲ−ＥＡＥ−２研究）を示す図である。各データ点は、９匹のマウスから得たスコアの平均を表す。群平均（ＧＭＳ）を、一元配置ＡＮＯＶＡとその後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較事後検定とを用いることにより比較した。 ３Ｄ２またはマウスＩｇＧ（対照）処置の後の進行ループス腎炎マウスにおける腎臓病態（ＳＬＥ−１研究）を示す図である。蛋白尿スコア（９Ａ）ならびに糸球体腎炎、間質性腎炎および血管炎についての腎臓病態スコア（９Ｂ）について、各データ点は、１０回の測定の平均を表す。 ３Ｄ２およびマウスＩｇＧ（対照）処置の後の早期ループス疾患マウスにおける腎臓病態（ＳＬＥ−２研究）を示す図である。蛋白尿スコア（１０Ａ）ならびに糸球体腎炎および間質性腎炎についての腎臓病態スコア（１０Ｂ）について、各データ点は、３Ｄ２処置群からの７匹のマウスおよびマウスＩｇＧ処置群からの９匹のマウスを表す。 ループスマウス脾臓中の胚中心（ＧＣ）および１次濾胞の数に対する３Ｄ２の影響を示している組織学的切片を示す図である。３Ｄ２処置（１１Ａ）およびマウスＩｇＧ処置（１１Ｂ）ＮＺＢ／ＮＺＷＦ１マウスからの脾臓切片を、ＧＬ−７（ＧＣ染色）、Ｂ２２０抗体（Ｂ細胞マーカー）または濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）に対する抗体を用いて染色した。 ３Ｄ２で処置したループスマウスの脾臓中の１次濾胞およびＧＣサイズを示す図である。値は、群あたり５匹のマウスを用いた平均＋／−ＳＥＭとして示す。３Ｄ２で処置したマウス（「ｔｘ」）は、１次：２次（ＧＣ）濾胞の比率として表した場合に、ＧＣの数の減少（ｐ＝０．１９）（１２Ａ）およびＧＣサイズの有意な減少（ｐ＝０．０３）（１２Ｂ）に向かう傾向を示した。 ３Ｄ２可変重鎖（Ｈ１６０９）および可変軽鎖（Ｌ０２９３）のポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す図である。相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を付す。 可変重鎖Ｈ１６０９からＨ２１７７への改変（１４Ａ）および可変軽鎖Ｌ０２９３からＬ５０５５へそしてＬ５１４０への改変（１４Ｂ）を示している、キメラ３Ｄ２のヒト化についてのアミノ酸配列を示す図である。推定グリコシル化部位および相補性決定領域（ＣＤＲ）を箱で囲む。 ＭＡｂ５２６１可変重鎖および軽鎖（Ｈ２１７７／Ｌ５１４０）ならびにＭＡｂ５０８０可変重鎖および軽鎖（Ｈ２１７７／Ｌ５０５５）のポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す図である。相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を付す。 組換えヒト（１６Ａ）、カニクイザル（１６Ｂ）およびマウス（１６Ｃ）ＣＸＣＬ１３へのＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６およびヒトアイソタイプ対照の結合についての特異的ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。各データ点は、三重測定の平均を表す。ＥＣ５０値は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングから算出した（曲線をグラフ上に示す；ＥＣ５０値を生成する曲線についてのＲ２は０．９９であった）。ＮＢ＝結合なし。 天然ヒト（１７Ａ）および天然マウス（１７Ｂ）ＣＸＣＬ１３へのＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５０８０および３Ｄ２の結合についての捕捉エピトープ競合ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。各データ点は、少なくとも３回の独立した実験の１回からの二重測定の平均を表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９９）。 ＭＡｂ５２６１によるヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５（１８Ａ）およびヒト扁桃腺細胞（１８Ｂ）移動のパーセント阻害を示す図である。データは、少なくとも３回の実験の１回からの三重測定の平均＋／−ＳＥＭを表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９８〜０．９９）。 ＭＡｂ５２６１によるＳＪＬ／Ｊ（１９Ａ）およびＣ５７Ｂｌａｃｋ／６（１９Ｂ）脾細胞移動のパーセント阻害を示す図である。代表的な実験からのデータを、二重測定の平均＋／−ＳＤとして示す。 ＭＡｂ５２６１およびアイソタイプ対照によるヒトＣＸＣＲ５受容体のヒトＣＸＣＬ１３仲介内部移行のパーセント阻害を示す図である。データは、少なくとも３回の独立した実験の１回からの三重測定の平均である。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９９）。 ＭＡｂ５３７８可変重鎖（Ｈ５１８８）および可変軽鎖（Ｌ５１５３）のポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す図である。相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を付す。 ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５２６１およびＭＡｂ４７０についてのエピトープ競合ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 組換えヒト（２３Ａ）、カニクイザル（２３Ｂ）およびマウス（２３Ｃ）ＣＸＣＬ１３へのＭＡｂ５３７８、３Ｄ２およびマウスアイソタイプ対照の結合についての特異的ＥＬＩＳＡの結果を示す図である。各データ点は、三重測定の平均を表す。ＥＣ５０値は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングから算出した（曲線をグラフ上に示す；ＥＣ５０値を生成する曲線についてのＲ２は０．９９であった）。 ＭＡｂ５２６１またはＭＡｂ５３７８（２４Ａ〜Ｂ）およびＭＡｂ５３７８または３Ｄ２（２４Ｃ）による、ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５（２４Ａ）、ヒト扁桃腺細胞（２４Ｂ）およびＣ５７Ｂｌａｃｋ６マウス脾細胞（２４Ｃ）移動のパーセント阻害を示す図である。データは、少なくとも３回の実験の１回からの三重測定の平均＋／−ＳＥＭを表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９９）。 ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５２６１、３Ｄ２、マウスアイソタイプ対照またはヒトアイソタイプ対照による、ヒトＣＸＣＲ５受容体のヒトＣＸＣＬ１３仲介内部移行のパーセント阻害を示す図である。５２６１および５３７８についてのデータ点は、２回の独立した実験からの測定の平均を表す。３Ｄ２およびアイソタイプ対照についてのデータ点は、１回の実験からの三重測定の平均を表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（曲線をグラフ上に示す；Ｒ２＝０．９９）。ＮＥ＝影響なし。 ＭＡｂ５３７６、エタネルセプトまたはマウスＩｇＧ（対照）で処置したマウスにおけるコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）の疾患進行（ＣＩＡ−１研究）を示す図である。各データ点は、１０匹のマウスから得たスコアの平均を表す。群平均を、一元配置ＡＮＯＶＡとその後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較事後検定とを用いることにより比較した。 ＭＡｂ５３７８、エタネルセプト、ＭＡｂ４７０またはマウスＩｇＧ（対照）で処置したマウスにおけるコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）の疾患進行（ＣＩＡ−２研究）を示す図である。各データ点は、１０匹のマウスから得たスコアの平均を表す。群平均を、一元配置ＡＮＯＶＡとその後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較事後検定とを用いることにより比較した。 ＭＡｂ５３７８、マウスアイソタイプ対照で処置したかまたは処置していないＮＰ−ＣＧＧ免疫化マウスにおける胚中心形成（ＧＣ−１研究）を示す図である。各脾臓データ点は、３匹のマウスから測定した値の平均を表す。各リンパ節データ点は、３匹のマウスから回収したプール細胞から得た単一の値を表す。 マウスのＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染および抗体投与についての処置スケジュールを示す図である。 Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ特異的１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を、アイソタイプ対照抗体処置および抗ＣＸＣＬ１３抗体処置を含むＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスから得た全ての胃試料において増幅したことを示す図である。陽性対照（Ｐ）および陰性対照（Ｎ）も示す。 リアルタイム定量ＰＣＲにより決定した（値は、各試料中のマウスベータアクチン発現レベルに対して標準化した）、感染１カ月後（３１Ａ）および３カ月後（３１Ｂ）のＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ（ＨＨ）感染野生型（ＷＴ）マウスの胃粘膜におけるＣＸＣＬ１３のｍＲＮＡ発現レベルを示す図である。 アイソタイプ対照抗体または抗ＣＸＣＬ１３抗体処置後のＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスの胃におけるＣＸＣＬ１３ ｍＲＮＡおよびβアクチンの発現（上のパネル）を示す図である。非感染マウスの胃におけるＣＸＣＬ１３ ｍＲＮＡおよびβアクチンの発現（下のパネル）。陽性対照（Ｐ）および陰性対照（Ｎ）も示す。 Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染３カ月後のアイソタイプ対照抗体処置マウス（左上のパネル）および抗ＣＸＣＬ１３抗体処置マウス（右上のパネル）からのヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色胃試料を示す図である。下のパネルは、アイソタイプ対照抗体および抗ＣＸＣＬ１３抗体処置マウスからの胃試料中で同定された胃リンパ濾胞の数を示す。
Ｉ．定義
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、１または複数の実体のことを
いうことに注意されたい。例えば、「抗ＣＸＣＬ１３抗体」は、１または複数の抗ＣＸＣ
Ｌ１３抗体を表すと理解される。したがって、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（
ａｎ）」）、「１または複数」および「少なくとも１つの」は、本明細書において交換可
能に用いることができる。
本明細書で用いる場合、用語「腫瘍」は、悪性または良性に関わらず全ての新生物細胞
成長および増殖ならびに全てのがん性および前がん性細胞および組織のことをいう。
用語「がん」または「がん性」は、制御されない細胞成長を典型的に特徴とする哺乳動
物における生理的状態のことをいうかまたは説明する。がんの例は、それらに限定されな
いが、癌、リンパ腫および白血病を含む。
本明細書で用いる場合、用語「ポリペプチド」は、単数の「ポリペプチド」および複数
の「ポリペプチド」を包含することを意図し、アミド結合（ペプチド結合としても知られ
る）により直鎖状に連結されたモノマー（アミノ酸）で構成される分子のことをいう。用
語「ポリペプチド」は、２以上のアミノ酸の任意の１または複数の鎖のことをいい、特定
の長さの生成物のことをいわない。つまり、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリ
ゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」または２以上のアミノ酸の１もしくは複数
の鎖のことをいうために用いられる任意のその他の用語は、「ポリペプチド」の定義の中
に含まれ、用語「ポリペプチド」は、これらの任意の用語の代わりにまたは交換可能に用
いることができる。用語「ポリペプチド」は、限定することなくグリコシル化、アセチル
化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮蔽基による誘導体化、タンパク質分解切断また
は非天然アミノ酸による修飾を含むポリペプチドの発現後修飾の生成物のことをいうこと
も意図する。ポリペプチドは、自然の生物学的供給源に由来するか、または組み換え技術
により生成できるが、指定する核酸配列から翻訳される必要はない。これは、化学合成を
含む任意の方法で作製してよい。
本発明のポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以
上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１，０００以上または２，０００
以上のアミノ酸のサイズのものであってよい。ポリペプチドは、規定された３次元構造を
有してよいが、そのような構造を有する必要はない。規定された３次元構造を有するポリ
ペプチドは、折り畳まれたといい、規定された３次元構造を有さないがむしろ多数の異な
る高次構造を採用できるポリペプチドは、折り畳まれていないという。本明細書で用いる
場合、用語「糖タンパク質」は、少なくとも１の炭水化物部分（これは、タンパク質に、
アミノ酸残基、例えばセリン残基またはアスパラギン残基の酸素含有または窒素含有側鎖
により付着する）に結合したタンパク質のことをいう。
「単離」ポリペプチドまたはその断片、バリアントもしくは誘導体により、その自然環
境にないポリペプチドを意図する。特定のレベルの精製は必要とされない。例えば、単離
ポリペプチドは、その天然または自然の環境から取り出すことができる。宿主細胞中で発
現された組換え生成ポリペプチドおよびタンパク質は、任意の適切な技術により分離、分
画、または部分的もしくは実質的に精製された天然または組換えポリペプチドと同様に、
本発明の目的のために単離されたとみなされる。
本発明のポリペプチドとして、上記のポリペプチドの断片、誘導体、類似体またはバリ
アント、およびそれらの任意の組み合わせも含まれる。用語「断片」、「バリアント」、
「誘導体」および「類似体」は、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗体ポリペプチドの
ことをいう場合、本発明の対応する抗体または抗体ポリペプチドの少なくともいくらかの
抗原結合特性を保持する任意のポリペプチドを含む。本発明のポリペプチドの断片は、タ
ンパク質分解断片および欠失断片を、本明細書の他の場所で論じる特異的抗体断片に加え
て含む。本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体および抗体ポリペプチドのバリアントは、上記の断
片、およびアミノ酸置換、欠失または挿入によるアミノ酸配列の変更を有するポリペプチ
ドを含む。バリアントは、自然に存在するかまたは自然に存在しないものであってよい。
自然に存在しないバリアントは、当技術分野において既知の突然変異誘発技術を用いて生
成できる。バリアントポリペプチドは、保存的もしくは非保存的アミノ酸置換、欠失また
は付加を含んでよい。バリアントポリペプチドは、本明細書において「ポリペプチド類似
体」ということもある。本明細書で用いる場合、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗体ポリペプ
チドの「誘導体」は、官能性側基の反応により化学的に誘導体化した１または複数の残基
を有する主題ポリペプチドのことをいう。「誘導体」として、２０の標準的アミノ酸の１
または複数の自然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも含まれる。例えば、４
−ヒドロキシプロリンは、プロリンを置換でき、５−ヒドロキシリシンは、リシンを置換
でき、３−メチルヒスチジンは、ヒスチジンを置換でき、ホモセリンは、セリンを置換で
き、オルニチンは、リシンを置換できる。本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体および抗体ポリペ
プチドの誘導体は、本発明の基準抗体または抗体ポリペプチドにおいて見出されないさら
なる特徴を示すように変更されたポリペプチドを含んでよい。
用語「ポリヌクレオチド」は、単数の核酸および複数の核酸を包含することを意図し、
単離核酸分子または構築物、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはプラスミド
ＤＮＡ（ｐＤＮＡ）のことをいう。ポリヌクレオチドは、通常のホスホジエステル結合ま
たは通常でない結合（例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）において見出されるようなアミド結
合）を含んでよい。用語「核酸」は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１または複数
の核酸セグメント、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ断片のことをいう。「単離」核酸またはポ
リヌクレオチドにより、その天然の環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡ
を意図する。例えば、ベクターに含まれる、抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体または
その抗原結合断片をコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的のために単離さ
れたとみなされる。単離ポリヌクレオチドのさらなる例は、異種宿主細胞において維持さ
れる組換えポリヌクレオチドまたは溶解している（部分的または実質的）精製ポリヌクレ
オチドを含む。単離ＲＮＡ分子は、本発明のポリヌクレオチドのインビボまたはインビト
ロでのＲＮＡ転写産物を含む。本発明による単離ポリヌクレオチドまたは核酸は、合成的
に生成されたこのような分子をさらに含む。さらに、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プ
ロモーター、リボソーム結合部位または転写ターミネーターのような調節エレメントであ
るかまたはそれを含んでよい。
本明細書で用いる場合、「コード領域」は、アミノ酸に翻訳されるコドンからなる核酸
の一部である。「停止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡまたはＴＡＡ）はアミノ酸に翻訳されな
いが、これは、コード領域の一部とみなすことができ、しかし、任意のフランキング配列
、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどは、
コード領域の一部でない。本発明の２以上のコード領域は、単一のポリヌクレオチド構築
物、例えば単一のベクター上または別々のポリヌクレオチド構築物、例えば別々の（異な
る）ベクター上に存在できる。さらに、ベクターはいずれも単一のコード領域を含有する
か、または２以上のコード領域を含んでよく、例えば単一のベクターは、免疫グロブリン
重鎖可変領域および免疫グロブリン軽鎖可変領域を別々にコードしてよい。さらに、本発
明のベクター、ポリヌクレオチドまたは核酸は、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその断片、バ
リアントもしくは誘導体をコードする核酸と融合しているかまたは融合していない異種コ
ード領域をコードできる。異種コード領域は、限定されないが、分泌シグナルペプチドま
たは異種機能性ドメインのような専門のエレメントまたはモチーフを含む。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたは核酸は、ＤＮＡである。ＤＮＡの場合、
ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは、通常、１または複数のコード
領域に作動可能に連結したプロモーターおよび／またはその他の転写もしくは翻訳制御エ
レメントを含んでよい。作動可能な会合は、遺伝子生成物、例えばポリペプチドのコード
領域が、遺伝子生成物の発現を１以上の調節配列の影響または制御の下におくような様式
で１以上の調節配列と会合する場合である。２つのＤＮＡ断片（例えばポリペプチドコー
ド領域とそれと会合するプロモーター）とは、プロモーター機能の誘発が所望の遺伝子生
成物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらし、２つのＤＮＡ断片間の結合の性質が遺伝子
生成物の発現を駆動する発現調節配列の能力に干渉しないかまたは転写されるＤＮＡ鋳型
の能力に干渉しないならば、「作動可能に連結」している。つまり、プロモーター領域は
、プロモーターが核酸の転写を可能にできるならば、ポリペプチドをコードする核酸と作
動可能に連結している。プロモーターは、所定の細胞においてのみＤＮＡの実質的な転写
を駆動する細胞特異的プロモーターであってよい。プロモーター以外のその他の転写制御
エレメント、例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサーおよび転写終結シグナル
は、ポリヌクレオチドに作動可能に連結して、細胞特異的転写を駆動できる。適切なプロ
モーターおよびその他の転写制御領域は、本明細書に開示する。
様々な転写制御領域が当業者に知られている。これらは、限定することなく、脊椎動物
細胞において機能する転写制御領域、例えばそれらに限定されないが、サイトメガロウイ
ルス（イントロンＡを伴う最初期プロモーター）、サルウイルス４０（初期プロモーター
）およびレトロウイルス（例えばラウス肉腫ウイルス）からのプロモーターおよびエンハ
ンサーセグメントを含む。その他の転写制御領域は、脊椎動物遺伝子に由来するもの、例
えばアクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモンおよびウサギβグロビン、なら
びに真核細胞における遺伝子発現を制御できるその他の配列を含む。さらなる適切な転写
制御領域は、組織特異的プロモーターおよびエンハンサー、ならびにリンホカイン誘導性
プロモーター（例えばインターフェロンまたはインターロイキンにより誘導できるプロモ
ーター）を含む。
同様に、様々な翻訳制御エレメントが当業者に知られている。これらは、それらに限定
されないが、リボソーム結合部位、翻訳開始および終結コドン、ならびにピコルナウイル
スに由来するエレメント（特に配列内リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列
ともよばれる）を含む。
他の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲ
ＮＡ）の形態のＲＮＡである。
本発明のポリヌクレオチドおよび核酸コード領域は、本発明のポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチドの分泌を駆動する分泌またはシグナルペプチドをコードするさ
らなるコード領域と会合してよい。シグナルの仮説によると、哺乳動物細胞により分泌さ
れるタンパク質は、成長するタンパク質鎖が粗面小胞体を横切って一旦輸送され始めると
成熟タンパク質から切断されるシグナルペプチドまたは分泌リーダー配列を有する。当業
者は、脊椎動物細胞により分泌されるポリペプチドが、通常、ポリペプチドのＮ末端に融
合したシグナルペプチドを有し、これは、完全または「全長」ポリペプチドから切断され
て分泌または「成熟」形態のポリペプチドを生成することを理解している。特定の実施形
態では、天然シグナルペプチド、例えば免疫グロブリン重鎖もしくは軽鎖シグナルペプチ
ド、または作動可能に連結したポリペプチドの分泌を駆動する能力を保持するその配列の
機能的誘導体を用いる。代わりに、異種哺乳動物シグナルペプチドまたはその機能的誘導
体を用いてよい。例えば、野生型リーダー配列は、ヒト組織プラスミノゲン活性化因子（
ＴＰＡ）またはマウスβ−グルクロニダーゼのリーダー配列で置換してよい。
本発明の「結合分子」または「抗原結合分子」は、その広い意味において、抗原決定基
に特異的に結合する分子のことをいう。一実施形態では、結合分子は、ＣＸＣＬ１３（Ｂ
ＣＡ−１ともよばれる）に特異的に結合する。別の実施形態では、本発明の結合分子は、
抗体またはその抗原結合断片、例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体である。別の実施形態では、本
発明の結合分子は、抗体分子の少なくとも１の重鎖または軽鎖ＣＤＲを含む。別の実施形
態では、本発明の結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも２つのＣＤＲを
含む。別の実施形態では、本発明の結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくと
も３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、本発明の結合分子は、１または複数の抗体分
子からの少なくとも４つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、本発明の結合分子は、１ま
たは複数の抗体分子からの少なくとも５つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、本発明の
結合分子は、１または複数の抗体分子からの少なくとも６つのＣＤＲを含む。特定の実施
形態では、１または複数のＣＤＲは、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０
、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２または３Ｃ９からである。
本発明は、ある抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導
体を対象とする。自然に存在する抗体のような完全サイズ抗体と特に言及しない限り、用
語「抗ＣＸＣＬ１３抗体」は、完全サイズ抗体およびそのような抗体、例えば自然に存在
する抗体もしくは免疫グロブリン分子の抗原結合断片、バリアント、類似体または誘導体
、あるいは抗体分子と同様の様式で抗原に結合する工学的に作製された抗体分子または断
片を包含する。
本明細書で用いる場合、「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのア
ミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーからまたは１もしくは
複数のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックであり、内因性免疫グロブリンを
発現しない動物から単離された抗体（以下および例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによ
る米国特許第５，９３９，５９８号に記載されるような）を含む。「ヒト」または「完全
ヒト」抗体は、少なくとも重鎖の可変ドメインまたは少なくとも重鎖および軽鎖の可変ド
メインを含む抗体も含み、ここで、可変ドメイン（複数可）は、ヒト免疫グロブリン可変
ドメイン（複数可）のアミノ酸配列を有する。
「ヒト」または「完全ヒト」抗体は、本明細書で記載する抗体分子（例えばＶＨ領域お
よび／またはＶＬ領域）の（誘導体を含む）バリアント（該抗体またはその断片は、ＣＸ
ＣＬ１３ポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントに特異的に結合する）を含むか
、本質的にそれからなるかまたはそれからなる上記の「ヒト」または「完全ヒト」抗体も
含む。それらに限定されないが、アミノ酸置換をもたらす部位特異的突然変異誘発および
ＰＣＲ仲介突然変異誘発を含む当業者に知られる標準的な技術を用いて、ヒト抗ＣＸＣＬ
１３抗体をコードするヌクレオチド配列に変異を導入できる。好ましくは、（誘導体を含
む）バリアントは、基準ＶＨ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬ領
域、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２またはＶＬＣＤＲ３に対して５０未満のアミノ酸置換、
４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満
のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸
置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換または２未満のアミノ酸置換をコー
ドする。
特定の実施形態では、アミノ酸置換は、以下にさらに論じる保存的アミノ酸置換である
。代わりに、変異は、例えば飽和突然変異誘発によりコード配列の全体または一部にわた
って無作為に導入でき、得られた変異体は、生物活性についてスクリーニングして、活性
（例えばＣＸＣＬ１３ポリペプチド、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方の
ＣＸＣＬ１３に結合する能力）を保持する変異を同定できる。「ヒト」または「完全ヒト
」抗体のこのようなバリアント（またはその誘導体）は、「最適化」または「抗原結合に
ついて最適化」されたヒトまたは完全ヒト抗体ということもでき、抗原に対する親和性が
改善された抗体を含む。
用語「抗体」および「免疫グロブリン」は、本明細書において交換可能に用いられる。
抗体または免疫グロブリンは、少なくとも重鎖の可変ドメインを含み、通常、少なくとも
重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造
は、比較的よく理解されている。例えばＨａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）を参照されたい。
以下により詳細に論じるように、用語「免疫グロブリン」は、生化学的に区別できる様
々な広いクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、
デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）に、それらのうちのいくつかのサブクラ
ス（例えばγ１〜γ４）とともに分類されることを認識する。抗体の「クラス」をＩｇＧ
、ＩｇＭ、ＩｇＡ ＩｇＧまたはＩｇＥにそれぞれ決定するのは、この鎖の性質である。
免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、Ｉ
ｇＧ４、ＩｇＡ１などは、十分に特徴づけられ、機能的に特化されていることが知られて
いる。当業者は、これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの改変バージョンを本開
示の観点で容易に認識でき、よって、これらの改変バージョンは本発明の範囲内である。
全ての免疫グロブリンクラスは、明らかに本発明の範囲内であり、以下の議論は、免疫グ
ロブリン分子のＩｇＧクラスを全般的に対象とする。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロ
ブリン分子は、およそ２３，０００ダルトンの分子量の２つの同一の軽鎖ポリペプチドと
、５３，０００〜７０，０００の分子量の２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４つ
の鎖は、典型的に、ジスルフィド結合により「Ｙ」形状につながれ、ここでは、軽鎖が、
「Ｙ」の口から開始して可変領域全体に継続して重鎖を囲む。
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは
、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合できる。一般的に、軽鎖および重鎖は、互い
に共有結合しており、２つの重鎖の「尾」部分は、共有ジスルフィド結合または免疫グロ
ブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞または遺伝子工学で作製された宿主細胞のいずれかによ
り作製される場合に非共有結合により互いに結合する。重鎖において、アミノ酸配列は、
Ｙ形状の分かれた端のＮ末端から、各鎖の底のＣ末端までに及ぶ。
軽鎖および重鎖はともに、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。用語「定常
」および「可変」は、機能的に用いられる。この点に関して、軽鎖（ＶＬまたはＶＫ）お
よび重鎖（ＶＨ）部分の両方の可変ドメインが抗原認識および特異性を決定することが認
識される。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメイ
ンは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などのような重要な生物学的特性
を与える。慣例的に、定常領域ドメインの番号付けは、それらが抗体の抗原結合部位また
はアミノ末端から遠ざかるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分
は定常領域である。ＣＨ３およびＣＬドメインは、実際に、それぞれ重鎖および軽鎖のカ
ルボキシ末端を含む。
上述したように、可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識してそれに特
異的に結合することを可能にする。つまり、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメイン、ま
たはこれらの可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）の部分集合は、組み合わされて、
３次元抗原結合部分を規定する可変領域を形成する。この４元の抗体構造は、Ｙの各腕の
端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶ
Ｌ各鎖上の３つのＣＤＲにより規定される。いくつかの場合、例えばラクダ種に由来する
かまたはラクダ免疫グロブリンに基づいて工学的に作製されたある免疫グロブリン分子に
おいて、完全免疫グロブリン分子は、軽鎖を有さず重鎖のみからなることがある。例えば
Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６〜４４８頁（１９９
３）を参照されたい。
自然に存在する抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６つの「相補性決定領域
」または「ＣＤＲ」は、抗体が水性環境中で３次元形状をとるように抗原結合ドメインを
形成するように特異的に配置されているアミノ酸の短い不連続配列である。「フレームワ
ーク」領域とよばれる抗原結合ドメイン中の残りのアミノ酸は、分子間変動性がより低い
。フレームワーク領域は、大部分がβシート高次構造を採用し、ＣＤＲは、βシート構造
をつなぎ、その一部を形成する場合もあるループを形成する。つまり、フレームワーク領
域は、鎖間非共有相互作用によりＣＤＲを正しい向きに配置するための足場を形成するよ
うに作用する。配置されたＣＤＲにより形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原
上のエピトープに対する表面相補性を規定する。この相補的表面は、抗体のその同族エピ
トープへの非共有結合を促進する。当業者は、ＣＤＲおよびフレームワーク領域を含むア
ミノ酸をそれぞれ、任意の与えられた重鎖または軽鎖可変ドメインについて容易に同定で
きる。なぜなら、これらは精密に定義されているからである（以下を参照されたい）。
ある用語について当技術分野において用いられかつ／または受け入れられている２以上
の定義がある場合、本明細書で用いる用語の定義は、そうでないと明示的に述べない限り
、全てのそのような意味を含むことを意図する。具体例は、重鎖および軽鎖ポリペプチド
の両方の可変領域内で見出される、不連続抗原結合部位を記載するための用語「相補性決
定領域」（「ＣＤＲ」）の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔら（１９８３）Ｕ
．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔ
ｅｒｅｓｔ」ならびにＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：
９０１〜９１７頁（１９８７）（これらは本明細書に参照により組み込まれている）によ
り記載され、ここで、これらの定義は、互いに比較した場合にオーバーラップまたはアミ
ノ酸残基の部分集合を含む。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲに
言及するためのどちらの定義を用いることも、本明細書で定義され用いられる用語の範囲
内であることを意図する。上記の引用した参考文献のそれぞれにより定義されるＣＤＲを
包含する適当なアミノ酸残基を、比較のために以下の表１に示す。特定のＣＤＲを包含す
る正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに依存して変動する。当業者は、抗体の可
変領域アミノ酸配列に鑑みて、どの残基が特定のＣＤＲを含むかを慣例的に決定できる。
Ｋａｂａｔらは、いずれの抗体にも用いることができる可変ドメイン配列についての番
号付けシステムを定義した。当業者は、「Ｋａｂａｔ番号付け」のこのシステムを、任意
の可変ドメイン配列に、配列自体を超えるいずれの実験データにも依存することなく、明
確に割り当てることができる。本明細書で用いる場合、「Ｋａｂａｔ番号付け」は、Ｋａ
ｂａｔら（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓ
ｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」に示される番号付けシステムのことをいう。そうでな
いと明記しない限り、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアント
もしくは誘導体中の特定のアミノ酸残基の位置の番号付けについての言及は、Ｋａｂａｔ
番号付けシステムに従う。
本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、それらに限定さ
れないが、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化、霊長類化また
はキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ
’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ
もしくはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより生成される
断片、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば本明細書で開示する抗ＣＸＣＬ１
３抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）を含む。ＳｃＦｖ分子は、当技術分野において知られ
ており、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。本発明の免疫グロブ
リンまたは抗体分子は、任意のタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ
およびＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１お
よびＩｇＡ２など）またはサブクラスの免疫グロブリン分子であり得る。
本明細書で用いる場合、用語「重鎖部分」は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸
配列を含む。重鎖部分を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば上部、中
間および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそ
のバリアントもしくは断片の少なくとも１つを含む。例えば、本発明で用いるための結合
ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとヒンジドメイ
ンの少なくとも一部分とＣＨ２ドメインとを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとＣＨ
３ドメインとを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部
分とＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖またはＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少
なくとも一部分とＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖を含んでよい
。別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を
含む。さらに、本発明で用いるための結合ポリペプチドは、ＣＨ２ドメインの少なくとも
一部分（例えばＣＨ２ドメインの全てまたは一部）を欠いてよい。上述したように、当業
者は、自然に存在する免疫グロブリン分子からアミノ酸配列が変動するようにこれらのド
メイン（例えば重鎖部分）を改変できることを理解している。
本明細書で開示するある抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもし
くは誘導体において、マルチマーのあるポリペプチド鎖の重鎖部分は、該マルチマーの第
２のポリペプチド鎖上のものと同一である。あるいは、本発明の重鎖部分を含有するモノ
マーは、同一でない。例えば、各モノマーは、例えば二重特異性抗体を形成する異なる標
的結合部分を含んでよい。
本明細書で開示する診断および処置方法において用いるための結合分子の重鎖部分は、
異なる免疫グロブリン分子に由来してよい。例えば、ポリペプチドの重鎖部分は、ＩｇＧ
１分子に由来するＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域とを含んでよい
。別の例では、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子と部分的にＩｇＧ３分子とに由来する
ヒンジ領域を含むことができる。別の例では、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子と部分
的にＩｇＧ４分子とに由来するキメラヒンジを含むことができる。
本明細書で用いる場合、用語「軽鎖部分」は、免疫グロブリン軽鎖、例えばカッパまた
はラムダ軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖部分は、ＶＬまたはＣＬ
ドメインの少なくとも１つを含む。
本明細書で開示する抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは
誘導体は、抗原の１以上のエピトープまたはその一部分、例えばそれらが認識または特異
的に結合する本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３）の点で記載ま
たは特定することがある。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的ポリペプ
チドの一部分は、「エピトープ」または「抗原決定基」である。標的ポリペプチドは、単
一のエピトープを含んでよいが、典型的に、少なくとも２つのエピトープを含み、抗原の
サイズ、高次構造およびタイプに依存して、任意の数のエピトープを含むことができる。
さらに、標的ポリペプチド上の「エピトープ」は、非ポリペプチド要素であってよいかま
たはそれを含んでよく、例えばエピトープは、炭水化物側鎖を含んでよいことに注意すべ
きである。
抗体についてのペプチドまたはポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４〜５アミ
ノ酸であると考えられる。ペプチドまたはポリペプチドエピトープは、好ましくは、少な
くとも７、より好ましくは少なくとも９、最も好ましくは少なくとも約１５から約３０の
間のアミノ酸を含有する。ＣＤＲは、抗原性ペプチドまたはポリペプチドをその３次形態
で認識できるので、エピトープを含むアミノ酸は連続的である必要はなく、同じペプチド
鎖上にない場合さえある。本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体が認識するペプチドまたはポリペ
プチドエピトープは、ＣＸＣＬ１３の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少な
くとも７、より好ましくは少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１
５、少なくとも２０、少なくとも２５または約１５から約３０の間の連続または不連続ア
ミノ酸の配列を含有してよい。
「特異的に結合する」とは、全般的に、抗体がエピトープにその抗原結合ドメインを介
して結合し、該結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を必然的
に伴うことを意味する。この定義に従って、抗体がエピトープに、その抗原結合ドメイン
を介して、抗体が無作為で無関係のエピトープに結合するよりも容易に結合する場合に、
該抗体はエピトープに「特異的に結合する」という。用語「特異性」は、本明細書におい
て、ある抗体があるエピトープに結合する相対的親和性を述べるために用いられる。例え
ば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープについてより高い特異性を有する
と考えることができるか、または抗体「Ａ」は、関係するエピトープ「Ｄ」についてそれ
が有するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合するということができる。
「優先的に結合する」とは、抗体がエピトープに、抗体が関係する、同様の、相同のま
たは類似のエピトープに結合するよりも容易に、特異的に結合することを意味する。よっ
て、所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのエピトープに、関係するエピ
トープよりも結合する可能性が高いが、そのような抗体は、関係するエピトープと交差反
応し得る。
非限定的な例として、第２のエピトープについての抗体の解離定数（ＫＤ）未満のＫＤ
で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合す
ると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のＫＤより少
なくとも１桁小さいＫＤで抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１の抗原
に優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての
抗体のＫＤよりも少なくとも２桁小さいＫＤで抗体が第１のエピトープに結合するならば
、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。
別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のオフレート（ｋ（ｏｆｆ）
）未満のｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピト
ープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについ
ての抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも１桁小さいｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトー
プに結合するならば、抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非
限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも２桁小
さいｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体は第１のエピトープ
に優先的に結合すると考えてよい。本明細書で開示する抗体または抗原結合断片、バリア
ントもしくは誘導体は、本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例
えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはその断片もしくは
バリアントに、５×１０−２ｓｅｃ−１、１０−２ｓｅｃ−１または５×ｌ０−３ｓｅｃ
−１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で結合するということができる。特定の実施形態
では、ｋ（ｏｆｆ）は、約３×１０−２以下であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、
ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約３×１
０−３以下であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまた
はマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約４×１０−３以下であり、例え
ばここで抗体はＭＡｂ５３７８であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。一実施
形態では、本発明の抗体は、本明細書で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３
、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはその断片もし
くはバリアントに、５×１０−４ｓｅｃ−１、１０−４ｓｅｃ−１、５×１０−５ｓｅｃ
−１または１０−５ｓｅｃ−１、５×１０−６ｓｅｃ−１、１０−６ｓｅｃ−１、５×１
０−７ｓｅｃ−１または１０−７ｓｅｃ−１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で結合す
るということができる。
本明細書で開示する抗体または抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、本明細書
で開示する標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよ
びマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはその断片もしくはバリアントに、１０３Ｍ−１ｓｅ
ｃ−１、５×１０３Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０４Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０４Ｍ−１ｓｅ
ｃ−１、１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０６Ｍ−１ｓｅｃ−
１または５×１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で結合するという
ことができる。特定の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は、約５×１０５以上であり、例えばこ
こで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はヒトであるか、またはｋ（ｏｎ）は、約１×１
０５以上であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はマウスである。別の
実施形態では、ｋ（ｏｎ）は、約１×１０６以上であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５２
６１であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は
約１×１０６以上であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５３７８であり、ＣＸＣＬ１３はヒ
トまたはマウスである。一実施形態では、本発明の抗体は、本明細書で開示する標的ポリ
ペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸ
ＣＬ１３）またはその断片もしくはバリアントに、１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０５
Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１または５×１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１または１
０７Ｍ−１ｓｅｃ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で結合するということができる。
抗体がある程度エピトープへの基準抗体の結合を遮断する程度に抗体がエピトープに優
先的に結合するならば、抗体は、所与のエピトープへの基準抗体、例えば本明細書に開示
する抗ＣＸＣＬ３抗体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡ
ｂ１４７６、３Ｄ２または３Ｃ９の結合を、競合的に阻害するという。競合阻害は、当技
術分野において知られる任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイにより決定できる。
抗体は、所与のエピトープへの基準抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％
、少なくとも７０％、少なくとも６０％または少なくとも５０％競合的に阻害するという
ことができる。
本明細書で用いる場合、用語「親和性」は、免疫グロブリン分子のＣＤＲとの個別のエ
ピトープの結合の強度の尺度のことをいう。例えば、Ｈａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔ
ｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版）２７〜２８頁を参照された
い。本明細書で用いる場合、用語「結合活性」は、免疫グロブリンの集団と抗原との間の
複合体の全体的な安定性、すなわち抗原と免疫グロブリン混合物とが機能的に組み合わさ
る強度のことをいう。例えば、Ｈａｒｌｏｗの２９〜３４頁を参照されたい。結合活性は
、特定のエピトープとの集団中の個別の免疫グロブリン分子の親和性と、免疫グロブリン
と抗原との価数との両方に関する。例えば、二価モノクローナル抗体と、高反復性エピト
ープ構造を有する抗原、例えばポリマーとの間の相互作用は、高い結合活性の１つである
。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、
それらの交差反応性の点で記載または特定することもできる。本明細書で用いる場合、用
語「交差反応性」は、ある抗原に特異的な抗体が第２の抗原と反応する能力のことをいい
、２つの異なる抗原性物質間の関係性の尺度である。つまり、その形成を誘発したエピト
ープ以外のエピトープに抗体が結合するならば、抗体は交差反応性である。交差反応性エ
ピトープは、通常、誘導エピトープと同じ相補性構造特徴の多くを含有し、いくつかの場
合では、元のものよりも実際によりうまく適合することがある。
例えば、ある抗体は、関係するが同一でないエピトープ、例えば基準エピトープと少な
くとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７
５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％およ
び少なくとも５０％の同一性（当技術分野において知られ、本明細書で記載する方法を用
いて算出される）を有するエピトープと該抗体が結合するという、ある程度の交差反応性
を有する。抗体は、基準エピトープと９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満
、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同
一性（当技術分野において知られ、本明細書で記載する方法を用いて算出される）を有す
るエピトープと抗体が結合しないならば、ほとんどまたは全く交差反応性を有さないとい
うことができる。抗体は、あるエピトープのいずれのその他の類似体、オルソログまたは
ホモログにも抗体が結合しないならば、抗体は該エピトープについて「高度に特異的」で
あると考えることができる。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントも
しくは誘導体は、本発明のポリペプチド、例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまた
はヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３に対するそれらの結合親和性の点で記載または特
定することもできる。特定の実施形態では、本発明の結合親和性は、５×１０−２Ｍ、１
０−２Ｍ、５×１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ
、１０−５Ｍ、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−
８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５
×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、
１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍまたは１０−１５Ｍ
未満または以下の解離定数またはＫｄを有するものを含む。一実施形態では、抗ＣＸＣＬ
１３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＸＣＬ１３に、約
５×１０−９Ｍ〜約５×１０−１０Ｍ未満のＫｄで結合し、例えばここで抗体はＭＡｂ５
２６１であり、Ｋｄは約５×１０−９Ｍ以下である。別の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３
結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片は、マウスＣＸＣＬ１３に、約５
×１０−７Ｍ〜約９×１０−９Ｍ未満のＫｄで結合し、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６
１であり、Ｋｄは約８×１０−９Ｍ以下である。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、
「多重特異的」、例えば二重特異的、三重特異的またはそれより多い多重特異性であって
よく、これは、これが１または複数の異なる抗原（例えばタンパク質）上に存在する２以
上の異なるエピトープを同時に認識してそれに結合することを意味する。つまり、抗ＣＸ
ＣＬ１３抗体が「単一特異的」または「多重特異的」、例えば「二重特異的」であるかは
、結合ポリペプチドが反応する異なるエピトープの数のことをいう。多重特異的抗体は、
本明細書で記載する標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であるか、または標的
ポリペプチドおよび異種エピトープ、例えば異種ポリペプチドもしくは固体支持体材料に
特異的であってよい。
本明細書で用いる場合、用語「価数」は、結合ポリペプチドまたはＣＸＣＬ１３結合分
子、例えば抗体もしくはその抗原結合断片中に存在する、可能性のある結合ドメイン、例
えば抗原結合ドメインの数のことをいう。各結合ドメインは、１のエピトープに特異的に
結合する。結合ポリペプチドまたはＣＸＣＬ１３結合分子が１より多い結合ドメインを含
む場合、各結合ドメインは、同じエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体について
「二価単一特異性」と称する）または異なるエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗
体について「二価二重特異性」と称する）に特異的に結合してもよい。抗体またはその抗
原結合断片は、二重特異性で、各特異性について二価であってもよい（「二重特異性四価
抗体」と称する）。別の実施形態では、四価ミニボディまたはドメイン欠失抗体を作製で
きる。
二重特異性二価抗体およびそれらを作製する方法は、例えば米国特許第５，７３１，１
６８号；第５，８０７，７０６号；第５，８２１，３３３号；ならびに米国特許出願公開
第２００３／０２０７３４号および第２００２／０１５５５３７号（これらすべての開示
は、本明細書に参照により組み込まれている）に記載される。二重特異性四価抗体および
それらを作製する方法は、例えば国際公開第０２／０９６９４８号および国際公開第００
／４４７８８号（これらの開示はともに、本明細書に参照により組み込まれる）に記載さ
れる。全般的に、国際公開第９３／１７７１５号；国際公開第９２／０８８０２号；国際
公開第９１／００３６０号；国際公開第９２／０５７９３号；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１４７：６０〜６９頁（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，
７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，
８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３頁（
１９９２）を参照されたい。
以前に示したように、様々な免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造およ
び３次元形状は、公知である。本明細書で用いる場合、用語「ＶＨドメイン」は、免疫グ
ロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、用語「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブ
リン重鎖の最初（最もアミノ末端側）の定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、Ｖ
Ｈドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端側である
。
本明細書で用いる場合、用語「ＣＨ２ドメイン」は、従来の番号付けスキームを用いて
、抗体の例えば約２４４残基〜３６０残基（残基２４４〜３６０、Ｋａｂａｔ番号付けシ
ステム；および残基２３１〜３４０、ＥＵ番号付けシステム；Ｋａｂａｔ ＥＡらを参照
されたい）にわたる重鎖分子の一部分を含む。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に
対形成しない点で、独特である。むしろ、２つのＮ連結分岐炭水化物鎖が、インタクトな
天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に介在する。ＣＨ３ドメインが、ＣＨ２ドメ
インからＩｇＧ分子のＣ末端まで広がり、およそ１０８残基を含むことも十分に報告され
ている。
本明細書で用いる場合、用語「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとを
つなぐ重鎖分子の一部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、フレキシブ
ルであり、よって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ
領域は、３つの別個のドメイン：上部、中間および下部ヒンジドメインに細分化できる（
Ｒｏｕｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３頁（１９９８））。
本明細書で用いる場合、用語「ジスルフィド結合」は、２つの硫黄原子の間に形成され
る共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とジスルフィド結合または
ブリッジを形成できるチオール基を含む。最も多く自然に存在するＩｇＧ分子において、
ＣＨ１領域とＣＬ領域とは、ジスルフィド結合により連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａ
ｔ番号付けシステムを用いて２３９および２４２に相当する位置（２２６位または２２９
位、ＥＵ番号付けシステム）にて２つのジスルフィド結合により連結される。
本明細書で用いる場合、用語「キメラ抗体」は、免疫反応性領域または部位が第１の種
から得られるかまたはそれに由来し、定常領域（これは、インタクト、部分的または本発
明に従って改変されていることがある）が第２の種から得られる任意の抗体を意味するた
めに用いられる。特定の実施形態では、標的結合領域または部位は、非ヒト供給源（例え
ばマウスまたは霊長類）からであり、定常領域はヒト（例えば本明細書で記載するモノク
ローナル抗体（ＭＡｂ）１４７６）である。
本明細書で用いる場合、用語「工学的に作製された抗体」は、重鎖もしくは軽鎖または
両方のいずれかにおける可変ドメインが、既知の特異性の抗体からの１または複数のＣＤ
Ｒの少なくとも部分的な置き換えにより、そして必要であれば、部分的フレームワーク領
域置き換えおよび配列変更により変更された抗体のことをいう。ＣＤＲは、フレームワー
ク領域が由来する抗体とクラスまたはサブクラスでさえが同じ抗体に由来できるが、ＣＤ
Ｒは、異なるクラスの抗体、そして好ましくは異なる種の抗体に由来することが構想され
る。既知の特異性の非ヒト抗体からの１または複数の「ドナー」ＣＤＲが、ヒト重鎖また
は軽鎖フレームワーク領域中にグラフトされた工学的に作製された抗体は、本明細書にお
いて「ヒト化抗体」という。ある可変ドメインの抗原結合能力を別のものに移すために、
全てのＣＤＲをドナー可変ドメインからの完全ＣＤＲに置き換える必要はないことがある
。むしろ、標的結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すことだけが必要になり
得る。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ドナー可変重鎖ドメインからの１、２または
３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ヒト化抗体は、ドナー可変軽鎖ドメインからの
１、２または３つのＣＤＲを含む。
ヒト化抗体の重鎖もしくは軽鎖または両方における可変ドメイン中のフレームワーク領
域が、ヒト起源の残基のみを含み得ることがさらに認識され、この場合、ヒト化抗体（例
えばＭＡｂ５０８０または５２６１）のこれらのフレームワーク領域は、「完全ヒトフレ
ームワーク領域」という。代わりに、ドナー可変ドメインの１以上のフレームワーク領域
の１または複数の残基を、ヒト化抗体の重鎖もしくは軽鎖または両方における可変ドメイ
ンのヒトフレームワーク領域の対応する位置内で必要に応じて工学的に作製して、ＣＸＣ
Ｌ１３抗原との適当な結合を維持するかまたは亢進できる。この様式で工学的に作製され
たヒトフレームワーク領域は、よって、ヒトおよびドナーのフレームワーク残基が混合さ
れており、本明細書において「部分的ヒトフレームワーク領域」という。
例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体のヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓ
ら、Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、Ｎａｔ
ｕｒｅ３３２：３２３〜３２７頁（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３９：１５３４〜１５３６頁（１９８８））の方法に従って、げっ歯類もしくは変異げ
っ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗ＣＸＣＬ１３抗体の対応する配列に置換すること
により、本質的に行うことができる。米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，
０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第５，８５９，２
０５号（参照により本明細書に組み込まれる）も参照されたい。得られるヒト化抗ＣＸＣ
Ｌ１３抗体は、ヒト化抗体の重鎖および／または軽鎖の可変ドメインの完全ヒトフレーム
ワーク領域内に、少なくとも１つのげっ歯類または変異げっ歯類ＣＤＲを含み得る。いく
つかの場合では、ヒト化抗ＣＸＣＬ１３抗体の１または複数の可変ドメインのフレームワ
ーク領域内の残基は、対応する非ヒト（例えばげっ歯類）残基で置き換えられ（例えば米
国特許第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；お
よび第６，１８０，３７０号を参照されたい）、この場合、得られるヒト化抗ＣＸＣＬ１
３抗体は、重鎖および／または軽鎖の可変ドメイン内に部分的ヒトフレームワーク領域を
含み得る。
さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基
を含んでよい。これらの改変は、抗体性能をさらに改良するため（例えば所望の親和性を
得るため）に作製される。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの
可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、全てまたは実質的に全てのＣＤＲは、非ヒ
トヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てのまたは実質的に全てのフレームワーク領域
は、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、場合によって、免疫グロブリ
ン定常領域（Ｆｃ）、典型的にヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分も含む。さ
らなる詳細について、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３３１：５２２〜５２５頁（１９８６
）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２９頁（１９８８）；およ
びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６頁（１
９９２）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。よって、このような「
ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ないものが、非ヒト種か
らの対応する配列で置換された抗体を含み得る。実際上、ヒト化抗体は、典型的に、いく
つかまたは全てのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が、げっ歯類
抗体の類似部位からの残基で置換されたヒト抗体である。例えば米国特許第５，２２５，
５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号
；および第５，８５９，２０５号を参照されたい。米国特許第６，１８０，３７０号およ
び国際公開第０１／２７１６０号も参照されたい（ここでは、ヒト化抗体および所定の抗
原に対する親和性が改善されたヒト化抗体を生成する技術が開示されている）。
本明細書で用いる場合、用語「連結された」、「融合された」または「融合」は、交換
可能に用いられる。これらの用語は、２以上の要素または成分を、化学的コンジュゲーシ
ョンまたは組換え手段を含むいずれかの手段によりつなぐことをいう。「インフレーム融
合」は、元のＯＲＦの正しい翻訳リーディングフレームを維持する様式で、２以上のポリ
ヌクレオチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をつないで、連続するより長いＯ
ＲＦを形成することをいう。つまり、組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによりコード
されるポリペプチドに対応する２以上のセグメント（これらのセグメントは、自然では、
通常、そのようにつながれていない）を含有する単一タンパク質である。リーディングフ
レームは、このようにして、融合されたセグメント全体を通して連続的にされるが、セグ
メントは、例えばインフレームリンカー配列により物理的または空間的に分けられてよい
。例えば、免疫グロブリン可変領域のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドは、インフレ
ームで融合できるが、「融合された」ＣＤＲが連続的ポリペプチドの一部として同時翻訳
される限り、少なくとも１つの免疫グロブリンフレームワーク領域またはさらなるＣＤＲ
領域をコードするポリヌクレオチドにより分けられてよい。
ポリペプチドの関係において、「直鎖状配列」または「配列」は、アミノ末端からカル
ボキシル末端方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序であり、ここで、配列中で互いに
隣にある残基は、ポリペプチドの１次構造において連続的である。
用語「発現」は、本明細書で用いる場合、遺伝子が生化学的物質、例えばポリペプチド
を生成するプロセスのことをいう。このプロセスは、限定することなく、遺伝子ノックダ
ウンならびに一過性発現および安定的発現の両方を含む、細胞内での遺伝子の機能的存在
の任意の顕れを含む。これは、限定することなく、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）へ
の遺伝子の転写、およびポリペプチドへのそのようなｍＲＮＡの翻訳を含む。所望の最終
生成物が生化学的物質であるならば、発現は、その生化学的物質と任意の前駆体の創出を
含む。遺伝子の発現は「遺伝子生成物」を生成する。本明細書で用いる場合、遺伝子生成
物は、核酸、例えば遺伝子の転写により生成されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写産
物から翻訳されるポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書で記載する遺伝子生成物
は、転写後修飾、例えばポリアデニル化された核酸、または翻訳後修飾、例えばメチル化
、グリコシル化、脂質付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解切断
などを受けたポリペプチドをさらに含む。
本明細書で用いる場合、用語「処置する」または「処置」は、治療的処置および予防的
または防止的措置の両方のことをいい、ここで、目的は、多発性硬化症、ループス、関節
炎もしくはがんの進行のような望ましくない生理的変化または障害を妨げるかまたは遅く
する（少なくする）ことである。有益なまたは所望の臨床的結果は、それらに限定されな
いが、検出可能または検出不可能な、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定
化（すなわち悪化しない）、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善もしくは一次的
緩和および寛解（部分的または完全のいずれか）を含む。「処置」は、処置を受けない場
合に予期される生存と比較して延長された生存も意味し得る。処置を必要とするものは、
状態または障害を既に有するもの、および状態もしくは障害を有する傾向にあるものまた
は状態もしくは障害を妨げようとするものを含む。
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」により、そ
れについての診断、予後または治療が所望される任意の対象、特に哺乳動物対象を意味す
る。哺乳動物対象は、ヒト、家畜、畜産動物ならびに動物園、スポーツまたはペット動物
、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシなどを含む。
本明細書で用いる場合、「抗ＣＸＣＬ１３抗体の投与により利益を受け得る対照」およ
び「処置を必要とする動物」のような句は、例えば抗ＣＸＣＬ１３ポリペプチドの検出の
ため（例えば診断手順のため）に、用いる抗ＣＸＣＬ１３抗体の投与から、および／また
は抗ＣＸＣＬ１３抗体を用いる処置、すなわち疾患の一次的緩和もしくは防止から利益を
受け得る哺乳動物対象のような対象を含む。本明細書でより詳細に記載するように、抗Ｃ
ＸＣＬ１３抗体は、非コンジュゲート形態で用いることができるか、または例えば薬物、
プロドラッグもしくは同位体にコンジュゲートできる。
ＩＩ．標的ポリペプチドの説明
本明細書で用いる場合、用語「ＣＸＣＬ１３」および「ＣＸＣＬ１３ポリペプチド」は
、交換可能に用いられる。特定の実施形態では、ＣＸＣＬ１３は、完全サイズＣＸＣＬ１
３もしくはその断片、またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペプチドを含んでよく、ここで
、ＣＸＣＬ１３の断片またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペプチドは、完全サイズＣＸＣ
Ｌ１３のいくらかまたは全ての機能的特性を保持する。ヒトＣＸＣＬ１３ポリペプチドお
よびポリヌクレオチド配列（それぞれ配列番号１９および２０）は記載されており、例え
ばＬｅｇｌｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７（４）：６５５〜６６０頁（１９９８）
を参照されたい。マウスＣＸＣＬ１３ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列（それぞ
れ配列番号２１および２２）は記載されており、例えばＧｕｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３９１
（６６６９）：７９９〜８０３頁（１９９８）を参照されたい。さらに、カニクイザルＣ
ＸＣＬ１３ポリペプチド配列は、配列番号２３に示すように、記載されている。
ＩＩＩ．抗ＣＸＣＬ１３抗体
ＣＸＣＬ１３に結合する市販の抗体、例えばラット抗マウスＭＡｂ４７０（Ｒ＆Ｄ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ）およびマウス抗ヒトＭＡｂ８０１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、当技術
分野において開示されている。さらに、マウス抗ＣＸＣＬ１３抗体は、米国特許出願公開
第２００８ ０２２７７０４Ａ１号に開示されている。
本発明の抗体は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、またはＣＸＣＬ１３に結合するその抗原結合断
片、バリアントもしくは誘導体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８
０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２または３Ｃ９を含む。特定の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３
抗体は、ヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ヒト化されている。他の実施形態
では、抗ＣＸＣＬ１３抗体は、その受容体、例えばＣＸＣＲ５へのＣＸＣＬ１３の結合を
遮断する。特定の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡ
ｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２、３Ｃ９またはその抗原結合断片
、バリアントもしくは誘導体である。
一実施形態では、本発明は、基準抗体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡ
ｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２または３Ｃ９と同じＣＸＣＬ１３エピトープに特異
的に結合する単離結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントおよび誘導
体を提供する。別の実施形態では、本発明は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し、基準抗体
、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２ま
たは３Ｃ９が、ＣＸＣＬ１３、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方
のＣＸＣＬ１３に特異的に結合することを競合的に阻害する単離結合分子、例えば抗体ま
たはその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態では、本発明の結合分子は、基準抗ＣＸＣＬ１３抗体分子についてのア
ミノ酸配列の少なくとも約８０％、約８５％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％
、約９２％、約９３％、約９４％または約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有
する。さらなる実施形態では、結合分子は、基準抗体と少なくとも約９６％、約９７％、
約９８％、約９９％または１００％の配列同一性を共有する。特定の実施形態では、基準
抗体は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２ま
たは３Ｃ９である。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号３または１３のＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、
約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号４、５または６と少
なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約
９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＨドメインは、配列番号３または１３と少なくとも約８０％、約８５％
、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一のアミノ酸
配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号３または１３のＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて
同一であるアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号４、５または６と１
、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、配列番号３または１３と少なくとも約８０％、約８５％
、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％
、約９８％、約９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、コードされるＶＨドメインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に
特異的または優先的に結合する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号８、１５または１７
のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９
５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する
。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号９、１６、１０また
は１１と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約
９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＬドメインは、配列番号８、１５または１７と少なくとも約８０％、約
８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であ
るアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号８、１５または１７
のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を
除いて同一であるアミノ酸配列を有する。
別の実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含
むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結合断片を提
供し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号９、１６、１０また
は１１と１、２、３、４または５の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列
を有する。
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８、１５または１７と少なくとも約８０％
、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％
、約９７％、約９８％、約９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬド
メインを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離抗体またはその抗原結
合断片を含み、ここで、コードされるＶＬドメインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣ
Ｌ１３に特異的または優先的に結合する。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体の適切な生物活性バリアントを、本発明の方法において用
いることができる。このようなバリアントは、親の抗ＣＸＣＬ１３抗体の所望の結合特性
を保持する。抗体バリアントを作製する方法は、当技術分野において一般的に利用可能で
ある。
突然変異誘発およびヌクレオチド配列変更の方法は、当技術分野において公知である。
例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：４８８〜４９２頁（１９８５）；Ｋｕｎｋｅｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７〜３８２頁（１９８７）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９
８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）；米国特許第４，８７３，１９２
号；およびその中で引用される参考文献（参照により本明細書に組み込まれる）を参照さ
れたい。対象とするポリペプチドの生物活性に影響しない適当なアミノ酸置換についての
手引きは、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ
．Ｃ．）、３４５〜３５２頁（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）中のＤａ
ｙｈｏｆｆら（１９７８）のモデルで見出すことができる。Ｄａｙｈｏｆｆらのモデルは
、点許容変異（ＰＡＭ）アミノ酸相似マトリクス（ＰＡＭ２５０マトリクス）を用いて、
適切な保存的アミノ酸置換を決定する。あるアミノ酸を同様の特性を有する別のアミノ酸
に交換するような保存的置換が好ましいことがある。ＤａｙｈｏｆｆらのモデルのＰＡＭ
２５０マトリクスにより教示される保存的アミノ酸置換の例は、それらに限定されないが
、Ｇｌｙ←→Ａｌａ、Ｖａｌ←→Ｉｌｅ←→Ｌｅｕ、Ａｓｐ←→Ｇｌｕ、Ｌｙｓ←→Ａｒ
ｇ、Ａｓｎ←→ＧｌｎおよびＰｈｅ←→Ｔｒｐ←→Ｔｙｒを含む。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、すなわち対象とするポ
リペプチドのバリアントの構築において、バリアントが継続して所望の特性を有するよう
に、例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣ
ＸＣＬ１３に特異的に結合できるように改変を作製する。明らかに、バリアントポリペプ
チドをコードするＤＮＡ中に作製されるいずれの変異も、リーディングフレームから外れ
て配列を配置してはならず、好ましくは、２次ｍＲＮＡ構造を生成し得る相補領域を創出
しない。例えば欧州特許第ＥＰ００７５４４４Ｂ１号を参照されたい。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片の結合特異性を測定する
方法は、それらに限定されないが、標準的競合結合アッセイ、Ｔ細胞またはＢ細胞による
免疫グロブリン分泌をモニタリングするアッセイ、Ｔ細胞増殖アッセイ、アポトーシスア
ッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイなどを含む。例えば国際公開第９３／１４１２５号；Ｓｈｉ
ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１３：６３３〜６４２頁（２０００）；Ｋｕｍａｎｏｇｏｈら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ１６９：１１７５〜１１８１頁（２００２）；Ｗａｔａｎａｂｅら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ１６７：４３２１〜４３２８頁（２００１）；Ｗａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ
９７：３４９８〜３５０４頁（２００１）；およびＧｉｒａｕｄｏｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ１７２（２）：１２４６〜１２５５頁（２００４）（これらの全ては参照により本明
細書に組み込まれる）に開示されるアッセイを参照されたい。
本明細書で開示する定常領域、ＣＤＲ、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを含む任意の
特定のポリペプチドが、別のポリペプチドと少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、
約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、
約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％さえ同一であるかを本明細書
で論じる場合、％同一性は、それらに限定されないが、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉ
ｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ用バ
ージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ
，Ｗｉｓ．５３７１１）のような当技術分野において知られる方法およびコンピュータプ
ログラム／ソフトウェアを用いて決定できる。ＢＥＳＴＦＩＴは、ＳｍｉｔｈおよびＷａ
ｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９頁の局所的
相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の相同性の最良のセグメントを見出す。ＢＥ
ＳＴＦＩＴまたは任意のその他の配列アラインメントプログラムを用いて特定の配列が、
本発明による参照配列と例えば９５％同一であるかを決定する場合、パラメータは、もち
ろん、同一性のパーセンテージが参照ポリペプチド配列の全長にわたって算出され、参照
配列中のアミノ酸の総数の５％までの相同性におけるギャップが許容されるように設定さ
れる。
本発明の目的のために、パーセント配列同一性は、１２のギャップ開始ペナルティ、２
のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスでアフィンギャップ検索を用
いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて決定してよい。Ｓｍ
ｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａ
ｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９頁に教示されている。
バリアントは、例えば、わずか１〜１５のアミノ酸残基、１〜１０、例えばわずか６〜１
０のアミノ酸残基、わずか５、４、３、２またはわずか１のアミノ酸残基だけ、基準抗Ｃ
ＸＣＬ１３抗体（例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４
７６、３Ｄ２または３Ｃ９）と異なってよい。
ＣＸＣＬ１３に特異的に結合でき、所望のＣＸＣＬ１３遮断活性を保持するポリペプチ
ドの精密な化学構造は、いくつかの因子に依存する。イオン化可能なアミノおよびカルボ
キシル基が分子中に存在するので、特定のポリペプチドは、酸性もしくは塩基性の塩とし
てまたは中性の形態で得ることができる。適切な環境条件においた場合にそれらの生物活
性を保持する全てのこのような調製物は、本明細書で用いる場合の抗ＣＸＣＬ１３抗体の
定義に含まれる。さらに、ポリペプチドの１次アミノ酸配列は、糖部分（グリコシル化）
または脂質、リン酸塩、アセチル基などの他の補助分子を用いる誘導体化により増強して
よい。これは、糖とのコンジュゲーションにより増強してもよい。このような増強のある
態様は、生成宿主の翻訳後プロセシングシステムにより達成される。その他のこのような
改変は、インビトロで導入してよい。いずれの場合でも、このような改変は、抗ＣＸＣＬ
１３抗体の所望の特性が損なわれない限り、本明細書で用いる抗ＣＸＣＬ１３抗体の定義
に含まれる。このような改変は、様々なアッセイにおいて、ポリペプチドの活性を亢進ま
たは減少させることにより、活性に量的または質的に影響し得ることが予期される。さら
に、鎖中の個別のアミノ酸残基は、酸化、還元またはその他の誘導体化により改変される
ことがあり、ポリペプチドは、活性を保持する断片を得るために切断されることがある。
所望の特性（例えばＣＸＣＬ１３についての結合特異性、結合親和性および／またはＣＸ
ＣＬ１３遮断活性）を損なわないこのような変更は、ポリペプチド配列を、本明細書で用
いる対象とする抗ＣＸＣＬ１３抗体の定義から除去しない。
当技術分野は、ポリペプチドバリアントの調製および使用に関して実質的な手引きを提
供する。抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントの調
製において、当業者は、天然タンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの
改変が、本発明の方法において用いる医薬組成物の治療活性成分として用いるために適切
なバリアントをもたらすかを容易に決定できる。
抗ＣＸＣＬ１３抗体の定常領域は、いくつかの様式で、エフェクター機能を変更するた
めに変異させてよい。例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願
公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号（これらは、Ｆｃ受容体との抗体結合を最適化す
るＦｃ変異を開示する）を参照されたい。
ある抗ＣＸＣＬ１３抗体では、Ｆｃ部分は、当技術分野において知られる技術を用いて
、エフェクター機能を減少させるために変異させてよい。例えば、定常領域ドメインの欠
失または不活性化（点突然変異またはその他の手段による）は、循環改変抗体のＦｃ受容
体結合を低下させ、そのことにより腫瘍局在化を増加させることがある。他の場合では、
これは、本発明と一貫する定常領域改変が、補体結合を和らげ、よって血清半減期および
コンジュゲートした細胞毒の非特異的会合を低減することであり得る。定常領域のさらに
別の改変を用いてジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を改変してよく、このことは、抗
原特異性または抗体フレキシビリティの増加により局在化の亢進を可能にする。改変の結
果として得られる生理的プロフィール、バイオアベイラビリティーならびに腫瘍局在化、
生体分布および血清半減期のようなその他の生化学的影響は、過度の実験を行うことなく
、公知の免疫学的技術を用いて容易に測定および定量できる。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体は、例えばその同族エピトープに抗体が特異的に結合する
ことを共有結合が妨げないような抗体への任意の型の分子の共有結合により改変された誘
導体も含む。例えば、しかし限定することなく、抗体誘導体は、例えばグリコシル化、ア
セチル化、ｐｅｇ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮蔽基による誘導体化、タン
パク質分解切断、細胞性リガンドまたはその他のタンパク質との結合などにより改変され
た抗体を含む。任意の多数の化学的改変を、それらに限定されないが、特異的化学的切断
、アセチル化、ホルミル化などを含む既知の技術により行うことができる。さらに、誘導
体は、１または複数の非伝統的アミノ酸を含有してよい。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の電荷を有する側鎖を有するアミノ
酸残基で置き換えられるものである。同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のフ
ァミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（
例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミ
ン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオ
ニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側
鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えばチロシン、フ
ェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。代わりに、飽
和突然変異誘発によるようにコード配列の全体または一部にわたって変異を無作為に導入
でき、得られた変異体を生物活性についてスクリーニングして、活性（例えばＣＸＣＬ１
３についての結合特異性、結合親和性および／またはＣＸＣＬ１３遮断活性）を保持する
変異体を同定できる。
例えば、抗体分子のフレームワーク領域のみまたはＣＤＲ領域のみに変異を導入するこ
とが可能である。導入された変異は、サイレントまたは中立ミスセンス変異であってよく
、すなわち抗原と結合する抗体の能力に対して全くまたはほとんど影響しない。これらの
型の変異は、コドン使用を最適化するためまたはハイブリドーマの抗体生成を改善するた
めに有用であり得る。代わりに、非中立ミスセンス変異は、抗原と結合する抗体の能力を
変更し得る。ほとんどのサイレントおよび中立ミスセンス変異の場所は、フレームワーク
領域内であることが多いが、ほとんどの非中立ミスセンス変異の場所は、ＣＤＲ内である
ことが多い（しかし、これは絶対的な要件でない）。当業者は、抗原結合活性に変更がな
いかまたは結合活性に変更がある（例えば抗原結合活性の改善または抗体特異性の変化）
ことのような所望の特性を有する変異体分子を設計して試験できる。突然変異誘発の後に
、コードされるタンパク質を慣例的に発現させ、コードされたタンパク質の機能的および
／または生物学的な活性（例えばＣＸＣＬ１３ポリペプチドの少なくとも１つのエピトー
プに免疫特異的に結合する能力）を、本明細書に記載される技術を用いてまたは当技術分
野において知られる技術を慣例的に改変することにより決定できる。
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体は、少なくとも１つの最適化相補性
決定領域（ＣＤＲ）を含む。「最適化ＣＤＲ」により、ＣＤＲが改変され、最適化配列が
、結合親和性および／もしくは最適化ＣＤＲを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体に与えられる抗Ｃ
ＸＣＬ１３活性の持続または改善に基づいて選択されることを意図する。「抗ＣＸＣＬ１
３活性」または「ＣＸＣＬ１３遮断活性」は、ＣＸＣＬ１３に関連する以下の活性の１ま
たは複数を調節する活性を含み得る。Ｂ細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に
移動することおよび胚中心形成（例えば自己免疫疾患の場合）に干渉する、その受容体と
のＣＸＣＬ１３の相互作用の遮断；がん細胞の増殖および腫瘍学的障害へ広がる能力の阻
害；またはＣＸＣＬ１３発現細胞に関連する任意のその他の活性。抗ＣＸＣＬ１３活性は
、それらに限定されないが、ある型の自己免疫疾患（例えば多発性硬化症、関節炎（例え
ば関節リウマチ）、慢性胃炎、胃リンパ腫、移植片拒絶、シェーグレン症候群（ＳＳ）、
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染における活動性混合型クリオ
グロブリン血症（ＭＣ）血管炎、若年性皮膚筋炎および重症筋無力症）およびある種のが
ん（例えばバーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫（例えば胃ＭＡ
ＬＴリンパ腫）、癌（例えば結腸、前立腺、乳、胃、食道および膵臓）および慢性リンパ
性白血病（ＣＬＬ））ならびにその他の炎症性疾患、例えばヘリコバクター感染誘発性炎
症性疾患、例えば胃炎、潰瘍および胃粘膜病変を含むＣＸＣＬ１３発現に関連する疾患の
発生率または重症度の減少に起因すると考えることもできる。
ＩＶ．抗ＣＸＣＬ１３抗体をコードするポリヌクレオチド
本発明は、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは
誘導体をコードする核酸分子も提供する。
一実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）をコー
ドする核酸を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチド
を提供し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号２または１２の
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３から選択されるポリヌクレオチド配列と少なくとも約
８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％また
は同一であるアミノ酸配列を有する。
他の実施形態では、本発明は、免疫グロブリンＶＨドメインをコードする核酸を含むか
、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチドを提供し、ここで、
ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、（ａ）配列番号４に示すアミノ酸配列を含む
ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号
６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３からなる群から選択される。
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号３または配列番号１３を含む基準ＶＨドメ
インポリペプチド配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％
、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１０
０％同一であるアミノ酸配列を有するＶＨドメインをコードする核酸を含むか、本質的に
それからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチドを含み、ここで、コードされる
ＶＨドメインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に特異的または優先的に結合す
る。
さらなる実施形態では、本発明は、ＶＨドメインをコードする核酸を含むか、本質的に
それからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチドを含み、ここで、該ポリヌクレ
オチド配列は、配列番号２または配列番号１２を含む配列と少なくとも約８０％、約８５
％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７
％、約９８％、約９９％または１００％同一であり、コードされるＶＨドメインを含む抗
ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に特異的または優先的に結合する。
一実施形態では、本発明は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）をコー
ドする核酸を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチド
を提供し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号８、配列番号１
５または配列番号１７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３のポリヌクレオチド配列と少
なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約
９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
他の実施形態では、本発明は、免疫グロブリンＶＬドメインをコードする核酸を含むか
、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチドを提供し、ここで、
ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、（ａ）配列番号９または１６に示すアミノ酸
配列を含むＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および（
ｃ）配列番号１１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３からなる群から選択される。
さらなる実施形態では、本発明は、配列番号８、１５または１７を含む基準ＶＬドメイ
ンポリペプチド配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、
約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００
％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬドメインをコードする核酸を含むか、本質的にそ
れからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチドを含み、ここで、コードされるＶ
Ｌドメインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に特異的または優先的に結合する
。
さらなる実施形態では、本発明は、ＶＬドメインをコードする核酸を含むか、本質的に
それからなるかまたはそれからなる単離ポリヌクレオチドを含み、ここで、該ポリヌクレ
オチド配列は、配列番号７、配列番号１４または配列番号１８を含む配列と少なくとも約
８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約
９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％同一であり、コードされるＶＬド
メインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に特異的または優先的に結合する。
上記のポリヌクレオチドはいずれも、例えば、コードされるポリペプチドの分泌を駆動
するシグナルペプチド、本明細書で記載する抗体定常領域または本明細書で記載するその
他の異種ポリペプチドをコードするさらなる核酸をさらに含んでよい。また、本明細書の
他の場所でより詳細に記載するように、本発明は、上記のポリヌクレオチドの１または複
数を含む組成物を含む。
一実施形態では、本発明は、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを含
む組成物であって、前記第１のポリヌクレオチドが、本明細書で記載するＶＨドメインを
コードし、前記第２のポリヌクレオチドが、本明細書で記載するＶＬドメインをコードす
る組成物を含む。具体的に、配列番号２および１２に示すＶＨドメインコードポリヌクレ
オチドと、ＶＬドメインコードポリヌクレオチド、例えば配列番号７、１４または１８に
示すＶＬドメインをコードするポリヌクレオチドを含むか、本質的にそれからなるかまた
はそれからなる組成物。
本発明は、他の場所で記載するように、本発明のポリヌクレオチドの断片も含む。さら
に、融合ポリポリペプチド、Ｆａｂ断片および本明細書で記載するその他の誘導体をコー
ドするポリヌクレオチドも、本発明により企図される。
ポリヌクレオチドは、当技術分野において知られる任意の方法により生成または製造で
きる。例えば、抗体のヌクレオチド配列がわかっているならば、抗体をコードするポリヌ
クレオチドを、化学合成オリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えばＫｕｔｍ
ｅｉｅｒら、Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１７：２４２頁（１９９４）に記載されるよ
うにして）、これは、簡単に述べると、抗体をコードする配列の部分を含有するオーバー
ラップオリゴヌクレオチドの合成と、これらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび
ライゲーションと、次いで、ライゲーションされたオリゴヌクレオチドのＰＣＲによる増
幅とを含む。
代わりに、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗原結合断片、バリアントもしくは誘導
体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供給源からの核酸から作製できる。特定の抗
体をコードする核酸を含有するクローンが入手可能でないが、抗体分子の配列がわかって
いるならば、抗体をコードする核酸は、化学合成できるか、あるいは適切な供給源（例え
ば抗体ｃＤＮＡライブラリー、あるいは抗体もしくはその他の抗ＣＸＣＬ１３抗体を発現
する任意の組織または細胞、例えば抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞
から作製したｃＤＮＡライブラリーまたはそれから単離した核酸、好ましくはポリＡ＋Ｒ
ＮＡ）から、配列の３’および５’端にハイブリダイズできる合成プライマーを用いるＰ
ＣＲにより、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いて例
えば抗体もしくはその他の抗ＣＸＣＬ１３抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからｃ
ＤＮＡクローンを同定するクローニングにより得ることができる。ＰＣＲにより作製され
る増幅核酸は、次いで、当技術分野において公知の任意の方法を用いて複製可能なクロー
ニングベクターにクローニングできる。
抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体のヌクレオチ
ド配列および対応するアミノ酸配列が一旦決定されると、そのヌクレオチド配列を、ヌク
レオチド配列の操作のための当技術分野において公知の方法、例えば組換えＤＮＡ技術、
部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲなどを用いて操作して（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（
１９９０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）およびＡｕｓｕｂｅｌら編（１９９８）Ｃ
ｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏ
ｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ）（これらはともにそれらの全体が本明細書に参照に
より組み込まれている）に記載される技術を参照されたい）、異なるアミノ酸配列を有す
る抗体を得る、例えばアミノ酸置換、欠失および／または挿入を創出できる。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘
導体をコードするポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシ
リボヌクレオチドで構成でき、これらは、未改変ＲＮＡもしくはＤＮＡまたは改変ＲＮＡ
もしくはＤＮＡであってよい。例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バ
リアントもしくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、１本鎖および２本鎖ＤＮＡ、
１本鎖および２本鎖領域が混合されたＤＮＡ、１本鎖および２本鎖ＲＮＡ、ならびに１本
鎖および２本鎖領域が混合されたＲＮＡ、１本鎖もしくはより典型的には２本鎖または１
本鎖および２本鎖領域が混合され得るＤＮＡとＲＮＡとを含むハイブリッド分子で構成で
きる。さらに、抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアン
トもしくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡ
とＤＮＡとの両方を含む３本鎖領域で構成できる。抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体
またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体をコードするポリヌクレオチドは、
１または複数の修飾塩基あるいは安定性もしくはその他の理由のために修飾されたＤＮＡ
またはＲＮＡ主鎖を含有してもよい。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化塩基およびイ
ノシンのような特殊塩基を含む。様々な修飾をＤＮＡおよびＲＮＡに対して行うことがで
きる。つまり、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態
を包含する。
免疫グロブリン（例えば免疫グロブリン重鎖部分または軽鎖部分）に由来するポリペプ
チドの非自然バリアントをコードする単離ポリヌクレオチドは、１もしくは複数のアミノ
酸置換、付加または欠失がコードされるタンパク質に導入されるように、１もしくは複数
のヌクレオチド置換、付加または欠失を免疫グロブリンのヌクレオチド配列に導入するこ
とにより創出できる。変異は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ仲介突然変異誘発の
ような標準的な技術により導入できる。好ましくは、保存的アミノ酸置換を、１または複
数の非必須アミノ酸残基にて作製する。
Ｖ．融合タンパク質および抗体コンジュゲート
本明細書の他の場所でより詳細に論じるように、抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば本発
明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、さらに、Ｎ末端もしく
はＣ末端にて異種ポリペプチドと組換えにより融合できるか、またはポリペプチドもしく
はその他の組成物と化学的にコンジュゲート（共有的および非共有的コンジュゲーション
を含む）できる。例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体は、検出アッセイにおいて標識として有用
な分子および異種ポリペプチド、薬物、放射性核種もしくは毒素のようなエフェクター分
子と組換えにより融合またはコンジュゲートできる。例えば、国際公開第９２／０８４９
５号；国際公開第９１／１４４３８号；国際公開第８９／１２６２４号；米国特許第５，
３１４，９９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照されたい。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、
改変された誘導体を含むことができ、すなわち抗ＣＸＣＬ１３に結合する抗体を共有的付
着が妨げないような抗体への任意の型の分子の共有的付着による。例えば、しかし限定す
ることなく、抗体誘導体は、例えばグリコシル化、アセチル化、ｐｅｇ化、リン酸化、ア
ミド化、既知の保護基／遮蔽基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞性リガンドま
たはその他のタンパク質との結合などにより改変された抗体を含む。任意の多数の化学的
改変を、それらに限定されないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化などを含
む既知の技術により行うことができる。さらに、誘導体は、１または複数の非伝統的アミ
ノ酸を含有してよい。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントも
しくは誘導体は、ペプチド結合または改変ペプチド結合により互いにつながれたアミノ酸
、すなわちペプチドアイソスターで構成でき、遺伝子によりコードされる２０のアミノ酸
以外のアミノ酸を含有してよい。例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体は、翻訳後プロセシングのよ
うな自然のプロセスにより、または当技術分野において公知の化学改変技術により改変で
きる。このような改変は、基本的な参考書およびより詳細な研究論文ならびに巻数が多い
研究文献に十分に記載されている。改変は、ペプチド主鎖、アミノ酸側鎖およびアミノも
しくはカルボキシル末端または炭水化物のような部分を含む抗ＣＸＣＬ１３結合分子の任
意の場所で生じることができる。所与の抗ＣＸＣＬ１３結合分子中のいくつかの部位にて
同じまたは変動する程度の同じ型の改変が存在できることが認識される。また、所与の抗
ＣＸＣＬ１３結合分子は、多くの型の改変を含有してよい。抗ＣＸＣＬ１３結合分子は、
例えばユビキチン化の結果として分岐してよく、これらは、分岐を有してまたは有さずに
環状であってよい。環状、分岐状および分岐状で環状の抗ＣＸＣＬ１３結合分子は、翻訳
後の自然のプロセスの結果であってよいか、または合成的方法により作製してよい。改変
は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有的付着、ヘ
ム部分の共有的付着、ヌクレオチドもしくはヌクレオチド誘導体の共有的付着、脂質もし
くは脂質誘導体の共有的付着、ホスホチジルイノシトールの共有的付着、架橋、環化、ジ
スルフィド結合形成、脱メチル化、共有的架橋の形成、システインの形成、ピログルタメ
ートの形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成
、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ｐｅｇ化、タンパク質
分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニ
ン化のようなタンパク質へのアミノ酸のトランスファーＲＮＡ仲介付加ならびにユビキチ
ン化を含む（例えばＰｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａ
ｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、ＮＹ；第２版（１９９３）；Ｊｏｈｎｓｏｎ編（１９８３）Ｐｏ
ｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）、１〜１２頁；Ｓｅｉｆｔ
ｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６〜６４６頁（１９９０）；Ｒａｔｔ
ａｎら、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８〜６２頁（１９９２）を参照さ
れたい）。
本発明は、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体と
、異種ポリペプチドとを含む融合タンパク質も提供する。抗体と融合する異種ポリペプチ
ドは、機能のために有用であり得るか、または抗ＣＸＣＬ１３ポリペプチド発現細胞を標
的にするために有用である。
一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、本発明の抗体の任意の１もしくは複数の
ＶＨドメインのアミノ酸配列、または本発明の抗体の任意の１もしくは複数のＶＬドメイ
ンのアミノ酸配列あるいはその断片もしくはバリアントと、異種ポリペプチド配列とを有
するポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。
別の実施形態では、本明細書で開示する診断および処置方法において用いるための融合
タンパク質は、抗ＣＸＣＬ１３抗体のＶＨドメインの任意の１、２、３のＣＤＲのアミノ
酸配列またはその断片、バリアントもしくは誘導体および／あるいは抗ＣＸＣＬ１３抗体
のＶＬドメインの任意の１、２、３のＣＤＲのアミノ酸配列またはその断片、バリアント
もしくは誘導体と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含むか、本質的にそ
れからなるかまたはそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、本発明の抗ＣＸ
ＣＬ１３抗体の少なくとも１つのＶＨドメインのアミノ酸配列および本発明の抗ＣＸＣＬ
１３抗体の少なくとも１つのＶＬドメインのアミノ酸配列またはその断片、誘導体もしく
はバリアントと、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含む。好ましくは、融
合タンパク質のＶＨおよびＶＬドメインは、ＣＸＣＬ１３の少なくとも１つのエピトープ
に特異的に結合する、単一供給源の抗体（またはｓｃＦｖもしくはＦａｂ断片）に相当す
る。まだ別の実施形態では、本明細書で開示する診断および処置方法において用いるため
の融合タンパク質は、抗ＣＸＣＬ１３抗体のＶＨドメインの任意の１、２、３以上のＣＤ
Ｒのアミノ酸配列および抗ＣＸＣＬ１３抗体のＶＬドメインの任意の１、２、３以上のＣ
ＤＲのアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントと、異種ポリペプチド配列とを有
するポリペプチドを含む。好ましくは、ＶＨドメインまたはＶＬドメインの２，３、４、
５、６以上のＣＤＲ（複数可）は、本発明の単一供給源の抗体（またはｓｃＦｖもしくは
Ｆａｂ断片）に相当する。これらの融合タンパク質をコードする核酸分子も本発明に包含
される。
文献において報告されている例示的な融合タンパク質は、Ｔ細胞受容体（Ｇａｓｃｏｉ
ｇｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：２９３６〜２９４０頁
（１９８７））；ＣＤ４（Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３７：５２５〜５３１頁（１９
８９）；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ３３９：６８〜７０頁（１９８９）；Ｚ
ｅｔｔｍｅｉｓｓｌら、ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．ＵＳＡ９：３４７〜３５３頁（１
９９０）；およびＢｙｒｎら、Ｎａｔｕｒｅ３４４：６６７〜６７０頁（１９９０））；
Ｌ−セレクチン（ホーミング受容体）（Ｗａｔｓｏｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１
０：２２２１〜２２２９頁（１９９０）；およびＷａｔｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３４９：
１６４〜１６７頁（１９９１））；ＣＤ４４（Ａｒｕｆｆｏら、Ｃｅｌｌ６１：１３０３
〜１３１３頁（１９９０））；ＣＤ２８およびＢ７（Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．１７３：７２１〜７３０頁（１９９１））；ＣＴＬＡ−４（Ｌｉｓｌｅｙら、Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：５６１〜５６９頁（１９９１））；ＣＤ２２（Ｓｔａｍｅｎｋ
ｏｖｉｃら、Ｃｅｌｌ６６：１１３３〜１１４４頁（１９９１））；ＴＮＦ受容体（Ａｓ
ｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１０５３５〜
１０５３９頁（１９９１）；Ｌｅｓｓｌａｕｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７
：２８８３〜２８８６頁（１９９１）；およびＰｅｐｐｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１
７４：１４８３〜１４８９頁（１９９１））；およびＩｇＥ受容体ａ（Ｒｉｄｇｗａｙお
よびＧｏｒｍａｎ、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．第１１５巻、アブストラクト第１４４８号
（１９９１））の融合体を含む。
本明細書の他の場所で論じるように、抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば本発明の抗体ま
たはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、異種ポリペプチドと融合させて、
ポリペプチドのインビボ半減期を増加させるか、または当技術分野において知られる方法
を用いるイムノアッセイにおいて用いることができる。例えば、一実施形態では、ＰＥＧ
を本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体にコンジュゲートして、それらの半減期をインビボで増加
させることができる。Ｌｅｏｎｇら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ１６：１０６頁（２００１）；Ａ
ｄｖ．ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４：５３１頁（２００２）；またはＷｅ
ｉｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ３０：５１２頁（２００２
）を参照されたい。
さらに、抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリ
アントもしくは誘導体は、それらの精製または検出を容易にするためのペプチドのような
マーカー配列と融合できる。特定の実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、なかでもｐ
ＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔ
ｓｗｏｒｔｈ，Ｃａｌｉｆ．，９１３１１）において提供されるタグのようなヘキサヒス
チジンペプチドである（これらの多くは市販で入手可能である）。Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８２１〜８２４頁（１９８９）に記載さ
れるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精
製に有用なその他のペプチドタグは、それらに限定されないが、「ＨＡ」タグ（これは、
インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに相当する（Ｗｉｌｓｏ
ｎら、Ｃｅｌｌ３７：７６７頁（１９８４）））および「フラグ」タグを含む。
融合タンパク質は、当技術分野において公知の方法を用いて調製できる（例えば米国特
許第５，１１６，９６４号および第５，２２５，５３８号を参照されたい）。融合が作製
される精密な部位は、融合タンパク質の分泌または結合の特徴を最適化するために経験的
に選択できる。融合タンパク質をコードするＤＮＡを、次いで、発現のために宿主細胞に
トランスフェクトする。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントも
しくは誘導体は、コンジュゲートされていない形態で用いることができるか、あるいは例
えば分子の治療特性を改善するため、標的検出を容易にするためまたは患者のイメージン
グもしくは治療のために様々な分子の少なくとも１つとコンジュゲートできる。抗ＣＸＣ
Ｌ１３結合分子、例えば本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導
体は、精製の前もしくは後または精製を行うときに標識またはコンジュゲートできる。
特に、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導
体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的
応答修飾物質、薬剤またはＰＥＧとコンジュゲートできる。
当業者は、コンジュゲートさせる選択された物質に依存して様々な技術を用いてコンジ
ュゲートを組み立てることもできることを認識している。例えば、ビオチンとのコンジュ
ゲートは、例えば、結合ポリペプチドをビオチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
のようなビオチンの活性化エステルと反応させることにより調製される。同様に、蛍光マ
ーカーとのコンジュゲートは、カップリング剤、例えば本明細書で列挙するものの存在下
で、またはイソチオシアネート、好ましくはフルオレセイン−イソチオシアネートとの反
応により調製できる。本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアント
もしくは誘導体のコンジュゲートは、類似の様式で調製される。
本発明は、診断剤または治療剤とコンジュゲートした抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば
本発明の抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体をさらに包含する。そ
の抗原結合断片、バリアントおよび誘導体を含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、例えば、例えば
所与の処置および／または防止計画の効力を決定するための臨床試験手順の一部として疾
患の発展または進行をモニタリングするために、診断的に用いることができる。例えば、
検出は、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体を検出
可能物質に結合させることにより容易にできる。検出可能物質の例は、様々な酵素、補欠
分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射活性物質、様々な陽電子放射断層撮影
を用いる陽電子放射金属、および非放射活性常磁性金属イオンを含む。本発明による診断
薬として用いるための抗体にコンジュゲートできる金属イオンについて、例えば米国特許
第４，７４１，９００号を参照されたい。適切な酵素の例は、セイヨウワサビペルオキシ
ダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラ
ーゼを含み、適切な補欠分子団複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビ
ジン／ビオチンを含み、適切な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フ
ルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセ
イン、ダンシルクロリドまたはフィコエリスリンを含み、発光物質の例は、ルミノールを
含み、生物発光物質の例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンを含み、適
切な放射活性物質の例は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９０Ｙまたは９９Ｔｃを含
む。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘
導体は、細胞毒、治療剤または放射活性金属イオンのような治療部分とコンジュゲートで
きる。細胞毒または細胞傷害作用物質は、細胞にとって有害な任意の物質を含む。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘
導体は、それを化学発光化合物に結合させることにより検出可能に標識することもできる
。化学発光タグ付加抗ＣＸＣＬ１３結合分子の存在は、次いで、化学反応の経過中に生じ
る発光の存在を検出することにより決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、
ルミノール、イソルミノール、テロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、
アクリジニウム塩およびオキサレートエステルである。
抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体を検出可能に
標識できる方法の１つは、これを酵素に連結させ、連結生成物を酵素イムノアッセイ（Ｅ
ＩＡ）において用いることによる（Ｖｏｌｌｅｒ，Ａ．、「Ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉ
ｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ （ＥＬＩＳＡ）」Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏ
ｎ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｈｏｒｉｚｏｎｓ２：
１〜７頁（１９７８）；Ｖｏｌｌｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．３１：５０７〜
５２０頁（１９７８）；Ｂｕｔｌｅｒ、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：４８２〜５２
３頁（１９８１）；Ｍａｇｇｉｏ編（１９８０）Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．；Ｉｓｈｉｋａｗａら編（１９
８１）Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（Ｋｇａｋｕ Ｓｈｏｉｎ、Ｔｏｋｙｏ）
）。抗ＣＸＣＬ１３抗体と結合した酵素は、適当な基質、例えば色素産生基質と、例えば
分光光学的、蛍光測定的にまたは視覚的手段により検出できる化学部分を生成するような
様式で反応させる。抗体を検出可能に標識するために用いることができる酵素は、それら
に限定されないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−
ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロホスフ
ェート、デヒドロゲナーゼ、トリオースホスフェートイソメラーゼ、セイヨウワサビペル
オキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、
ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−
６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼを含
む。さらに、検出は、酵素についての色素酸性基質を用いる比色法により達成できる。検
出は、同様に調製した標準物質との比較における基質の酵素反応の程度の視覚的比較によ
り達成してもよい。
検出は、様々なその他のイムノアッセイのいずれを用いて達成してもよい。例えば、抗
ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体
を放射活性標識することにより、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を用いて結合分子を検
出することが可能である（例えばＷｅｉｎｔｒａｕｂ（１９８６年３月）Ｐｒｉｎｃｉｐ
ｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｔｒａｉｎｉｎ
ｇ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
（Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ）（これは、本明細書に参照により組み
込まれている）を参照されたい）。放射活性同位体は、それらに限定されないが、ガンマ
カウンタ、シンチレーションカウンタまたはオートラジオグラフィを含む手段により検出
できる。
抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘
導体は、１５２Ｅｕまたはランタニド系の他のもののような蛍光放出金属を用いて検出可
能に標識することもできる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）
またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を用いて結合分子に
付着できる。
様々な部分を抗体、例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントも
しくは誘導体にコンジュゲートするための技術は公知であり、例えばＭｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄ
ら編（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、２４３〜５６頁中のＡｍｏｎら（１９８５
）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔ
ｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌ
ｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編（第２版；Ｍａｒｃｅｌ Ｄ
ｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、６２３〜５３頁中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら（１９８７）「Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、４７５〜５０６頁中のＴｈｏｒｐｅ（１
９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎ
ｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、３０３〜１６頁（１
９８５）中の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐ
ｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａ
ｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏ
ｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８頁（１９８２）を参照されたい
。
ＶＩ．抗体ポリペプチドの発現
抗体の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡ配列は、逆転写酵素およびＤＮＡポリメラー
ゼを公知の方法に従って用いて、同時にまたは別々に作製できる。ＰＣＲは、コンセンサ
ス定常領域プライマーによりまたは発表された重鎖および軽鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配
列に基づくより特異的なプライマーにより開始できる。上で論じたように、ＰＣＲを用い
て、抗体軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡクローンを単離できる。この場合、ライブラ
リーを、コンセンサスプライマーまたはマウス定常領域プローブのようなより大きい相同
プローブによりスクリーニングできる。
ＤＮＡ、典型的にはプラスミドＤＮＡは、当技術分野において知られる技術を用いて細
胞から単離し、制限マッピングし、例えば組換えＤＮＡ技術に関する上記の参考文献にお
いて詳細に示される標準的で公知の技術に従って配列決定できる。もちろん、ＤＮＡは、
単離プロセスまたはその後の分析中の任意の時点で本発明に従って合成的されてよい。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体を提
供するための単離遺伝物質の操作の後に、抗ＣＸＣＬ１３抗体をコードするポリヌクレオ
チドを、典型的に、所望の量の抗ＣＸＣＬ１３抗体を生成するために用い得る宿主細胞に
導入するために発現ベクターに挿入する。
抗体またはその断片、誘導体もしくは類似体、例えば本明細書で記載する標的分子、例
えばＣＸＣＬ１３に結合する抗体の重鎖または軽鎖の組換え発現は、抗体をコードする１
または複数のポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を必要とする。本発明の抗
体分子あるいは抗体の重鎖もしくは軽鎖またはその一部分（好ましくは重鎖または軽鎖可
変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチドが一旦得られると、抗体分子の生成の
ためのベクターを、当技術分野において公知の技術を用いる組換えＤＮＡ技術により生成
できる。つまり、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含有するポリヌクレオチドを発現
することによりタンパク質を調製する方法が本明細書に記載される。当業者に公知の方法
を用いて、抗体コード配列ならびに適当な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベ
クターを構築できる。これらの方法は、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術
およびインビボ遺伝子組み換えを含む。本発明は、つまり、本発明の抗体分子、またはそ
の重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖可変ドメインをコードする、プロモーター
に作動可能に連結したヌクレオチド配列を含む複製可能ベクターを提供する。このような
ベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含んでよく（例えば国
際公開第８６／０５８０７号；国際公開第８９／０１０３６号；および米国特許第５，１
２２，４６４号を参照されたい）、抗体の可変ドメインは、重鎖または軽鎖全体の発現の
ためにこのようなベクターにクローニングできる。
用語「ベクター」または「発現ベクター」は、本明細書において、宿主細胞に所望の遺
伝子を導入して発現させるための媒体としての本発明に従って用いるベクターを意味する
ために用いる。当業者に知られるように、このようなベクターは、プラスミド、ファージ
、ウイルスおよびレトロウイルスからなる群から容易に選択できる。一般的に、本発明に
適合するベクターは、選択マーカー、所望の遺伝子のクローニングを容易にする適当な制
限部位および真核もしくは原核細胞に侵入し、かつ／またはそこで複製する能力を含む。
本発明の目的のために、多数の発現ベクター系を用いることができる。例えば、あるク
ラスのベクターは、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワ
クシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ、ＭＭＴＶまたはＭＯＭ
ＬＶ）またはＳＶ４０ウイルスのような動物ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用
する。その他のものは、配列内リボソーム結合部位を有するポリシストロン系の使用を含
む。さらに、染色体中にＤＮＡを組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の
選択を可能にする１または複数のマーカーを導入することにより選択できる。マーカーは
、栄養要求性宿主に原栄養性を、殺生物剤耐性（例えば抗生物質）または銅のような重金
属に対する耐性を与えることができる。選択可能マーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配
列に直接連結できるか、または同時形質転換により同じ細胞に導入できる。さらなるエレ
メントが、ｍＲＮＡの最適な合成のために必要になることもある。これらのエレメントは
、シグナル配列、スプライシングシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサーお
よび終結シグナルを含み得る。
特定の実施形態では、クローニングされた可変領域遺伝子を、上で論じたようにして合
成された重鎖および軽鎖定常領域遺伝子（例えばヒト）とともに発現ベクターに挿入する
。もちろん、真核細胞において発現を誘発できる任意の発現ベクターを本発明において用
いることができる。適切なベクターの例は、それらに限定されないが、プラスミドｐｃＤ
ＮＡ３、ｐＨＣＭＶ／Ｚｅｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＥＦ１／Ｈｉｓ、ｐＩＮＤ／ＧＳ、ｐＲ
ｃ／ＨＣＭＶ２、ｐＳＶ４０／Ｚｅｏ２、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＨＣＭＶ、ｐＵＢ６／Ｖ５−
Ｈｉｓ、ｐＶＡＸ１およびｐＺｅｏＳＶ２（インビトロｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃ
ａｌｉｆ．から入手可能）ならびにプラスミドｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ
，Ｗｉｓ．から入手可能）を含む。一般的に、免疫グロブリン重鎖および軽鎖が適切に高
いレベルを発現するものについての、多数の形質転換細胞のスクリーニングは、例えばロ
ボットシステムにより行うことができるような慣例的な実験である。
より一般的に、抗ＣＸＣＬ１３抗体のモノマーサブユニットをコードするベクターまた
はＤＮＡ配列が一旦調製されると、発現ベクターを適当な宿主細胞に導入できる。宿主細
胞へのプラスミドの導入は、当業者に公知の様々な技術により達成できる。これらは、そ
れらに限定されないが、トランスフェクション（電気泳動およびエレクトロポレーション
を含む）、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、被包ＤＮＡを用いる細胞融合、
マイクロインジェクションおよびインタクトウイルスを用いる感染を含む。Ｖｅｃｔｏｒ
ｓ、ＲｏｄｒｉｇｕｅｚおよびＤｅｎｈａｒｄｔ編（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓ
ｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）、第２４．２章、４７０〜４７２頁中のＲｉｄｇｗａｙ（１９８８
）「Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ」を参照されたい。典
型的に、宿主へのプラスミド導入は、エレクトロポレーションによる。発現構築物を有す
る宿主細胞を、軽鎖および重鎖の生成に適当な条件下で成長させ、重鎖および／または軽
鎖タンパク質合成についてアッセイする。例示的なアッセイ技術は、酵素結合免疫吸着ア
ッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または蛍光標示式細胞分取分析
（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学などを含む。
発現ベクターを、宿主細胞に、従来の技術により移入し、トランスフェクトされた細胞
を、次いで、従来の技術により培養して、本明細書で記載する方法において用いるための
抗体を生成する。つまり、本発明は、異種プロモーターに作動可能に連結した本発明の抗
体またはその重鎖もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む
。二重鎖抗体の発現のための好ましい実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコード
するベクターを、以下に詳述するように、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細
胞で同時発現させることができる。
本明細書で用いる場合、「宿主細胞」は、組換えＤＮＡ技術を用いて構築され、少なく
とも１つの異種遺伝子をコードするベクターを有する細胞のことをいう。組換え宿主から
の抗体の単離のためのプロセスの記載において、用語「細胞」および「細胞培養物」は、
そうでないと明確に特定しない限り、抗体の供給源を示すために交換可能に用いられる。
言い換えると、「細胞」からのポリペプチドの回収は、スピンダウンした細胞全体から、
または培地および懸濁細胞の両方を含有する細胞培養物からのいずれかを意味し得る。
様々な宿主−発現ベクター系を用いて、本明細書で記載する方法において用いるための
抗体分子を発現できる。このような宿主−発現系は、それにより対象とするコード配列を
生成して、その後、精製できる媒体を表すが、適当なヌクレオチドコード配列で形質転換
またはトランスフェクトされた場合に、本発明の抗体分子をｉｎ ｓｉｔｕで発現できる
細胞も表す。これらは、限定されないが、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオフ
ァージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡもしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された
細菌（例えばＥ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）のような微生物；抗体コード配列を
含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば
バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発
現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス
、ＴＭＶ）に感染したかもしくは組換えプラスミド発現ベクター（例えばＴｉプラスミド
）で形質転換された植物細胞系；または哺乳動物細胞のゲノム（例えばメタロチオネイン
プロモーター）もしくは哺乳動物ウイルス（例えばアデノウイルス後期プロモーター；ワ
クシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）に由来するプロモーターを含有する組換え発現
構築物を有する哺乳動物細胞系（例えばＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＬＫ、２９３、３Ｔ３細胞）
を含む。特定の実施形態では、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのような細菌細胞、お
よびさらなる実施形態では、特に組換え抗体分子全体の発現のための真核細胞が、組換え
抗体分子の発現のために用いられる。例えば、ヒトサイトメガロウイルスからの主要中間
初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターを伴うチャイニーズハムスター卵巣
細胞（ＣＨＯ）のような哺乳動物細胞は、抗体についての有効な発現系である（Ｆｏｅｃ
ｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ４５：１０１頁（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ８：２頁（１９９０））。
タンパク質発現のために用いられる宿主株化細胞は、頻繁に哺乳動物起源のものである
。当業者は、発現させる所望の遺伝子生成物に最も適する具体的な宿主株化細胞を優先的
に決定する能力を有すると信じられる。例示的な宿主株化細胞は、それらに限定されない
が、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）、ＤＧ４４およびＤＵＸＢ１１（チャイニー
ズハムスター卵巣系統、ＤＨＦＲマイナス）、ＨＥＬＡ（ヒト子宮頚癌）、ＣＶＩ（サル
腎臓系統）、ＣＯＳ（ＳＶ４０Ｔ抗原を有するＣＶＩの誘導体）、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ（ベ
ビーハムスター腎臓）、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、Ｒ１６１０（チャイニーズハムス
ター線維芽細胞）、ＢＡＬＢＣ／３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、ＨＡＫ（ハムスター腎臓
系統）、ＳＰ２／Ｏ（マウスミエローマ）、Ｐ３．ｔｉｍｅｓ．６３−Ａｇ３．６５３（
マウスミエローマ）、ＢＦＡ−１ｃ１ＢＰＴ（ウシ内皮細胞）、ＲＡＪＩ（ヒトリンパ球
）および２９３（ヒト腎臓）を含む。宿主株化細胞は、商業的なサービスＡｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎまたは発表された文献から典
型的に入手可能である。
さらに、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子生成物
を改変およびプロセシングする宿主細胞株を選択できる。タンパク質生成物のこのような
改変（例えばグリコシル化）およびプロセシング（例えば切断）は、タンパク質の機能の
ために重要なことがある。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子生成物の翻訳後プ
ロセシングおよび改変について特徴的で特異的な機構を有する。適当な株化細胞または宿
主系を選択して、発現される外来タンパク質の正しい改変およびプロセシングを確実にす
ることができる。このために、１次転写産物の正しいプロセシング、遺伝子生成物のグリ
コシル化およびリン酸化のための細胞の仕組みを有する真核宿主細胞を用いることができ
る。
組換えタンパク質の長期で高収率の生成のために、安定発現が好ましい。例えば、抗体
分子を安定的に発現する株化細胞を工学的に作製できる。ウイルス複製起点を含有する発
現ベクターを用いるよりむしろ、宿主細胞を、適当な発現制御エレメント（例えばプロモ
ーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）と選択可
能マーカーとで制御されたＤＮＡで形質転換できる。外来ＤＮＡの導入の後に、工学的に
作製された細胞を富栄養培地中で１〜２日間成長させることができ、次いで選択培地に交
換する。組換えプラスミド中の選択可能マーカーは、選択に対する耐性を与え、細胞の染
色体中に細胞がプラスミドを安定的に組み込み、成長して増殖巣を形成することを可能に
する（これが次いでクローニングされ、株化細胞に発展することができる）。この方法は
、抗体分子を安定的に発現する株化細胞を工学的に作製するために有利に用いることがで
きる。
それらに限定されないが、ヘルペス単純ウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、
Ｃｅｌｌ１１：２２３頁（１９７７））、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトラ
ンスフェラーゼ（ＳｚｙｂａｌｓｋａおよびＳｚｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ４８：２０２頁（１９９２））およびアデニンホスホリボシル
トランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら、Ｃｅｌｌ２２：８１７頁（１９８０））遺伝子（ｔｋ
−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ細胞においてそれぞれ用いることができる）を含むいく
つかの選択系を用いることができる。また、代謝拮抗物質耐性を、以下の遺伝子について
の選択の基礎として用いることができる：ｄｈｆｒ（これは、メトトレキセートに対する
耐性を与える（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：３５７頁（
１９８０）；Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８：１
５２７頁（１９８１）））；ｇｐｔ（これは、ミコフェノール酸に対する耐性を与える（
ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＢｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８
：２０７２頁（１９８１）））；ｎｅｏ（これは、アミノグリコシドＧ−４１８に対する
耐性を与えるＣｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ１２：４８８〜５０５頁；Ｗｕおよび
Ｗｕ、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ３：８７〜９５頁（１９９１））；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、
Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３〜５９６頁（１９
９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９２６〜９３２頁（１９９３）；な
らびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：
１９１〜２１７頁（１９９３）；ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５〜２１５頁（１
９９３年５月））；およびｈｙｇｒｏ（これは、ハイグロマイシンに対する耐性を与える
（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ３０：１４７頁（１９８４））。用いることができる組
換えＤＮＡ技術の分野において一般的に知られる方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９３）
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊ
ｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ）；Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓ
ｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）中のＫｒｉｅｇｌｅｒ（１９９０）「Ｇｅｎｅ Ｔ
ｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」；Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）（１９
９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｊ
ｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ）１２および１３章；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａ
ｐｉｎら（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１頁（これらはそれらの全体が本
明細書に参照により組み込まれている）に記載される。
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅により増やすことができる（総説については、
ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ（１９８７）「Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ
Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｇｅｎｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｌｏｎｅｄ Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｍａｍｍａｌ
ｉａｎ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
、ＮＹ）第３巻を参照されたい）。抗体を発現するベクター系中のマーカーが増幅可能で
ある場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害物質のレベルが増加すると、マーカー遺伝
子のコピー数が増加する。増幅領域は抗体遺伝子と関連するので、抗体の生成も増加する
（Ｃｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７頁（１９８３））。
インビトロ生成は、大量の所望のポリペプチドを得るためのスケールアップを可能にす
る。組織培養条件下での哺乳動物細胞培養のための技術は当技術分野において知られてお
り、例えばエアリフトリアクタもしくは連続撹拌リアクタ中での均質懸濁培養、あるいは
例えば中空繊維、マイクロカプセル中、アガロースマイクロビーズもしくはセラミックカ
ートリッジ上での固定化または包括細胞培養を含む。必要でありかつ／または望ましいな
らば、ポリペプチドの溶液を、例えば合成ヒンジ領域ポリペプチドの優先的生合成の後ま
たは本明細書で記載するＨＩＣクロマトグラフィーステップの前もしくは後の慣習的なク
ロマトグラフィー法、例えばゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥセルロ
ースでのクロマトグラフィー、または（免疫）親和性クロマトグラフィーにより精製でき
る。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体をコ
ードする遺伝子は、昆虫、細菌もしくは酵母または植物細胞のような非哺乳動物細胞にお
いて発現することもできる。核酸を容易に取り込む細菌は、腸内細菌のメンバー、例えば
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉの株もしくはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ；Ｂａｃｉｌｌａ
ｃｅａｅ、例えばＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ；Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ；Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓおよびＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅを含む
。細菌において発現される場合、異種ポリペプチドが典型的に封入体の一部になることが
さらに認識される。異種ポリペプチドは、単離し、精製し、次いで機能的分子に組み立て
なければならない。四価の形態の抗体が望まれる場合、サブユニットを、次いで、四価抗
体に自己集合させる（国際公開第０２／０９６９４８号）。
細菌系において、いくつかの発現ベクターを、発現される抗体分子が意図する使用に依
存して有利に選択できる。例えば、抗体分子の医薬組成物の作製のために大量のこのよう
なタンパク質を生成する場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質生成物の発現
を駆動するベクターが望ましい場合がある。このようなベクターは、それらに限定されな
いが、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．２：１
７９１頁（１９８３））（ここでは、抗体コード配列が、融合タンパク質が生成されるよ
うにｌａｃＺコード領域とインフレームでベクター中に個別にライゲーションされ得る）
；ｐＩＮベクター（ＩｎｏｕｙｅおよびＩｎｏｕｙｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．１３：３１０１〜３１０９頁（１９８５）；Ｖａｎ ＨｅｅｋｅおよびＳｃｈｕｓ
ｔｅｒ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３〜５５０９頁（１９８９））などを含
む。ｐＧＥＸベクターを用いて、外来ポリペプチドを、グルタチオンＳ−トランスフェラ
ーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現させてもよい。一般的に、このような融合
タンパク質は、可溶性であり、溶解細胞から、マトリクスグルタチオン−アガロースビー
ズへの吸着および結合と、その後の遊離グルタチオンの存在下での溶出とにより容易に精
製できる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子生成物がＧＳＴ部分から
遊離され得るように、トロンビンまたは第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設
計されている。
原核生物に加えて、真核微生物も用いてよい。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅまたは一般的にパン酵母は、真核微生物のうちで最も一般的に用いられるが
、いくつかのその他の株、例えばＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓも一般的に利用可能で
ある。
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓにおける発現について、例えばプラスミドＹＲｐ７（Ｓｔ
ｉｎｃｈｃｏｍｂら、Ｎａｔｕｒｅ２８２：３９頁（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎら、
Ｇｅｎｅ７：１４１頁（１９７９）；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒら、Ｇｅｎｅ１０：１５７頁（
１９８０））が一般的に用いられる。このプラスミドは、ＴＲＰ１遺伝子を既に含有し、
これは、トリプトファン中で成長する能力を欠く酵母変異株、例えばＡＴＣＣ第４４０７
６号またはＰＥＰ４−１（Ｊｏｎｅｓ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ８５：１２頁（１９７７））に
ついての選択マーカーを提供する。酵母宿主細胞ゲノムの特徴としてのｔｒｐ１欠損の存
在は、次いで、トリプトファンの非存在下での成長による形質転換の検出のための有効な
環境を提供する。
昆虫系において、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス
（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして典型的に用いられる。ウ
イルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞で成長する。抗体コード配
列は、ウイルスの非必須領域（例えばポリヘドリン遺伝子）中に個別にクローニングして
、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下におくことがで
きる。
本発明の抗体分子が組換えにより一旦発現されると、これは、免疫グロブリン分子の精
製のための当技術分野において知られる任意の方法、例えばクロマトグラフィー（例えば
イオン交換、親和性、特にプロテインＡの後の特異的抗原についての親和性、およびサイ
ジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差的溶解性またはタンパク質の精製の
ための任意のその他の標準的な技術により精製できる。代わりに、本発明の抗体の親和性
を増加させる方法は、米国特許出願公開第２００２ ０１２３０５７Ａ１号に開示される
。
ＶＩＩ．治療的抗ＣＸＣＬ１３抗体を用いる処置方法
リンパ系ケモカインＣＸＣＬ１３は、濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）およびマクロファージに
より発現される。様々な免疫細胞（例えばＢ細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞および活性化され
たばかりのＴ細胞）上で見出されるその受容体であるＣＸＣＲ５を介して、ＣＸＣＬ１３
は、免疫系恒常性の維持、リンパ器官形成、白血球のやり取りおよび化学走性移動ならび
に２次リンパ組織（例えば胚中心）の発達に必要な細胞内変化を誘発する。ＣＸＣＬ１３
およびその受容体ＣＸＣＲ５の過剰発現は、様々な自己免疫疾患に関わっている（例えば
多発性硬化症（例えばＣｏｒｃｉｏｎｅら、ＰＮＡＳ１０１（３０）：１１０６４〜１１
０６９頁（２００４）；Ｓｅｒａｆｉｎｉら、Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１４：１６４
〜１７４頁（２００４）；Ｍａｇｌｉｏｚｚｉら、Ｂｒａｉｎ１３０：１０８９〜１１０
４頁（２００７）を参照されたい）、関節炎（例えば関節リウマチ（例えばＲｉｏｊａら
、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ５８（８）：２２５７〜２２６７頁（２０
０８）；Ｓｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１６６：６５０〜６５５頁（２００１）；Ｓｃｈ
ｍｕｔｚら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｔｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ７：Ｒ
２１７〜Ｒ２２９頁（２００５）；Ｈｊｅｌｍｓｔｒｏｍら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ
Ｂｉｏ．６９：３３１〜３３９頁（２００１）を参照されたい）、慢性胃炎（例えばＨｊ
ｅｌｍｓｔｒｏｍら；Ｍａｚｚｕｃｃｈｅｌｌｉら、Ｂｒａｉｎ１３０：１０８９〜１１
０４頁（２００７）を参照されたい）、胃リンパ腫（例えば同著；Ｎｏｂｕｔａｎｉら、
ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ６０：１５６〜１６４頁（２０
１０）を参照されたい）、移植片拒絶（例えばＳｔｅｉｎｍｅｔｚら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ６７：１６１６〜１６２１頁（２００５）を参照されたい）、
シェーグレン症候群（ＳＳ）（例えばＢａｒｏｎｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１８０：５１
３０〜５１４０頁（２００８）；Ｈｊｅｌｍｓｔｒｏｍらを参照されたい）、全身性エリ
テマトーデス（ＳＬＥ）（例えばＳｔｅｉｎｍｅｔｚら、Ｌｅｅら、Ｊ．Ｒｈｅｕｍ．３
７（１）：４５〜５２頁（２０１０）；Ｓｃｈｉｆｆｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１７１：
４８９〜４９７頁（２００３）を参照されたい）、Ｃ型肝炎ウイルス感染における活動性
混合型クリオグロブリン血症（ＭＣ）血管炎（例えばＳａｎｓｏｎｎｏら、Ｂｌｏｏｄ１
１２（５）：１６２０〜１６２７頁（２００８）を参照されたい）、若年性皮膚筋炎（例
えばｄｅ Ｐａｄｉｌｌａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ６０（４）：
１１６０〜１１７２頁（２００９）を参照されたい）および重症筋無力症（例えばＭａｔ
ｓｕｍｏｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１７６：５１００〜５１０７頁（２００６）；Ｍｅ
ｒａｏｕｎａら、Ｂｌｏｏｄ１０８（２）：４３２〜４４０頁（２００６）；Ｓａｉｔｏ
ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ１７０：１７２〜１７８頁（２００５）を参照された
い）ならびにある種のがん（例えばバーキットリンパ腫（例えばＦｏｒｓｔｅｒら、Ｂｌ
ｏｏｄ８４：８３０〜８４０頁（１９９４）；Ｆｏｒｓｔｅｒら、Ｃｅｌｌ８７：１０３
７〜１０４７頁（１９９６）を参照されたい）、非ホジキンリンパ腫（例えばＴｒｅｎｔ
ｉｎら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２５１〜８１頁（１９８８）；Ｇｏｎｇ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：８１７〜８２６頁（２００５）；Ｈａｍａｇｕｃｈｉ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：４３８９〜４３９９頁（２００５）を参照されたい）
、癌（例えば結腸および膵臓）（例えばＧｕｎｔｈｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１
１６：７２６〜７３３頁（２００５）；Ｍｅｉｊｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：
９５７６〜９５８２頁（２００６）を参照されたい）、乳がん（例えばＰａｎｓｅら、Ｂ
ｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ９９：９３０〜９３８頁（２００８
）を参照されたい）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えばＢｕｒｋｌｅら、Ｂｌｏｏ
ｄ１１０：３３１６〜３３２５頁（２００７）を参照されたい）および前立腺がん（例え
ばＳｉｎｇｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ２８３（１）：２９〜３５頁（２００９
）を参照されたい）。ＣＸＣＬ１３活性の阻害のための本発明の方法は、上記の障害に対
して治療効果を有することが予期される。
本発明の特定の方法は、ＣＸＣＬ１３発現細胞、例えばＣＸＣＬ１３過剰発現細胞に関
連する疾患を有する患者を処置するための抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えばその抗原結合
断片、バリアントおよび誘導体を含む抗体の使用を対象とする。「ＣＸＣＬ１３発現細胞
」により、ＣＸＣＬ１３抗原を発現する正常および悪性細胞を意図する。細胞においてＣ
ＸＣＬ１３発現を検出するための方法は当技術分野において公知であり、それらに限定さ
れないが、ＰＣＲ技術、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、Ｅ
ＬＩＳＡなどを含む。
以下の議論は、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体を用いる様々な疾患および障害の診断方法
および処置に言及するが、本明細書で開示する方法は、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体の所
望の特性、例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウスの
ＣＸＣＬ１３に特異的に結合できることおよびＣＸＣＬ１３中和活性を有することを保持
するこれらの抗ＣＸＣＬ１３抗体の抗原結合断片、バリアントおよび誘導体にも当てはめ
ることができる。
一実施形態では、処置は、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗
原結合断片の患者への施用または投与、あるいは抗ＣＸＣＬ１３結合分子の患者からの単
離組織または株化細胞への施用または投与を含み、ここで、患者は、疾患、疾患の症状ま
たは疾患に対する素因を有する。別の実施形態では、処置は、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結
合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物の患者への施用または投与
、あるいは抗ＣＸＣＬ１３結合分子を含む医薬組成物の患者からの単離組織または株化細
胞への施用または投与を含むことも意図し、ここで、患者は疾患、疾患の症状または疾患
に対する素因を有する。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片は、様々な悪性およ
び非悪性腫瘍の処置のために有用である。「抗腫瘍活性」により、悪性ＣＸＣＬ１３発現
細胞増殖または蓄積の速度の低下、よって現存する腫瘍の成長速度の減退もしくは治療中
に生じる腫瘍の減退および／または現存する新生物（腫瘍）細胞もしくは新しく形成され
る新生物細胞の破壊、よって治療中の腫瘍の全体的なサイズの減少を意図する。例えば、
少なくとも１つの抗ＣＸＣＬ１３抗体を用いる治療は、ヒトにおけるＣＸＣＬ１３発現細
胞に関連する疾患状態の処置に関して有益である生理的応答を引き起こす。
一実施形態では、本発明は、医薬品として用いるため、特にがんの処置または予防にお
いて用いるためまたは前がん性状態もしくは病変において用いるための本発明による抗Ｃ
ＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片に関する。特定の実施形態では、本
発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片、例えばＭＡｂ５２６１
は、ＣＸＣＬ１３過剰発現がんの処置のために用いられる。特定の実施形態では、本発明
の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片は、ＣＸＣＬ１３発現もしく
は過剰発現白血病、リンパ腫（例えばＭＡＬＴリンパ腫）、結腸、膵臓、胃、食道、乳ま
たは前立腺がんの処置のために用いられる。一実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結
合分子、例えば抗体またはその結合断片は、がん、例えば結腸または前立腺がんの処置の
ために用いられる。一実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体また
はその結合断片は、ＣＸＣＲ５発現または過剰発現がんの処置のために用いられる。
がんの処置または防止のための抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断
片の有効性は、動物モデルを用いて示すことができる。例えば、前立腺がんの処置または
防止のための本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片の有効性
は、前立腺がんについての動物モデル、例えばＰＣ３−ｌｕｃヒト前立腺がん細胞を注射
され、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子で処置されたマウスを用いて示すことができる。
別の例では、結腸がんの処置または防止のための本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例え
ば抗体またはその結合断片の有効性は、結腸がんについての動物モデル、例えばＣＴ２６
結腸癌細胞を注射され、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子で処置されたマウスを用いて示
すことができる。別の例では、ＭＡＬＴリンパ腫の処置または防止のための本発明の抗Ｃ
ＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片の有効性は、胃ＭＡＬＴリンパ腫に
ついての動物モデル、例えばヘリコバクター細菌に感染し（Ｎｏｂｕｔａｎｉら（２０１
０）を参照されたい）、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子で処置されたマウスを用いて示
すことができる。Ｎｏｂｕｔａｎｉらのモデルを用いて、ヘリコバクター感染組織の胃リ
ンパ濾胞の低減についての本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合
断片の有効性を評価することもできる。
本発明の方法に従って、本明細書の他の場所で定義されるような少なくとも１つの抗Ｃ
ＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片は、悪性ヒト細胞に関する正の
治療応答を促進するために用いられる。がんの処置に関する「正の治療応答」により、こ
れらの結合分子、例えば抗体もしくはその断片の抗腫瘍活性に関連する疾患の改善、およ
び／または疾患に関連する症状の改善を意図する。つまり、抗増殖効果、さらなる腫瘍増
生の防止、腫瘍サイズの低下、腫瘍脈管構造の減少、がん細胞の数の低下および／または
疾患に関連する１もしくは複数の症状の減少が観察できる。つまり、例えば、疾患の改善
は、完全応答を特徴とできる。「完全応答」により、以前のいずれの異常なＸ線検査、骨
髄および脳脊髄液（ＣＳＦ）の正常化を伴う臨床的に検出できる疾患の非存在を意図する
。このような応答は、本発明の方法に従う処置の後少なくとも１カ月間持続しなければな
らない。代わりに、疾患の改善は、部分的応答として分類できる。「部分的応答」により
、新しい病変の非存在下での全ての測定可能な腫瘍量（すなわち対象に存在する腫瘍細胞
の数）の少なくとも約５０％の減少（少なくとも１カ月間持続する）を意図する。このよ
うな応答は、測定可能な腫瘍にのみ用いることができる。
腫瘍応答は、生物発光イメージング、例えばルシフェラーゼイメージング、骨スキャン
イメージングおよび骨髄吸引（ＢＭＡ）を含む腫瘍生検標本採取のようなスクリーニング
技術を用いて、腫瘍形態（すなわち全体的な腫瘍量、腫瘍細胞数など）の変化について評
価できる。これらの正の治療応答に加えて、抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体または
その抗原結合断片を用いる治療を受ける対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果
を経験し得る。例えば、対象は、いわゆるＢ症状、例えば寝汗、発熱、体重減少および／
またはじんま疹の減少を経験し得る。
本明細書で記載する抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片は、
炎症性疾患およびＣＸＣＬ１３発現細胞に関連する免疫系の機能不全もしくは障害の処置
または防止において用いることもできる。炎症性疾患は、炎症および組織破壊またはその
組み合わせを特徴とする。「抗炎症活性」により、炎症の低下または防止を意図する。「
炎症性疾患」は、開始イベントまたは免疫応答の標的が例えば同種抗原、異種抗原、ウイ
ルス抗原、細菌抗原、未知抗原またはアレルゲンを含む非自己抗原に関与する任意の炎症
性免疫仲介プロセスを含む。
一実施形態では、炎症性疾患は、細菌感染、例えばヘリコバクター感染、例えばＨ．ｐ
ｙｌｏｒｉ、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、Ｈ．ａｃｉｎｏｎｙｃｈｉｓ、Ｈ．ａｎｓｅｒ
ｉｓ、Ｈ．ａｕｒａｔｉ、Ｈ．ｂａｃｕｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｈ．ｂｉｌｉｓ、Ｈ．ｂｉｚ
ｚｏｚｅｒｏｎｉｉ、Ｈ．ｂｒａｎｔａｅ、Ｈ．ｃａｎｄａｄｅｎｓｉｓ、Ｈ．ｃａｎｉ
ｓ、Ｈ．ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｕｓ、Ｈ．ｃｉｎａｅｄｉ、Ｈ．ｃｙｎｏｇａｓｔｒｉｃｕ
ｓ、Ｈ．ｅｑｕｏｒｕｍ、Ｈ．ｆｅｌｉｓ、Ｈ．ｆｅｎｅｌｌｉａｅ、Ｈ．ｇａｎｍａｎ
ｉ、Ｈ．ｈｅｐａｔｉｃｕｓ、Ｈ．ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｏｒｕｍ、Ｈ．ｍａｒｍｏｔａ
ｅ、Ｈ．ｍｕｒｉｄａｒｕｍ、Ｈ．ｍｕｓｔｅｌａｅ、Ｈ．ｐａｍｅｔｅｎｓｉｓ、Ｈ．
ｐｕｌｌｏｒｕｍ、Ｈ．ｒａｐｐｉｎｉ、Ｈ．ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｈ．ｓａｌｏｍｏｎ
ｉｓ、Ｈ．ｓｕｉｓ、Ｈ．ｔｒｏｇｏｎｔｕｍ、Ｈ．ｔｙｐｈｌｏｎｉｕｓおよびＨ．ｗ
ｉｎｇｈａｍｅｎｓｉｓ感染に関連する。ある実施形態では、ヘリコバクター感染は、Ｈ
．ｐｙｌｏｒｉまたはＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染である。さらなる実施形態では、ヘ
リコバクター関連炎症性疾患は、ＭＡＬＴリンパ腫、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がん（例えば
食道または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん）、胃もしくは十二指腸潰瘍、胃炎（胃の裏層の炎
症）または胃病変である（例えばＣｈｅｎら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ５５（２）：
１３３〜７頁（２００２）；Ｇｅｎｔａら、Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ２４（６）：５７７〜
８３頁（１９９３）；Ｏｋｉｙａｍａら、Ｐａｔｈｏｌ Ｉｎｔ５５（７）：３９８〜４
０４頁（２００５）を参照されたい）。
一実施形態では、炎症性疾患は、末梢または中枢神経系の炎症性障害である。
さらに、本発明の目的のために、用語「炎症性疾患」は、それらに限定されないが「自
己免疫疾患」を含む。本明細書で用いる場合、用語「自己免疫」は、「自己」抗原に関わ
る炎症性免疫仲介プロセスを包含すると一般的に理解される。自己免疫疾患において、自
己抗原は、宿主免疫応答を引き起こす。
一実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体または抗原結合断片は
、多発性硬化症（ＭＳ）を処置または妨げるために用いられる。播種性硬化症または播種
性脳脊髄炎としても知られるＭＳは、免疫系が中枢神経系を攻撃して脱髄を導く自己免疫
状態である。名称「多発性硬化症」は、神経系に形成される瘢痕（プラークまたは病変と
もよばれる硬化）のことをいう。ＭＳ病変は、小脳の脳室、脳幹、大脳基底核および脊髄
ならびに視神経に近い白質領域に一般的に関与する。ＭＳは、髄鞘の創出および維持を担
う細胞であるオリゴデンドロサイトの破壊をもたらす。ＭＳは、ミエリンの薄化または完
全喪失と、疾患が進行するにつれて軸策の切断をもたらす。
ＭＳに伴う神経症状は様々であり得、疾患は、頻繁に、身体および認知能力障害に進行
する。ＭＳはいくつかの形態をとり、新しい症状は、孤立した発作（再発型）または経時
的なゆっくりとした蓄積（進行型）のいずれかで生じる。発作の間に、症状は完全になく
なることがあるが、特に疾患が進行するにつれて、永続的な神経損傷が頻繁にもたらされ
る。
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症の広く受け入れられている動物
モデルである。ＥＡＥは、脊髄を主に標的にする炎症を伴う、程度が拡大する上行性麻痺
を累進的にもたらすＣＮＳの脱髄疾患である。この疾患は、誘発の方法および用いる動物
の型に依存して、急性、慢性または再発−寛解経過を呈することができる。Ｂａｇａｅｖ
ａらは、Ｂ細胞およびＣＸＣＬ１３発現樹状細胞を含有する濾胞が、再発−寛解ＥＡＥを
有するマウスの炎症性髄膜において形成され、ＣＸＣＬ１３発現のレベルが疾患の経過の
間を通して絶え間なく上昇したことを示している。ＣＸＣＬ１３欠損マウスは、寛解速度
が減少した温和な疾患を経験し、ＣＸＣＬ１３を抗ＣＸＣＬ１３ ＭＡｂで遮断すること
により、Ｂ１０．ＰＬマウスにおいて受動的に誘発したＥＡＥの疾患の減弱が導かれた。
Ｂａｇａｅｖａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１７６：７６７６〜７６８５頁（２００６）。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、例えばＭＡｂ５
２６１を用いるＣＸＣＬ１３の中和を用いて、いくつかの異なる機構、例えば、例えばＢ
細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に移動することおよび胚中心形成の干渉を
もたらす、その受容体を用いてＣＸＣＬ１３相互作用を遮断することによりＭＳの重症度
を低下させることができる。
一実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体または抗原結合断片は
、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥまたはループス）を処置または妨げるために用いられ
る。ＳＬＥは、複数の器官に関わり、異所性胚中心の自発的形成およびいくつかの核抗原
に対する自己抗体生成を特徴とする自己免疫疾患である。ＳＬＥは、最も頻繁には、心臓
、関節、皮膚、肺、血管、肝臓、腎臓および神経系に影響する。
活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞およびそれらの移動促進性ケモカインＣＸＣＬ１３は、ＳＬＥを
含む複数の自己免疫障害の炎症性異所性部位においてみられる組織化されたリンパ組織の
形成において重要な役割を演じる。ループス易発症Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｂｌａｃｋ
Ｘ Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅ Ｆ１（ＮＺＢ／ＮＺＷＦ１）マウスは、高
力価の抗ｄｓＤＮＡ抗体および腎臓の糸球体における免疫複合体の形成を原因とする重症
増殖性糸球体腎炎を自発的に発生する。これらのマウスにおけるループス様症状の発生は
、腎臓および胸腺における樹状細胞によるＣＸＣＬ１３の発現の増加を伴う（Ｉｓｈｉｋ
ａｗａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３（１２）：１３９３〜１４０２頁（２００１）；
Ｓｃｈｉｆｆｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１７１：４８９〜４９７頁（２００３））。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、例えばＭＡｂ５
２６１を用いるＣＸＣＬ１３の中和を用いて、いくつかの異なる機構、例えば、例えばＢ
細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に移動することおよび胚中心形成の干渉を
もたらす、その受容体を用いてＣＸＣＬ１３相互作用を遮断することによりＳＬＥの重症
度を低下させることができる。
一実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体または抗原結合断片は
、関節炎、例えば関節リウマチを処置または妨げるために用いられる。関節リウマチ（Ｒ
Ａ）は、最も一般的な自己免疫疾患の１つであり、米国において２〜４％の人に影響する
。これは、滑膜関節の融着、軟骨浸食および骨破壊を特徴とする慢性で進行性の全身性炎
症障害である。ＲＡにおいて、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）
は、パンヌスを形成する滑膜層（軟骨および骨に浸食する滑膜の浸潤性領域）において蓄
積される。さらに、滑膜病変内のＴおよびＢ細胞は、リンパ系胚中心様構造に組織化され
、これが自己抗体（リウマチ因子）生成を支持し、よって、疾患病原に直接寄与する（Ｔ
ａｋｅｍｕｒａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１６７：１０７２〜１０８０頁（２００１）；Ｓ
ｈｉら、Ｊ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ．１６６：６５０〜６５５頁（２００１））。
滑膜線維芽細胞、選択された内皮細胞、滑膜抗原刺激Ｔヘルパー細胞およびＦＤＣによ
り生成されるリンパ系ケモカインＣＸＣＬ１３（Ｔａｋｅｍｕｒａら（２００１）；Ｓｈ
ｉら（２００１）；Ｍａｎｚｏら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ５８（１
１）：３３７７〜３３８７頁（２００８））は、ＣＸＣＲ５陽性リンパ系細胞（主にＢ細
胞および濾胞Ｔヘルパー細胞）の炎症性滑膜への移動を駆動することにより、滑膜組織に
おける胚中心形成において重要な役割を演じる。
臨床的に、ＲＡ患者におけるＣＸＣＬ１３の血漿レベルは、疾患の重症度と相関する。
なぜなら、著しくより高いレベルのＣＸＣＬ１３が、対照および静止疾患の患者と比較し
て、活動性ＲＡの患者からの血漿において見出されたからである（Ｒｉｏｊａら、Ａｒｔ
ｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ５８（８）：２２５７〜２２６７頁（２００８））
。さらに、ＣＸＣＲ５受容体は、ＲＡ患者の滑膜において上方制御され、浸潤性Ｂおよび
Ｔ細胞上、ならびにマクロファージおよび内皮細胞上に存在する（Ｓｃｈｍｕｔｚら、Ａ
ｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｈｅｒａｐｙ７：Ｒ２１７〜Ｒ２２９頁（２０
０５））。
マウスおよびラットにおけるコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）は、ヒト関節リウマチ（
ＲＡ）の十分に確立されたモデルである。疾患は、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ
）中で乳化したウシＩＩ型コラーゲンの皮内注射により典型的に誘発され、マウスコラー
ゲン抗体の生成と、その後の足における関節炎の進行性の発展を特徴とする。Ｓｔａｎｎ
ａｒｄらは、ラット抗マウスＣＸＣＬ１３抗体を用いるＣＸＣＬ１３の中和が、関節炎Ｄ
ＢＡ／１マウスにおける関節炎スコアおよび関節破壊の重症度の著しい低下を導いたこと
を示した。Ｓｔａｎｎａｒｄら、「Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＸＣＬ１３
ｉｍｐａｃｔｓ Ｂ−ｃｅｌｌ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｓ
ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｒｔ
ｈｒｉｔｉｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ
の２００８年Ａｎｎｕａｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｅｅｔｉｎｇにて発表（２００８
）。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、例えばＭＡｂ５
２６１を用いるＣＸＣＬ１３の中和を用いて、いくつかの異なる機構、例えば、例えばＢ
細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に移動することおよび胚中心形成の干渉を
もたらす、その受容体を用いてＣＸＣＬ１３相互作用を遮断することにより関節炎、例え
ば関節リウマチの重症度を低下させることができる。さらに、本発明の抗ＣＸＣＬ１３モ
ノクローナル抗体またはその抗原結合断片、例えばＭＡｂ５２６１を用いて、例えばＲＡ
ＮＫＬ過剰発現の対象においてＲＡＮＫＬ発現および骨減少を低減できる。
本発明の方法に従って、本明細書の他の場所で定義するような少なくとも１つの抗ＣＸ
ＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片は、自己免疫疾患および／または
炎症性疾患の処置または防止に関する正の治療応答を促進するために用いられる。自己免
疫疾患および／または炎症性疾患に関する「正の治療応答」により、これらの抗体の抗炎
症活性、抗血管新生活性、抗アポトーシス活性などに関連する疾患の改善および／または
疾患に関連する症状の改善を意図する。つまり、抗増殖効果、ＣＸＣＬ１３発現細胞のさ
らなる増殖の防止、それらに限定されないが、炎症性サイトカイン、接着分子、プロテア
ーゼ、免疫グロブリン（例えばＣＸＣＬ１３を有する細胞がＢ細胞である場合）、それら
の組み合わせの分泌の低下などを含む炎症性応答の低減、抗炎症性タンパク質の生成の増
加、自己反応性細胞の数の低下、免疫寛容の増加、自己反応性細胞生存の阻害、アポトー
シスの低下、内皮細胞移動の低下、自発的単球移動の増加、ＣＸＣＬ１３発現細胞の刺激
により仲介される１もしくは複数の症状の低下および／または減少が観察できる。このよ
うな正の治療応答は、投与経路に限定されず、ドナー、ドナー組織（例えば臓器灌流）、
ホスト、それらの任意の組み合わせなどへの投与を含み得る。
臨床応答は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）スキャン、ｘ線撮影イメージング、コン
ピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光標示式細胞分取（
ＦＡＣＳ）分析、組織学的検査、肉眼所見、およびそれらに限定されないがＥＬＩＳＡ、
ＲＩＡ、クロマトグラフィーなどにより検出可能な変化を含む血液化学のようなスクリー
ニング技術を用いて評価できる。これらの正の治療応答に加えて、抗ＣＸＣＬ１３結合分
子、例えば抗体またはその抗原結合断片を用いる治療を受ける対象は、疾患に関連する症
状の改善の有益な効果を経験し得る。
本発明のさらなる実施形態は、例えば所与の処置計画の効力を決定するための臨床試験
手順の一部として組織におけるタンパク質レベルを診断的にモニタリングするための、抗
ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片の使用である。例えば、検出
は、抗体を検出可能物質に結合させることにより容易にできる。検出可能物質の例は、様
々な酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射活性物質を含む。
適切な酵素の例は、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガ
ラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子団複合体の例
は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み、適切な蛍光物質の
例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダ
ミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリ
スリンを含み、発光物質の例は、ルミノールを含み、生物発光物質の例は、ルシフェラー
ゼ、ルシフェリンおよびエクオリンを含み、適切な放射活性物質の例は、１２５Ｉ、１３
１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈを含む。
ＶＩＩＩ．医薬組成物および投与方法
必要とする対象に本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断
片、バリアントもしくは誘導体を調製して投与する方法は、当業者に公知であるかまたは
当業者により容易に決定する。抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合
断片、バリアントもしくは誘導体の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入によるかま
たは局所的であってよい。用語「非経口」は、本明細書で用いる場合、例えば静脈内、動
脈内、腹腔内、筋内、皮下、直腸または膣投与を含む。これらの全ての投与の形態は本発
明の範囲内であると明確に考えられるが、投与の形態の例は、注射用、特に静脈内もしく
は動脈内注射または点滴用の液剤である。通常、注射用の適切な医薬組成物は、緩衝剤（
例えば酢酸塩、リン酸塩またはクエン酸塩緩衝剤）、界面活性剤（例えばポリソルベート
）、場合によって安定化剤（例えばヒトアルブミン）などを含み得る。しかし、本明細書
における教示に適合するその他の方法において、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例え
ば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、有害な細胞集団の部位に
直接送達することにより、疾患組織が治療剤により多く曝露されるようにできる。
本明細書で論じるように、本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗
原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、ある種のがん、自己免疫疾患ならびに中枢神
経系（ＣＮＳ）および末梢神経系（ＰＮＳ）炎症性疾患を含む炎症性疾患のようなＣＸＣ
Ｌ１３発現細胞仲介疾患のインビボ処置のための薬学的有効量で投与できる。この点につ
いて、本発明の開示される結合分子は、投与を容易にし、かつ活性作用物質の安定性を促
進するように処方される。特定の実施形態では、本発明に従う医薬組成物は、食塩水、非
毒性緩衝剤、防腐剤などのような薬学的に許容される非毒性の滅菌担体を含む。本出願の
目的のために、コンジュゲートされたかまたはコンジュゲートされていない抗ＣＸＣＬ１
３結合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体の薬学的有
効量は、標的との有効な結合を達成するため、および利益、例えば疾患もしくは障害の症
状を改善するかまたは物質もしくは細胞を検出することを達成するために十分な量を意味
するために用いられる。
本発明で用いる医薬組成物は、例えばイオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミ
ニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン
酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド
混合物、水、塩もしくは電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン
酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛の塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム
、ポリビニルピロリドン、セルロースに基づく物質、ポリエチレングリコール、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキ
シプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂を含む薬学的に許
容される担体を含む。
非経口投与用の調製物は、滅菌水性または非水性の液剤、懸濁剤および乳剤を含む。非
水性溶剤の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリ
ーブ油および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は、例えば
食塩水および緩衝溶媒を含む水、アルコール性／水性溶液、乳化物、懸濁物を含む。主題
の発明において、薬学的に許容される担体は、それらに限定されないが、０．０１〜０．
１Ｍ、例えば０．０５Ｍのリン酸塩緩衝液または０．８％食塩水を含む。その他の一般的
な非経口媒体は、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリ
ウム、乳酸加リンゲルまたは不揮発性油を含む。静脈内用の媒体は、流体および栄養補充
剤、電解質補充剤、例えばリンゲルブドウ糖に基づくものなどを含む。例えば抗菌剤、抗
酸化剤、キレート化剤および不活性ガスなどのような防腐剤およびその他の添加物も存在
してよい。
より具体的には、注射用に適切な医薬組成物は、滅菌水性液剤（水溶性の場合）または
分散剤、および滅菌注射用液剤または分散剤の即時調製用の滅菌散剤を含む。このような
場合、組成物は滅菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性であるべきである
。これは、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきであり、好ましくは、細菌および真
菌のような微生物の汚染作用に対向して保存される。担体は、例えば水、エタノール、ポ
リオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコー
ルなど）およびそれらの適切な混合物を含有する溶剤または分散媒であり得る。適当な流
動性は、例えば、レシチンのようなコーティングを用いることにより、分散剤の場合に要
求される特定のサイズを維持することにより、および界面活性剤を用いることにより維持
できる。本明細書で開示する治療方法で用いるための適切な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｃｏ．）第１６版（１９８０）に記載されている。
微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノー
ル、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成できる。あるいくつかの
場合では、等張剤、例えば糖類、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトールま
たは塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射用組成物の持続吸収性は、
吸収を遅らせる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に
含めることによりもたらすことができる。
いずれの場合でも、滅菌注射用液剤は、活性化合物（例えばそれ自体またはその他の活
性作用物質との組み合わせでの抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアント
もしくは誘導体）を必要量で、適当な溶剤中に、必要であれば本明細書で列挙する１また
は組み合わせでの成分とともに組み込み、その後、ろ過滅菌することにより調製できる。
一般的に、分散剤は、活性化合物を、基本的な分散媒および上で列挙したものからの必要
なその他の成分を含有する滅菌媒体中に組み込むことにより調製される。滅菌注射用液剤
の調製のための滅菌散剤の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、
これにより、予めろ過滅菌された溶液から活性成分と任意のさらなる所望の成分との粉末
が得られる。注射用の調製物は、加工され、アンプル、バッグ、瓶、シリンジまたはバイ
アルのような容器に充填され、当技術分野において知られる方法に従って無菌的条件下で
密閉される。さらに、調製物は、米国特許出願第０９／２５９，３３７号に記載されるも
ののようなキットの形態で包装および販売できる。このような製品は、好ましくは、関連
する組成物が、疾患もしくは障害に罹患しているかまたはその素因がある対象を処置する
ために有用であることを示すラベルまたは包装挿入物を有する。
非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入または負荷ボーラス用量、その後に維持用量で
あってよい。これらの組成物は、特定の固定もしくは変動性の間隔で、例えば１日１回、
または「必要に応じて」を原則として投与してよい。
本発明で用いるあるいくつかの医薬組成物は、例えばカプセル剤、錠剤、水性懸濁剤ま
たは液剤を含む許容される剤形で経口投与してよい。あるいくつかの医薬組成物は、鼻エ
アロゾルまたは吸入により投与してもよい。このような組成物は、ベンジルアルコールも
しくはその他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティーを亢進するための吸収促進剤お
よび／またはその他の従来の可溶化もしくは分散化剤を用いる食塩水中の溶液として調製
してよい。
単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる抗ＣＸＣＬ１３結合分
子、例えば抗体またはその断片、バリアントもしくは誘導体の量は、処置されるホストお
よび具体的な投与形態に依存して変動する。組成物は、単回用量、複数回用量または注入
で確立された期間にわたって投与してよい。投与計画も、最適な所望の応答（例えば治療
または予防応答）を提供するように調整してよい。
本開示の範囲と一致して、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリ
アントもしくは誘導体は、ヒトまたはその他の動物に、上記の処置の方法に従って、治療
効果をもたらすために十分な量で投与してよい。本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその
抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、そのようなヒトまたはその他の動物に、本
発明の抗体、例えばＭＡｂ５２６１を従来の薬学的に許容される担体または希釈剤と既知
の技術に従って組み合わせることにより調製される従来の剤形で投与できる。薬学的に許
容される担体または希釈剤の形態および特徴は、それが組み合わされる活性成分の量、投
与経路およびその他の公知の変数により指図されることが当業者により認識される。当業
者は、さらに、一種以上の本発明の抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその抗原
結合断片、バリアントもしくは誘導体を含むカクテルが特に効果的であると証明され得る
ことを認識する。
「治療有効用量または量」または「有効量」により、投与されたときに、処置される疾
患を有する患者の処置に関して正の治療応答をもたらす抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば
抗体またはその抗原結合断片の量を意図する。
ある型のがん、例えば白血病、リンパ腫（例えばＭＡＬＴリンパ腫）、結腸、乳、食道
、胃および前立腺がん；自己免疫疾患、例えばループス、関節炎、多発性硬化症、ならび
に中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢神経系（ＰＮＳ）炎症性疾患を含む炎症性疾患のよう
なＣＸＣＬ１３発現細胞仲介疾患の処置についての本発明の組成物の治療有効用量は、投
与の手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトまたは動物であるか、投与されるそ
の他の薬物療法および処置が予防的または治療的であるかを含む多くの異なる因子に依存
して変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺
乳動物も処置できる。処置投与量は、安全性および効力を最適化するために、当業者に知
られる慣例的な方法を用いて用量設定できる。
投与される少なくとも１つの抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体またはその結合断片
の量は、本発明の開示に鑑みて、過度の実験を行うことなく当業者により容易に決定され
る。少なくとも１つの抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体、その抗原結合断片、バリア
ントもしくは誘導体の投与形態およびそれぞれの量に影響する因子は、それらに限定され
ないが、疾患の重症度、疾患の履歴、ならびに治療を受ける個体の年齢、身長、体重、健
康状態および身体状態を含む。同様に、投与される抗ＣＸＣＬ１３結合分子、例えば抗体
またはその断片、バリアントもしくは誘導体の量は、投与の形態および対象がこの作用物
質の単回用量または複数回用量を受けるかに依存する。
本発明は、例えばＭＳ、関節炎、ループス、胃炎、潰瘍を含む自己免疫疾患および／も
しくは炎症性疾患またはがんを処置するための医薬品の製造における、抗ＣＸＣＬ１３結
合分子、例えば抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体の使用も提供す
る。
ＩＸ．診断
本発明は、ある型のがんおよび自己免疫疾患を含む炎症性疾患のようなＣＸＣＬ１３発
現細胞仲介疾患の診断中に有用な診断方法をさらに提供し、これは、個体からの組織また
はその他の細胞または体液中のＣＸＣＬ１３タンパク質または転写産物の発現レベルを測
定するステップと、測定された発現レベルを、正常組織または体液中の標準ＣＸＣＬ１３
発現レベルと比較することにより、標準と比較した発現レベルの増加が障害を示すステッ
プとを含む。特定の実施形態では、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片
、バリアントおよび誘導体、例えばＭＡｂ ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５
０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２または３Ｃ９は、がん、多発性硬化症、関節炎またはル
ープスの診断において用いられる。
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体ならびにその抗原結合断片、バリアントおよび誘導体は、
当業者に知られる伝統的な免疫組織学的方法を用いて生体試料中のＣＸＣＬ１３タンパク
質レベルをアッセイするために用いることができる（例えばＪａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６〜９８５頁（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．
Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７〜３０９６頁（１９８７）を参照されたい）。Ｃ
ＸＣＬ１３タンパク質発現を検出するために有用なその他の抗体に基づく方法は、酵素結
合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降またはウェスタンブロッティングのような
イムノアッセイを含む。適切なアッセイは、本明細書の他の場所でより詳細に記載する。
「ＣＸＣＬ１３ポリペプチドの発現レベルをアッセイする」により、第１の生体試料中
のＣＸＣＬ１３ポリペプチドのレベルを、直接的（例えば絶対タンパク質レベルを決定ま
たは推定することにより）または相対的（例えば第２の生体試料中の疾患関連ポリペプチ
ドレベルと比較することにより）に、定性的もしくは定量的に測定または推定することを
意図する。一実施形態では、第１の生体試料中のＣＸＣＬ１３ポリペプチド発現レベルは
、測定または推定され、標準ＣＸＣＬ１３ポリペプチドレベルと比較される（標準は、障
害を有さない個体から得られた第２の生体試料から得られるか、または障害を有さない個
体の集団からのレベルを平均することにより決定される）。当技術分野において認識され
るように、「標準」ＣＸＣＬ１３ポリペプチドレベルが一旦わかったら、これを比較のた
めの標準として反復して用いることができる。
「生体試料」により、個体、株化細胞、組織培養物またはＣＸＣＬ１３を発現する可能
性がある細胞のその他の供給源から得られる任意の生体試料を意図する。組織生検および
体液を哺乳動物から得るための方法は、当技術分野において公知である。
Ｘ．イムノアッセイ
本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導体は、
免疫特異的結合について、当技術分野において知られる任意の方法によりアッセイしてよ
い。用いることができるイムノアッセイは、それらに限定されないが（ほんの数例を挙げ
れば）、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着ア
ッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散
沈降素反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ
、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイのような技術を用いる競合および非
競合アッセイ系を含む。このようなアッセイは慣例的であり、当技術分野において公知で
ある（例えばＡｕｓｕｂｅｌら編、（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ
．、ＮＹ）第１巻（これは、その全体が本明細書に参照により組み込まれる）を参照され
たい）。
抗原との抗体の結合親和性および抗体−抗原相互作用のオフレートは、競合結合アッセ
イにより決定できる。競合結合アッセイの一例は、標識抗原（例えば３Ｈまたは１２５Ｉ
）と対象とする抗体とを、漸増量の未標識抗原の存在下でインキュベートすることと、標
識抗原と結合した抗体を検出することとを含むラジオイムノアッセイである。特定の抗原
についての対象とする抗体の親和性および結合オフレートは、スキャッチャードプロット
分析によりデータから決定できる。第２の抗体との競合も、ラジオイムノアッセイを用い
て決定できる。この場合、抗原を、標識された化合物（例えば３Ｈまたは１２５Ｉ）とコ
ンジュゲートした対象とする抗体と、漸増量の未標識の第２の抗体の存在下でインキュベ
ートする。
所与のロットの抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合断片、バリアントもしくは誘導
体の結合活性は、公知の方法に従って決定してよい。当業者は、慣例的な実験を採用する
ことにより、各決定について機能的で最適なアッセイ条件を決定できる。
抗体−抗原相互作用の親和性を測定するために様々な方法が利用可能であるが、速度定
数を決定するためのものは比較的少ない。ほとんどの方法は、標識抗体または抗原のいず
れかに依存し、これは、慣例的な測定を必然的に複雑にし、測定された値に不確かさを導
入する。
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）で行われる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、抗体−抗原
相互作用の親和性を測定する従来の方法に対していくつかの利点をもたらす：（ｉ）抗体
または抗原のいずれも標識する必要がない；（ｉｉ）抗体は前もって精製する必要がなく
、細胞培養上清を直接用いることができる；（ｉｉｉ）異なるモノクローナル抗体相互作
用の迅速な半定量的比較を可能にするリアルタイム測定が可能であり、多くの評価目的に
ついて十分である；（ｉｖ）一連の異なるモノクローナル抗体を同一条件下で容易に比較
できるように、生体特異的表面を再生できる；（ｖ）分析手順は完全に自動化されており
、ユーザが介入することなく網羅的な一連の測定を行うことができる。ＢＩＡａｐｐｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、バージョンＡＢ（再版１９９８）、ＢＩＡＣＯＲＥ
（登録商標）コード第ＢＲ−１００１−８６号；ＢＩＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｈａｎｄ
ｂｏｏｋ、バージョンＡＢ（再版１９９８）、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）コード第ＢＲ
−１００１−８４号。ＳＰＲに基づく結合研究は、結合対の一方のメンバーがセンサ表面
に固定化されていることを必要とする。固定化された結合パートナーは、リガンドとよば
れる。溶解している結合パートナーは、分析物とよばれる。いくつかの場合、リガンドは
、別の固定化分子（捕捉分子とよばれる）との結合により表面に間接的に付着する。ＳＰ
Ｒ応答は、分析物が結合または解離することによる、検出表面での質量濃度の変化を反映
する。
ＳＰＲに基づいて、リアルタイムＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）測定は、相互作用が生じ
るとそれを直接モニタリングする。この技術は、速度パラメータの決定によく適する。比
較による親和性の順位付けは行うのが単純であり、速度定数および親和性定数の両方を、
センサグラムデータから導くことができる。
分析物をリガンド表面にわたって離散したパルスで注入する場合、得られるセンサグラ
ムは、３つの必須の段階に分割できる。（ｉ）試料注入中のリガンドとの分析物の会合；
（ｉｉ）試料注入中の平衡または定常状態（ここで、分析物結合の速度は、複合体の解離
により釣り合っている）；（ｉｉｉ）緩衝液フロー中の表面からの分析物の解離。
会合および解離段階は、分析物−リガンド相互作用の速度論についての情報を提供する
（ｋａおよびｋｄ、複合体形成および解離の速度、ｋｄ／ｋａ＝ＫＤ）。平衡段階は、分
析物−リガンド相互作用の親和性についての情報を提供する（ＫＤ）。
ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアは、数値積分およびグローバルフィッティン
グアルゴリズムの両方を用いる曲線フィッティングのための包括的な機能を提供する。デ
ータの適切な分析を用いて、相互作用の別々の速度および親和性定数を、単純なＢＩＡＣ
ＯＲＥ（登録商標）調査から得ることができる。この技術により測定可能な親和性の範囲
は、ｍＭからｐＭまでの非常に広い範囲である。
エピトープ特異性は、モノクローナル抗体の重要な特徴である。ラジオイムノアッセイ
、ＥＬＩＳＡまたはその他の表面吸着法を用いる従来の技術とは対照的に、ＢＩＡＣＯＲ
Ｅ（登録商標）を用いるエピトープマッピングは、標識または精製抗体を必要とせず、一
連のいくつかのモノクローナル抗体を用いる多重部位特異性試験を可能にする。さらに、
多数の分析を自動で処理できる。
ペアワイズ結合実験は、２つのＭＡｂが同じ抗原に同時に結合する能力を試験する。別
々のエピトープを指向するＭＡｂは、独立して結合するが、同一または密接に関連したエ
ピトープを指向するＭＡｂは、互いの結合に干渉する。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）を用
いるこれらの結合実験は、行うのが簡単である。
例えば、第１のＭａｂを結合するために捕捉分子を用い、その後、抗原および第２のＭ
Ａｂを逐次的に加えることができる。センサグラムは、（１）どれぐらいの量の抗原が第
１のＭａｂと結合するか、（２）どの程度第２のＭＡｂが表面付着抗原と結合するか、（
３）第２のＭＡｂが結合しないならば、ペアワイズ試験の順序を逆にすることにより結果
が変わるかを明らかにする。
ペプチド阻害は、エピトープマッピングのために用いられる別の技術である。この方法
は、ペアワイズ抗体結合研究を補うことができ、抗原の１次配列がわかっている場合に、
機能的エピトープを構造的特徴に関連付けることができる。ペプチドまたは抗原断片は、
固定化された抗原との異なるＭＡｂの結合の阻害について試験される。所与のＭＡｂの結
合に干渉するペプチドは、そのＭＡｂにより規定されるエピトープと構造的に関係すると
考えられる。
本発明の実施は、そうでないと記載しない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、
トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技術を採用し
、これらは当業者の熟練の範囲内である。このような技術は、文献に完全に説明されてい
る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら編（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら編（１９９２）Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ
編（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ、第ＩおよびＩＩ巻；Ｇａｉｔ編（１９８４）Ｏ
ｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓら、米国特許第４，
６８３，１９５号；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）
Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１
９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，
Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ
Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉ
ｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ、Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ
．Ｙ．）；ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ編（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ
Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕら編、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ、第１５４および１５５巻；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７）Ｉ
ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒお
よびＢｌａｃｋｗｅｌｌ編、（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ〜ＩＶ巻；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍ
ｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、（１９８６）；な
らびにＡｕｓｕｂｅｌら（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔ
ｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。
抗体工学の全般的な原理は、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第２版；Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ）に示されてい
る。タンパク質工学の全般的な原理は、Ｒｉｃｋｗｏｏｄら編（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐ
ｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇ．）に示
されている。抗体および抗体−ハプテン結合の全般的な原理は、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ（１９
８４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第２版；Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．）；およびＳｔｅｗａｒｄ（１９８４
）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｔｈｅｉｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ
（Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）に示されている。
さらに、当技術分野において知られ具体的に記載されない免疫学における標準的な方法は
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｓｔｉｔｅｓら編（１９９４）Ｂａｓｉｃ ａｎ
ｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第８版；Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ
、Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．）ならびにＭｉｓｈｅｌｌおよびＳｈｉｉｇｉ（編）（１
９８０）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ＮＹ）に全般的に従う。
免疫学の全般的な原理を示す標準的な参照研究は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
；Ｋｌｅｉｎ（１９８２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ
Ｓｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆
Ｓｏｎｓ、ＮＹ）；Ｋｅｎｎｅｔｔら編（１９８０）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）；Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｂｕｒｄｅｎら編、（Ｅｌｓｅｖｅｒｅ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ
）中のＣａｍｐｂｅｌｌ（１９８４）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ」；Ｇｏｌｄｓｂｙら編（２０００）Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｎｏｌｏｇ
ｙ（第４版；Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎｄ＆Ｃｏ．）；Ｒｏｉｔｔら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ（第６版；Ｌｏｎｄｏｎ：Ｍｏｓｂｙ）；Ａｂｂａｓら（２００５）Ｃｅｌｌｕ
ｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第５版；Ｅｌｓｅｖｉｅ
ｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎおよ
びＤｕｂｅｌ（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ Ｖｅｒｌａｎ）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）；Ｌｅｗｉｎ（２００３）Ｇｅｎｅｓ ＶＩＩＩ（
Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ２００３）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）；ＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ（２０
０３）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）を
含む。
上で引用した全ての参考文献および本明細書で引用する参考文献の全ては、それらの全
体が参照により本明細書に組み込まれる。
以下の実施例は、限定のためではなく説明のために提供される。
［実施例１］
＜ヒトＣＸＣＬ１３に特異的なマウス抗体の選択および特徴決定＞
ハイブリドーマ作製。Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスを、キーホールリンペットヘ
モシアニン（ＫＬＨ）コンジュゲートヒトＣＸＣＬ１３で免疫化した。３回の免疫化の後
に、最高の抗ＣＸＣＬ１３力価を有するマウスから脾臓を採集し、脾臓細胞とＳＰ２／０
ミエローマ細胞とを標準的な手順を用いて融合することによりハイブリドーマを作製した
。
ハイブリドーマクローンを、ＥＬＩＳＡにより、ヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３タンパ
ク質との結合についてスクリーニングした。ＥＬＩＳＡプレートを約１００ｎＭのヒト（
Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ：＃３００−４７）またはマウス（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ：＃２５０−
２４）ＣＸＣＬ１３タンパク質で１晩、室温（ＲＴ）にて被覆した。プレートを洗浄して
ブロッキングした後に、標準抗ＣＸＣＬ１３抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：ラット抗マ
ウスＭＡｂ４７０およびマウス抗ヒトＭＡｂ８０１）またはハイブリドーマ上清の希釈物
を加え、ＲＴにて１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、２次抗体（ハイブリド
ーマ上清およびＭＡｂ８０１についてヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ；ＭＡｂ４７０につい
てロバ抗ラットＩｇＧ−ＨＲＰ）を加え、ＲＴにて１時間インキュベートした。プレート
を洗浄し、等容量で混合したテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質試薬ＡおよびＢ（Ｂ
Ｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ：＃５５５２１４）で暗所にて１５分間発色させ、４５０／
５７０波長にて読み取った。「３Ｄ２」および「３Ｃ９」とよばれる２つの陽性ハイブリ
ドーマクローン（ともにマウスＩｇＧ１抗体）をさらなる特徴決定のために選択した。
ハイブリドーマにより生成されるマウス抗ヒト抗体３Ｄ２および３Ｃ９の特異性を、Ｅ
ＬＩＳＡにより（上記のようにして）、組換えケモカイン（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ：マウス
およびヒトＣＸＣＬ１３、ヒトＩＬ−８／ＣＸＣＬ８（＃２００−０８）、ヒトＩＰ−１
０／ＣＸＣＬ１０（＃２００−１０）、ヒトＭＩＧ／ＣＸＣＬ９（＃３００−２６）、ヒ
トＳＤＦ−１アルファ／ＣＸＣＬ１２（＃３００−２８Ａ）ならびにカニクイザルＣＸＣ
Ｌ１３）およびいくつかの非特異的対照抗原（組換えヒトＣ３５、ストレプトアビジン（
Ｔｈｅｒｍｏ：＃２１１２２）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（ＳｅｒａＣｏｒｅ：＃
ＡＰ−４５１０−０１））、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）（Ｓｉｇｍａ：＃Ａ８７６３
）、インスリン（Ｇｉｂｃｏ：＃１２５８５−０１４）およびヘモグロビン（Ｓｉｇｍａ
：＃Ｈ７３７９））を含むパネルに対して評価した。市販の抗体ＭＡｂ４７０およびＭＡ
ｂ８０１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、マウスおよびヒト／カニクイザルＣＸＣＬ１３
結合のそれぞれについての陽性対照として用いた。
３Ｄ２および３Ｃ９は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合することが示された。３Ｄ２およ
び３Ｃ９クローンはともに、組換えヒト、マウスおよびカニクイザルＣＸＣＬ１３に結合
したので、多重種ＣＸＣＬ１３特異性を示した（図１Ａ〜１Ｃ）。図１は、少なくとも３
回の実験についての二重測定からの結果を示す。３Ｄ２抗体は、組換えヒト、マウスおよ
びサルＣＸＣＬ１３との強い結合を有することが示された。特に、３Ｄ２は、３Ｃ９およ
びＭＡｂ８０１と比較して、組換えマウスＣＸＣＬ１３に対してより強く結合した。３Ｄ
２は、インビトロおよびインビボにおいてさらに特徴決定した（結果を以下に示す）。３
Ｄ２抗体も、キメラおよびヒト化ＣＸＣＬ１３抗体の作製のための原型として用いた（結
果を以下に示す）。３Ｃ９抗体は、３Ｄ２、ＭＡｂ４７０およびＭＡｂ８０１と比較して
、組換えヒトＣＸＣＬ１３に対して最も強い結合を有することを示した。３Ｃ９および３
Ｄ２は、バイオアッセイ開発における試薬として用いた（例えば以下に記載するエピトー
プ競合ＥＬＩＳＡ）。
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）による３Ｄ２親和性測定。組換えヒトおよびマウスＣＸＣ
Ｌ１３についての３Ｄ２、３Ｃ９、ＭＡｂ８０１およびＭＡｂ４７０の親和性を、ＢＩＡ
ＣＯＲＥ（登録商標）により測定した。ケモカインを、酢酸塩緩衝液（ｐＨ＝５）中でＣ
１チップ上に１μｇ／ｍｌのヒトＣＸＣＬ１３、０．３μｇ／ｍｌのマウスＣＸＣＬ１３
および０．５μｇ／ｍｌの陰性対照ＳＤＦ−１αとともに固定化した。３Ｄ２および３Ｃ
９をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中で、１００ｎＭから０．７８ｎＭまでおよび３８ｎＭから０．
５９４ｎｍまで２倍で希釈した。ＭＡｂ８０１およびＭＡＢ４７０を５０ｎＭから０．７
８ｎＭまでおよび１９ｎＭから０．５９４ｎｍまで２倍で希釈した。結果は、ヒトおよび
マウスＣＸＣＬ１３に対する３Ｄ２についての親和性測定（ｎＭ）が、それぞれ市販抗体
ＭＡｂ８０１およびＭＡｂ４７０のものより著しく低かったことを示した。結果を表２に
示す。
３Ｄ２エピトープマッピング。エピトープマッピング研究を、エピトープ競合ＥＬＩＳ
Ａを用いて行った。プレートを、１００ｎＭ組換えヒトＣＸＣＬ１３で被覆し、０．０３
３ｎＭビオチン化３Ｄ２とインキュベートした後に、競合未標識抗体を、３Ｄ２の量より
過剰の様々な量で加えた。代表的な実験からの結果を図２に示す。結果は、３Ｃ９が、ヒ
トＣＸＣＬ１３との結合について３Ｄ２と競合するが、ＭＡｂ８０１は、ヒトＣＸＣＬ１
３との結合について３Ｄ２と競合しなかったことを示す。
天然ＣＸＣＬ１３への３Ｄ２の結合。捕捉エピトープ競合ＥＬＩＳＡを用いて、天然ヒ
トおよびマウスＣＸＣＬ１３への３Ｄ２結合を評価した。このアッセイにおいて、天然ヒ
トＣＸＣＬ１３を、ヒトＩＦＮ−ガンマ刺激ＴＨＰ−１細胞から回収した上清から得た。
ヒトＣＸＣＬ１３（ＴＨＰ１上清の１：４希釈物または０．０９７ｎＭ（１ｎｇ／ｍｌ）
のｒｈｕＣＸＣＬ１３）を、６．６ｎＭ ＭＡｂ８０１で捕捉し、０．６６ｎＭビオチン
−３Ｃ９を用いて検出した。適当な抗原提示のために、組織培養上清からのケモカイン（
または対照として用いた組換えヒトＣＸＣＬ１３）をＥＬＩＳＡプレート上でＭＡｂ８０
１により捕捉した。プレートを、次いで、ビオチン化３Ｃ９と、様々な量の未標識３Ｄ２
の存在下でインキュベートした。ヒトＣＸＣＬ１３への結合についての競合（これは、ビ
オチン化３Ｃ９の結合の低下をもたらした）が、ストレプトアビジン−ＨＲＰにより検出
された。図３Ａから明らかなように、３Ｄ２は、天然および組換えの両方のヒトＣＸＣＬ
１３と強く結合し、統計的に同様のＥＣ５０値が得られた。
ＴＮＦ−アルファトランスジェニックマウスからのマウスＣＸＣＬ１３リッチ器官抽出
物を、天然マウスＣＸＣＬ１３の供給源として用いた。マウスＣＸＣＬ１３（ＴＮＦ−Ｔ
ｇ器官抽出物の１：４０希釈物または０．５ｎＭ ｒｍｕＣＸＣＬ１３）を、３３ｎＭ
ＭＡｂ４７０で捕捉し、３．３ｎＭビオチン−３Ｄ２を用いて検出した。抽出物からのケ
モカイン（および対照として用いた組換えマウスＣＸＣＬ１３）をＥＬＩＳＡプレート上
でＭＡｂ４７０により捕捉した。プレートを、次いで、ビオチン化３Ｄ２と、様々な量の
未標識３Ｄ２の存在下でインキュベートした。次いで、マウスＣＸＣＬ１３との結合につ
いての競合（これは、ビオチン化３Ｄ２の結合の低下をもたらした）が、ストレプトアビ
ジン−ＨＲＰにより検出された。図３Ｂからわかるように、３Ｄ２は、それ自体のビオチ
ン化バージョンと競合してそれを外し、天然および組換えの両方のマウスＣＸＣＬ１３と
等しい効力で結合できた。
図３Ａおよび３Ｂの両方について、各データ点は、少なくとも３回の独立した実験の１
回からの二重測定の平均を表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティング
を用いてフィッティングした（Ｒ２＝０．９９）。ＥＣ５０値の差は、対応のないｔ検定
により分析し、有意でなかった（Ｐ＞０．０５）。これらの結果は、マウス抗ヒト３Ｄ２
抗体が、抗体がそれに対して作製された組換えケモカインだけでなく、天然ヒトおよびマ
ウスケモカインにも結合したことを示す。
［実施例２］
＜ヒトＢ細胞移動の抗ＣＸＣＬ１３抗体阻害＞
ＣＸＣＬ１３機能、例えばＢ細胞移動の阻害を、ヒトおよびマウス両方の系におけるＢ
細胞移動をシミュレートする確立されたモデルを用いて評価した。非ＣＸＣＬ１３ケモカ
インであるＳＤＦ−１α（ＣＸＣＬ１２としても知られる）に向かう移動を対照として用
いて、Ｂ細胞移動の阻害に対する抗ＣＸＣＬ１３抗体の特異性を確認した。つまり、抗Ｃ
ＸＣＬ１３抗体を、ヒトＣＸＣＬ１３誘発性移動の阻害およびＳＤＦ−１α誘発性移動に
対する影響がないことについて試験した。
ヒトＣＸＣＬ１３に向かうヒトＢ細胞移動の阻害。ヒトＣＸＣＬ１３誘発性Ｂ細胞移動
に対する３Ｄ２、３Ｃ９およびＭＡｂ８０１の影響を試験した。
２つのクローン株化細胞であるヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５およびヒトプレＢ−
６９７−ｈＣＸＣＲ４を用いて、組換えヒトＣＸＣＬ１３依存性移動および組換えヒトＳ
ＤＦ−１α依存性移動のそれぞれに対する抗ＣＸＣＬ１３抗体の影響を評価した。孔サイ
ズ８μｍおよび直径６．５ｍｍのトランスウェル組織培養処理プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ
Ｃｏｓｔａｒ：３４２２）を用いた。ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５細胞をｒｈＣ
ＸＣＬ１３誘発性移動のために用い、ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ４をｒｈＳＤＦ−
１誘発性移動（陰性対照）のために用いた。細胞を、化学走性緩衝液（（ｌ−グルタミン
、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ＰｅｎｎＳｔｒｅｐおよび０．５％ＢＳＡを含むＲＰＭＩ１６
４０）ＲＴに予め温める）に５×１０６／ｍｌにて再懸濁し、３７℃に３０分間戻した。
希釈ケモカイン（化学走性緩衝液中に９７ｎｍ（１μｇ／ｍｌ）ｒｈＣＸＣＬ１３または
１２．５ｎＭ（０．１μｇ／ｍｌ）ｒｈＳＤＦ−１α）＋／−抗体を、下方のチャンバに
５９０μｌ／ウェルで加え、ＲＴにて３０分間予備インキュベートした。細胞を１００μ
ｌ（５×１０５）細胞／上方のチャンバで加えた。プレートを３７℃にて１晩インキュベ
ートした。インサートを次いで除去し、アラマーブルーをウェルあたり６０μｌにて加え
、プレートを３７℃にて４時間インキュベートした。蛍光を波長５３０ｎｍおよび５９０
ｎｍにて測定した。
移動インデックスを各条件について次のように算出した。（（移動インデックス［アイ
ソタイプ対照］−移動インデックス［抗体］）×１００）／（移動インデックス［アイソ
タイプ対照］）。パーセント移動阻害をｌｏｇ［ｎＭ抗体］に対してプロットして、Ｇｒ
ａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５を用いて力価曲線を得た。ヒトＣＸＣＬ１３誘発性移動に
ついての結果を図４Ａに示す。結果は、２回のｈＣＸＣＬ１３誘発性移動および３回のｈ
ＳＤＦ−１誘発性移動の独立した実験の平均＋／−ＳＥＭとして表す。
３Ｄ２、３Ｃ９およびＭＡｂ８０１の間でのヒトＣＸＣＬ１３誘発性移動の阻害の程度
の差は、ヒトＣＸＣＬ１３についての親和性の差に相当した（上の表２を参照されたい）
。つまり、ケモカインに対して最低の親和性を有する抗体（３Ｄ２）は、ヒトプレＢ−ｈ
ＣＸＣＲ５化学走性の最も弱い阻害物質であるとみられるが、それより高くほぼ同一の親
和性を有する抗体（ＭＡｂ８０１および３Ｃ９）は、細胞移動のより高いパーセントの阻
害をもたらした（図４Ａ）。いずれの抗ヒトＣＸＣＬ１３抗体（３Ｄ２、３Ｃ９またはＭ
Ａｂ８０１）も、ヒトプレＢ−ｈＣＸＣＲ４（５）細胞のヒトＳＤＦ−１α仲介化学走性
に対していずれの影響も示さなかった（図４Ｂ）。一方、陽性対照であるヤギ抗ヒトＳＤ
Ｆ−１α抗体（ＭＡｂ８７Ａ）は、ＳＤＦ−１α依存性移動を強く阻害した。
マウス脾細胞のマウスＣＸＣＬ１３依存性移動の阻害。抗ＣＸＣＬ１３抗体を、マウス
脾細胞（機械的に解離させた脾臓から得た）の組換えマウスＣＸＣＬ１３仲介化学走性を
阻害する能力について試験した。アッセイは、４８５ｎＭ（５μｇ／ｍｌ）ｒｍｕＣＸＣ
Ｌ１３を用い、より小さい孔サイズを有するトランスウェルプレート（すなわち孔サイズ
５μｍおよび直径６．５ｍｍのトランスウェル組織培養処理プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ
Ｃｏｓｔａｒ：＃３４２１））を用い、ウェルあたりより多い量の細胞（１０６）を用い
たことを含むわずかな変更を含めて、ヒトＣＸＣＬ１３依存性Ｂ細胞移動アッセイについ
て上記したことと本質的に同じプロトコールを用いて行った。マウスの２つの異なる株Ｃ
５７／ＢＬ６およびＳＪＬからの脾細胞の移動に対する試験した抗体の影響を、それぞれ
図５Ａおよび５Ｂに示す。ＭＡｂ４７０は、陽性対照として用いた。ラットおよびマウス
ＩｇＧならびにヒトＣＸＣＬ１３特異的マウス抗体３Ｃ９を陰性対照として含めた。図５
Ａおよび５Ｂに示すように、阻害のパターンは、ＭＡｂ４７０と３Ｄ２の間で異なった。
特に、３Ｄ２は力価決定可能な様式で化学走性を阻害したが、ＭＡｂ４７０の影響は、３
９６ｎＭの最高の抗体濃度でのみ明らかであった。Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６およびＳＪＬ／
Ｊ移動に対する３Ｄ２の影響を比較するデータを、対応のないｔ検定により分析し、これ
によりＰ値＞０．０５が得られ、２つの曲線間に有意な差がないことを示した。曲線は、
４パラメータシグモイドカーブフィッティングを用いてフィッティングした（Ｒ２＝０．
９９）。ＳＪＬ／ＪおよびＣ５７Ｂｌａｃｋ／６脾細胞移動に対する３Ｄ２の影響の比較
を図５Ｃに示す。３Ｄ２阻害プロフィールにおける有意な差は、２つのマウス株間で示さ
れなかった。
［実施例３］
＜ヒトＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスの抗ＣＸＣＬ１３抗体阻害＞
ＣＸＣＬ１３ケモカイン機能、例えばＣＸＣＲ５受容体のＣＸＣＬ１３仲介エンドサイ
トーシスの抗ＣＸＣＬ１３抗体を用いる阻害を、ヒトＣＸＣＲ５受容体のヒトＣＸＣＬ１
３仲介エンドサイトーシスについての確立されたモデルを用いて評価した（Ｂｕｒｋｅら
、Ｂｌｏｏｄ１１０：２２１６〜３３２５頁（２００７））。
ヒトＣＸＣＲ５受容体のＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスの阻害。ケモカインとそ
のケモカイン受容体との結合は、リガンド−受容体複合体の内部移行と、その後の細胞内
シグナル伝達カスケードの活性化とを導く（Ｎｅｅｌら、Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ａｎｄ
Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗｓ１６：６３７〜６５８頁（２００５））。
Ｂｕｒｋｌｅらに記載されるフローに基づく方法を適応させて、ヒトおよびマウスの両方
の細胞におけるＣＸＣＬ１３仲介ＣＸＣＲ５受容体内部移行を阻害する３Ｄ２の能力を決
定した。ヒトＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスについて、ｈＣＸＣＬ１３を３Ｄ２、
ＭＡｂ４７０またはマウスＩｇＧ（濃度０、３３、６６、１３２、２６４および５２８ｎ
Ｍにて）と組み合わせ、４℃にて１晩インキュベートした。次の日に、細胞を希釈剤（Ｒ
ＰＭＩ＋０．５％ＢＳＡ）に、１０７細胞／ｍｌにて再懸濁した。細胞を、１０μｇ／ｍ
ｌ抗ヒトＦｃブロックを用いて３７℃にて１５分間予備ブロッキングした。細胞を、次い
で、ＣＸＣＬ１３／抗体ミックス（５０μｌ細胞：５０μｌミックス）と３７℃にて２時
間インキュベートした。細胞を、次いで、抗ヒトＣＸＣＲ５抗体（ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇ
ｅｎ：＃５５８１１３）で４℃にて３０分間染色し、フローサイトメトリーにより分析し
た。同様に、マウスＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスを、３Ｄ２またはマウスＩｇＧ
（濃度０、２０、５９、１９８および５２８ｎＭにて）と組み合わせたｍＣＸＣＬ１３を
用いてアッセイした。エンドサイトーシスの阻害を、次のようにして算出した：％阻害＝
１００−［１００×（０ＣＸＣＬ１３−ｇｅｏｍｅａｎ）／（０ＣＸＣＬ１３−０ｍＡＢ
）］。
図６は、代表的なヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３実験からのデータを示す。図６Ａは、
４８５ｎＭ（５μｇ／ｍｌ）のヒトＣＸＣＬ１３で処置したヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸ
ＣＲ５細胞の表面上のヒトＣＸＣＲ５受容体発現に対する３Ｄ２抗体の影響を示す。図６
Ｂは、１０００ｎＭ（１０μｇ／ｍｌ）のマウスＣＸＣＬ１３と予備インキュベートした
Ｗｅｈｉ−２３１細胞におけるマウスＣＸＣＲ５受容体内部移行の３Ｄ２仲介阻害を示す
。両方の場合において、３Ｄ２は、ＣＸＣＲ５受容体のＣＸＣＬ１３誘発性下方制御に、
効果的および力価決定可能な様式で干渉した。図６Ｃは、ＥＣ５０値を示し、これは、シ
グモイド用量応答曲線（グラフに示す）から、１（マウスエンドサイトーシス）および０
．９９４（ヒトエンドサイトーシス）に等しいＲ２値で算出した。ヒトおよびマウス受容
体エンドサイトーシスに対する３Ｄ２の影響を比較するデータを対応のないｔ検定により
分析し、これによりＰ値＞０．０５が得られ、ヒトＣＸＣＬ１３およびマウスＣＸＣＬ１
３曲線間に有意な差がないことを示した。
［実施例４］
＜多発性硬化症についてのマウス疾患モデルにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の評価＞
多発性硬化症のマウスモデル。実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症
の広く受け入れられている動物モデルである。ＥＡＥは、脊髄を主に標的にする炎症を伴
う、程度が拡大する上行性麻痺を累進的にもたらすＣＮＳの脱髄疾患である。この疾患は
、誘発の方法および用いる動物の型に依存して、急性、慢性または再発−寛解経過を呈す
ることができる。つまり、ＥＡＥは、ＣＮＳの成分、ペプチド（能動誘発）および一方の
動物から別の動物への細胞移動（受動誘発）によっても誘発できる。完全フロイントアジ
ュバント（ＣＦＡ）を抽出物またはペプチドとともに用い、これは、百日咳毒素とともに
頻繁に用いられる。
ＲＲ−ＥＡＥ−１：ＳＪＬマウスにおける再発−寛解ＥＡＥに対する３Ｄ２の影響。３
Ｄ２抗体を、ＥＡＥの能動免疫化モデルを用いて試験した。「ＲＲ−ＥＡＥ−１」研究に
おいて、再発−寛解（ＲＲ）疾患を、ＳＪＬ／Ｊマウスにおいて、５ｍｇの熱不活化Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７ＲＡ株で増強した１ｍｇ／
ｍｌ ＣＦＡ中のプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）１３９−１５１ペプチドエピトー
プ（ＨＳＬＧＫＷＬＧＨＰＤＫＦ；配列番号１）の皮下免疫化により誘発した。研究は、
以下の処置群を含んだ：
Ａ．０日目に開始する対照（マウスＩｇＧ）
Ｂ．０日目に開始する３Ｄ２
Ｃ．スコア≧１にて開始する３Ｄ２
マウスに、０．３ｍｇ（１５ｍｇ／ｋｇ）の抗体を１週間に２回、腹腔内注射した。処
置は群ＡおよびＢについて０日目に開始し、群Ｃについて臨床スコア≧１にて開始した（
評点システムは、以下の表３に記載する）。
図７に示すように、３Ｄ２での処置は、疾患の改善をもたらした。各データ点は、９匹
のマウスから得たスコアの平均を表す。群平均（ＧＭＳ）を、一元配置ＡＮＯＶＡ、その
後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較事後検定を用いることによって比較した。統計的に
有意な差が、対照群（マウスＩｇＧ）と各３Ｄ２処置群との間に観察された（Ｐ＜０．０
５）が、２つの３Ｄ２処置群間では観察されなかった（Ｐ＞０．０５）。疾患の減弱は、
マウスが活動性疾患を示すまで処置を開始しなかったときでさえ観察された（群Ｃ）。
ＲＲ−ＥＡＥ−２：ＳＪＬマウスにおける再発−寛解ＥＡＥに対する３Ｄ２の影響。第
２の研究（「ＲＲ−ＥＡＥ−２」）を、誘発プロトコールにおいて百日咳毒素を用いて行
って、３Ｄ２をより重症の疾患モデルにおいて試験した。この第２の再発−寛解ＥＡＥ研
究において、ＳＪＬ／Ｊマウスを、５ｍｇの熱不活化Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７ＲＡ株で増強した１ｍｇ／ｍｌ ＣＦＡ中のＰＬＰ１３９
−１５１で皮下免疫化し、１００ナノグラムの百日咳毒素を免疫後０および２日目に腹腔
内投与した。処置は、以下の群に分けた０．３ｍｇ（１５ｍｇ／ｋｇ）の抗体の週２回の
腹腔内注射により行った。
Ａ．０日目に開始する対照（マウスＩｇＧ）
Ｂ．０日目に開始する３Ｄ２
Ｃ．７日目に開始する３Ｄ２
Ｄ．ＥＡＥの発症時に開始する３Ｄ２（スコア≧２）
ＲＲ−ＥＡＥ−２の結果を図８に示す。各データ点は、９匹のマウスから得たスコアの
平均を表す。群平均を、一元配置ＡＮＯＶＡと、その後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比
較事後検定とを用いることによって比較した。統計的に有意な差が、対照群（マウスＩｇ
Ｇ）と各３Ｄ２処置群との間に観察された（Ｐ＜０．０５）が、３つの３Ｄ２処置群の間
では観察されなかった（Ｐ＞０．０５）。ここでもまた、３Ｄ２での処置は、ＥＡＥ症状
の開始、スコア≧２にて処置が開始しても（群Ｄ）、疾患の重症度に対して統計的に有意
な影響を有した。
［実施例５］
＜ループスについてのマウス疾患モデルにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の評価＞
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）のマウスモデル。ＳＬＥは、複数の器官に関わり、
異所性胚中心の自発的形成およびいくつかの核抗原に対する自己抗体生成を特徴とする自
己免疫疾患である。抗ＣＸＣＬ１３ ３Ｄ２抗体の影響を、ループスのマウスモデルにお
いて試験した。ループス易発性Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｂｌａｃｋ Ｘ Ｎｅｗ Ｚｅ
ａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅ Ｆ１（ＮＺＢ／ＮＺＷＦ１）マウスは、高力価の抗ｄｓＤＮＡ
抗体および腎臓の糸球体における免疫複合体の形成を原因とする重症増殖性糸球体腎炎を
自発的に発生する。
ＳＬＥ−１：進行疾患の処置。研究「ＳＬＥ−１」において、処置を、蛋白尿≧２（蛋
白尿評点システムは、以下の表４に記載する）である２４〜３０週齢のＮＺＢ／ＮＺＷＦ
１マウスにおいて開始し、処置を８週間継続した。処置は、０．３ｍｇ（１５ｍｇ／ｋｇ
）の３Ｄ２またはマウスＩｇＧ（対照）の週２回の腹腔内注射により行った。
図９Ａに示すように、３Ｄ２での処置は、蛋白尿の進行を停止させた。十分に定義され
た評点システムを用いた腎臓の組織学的分析（表５）も、糸球体腎炎（ＧＮ）、間質性腎
炎（ＩＮ）および血管炎（ＶＩ）の病態スコアが対照（マウスＩｇＧ）と比較して３Ｄ２
処置群においてより低かったので、抗ＣＸＣＬ１３処置の有益な影響を示した。図９Ｂを
参照されたい。
蛋白尿スコア（図９Ａ）および腎臓病態スコア（図９Ｂ）について、各データ点は、１
０回の測定の平均を表す。統計的に有意な差を同定するための（Ｐ＜０．０５）二元配置
ＡＮＯＶＡとその後のＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較事後検定とにおいて、統計的に有
意な差は観察されなかった（Ｐ＞０．０５）。
ＳＬＥ−２：早期疾患（自己抗体誘発後であるが、重症の蛋白尿の前）のマウスにおけ
る防止試験。研究「ＳＬＥ−２」において、処置を、２０週齢のＮＺＢ／ＮＺＷＦ１マウ
スにおいて開始し、１２週目まで継続した。処置は、０．３ｍｇ（１５ｍｇ／ｋｇ）の３
Ｄ２またはマウスＩｇＧ（対照）の週２回の腹腔内注射により行った。図１０Ａに示すよ
うに、３Ｄ２での処置は、特に処置の最初の８週間の間に蛋白尿の進行を統計的に有意に
阻害した。８週間後に、３Ｄ２処置群の７匹のマウスのうち０匹（０％）および対照群の
９匹のマウスのうち４匹（４４％）が、＞２＋の蛋白尿スコアを有した。１２週間の処置
の最後に、平均尿タンパク質は、３Ｄ２処置での２．１＋／−０．２に対してマウスＩｇ
Ｇ（対照）抗体での３．１＋／−０．１５であった。
腎臓病態スコアも、３Ｄ２処置群およびマウスＩｇＧ処置群からのマウスにおいて測定
した。糸球体腎炎（ＧＮ）および間質性腎炎（ＩＮ）病態スコアのまとめを図１０Ｂに示
す。
蛋白尿レベル（図１０Ａ）および腎臓病態スコア（図１０Ｂ）を、３Ｄ２処置群からの
７匹のマウスおよびマウスＩｇＧ処置群からの９匹のマウスにおいて測定した。蛋白尿ス
コアは、これらの群の間で有意に異なっていた（Ｐ＝０．００４２；二元配置ＡＮＯＶＡ
とＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較検定）。腎臓病態スコアは、有意に異ならなかった（
Ｐ＞０．０５）。平均病態スコアは有意に異ならなかったが、３Ｄ２処置群において７匹
のマウスのうち２匹（２９％）において重症腎臓疾患の組織学的証拠があった一方、対照
群の９匹のマウスのうち４匹（４４％）が重傷疾患の証拠を示した。３Ｄ２によりＣＸＣ
Ｌ１３を遮断することは、自己抗体の発生を妨げなかったことが注目された（データは示
さず）。
ループスマウスの脾臓における胚中心（ＧＣ）および１次濾胞の数に対する３Ｄ２処置
の影響を評価した。３Ｄ２処置およびマウスＩｇＧ処置（対照）ＮＺＢ／ＮＺＷＦ１マウ
スからの脾臓切片を、ＧＬ−７（ＧＣ染色）、Ｂ２２０抗体（Ｂ細胞マーカー）または濾
胞樹状細胞（ＦＤＣ）に対する抗体で染色した。脾臓リンパ系構造に対するＣＸＣＬ１３
阻害の影響を、図１１Ａ〜Ｂに示す。１次濾胞はインタクトなままであった。３Ｄ２で処
置したマウスは、脾臓における自発的胚中心（ＧＣ）のサイズおよび頻度が著しく低下し
た。３Ｄ２で処置したマウス（「ｔｘ」）は、１次：２次（ＧＣ）濾胞の比率として表し
た場合のＧＣの数が減少し（ｐ＝０．１９）（図１２Ａ）、ＧＣサイズが著しく減少する
（ｐ＝０．０３）（図１２Ｂ）傾向を示した。値は、１群あたり５匹のマウスの平均＋／
−ＳＥＭとして示す。
上記のＳＬＥの結果は、３Ｄ２抗体によるＣＸＣＬ１３阻害が、特に疾患の早期段階で
ループスのＮＺＢ／ＮＺＷＦ１マウスモデルにおける腎炎の減少を導き、脾臓構造に影響
し得ることを示す。
［実施例６］
＜キメラおよびヒト化抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体の調製＞
３Ｄ２ハイブリドーマＶ遺伝子の単離およびキメラ３Ｄ２抗体のクローニング。マウス
３Ｄ２抗体を、キメラ抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体の作製のための原型として用い
た。可変（Ｖ）遺伝子を、標準的な方法を用いて３Ｄ２ハイブリドーマから単離した。３
Ｄ２の重鎖（Ｈ１６０９）および軽鎖（Ｌ０２９３）のポリヌクレオチドおよびアミノ酸
配列を、図１３に示す。ＶＨおよびＶＫ相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を付す（それぞ
れ配列番号４、５、６、９、１０および１１）。
可変重鎖（ＶＨ）遺伝子を、ヒトガンマ１重鎖遺伝子を含有する哺乳動物発現ベクター
にクローニングして、全長キメラ重鎖を創出した。可変軽鎖（ＶＫ）遺伝子を、ヒトカッ
パ定常遺伝子を有する哺乳動物発現ベクターにクローニングして、全長キメラ軽鎖を創出
した。キメラ抗体を作製するために、キメラ重鎖およびキメラ軽鎖を含有する発現ベクタ
ーをＣＨＯ−Ｓ細胞に同時トランスフェクトした。生成されたモノクローナル抗体（ＭＡ
ｂ）は細胞から分泌され、これを３〜６日間の発現期間の後に採集した。得られたＭＡｂ
を、プロテインＡクロマトグラフィーを用いて精製して、特徴決定した。得られたキメラ
ＩｇＧ１抗体（「ＭＡｂ１４７６」）は、ＥＬＩＳＡによりヒトおよびマウスＣＸＣＬ１
３に特異的であることが示され、マウスおよびヒトＣＸＣＬ１３に対して同様の親和性を
有することが示され、親のマウス抗体である３Ｄ２と同様の機能的活性を有することが示
された（データは示さず）。さらに、ＭＡｂ１４７６は、エピトープ競合ＥＬＩＳＡにお
いて、マウスおよびヒトＣＸＣＬ１３への結合についてビオチン化３Ｄ２および３Ｃ９と
競合できた（データは示さず）。
キメラ３Ｄ２（ＭＡｂ１４７６）のヒト化。キメラ３Ｄ２抗体のヒト化について以下に
まとめる。キメラＭＡｂ１４７６からの重鎖（Ｈ１６０９）および軽鎖（Ｌ０２９３）の
フレームワーク領域（ＦＷＲ）に導入した改変を、それぞれ図１４Ａおよび１４Ｂに示す
。Ｈ１６０９中の推定Ｎ結合グリコシル化部位（Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ）を、Ｓｅｒ−
Ｌｅｕ−Ｔｈｒに置き換えた（図１４Ａ）。この変異は、抗体親和性に影響せず（表６を
参照されたい）、「ＭＡｂ５０８０」の作製をもたらした。ＭＡｂ５０８０の親和性およ
び機能性を改善するために、いくつかの可変領域変異体を生成し、ＩＣ５０ ＥＬＩＳＡ
によりヒトＣＸＣＬ１３に対してスクリーニングした。Ｌ５０５５−ＣＤＲ１中の３１位
での単一のセリン（Ｓ）からメチオニン（Ｍ）への変異および軽鎖フレームワーク領域中
の変化（図１４Ｂおよび１５を参照されたい）により「ＭＡｂ５２６１」が作製され、こ
れは、３Ｄ２およびＭＡｂ５０８０と比較して著しい親和性の改善を示した（表６）。Ｈ
１６０９（配列番号３）およびＨ２１７７（配列番号１３）のアミノ酸配列の比較を図１
４Ａに示し、Ｌ０２９３（配列番号８）、Ｌ５０５５（配列番号１７）およびＬ５１４０
（配列番号１５）の比較を図１４Ｂに示す。
ＭＡｂ５０８０のＶＨおよびＶＫ（Ｈ２１７７（配列番号１３）およびＬ５０５５（配
列番号１７）のそれぞれ）ならびにＭＡｂ５２６１のＶＨおよびＶＫ（Ｈ２１７７（配列
番号１２）およびＬ５１４０（配列番号１５）のそれぞれ）のポリヌクレオチドおよびア
ミノ酸配列を、図１５に示す。
ＣＸＣＬ１３についてのＭＡｂ５２６１特異性。３Ｄ２と同様に、ＭＡｂ５２６１の特
異性を、組換えケモカイン（組換えマウス、ヒトおよびカニクイザルＣＸＣＬ１３、ヒト
ＩＬ−８／ＣＸＣＬ８；ヒトＩＰ−１０／ＣＸＣＬ１０、ヒトＭＩＧ／ＣＸＣＬ９および
ヒトＳＤＦ−１アルファ／ＣＸＣＬ１２）；天然ヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３；ならび
に様々な非特異的抗原（組換えヒトＣ３５、ストレプトアビジン、ウシ血清アルブミン（
ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）、インスリンおよびヘモグロビン）を含むパネ
ルに対する特異的ＥＬＩＳＡおよび捕捉エピトープ競合ＥＬＩＳＡにより評価した。
特異的ＥＬＩＳＡについて、組換えヒト、カニクイザルおよびマウスＣＸＣＬ１３をそ
れぞれ１００ｎＭで被覆した。ＭＡｂ５２６１は、ＣＸＣＬ１３に対して多重種特異性を
示した（図１６Ａ〜Ｃ）。組換えヒト（図１６Ａ）およびカニクイザルＣＸＣＬ１３（図
１６Ｂ）に対するＭＡｂ５２６１の結合は、その直接の「親」であるＭＡｂ５０８０の結
合に匹敵し、ＭＡｂ１４７６（キメラ３Ｄ２）の結合よりも強かった。ＭＡｂ５２６１は
、ＭＡｂ１４７６およびＭＡｂ５０８０の両方と比較して、組換えマウスＣＸＣＬ１３に
対する結合が著しく優れていた（図１６Ｃ）。各ケモカインについてのデータ点は、三重
測定の平均を表す。ＥＣ５０値は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングから算
出した（ＥＣ５０値を生成する曲線についてのＲ２は０．９９であった）。
天然ヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３へのＭＡｂ５２６１の結合を、捕捉エピトープ競合
ＥＬＩＳＡにより決定した。ヒトＥＬＩＳＡについて、ヒトＣＸＣＬ１３（ＴＨＰ１上清
の１：４希釈物または０．０９７ｎＭ）を６．６ｎＭ ＭＡｂ８０１で捕捉し、０．６６
ｎＭビオチン−３Ｃ９で検出した。マウスＥＬＩＳＡについて、マウスＣＸＣＬ１３（Ｔ
ＮＦ−Ｔｇ器官抽出物の１：４０希釈物）を３３ｎＭ ＭＡｂ４７０で捕捉し、３．３ｎ
Ｍビオチン−３Ｄ２で検出した。各データ点は、少なくとも３回の実験の１回からの二重
測定の平均を表す。天然ヒト（図１７Ａ）およびマウスＣＸＣＬ１３（図１７Ｂ）に対し
て捕捉エピトープ競合ＥＬＩＳＡで試験した場合に、ＭＡｂ５２６１は、ヒトおよびマウ
ス両方の天然ＣＸＣＬ１３への結合について３Ｄ２および５０８０抗体の両方よりも優越
性を示した。図１７Ａ〜Ｂに示す曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティング
（Ｒ２＝０．９９）を用いてフィッティングした。
［実施例７］
＜抗ＣＸＣＬ１３ ＭＡｂ５２６１の機能的特徴決定＞
ヒトおよびマウスＢ細胞移動の阻害。ヒトＣＸＣＬ１３誘発性ヒトＢ細胞化学走性を阻
害するＭＡｂ５２６１の能力を、安定株化細胞ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５および
初代ヒト扁桃腺細胞の両方について試験した。
安定株化細胞ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５についてのヒトＣＸＣＬ１３誘発性ヒ
トＢ細胞化学走性のＭＡｂ５２６１による阻害を、上の実施例２に記載するプロトコール
を用いて試験した。ＭＡｂ５２６１によるヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５細胞移動の
阻害を図１８Ａに示す。ヒト初代扁桃腺細胞研究について、扁桃腺細胞を、組織の機械的
解離により得た。細胞（１０６／５μｍのトランスウェルプレートの上方のチャンバ）を
、５μｇ／ｍｌのヒトＣＸＣＬ１３に向かって３７℃にて２時間移動することを可能にし
た。ヒト初代扁桃腺細胞の移動のＭＡｂ５２６１による阻害を、図１８Ｂに示す。図１８
Ａ〜Ｂに示す結果は、少なくとも３回の実験の１回からの三重測定の平均＋／−ＳＥＭを
表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティング（Ｒ２＝０．９８〜０．９
９）を用いてフィッティングした。
マウスＣＸＣＬ１３仲介マウスＢ細胞化学走性に対するＭＡｂ５２６１の影響を、上の
実施例２に記載するようにして、Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６およびＳＪＬ／Ｊマウスからのマ
ウス脾細胞について評価した。ここでもまた、ヒトまたはマウスＳＤＦ−１α（０．１μ
ｇ／ｍｌ）に向かう移動を陰性対照として用いて、抗体の影響のＣＸＣＬ１３特異性を確
実にした（データは示さず）。脾細胞移動のＭＡｂ５２６１による阻害を図１９に示す（
代表的な実験からのデータは、二重測定の平均＋／−ＳＤとして示す）。移動阻害の値を
、対応するアイソタイプ対照を用いて得られた値に基づいて算出した。
図１８および１９に示すように、ＭＡｂ５２６１は、ヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ
１３依存性化学走性を阻害した。培養細胞と初代細胞との間のＥＣ５０値の差（図１８を
参照されたい）は、ヒトＣＸＣＬ１３濃度の差に起因すると考えられる可能性が高く、例
えば９７ｎＭ（１μｇ／ｍｌ）をヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５細胞移動において用
い、４８５ｎＭ（５μｇ／ｍｌ）をヒト扁桃腺細胞移動において用いた。
ヒトＣＸＣＲ５受容体のヒトＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスの阻害。この実験は
、上の実施例３に記載する方法に従って、ヒトＣＸＣＲ５受容体のエンドサイトーシスを
誘発するためにヒトＣＸＣＬ１３で処理したヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５細胞を用
いて行った。ヒトＣＸＣＬ１３の量は２μＭであり、これは実施例３に示す３Ｄ２エンド
サイトーシスアッセイにおいて用いた量（すなわち０．４８５μＭ）よりも高く、よって
ＥＣ５０値の差が観察された。ＣＸＣＲ５受容体エンドサイトーシスのＭＡｂ５２６１に
よる阻害を図２０に示す。結果は、少なくとも３回の独立した実験の１回からの三重測定
の平均として示す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティング（Ｒ２＝０．
９９）を用いてフィッティングした。
［実施例８］
＜抗ＣＸＣＬ１３ ＭＡｂ５２６１のマウスバージョンの作製および特徴決定＞
ＭＡｂ５２６１は、ヒト重鎖および軽鎖可変領域とヒトＩｇガンマ１−Ｆアロタイプと
ヒトカッパとを含有する。マウスの対応物（「ＭＡｂ５３７８」）を、マウスＩｇＧ２ａ
（ガンマ２ａ鎖）を用いて工学的に作製した。ＩｇＧ２ａアイソタイプは、補体を固定し
、Ｆｃ受容体に結合する能力を含めてヒトＩｇＧ１と密接な類似性を有する。ＭＡｂ５３
７８は、ＭＡｂ５２６１と同じヒト重鎖および軽鎖可変遺伝子を、マウスＩｇＧ２ａ定常
およびマウスカッパそれぞれとともに含有する。
重鎖および軽鎖発現プラスミドのうちの共通制限部位を用いて、アイソタイプの変更を
可能にした。アイソタイプ種の作製は、制限消化、ライゲーションおよび形質転換により
達成した。具体的に、ＭＡｂ５２６１重鎖について、遺伝子の可変領域を制限エンドヌク
レアーゼで消化し、マウスＩｇＧ２ａ定常領域を含有する発現プラスミド中の匹敵する部
位にライゲーションして、ＭＡｂ５３７８についての重鎖（Ｈ５１８８）を作製した。同
様に、ＭＡｂ５２６１軽鎖について、遺伝子の可変領域を制限エンドヌクレアーゼで消化
し、マウスＩｇカッパ定常領域を含有する発現プラスミド中の匹敵する部位にライゲーシ
ョンして、ＭＡｂ５３７８についての軽鎖（Ｌ５１５３）を作製した。ＭＡｂ５３７８軽
鎖および重鎖の可変領域のポリペプチドおよびアミノ酸配列は、ＭＡｂ５２６１と同一で
あり、図２１に示す。ＶＨおよびＶＫ相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を付す（それぞれ
配列番号４、５、６、１６、１０および１１）。
ＭＡｂ５３７８親和性測定。組換えヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３についてのＭＡｂ５
３７８の親和性測定を、実施例１に記載するものと同様の方法を用いてＢＩＡＣＯＲＥ（
登録商標）により測定した。組換えヒトおよびマウスＣＸＣＬ１３についてのＭＡｂ５３
７８親和性を、ＭＡｂ５２６１および３Ｄ２と比較した。表７に示すように、ヒトおよび
マウス両方のケモカインについてのＭＡｂ５２６１およびＭＡｂ５３７８の親和性測定（
ｎＭ）は、３Ｄ２と比較して著しく改善された。
ＭＡｂ５３７８エピトープマッピング。エピトープ競合ＥＬＩＳＡ実験を行って、ＭＡ
ｂ５３７８がマウスＣＸＣＬ１３上の結合エピトープをＭＡｂ５２６１と共有するかを決
定した。組換えマウスＣＸＣＬ１３を、プレート上に１μｇ／ｍｌのＭＡｂ４７０、５３
７８または５２６１（対照）を用いて捕捉した。抗体／ケモカイン相互作用を、０．５μ
ｇ／ｍｌ（３．３ｎＭ）のビオチン化ＭＡｂ５２６１とその後のストレプトアビジン−Ｈ
ＲＰとを用いて検出した。市販のラット抗マウス抗体ＭＡｂ４７０も研究に含めた。ＭＡ
ｂ４７０または５３７８のいずれかと予備インキュベートしたマウスＣＸＣＬ１３がビオ
チン化ＭＡｂ５２６１と結合する能力を、エピトープ競合ＥＬＩＳＡを用いて評価した。
ＭＡｂ５３７８がマウスＣＸＣＬ１３結合エピトープをＭＡｂ５２６１と共有するが、Ｍ
Ａｂ４７０と共有しないことが示された（図２２）。つまり、ＭＡｂ５３７８は、エピト
ープ結合および親和性を保持し、これはＭＡｂ５３７８を動物モデル研究においてＭＡｂ
５２６１の代用物として用いるために必要であった。さらに、実施例を通して記載するエ
ピトープ結合の結果は、３Ｄ２、３Ｃ９、ＭＡｂ１４７６、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ５２
６１およびＭＡｂ５３７８が全て、ヒトＣＸＣＬ１３の同じエピトープに結合することを
示すと要約することができる。
ＣＸＣＬ１３についてのＭＡｂ５３７８特異性。ＭＡｂ５３７８の特異性を、組換えヒ
ト、マウスおよびカニクイザルＣＸＣＬ１３（図２３）ならびに組換えケモカインおよび
様々な抗原のパネル（組換えケモカイン（マウス、ヒトおよびカニクイザルＣＸＣＬ１３
、ヒトＩＬ−８／ＣＸＣＬ８、ヒトＩＰ−１０／ＣＸＣＬ１０、ヒトＭＩＧ／ＣＸＣＬ９
およびヒトＳＤＦ−１アルファ／ＣＸＣＬ１２）；天然ヒトおよびマウスＣＣＬ１３；な
らびに様々な非特異的抗原（組換えヒトＣ３５、ストレプトアビジン、ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）、インスリン、ヘモグロビン）に対して評
価した（データは示さず）。特異的ＥＬＩＳＡは、実施例１に記載するようにして行った
。特に、各ケモカインは１００ｎＭで被覆した。図２３に示すように、ＭＡｂ５３７８を
、マウス抗体３Ｄ２および対照（マウスＩｇＧ）と比較した。ＭＡｂ５３７８は、様々な
程度で、３つ全ての種からのケモカインとの結合において３Ｄ２より優れていた。結合の
最も著しい差は、マウスＣＸＣＬ１３で観察され、動物研究において３Ｄ２を超えるＭＡ
ｂ５３７８の可能性のある利点を示した。各データ点は、三重測定の平均を表す。ＥＣ５
０値は、４パラメータシグモイドカーブフィッティングから算出した（ＥＣ５０値を生成
する曲線についてのＲ２は０．９９であった）。
ヒトおよびマウスＢ細胞移動の阻害をＭＡｂ５３７８について試験した。ＭＡｂ５３７
８がマウスおよびヒトＢ細胞のＣＸＣＬ１３依存性化学走性に干渉する能力を、それぞれ
実施例２、７および２に記載する方法を用いる培養（ヒトプレＢ−６９７−ｈＣＸＣＲ５
細胞；図２４Ａ）および初代（ヒト扁桃腺細胞；図２４Ｂ）ヒト細胞ならびにマウス脾細
胞（図２４Ｃ）を含む移動アッセイにおいて試験した。ケモカイン濃度は、ヒトプレＢ−
６９７−ｈｕＣＸＣＲ５移動について９７ｎＭのｈｕＣＸＣＬ１３；ヒト扁桃腺細胞移動
について４８５ｎＭのｈｕＣＸＣＬ１３；およびマウス脾細胞移動について５００ｎＭの
ｍｕＣＸＣＬ１３であった。ヒトまたはマウスＳＤＦ−１アルファに向かう移動を陰性対
照として用いた（示さず）。移動阻害の値は、対応するアイソタイプ対照を用いて得られ
た値に基づいて算出した。図２４Ａ〜Ｃに示す結果は、少なくとも３回の実験の１回から
の三重測定の平均＋／−ＳＥＭを表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッテ
ィング（Ｒ２＝０．９９）を用いてフィッティングした。ヒト移動アッセイでは、ＭＡｂ
５３７８をＭＡｂ５２６１と比較し、マウス移動アッセイでは、ＭＡｂ５３７８を３Ｄ２
と比較した。両方の場合において、ＭＡｂ５３７８は、ＣＸＣＬ１３誘発性ヒトおよびマ
ウス細胞移動を、ＭＡｂ５２６１に匹敵する程度および３Ｄ２より少し優れる程度でうま
く阻害した。
ヒトＣＸＣＲ５受容体のヒトＣＸＣＬ１３仲介エンドサイトーシスの阻害。ＭＡｂ５３
７８を、その原型ＭＡｂ５２６１およびマウス抗ヒトＣＸＣＬ１３抗体３Ｄ２と、実施例
３に記載する方法を用いるヒトＣＸＣＬ１３仲介ヒトＣＸＣＲ５受容体内部移行アッセイ
において比較した。図２５に示すように、ＭＡｂ５３７８は、ヒトＣＸＣＲ５受容体内部
移行を阻害するその能力が、ＭＡｂ５２６１と同一であり、３Ｄ２より著しく優れていた
。ＭＡｂ５２６１およびＭＡｂ５３７８についてのデータ点は、２回の独立した実験から
の測定の平均を表す。３Ｄ２およびアイソタイプ対照についてのデータ点は、１回の実験
からの三重測定の平均を表す。曲線は、４パラメータシグモイドカーブフィッティング（
Ｒ２＝０．９９）を用いてフィッティングした。
［実施例８］
＜関節リウマチについてのマウス疾患モデルにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の評価＞
関節リウマチのマウスモデル。マウスおよびラットにおけるコラーゲン誘発関節炎（Ｃ
ＩＡ）は、ヒト関節リウマチ（ＲＡ）の十分に確立されたモデルである。疾患は、完全フ
ロイントアジュバント（ＣＦＡ）中で乳化したウシＩＩ型コラーゲンの皮内注射により典
型的に誘発され、マウスコラーゲン抗体の生成と、その後の足における関節炎の進行性の
発展を特徴とする。
ＣＩＡ−１：ＤＢＡ１／Ｊマウスを用いるＣＩＡモデルにおけるＭＡｂ５３７８の抗関
節炎効力。疾患を、ＤＢＡ１／Ｊマウスにおいて、１００μｇの熱死滅Ｍ．ｔｕｂｅｒｃ
ｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ｒａで増強したＣＦＡ中の１００μｇのウシＩＩ型コラーゲンの皮
下免疫化と、その後の２１日目の不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中の１００μ
ｇのウシＩＩ型コラーゲンでの追加免疫化により誘発した。動物を、毎週３回、関節炎の
巨視的な徴候（表８を参照されたい）について評点し、関節炎インデックス（ＡＩ）を、
個別の足スコアを加算することにより算出した（いずれの与えられた動物においても達成
できる最大の関節炎インデックスは１６であった）。
予防的処置は、追加免疫化の１日前、すなわち誘発後２０日目に２〜６の低ＡＩの動物
において開始し、以下の処置群（群あたり１０匹）からなった。
Ａ．マウスＩｇＧアイソタイプ（対照）
Ｂ．ＭＡｂ５３７８
Ｃ．エタネルセプト（ＴＮＦ阻害剤；陽性対照）
マウスに、１週間に２回、３週間にわたって０．６ｍｇ（３０ｍｇ／ｋｇ）の抗体の腹
腔内（マウスＩｇＧおよびＭＡｂ５３７８）または皮下（エタネルセプト）注射のいずれ
かを行った。研究は、誘発後４１日目に終了した。
図２６に示すように、ＭＡｂ５３７８での予防的処置は、疾患発展の速度の減少と、疾
患重症度の著しい阻害とをもたらし、これは、研究の終点にて明らかになった。統計的に
有意な差が、研究の終点（４１日目）にて、マウスＩｇＧ処置群とＭＡｂ５３７８処置群
との間（Ｐ＜０．０５）およびマウスＩｇＧ処置群とエタネルセプト処置群との間（Ｐ＜
０．０５）で観察された。ＭＡｂ５３７８の阻害効果は、陽性対照作用物質エタネルセプ
トの阻害効果から統計的に異ならなかった（Ｐ＞０．０５）。
ＣＩＡ−２：ＤＢＡ１／ＪマウスにおけるＣＩＡモデルでのＭＡｂ５３７８の抗関節炎
効力。ＭＡｂ５３７８を用いる第２のＣＩＡ研究「ＣＩＡ−２」を行った。この研究では
、疾患を、ＤＢＡ１／Ｊマウスにおいて、ＣＩＡ−１について上に記載したようにして誘
発した。ここでもまた、予防的処置を追加免疫化の１日前、誘発後２０日目に、２〜６の
低ＡＩの動物において開始した。エタネルセプトに加えて、市販のラット抗マウスＣＸＣ
Ｌ１３抗体ＭＡｂ４７０を対照として用いた。研究は、よって、以下の群を含んだ：
Ａ．マウスＩｇＧアイソタイプ対照
Ｂ．ＭＡｂ５３７８
Ｃ．エタネルセプト（ＴＮＦ阻害剤；陽性対照）
Ｄ．ＭＡｂ４７０
マウスに、１週間に２回、３週間にわたって０．６ｍｇ（３０ｍｇ／ｋｇ）の抗体の腹
腔内（マウスＩｇＧ、ＭＡｂ４７０およびＭＡｂ５３７８）または皮下（エタネルセプト
）注射のいずれかを行った。研究は、誘発後４２日目に終了した。
図２７から明らかなように、ＭＡｂ５３７８での予防的処置は、ここでもまた、研究中
ずっとそして終点（４２日目）にて疾患発展の速度の減少と疾患重症度の著しい阻害とを
もたらした。統計的に有意な差が、マウスＩｇＧ処置群とＭＡｂ５３７８処置群との間（
Ｐ＜０．０５）およびマウスＩｇＧ処置群とＭＡｂ４７０処置群との間で観察された（Ｐ
＜０．０５）。ＭＡｂ５３７８の阻害効果は、陽性対照作用物質エタネルセプトおよびラ
ット抗マウスＣＸＣＬ１３抗体ＭＡｂ４７０の阻害効果から統計的に異ならなかった（Ｐ
＞０．０５）。
ＧＣ−１：免疫化ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける胚中心形成に対するＭＡｂ５３７８の影
響。自己免疫性の動物モデルにおける我々の抗ＣＸＣＬ１３抗体の性能の成功に鑑みて、
異所性胚中心形成の破壊に関する可能性のある作用機序について試験した。１００ｕｌの
ミョウバン中で沈殿させた１００μｇの４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニルアセチル−
ニワトリ−ｇ−グロブリン（ＮＰ−ＣＧＧ）で免疫化したＭＡｂ５３７８処置ＢＡＬＢ／
Ｃマウスにおける胚中心を調べた。動物に、１週間に合計０．６ｍｇ（３０ｍｇ／ｋｇ）
のマウスアイソタイプ対照（０．６ｍｇの毎週の注射）またはＭＡｂ５３７８（０．３ｍ
ｇの週２回の注射）のいずれかを腹腔内注射した。注射はＮＰ−ＧＣＣ免疫化の１週間前
に開始し、１週間後まで継続した。胚中心形成を、攻撃後１０日目に評価した。脾臓およ
びリンパ節からの単細胞懸濁物を、フローサイトメトリーにより、様々なＢ細胞（活性化
ＧＣ Ｂ細胞；濾胞および辺縁帯Ｂ細胞）およびＴ細胞（ＣＤ４＋およびＣＤ８＋）部分
集合の存在について分析した。ＭＡｂ５３７８はＴ細胞または濾胞および辺縁帯Ｂ細胞に
対して影響しなかった（データは示さず）が、胚中心Ｂ細胞（Ｂ２２０＋／ＣＤ３８ｌｏ
ｗ／ＰＮＡ＋）は、脾臓およびリンパ節においてそれぞれ４３％および４１％低下した（
図２８）。脾臓群平均を、対応のないスチューデントのｔ検定を用いることにより比較し
た。ＧＣ−Ｂ細胞の低下は、マウスＩｇＧ処置群と比較して、ＭＡｂ５３７８処置脾臓に
おいて統計的に有意であった（Ｐ＜０．０５）。リンパ節から回収した細胞の数は非常に
低く、よってプールした（その結果、リンパ節からのデータを用いて統計解析を行わなか
った）。
［実施例９］
＜ヘリコバクター感染についてのマウスモデルにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の評価＞
ヘリコバクター感染のマウスモデル。Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉおよびＨ．Ｐｙｌｏｒ
ｉのようなヘリコバクター種は、患者において胃ＭＡＬＴリンパ腫を誘発する。ヘリコバ
クター誘発性胃リンパ濾胞のマウスモデルは、Ｎｏｂｕｔａｎｉら、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ６０：１５６〜１６４頁（２０１０）（これは、そ
の全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載された。Ｎｏｂｕｔａｎｉらのマウ
スモデルは、本明細書において、胃リンパ濾胞の低下における抗ＣＸＣＬ１３抗体の影響
を試験するために用いた。マウスのＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染についての処置スケジ
ュールおよび本実施例で用いた抗体投与を図２９に示す。
特に、Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスをＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉに感染させた。感染後１週
目に開始して、マウスにアイソタイプ抗体対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体（ＭＡｂ５３７
８）のいずれかを毎週、１２週間にわたって投与した。抗ＣＸＣＬ１３ ＭＡｂ５３７８
（マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ）は、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中で３ｍｇ／ｍｌで処方した
。マウスに、２００マイクロリットル（６００マイクログラム）を、感染後７日目に開始
してその後毎週腹腔内注射した。アイソタイプ対照は、独立したモノクローナルマウスＩ
ｇＧ２ａ抗体であった。
マウスからの胃試料を、ＰＣＲにより、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ特異的１６ｓ ｒＲ
ＮＡ遺伝子の発現について評価して、感染を確認した。ＰＣＲ増幅反応は、１単位のＴａ
ｑ ＤＮＡポリメラーゼ（ＴＯＹＯＢＯ、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）を含有する１×反応
緩衝液［２０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭのＫＣｌ、０．１ｍＭ
のＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ
４０および５０％グリセロール］；１０ｎｍｏｌの各デオキシヌクレオチド三リン酸；１
０ｐｍｏｌの各オリゴヌクレオチドプライマー；ならびに１μｌの希釈ＤＮＡ（これは、
およそ２０〜１００ｎｇ／μｌのＤＮＡ濃度の元の試料の１：１０希釈により調製した）
を５０μｌの最終容量中に含んだ。１６ｓ ｒＲＮＡ反応についてのサイクル条件は、９
４℃にて３０秒間、５６℃にて３０秒間および７２℃にて３０秒間の３５サイクルを含ん
だ。
Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ特異的１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子ＰＣＲプライマーを以下に示
す：
Ｆ：５’−ＴＴＧＧＧＡＧＧＣＴＴＴＧＴＣＴＴＴＣＣＡ−３’（配列番号２４）
Ｒ：５’−ＧＡＴＴＡＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＧＣＧＧＣＴ−３’（配列番号２５）
Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスから得られた全ての胃試料中のＨ．ｈｅｉｌｍａ
ｎｎｉｉ特異的１６ｓ−ｒＲＮＡ遺伝子の発現についての結果を図３０に示す。これらの
結果は、全ての処置マウスが、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染について陽性であったこと
を示す。
ヘリコバクター感染マウスの胃粘膜におけるＣＸＣＬ１３発現。Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎ
ｉｉ感染マウスおよび非感染マウスの胃粘膜におけるＣＸＣＬ１３のｍＲＮＡ発現レベル
を、リアルタイム定量ＰＣＲにより決定した。感染後１カ月および３カ月での非感染野生
型対照マウスと比較したＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスの胃粘膜におけるＣＸＣＬ
１３のｍＲＮＡ発現を、それぞれ図３１Ａおよび３１Ｂに示す。これらの結果は、Ｈ．ｈ
ｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスにおけるＣＸＣＬ１３発現の増加を示す。
抗体処置ヘリコバクター感染マウスの胃粘膜におけるＣＸＣＬ１３発現。アイソタイプ
対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体で処置した後のＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスの胃
粘膜におけるＣＸＣＬ１３のｍＲＮＡ発現レベルを、逆転写ＰＣＲにより決定した。胃の
粘膜層および粘膜下層を筋および漿膜から取り外し、１ｍｌのＴＲＩＺＯＬ試薬（インビ
トロｇｅｎ）とともにホモジナイズした。ＲＮＡを、製造業者の使用説明に従ってホモジ
ネートから抽出した。ＲＮＡを、製造業者のプロトコールに従ってＨｉｇｈ Ｃａｐａｃ
ｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いる逆転写反応に供し
た。ＰＣＲ増幅反応は、１単位のＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（ＴＯＹＯＢＯ、Ｏｓａｋ
ａ、Ｊａｐａｎ）を含有する１×反応緩衝液［２０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８．０
）、１００ｍＭのＫＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％Ｔｗｅｅｎ
−２０、０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ４０および５０％グリセロール］；１０ｎｍｏｌの
各デオキシヌクレオチド三リン酸；１０ｐｍｏｌの各オリゴヌクレオチドプライマー；な
らびに１μｌの希釈ＤＮＡ（これは、およそ１００ｎｇ／μｌのＤＮＡ濃度の元の試料の
１：１０希釈により調製した）を５０μｌの最終容量中に含んだ。ＣＸＣＬ１３およびβ
アクチン反応のサイクル条件は、９４℃にて２分間と、９４℃にて３０秒間、５５℃にて
３０秒間および７２℃にて１分間の３５サイクルとを含んだ。
図３２は、アイソタイプ対照または抗ＣＸＣＬ１３抗体処置後のＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎ
ｉｉ感染マウスの胃におけるＣＸＣＬ１３およびβアクチン対照ｍＲＮＡの発現を示す。
これらの結果は、ＣＸＣＬ１３が、非感染野生型マウスでは発現されなかったが、全ての
Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスにおいて発現されたことを示す。
抗ＣＸＣＬ１３抗体処置は、ヘリコバクター感染マウスにおける胃リンパ濾胞を低下さ
せる。Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染の３カ月後のマウスの胃を切除し、大弯にて開いた
。胃の半分をパラフィンワックスに包埋し、パラフィン包埋組織を切片にして、ヘマトキ
シリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。図３３は、アイソタイプ対照（左のパネル
）および抗ＣＸＣＬ１３抗体（右のパネル）処置マウスからの胃のＨ＆Ｅ染色画像を示す
。胃リンパ濾胞の数を、アイソタイプ対照および抗ＣＸＣＬ１３抗体試料について計数し
た。結果を図３３の下のパネルに示す。これらの結果は、対照処置に対して、抗ＣＸＣＬ
１３抗体で処置したＨ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ感染マウスにおける胃濾胞の低下を示す。
具体的な実施形態についての上記の記載は、本発明の全般的な性質を完全に明らかにす
るので、他者は、当技術分野における熟練の範囲内の知識を用いることにより、過度の実
験を行うことなく、本発明の全般的な概念から逸脱することなく、このような具体的な実
施形態の様々な応用について容易に改変および／または改作できる。よって、このような
改作および改変は、本明細書で示す教示および手引きに基づいて、開示される実施形態の
等価物の意味および範囲内であることを意図する。本明細書における言葉使いおよび術語
は、説明を目的とし、限定を目的としないので、本明細書の術語または言葉使いは、教示
および手引きに鑑みて当業者により解釈されると理解される。
本発明の広さおよび範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても限定されない
が、以下の特許請求の範囲およびその等価物に従ってのみ定義される。

Claims (158)

  1. ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２および３
    Ｃ９からなる群から選択される基準モノクローナル抗体と同じＣＸＣＬ１３エピトープに
    特異的に結合する単離抗原結合分子。
  2. ＭＡｂ５２６１およびＭＡｂ５３７８と同じＣＸＣＬ１３エピトープに特異的に結合す
    る、請求項１に記載の抗原結合分子。
  3. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗原結合分子であって、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ
    ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２および３Ｃ９からなる群から選択さ
    れる基準モノクローナル抗体がＣＸＣＬ１３に特異的に結合することを競合的に阻害する
    単離抗原結合分子。
  4. ＭＡｂ５２６１およびＭＡｂ５３７８を競合的に阻害する、請求項３に記載の抗原結合
    分子。
  5. 抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗原結合分
    子。
  6. ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、３Ｄ２および３
    Ｃ９からなる群から選択される、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗
    原結合断片。
  7. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片の重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号１３および配列番号３からなる群か
    ら選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む単離抗体またはその
    抗原結合断片。
  8. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片の軽鎖可変領域（ＶＬ）が、配列番号１５、配列番号１７および配列番号
    ８からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む単離
    抗体またはその抗原結合断片。
  9. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨが、配列番号１３および配列番号３からなる群から選択される配列
    と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を含む単離抗体または
    その抗原結合断片。
  10. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＬが、配列番号１５、配列番号１７および配列番号８からなる群から
    選択される配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を含む
    単離抗体またはその抗原結合断片。
  11. 前記抗体またはその断片のＶＨが、配列番号１３および配列番号３からなる群から選択
    されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  12. 前記抗体またはその断片のＶＬが、配列番号１５、配列番号１７および配列番号８から
    なる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合断
    片。
  13. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨおよびＶＬが、
    （ａ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、
    （ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７、ならびに
    （ｃ）それぞれ配列番号３および配列番号８
    からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配
    列を含む単離抗体またはその抗原結合断片。
  14. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨおよびＶＬが、
    （ａ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、
    （ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７、ならびに
    （ｃ）それぞれ配列番号３および配列番号８
    からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列とそれぞれ２０以下の保存的アミノ酸置換
    を除いて同一であるアミノ酸配列を含む単離抗体またはその抗原結合断片。
  15. 前記抗体またはその断片のＶＨおよびＶＬが、
    （ａ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、
    （ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７、ならびに
    （ｃ）それぞれ配列番号３および配列番号８
    からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列と同一であるアミノ酸配列を含む、請求項
    １３に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
  16. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨが、２以下のアミノ酸置換を除いて配列番号４と同一であるＣｈｏ
    ｔｈｉａ−Ｋａｂａｔ重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む単離
    抗体またはその抗原結合断片。
  17. 前記ＶＨ−ＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号４である、請求項１６に記載の抗体また
    はその断片。
  18. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨが、４以下のアミノ酸置換を除いて配列番号５と同一であるＫａｂ
    ａｔ重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む単離抗体またはその抗
    原結合断片。
  19. 前記ＶＨ−ＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号５である、請求項１８に記載の抗体また
    はその断片。
  20. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨが、２以下のアミノ酸置換を除いて配列番号６と同一であるＫａｂ
    ａｔ重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む単離抗体またはその抗
    原結合断片。
  21. 前記ＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号６である、請求項２０に記載の抗体また
    はその断片。
  22. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＬが、４以下のアミノ酸置換を除いて配列番号１６または９と同一で
    あるＫａｂａｔ軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）アミノ酸配列を含む単離抗体ま
    たはその抗原結合断片。
  23. 前記ＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号１６である、請求項２２に記載の抗体ま
    たはその断片。
  24. 前記ＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号９である、請求項２２に記載の抗体また
    はその断片。
  25. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＬが、２以下のアミノ酸置換を除いて配列番号１０と同一であるＫａ
    ｂａｔ軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）アミノ酸配列を含む単離抗体またはその
    抗原結合断片。
  26. 前記ＶＬ−ＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号１０である、請求項２５に記載の抗体ま
    たはその断片。
  27. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＬが、２以下のアミノ酸置換を除いて配列番号１１と同一であるＫａ
    ｂａｔ軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む単離抗体またはその
    抗原結合断片。
  28. 前記ＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号１１である、請求項２７に記載の抗体ま
    たはその断片。
  29. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＨが、配列番号４、配列番号５および配列番号６をそれぞれ含むＶＨ
    −ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を、１または複数の前記
    ＶＨ−ＣＤＲにおける４以下のアミノ酸置換を除いて含む単離抗体またはその抗原結合断
    片。
  30. 前記ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、それぞれ
    配列番号４、配列番号５および配列番号６である、請求項２９に記載の単離抗体。
  31. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体
    またはその断片のＶＬが、配列番号１６または配列番号９、配列番号１０および配列番号
    １１をそれぞれ含むＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列
    を、１または複数の前記ＶＬ−ＣＤＲにおける４以下のアミノ酸置換を除いて含む単離抗
    体またはその抗原結合断片。
  32. 前記ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、それぞれ
    配列番号１６、配列番号１０および配列番号１１である、請求項３１に記載の単離抗体。
  33. 前記ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、それぞれ
    配列番号９、配列番号１０および配列番号１１である、請求項３１に記載の単離抗体。
  34. ＶＨフレームワーク領域が、５以下のアミノ酸置換を有する、請求項７、９、１３およ
    び１４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  35. ＶＬフレームワーク領域が、５以下のアミノ酸置換を有する、請求項８、１０、１３お
    よび１４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  36. 直鎖状エピトープに結合する、請求項５〜３５のいずれか一項に記載の抗体またはその
    断片。
  37. 非直鎖状高次構造エピトープに結合する、請求項５〜３５のいずれか一項に記載の抗体
    またはその断片。
  38. 多重特異的である、請求項５〜３７のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  39. 二重特異的である、請求項３８に記載の抗体またはその断片。
  40. Ｆａｂ断片である、請求項５〜３９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  41. Ｆ（ａｂ）２断片である、請求項５〜３９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片
    。
  42. Ｆｖ断片である、請求項５〜３９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  43. 単鎖抗体である、請求項５〜３９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  44. 多価であり、少なくとも２つの重鎖と少なくとも２つの軽鎖とを含む、請求項５〜３９
    のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  45. ヒトカッパ定常領域およびヒトラムダ定常領域からなる群から選択される軽鎖定常領域
    を含む、請求項５〜３９、４３および４４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  46. 重鎖定常領域またはその断片を含む、請求項５〜３９および４３〜４５のいずれか一項
    に記載の抗体またはその断片。
  47. 前記重鎖定常領域またはその断片が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、
    ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥまたはＩｇＤである、請求項４６に記載の抗体また
    はその断片。
  48. ＣＸＣＬ１３ポリペプチドもしくはその断片またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペプチ
    ドに、５×１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５×１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１
    ０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ、１０−５Ｍ、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ
    、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−
    １０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、５．７×
    １０−１２Ｍ、８．４×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ
    、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍまたは１０−１５Ｍ以下の解離定
    数（ＫＤ）を特徴とする親和性で特異的に結合する、請求項５から４７のいずれか一項に
    記載の抗体またはその断片。
  49. 前記ＣＸＣＬ１３ポリペプチドもしくはその断片またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペ
    プチドが、ヒトまたはマウスである、請求項４８に記載の抗体またはその断片。
  50. 前記ＣＸＣＬ１３ポリペプチドもしくはその断片またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペ
    プチドがヒトであり、前記ＫＤが、約５×１０−８〜約５×１０−１０である、請求項４
    ９に記載の抗体またはその断片。
  51. 前記ＣＸＣＬ１３ポリペプチドもしくはその断片またはＣＸＣＬ１３バリアントポリペ
    プチドがマウスであり、前記ＫＤが、約５×１０−８〜約５×１０−１０である、請求項
    ４９に記載の抗体またはその断片。
  52. ＣＸＣＬ１３がＣＸＣＬ１３受容体に結合することを阻害する、請求項５〜５１のいず
    れか一項に記載の抗体またはその断片。
  53. 前記ＣＸＣＬ１３受容体がＣＸＣＲ５である、請求項５２に記載の抗体またはその断片
    。
  54. 前記抗体またはその断片が、ヒト化されたもの、霊長類化されたもの、またはキメラで
    ある、請求項５〜５３のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
  55. 前記抗体またはその断片がヒト化である、請求項５４に記載の抗体またはその断片。
  56. 融合した異種ポリペプチドをさらに含む、請求項５〜５５のいずれか一項に記載の抗体
    またはその断片。
  57. 前記抗体またはその断片が、細胞傷害作用物質、治療剤、細胞分裂阻害剤、生物学的毒
    素、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答修飾物
    質、薬剤、リンホカイン、異種抗体もしくはその断片、検出可能な標識、ポリエチレング
    リコール（ＰＥＧ）および前記作用物質のいずれか２以上の組み合わせからなる群から選
    択される作用物質にコンジュゲートされている、請求項５〜５６のいずれか一項に記載の
    抗体またはその断片。
  58. 前記細胞傷害作用物質が、放射性核種、生体毒素、酵素活性毒素または前記細胞傷害作
    用物質のいずれか２以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項５７に記載の抗
    体またはその断片。
  59. 前記検出可能標識が、酵素、蛍光標識、化学発光標識、生物発光標識、放射活性標識ま
    たは前記検出可能な標識のいずれか２以上の組み合わせからなる群から選択される、請求
    項５８に記載の抗体またはその断片。
  60. 請求項１〜５９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片と担体とを含む組成物。
  61. 前記担体が、食塩水、緩衝食塩水、ブドウ糖、水、グリセロールおよびそれらの組み合
    わせからなる群から選択される、請求項６０に記載の組成物。
  62. 抗体ＶＨポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記Ｖ
    Ｈポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１２および配列番号２からなる群から選択さ
    れる配列と少なくとも９０％同一であり、前記ＶＨポリペプチドを含む抗体またはその抗
    原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
  63. 前記ＶＨポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、前記ＶＨポリペプチドのアミ
    ノ酸配列を変更することなく発現を増加させるために最適化されている、請求項６２に記
    載のポリヌクレオチド。
  64. 前記最適化が、スプライス供与部位およびスプライス受容部位の同定および除去を含む
    、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
  65. 前記最適化が、前記ポリヌクレオチドを発現する細胞についてのコドン使用の最適化を
    含む、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
  66. 前記核酸が、配列番号１２および配列番号２からなる群から選択される配列を含むヌク
    レオチド配列を含む、請求項６２〜６５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  67. 前記核酸が、配列番号１２および配列番号２からなる群から選択される配列からなるヌ
    クレオチド配列を含む、請求項６６に記載のポリヌクレオチド。
  68. 抗体ＶＬポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記Ｖ
    Ｌポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号７および配列番号１４からなる群から選択さ
    れる配列と少なくとも９０％同一であり、前記ＶＬポリペプチドを含む抗体またはその抗
    原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
  69. 前記ＶＬポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、前記ＶＬポリペプチドのアミ
    ノ酸配列を変更することなく発現を増加させるために最適化されている、請求項６８に記
    載のポリヌクレオチド。
  70. 前記最適化が、スプライス供与部位およびスプライス受容部位の同定および除去を含む
    、請求項６９に記載のポリヌクレオチド。
  71. 前記最適化が、前記ポリヌクレオチドを発現する細胞についてのコドン使用の最適化を
    含む、請求項６９に記載のポリヌクレオチド。
  72. 前記核酸が、配列番号７、配列番号１４および配列番号１８からなる群から選択される
    配列を含むヌクレオチド配列を含む、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載のポリヌク
    レオチド。
  73. 前記核酸が、配列番号７、配列番号１４および配列番号１８からなる群から選択される
    配列からなるヌクレオチド配列を含む、請求項７２に記載のポリヌクレオチド。
  74. 抗体ＶＨポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記Ｖ
    Ｈポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号２および配列番号１２からなる群から選択さ
    れる配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であり、前記ＶＨポリペプチドを
    含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌクレ
    オチド。
  75. 抗体ＶＬポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記Ｖ
    Ｌポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号７、配列番号１４および配列番号１８からな
    る群から選択される配列と２０以下の保存的アミノ酸置換を除いて同一であり、前記ＶＬ
    ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、
    単離ポリヌクレオチド。
  76. 配列番号４からなる配列と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＨ−ＣＤＲ１ア
    ミノ酸配列をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記ＶＨ−ＣＤＲ１
    を含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌク
    レオチド。
  77. 前記ＶＨ−ＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号４である、請求項７６に記載のポリヌク
    レオチドまたはその断片。
  78. 配列番号５からなる配列と４以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＨ−ＣＤＲ２ア
    ミノ酸配列をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記ＶＨ−ＣＤＲ２
    を含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌク
    レオチド。
  79. 前記ＶＨ−ＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号５である、請求項７８に記載のポリヌク
    レオチドまたはその断片。
  80. 配列番号６からなる配列と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＨ−ＣＤＲ３ア
    ミノ酸配列をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記ＶＨ−ＣＤＲ３
    を含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌク
    レオチド。
  81. 前記ＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号６である、請求項８０に記載のポリヌク
    レオチドまたはその断片。
  82. 配列番号９および配列番号１６からなる群から選択される配列と４以下のアミノ酸置換
    を除いて同一であるＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列をコードする核酸を含む単離ポリヌクレ
    オチドであって、前記ＶＬ−ＣＤＲ１を含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１
    ３に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
  83. 前記ＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列が、配列番号９および配列番号１６からなる群から選
    択される配列である、請求項８２に記載のポリヌクレオチドまたはその断片。
  84. 配列番号１０からなる配列と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＬ−ＣＤＲ２
    アミノ酸配列をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記ＶＬ−ＣＤＲ
    ２を含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌ
    クレオチド。
  85. 前記ＶＬ−ＣＤＲ２アミノ酸配列が、配列番号１０である、請求項８４に記載のポリヌ
    クレオチドまたはその断片。
  86. 配列番号１１からなる配列と２以下のアミノ酸置換を除いて同一であるＶＬ−ＣＤＲ３
    アミノ酸配列をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記ＶＬ−ＣＤＲ
    ３を含む抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌ
    クレオチド。
  87. 前記ＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列が、配列番号１１である、請求項８６に記載のポリヌ
    クレオチドまたはその断片。
  88. 抗体ＶＨポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記Ｖ
    Ｈポリペプチドが、配列番号４、配列番号５および配列番号６をそれぞれ含むＶＨ−ＣＤ
    Ｒ１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、抗体またはその抗原結
    合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌクレオチド。
  89. 抗体ＶＬポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって、前記Ｖ
    Ｌポリペプチドが、配列番号９または配列番号１６、配列番号１０および配列番号１１を
    それぞれ含むＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含み
    、抗体またはその抗原結合断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、単離ポリヌクレオ
    チド。
  90. 前記抗体ＶＨポリペプチドと融合したシグナルペプチドをコードする核酸をさらに含む
    、請求項６２〜６７、７４、７６〜８１および８８のいずれか一項に記載のポリヌクレオ
    チド。
  91. 前記抗体ＶＬポリペプチドと融合したシグナルペプチドをコードする核酸をさらに含む
    、請求項６８〜７３、７５、８２〜８７および８９のいずれか一項に記載のポリヌクレオ
    チド。
  92. 前記抗体ＶＨポリペプチドと融合した重鎖定常領域ＣＨ１ドメインをコードする核酸を
    さらに含む、請求項６２〜６７、７４〜８１、８８および９０のいずれか一項に記載のポ
    リヌクレオチド。
  93. 前記抗体ＶＨポリペプチドと融合した重鎖定常領域ＣＨ２ドメインをコードする核酸を
    さらに含む、請求項６２〜６７、７４〜８１、８８、９０および９２のいずれか一項に記
    載のポリヌクレオチド。
  94. 前記ＶＨポリペプチドと融合した重鎖定常領域ＣＨ３ドメインをコードする核酸をさら
    に含む、請求項６２〜６７、７４〜８１、８８、９０、９２および９３のいずれか一項に
    記載のポリヌクレオチド。
  95. 前記ＶＨポリペプチドと融合した重鎖ヒンジ領域をコードする核酸をさらに含む、請求
    項６２〜６７、７４〜８１、８８、９０および９２から９４のいずれか一項に記載のポリ
    ヌクレオチド。
  96. 前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ
    １、ＩｇＡ２、ＩｇＥまたはＩｇＤである、請求項９４または９５に記載のポリヌクレオ
    チド。
  97. 前記ＶＬポリペプチドと融合した軽鎖定常領域ドメインをコードする核酸をさらに含む
    、請求項６８〜７３、７５、８２〜８７、８９および９１のいずれか一項に記載のポリヌ
    クレオチド。
  98. 前記軽鎖定常領域が、ヒトカッパである、請求項９７に記載のポリヌクレオチド。
  99. 前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトおよびマウスのＣＸＣＬ１３に特異的に結合
    する、請求項６２〜９８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  100. 請求項６２〜９９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  101. 前記ポリヌクレオチドが、プロモーターに作動可能に連結している、請求項１００に記
    載のベクター。
  102. 請求項１００または１０１に記載のベクターを含む宿主細胞。
  103. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する抗体またはその断片を生成する方法であって、請求項
    １０２に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記抗体またはその断片を回収するステ
    ップとを含む方法。
  104. 請求項１０３に記載の方法により生成される単離ポリペプチド。
  105. 請求項６２〜９９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによりコードされる単離ポ
    リペプチド。
  106. 請求項１０３または１０５に記載のポリペプチドを含む単離抗体またはその断片。
  107. ＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドとＶＬをコードする単離ポリヌクレオチドとを
    含む組成物であって、ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前
    記ポリヌクレオチドが、
    （ａ）それぞれ配列番号３および配列番号８、
    （ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、ならびに
    （ｃ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７
    からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配
    列をコードする核酸を含み、
    ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチドに
    よりコードされる抗体またはその断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する、組成物。
  108. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチド
    が、
    （ａ）それぞれ配列番号３および配列番号８、
    （ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、ならびに
    （ｃ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７
    からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列からなるアミノ酸配列をコードする核酸を
    含む、請求項１０７に記載の組成物。
  109. ＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドとＶＬをコードする単離ポリヌクレオチドとを
    含む組成物であって、ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前
    記ポリヌクレオチドが、
    （ａ）それぞれ配列番号３および配列番号８、
    （ｂ）それぞれ配列番号１３および配列番号１５、ならびに
    （ｃ）それぞれ配列番号１３および配列番号１７
    からなる群から選択されるＶＨおよびＶＬ配列と２０未満の保存的アミノ酸置換を除いて
    同一であるアミノ酸配列をコードする核酸を含み、
    ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチドに
    よりコードされる抗体またはその断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する組成物。
  110. 前記ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列が、それぞれ配列番号３および配列番号８、それぞれ
    配列番号１３および配列番号１５またはそれぞれ配列番号１３および配列番号１７である
    、請求項１０９に記載の組成物。
  111. ＶＨをコードする単離ポリヌクレオチドとＶＬをコードする単離ポリヌクレオチドとを
    含む組成物であって、ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、それぞれ配列番号４、
    配列番号５および配列番号６からなるＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２およびＶＨ−ＣＤ
    Ｒ３アミノ酸配列を含むＶＨポリペプチドをコードし、ＶＬをコードする前記ポリヌクレ
    オチドが、それぞれ配列番号９または配列番号１６、配列番号１０および配列番号１１か
    らなるＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２およびＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬポ
    リペプチドをコードし、ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする
    前記ポリヌクレオチドによりコードされる抗体またはその断片が、ＣＸＣＬ１３に特異的
    に結合する、組成物。
  112. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記抗体ＶＨポリペプチドと融合したシグ
    ナルペプチドをコードする核酸をさらに含む、請求項１０７〜１１１のいずれか一項に記
    載の組成物。
  113. ＶＬをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記抗体ＶＬポリペプチドと融合したシグ
    ナルペプチドをコードする核酸をさらに含む、請求項１０８〜１１１のいずれか一項に記
    載の組成物。
  114. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記ＶＨポリペプチドと融合した重鎖定常
    領域ＣＨ１ドメインをコードする核酸をさらに含む、請求項１０８〜１１３のいずれか一
    項に記載の組成物。
  115. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記ＶＨポリペプチドと融合した重鎖定常
    領域ＣＨ２ドメインをコードする核酸をさらに含む、請求項１０８〜１１４のいずれか一
    項に記載の組成物。
  116. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記ＶＨポリペプチドと融合した重鎖定常
    領域ＣＨ３ドメインをコードする核酸をさらに含む、請求項１０８〜１１５のいずれか一
    項に記載の組成物。
  117. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記ＶＨポリペプチドと融合した重鎖ヒン
    ジ領域をコードする核酸をさらに含む、請求項１０８〜１１６のいずれか一項に記載の組
    成物。
  118. 前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ
    １、ＩｇＡ２、ＩｇＥまたはＩｇＤである、請求項１１６または１１７に記載の組成物。
  119. ＶＬをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記ＶＬポリペプチドと融合した軽鎖定常
    領域ドメインをコードする核酸をさらに含む、請求項１０７から１１８のいずれか一項に
    記載の組成物。
  120. 前記軽鎖定常領域が、ヒトカッパである、請求項１１９に記載の組成物。
  121. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチド
    が、単一のベクターに含有される、請求項１０７から１２０のいずれか一項に記載の組成
    物。
  122. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、第１のベクターに含有され、ＶＬをコード
    する前記ポリヌクレオチドが、前記第１のベクターと同一でない第２のベクターに含有さ
    れる、請求項１０７から１２０のいずれか一項に記載の組成物。
  123. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドが、第１のプロモーターに作動可能に連結し、
    ＶＬをコードする前記ポリヌクレオチドが、第２のプロモーターに作動可能に連結してい
    る、請求項１２１または１２２に記載の組成物。
  124. 前記第１のプロモーターと第２のプロモーターとが、同じプロモーターのコピーである
    、請求項１２３に記載の組成物。
  125. 前記第１のプロモーターと第２のプロモーターとが同一でない、請求項１２３に記載の
    組成物。
  126. 前記第１のベクターおよび前記第２のベクターが、単一の宿主細胞に含有される、請求
    項１２１〜１２５のいずれか一項に記載の組成物。
  127. 前記第１のベクターおよび前記第２のベクターが、別々の宿主細胞に含有される、請求
    項１２１〜１２５のいずれか一項に記載の組成物。
  128. 前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトおよびマウスのＣＸＣＬ１３に特異的に結合
    する、請求項１０７〜１２７のいずれか一項に記載の組成物。
  129. 請求項１２１に記載のベクター。
  130. 請求項１２２に記載の第１のベクター。
  131. 請求項１２２に記載の第２のベクター。
  132. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチド
    がインフレームで融合され、それらに作動可能に連結した単一のプロモーターから同時転
    写され、単鎖抗体またはその抗原結合断片に同時翻訳される、請求項１２９に記載のベク
    ター。
  133. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチド
    が、それらに作動可能に連結した単一のプロモーターから同時転写されるが、別々に翻訳
    される、請求項１２９に記載のベクター。
  134. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドとＶＬをコードする前記ポリヌクレオチドとの
    間に配置されたＩＲＥＳ配列をさらに含む、請求項１２９に記載のベクター。
  135. ＶＨをコードする前記ポリヌクレオチドおよびＶＬをコードする前記ポリヌクレオチド
    が別々に転写され、それぞれが別々のプロモーターに作動可能に連結している、請求項１
    ２９に記載のベクター。
  136. 請求項１２９もしくは１３２〜１３５のいずれか一項に記載のベクター、請求項１３０
    に記載の第１のベクター、または請求項１３１に記載の第２のベクターを含む宿主細胞。
  137. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する抗体またはその断片を生成する方法であって、請求項
    １３６に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記抗体またはその断片を回収するステ
    ップとを含む方法。
  138. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する抗体またはその断片を生成する方法であって、請求項
    １３６に記載の個々の宿主細胞を同時培養するステップと、前記抗体またはその断片を回
    収するステップとを含む方法。
  139. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する抗体またはその断片を生成する方法であって、請求項
    １３６に記載の個々の宿主細胞を別々に培養するステップと、前記ＶＨおよびＶＬコード
    ポリペプチドを組み合わせるステップと、前記抗体またはその断片を回収するステップと
    を含む方法。
  140. ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する抗体またはその断片を生成する方法であって、請求項
    １３６に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記抗体またはその断片を回収するステ
    ップとを含む方法。
  141. 請求項１４０に記載の方法により生成される、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合する抗体ま
    たはその断片。
  142. 動物においてＣＸＣＬ１３を中和するための方法であって、前記動物に、
    （ａ）請求項５〜５９のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその断片または請求項６
    ０もしくは６１に記載の組成物と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と
    を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  143. 処置を必要とする動物において自己免疫疾患または炎症性疾患を処置するための方法で
    あって、前記動物に、
    （ａ）請求項５〜５９のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその断片または請求項６
    ０もしくは６１に記載の組成物と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と
    を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  144. 前記自己免疫疾患または前記炎症性疾患が、多発性硬化症である、請求項１４３に記載
    の方法。
  145. 前記自己免疫疾患または前記炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である
    、請求項１４３に記載の方法。
  146. 前記自己免疫疾患または前記炎症性疾患が、関節炎である、請求項１４３に記載の方法
    。
  147. 前記関節炎が、関節リウマチである、請求項１４６に記載の方法。
  148. 処置を必要とする動物においてがんを処置するための方法であって、前記動物に、
    （ａ）請求項５〜５９のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその断片または請求項６
    ０もしくは６１に記載の組成物と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と
    を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  149. 前記がんが、前立腺または結腸がんである、請求項１４８に記載の方法。
  150. 動物において胃リンパ濾胞を阻害するための方法であって、前記動物に、
    （ａ）請求項５〜５９のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその断片または請求項６
    ０もしくは６１に記載の組成物と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と
    を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  151. 防止または処置を必要とする動物において粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を
    防止または処置するための方法であって、前記動物に、
    （ａ）請求項５〜５９のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその断片または請求項６
    ０もしくは６１に記載の組成物と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と
    を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  152. 防止または処置を必要とする動物において胃潰瘍または十二指腸潰瘍を防止または処置
    するための方法であって、前記動物に、
    （ａ）請求項５〜５９のいずれか一項に記載の単離抗体もしくはその断片または請求項６
    ０もしくは６１に記載の組成物と、
    （ｂ）薬学的に許容される担体と
    を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  153. 前記動物が、ヘリコバクター細菌に感染している、請求項１５０〜１５２のいずれか一
    項に記載の方法。
  154. 前記抗体またはその断片が、ＣＸＣＬ１３がＣＸＣＬ１３受容体に結合することを阻害
    する、請求項１４２〜１５３のいずれか一項に記載の方法。
  155. 前記ＣＸＣＬ１３受容体が、ＣＸＣＲ５である、請求項１５４に記載の方法。
  156. 前記抗体またはその断片が、ＣＸＣＲ５受容体内部移行を阻害する、請求項１５５に記
    載の方法。
  157. 前記動物が哺乳動物である、請求項１４２〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
  158. 前記哺乳動物がヒトである、請求項１５７に記載の方法。
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