JP2017035109A - 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス - Google Patents
加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017035109A JP2017035109A JP2016218086A JP2016218086A JP2017035109A JP 2017035109 A JP2017035109 A JP 2017035109A JP 2016218086 A JP2016218086 A JP 2016218086A JP 2016218086 A JP2016218086 A JP 2016218086A JP 2017035109 A JP2017035109 A JP 2017035109A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- capsid
- sequence
- item
- protein
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 title abstract description 388
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 101
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 44
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 claims abstract description 141
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 claims abstract description 141
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 claims abstract description 141
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 72
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims abstract description 58
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 117
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 72
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 72
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 47
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 claims description 35
- 208000029570 hepatitis D virus infection Diseases 0.000 claims description 35
- 108090001102 Hammerhead ribozyme Proteins 0.000 claims description 30
- 208000005331 Hepatitis D Diseases 0.000 claims description 25
- 108091080980 Hepatitis delta virus ribozyme Proteins 0.000 claims description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 22
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 11
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 abstract description 143
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 abstract description 142
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 123
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 55
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 44
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 43
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 35
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 abstract description 34
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 abstract description 33
- 108091027075 5S-rRNA precursor Proteins 0.000 abstract description 30
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 abstract description 26
- -1 siRNA and shRNA Chemical class 0.000 abstract description 13
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 138
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 126
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 126
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 125
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 116
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 116
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 116
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 115
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 109
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 109
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 109
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 109
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 109
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 109
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 107
- 241000709744 Enterobacterio phage MS2 Species 0.000 description 105
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 92
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 82
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 79
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 74
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 60
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 60
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 58
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 51
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 44
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 44
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 42
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 42
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 42
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 40
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 37
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 36
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 35
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 35
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 34
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 34
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 32
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 32
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 30
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 28
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 28
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 27
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 26
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 25
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 25
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 24
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 23
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 21
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 21
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 21
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 21
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 21
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 20
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 20
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 20
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 20
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 20
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 20
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 20
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 20
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 20
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 19
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 19
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 18
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 18
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 18
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 17
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 17
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 17
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 16
- 241000714210 Leviviridae Species 0.000 description 16
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 14
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 14
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 14
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 14
- 241000251131 Sphyrna Species 0.000 description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 12
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 11
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 11
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 11
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 11
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 10
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 10
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 10
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 10
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 10
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 10
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 9
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 9
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 9
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 9
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 9
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 9
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 9
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000012197 frelon Substances 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 8
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 6
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 6
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 6
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 6
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 6
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- MXWJVTOOROXGIU-UHFFFAOYSA-N atrazine Chemical compound CCNC1=NC(Cl)=NC(NC(C)C)=N1 MXWJVTOOROXGIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 5
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000709738 Enterobacteria phage fr Species 0.000 description 4
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- YFVOXLJXJBQDEF-UHFFFAOYSA-N isocarbophos Chemical compound COP(N)(=S)OC1=CC=CC=C1C(=O)OC(C)C YFVOXLJXJBQDEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000013631 noncovalent dimer Substances 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- QYMMJNLHFKGANY-UHFFFAOYSA-N profenofos Chemical compound CCCSP(=O)(OCC)OC1=CC=C(Br)C=C1Cl QYMMJNLHFKGANY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000219173 Carica Species 0.000 description 3
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 3
- 241000709737 Enterobacteria phage GA Species 0.000 description 3
- 241000709740 Enterobacteria phage isolate BZ13 Species 0.000 description 3
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 3
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 3
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 3
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 3
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N (3ar,7as)-2-(trichloromethylsulfanyl)-3a,4,7,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@H]2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)[C@H]21 LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N 0.000 description 2
- WCXDHFDTOYPNIE-RIYZIHGNSA-N (E)-acetamiprid Chemical compound N#C/N=C(\C)N(C)CC1=CC=C(Cl)N=C1 WCXDHFDTOYPNIE-RIYZIHGNSA-N 0.000 description 2
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 239000005875 Acetamiprid Substances 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 101100533230 Caenorhabditis elegans ser-2 gene Proteins 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000709742 Enterobacteria phage TH1 Species 0.000 description 2
- 241000339371 Enterobacteria phage ZR Species 0.000 description 2
- 241000709739 Enterobacteria phage f2 Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001523956 Parengyodontium album Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N azoxystrobin Chemical compound CO\C=C(\C(=O)OC)C1=CC=CC=C1OC1=CC(OC=2C(=CC=CC=2)C#N)=NC=N1 WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HUBANNPOLNYSAD-UHFFFAOYSA-N clopyralid Chemical compound OC(=O)C1=NC(Cl)=CC=C1Cl HUBANNPOLNYSAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 2
- UNAHYJYOSSSJHH-UHFFFAOYSA-N oryzalin Chemical compound CCCN(CCC)C1=C([N+]([O-])=O)C=C(S(N)(=O)=O)C=C1[N+]([O-])=O UNAHYJYOSSSJHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L paraquat dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N permethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OCC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- LMNZTLDVJIUSHT-UHFFFAOYSA-N phosmet Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(CSP(=S)(OC)OC)C(=O)C2=C1 LMNZTLDVJIUSHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N picloram Chemical compound NC1=C(Cl)C(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- HZRSNVGNWUDEFX-UHFFFAOYSA-N pyraclostrobin Chemical compound COC(=O)N(OC)C1=CC=CC=C1COC1=NN(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=C1 HZRSNVGNWUDEFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- REEQLXCGVXDJSQ-UHFFFAOYSA-N trichlopyr Chemical compound OC(=O)COC1=NC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl REEQLXCGVXDJSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZSDSQXJSNMTJDA-UHFFFAOYSA-N trifluralin Chemical compound CCCN(CCC)C1=C([N+]([O-])=O)C=C(C(F)(F)F)C=C1[N+]([O-])=O ZSDSQXJSNMTJDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N 0.000 description 1
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 1
- 108091064702 1 family Proteins 0.000 description 1
- SJBBXFLOLUTGCW-UHFFFAOYSA-N 1,3-bis(trifluoromethyl)benzene Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 SJBBXFLOLUTGCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 2-(3-aminopropanoylamino)-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound NCCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVQBLGZPHOPPFO-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-N-(2-ethyl-6-methylphenyl)-N-(1-methoxypropan-2-yl)acetamide Chemical compound CCC1=CC=CC(C)=C1N(C(C)COC)C(=O)CCl WVQBLGZPHOPPFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVSGXWMWNRGTKE-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-[4-methyl-5-oxo-4-(propan-2-yl)-4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yl]pyridine-3-carboxylic acid Chemical compound N1C(=O)C(C(C)C)(C)N=C1C1=NC=C(C)C=C1C(O)=O PVSGXWMWNRGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005730 Azoxystrobin Substances 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 239000005740 Boscalid Substances 0.000 description 1
- 239000005745 Captan Substances 0.000 description 1
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 1
- 239000005758 Cyprodinil Substances 0.000 description 1
- 108091008102 DNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 101100285402 Danio rerio eng1a gene Proteins 0.000 description 1
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 description 1
- 241000709741 Enterobacteria phage BO1 Species 0.000 description 1
- 241000709736 Enterobacteria phage JP34 Species 0.000 description 1
- 241000709746 Enterobacteria phage JP501 Species 0.000 description 1
- 241000709745 Enterobacteria phage KU1 Species 0.000 description 1
- 241000709747 Enterobacteria phage R17 Species 0.000 description 1
- 101000933974 Enterobacteria phage fr Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000047486 Escherichia virus BZ13 Species 0.000 description 1
- 241000047479 Escherichia virus MS2 Species 0.000 description 1
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 239000005867 Iprodione Substances 0.000 description 1
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N LSM-4015 Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000005587 Oryzalin Substances 0.000 description 1
- 239000005591 Pendimethalin Substances 0.000 description 1
- 239000005921 Phosmet Substances 0.000 description 1
- 239000005595 Picloram Substances 0.000 description 1
- 101100271190 Plasmodium falciparum (isolate 3D7) ATAT gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 239000005869 Pyraclostrobin Substances 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 1
- 240000003949 Sporobolus virginicus Species 0.000 description 1
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000005627 Triclopyr Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- WCXDHFDTOYPNIE-UHFFFAOYSA-N acetamiprid Chemical compound N#CN=C(C)N(C)CC1=CC=C(Cl)N=C1 WCXDHFDTOYPNIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- NIXXQNOQHKNPEJ-UHFFFAOYSA-N aminopyralid Chemical compound NC1=CC(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NIXXQNOQHKNPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940118790 boscalid Drugs 0.000 description 1
- WYEMLYFITZORAB-UHFFFAOYSA-N boscalid Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C1=CC=CC=C1NC(=O)C1=CC=CN=C1Cl WYEMLYFITZORAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 1
- 229930008380 camphor Natural products 0.000 description 1
- 229940117949 captan Drugs 0.000 description 1
- MPBRYMWMMKKRGC-UHFFFAOYSA-M carbocyanin DBTC Chemical compound [Br-].C1=CC=CC2=C([N+](=C(C=C(C)C=C3N(C4=C5C=CC=CC5=CC=C4S3)CC)S3)CC)C3=CC=C21 MPBRYMWMMKKRGC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N chlorothalonil Chemical compound ClC1=C(Cl)C(C#N)=C(Cl)C(C#N)=C1Cl CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N chlorpyrifos Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=NC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl SBPBAQFWLVIOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013632 covalent dimer Substances 0.000 description 1
- HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N cyprodinil Chemical compound N=1C(C)=CC(C2CC2)=NC=1NC1=CC=CC=C1 HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N diazinon Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC(C)=NC(C(C)C)=N1 FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 235000019239 indanthrene blue RS Nutrition 0.000 description 1
- UHOKSCJSTAHBSO-UHFFFAOYSA-N indanthrone blue Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=C4NC5=C6C(=O)C7=CC=CC=C7C(=O)C6=CC=C5NC4=C3C(=O)C2=C1 UHOKSCJSTAHBSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N iprodione Chemical compound O=C1N(C(=O)NC(C)C)CC(=O)N1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- YPJRHEKCFKOVRT-UHFFFAOYSA-N lerociclib Chemical compound C1CN(C(C)C)CCN1C(C=N1)=CC=C1NC1=NC=C(C=C2N3C4(CCCCC4)CNC2=O)C3=N1 YPJRHEKCFKOVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- ZDAFHQWFOMHDMG-UHFFFAOYSA-N n-(3,4-dichlorophenyl)-n-propanoylpropanamide Chemical compound CCC(=O)N(C(=O)CC)C1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 ZDAFHQWFOMHDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012858 packaging process Methods 0.000 description 1
- RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N parathion-methyl Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- CHIFOSRWCNZCFN-UHFFFAOYSA-N pendimethalin Chemical compound CCC(CC)NC1=C([N+]([O-])=O)C=C(C)C(C)=C1[N+]([O-])=O CHIFOSRWCNZCFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000490 permethrin Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000000247 postprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- UOCCVDMCNJYVIW-UHFFFAOYSA-N prop-2-yne-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC#C UOCCVDMCNJYVIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- ZYHMJXZULPZUED-UHFFFAOYSA-N propargite Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1OC1C(OS(=O)OCC#C)CCCC1 ZYHMJXZULPZUED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102200104662 rs121908730 Human genes 0.000 description 1
- 102220165685 rs202093758 Human genes 0.000 description 1
- 102200042454 rs2070025 Human genes 0.000 description 1
- 102220047952 rs35718384 Human genes 0.000 description 1
- 102200006593 rs727503093 Human genes 0.000 description 1
- 102220082602 rs863224271 Human genes 0.000 description 1
- 102220096862 rs876659891 Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000010741 sumoylation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000008957 viral persistence Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
- A01N25/26—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests in coated particulate form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
- A01N25/26—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests in coated particulate form
- A01N25/28—Microcapsules or nanocapsules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/01—DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/12—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes
- C12N2310/121—Hammerhead
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/12—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes
- C12N2310/123—Hepatitis delta
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/12—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes
- C12N2310/128—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes processing or releasing ribozyme
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/16—Aptamers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
- C12N2330/51—Specially adapted vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/18011—Details ssRNA Bacteriophages positive-sense
- C12N2795/18111—Leviviridae
- C12N2795/18122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/18011—Details ssRNA Bacteriophages positive-sense
- C12N2795/18111—Leviviridae
- C12N2795/18123—Virus like particles [VLP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/18011—Details ssRNA Bacteriophages positive-sense
- C12N2795/18111—Leviviridae
- C12N2795/18141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2795/18142—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector virus or viral particle as vehicle, e.g. encapsulating small organic molecule
Abstract
【解決手段】1つの態様において、本開示は、少なくとも1つの異種カーゴ分子及びパッキング配列を包むウイルス様粒子(VLP)を提供する。VLPは、更にカプシドによって包み込まれた少なくとも1つのリボザイムを含む。異種カーゴ分子は、オリゴヌクレオチド、又はオリゴリボヌクレオチドを含んでもよい。
【選択図】なし
Description
本出願は、米国仮特許出願第61/578,706号(2011年12月21日出願)、米国仮特許出願第61/607,900号(2012年3月7日出願)、米国仮特許出願第61/661,688号(2012年6月19日出願)(その開示全部が、本発明において参考として含まれる)に対する優先権を主張し、そのすべての開示は参照により本明細書に組み込まれる。
ファイル名450061_配列表_ST25.txt(容量77キロバイト)を含み2012年12月20日に作成された、「配列表」の紙のコピー及びフロッピー(登録商標)ディスクで配列表のコンピューターに読み込み可能な形式の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
(項目1)
少なくとも1つの異種カーゴ分子及びパッキング配列を封入するカプシドを含む、ウイルス様粒子(VLP)。
(項目2)
カプシドに封入された少なくとも1つのリボザイムを更に含む、項目1に記載のVLP。
(項目3)
異種カーゴ分子がオリゴヌクレオチドを含む、項目2に記載のVLP。
(項目4)
異種カーゴ分子がオリゴリボヌクレオチドを含む、項目3に記載のVLP。
(項目5)
リボザイムが、パッキング配列およびオリゴリボヌクレオチドによりフランクされて核酸構築物を形成する、項目4に記載のVLP。
(項目6)
複数の核酸構築物を含む、項目5に記載のVLP。
(項目7)
オリゴリボヌクレオチドが、siRNA、shRNA、sshRNA、lshRNA及びmiRNAから選択される短RNAである、項目4に記載のVLP。
(項目8)
少なくとも2つのリボザイムを含み、それぞれのリボザイムが短RNAの一端を切断するために選択される、項目7に記載のVLP。
(項目9)
少なくとも1〜100個のヌクレオチドからなるリンカーを更に含み、リンカーが少なくとも40%のA又は少なくとも40%のUを含み、リンカーが、オリゴリボヌクレオチドとパッキング配列又はオリゴリボヌクレオチドとリボザイムを結合させる、項目4に
記載のVLP。
(項目10)
リボザイムが、ハンマーヘッドリボザイム及び肝炎デルタVリボザイムから選択される、項目2に記載のVLP。
(項目11)
リボザイムが、オリゴリボヌクレオチドの少なくとも6個の隣接ヌクレオチドに相補的なヌクレオチドの隣接セットを有するハンマーヘッドリボザイム変種である、項目2に記載のVLP。
(項目12)
リボザイムが、野生型肝炎デルタVリボザイムの速度の最大で約50%の速度でオリゴリボヌクレオチドとの連結を切断することができる突然変異肝炎デルタVリボザイムである、項目2に記載のVLP。
(項目13)
リボザイムが、配列番号10〜18から選択される核酸配列を有する突然変異肝炎デルタV(HDV)リボザイムである、項目2に記載のVLP。
(項目14)
カプシドが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある野生型ウイルスカプシドを含む、項目1に記載のVLP。
(項目15)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも40%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目16)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも41%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目17)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも45%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目18)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも52%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目19)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも53%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目20)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも56%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目21)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも59%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目22)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも86%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目23)
カプシドが、配列番号3のアミノ酸配列を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質を含む、項目1に記載のVLP。
(項目24)
カプシドが、有効構造アンカードアラインメントに基づいて、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも15%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目25)
カプシドが、有効構造アンカードアラインメントに基づいて、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも16%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目26)
カプシドが、有効構造アンカードアラインメントに基づいて、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも21%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目27)
異種カーゴ分子が、ペプチド又はポリペプチドを含む、項目1に記載のVLP。
(項目28)
異種カーゴ分子とウイルスカプシドを結合するオリゴヌクレオチドリンカーを更に含む、項目27に記載のVLP。
(項目29)
オリゴヌクレオチドリンカーが、リボザイム配列を含むオリゴリボヌクレオチドである、項目28に記載のVLP。
(項目30)
異種カーゴ分子が、約1,500Da以下の分子量を有する生体活性小分子に特異的に結合する第1アパタマー(apatamer)配列及びカプシドのパッキング配列に結合する第2アパタマー配列を含む二官能性ポリヌクレオチドを含む二分子カーゴ分子を含む、項目1に記載のVLP。
(項目31)
第1アプタマー配列に結合している生体活性小分子を更に含む、項目30に記載のVLP。
(項目32)
生体活性小分子が、及び除草剤又は殺虫剤を含む、項目31に記載のVLP。
(項目33)
生体活性小分子が、アトラジン、アセタミプリドホレート(acetamipridphorate)、プロフェノホス(profenofos)、イソカルボホス(isocarbophos)及びオメトエートアス(omethoateas)からなる群から選択される、項目32に記載のVLP。
(項目34)
短RNA、リボザイム及びパッキング配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸構築物。
(項目35)
短RNAが、siRNA又はshRNAである、項目34に記載の核酸構築物。
(項目36)
少なくとも40%がAであるか、少なくとも40%がTであるか又は少なくとも40%がUである、4〜100個のヌクレオチドの結合ヌクレオチド配列を更に含み、結合ヌクレオチド配列が、パッキングコード配列により及びsiRNAコード配列によりフランクされている、項目34に記載の核酸構築物。
(項目37)
リボザイムが、短RNA及びパッキング配列によりフランクされている、項目34に記載の核酸構築物。
(項目38)
短RNAが、siRNA又はshRNAである、項目37に記載の核酸構築物。
(項目39)
項目34に記載の核酸構築物を含むベクター。
(項目40)
項目39に記載のベクターを含む宿主細胞。
(項目41)
宿主細胞がベクターにより安定して形質移入されている、項目40に記載の宿主細胞。
(項目42)
細菌細胞である、項目40に記載の宿主細胞。
(項目43)
Escherichia coli(エシェリキア・コリ)細胞である、項目40に記載の宿主細胞。
(項目44)
植物細胞である、項目40に記載の宿主細胞。
(項目45)
哺乳類細胞である、項目40に記載の宿主細胞。
(項目46)
真菌細胞である、項目40に記載の宿主細胞。(項目47)
酵母細胞である、項目40に記載の宿主細胞。
(項目48)
宿主細胞が、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるウイルスカプシドをコードする第2核酸配列を含む第2ベクターにより安定して更に形質移入されている、項目40に記載の宿主細胞。
(項目49)
第2核酸配列が、野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも40%の配列同一性を有するウイルスカプシドをコードするウイルスタンパク質をコードし、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目40に記載の宿主細胞。
(項目50)
核酸配列が、野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質(配列番号3)をコードする、項目40に記載の宿主細胞。
(項目51)
リボザイムがハンマーヘッドリボザイムである、項目34に記載の核酸構築物。
(項目52)
リボザイムが、短RNAの少なくとも6個の隣接ヌクレオチドに相補的な核酸の隣接セットを有するハンマーヘッドリボザイム変種である、項目34に記載の核酸構築物。
(項目53)
リボザイムが肝炎デルタVリボザイムである、項目34に記載の核酸構築物。
(項目54)
リボザイムが、野生型肝炎デルタVリボザイムの速度の最大で50%の速度で短RNAとの連結を切断することができる突然変異肝炎デルタVリボザイム又は配列番号10〜18から選択される核酸配列を有する突然変異肝炎デルタV(HDV)リボザイムである、項目34に記載の核酸構築物。
(項目55)
項目34に記載の核酸構築物を含有するように形質転換された、植物又は植物組織。
(項目56)
種又は子孫が核酸構築物を含む、項目55に記載の植物又は植物組織の種又は子孫。
(項目57)
a)少なくとも1つの異種カーゴ分子を封入するウイルスカプシドをそれぞれ含む複数のウイルス様粒子と、b)組成物に存在するカプシド100グラムあたり4グラム未満の量で存在する1つ以上の細胞溶解産物とを含み、細胞溶解産物が、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びこれらの任意の組み合わせから選択される、組成物。
(項目58)
カプシドが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目57に記載の組成物。
(項目59)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも40%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目57に記載の組成物。
(項目60)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質(配列番号3)を含む、項目57に記載の組成物。
(項目61)
異種カーゴ分子がオリゴヌクレオチドを含む、項目57に記載の組成物。
(項目62)
異種カーゴ分子が、siRNA、shRNA、sshRNA、lshRNA及びmiRNAから選択されるオリゴリボヌクレオチドを含む、項目57に記載の組成物。
(項目63)
それぞれのウイルス様粒子が、少なくとも1つのリボザイムを更に含み、リボザイムが、パッキング配列およびオリゴリボヌクレオチドによりフランクされて核酸構築物を形成する、項目62に記載の組成物。
(項目64)
それぞれのウイルス様粒子が複数の核酸構築物を含む、項目63に記載の組成物。
(項目65)
リボザイムが、ハンマーヘッドリボザイム及び肝炎デルタVリボザイムから選択される、項目63に記載の組成物。
(項目66)
リボザイムが、オリゴリボヌクレオチドの少なくとも6個の隣接ヌクレオチドに相補的なヌクレオチドの隣接セットを有するハンマーヘッドリボザイム変種である、項目63に記載の組成物。
(項目67)
リボザイムが、野生型肝炎デルタVリボザイムの速度の最大で約50%の速度でオリゴリボヌクレオチドとの連結を切断することができる突然変異肝炎デルタVリボザイム又は配列番号10〜18から選択される核酸配列を有する突然変異肝炎デルタV(HDV)リボザイムである、項目63に記載の組成物。
(項目68)
オリゴリボヌクレオチド及びパッキング配列が、長さが1〜100個のヌクレオチドのヌクレオチド配列により結合されており、そのような結合配列が、40%を超えるA又は40%超えるUを含む、項目63に記載の組成物。
(項目69)
異種カーゴ分子が、ペプチド又はポリペプチドを含む、項目57に記載の組成物。
(項目70)
異種カーゴ分子とウイルスカプシドを結合するオリゴヌクレオチドリンカーを更に含む、項目69に記載の組成物。
(項目71)
オリゴヌクレオチドリンカーが、リボザイム配列を含むオリゴリボヌクレオチドである、項目70に記載の組成物。
(項目72)
細胞溶解産物が0.5グラム未満の量で存在する、項目57に記載の組成物。
(項目73)
細胞溶解産物が0.2グラム未満の量で存在する、項目57に記載の組成物。
(項目74)
細胞溶解産物が0.1グラム未満の量で存在する、項目57に記載の組成物。
(項目75)
標的カーゴ分子を単離及び精製する方法であって、(a)少なくとも1つの標的カーゴ分子を封入するカプシドをそれぞれ含む複数のウイルス様粒子(VLP)を含む全細胞溶解物を得ることであり、カプシドが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があること、(b)VLPを、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼを使用する加水分解に、全細胞溶解物に存在するが、カプシドにより封入されていない個別のポリペプチド100個あたり、少なくとも60個、少なくとも70個、少なくとも80個又は少なくとも90個が切断されるが、そのような加水分解の前の全細胞溶解物に存在するカプシド100個あたり少なくとも60個、少なくとも70個、少なくとも80個又は少なくとも90個が、加水分解の後に無傷のまま残るのに十分な時間及び条件下で付すことを含む、方法。
(項目76)
カプシドが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも40%の配列同一性を有するウイルスカプシドタンパク質をそれぞれ含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目75に記載の方法。
(項目77)
カプシドが、それぞれ野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質(配列番号3)を含む、項目75に記載の方法。
(項目78)
標的カーゴ分子がオリゴヌクレオチドを含む、項目75に記載の方法。
(項目79)
標的カーゴ分子が、siRNA、shRNA、sshRNA、lshRNA及びmiRNAから選択されるオリゴリボヌクレオチドを含む、項目75に記載の方法。
(項目80)
それぞれのウイルス様粒子が、リボザイムを更に含み、リボザイムが、パッキング配列およびオリゴリボヌクレオチドによりフランクされて核酸構築物を形成する、項目75に記載の方法。
(項目81)
加水分解の後にカプシドの精製を更に含む、項目75に記載の方法。
(項目82)
精製が、液−液抽出工程、結晶化工程、分別沈殿工程及び限外濾過工程の少なくとも1つを含む、項目81に記載の方法。
(項目83)
標的カーゴ分子が、ペプチド又はポリペプチドを含む、項目75に記載の方法。
(項目84)
項目75に記載の方法により生成される組成物。
(項目85)
宿主細胞における標的細胞の細胞内産生の後で、全細胞溶解物における加水分解から標的分子を保護する方法であって、(a)カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるウイルスカプシドを選択すること、(b)ウイルスカプシドを形成するウイルスタンパク質をコードする核酸配列を含む第1ベクターと、パッキング配列及びsiRNA配列によりフランクされているリボザイムを含む核酸配列を含む第2ベクターにより、宿主細胞を安定的に形質移入すること、並びに(c)パッキング配列及びsiRNA配列によりフランクされているリボザイムを包むカプシドを発現及び組み立てるために、形質転換された細胞にとって十分な時間及び条件下で細胞を維持することを含む、方法。
(項目86)
少なくとも1つの異種カーゴ分子を封入するVLPを精製するプロセスであって、(a)複数のVLPを含む細胞溶解物を得ること、(b)細胞溶解物を、VLP以外の細胞溶解産物を加水分解するのに十分な時間及び条件下でプロテアーゼと接触させて、加水分解物を形成すること、並びに(c)加水分解物からVLPを単離することを含む、プロセス。
(項目87)
工程(c)が、(i)硫酸アンモニウムによる第1沈殿、続いて第1遠心分離を実施して、第1沈殿物及び第1上澄みを得ること、並びに(ii)硫酸アンモニウムによる第1上澄みに対する第2沈殿、続いて第2遠心分離を実施して、第2沈殿物を得ることを含み、第2沈殿物が少なくとも約90重量%のVLPを含む、項目86に記載のプロセス。
(項目88)
工程(c)が、(i)エタノールによる第1沈殿、続いて第1遠心分離を実施して、第1沈殿物及び第1上澄みを得ること、並びに(ii)硫酸アンモニウムによる第1上澄みに対する第2沈殿、続いて第2遠心分離を実施して、第2沈殿物を得ることを含み、第2沈殿物が少なくとも約90重量%のVLPを含む、項目86に記載のプロセス。
(項目89)
工程(c)が、加水分解物を超遠心分離して、少なくとも約90重量%のVLPを含む沈殿物を得ることを含む、項目86に記載のプロセス。
(項目90)
VLPが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドをそれぞれ含む、項目86に記載のプロセス。
(項目91)
VLPが、野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列と少なくとも40%の配列同一性を有するカプシドタンパク質を含む及びカテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドをそれぞれ含む、項目86に記載のプロセス。
(項目92)
VLPが、それぞれ野生型腸内細菌ファージMS2カプシドタンパク質(配列番号3)を含む、項目86に記載のプロセス。
(項目93)
工程(b)が、約37℃で少なくとも約30分間実施される、項目86に記載のプロセス。
(項目94)
工程(b)の前に、細胞溶解物をヌクレアーゼ、アミラーゼ及びリパーゼの少なくとも1つと約37℃で少なくとも約30分間接触させることを更に含む、項目86に記載のプロセス。
(項目95)
プロテアーゼが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼである、項目86に記載のプロセス。
(項目96)
プロテアーゼが、プロテイナーゼK、Streptomyces griseus(ストレプトマイセス・グリセウス)のプロテアーゼ、Bacillus lichenformis(バチルス・リケンフォルミス)のプロテアーゼ、ペプシン及びパパインから選択される、項目86に記載のプロセス。
(項目97)
異種カーゴ分子がオリゴヌクレオチドを含む、項目86に記載のプロセス。
(項目98)
異種カーゴ分子がオリゴリボヌクレオチドを含む、項目86に記載のプロセス。
(項目99)
オリゴリボヌクレオチドが、siRNA、shRNA、sshRNA、lshRNA及びmiRNAから選択される短RNAである、項目98に記載のプロセス。
(項目100)
VLPが、パッキング配列及びオリゴリボヌクレオチドによりフランクされて核酸構築物を形成するリボザイムをそれぞれ更に含む、項目86に記載のプロセス。
(項目101)
リボザイムが、ハンマーヘッドリボザイム及び肝炎デルタVリボザイムから選択される、項目100に記載のプロセス。
(項目102)
リボザイムが、オリゴリボヌクレオチドの少なくとも6個の隣接ヌクレオチドに相補的なヌクレオチドの隣接セットを有するハンマーヘッドリボザイム変種である、項目100に記載のプロセス。
(項目103)
リボザイムが、野生型肝炎デルタVリボザイムの速度の最大で約50%の速度でオリゴリボヌクレオチドとの連結を切断することができる突然変異肝炎デルタVリボザイムである、項目100に記載のプロセス。
(項目104)
リボザイムが、配列番号10〜18から選択される核酸配列を有する突然変異肝炎デルタV(HDV)リボザイムである、項目100に記載のプロセス。
(項目105)
オリゴリボヌクレオチド及びパッキング配列が、少なくとも1〜100個のヌクレオチドの、40%を超えるA又は40%超えるUを含むリンカー配列により結合されている、項目100に記載のプロセス。
(項目106)
異種カーゴ分子が、ペプチド又はポリペプチドを含む、項目86に記載のプロセス。
(項目107)
VLPが、異種カーゴ分子とウイルスカプシドを結合するオリゴヌクレオチドリンカーをそれぞれ更に含む、項目106に記載のプロセス。
(項目108)
オリゴヌクレオチドリンカーが、リボザイム配列を含むオリゴリボヌクレオチドである、項目107に記載のプロセス。
(項目109)
工程(a)の前に、細胞におけるVLPの発現に続いて細胞を遠心分離すること、細胞を再懸濁すること、細胞を溶解し、細胞溶解物を遠心分離して、上澄みを得ることによる細胞溶解物の調製を更に含み、上澄みが工程(a)に細胞溶解物として使用される、請求項86に記載のプロセス。
(項目110)
カプシドが、1位のA残基が欠失していることを除いて野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目111)
カプシドが、1位のA残基が欠失している及び2位のS残基が欠失していることを除いて野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目112)
カプシドが、1位のA残基が欠失している、2位のS残基が欠失している及び3位のN残基が欠失していることを除いて野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目113)
カプシドが、129位のY残基が欠失していることを除いて野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、請求項1に記載のVLP。
(項目114)
カプシドが、112〜117セグメントに単一のアミノ酸欠失を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目115)
カプシドが、112〜117セグメントに単一のアミノ酸欠失を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目116)
カプシドが、65〜83セグメントに1〜2つの残基挿入を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目117)
カプシドが、44〜55セグメントに1〜2つの残基挿入を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目118)
カプシドが、33〜43セグメントに単一の残基挿入を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目119)
カプシドが、24〜30セグメントに1〜2つの残基挿入を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目120)
カプシドが、10〜18セグメントに単一の残基挿入を有する野生型腸内細菌ファージMS2カプシド(配列番号3)のアミノ酸配列を有するカプシドタンパク質を含み、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
(項目121)
カプシドが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられる第2カプシドモノマー配列と連鎖しているカプシドタンパク質モノマー配列を含む、項目1に記載のVLP。
(項目122)
カプシドが、C末端が第2カプシドモノマー配列と連鎖している0〜6個の残基リンカーセグメントによりC末端が延長されているカプシドタンパク質モノマー配列を含み、全てが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられる、項目1に記載のVLP。
(項目123)
リンカー配列が、−(Gly)x−であり、ここでx=0〜6であるか又は−Gly−Gly−Ser−Gly−Gly−、−Gly−Gly−Ser及び−Gly−Ser−Gly−から選択されるGly−Serリンカーである、項目122に記載のVLP。
(項目124)
カプシドが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられる第3カプシドモノマー配列と連鎖しているカプシドタンパク質を含む、項目122に記載のVLP。
(項目125)
カプシドが、C末端が第3カプシドモノマー配列と連鎖している0〜6個の残基リンカーセグメントによりC末端が延長されているカプシドタンパクを含み、全てが、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられる、項目122に記載のVLP。
(項目126)
カプシドが、一方又は両方のリンカー配列が−(Gly)x−であり、ここでx=0〜6であるか又は−Gly−Gly−Ser−Gly−Gly−、−Gly−Gly−Ser及び−Gly−Ser−Gly−から選択されるGly−Serリンカーであり、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられるカプシドタンパク質を含む、項目125に記載のVLP。
(項目127)
カプシドが、一方又は両方のリンカー配列が−(Gly)x−、x=1であり、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられるカプシドタンパク質を含む、項目125に記載のVLP。
(項目128)
カプシドが、一方又は両方のリンカー配列が−(Gly)x−、x=2であり、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられるカプシドタンパク質を含む、項目125に記載のVLP。
(項目129)
カプシドが、一方又は両方のリンカー配列が−(Gly)x−、x=3であり、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があるカプシドの中に組み立てられるカプシドタンパク質を含む、項目134に記載のVLP。
(項目130)
1つ以上のコートタンパク質配列が、1〜3つの残基によりN末端切断されており、リンカー配列が、欠失された残基の数により延長され、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があり、リンカー配列が−(Gly)x−であり、ここでx=0〜6である、項目1に記載のVLP。
(項目131)
1つ以上のコートタンパク質配列が、1つの残基によりC末端切断されており、リンカー配列が、1つの残基により延長され、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があり、リンカー配列が−(Gly)x−であり、ここでx=0〜6である、項目1に記載のVLP。
(項目132)
連鎖二量体における第1コートタンパク質配列が、1つの残基によりC末端切断されており、リンカー配列が、1つの残基により延長されている、或いは連鎖三量体における第1及び/又は第2コートタンパク質配列が、1つの残基によりC末端切断され、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性があり、リンカー配列が−(Gly)x−であり、ここでx=0〜6である、項目1に記載のVLP。
(項目133)
N及びC末端切断を含有し、カテゴリーEC3.4のペプチド結合ヒドロラーゼにより触媒される加水分解に耐性がある、項目1に記載のVLP。
出願書類にはカラーで作成された少なくとも1枚の写真が含まれている。カラー写真を有するこの特許出願のコピーは、請求及び必要な料金の支払いに応じて特許庁より提供されるであろう。
A.定義
(配列番号1)全MS2ゲノム、野生型、太字で外皮タンパク質配列
ATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG
(配列番号3)MS2外皮タンパク質、アミノ酸配列:
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
(i)全ての一本鎖RNAスペーサーが4〜40ヌクレオチド(配列番号30)を有する場合、1つの一本鎖(非ハイブリダイズ)RNAスペーサーに隣接した少なくとも1つのパッキング配列及び1〜100の同一の又は異なるsiRNAs、
(ii)全ての一本鎖RNA配列が4〜40ヌクレオチド(配列番号28、HDVリボザイム)を有する場合、1つの(1)リボザイム及びsiRNAにつき1つの一本鎖(非ハイブリダイズ)RNA配列、
(iii)siRNAにつき2つの(2)リボザイム、
(iv)1つの(1)T7開始部位、1つの(1)リボザイム、1つの(1)パッキング部位及び1つの(1)転写終結部位、又は
(v)1つの(1)T7開始部位、1つの(1)パッキング部位、及び1つの(1)転写終結部位
(vi)siRNAにつき4つの(4)リボザイム(配列番号29)
CTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTG(配列番号4)
又は
TAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTG (配列番号5)
以下の非限定的な実施例は、本開示の様々な態様を例示するために含まれる。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能するために本出願人によって発見された技術を表し、したがって、その実施のための好ましい方法を構成するために考慮され得ることは当業者に理解されるであろう。しかしながら、本開示を考慮すると、当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、又は同様の結果のように得ながら、記載された具体例で多くの変化が起こることを理解すべきである。したがって、実施例は例示のためだけのものであり、決して本発明を限定するものと解釈されるべきではない。本発明を有効にし、記述するために必要な程度まで、引用された全ての文献は、本明細書に参考として組み込まれる。
MS2バクテリオファージ(ATTC No.15597−B1,from American Type Culture Collection,Rockville,MD)及び大腸菌(ATCC No.15669)は、ATCCから得られ、Strauss and Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54 J.Mol.Biol 7:43−54によって記載された方法を使用して増殖させた。600nmの光学濃度(OD)及びpHは、反応の間ずっと追跡した。ODiは、宿主との接種後すぐのODを表している。感染は2.3時間で行われた。Ln(OD/ODi)は、左軸(全菱形)で表し、pHは右軸(白四角)で表した。この実験は宿主の接種後5.3時間で終了した。得られた溶解物を、2,000gで遠心分離し、残りの細菌及び細菌の破片を除去するために0.2umの膜を通して濾過した。
MS2バクテリアファージの精製は次の通り行われた。精製中に試料を採取し、SDS PAGE分析を試料上で実行した。得られた結果を図3に示す。実施例4の終わりに得られた4mLの溶解物は、硫酸アンモニウムを用いた沈殿及びStrauss and Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54によって記載されるようなトリクロロフルオロメタン(フレロン11)を用いた抽出によって部分的に精製された。部分的に精製されたファージを含有する水溶液を、脱イオン水で2mLに希釈し、300kDaの膜を通して濾過し、濾液を100kDaの膜を通して濾過し、そこから150μLの濃縮水が得られた。次いで、濃縮水を脱イオン(DI)水で2mLに希釈し、同じ100kDaの膜を通して濾過した。濃縮水(150μL)の希釈及び限外濾過をもう一回繰り返した。次いで、濃縮水の試料を採取し、分析した。レーン4の試料、図3。混合物を37℃でインキュベートし、1時間後にそれを氷水浴に入れた。次いで、試料を採取し、分析した。レーン5の試料、図3。次いで、生成物を脱イオン(DI)水で2mLに希釈し、100kDaの膜を通して濾過した。濃縮水(150μL)をDI水で2mLに希釈し、同じ膜を通して再び濾過した。濃縮水の希釈及び限外濾過をもう一回繰り返した。次いで、濃縮水の試料を採取し、分析した。レーン6の試料、図3。100kDa以下の分子量でタンパク質を透過する膜によって維持された14kDaのMS2’s外皮タンパク質は、明確に視認でき、無傷のMS2カプシドの存在を示している。99%より高い純度のファージを含有する生成物を得た。
MS2バクテリアファージの精製は次の通り行われた。精製中に試料を採取し、SDS PAGE分析を試料上で実行した。得られた結果を図4に示す。
MS2バクテリアファージの精製は次の通り行われた。精製中に試料を採取し、SDS PAGE分析を試料上で実行した。得られた結果を図5に示す。実施例50の終わりに得られた4mLの溶解物は、硫酸アンモニウムを用いた沈殿及びStrauss and Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54によって記載されるようなトリクロロフルオロメタン(フレロン11)を用いた抽出によって部分的に精製された。フレロン11での抽出後の水溶液の試料は、採取され、分析された(レーン1のサンプル、図5)。20mMのCaCl2の水溶液1.24mLに溶解された0.9mgのプロテイナーゼKを部分的に精製されたファージ溶液(1.2mL)に添加した。混合物を37℃でインキュベートし、1時間後にプロテイナーゼKを不活性化するためにエタノールに0.2Mのフッ化フェニルメチルスルホニル(PMSF)溶液60μLを添加した。次いで、混合物を氷水浴に入れた。次いで、試料を採取し、分析した。レーン2の試料、図5。0.1%のリン酸水溶液の0.68mLを、液体のpHを4までもたらすために氷水浴に激しい撹拌でゆっくり添加した。液体は30分間0℃に保ち、4℃で16,000gで30分間遠心分離した。上清を室温に到達させ、1%のNaOH130μLを液体のpHを8までもたらすために添加した。上清を氷水浴に15分間入れ、1%の酢酸1.3mLを液体のpHを4までもたらすために0℃で激しい撹拌でゆっくり添加した。0℃で1.5mLのエタノールを、液体中のエタノール濃度を34%までもたらすために激しい撹拌でゆっくり添加した。液体は30分間0℃に保ち、4℃で16,000gで30分間遠心分離した。ペレットを200μLの脱イオン水に再懸濁し、20μLの試料を採取し、分析した。レーン3、図5。残り(180μL)を脱イオン(DI)水で2mLに希釈し、100kDaの膜を通して濾過した。濃縮水(150μL)をDI水で2mLに希釈し、同じ膜を通して再び濾過した。濃縮水の希釈及び限外濾過をもう一回繰り返した。次いで、濃縮水の資料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン4の試料、図5。100kDa以下の分子量でタンパク質を透過する膜によって維持された14kDaのMS2’s外皮タンパク質は、明確に視認でき、無傷のMS2カプシドの存在と一致する。同じ濃縮水でUVスペクトルは、図6に示され、それはG.F.Rohrmann and R.G.Krueger,(1970)J.Viro.,6(3):26により発行された結果と一致する。Superdex 200(GE Healthcare,Piscataway,NJ)サイズ排除クロマトグラフィーを、pH7.4及び150mMのNaClでトリス緩衝食塩水を使用して同じ濃縮水上で実行した。それはカラムの空隙容量でのみ280nmの吸光度を示した。600kD〜2kDのタンパク質に対する溶出量に吸光度はなかった。この試験は無傷のファージ粒子と一致する。RNAをQIAamp Viral RNA Mini Kit(Qiagen,Valencia,CA)及びDNA−free kit(Life Technologies,Grand Island,NY)を使用して同じ濃縮水の別の試料から単離し、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Life Technologies)を使用して逆転写した。次いで、MS2ゲノムの3つの異なる部分の有無をPCR実験で識別した。次の一対のプライマーを使用し、各プライマーはMS2ゲノムの最初及び最後のベースの位置を指定し、それぞれforward(F)及びreverse(R):F1001_1021−R2180_2201,F1201_1223−R1979_2001,F1401_1426−R1680_1705。Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity (Life Technologies)を増幅に用いた。Ethidium Bromideで染色した1.5%のアガロースゲルにクロマトグラフィーで分析された、図9に示すようなPCR生成物(レーン1のプライマーF1201_1223−R1979_2001に対して1.2kbp、レーン2のプライマーF1201_1223−R1979_2001に対して800bp、及びレーン3のプライマーF1401_1426−R1680_1705に対して304bp)は、無傷のMS2バクテリアファージゲノムと一致した。また、感染性試験を以下のように同じ濃縮水上で実行した。濃縮水5μLを用いて、それがOD(600nm)=0.22に達した時点で、実施例Aに記載されたような細菌培養物の1mLを感染させた。図7に示すように、感染後1時間はOD(600nm)は0.62であり及び更に2時間後は0.21に下がったが、同じ時間中対照試料は、感染後1時間はOD(600nm)の0.82及び更に2時間後は1.2に達した。この試験は濃縮水の高い感染性のファージを示し、したがって精製工程は単離するために使用し、その安全性に妥協しなかったことを証明した。結論として、99%より高い純度のMS2バクテリアファージを含有する生成物を得た。
異なる外因性プロテイナーゼを使用したMS2バクテリアファージの精製は、実施例Eに記載されるようにプロテイナーゼK以外のプロテイナーゼを使用したことを除いて実質的に試みられた。Bacillus lichenformis(P5380,Sigma Aldrich)からのプロテアーゼによって進められたタンパク質分解後に、MS2バクテリアファージを正常に精製した。しかしながら、pH1.6でporcine gastric mucosa(P6887,Sigma Aldrich)からのペプシンを用いたタンパク質分解反応は、MS2バクテリアファージを有意に分解するために見出された。一方、pH6でpapaya latex(P3125,Sigma Aldrich)からのパパインを用いたタンパク質分解反応は、MS2バクテリアファージを広範囲にわたって分解しなかった。実施例H:特定の19−mer RNAヘアピンに付属のその外皮タンパク質をコード化するRNAをカプシドで包むMS2カプシドの産出MS2カプシドの産出は次の通り行われた。得られた結果を図8に示す。次のDNA配列、コード化MS2外皮タンパク質及びその特別のRNA19−merパック部位は、pDEST14_A252 Plamsmid(Life Technologies)にクローン化された。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAGACGCCGGCCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTACCCAGCT(配列番号6)
MS2カプシドの精製は次の通り行われた。精製中に試料を採取し、SDS PAGE分析を試料上で実行した。得られた結果を図8に示す。培養物の115mLと同等である実施例Hからのベレットの画分は、10mMのMgCl2を含有する20mMのTris−HCl、pH7.5に再懸濁し、細胞を溶解させるため超音波で分解した。細胞残屑は、16,000gで遠心分離によって除去される。得られた細胞溶解物は、硫酸アンモニウムを用いた沈殿及びStrauss and Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54によって記載されるようなトリクロロフルオロメタン(フレロン11)を用いた抽出によって部分的に精製された。20mMのCaCl2の水溶液1.05mLに溶解された0.3mgのプロテイナーゼKを部分的に精製されたMS2カプシド溶液(1.05mL)に添加した。混合物を37℃でインキュベートし、2.5時間後にそれを氷水浴に入れた。次いで、試料を採取し、分析した。レーン3の試料、図8。15分後、0.1%のリン酸水溶液の0.14mLを、4.1まで液体のpHをもたらすために氷水浴に激しい撹拌でゆっくり添加した。液体は30分間0℃に保ち、4℃で16,000gで20分間遠心分離した。1%のNaOHの100μLを0℃で保つ上清に7.9まで液体のpHをもたらすために添加した。次いで、0℃で0.5mLのエタノールを、液体中のエタノール濃度を20%までもたらすために激しい撹拌でゆっくり添加した。液体は30分間0℃に保ち、4℃で16,000gで20分間遠心分離した。7まで溶液のpHを調節するために1%の酢酸を添加した後、上清をVivaspin2(Sartorius)300kDa膜を通して濾過し、そこから150μLの濃縮水を得た。次いで、濃縮水をリン酸緩衝生理食塩水で2mLに希釈し、同じ100kDaの膜を通して濾過した。濃縮水(150μL)の希釈及び限外濾過を4回繰り返した。次いで、濃縮水の資料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン4の試料、図8。100kDa以下の分子量でタンパク質を透過する膜によって維持された14kDaのMS2’s外皮タンパク質は、明確に視認でき、無傷のMS2カプシドの存在と一致する。RNAをQIAamp Viral RNA Mini Kit(Qiagen,Valencia,CA)及びDNA−free kit(Life Technologies,Grand Island,NY)を使用して同じ濃縮水の別の試料から単離し、High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Life Technologies)を使用して逆転写した。次いで、MS2カプシドの部分の有無をPCR実験で識別した。F1401_1426−R1680_1705。次の一対のプライマーを使用し、各プライマーはMS2ゲノムの最初及び最後のベースの位置を指定し、それぞれforward(F)及びreverse(R):F1401_1426−R1680_1705。Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity (Life Technologies)を増幅に用いた。図10に示すような(レーン1の304bp、Life Technologiesからの1kb plus ladderに相当する最左のレーン)、Ethidium Bromideで染色した2%のアガロースゲルにクロマトグラフィーで分析された、PCR生成物は、無傷のMS2被膜遺伝子と一致した。結論として、99%より高い純度のMS2カプシドを含有する生成物を得た。
MS2 VLPの精製は次の通り行われた。精製中に試料を採取し、SDS PAGE分析を試料上で実行した。得られた結果を図11に示す。実施例Hと同一の実験から得たベレットの6分の1を、10mMのMgCl2を含有する20mMのTris−HCl、pH7.5に再懸濁し、細胞を溶解させるため超音波で分解した。細胞残屑は、16,000gで遠心分離によって除去される。得られた細胞溶解物は、硫酸アンモニウムを用いた沈殿及びStrauss and Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54によって記載されるようなトリクロロフルオロメタン(フレロン11)を用いた抽出によって部分的に精製された。次いで、試料を採取し、分析した。レーン1の試料、図11。MS2ファージの外皮タンパク質と一致する約14kDaの強いバンドを見出した。他のバンド−不純物−高分子量の大部分は、試料重量の約27%を示す。20mMのCaCl2水溶液の1.36mLを部分的に精製されたMS2 VLP溶液(1.35mL)に添加し、氷水浴に入れた。15分後、10%の酢酸水溶液の50mLを、4.1まで液体のpHをもたらすために添加した。次いで、同じ温度及び激しい撹拌で、1.44mLのエタノールをゆっくり添加した。液体は30分間0℃に保ち、4℃で16,000gで20分間遠心分離した。ペレットを20mMのTris−HCl及びpH7.5まで調製した10mMのMgCl2から成る水性緩衝液の2mLに懸濁させた。次いで、試料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン2の試料、図11。この試料の不純物は試料重量の約24%を示した。希釈した試料はVivaspin2(Sartorius)100kDa膜を通して濾過し、そこから200μLの濃縮水を得た。次いで、濃縮水を同じバッファで2mLに希釈し、同じ100kDaの膜を通して濾過した。濃縮水(200μL)の希釈及び限外濾過を4回繰り返した。次いで、濃縮水の資料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン3の試料、図11。この試料の不純物は試料重量の約9,7%を示した。結論として、99%より高い純度のMS2 VLPを含有する生成物を得た。
MS2 VLPの精製は次の通り行われた。精製中に試料を採取し、SDS PAGE分析を試料上で実行した。得られた結果を図12に示す。実施例Hと同一の実験から得たベレットの6分の1を、10mMのMgCl2を含有する20mMのTris−HCl、pH7.5に再懸濁し、細胞を溶解させるため超音波で分解した。細胞残屑は、16,000gで遠心分離によって除去される。得られた細胞溶解物は、硫酸アンモニウムを用いた沈殿及びStrauss and Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54によって記載されるようなトリクロロフルオロメタン(フレロン11)を用いた抽出によって部分的に精製された。次いで、試料を採取し、分析した。レーン1の試料、図12。MS2ファージの外皮タンパク質と一致する約14kDaの強いバンドを見出した。他のバンド−不純物−高分子量の大部分は、試料重量の約26%を示す。20mMのCaCl2の水溶液1.36mLに溶解された0.6mgのプロテイナーゼKを部分的に精製されたMS2 VLP溶液(1.35mL)に添加した。混合物を37℃でインキュベートし、2.5時間後に氷水浴に入れた。次いで、試料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン2の試料、図12。この試料の不純物は試料重量の約14%を示した。15分後、10%の酢酸水溶液の約50mLを、4.1まで液体のpHをもたらすため氷水浴に添加した。次いで、同じ温度及び激しい撹拌で、1.54mLのエタノールをゆっくり添加した。液体は30分間0℃に保ち、4℃で16,000gで20分間遠心分離した。ペレットを20mMのTris−HCl及びpH7.5まで調製した10mMのMgCl2から成る水性緩衝液の2mLに懸濁させた。次いで、試料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン3の試料、図12。この試料の不純物は試料重量の約10%を示した。希釈した試料はVivaspin2(Sartorius)100kDa膜を通して濾過し、そこから200μLの濃縮水を得た。次いで、濃縮水を同じバッファで2mLに希釈し、同じ100kDaの膜を通して濾過した。濃縮水(200μL)の希釈及び限外濾過を4回繰り返した。次いで、濃縮水の資料を採取し、SDS PAGEによって分析した。レーン4の試料、図12。この試料の不純物は試料重量の約5.1%を示した。結論として、約95%の純度のMS2 VLPを含有する生成物を得た。
MS2 VLPの精製を以下のように実施した。試料を、精製の際に取り出し、SDS PAGE分析を試料に行った。得られた結果を図13に示す。実施例Hと同様の実験により得られたペレットの6分の1を、10mMのMgCl2を含有する20mMのTris−HCl、pH7.5に再懸濁し、超音波処理して細胞を溶解した。細胞片を16,000gでの遠心分離により除去した。得られた細胞溶解物を、Strauss & Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54に記載されているように、硫酸アンモニウムの使用による沈殿及びトリクロロフルオロメタン(Freon 11)の使用による抽出によって部分的に精製した。部分的に精製されたMS2 VLP溶液(1.35mL)に、1.36mLの20mM CaCl2水溶液を加えた。混合物を、(構成的ヒドロラーゼが作用することを可能にするため)37℃で2.5時間インキュベートし、その後、氷水浴の中に入れた。試料を取り出し、SDS PAGEにより分析した:図13のレーン1が試料である。この試料中の不純物は、試料重量の約12%を表した。15分後、約120μLの1%水酸化ナトリウム水溶液を氷/水浴に加えて、液体のpHを7.86にした。次に、同じ温度で激しく撹拌しながら、0.81mLのエタノールをゆっくりと加えた。液体を0℃で30分間保持し、16,000gにより4℃で20分間遠心分離した。約100μLの10%酢酸水溶液を、氷/水浴中で激しく撹拌しながら上澄みにゆっくりと加え、液体のpHを4.01にした。次に、同じ温度で激しく撹拌しながら、1.3mLのエタノールをゆっくりと加えた。液体を0℃で30分間保持し、16,000gにより4℃で20分間遠心分離した。ペレットを、20mMのTris−HCl及び10mMのMgCl2を含有し、pH7.5に調整された2mLの緩衝水溶液に懸濁した。希釈された試料をVivaspin 2(Sartorius)100kDa膜で濾過し、200μLの濃縮液(retentate)を得た。次に濃縮水を同じ緩衝液で2mLに希釈し、同じ100kDa膜で濾過した。濃縮液(200μL)の希釈及び限外濾過を更に4回繰り返した。濃縮水の試料を取り出し、SDS PAGEにより分析した:図13のレーン3が試料である。この試料中の不純物は、試料重量の約4.7%を表した。結論として、得られた生成物は、MS2 VLPを約95%より高い純度で含有した。
MS2 VLPの精製を以下のように実施した。試料を、精製の際に取り出し、SDS PAGE分析を試料に行った。得られた結果を図13に示す。実施例Hと同様の実験により得られたペレットの6分の1を、10mMのMgCl2を含有する20mMのTris−HCl、pH7.5に再懸濁し、超音波処理して細胞を溶解した。細胞片を16,000gでの遠心分離により除去した。得られた細胞溶解物を、Strauss & Sinsheimer(1963)J.Mol.Biol 7:43−54に記載されているように、硫酸アンモニウムの使用による沈殿及びトリクロロフルオロメタン(Freon 11)の使用による抽出によって部分的に精製した。部分的に精製されたMS2 VLP溶液(1.35mL)に、1.36mLの20mM CaCl2水溶液に溶解した0.3mgのプロテイナーゼKを加えた。混合物を、37℃で2.5時間インキュベートし、その後、氷水浴の中に入れた。試料を取り出し、SDS PAGEにより分析した:図13のレーン2が試料である。この試料中の不純物は、試料重量の約8.1%を表した。15分後、約120μLの1%水酸化ナトリウム水溶液を氷/水浴に加えて、液体のpHを7.86にした。次に、同じ温度で激しく撹拌しながら、0.81mLのエタノールをゆっくりと加えた。液体を0℃で30分間保持し、16,000gにより4℃で20分間遠心分離した。約100μLの10%酢酸水溶液を、氷/水浴中の上澄みに加え、液体のpHを4.01にした。次に、同じ温度で激しく撹拌しながら、1.3mLのエタノールをゆっくりと加えた。液体を0℃で30分間保持し、16,000gにより4℃で20分間遠心分離した。ペレットを、20mMのTris−HCl及び10mMのMgCl2を含有し、pH7.5に調整された2mLの緩衝水溶液に懸濁した。希釈された試料をVivaspin 2(Sartorius)100kDa膜で濾過し、200μLの濃縮液を得た。次に濃縮水を同じ緩衝液で2mLに希釈し、同じ100kDa膜で濾過した。濃縮液(200μL)の希釈及び限外濾過を更に4回繰り返した。濃縮水の試料を取り出し、SDS PAGEにより分析した:図13のレーン4が試料である。この試料中の不純物は、試料重量の約0.9%を表した。結論として、得られた生成物は、MS2 VLPを約99%より高い純度で含有した。
MS2 VLPの精製を以下のように実施した。試料を、精製の際に取り出し、SDS PAGE分析を試料に行った。得られた結果を図14に示す。実施例Hと同様の実験により得られたペレットの6分の1を、10mMのMgCl2を含有する20mMのTris−HCl、pH7.5に再懸濁し、超音波処理して細胞を溶解した。細胞片を16,000gでの遠心分離により除去した。上澄みの試料を取り出し、SDS PAGEにより分析した:図14のレーン1が試料である。この試料中の不純物は、試料重量の約70%を表した。実施例Hと同様の実験から得られたペレットの他の4つの同様の画分を、同じ方法で処理した。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG 配列A(配列番号7)
配列T7−Rz6 GGATCCTAATACGACTCACTATAGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCTCAAGAGGAACTTCAGGGTCAGCTTGCCAAGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCACGCTTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGCGACCATGG(配列番号8)
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列の配列A(配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンする。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG 配列A(配列番号7)
配列T7−Rz12 GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGAGATAAATAAATAAATTTGAATGAACTTCAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCCAGTGGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATTCAAGAGATGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCACGCTTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGCGAATTTATTTATTTAATTATTATTATTATTATTGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACACCTTCGGGTGGCGAATGGGACCAAAAAAAAATAATAATAATAATAATCCATGG(配列番号9)
それぞれ異なるカーゴを包むMS2カプシドを産生する幾つかの実験を、実施例Oに記載されているように実施する。しかし、配列B(配列番号8)に含まれるHDVリボザイム配列の代わりに、遅い反応速度定数を有するsiRNAの3’末端を切断する突然変異体を、それぞれの実験において使用する。遅発性HDVリボザイムを含有する以下の配列を、それぞれの実験において配列Bの代わりに使用する。
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCGGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号12)
配列G39U:
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGTGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号13)
配列A78G:
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAGTGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号14)
配列C21U:
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTTCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号15)
配列G25A:
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCACTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号16)
配列A78U:
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGATTGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号17)
配列G74C:
TAATACGACTCACTATAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGCCGAATGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号18)
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列の配列A(配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンする。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG
配列T7−Rz15:
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGAGACGTTCACGTTGAATGAACTTCAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCCAGTGGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATTCAAGAGATGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACAAGCTGACCCTGAAGTTCATCCGTGAACGACGCTTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGCGAATATATATATATAGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACACCTTCGGGTGGCGAATGGGACCAAAAAAATATATATATATACCATGG(配列番号19)
それぞれ異なるカーゴを包むMS2カプシドを産生する幾つかの実験を、実施例Oに記載されているように実施する。しかし、配列B(配列番号8)に含まれるHDVリボザイム配列の代わりに、siRNAの3’末端をハイブリダイズし、切断するように設計された長ハンマーヘッドリボザイム配を、それぞれの実験において使用する。長ハンマーヘッドリボザイムを含有する以下の配列を、それぞれの実験において配列B(配列番号8)の代わりに使用する。
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列(配列A;配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンする。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG (配列番号7)
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGATCTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGGGATCATATCTTGATGAACTTCAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAATGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGTTAATTAA(配列番号26)
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列(配列A;配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンする。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG(配列番号7)
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGAGACTTGATGAACTTCAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCCAGTGGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAATGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACAAGCTGACCCTGAAGTTCATTATATCTTGGCAGATGAACTTCAGGGTCAGCTGATGAGACTCTTCGGAGTCGAAACACCCAGTGGTGTCCTGACCCTGAAGTTCATCTGCCAAGAGCAGATGAACTTCAGGGTCAGTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACTGACCCTGAAGTTCATCTGCTATATCTTGTGGTGCAGATGAACTTCAGGGCTGATGAGGCTCTTCGGAGCCGAAACACCCAGTGGTGTCCCCTGAAGTTCATCTGCACCACAAGATGGTGCAGATGAACTTCAGGGTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACCCTGAAGTTCATCTGCACCATACGCCGGCCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGTTAATTAA(配列番号27)
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列(配列A;配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンする。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG (配列番号7)
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGAGAATATATATACAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAATGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCAATTAATTACTGACCCTGAAGTTCATCTGCCAAGAGCAGATGAACTTCAGGGTCAGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCAATAATAATCCCTGAAGTTCATCTGCACCACAAGATGGTGCAGATGAACTTCAGGGTCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGTTAATTAA(配列番号928)
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列(配列A;配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンする。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG(配列番号7)
配列T7−Rz8
GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGAGAATGAACTTCAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCATTAGCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGATGAGACTCCGAATTCGGAGTCGAAACACGGTAACCGTGTCATGAACTTCAGGGTCAGCTTGGCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTCGAAGCCATGG(配列番号29)
MS2カプシドの産生を以下のように実施する。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列(配列A;配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンした。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG (配列番号7)
実施例O〜Xにより得られたMS2カプシドを、実施例Nに概説された手順の使用により精製する。
実施例Nに記載されているように精製されたMS2カプシドに包まれているRNAを、製造会社(Life Technologies,Grand Island,NY)から供給されたプロトコールに従って、TRIzol(登録商標)試薬の使用によりそれぞれの実験において抽出した。得られたRNAを、ホルムアミドにおいて95℃で5分間加熱して変性させ、8%のポリアクリルアミド、8モルの尿素、1.08%のTris塩基、0.55%のホウ酸及び0.093%のEDTAから構成される17.6cm×38cm×0.04cm(幅、長さ、高さ)のゲルにおける電気泳動により分析した。処理緩衝液は、ゲルと同じ濃度のTris塩基、ホウ酸及びEDTAを有した。電力は約40Wで送った。ゲルを、25%のホルムアミド、19%のイソプロパノール及び15mMのTrisをpH8で含有する水性混合物中のStains−All染料(Sigma−Aldrich,St.Louis,MO)の0.025%溶液の使用により染色した。得られた結果を図15に示す。図15のRNA電気泳動のレーン番号は、図14のタンパク質電気泳動と同じレーン番号を参照する。単一RNAバンドを各レーンにおいて観察することができ、それぞれの場合に回収された高純度RNAと一致しうる。
作成物T7−Rz2をインビトロ転写に使用した。この作成物をpACYC184プラスミド(New England Biolabs)にクローンした。One Shot BL21(DE3) Chemically Competent E. coli(Life Technologies)の細胞を、このプラスミドの使用により形質転換した。プラスミドを含有するBL21(DE3)を、アンピシリンを含有するLB培地において37℃で増殖させ、OD(600nm)を0.8に等しくした。プラスミドを、製造会社の使用説明書に従ってQIAprep(登録商標)Spin Miniprep Kit(Qiagen)の使用により単離した。NcoI(New England Biolabs)を使用し、単離したプラスミドをこの作成物に導入した制限部位で切断した。消化の後、テンプレートを、1.5%アガロースゲルにおける電気泳動により精製し、製造会社の使用説明書に従ってPureLink(商標)Quick Gel Extraction Kit(Life Technologies)の使用により単離した。逆転写を、製造会社の使用説明書に従ってMAXIscript(登録商標)T7 Kitの使用により行った。RNA産物を、Novex(登録商標)変性15%ポリアクリルアミドTBE−尿素ゲル(Life Technologies)を70℃で作動して電気泳動した。RNAバンドを、臭化エチジウム(Sigma−Aldrich)の使用により可視化した。ゲル画像化を、Image Lab 4.0.1ソフトウエア(Bio−Rad)の使用により行った。
TAATACGACTCACTATAGGCTTGTGATGCTTCAGCCAAATCAAGAGTTTGGCTGAAGCATCACAAGCGGCCGGCATGGTCCCAGCCTCCTCGCTGGCGCCGGCTGGGCAACATTCGTGGCGAATGGGACCATATATATATACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号31)
作成物T7−Rz1及びT7−Rz4をインビトロ転写に使用した。T7−Rz1は、共通リボザイムを含み、すなわち、6対未満のハイブリダイズヌクレオチドに切断されるRNAとハイブリダイズする幹を有するものを含む。T7−Rz4は、切断されるsiRNAとハイブリダイズする長い幹を有する、すなわち、6対を超えるハイブリダイズヌクレオチドを有する幹を有するフランキングリボザイムを含む。
TAATACGACTCACTATAGGCTCGAGCAAGCCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCGTGTCGCTTGTGATGCTTCAGCCAAATCAAGAGTTTGGCTGAAGCATCACAAGCTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAAGCTTGCCATGG(配列番号32)
TAATACGACTCACTATAGGGAGAACGCCGGCCATTCAAATAGTAAATAATAGAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACAAGCTGACCCTGAAGTTCACTACGCCGGCCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号33)
MS2カプシドの産生を以下のように実施した。MS2のコートタンパク質をコードする以下のDNA配列(配列A;配列番号7)を、pDEST14(Life Technologies)プラスミドにクローンした。
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAGAAGGAGATATACATATGGCTTCTAACTTTACTCAGTTCGTTCTCGTCGACAATGGCGGAACTGGCGACGTGACTGTCGCCCCAAGCAACTTCGCTAACGGGGTCGCTGAATGGATCAGCTCTAACTCGCGTTCACAGGCTTACAAAGTAACCTGTAGCGTTCGTCAGAGCTCTGCGCAGAATCGCAAATACACCATCAAAGTCGAGGTGCCTAAAGTGGCAACCCAGACTGTTGGTGGTGTAGAGCTTCCTGTAGCCGCATGGCGTTCGTACTTAAATATGGAACTAACCATTCCAATTTTCGCTACGAATTCCGACTGCGAGCTTATTGTTAAGGCAATGCAAGGTCTCCTAAAAGATGGAAACCCGATTCCCTCAGCAATCGCAGCAAACTCCGGCATCTACTAATAG(配列番号7)
TAATACGACTCACTATAGGGAGAACGCCGGCCATTCAAATAGTAAATAATAGAGGGTCAGCTTGCTGATGAGGCGCTTCGGCGCCGAAACACCGTGTCCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCAAGAGTGAACTTCAGGGTCAGCTTGTCACCGGATGTGCTCTCCGGTCTGATGAGTCCGTGAGGACGAAACAAGCTGACCCTGAAGTTCACTACGCCGGCCATTCAAACATGAGGATTACCCATGTCCATGG(配列番号33)
実施例CCにおいて産生されたウイルス様粒子の精製を、実施例Nに記載されたとおりに実施した。
実施例DDに記載されているように精製されたウイルス様粒子に包まれているRNAを、製造会社(Life Technologies,Grand Island,NY)から供給されたプロトコールに従って、TRIzol(登録商標)試薬の使用により抽出した。得られたRNAを、ホルムアミドにおいて95℃で5分間加熱して変性させ、Novex(登録商標)変性15%ポリアクリルアミドTBE−尿素ゲル(Life Technologies)を70℃で作動して電気泳動することにより分析した。RNAバンドを、水溶液1mLあたり0.5μgの臭化エチジウム(Sigma−Aldrich,St.Louis,MO)の使用により可視化した。得られた結果を図18のレーン3に示す。レーン1は、分子基準のセットを示す。レーン2は、49個のヌクレオチド長さの化学的に合成されたshRNAを示す。
250mLの培養物から得られ、実施例DDに記載されたように精製された、MS2カプシドを含むウイルス様粒子を、400μLの20mM CaCl2水溶液にpH=7.5で懸濁した。
MS2ウイルスカプシドタンパク質(配列番号3)は、単一の折り畳みドメインを有し、レビウイルス科及びアロレビウイルス科カプシドタンパク質を含む、スーパーファミリーd.85の折り畳みファミリーd.85.1(RNAバクテリオファージカプシドタンパク質に属する。このファミリーのそれぞれのカプシドモノマーは、6本鎖ベータシート、続く2つのへリックスから構成される(時々、ねじれを有する長へリックスとして記載される)。180個のモノマーが非共有的に組み立てられて、カプシド内面を向いている連続ベータ−シート層及びカプシド外面にアルファ−へリックスを有する二十面体(ほぼ球状)のウイルスカプシドを形成する。X線結晶構造が、腸内細菌ファージMS2、GA(UniProt配列アイデンティファイアーP07234)及びFR(UniProt配列アイデンティファイアーP03614)ウイルスカプシド、並びに1つのMS2の1つのC末端が別の全てのd.81.1ファミリーレビウイルス科コートタンパク質のN末端と縮合しているMS2二量体から形成されるMS2のカプシドのために解明され、パブリックドメインに配置された。これらの構造のProtein Data Bankアンデンティファイアーは、それぞれ1AQ3(配列番号34)、1GAV(配列番号35)、1FRS(配列番号36)及び2VTU(配列番号37)であり、これらのアラインメントを図20に示す。この本明細書に記載されている全てのアラインメントにおいて、残基の番号付けは、連続した残基番号付けであり、例えば配列番号3は、大部分のPDB構造に使用されているように、細胞により除去されるリードMet(M)残基の0から開始している。
配列番号34 1AQ3 腸内細菌ファージMS2コートタンパク質 T59S
ASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYSIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号35 1GAV 腸内細菌ファージGAコートタンパク質 A59T G79V
ATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPGSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIAEAISSQSGFYA
配列番号36 1FRS 腸内細菌ファージFRコートタンパク質
>sp|P03614|COAT_BPFR コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ fr PE=1 SV=4
ASNFEEFVLVDNGGTGDVKVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSANNRKYTVKVEVPKVATQVQGGVELPVAAWRSYMNMELTIPVFATNDDCALIVKALQGTFKTGNPIATAIAANSGIY
配列番号37 2VTU 腸内細菌ファージMS2コートタンパク質共有二量体
sp|P03612|COAT_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 PE=1 SV=2
ASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIYANFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号38(配列番号38) G4WZU0 G4WZU0_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 329852
>sp|P03612|COAT_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 PE=1 SV=2
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNLELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号39
D0U1D6 D0U1D6_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022
>tr|D0U1D6|D0U1D6_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージMS2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNLELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号40
C0M2U4 C0M2U4_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M2U4|C0M2U4_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVELPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号41
C0M2S8 C0M2S8_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M2S8|C0M2S8_BPMS2 コートタンパク質OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNVELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号42
C0M212 C0M212_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2t
r|C0M212|C0M212_BPMS2 コートタンパク質OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNPDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号43
C0M1M2 C0M1M2_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M1M2|C0M1M2_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVAVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号44
C0M2L4 C0M2L4_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022遺伝子ms2g2
>tr|C0M2L4|C0M2L4_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVXQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号45
C0M220 C0M220_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M220|C0M220_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTXFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号46
Q2V0S8 Q2V0S8_BPBO1116 腸内細菌ファージbo1 12014
>tr|Q2V0S8|Q2V0S8_BPBO1 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ BO1 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGPLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号47
C0M216 C0M216_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M216|C0M216_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNDGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号48
C0M1Y0 C0M1Y0_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M1Y0|C0M1Y0_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGXVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号49
D0U1E4 D0U1E4_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|D0U1E4|D0U1E4_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNLELTIPIFATNPDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号50
C0M309 C0M309_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M309|C0M309_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPISSAIAANSGIY
配列番号51
C0M325 C0M325_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M325|C0M325_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNVELTIPIFATNSDCEXIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号52
Q9T1C7 Q9T1C7_BPMS2116 腸内細菌ファージms12 110679
>tr|Q9T1C7|Q9T1C7_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ M12 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVXPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCALIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号53
C0M2Z1 C0M2Z1_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M2Z1|C0M2Z1_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNVELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIX
配列番号54
C0M1N8 C0M1N8_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M2Z1|C0M2Z1_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNVELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIX
配列番号55
J9QBW2 J9QBW2_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|J9QBW2|J9QBW2_BPMS2 カプシドタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVQLPVAAWRSYLNMELTIPIFATNDDCALIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号56
C8XPC9 C8XPC9_BPMS2113 腸内細菌ファージms2 329852
>tr|C8XPC9|C8XPC9_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVQLPVAAWRSYLNMELTIPIFATNDDCALIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号57
C0M2Y4 C0M2Y4_BPMS2115 腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M2Y4|C0M2Y4_BPMS2 コートタンパク質(フラグメント) OS=腸内細菌ファージMS2 GN=MS2g2 PE=4 SV=1
NFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNVELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号58
P69171 COAT_BPZR115 腸内細菌ファージzr 332942
>sp|P69171|COAT_BPZR コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ ZR PE=1 SV=1
ASNFTQFVLVNDGGTGNVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号59
P69170 COAT_BPR17116 腸内細菌ファージr17 12026
>sp|P69170|COAT_BPR17 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ R17 PE=1 SV=1
ASNFTQFVLVNDGGTGNVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号60
P03612 COAT_BPMS2 腸内細菌ファージms2 329852
>sp|P03612|COAT_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 PE=1 SV=2
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号61
C0M1L4 C0M1L4_BPMS2116腸内細菌ファージms2 12022 遺伝子ms2g2
>tr|C0M1L4|C0M1L4_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=MS2g2 PE=2 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号62
C8XPD7 C8XPD7_BPMS2116 腸内細菌ファージms2 329852 遺伝子cp
>tr|C8XPD7|C8XPD7_BPMS2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ MS2 GN=cp PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号63
Q2V0T1 Q2V0T1_BPZR116 腸内細菌ファージzr 332942
>tr|Q2V0T1|Q2V0T1_BPZR コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ ZR PE=4 SV=1
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号64
Q9MCD7 Q9MCD7_BPJP5115 腸内細菌ファージjp501 12020
>tr|Q9MCD7|Q9MCD7_BPJP5 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ JP501 PE=4 SV=1
MASNFTEFVLVDNGETGNVTVAPSNFANGVAEWISSDSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVAVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCALIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号65
P03611 COAT_BPF2115 腸内細菌ファージf2 12016
>sp|P03611|COAT_BPF2 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ f2 PE=1 SV=1
ASNFTQFVLVNDGGTGNVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNLELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号66
P34700 COAT_BPJP3115 腸内細菌ファージjp34 12019
>sp|P34700|COAT_BPJP3 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ JP34 PE=3 SV=2
MATLRSFVLVDNGGTGDVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIADAISSQSGFYA
配列番号67
Q2V0U0 Q2V0U0_BPBZ1115 腸内細菌ファージjp500 332939
>tr|Q2V0U0|Q2V0U0_BPBZ1 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ JP500 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGDVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIADAISSQSGFYA
配列番号68
Q2V0T7 Q2V0T7_BPBZ1115 腸内細菌ファージsd 332940
>tr|Q2V0T7|Q2V0T7_BPBZ1 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ SD PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPISAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTTISKSLAGLFKVGNPIADAISSQSGFYA
配列番号69
Q9MBL2 Q9MBL2_BPKU1115 腸内細菌ファージku1 12021
>tr|Q9MBL2|Q9MBL2_BPKU1 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ KU1 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQSVNGVELPVSAWKAFASIDLTIPIFAATDDVTLISKSLAGLFKIGNPVADAISSQSGFYA
配列番号70
P07234 COAT_BPGA115 腸内細菌ファージga 12018
>sp|P07234|COAT_BPGA コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ GA PE=1 SV=3
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYAIKLEVPKIVTQVVNGVELPGSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIAEAISSQSGFYA
配列番号71
C8YJG7 C8YJG7_BPBZ1115 腸内細菌ファージbz13 329853
>tr|C8YJG7|C8YJG7_BPBZ1 カプシドタンパク質 OS=腸内細菌ファージ BZ13 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIAEAISSQSGFYA
配列番号72
C8YJH1 C8YJH1_BPBZ1115 腸内細菌ファージbz13 329853
>tr|C8YJH1|C8YJH1_BPBZ1 カプシドタンパク質 OS=腸内細菌ファージ BZ13 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQTVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTLISKSLAGLFKIGNPVADAISSQSGFYA
配列番号73
C8YJH5 C8YJH5_BPBZ1115 腸内細菌ファージbz13 329853
>tr|C8YJH5|C8YJH5_BPBZ1 カプシドタンパク質 OS=腸内細菌ファージBZ13 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGDPIADAISSQSGFYA
配列番号74
Q2V0T4 Q2V0T4_BPTH1115 腸内細菌ファージth1 12029
>tr|Q2V0T4|Q2V0T4_BPTH1 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ TH1 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIADAISSQSGFYA
配列番号75
Q2V0U3 Q2V0U3_BPBZ1116 腸内細菌ファージtl2 332938
>tr|Q2V0U3|Q2V0U3_BPBZ1 コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ TL2 PE=4 SV=1
MATLRSFVLVDNGGTGNVTVVPVSNANGVAEWLSNNSRSQAYRVTASYRASGADKRKYTIKLEVPKIVTQVVNGVELPVSAWKAYASIDLTIPIFAATDDVTVISKSLAGLFKVGNPIADAISSQSGFYA
配列番号76
P03614 COAT_BPFR116 腸内細菌ファージfr 12017
>sp|P03614|COAT_BPFR コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ fr PE=1 SV=4
MASNFEEFVLVDNGGTGDVKVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSANNRKYTVKVEVPKVATQVQGGVELPVAAWRSYMNMELTIPVFATNDDCALIVKALQGTFKTGNPIATAIAANSGIY
配列番号77
ef108465 腸内細菌ファージr17 329852
gi|132424616|gb|ABO33465.1| コートタンパク質 [腸内細菌ファージMS2]
MASNFTQFVLVDNGGTGDVTVAPSNFANGVAEWISSNSRSQAYKVTCSVRQSSAQNRKYTIKVEVPKVATQTVGGVELPVAAWRSYLNMELTIPIFATNSDCELIVKAMQGLLKDGNPIPSAIAANSGIY
配列番号78 1QBE
>sp|P03615|COAT_BPQBE コートタンパク質 OS=腸内細菌ファージ Qbeta PE=1 SV=2
AKLETVTLGNIGKDGKQTLVLNPRGVNPTNGVASLSQAGAVPALEKRVTVSVSQPSRNRKNYKVQVKIQNPTACTANGSCDPSVTRQAYADVTFSFTQYSTDEERAFVRTELAALLASPLLIDAIDQLNPAY
Claims (7)
- 短RNA(shRNA)、リボザイム及びパッキング配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸構築物。
- リボザイムが、一方の末端はshRNAによりフランクされており、もう一方の末端はパッキング配列によりフランクされている、請求項1に記載の核酸構築物。
- 請求項1に記載の核酸構築物を含むベクター。
- 請求項3に記載のベクターを含む宿主細胞。
- リボザイムがハンマーヘッドリボザイムまたは肝炎デルタV(HDV)リボザイムである、請求項1に記載の核酸構築物。
- リボザイムが、shRNAの少なくとも6個の隣接ヌクレオチドに相補的な核酸の隣接セットを有するハンマーヘッドリボザイム変種である、請求項5に記載の核酸構築物。
- リボザイムが、野生型HDVリボザイムの速度の最大で50%の速度でshRNAとの連結を切断することができる突然変異HDVリボザイム又は配列番号10〜17から選択される核酸配列を有する突然変異HDVリボザイムである、請求項5に記載の核酸構築物。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161578706P | 2011-12-21 | 2011-12-21 | |
US61/578,706 | 2011-12-21 | ||
US201261607900P | 2012-03-07 | 2012-03-07 | |
US61/607,900 | 2012-03-07 | ||
US201261661688P | 2012-06-19 | 2012-06-19 | |
US61/661,688 | 2012-06-19 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014548974A Division JP6041896B2 (ja) | 2011-12-21 | 2012-12-21 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017241444A Division JP2018038437A (ja) | 2011-12-21 | 2017-12-18 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017035109A true JP2017035109A (ja) | 2017-02-16 |
JP6332879B2 JP6332879B2 (ja) | 2018-05-30 |
Family
ID=48655925
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014548974A Active JP6041896B2 (ja) | 2011-12-21 | 2012-12-21 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
JP2016218086A Active JP6332879B2 (ja) | 2011-12-21 | 2016-11-08 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
JP2017241444A Withdrawn JP2018038437A (ja) | 2011-12-21 | 2017-12-18 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014548974A Active JP6041896B2 (ja) | 2011-12-21 | 2012-12-21 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017241444A Withdrawn JP2018038437A (ja) | 2011-12-21 | 2017-12-18 | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20130167267A1 (ja) |
EP (2) | EP4019636A1 (ja) |
JP (3) | JP6041896B2 (ja) |
CN (2) | CN104114696B (ja) |
AR (1) | AR089440A1 (ja) |
AU (2) | AU2012358267B2 (ja) |
BR (1) | BR112014012162B1 (ja) |
CA (1) | CA2860310C (ja) |
HK (1) | HK1203082A1 (ja) |
IL (1) | IL232662B (ja) |
MX (1) | MX358762B (ja) |
SG (1) | SG11201402657WA (ja) |
WO (1) | WO2013096866A2 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2012358267B2 (en) | 2011-12-21 | 2017-10-26 | Rnaissance Ag Llc | Processes using VLPs with capsids resistant to hydrolases |
JP6636418B2 (ja) * | 2013-06-19 | 2020-01-29 | エイピーエスイー リミテッド ライアビリティ カンパニー | ヒドロラーゼに耐性のあるカプシドを使用する組成物及び方法 |
US9932563B2 (en) * | 2013-09-11 | 2018-04-03 | Georgia Tech Research Corporation | Compositions and methods for inhibiting gene expressions |
WO2015038915A2 (en) * | 2013-09-12 | 2015-03-19 | Apse, Llc | Compositions and methods using capsids resistant to hydrolases |
EP3356531A4 (en) * | 2015-10-01 | 2019-05-29 | Apse Llc | METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING APSE NODES |
CA3040110A1 (en) | 2015-10-13 | 2017-04-20 | Daniel C. Carter | Nsp10 self-assembling fusion proteins for vaccines, therapeutics, diagnostics and other nanomaterial applications |
JP2019506848A (ja) * | 2015-12-31 | 2019-03-14 | アプス, インコーポレイテッド | 昆虫防除の方法及び組成物 |
CN109196102B (zh) | 2016-03-15 | 2022-04-26 | 阿普斯公司 | 增加双链rna产生的方法和组合物 |
US10131911B2 (en) | 2016-11-07 | 2018-11-20 | nanoSUR LLC | Post-transcriptionally chemically modified double strand RNAs |
CN108795961A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-11-13 | 中华人民共和国大榭出入境检验检疫局 | 肠道病毒pcr质控品装甲rna及制备方法 |
WO2020254876A1 (en) | 2019-06-18 | 2020-12-24 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Virus-like particle delivery of hepatitis b virus (hbv) vaccines |
WO2021215952A1 (ru) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Индженик" | Способ получения частиц бактериофагов семейства levivirus |
CN113045631B (zh) * | 2021-03-10 | 2022-11-08 | 湖北大学 | 一种表达病毒样颗粒的质体转化的转基因植物的制备方法及其在抵抗棉铃虫中的应用 |
EP4166672A1 (en) * | 2021-10-15 | 2023-04-19 | NEUWAY Pharma GmbH | A novel method for purification of protein- or peptide-based capsules |
WO2024006433A1 (en) * | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Carnegie Mellon University | Method for production of virus-like particles for gene delivery |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001505427A (ja) * | 1996-12-03 | 2001-04-24 | メディカル ユニバーシテイー オブ サウス カロライナ | 微生物病原体に対する抗菌治療剤としての組織特異的および標的rna特異的リボザイム |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS501B1 (ja) | 1970-05-19 | 1975-01-06 | ||
US5443969A (en) | 1992-10-29 | 1995-08-22 | Rutgers University | RNA packaging system |
US6066318A (en) | 1995-10-05 | 2000-05-23 | G.D. Searle & Co. | Multi-functional hematopoietic fusion proteins between sequence rearranged C-MPL receptor agonists and other hematopoietic factors |
GB9925459D0 (en) | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
US7320793B2 (en) | 2001-01-19 | 2008-01-22 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
AU2002327614B2 (en) * | 2001-09-06 | 2007-12-06 | Alphavax, Inc. | Alphavirus replicon vector systems |
DK1450856T3 (da) | 2001-09-14 | 2010-05-31 | Cytos Biotechnology Ag | Pakning af immunstimulatorisk CpG i virus-lignende partilker, fremgangsmåde og anvendelse |
IL165249A0 (en) * | 2002-07-18 | 2005-12-18 | Cytos Biotechnology Ag | Hapten-carrier conjugates and uses thereof |
WO2005001039A2 (en) * | 2003-05-29 | 2005-01-06 | Creighton University | Ribozyme-regulated small inhibitory rna (sirna) production and methods of use thereof |
WO2005021751A1 (en) * | 2003-09-01 | 2005-03-10 | Patrick Arbuthnot | A self-processing rna expression cassette |
EP1512742A1 (en) * | 2003-09-08 | 2005-03-09 | Margarete Odenthal | Conditional modification of sirnas expression |
AU2005220734A1 (en) | 2004-02-27 | 2005-09-22 | Dow Global Technologies Inc. | High efficiency peptide production in plant cells |
US20080171361A1 (en) | 2007-01-11 | 2008-07-17 | The Board Of Regents For Oklahoma State University | CAP-Independent Translational Enhancer for Protein Synthesis in Wheat Germ Extract and Transgenic Cereals |
US20090093019A1 (en) * | 2007-04-27 | 2009-04-09 | Phelps Jamie P | Production and in vivo assembly of soluble recombinant icosahedral virus-like particles |
EP2085479A1 (en) * | 2008-01-31 | 2009-08-05 | Institut Pasteur | Reverse genetics of negative-strand rna viruses in yeast |
US20110250675A1 (en) * | 2008-03-26 | 2011-10-13 | Life Technologies Corporaiton | Virus-Like Particle Mediated Cellular Delivery |
US8324149B2 (en) * | 2008-11-18 | 2012-12-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Encapsidation of heterologous entities into virus-like particles |
US8906862B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-12-09 | The Regents Of The University Of California | Multiple antigen delivery system using hepatitis E virus-like particle |
US8906863B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-12-09 | The Regents Of The University Of California | Proteolysis-resistant capsid of chimeric hepatitis E virus as an oral delivery vector |
CA2765357A1 (en) | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Plant Bioscience Limited | Production of viral capsids |
JP5551780B2 (ja) * | 2009-09-22 | 2014-07-16 | メディカゴ インコーポレイテッド | 植物由来のタンパク質を調製する方法 |
NZ601784A (en) | 2010-03-08 | 2014-08-29 | Monsanto Technology Llc | Polynucleotide molecules for gene regulation in plants |
US20130245102A1 (en) | 2010-10-12 | 2013-09-19 | Research Foundation Of The City University Of New York | Novel dna templates for small rna production in mammalian cells |
US20130224828A1 (en) * | 2010-11-01 | 2013-08-29 | Qapsule Technologies, Inc. | RNA-Directed Packaging of Enzymes Within Protein Particles |
AU2012358267B2 (en) | 2011-12-21 | 2017-10-26 | Rnaissance Ag Llc | Processes using VLPs with capsids resistant to hydrolases |
CN102533831B (zh) * | 2012-02-16 | 2013-09-11 | 郑州大学 | 一种包含自剪切位点的组织特异性双基因沉默RNAi表达载体 |
JP6636418B2 (ja) * | 2013-06-19 | 2020-01-29 | エイピーエスイー リミテッド ライアビリティ カンパニー | ヒドロラーゼに耐性のあるカプシドを使用する組成物及び方法 |
WO2015038915A2 (en) * | 2013-09-12 | 2015-03-19 | Apse, Llc | Compositions and methods using capsids resistant to hydrolases |
-
2012
- 2012-12-21 AU AU2012358267A patent/AU2012358267B2/en active Active
- 2012-12-21 MX MX2014007516A patent/MX358762B/es active IP Right Grant
- 2012-12-21 AR ARP120104949A patent/AR089440A1/es active IP Right Grant
- 2012-12-21 EP EP21197081.9A patent/EP4019636A1/en active Pending
- 2012-12-21 JP JP2014548974A patent/JP6041896B2/ja active Active
- 2012-12-21 CN CN201280062447.0A patent/CN104114696B/zh active Active
- 2012-12-21 BR BR112014012162-1A patent/BR112014012162B1/pt active IP Right Grant
- 2012-12-21 SG SG11201402657WA patent/SG11201402657WA/en unknown
- 2012-12-21 EP EP12860313.1A patent/EP2798059B1/en active Active
- 2012-12-21 CA CA2860310A patent/CA2860310C/en active Active
- 2012-12-21 CN CN201710382239.3A patent/CN107164376B/zh active Active
- 2012-12-21 WO PCT/US2012/071419 patent/WO2013096866A2/en active Application Filing
- 2012-12-21 US US13/725,184 patent/US20130167267A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-05-16 US US14/279,793 patent/US9181531B2/en active Active
- 2014-05-18 IL IL232662A patent/IL232662B/en active IP Right Grant
-
2015
- 2015-04-14 HK HK15103603.6A patent/HK1203082A1/xx unknown
-
2016
- 2016-11-08 JP JP2016218086A patent/JP6332879B2/ja active Active
-
2017
- 2017-11-16 AU AU2017261590A patent/AU2017261590B2/en active Active
- 2017-12-18 JP JP2017241444A patent/JP2018038437A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001505427A (ja) * | 1996-12-03 | 2001-04-24 | メディカル ユニバーシテイー オブ サウス カロライナ | 微生物病原体に対する抗菌治療剤としての組織特異的および標的rna特異的リボザイム |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
OLIGONUCLEOTIDES, vol. Vol.13, JPN6017041259, 2003, pages 335 - 343 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104114696A (zh) | 2014-10-22 |
CN107164376B (zh) | 2021-03-30 |
AU2012358267B2 (en) | 2017-10-26 |
US20140302593A1 (en) | 2014-10-09 |
WO2013096866A3 (en) | 2013-10-03 |
AR089440A1 (es) | 2014-08-20 |
JP2015500662A (ja) | 2015-01-08 |
CA2860310C (en) | 2023-03-21 |
EP4019636A1 (en) | 2022-06-29 |
JP6332879B2 (ja) | 2018-05-30 |
MX2014007516A (es) | 2014-09-22 |
CA2860310A1 (en) | 2013-06-27 |
SG11201402657WA (en) | 2014-09-26 |
EP2798059A4 (en) | 2015-07-29 |
AU2017261590B2 (en) | 2019-12-12 |
BR112014012162A2 (pt) | 2019-08-13 |
AU2017261590A1 (en) | 2017-12-07 |
JP6041896B2 (ja) | 2016-12-14 |
EP2798059A2 (en) | 2014-11-05 |
IL232662A0 (en) | 2014-07-31 |
AU2012358267A1 (en) | 2014-06-05 |
WO2013096866A2 (en) | 2013-06-27 |
MX358762B (es) | 2018-09-03 |
JP2018038437A (ja) | 2018-03-15 |
BR112014012162B1 (pt) | 2021-09-08 |
CN107164376A (zh) | 2017-09-15 |
US9181531B2 (en) | 2015-11-10 |
IL232662B (en) | 2019-05-30 |
HK1203082A1 (en) | 2015-10-16 |
EP2798059B1 (en) | 2021-09-29 |
US20130167267A1 (en) | 2013-06-27 |
CN104114696B (zh) | 2017-05-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6332879B2 (ja) | 加水分解酵素に対して耐性があるカプシドを有するvlpを用いるプロセス | |
US10428329B2 (en) | Compositions and methods using capsids resistant to hydrolases | |
KR102012382B1 (ko) | 조작된 crispr-cas9 조성물 및 사용 방법 | |
JP2000300254A (ja) | 寄生体由来抵抗性 | |
US20160208221A1 (en) | Compositions and methods using capsids resistant to hydrolases | |
US20180291066A1 (en) | In vivo production of long double stranded rna utilizing vlps | |
FR2844806A1 (fr) | Systemes d'expression de proteines toxiques, vecteurs et procede de fabrication de proteines toxiques | |
JP6044974B2 (ja) | 組換えカイコ核多角体病ウイルスベクター | |
JP2015086182A (ja) | 多角体病ウイルスの多角体構造に由来する担体粒子からの目的分子の取り出し方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161108 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171030 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171218 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180419 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180423 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6332879 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |