JP2016536012A5 - - Google Patents

Claims (23)

1. 対象から得た血漿試料を血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）系の活性化剤と共にインキュベートすること、
   前記インキュベーションの前および後の血漿試料において、インタクト高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）、切断型ＨＭＷＫ、もしくはその両方のレベルを測定すること、および
   活性化後の試料中のインタクトＨＭＷＫの低減を決定すること
   を含むエクスビボ活性化方法。
2. 対象における血漿活性化を評価する方法であって、
   対象からの血漿試料を提供すること、および
   前記血漿試料において切断型ＨＭＷＫのレベルを測定すること
   を含む、方法。
3. 試料中の血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）活性を決定するためのエクスビボアッセイであって、
   ｐＫａｌ基質の存在下で前記試料をｐＫａｌ系活性化剤とインキュベートすること、および
   前記基質の切断速度に基づいてｐＫａｌの活性を測定すること
   を含むアッセイ。
4. インタクトＨＭＷＫおよび切断型ＨＭＷＫのレベルがウェスタンブロット解析によって測定される、請求項１又は２に記載の方法。
5. 前記ウェスタンブロット解析がＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅウェスタンブロット解析である、請求項４に記載の方法。
6. 前記活性化剤が第ＸＩＩａ因子である、請求項１又は３に記載の方法。
7. 前記血漿試料および活性化剤がｐＫａｌ阻害剤候補の存在下でインキュベートされ、前記方法は血漿カリクレインに対するｐＫａｌ阻害剤候補の活性を評価することをさらに含む、請求項１又は３に記載の方法。
8. 前記対象が、ｐＫａｌ関連疾患を有するかもしくはその危険性があるかを評価することをさらに含み、既定の値と比較して切断型ＨＭＷＫのレベルが増加するか、既定の値と比較してｐＫａｌ活性が増加すれば、前記対象が前記疾患を有するかその危険性があることを示す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記疾患がＨＡＥである、請求項８に記載の方法。
10. 前記対象がｐＫａｌ関連疾患を有するヒト患者であり、該疾患の治療が行われており、そして前記血漿試料が、前記治療の過程の後もしくは前記治療の過程の最中に得られる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記治療の有効性を評価することをさらに含み、前記治療前と比較して切断型ＨＭＷＫのレベルが低減するか、もしくは前記治療の最中にわたって切断型ＨＭＷＫのレベルが低減すれば、前記治療が有効であることを示す、請求項１０に記載の方法。
12. 前記患者がＨＡＥを有し、かつｐＫａｌ阻害剤によって治療される、請求項１０に記載の方法。
13. 前記ｐＫａｌ阻害剤がＤＸ２９３０である、請求項１２に記載の方法。
14. 前記対象が、血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）系に関連する疾患を有するかもしくはそれを有する疑いのある、請求項１又は２に記載の方法。
15. 前記対象がｐＫａｌ阻害剤によって治療される、請求項１４に記載の方法。
16. 前記ｐＫａｌ阻害剤の有効性を評価することをさらに含み、前記治療前と比較して切断型ＨＭＷＫのレベルが低減すれば、前記ｐＫａｌ阻害剤が有効であることを示す、請求項１５に記載の方法。
17. 前記試料が対象からの血漿試料である、請求項３に記載の方法。
18. 前記基質がｐＫａｌによる切断の後に検出可能なシグナルを遊離できる標識に結合し、そして基質の切断速度が、検出可能なシグナルの大きさに基づいて決定される、請求項１７に記載のアッセイ。
19. 前記血漿試料が、活性化剤、ｐＫａｌ基質、およびｐＫａｌ阻害剤候補と共にインキュベートされる、請求項３、１７、及び１８のいずれか１項に記載のアッセイ。
20. 前記ｐＫａｌ阻害剤候補のｐＫａｌに対する阻害活性を評価することをさらに含み、前記ｐＫａｌ阻害剤候補の非存在下でのｐＫａｌ活性のレベルと比較して、前記ｐＫａｌ阻害剤候補の存在下でのｐＫａｌ活性のレベルが低減すれば、前記阻害剤候補が有効であることを示す、請求項１９に記載のアッセイ。
21. 前記ｐＫａｌ阻害剤がｐＫａｌに結合する抗体である、請求項２０に記載のアッセイ。
22. 前記抗体がＤＸ−２９３０である、請求項２１に記載のアッセイ。
23. 前記アッセイがマイクロプレート中で実施される、請求項３、１７、および１８のいずれか１項に記載のアッセイ。