JP2016528918A - セタリア属(Setaria)ユビキチン遺伝子由来の調節エレメントを用いて導入遺伝子を発現させるための構築物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、2013年8月30日出願の米国仮特許出願第61/872134号に基づく優先権を主張するものである。
本明細書と同時に提出され、以下のように特定されるコンピュータ可読ヌクレオチド/アミノ酸配列表は、その全体が参照により組み込まれる:2014年8月15日に作成された「Setaria_UBI_SEQ_LIST_ST25」という名前付きの68KB ACII(テキスト)の1ファイル。
本発明を記載および主張する際、以下に示される定義にしたがって以下の専門用語を使用する。
・極めて高いストリンジェンシー:5×SSC緩衝液中65℃で16時間のハイブリダイゼーション;2×SSC緩衝液中室温でそれぞれ15分間の2回の洗浄;および0.5×SSC緩衝液中65℃でそれぞれ20分間の2回の洗浄。
・高いストリンジェンシー:5〜6×SSC緩衝液中65〜70℃で16〜20時間のハイブリダイゼーション;2×SSC緩衝液中室温でそれぞれ5〜20分間の2回の洗浄;および1×SSC緩衝液中55〜70℃でそれぞれ30分間の2回の洗浄。
・中等度のストリンジェンシー:6×SSC緩衝液中室温〜55℃で16〜20時間のハイブリダイゼーション;2×〜3×SSC緩衝液中室温〜55℃でそれぞれ20〜30分間の少なくとも2回の洗浄。
実施形態では、特異的にハイブリダイズ可能な核酸分子が、極めて高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で結合したままであることができる。実施形態では、特異的にハイブリダイズ可能な核酸分子が、高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で結合したままであることができる。実施形態では、特異的にハイブリダイズ可能な核酸分子が、中等度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で結合したままであることができる。
本明細書で開示されるように、パニクム・ヴィルガツム(Panicum virgatum)、ミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)またはアワ(Setaria italica)由来のユビキチン遺伝子の調節配列を用いて非ユビキチン導入遺伝子を発現させるための新規な組換え構築物が提供される。これらの構築物を使用して植物細胞を含む細胞を形質転換し、その細胞内で導入遺伝子産物を発現する完全な生物を作製することができる。
基礎研究または生物工学用途に使用される植物プロモーターは、一般的に一方向性であり、その3’末端(下流)に融合されている1つの遺伝子のみを管理する。代謝工学および形質スタッキングのためには、通常、複数の遺伝子を植物に導入することが必要であるので、複数の遺伝子の発現を駆動するために、典型的には、複数のプロモーターがトランスジェニック作物に必要である。
CTGCTCGTTCAGCCCACAGTAACACGCCGTGCGACATGCAGATGCCCTCCACCACGCCGACCAACCCCAAGTCCGCCGCGCTCGTCCACGGCGCCATCCGCATCCGCGCGTCAACGTCATCCGGAGGAGGCGAGCGCGATGTCGACGGCCACGGCGGCGGCGGACACGACGGCGACGCCCCGACTCCGCGCGCGCGTCAAGGCTGCAGTGGCGTCGTGGTGGCCGTCCGCCTGCACGAGATCCCCGCGTGGACGAGCGCCGCCTCCACCCAGCCCCTATATCGAGAAATCAACGGTGGGCTCGAGCTCCTCAGCAACCTCCCCACCCCCCCTTCCGACCACGCTCCCTTCCCCCGTGCCCCTCTTCTCCGTAAACCCGAGCCGCCGAGAACAACACCAACGAAAGGGCGAAGAGAATCGCCATAGAGAGGAGATGGGCGGAGGCGGATAGTTTCAGCCATTCACGGAGAAATGGGGAGGAGAGAACACGACATCATACGGACGCGACCCTCTAGCTGGCTGGCTGTCCTAAAGAATCGAACGGAATCGCTGCGCCAGGAGAAAACGAACGGTCCTGAAGCATGTGCGCCCGGTTCTTCCAAAACACTTATCTTTAAGATTGAAGTAGTATATATGACTGAAATTTTTACAAGGTTTTTCCCCATAAAACAGGTGAGCTTATCTCATCCTTTTGTTTAGGATGTACGTATTATATATGACTGAATATTTTTTATTTTCATTGAATGAAGATTTTCGACCCCCCAAAAATAAAAAACGGAGGGAGTACCTTTGTGCCGTGTATATGGACTAGAGCCATCGGGACGTTTCCGGAGACTGCGTGGTGGGGGCGATGGACGCACAACGACCGCATTTTCGGTTGCCGACTCGCCGTTCGCATCTGGTAGGCACGACTCGTCGGGTTCGGCTCTTGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACCCGTTCTCTTCCCCCGTCTGGCCATCCATAAATCCCCCCTCCATCGGCTTCCCTTTCCTCAATCCAGCACCCTGATT(配列番号1)
実施形態では、プロモーターがミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)ユビキチン1(Ubi1)プロモーターであり得る。
GGCGTCAGGACTGGCGAAGTCTGGACTCTGCAGGGCCGAACTGCTGAAGACGAAGCAGAGGAAGAGAAAGGGAAGTGTTCGACTTGTAATTTGTAGGGGTTTTTTTTAGAGGAACTTGTAATTTGTAGGTGGGCTGGCCTCGTTGGAAAAACGATGCTGGCTGGTTGGGCTGGGCCGATGTACGCTTGCAAACAACTTGTGGCGGCCCGTTCTGGACGAGCAGGAGTTTCTTTTTTGTTCTCACTTTTCTGGTCTTCTTTAGTTACGGAGTACCTTTTGTTTTTTAAAGGAGTTACCTTTTTTTTAGGAATTCTTTAGTTACCTTTCGCTTGCTCTCAAAAAATATTTAACTTTCGCTTTTTTTCATTTTAATTTTTGCAACTATTTACGAGTTTCATGAATGCTTATTTTCCAGCATATCATTATTTGCAAGTATTTTTATGCCGTATGTATTGGACGAGAGCCATCGGGACTGTTCCAGAGACTGCGTGGTGGGGACGGCTCCCAACCGCCTTTTCTATCTCTGTTCGCATCCGGTGGCCGACTTGGCTCGCGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACTTGGTCTCTTCCCCATCTGGCCATCTATAAATTCCCCCATCGATCGACCCTCCCTTTCC(配列番号2)
実施形態では、プロモーターがアワ(Setaria italica)ユビキチン2(Ubi2)プロモーターであり得る。
TGCGTCTGGACGCACAAGTCATAGCATTATCGGCTAAAATTTCTTAATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCATTTCGTAGAACAAGAACAAGGTATCATATATATATATATATATAATATTTAAACTTTGTTAAGTGGAATCAAAGTGCTAGTATTAATGGAGTTTCATGTGCATTAAATTTTATGTCACATCAGCAATTTTGTTGACTTGGCAAGGTCATTTAGGGTGTGTTTGGAAGACAGGGGCTATTAGGAGTATTAAACATAGTCTAATTACAAAACTAATTGCACAACCGCTAAGCTGAATCGCGAGATGGATCTATTAAGCTTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGGTGCTACAATAACCATTTGCTAATGATGGATTACTTAGGTTTAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAATTTTGTAATTAGCTCATATTTAGTTCTTATAATTAGTATCCGAACATCCAATGTGACATGCTAAAGTTTAACCCTGGTATCCAAATGAAGTCTTATGAGAGTTTCATCACTCCGGTGGTATATGTACTTAGGCTCCGTTTTCTTCCACCGACTTATTTTTAGCACCCGTCACATTGAATGTTTAGATACTAATTAGAAGTATTAAACGTAGACTATTTACAAAATCCATTACATAAGACGAATCTAAACGGCGAGACGAATCTATTAAACCTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGTTGCTACAGTAAACATTTGCTAATGATGGATTAATTAGGCTTAATAGATTCGTCTCGCCGTTTAGCCTCCACTTATGTAATGGGTTTTCTAAACAATCTACGTTTAATACTCCTAATTAGTATCTAAATATTCAATGTGACACGTGCTAAAAATAAGTCAGTGGAAGGAAGAGAACGTCCCCTTAGTTTTCCATCTTATTAATTGTACGATGAAACTGTGCAGCCAGATGATTGACAATCGCAATACTTCAACTAGTGGGCCATGCACATCAGCGACGTGTAACGTCGTGAGTTGCTGTTCCCGTAG(配列番号3)
実施形態では、プロモーターがパニクム・ヴィルガツム(Panicum virgatum)(スイッチグラス)ユビキチン1プロモーターであり得る。
TTGAATTTTAATTTCAAATTTTGCAGGGTAGTAGTGGACATCACAATACATATTTAGAAAAAGTTTTATAATTTTCCTCCGTTAGTTTTCATATAATTTTGAACTCCAACGATTAATCTATTATTAAATATCCCGATCTATCAAAATAATGATAAAAATTTATGATTAATTTTTCTAACATGTGTTATGGTGTGTACTATCGTCTTATAAAATTTCAACTTAAAACTCCACCTATACATGGAGAAATGAAAAAGACGAATTACAGTAGGGAGTAATTTGAACCAAATGGAATAGTTTGAGGGTAAAATGAACTAAACAATAGTTTAGGAGGTTATTCAGATTTTAGTTATAGTTGAGAGGAGTAATTTAGACTTTTTCCTATCTTGAATTGTTGACGGCTCTCCTATCGGATATCGGATGGAGTCTTTCAGCCCAACATAACTTCATTCGGGCCCAAACGTTCGTCCATCCAGCCTAGGGAGAACATTTTGCCCATGATATCTGTTTTTCTTTTTTTCTATTTTCACTGGTATTATAGGAGGGAAATATACAACGTGTTCACCTTTGGTTTCATTCTTGTTCCATCTGAATTTATCTAAAACTGTGTTTGAACTTCGTAAGAATTTTGTTCGATCTGTCCGGTACATCGTGTTGATAGGTGGCCTCCGAGATTCTTCTTTTTAACCGGCAAAGTAAAATAATCTCAGCTCCAGCCTAACGTCAATTATCAGAGAGAGAAAAAAATATTTTTTTATGATTGATCGGAAACCAACCGCCTTACGTGTCGATCCTGGTTCCTGGCCGGCACGGCGGAGGAAAGCGACCGACCTCGCAACGCCGGCGCACGGCGCCGCCGTGTTGGACTTGGTCTCCCGCGACTCCGTGGGCCTCGGCTTATCGCCGCCGCTCCATCTCAACCGTCCGCTTGGACACGTGGAAGTTGATCCGTCGCGCACCAGCCTCGGAGGTAACCTAACTGCCCGTACTATAAATCCGGGATCCGGCCTCTCCAATCCCCATCGCCA(配列番号35)
GTTTGTCAAAAACTGGCCTACAGTCTGCTGCCCCTGTTGGTCTGCCCCTTGGAAGTAGTCGTGTCTATGGTTATGTGAGAAGTCGTTGTGTTCTTTCTAATCCCGTACTGTTTGTGTGAACATCTGCTGCTGTCGTATTGCATCGTGAAGAATCCTGTTATGAATAAGTGAACATGAACCTTGTTCTGTGATTACGGCTTCGTGGTTATGCGAACGTTCTTACAAACGCAATTGCACCTGATGTAAAATCGTTTTTGCTAGCTGTATGGAACAAGTGCTCATGATGTTCATGCAAGATGCAATTCCAGCTTTTGTTGGTTTGTCATCTTTGTACTGTGCTTACCGCACATAAAGATTGCATCTTGCTTATTGCTTTGTTGCTTTGGTGCTCGTCCGCTTCTCCTTGCACCTTATCAAACCTTTGTTTAGATTCTCTTCTTATAGCACTTGGTAACTCTCAGCTTTACAACGCCAGTACTGTTTCTGAAATTTCATGACTGATAAAGCTGATAGATGGAGTACTAATATATGACATCTTTCCATAAATGTTCGGGTGCAGAGATATGGAGGCCCCAGGATCCTATTTACAGGATGAACCTACCTGGGCCGCTGTACGCATGACATCCGCGAGCAAGTCTGAGGTTCTCAATGTACACATGAAATTGATTTTTGCTGCGTTTGGCTTGGCTGATCGTTGCATTTGTTCTGATTCATCAGAGTTAAATAACGGATATATCAGCAAATATCCGCAGCATCCACACCGACCACACGTCCGGTTAACAGAGTCCCCCTGCCTTGCTTTAATTATTACGGAGTACTCCGCTATTAATCCTTAGATATGTTTCGAAGGAACTCAAACCTTCCTCCATCTGCAAATCTCAGTGCTTCAAAACTGGAATTAGATAATTGAAACCTTCATTCGGTTGCAATTCACAACTGCAAATTGAACAGCACTGTCAATTTCAATTTCGGGTTCACGATTCCACCGATAGGTTGACATGATCCATGATCCACCCATTGTACAAC(配列番号4)
実施形態では、3’−UTRがミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)ユビキチン1(Ubi1)3’−UTRであり得る。
GCTTCTGCCGAACTGGTTCACAGTCTGCTGCCCTTGGTGGTCTGCCCCTTAGTGGTCATGCCTTTTGTTATGTGTCTTGCGTCCCAATCCTGTATCGTTTGTGTGAACATCTCTGCTGCTGTATAGCAGCTTGAATCCTGTTATGAATTTGTGAACCTGAACCTTGTTCCGTGAATCATGTTATGAATAAGTGAACCTGAACCTTGTTCCGTGATTATTGTTACAATCTGTTGTGCCGTATGGTTGGTCGTGTGTGATTTATGTTGAACTGGAGAACCAAGTTCGTTCCAGGACATATTGCAACCTAAGCTAAACCATGTAGAACTACTTGTTCTGGGAGACATAAAACGTCATTTTTATGCATTCGTAACATTTAAGCATACTACAATAATTGTATTGTCCTTTTCCTACTCATCCTTGAAACCATATGCCTCTTCTCAGCGCCTCTACATGCAGTGTGCTCAGAACAAACAGGCCCTGCCAGCTGCTTTTCAATTTTCCAATTAATAACCACAATAGTCGGACTATGGCATCTGTGGGTGACTATGCAAGATGTTGCTGTCAGGTCTCTGAAACTTTTCCCATGTATCTGTTGAAATTACCCAGTAAATTCATGCCTCTATTTAATCTGGCATGGTTGATTTTCAAACAGAATGTGTTTTTTTTTGTTCTGGAAGCTATATTGGTAAATAAATACAAAGCTGGAGTGTGATTATATTTCCAACAGATATTCAAGAAAATCTCAGTTGATTTATTTACTACTGTAGTATATATATATATCTTACAGTTGACTTCTCATATTTCAAACGACATGTGAGCACATTGTTCAGTTTCTTAGGATGTGTTGTGTGCTCAAAGGTGTAATTTTGCATTCTGCCCTCCGAGTAAACACTACACGTATTTTTTTGAGTGGCAGTGCATTTGATTACAAGGCAACAACAACAAAAACCTATGGCAAGATATCCTTCTTAGAGGCTGCCAGGATCATTTTGACTGAACTATGTAAGGCTGAAGAAAAGG(配列番号5)
実施形態では、3’−UTRがアワ(Setaria italica)ユビキチン2(Ubi2)3’−UTRであり得る。
GCCCATCGGTCATGGATGCTTCTACTGTACCTGGGTCGTCTGGTCTCTGCCTGTGTCACCTTTGAAGTACCTGTGTCGGGATTGTGTTTGGTCATGAACTGCAGTTTGTCTTTGATGTTCTTTTGTCTGGTCTTATGAACTGGTTGTATCTGTATGTTTACTGTAAACTGTTGTTGCGGTGCAGCAGTATGGCATCCGAATGAATAAATGATGTTTGGACTTAAATCTGTACTCTGTTTGTTTTCGGTTATGCCAGTTCTATATTGCCTGAGATCAGAATGTTTAGCTTTTGAGTTCTGTTTGGCTTGTGGTCGACTCCTGTTTCTTACTTGAGGCGTAACTCTGTTCTGGCAAACTCAAATGTCTAACTGAATGTTTTAGGACTTAATTGTTGGACAGATTAACGTGTTTGGTTTGTTTCTAGATTGTGATTCGGAAGGCTTGTTAGTTGTGGAATCAAGGAGAGCAGCTAGGTCTGTGCAGAACGTTATTTTGGATTTAAGCCTTCTCAGATTATGCCATTACTCTAAACCTAATGATATCATATTTCACTCGGGGATGTTGGAGTAGTCTTTTCTTTCTCCTGCAGACAAAATGATTTTGCTTTCGTGTGTGTACATGATTTTGTGCAACTGTTGCAACAACTGAAGTAGACAAGTTTTGACCTCACCAGAAGAATGAAAAAGATTTTGGAATTTGTTACATCGACAAACCATTGTAACTTGGCCCATCAGAATGCACAGAAGAGCGGCTACAAATTGACATGCGTTGCAAACTTTGCAATAGTTGATGCACATGTTTGCCATTGCCTGCCAGTCTTAGGAAAAGTGTGTGGTTCGAGAAATCTAAGCATATGTGCTCTGCTCACATTGCGTGGAACCCACACAGCTTTGTCACACTCTTGTCCACTCCAGAAGTCATTCCTGGCGCTGTTTACCCCTGGTAAAAGGTAACCGAAAACTTCTCAAGGCTGTACCCAAAACTGGAAGGAAATTTGGAGGAAATCTTTGCTTTTGATCGGCTCACTCTTTC(配列番号6)
実施形態では、3’−UTRがパニクム・ヴィルガツム(Panicum virgatum)(スイッチグラス)ユビキチン1 3’−UTRであり得る。
GCCTAGTGCTCCTGAGTTGCCTTTTGTCGTTATGGTCAACCTCTGGTTTAAGTCGTGTGAACTCTCTGCATTGCGTTGCTAGTGTCTGGTTGTGGTTGTAATAAGAACATGAAGAACATGTTGCTGTGGATCACATGACTTTTTTTTTTGAACCGGAAGATCACATGACTTTCATGGCTTTAAGTTCCTGAACTCTGAAATCTGGACCCCTTTTTAAGCTCTGAACTCATCATTCTTGCATTTACATCTGGTGTTGATCTTATTGATGTGATGCAGTCCTGCTGAAATAGTCAATGTAGATTCATGACTGACTGATTGCGTTTATGGTGTGTATGTTGTTAACAAGCTGAAGGTCGTGTGGTGTCTTTCCAGTTAGACGAAGTGTGCTTTATTGTAGCGTGTAGTGCTGCTGGATGATTGATGAACTGAAACATTCTGCATTTAGCAACTAGCGAGCCAAAGGTGATGACTGAGTTTCTGTAGACCTGTTTTTTTATGCCCATGGTCGTTCTTCAATTGCACTTGATTTTCACATTAGCTGGATCATAATCTGAGCAGACTACTCAAAAGTACAAAGTTCATCTTCGCTATGACGCTTTGCCACTAGGATTTTCTTTGTATGATTTGTTTACAAATCCTGTAATCTAGTCAAAAGAAAAGCCAAAATTTTTCTTTGTATGATTTGTTTACAAATCCTCTAATCTAGTCAAAGAAAAGCCAAATTTATCCCTCCTGGTCCCCTACATCACGTAGCTATGTGGCCCGCAAGCAGATGAAAGCAGCCCCGTCAGCCGACGCCGACGCCGACGCCAACACATCCTGCTCCTCCCTCGCCGGCGCCGGCGCCGGCGAGGCCGCACCGCCGCTGCCCCGTGGCCGCAGGCACACGGTGCCGCACTGCCGCCGCCCCGTGGCCGCAGGCACACGGTGCCGCACTGCCGCCGCCTCCCCTTCCGGCATTGCCGGACGGCTGGGCTACTGTCCCCGCCGCCTTCCCAAT(配列番号36)
GTATGCAGCCTCGCTTCCTCCTCGCTACCGTTTCAATTCTGGAGTAGGTCGTAGAGGATACCATGTTGATTTGACAGAGGGAGTAGATTAGATACTTGTAGATCGAAGTGCGGATGTTCCATGGTAGATGATACCATGTTGATTTCGATTAGATCGGATTAAATCTTTGTAGATCGAAGTGCGCATGTTCCATGAATTGCCTGTTACCAGTAGATTCAAGTTTTTCTGTGTTATAGAGGTGGGATCTACTCGTTGAGATGATTAGCTCCTAGAGGACACCATGCCGTTTTGGAAAATAGATCAGAACCGTGTAGATCGATGTGAGCATGTGTTCCTGTAGATCCAAGTTCTTTCGCATGTTACTAGTTGTGATCTATTGTTTGTGTAATACGCTCTCGATCTATCCGTGTAGATTTCACTCGATTACTGTTACTGTGGCTTGATCGTTCATAGTTGTTCGTTAGGTTTGATCGAACAGTGTCTGAACCTAATTGGATATGTATTCTTGATCTATCAACGTGTAGGTTTCAGTCATGTATTTATGTACTCCCTCCGTCCCAAATTAACTGACGTGGATTTTGTATAAGAATCTATACAAATCCATGTCAGTTAATTCGGGATGGAGTACCATATTCAATAATTTGTTTATTGCTGTCCACTTATGTACCATATGTTTGTTGTTCCTCATGTGGATTCTACTAATTATCATTGATTGGTGATCTTCTATTTTGCTAGTTTCCTAGCTCAATCTGGTTATTCATGTAGATGTGTTGTTGAAATCGGAGACCATGCTTGTTATTAGATAGTTTATTGCTTATCAGTTTCATGTTCTGGTTGATGCAACACATATTCATGTTCGCTATCTGGTTGCTGCTTGATATTCTCTGATTTACATTCATTATAAGAATATATTCTGCTCTGGTTGTTGCTTCTCATGACTTTACCTACTCGGTAGGTGACTTACCTTTTGGTTTACAATTGTCAACTATGCAG(配列番号7)
実施形態では、イントロンがミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)ユビキチン1(Ubi1)イントロンであり得る。
GTATGTAGCCTCTCGATTCCTCCTCAGCCCTGCCCTCGATTTGGTGTACGCGTTGAGATGATGATCTCGTAGATGTCTAGATGACACCATGTCGATTTGAAATAGATCAGATCCGTGTAGATCGATGAGCTCCTGTGTACCTGTGGATTCAAGTTATTTTCGCATGCTATTGTTGTGATCTACTAGATCTAGTGTGTGTATTCTATGCTATCGATTTCTCCGTGTAGATTTCACTCGATTACTGTTACTGTGGCTTGATCGGCCATAGATGTTGGTTAAGGTTTGATCGGTTAGTGTTTGAACCTGCGTGGATATCTAGCATCCATCTATTATCGTGTAGGTTTCGAACAAACAAGCACTATTATTGTACTGATGGTTCGTCTATGGTTGGTTTTGACCGTTTTAGTGTTGAACGAGCCTTCTGTATTTGTTTATTGCTGTCCAGTGATGTACCATGTTCGTTGAGTGTCGGATTATACTAATTATTGTTGATTGATAATCTTGTAGTTTGCTTTTCCTAATTTATTTATCGTAGTCCTGATTTGCCTCAGCTGTGCCTCACCCGTGCGATGGTCAATCAACTTGTTAGCCCAATCTGCTTAATCATGTACATTTGTTGTTAGAATCAGAGATCAAGCCAATTAGCTATCTTATTGCTTATCTGTTCCATGTTCTGATCGATGTAACAGTCTACACTTTTGCTCTGTGCTACTTGATTAAAACATTCTGACTTAAATTCATGATTGGAAGTTTCAGATCTGATTGTTGCCTTACTTGACTAATATCTATTCATGTGACACCTCTCTGTCTTGGTAACTTACCGCTGTTTGTTTGTAATTTCTGACTATGCAG(配列番号8)
実施形態では、イントロンがアワ(Setaria italica)ユビキチン2(Ubi2)イントロン1であり得る。
GTCACGGGTTCCTTCCCCACCTCTCCTCTTCCCCACCGCCATAAATAG(配列番号9)
実施形態では、イントロンがアワ(Setaria italica)ユビキチン2(Ubi2)イントロン2であり得る。
GTACGGCGATCGTCTTCCTCCTCTAGATCGGCGTGATCTGCAAGTAGTTGATTTGGTAGATGGTTAGGATCTGTGCACTGAAGAAATCATGTTAGATCCGCGATGTTTCTGTTCGTAGATGGCTGGGAGGTGGAATTTTTGTGTAGATCTGATATGTTCTCCTGTTTATCTTGTCACGCTCCTGCGATTTGTGGGGATTTTAGGTCGTTGATCTGGGAATCGTGGGGTTGCTTCTAGGCTGTTCGTAGATGAGGTCGTTCTCACGGTTTACTGGATCATTGCCTAGTAGATCAGCTCGGGCTTTCGTCTTTGTATATGGTGCCCATACTTGCATCTATGATCTGGTTCCGTGGTGTTACCTAGGTTTCTGCGCCTGATTCGTCCGATCGATTTTGTTAGCATGTGGTAAACGTTTGGTCATGGTCTGATTTAGATTAGAGTCGAATAGGATGATCTCGATCTAGCTCTTGGGATTAATATGCATGTGTCACCAATCTGTTCCGTGGTTAAGATGATGAATCTATGCTTAGTTAATGGGTGTAGATATATATGCTGCTGTTCCTCAATGATGCCGTAGCTTTTACCTGAGCAGCATGGATCCTCCTGTTACTTAGGTAGATGCACATGCTTATAGATCAAGATATGTACTGCTACTGTTGGAATTCTTTAGTATACCTGATGATCATCCATGCTCTTGTTACTTGTTTTGGTATACTTGGATGATGGCATGCTGCTGCTTTTTGTTGATTTGAGCCCATCCATATCTGCATATGTCACATGATTAAGATGATTACGCTGTTTCTGTATGATGCCATAGCTTTTATGTGAGCAACATGCATCCTCCTGGTTATATGCATTAATAGATGGAAGATATCTATTGCTACAATTTGATGATTATTTTGTACATACGATGATCAAGCATGCTCTTCATACTTTGTTGATATACTTGGATAATGAAATGCTGCTGCACGTTCATTCTATAGCACTAATGATGTGATGAACACGCACGACCTGTTTGTGGCATCTGTTTGAATGTGTTGTTGCTGTTCACTAGAGACTGTTTTATTAACCTACTGCTAGATACTTACCCTTCTGTCTGTTTATTCTTTTGCAG(配列番号10)
実施形態では、イントロンがパニクム・ヴィルガツム(Panicum virgatum)(スイッチグラス)ユビキチンイントロンであり得る。
GTACTCCTACCTAATCCTCCTTAACTGATCTCTCCTCTATCACGTTGGTAATCTTCGAATGATCTGCTGCCTGGCTCGCTGTTCCCCCTCGTTATGCACTGTTTCCATCACGAGTTTTTTTTTTCATCATCTAATCTATGCGGTTGCGGAAGAATTGTGGCTAGTGGAGTAGTTTTCTGTGCTTGATCGGTAGATTCGATGTGTGGGTGTATGGATGTTTTCTGAAAAGTTGCTGGATTAGTTTACGCTTTCAGGCCGCAGGTCTGTTCGAAATTGATTATGAAGTCTATATGCTTTGGATCTATCGATTTCCAGTTTTATTCAGATGTAGGCCAAAAAATTGTCGGCATTTGTGTGGAATTAGTTGGCCTTTAGGTCTGCACATTCATGGTGACGGCACAGTTGCTGCTGGCTGTTGCGTGGGACGAGTTATTATAGTTGTTTTTGTTTTTCCCTGATTGATTCACATTTTCAATGATAACTAGCCTTTGTCACCTAACCAAGTCCAGGTTGATCCTATCTGTGTTCTTCAGCTACCAGTTTGCATAGATGATGGTGTATTCGATTGCTTTAGTAGGCCTTCTGATTTCACATCTAATTCTGTCATGAATATAGATAACTTTACATGCTTTTGATATACTTTATATTTGAACTGTTCACTGTCCAGCCTATTTTGGATAATTGAGTGCATTGGCTTTTGATGCCTGAATTATTCACATGTTCCTGGATAATTGACCTGTGTCACCTAGTTGACTGTTTTTTGAGGTGCCACCCGTCTGTTCAGCTGATTTGTGTATTCGATTGCTCTAGTTAATCTTTTGATTATGCAGCTAGTGCTTTGTCATATGTAGCTTTATAGGCTTCTGATGTCCTTGGATATAGTTCAGTCTACTTGTCAAGTTGCTTTACAAGTAGTAGCTCTGATTCTATTTGGCTTCCTGAGTCAGAGCTTTGCAAATTGCTTGTTGTTACATTACATCATATTACTTGAATTGCAGTTATTTAATGGTTGGATTGTTGCTGTTTACTTCTACATTTTTTGCTGTTTTATATTATACTAAAATGTTTGTGTTGCTGCTTTTCAG(配列番号37)
CCGATCGAAAAGTCCCCGCAAGAGCAAGCGACCGATCTCGTGAATCTCCGTCAAG(配列番号11)
CCAATCCAGCACCCCCGATCCCGATCGAAAATTCTCCGCAACAGCAAGCGATCGATCTAGCGAATCCCCGTCAAG(配列番号12)
AGAAATATCAACTGGTGGGCCACGCACATCAGCGTCGTGTAACGTGGACGGAGGAGCCCCGTGACGGCGTCGACATCGAACGGCCACCAACCACGGAACCACCCGTCCCCACCTCTCGGAAGCTCCGCTCCACGGCGTCGACATCTAACGGCTACCAGCAGGCGTACGGGTTGGAGTGGACTCCTTGCCTCTTTGCGCTGGCGGCTTCCGGAAATTGCGTGGCGGAGACGAGGCGGGCTCGTCTCACACGGCACGGAAGAC(配列番号13)
CCGACCCCCTCGCCTTTCTCCCCAATCTCATCTCGTCTCGTGTTGTTCGGAGCACACCACCCGCCCCAAATCGTTCTTCCCGCAAGCCTCGGCGATCCTTCACCCGCTTCAAG(配列番号14)
CAAGTTCGCGATCTCTCGATTTCACAAATCGCCGAGAAGACCCGAGCAGAGAAGTTCCCTCCGATCGCCTTGCCAAG(配列番号38)。
a)5’非翻訳領域;
b)イントロン;および
c)3’非翻訳領域
の1つまたは複数とを含む核酸構築物であって、
プロモーターが配列番号1、配列番号2、配列番号3もしくは配列番号35または配列番号1、配列番号2、配列番号3もしくは配列番号35と98%の配列同一性を有する配列からなり;
5’非翻訳領域が配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14もしくは配列番号38または配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14もしくは配列番号38と98%の配列同一性を有する配列からなり;
イントロンが配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10もしくは配列番号37または配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10もしくは配列番号37と98%の配列同一性を有する配列からなり;
3’非翻訳領域が配列番号4、配列番号5、配列番号6もしくは配列番号36または配列番号4、配列番号5、配列番号6もしくは配列番号36と98%の配列同一性を有する配列からなり;
さらに前記プロモーターが前記ポリリンカーと作動可能に連結しており、存在する場合、各任意のエレメントもプロモーターとポリリンカーの両方と作動可能に連結している、核酸構築物が提供される。
a)5’非翻訳領域;
b)イントロン;および
c)3’非翻訳領域
の1つまたは複数とを含む核酸構築物であって、
プロモーターが配列番号1、配列番号2、配列番号3もしくは配列番号35または配列番号1、配列番号2、配列番号3もしくは配列番号35と98%の配列同一性を有する配列からなり;
5’非翻訳領域が配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14もしくは配列番号38または配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14もしくは配列番号38と98%の配列同一性を有する配列からなり;
イントロンが配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10もしくは配列番号37または配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10もしくは配列番号37と98%の配列同一性を有する配列からなり;
3’非翻訳領域が配列番号4、配列番号5、配列番号6もしくは配列番号36または配列番号4、配列番号5、配列番号6もしくは配列番号36と98%の配列同一性を有する配列からなり;
さらに前記プロモーターが前記導入遺伝子と作動可能に連結しており、存在する場合、各任意のエレメントもプロモーターと導入遺伝子の両方と作動可能に連結している、核酸構築物が提供される。さらなる実施形態では、直前に開示される核酸構築物を含むトランスジェニック細胞が提供される。一実施形態では、トランスジェニック細胞が植物細胞であり、さらなる実施形態では、前記トランスジェニック細胞を含む植物が提供される。
CTGCTCGTTCAGCCCACAGTAACACGCCGTGCGACATGCAGATGCCCTCCACCACGCCGACCAACCCCAAGTCCGCCGCGCTCGTCCACGGCGCCATCCGCATCCGCGCGTCAACGTCATCCGGAGGAGGCGAGCGCGATGTCGACGGCCACGGCGGCGGCGGACACGACGGCGACGCCCCGACTCCGCGCGCGCGTCAAGGCTGCAGTGGCGTCGTGGTGGCCGTCCGCCTGCACGAGATCCCCGCGTGGACGAGCGCCGCCTCCACCCAGCCCCTATATCGAGAAATCAACGGTGGGCTCGAGCTCCTCAGCAACCTCCCCACCCCCCCTTCCGACCACGCTCCCTTCCCCCGTGCCCCTCTTCTCCGTAAACCCGAGCCGCCGAGAACAACACCAACGAAAGGGCGAAGAGAATCGCCATAGAGAGGAGATGGGCGGAGGCGGATAGTTTCAGCCATTCACGGAGAAATGGGGAGGAGAGAACACGACATCATACGGACGCGACCCTCTAGCTGGCTGGCTGTCCTAAAGAATCGAACGGAATCGCTGCGCCAGGAGAAAACGAACGGTCCTGAAGCATGTGCGCCCGGTTCTTCCAAAACACTTATCTTTAAGATTGAAGTAGTATATATGACTGAAATTTTTACAAGGTTTTTCCCCATAAAACAGGTGAGCTTATCTCATCCTTTTGTTTAGGATGTACGTATTATATATGACTGAATATTTTTTATTTTCATTGAATGAAGATTTTCGACCCCCCAAAAATAAAAAACGGAGGGAGTACCTTTGTGCCGTGTATATGGACTAGAGCCATCGGGACGTTTCCGGAGACTGCGTGGTGGGGGCGATGGACGCACAACGACCGCATTTTCGGTTGCCGACTCGCCGTTCGCATCTGGTAGGCACGACTCGTCGGGTTCGGCTCTTGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACCCGTTCTCTTCCCCCGTCTGGCCATCCATAAATCCCCCCTCCATCGGCTTCCCTTTCCTCAATCCAGCACCCTGATTCCGATCGAAAAGTCCCCGCAAGAGCAAGCGACCGATCTCGTGAATCTCCGTCAAGGTATGCAGCCTCGCTTCCTCCTCGCTACCGTTTCAATTCTGGAGTAGGTCGTAGAGGATACCATGTTGATTTGACAGAGGGAGTAGATTAGATACTTGTAGATCGAAGTGCGGATGTTCCATGGTAGATGATACCATGTTGATTTCGATTAGATCGGATTAAATCTTTGTAGATCGAAGTGCGCATGTTCCATGAATTGCCTGTTACCAGTAGATTCAAGTTTTTCTGTGTTATAGAGGTGGGATCTACTCGTTGAGATGATTAGCTCCTAGAGGACACCATGCCGTTTTGGAAAATAGATCAGAACCGTGTAGATCGATGTGAGCATGTGTTCCTGTAGATCCAAGTTCTTTCGCATGTTACTAGTTGTGATCTATTGTTTGTGTAATACGCTCTCGATCTATCCGTGTAGATTTCACTCGATTACTGTTACTGTGGCTTGATCGTTCATAGTTGTTCGTTAGGTTTGATCGAACAGTGTCTGAACCTAATTGGATATGTATTCTTGATCTATCAACGTGTAGGTTTCAGTCATGTATTTATGTACTCCCTCCGTCCCAAATTAACTGACGTGGATTTTGTATAAGAATCTATACAAATCCATGTCAGTTAATTCGGGATGGAGTACCATATTCAATAATTTGTTTATTGCTGTCCACTTATGTACCATATGTTTGTTGTTCCTCATGTGGATTCTACTAATTATCATTGATTGGTGATCTTCTATTTTGCTAGTTTCCTAGCTCAATCTGGTTATTCATGTAGATGTGTTGTTGAAATCGGAGACCATGCTTGTTATTAGATAGTTTATTGCTTATCAGTTTCATGTTCTGGTTGATGCAACACATATTCATGTTCGCTATCTGGTTGCTGCTTGATATTCTCTGATTTACATTCATTATAAGAATATATTCTGCTCTGGTTGTTGCTTCTCATGACTTTACCTACTCGGTAGGTGACTTACCTTTTGGTTTACAATTGTCAACTATGCAG(配列番号15)
の配列を含むまたはその配列からなる。
GGCGTCAGGACTGGCGAAGTCTGGACTCTGCAGGGCCGAACTGCTGAAGACGAAGCAGAGGAAGAGAAAGGGAAGTGTTCGACTTGTAATTTGTAGGGGTTTTTTTTAGAGGAACTTGTAATTTGTAGGTGGGCTGGCCTCGTTGGAAAAACGATGCTGGCTGGTTGGGCTGGGCCGATGTACGCTTGCAAACAACTTGTGGCGGCCCGTTCTGGACGAGCAGGAGTTTCTTTTTTGTTCTCACTTTTCTGGTCTTCTTTAGTTACGGAGTACCTTTTGTTTTTTAAAGGAGTTACCTTTTTTTTAGGAATTCTTTAGTTACCTTTCGCTTGCTCTCAAAAAATATTTAACTTTCGCTTTTTTTCATTTTAATTTTTGCAACTATTTACGAGTTTCATGAATGCTTATTTTCCAGCATATCATTATTTGCAAGTATTTTTATGCCGTATGTATTGGACGAGAGCCATCGGGACTGTTCCAGAGACTGCGTGGTGGGGACGGCTCCCAACCGCCTTTTCTATCTCTGTTCGCATCCGGTGGCCGACTTGGCTCGCGCGTGAGCCGTGACGTAACAGACTTGGTCTCTTCCCCATCTGGCCATCTATAAATTCCCCCATCGATCGACCCTCCCTTTCCCCAATCCAGCACCCCCGATCCCGATCGAAAATTCTCCGCAACAGCAAGCGATCGATCTAGCGAATCCCCGTCAAGGTATGTAGCCTCTCGATTCCTCCTCAGCCCTGCCCTCGATTTGGTGTACGCGTTGAGATGATGATCTCGTAGATGTCTAGATGACACCATGTCGATTTGAAATAGATCAGATCCGTGTAGATCGATGAGCTCCTGTGTACCTGTGGATTCAAGTTATTTTCGCATGCTATTGTTGTGATCTACTAGATCTAGTGTGTGTATTCTATGCTATCGATTTCTCCGTGTAGATTTCACTCGATTACTGTTACTGTGGCTTGATCGGCCATAGATGTTGGTTAAGGTTTGATCGGTTAGTGTTTGAACCTGCGTGGATATCTAGCATCCATCTATTATCGTGTAGGTTTCGAACAAACAAGCACTATTATTGTACTGATGGTTCGTCTATGGTTGGTTTTGACCGTTTTAGTGTTGAACGAGCCTTCTGTATTTGTTTATTGCTGTCCAGTGATGTACCATGTTCGTTGAGTGTCGGATTATACTAATTATTGTTGATTGATAATCTTGTAGTTTGCTTTTCCTAATTTATTTATCGTAGTCCTGATTTGCCTCAGCTGTGCCTCACCCGTGCGATGGTCAATCAACTTGTTAGCCCAATCTGCTTAATCATGTACATTTGTTGTTAGAATCAGAGATCAAGCCAATTAGCTATCTTATTGCTTATCTGTTCCATGTTCTGATCGATGTAACAGTCTACACTTTTGCTCTGTGCTACTTGATTAAAACATTCTGACTTAAATTCATGATTGGAAGTTTCAGATCTGATTGTTGCCTTACTTGACTAATATCTATTCATGTGACACCTCTCTGTCTTGGTAACTTACCGCTGTTTGTTTGTAATTTCTGACTATGCAG(配列番号16)
の配列を含むまたはこの配列からなる。
TGCGTCTGGACGCACAAGTCATAGCATTATCGGCTAAAATTTCTTAATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCATTTCGTAGAACAAGAACAAGGTATCATATATATATATATATATAATATTTAAACTTTGTTAAGTGGAATCAAAGTGCTAGTATTAATGGAGTTTCATGTGCATTAAATTTTATGTCACATCAGCAATTTTGTTGACTTGGCAAGGTCATTTAGGGTGTGTTTGGAAGACAGGGGCTATTAGGAGTATTAAACATAGTCTAATTACAAAACTAATTGCACAACCGCTAAGCTGAATCGCGAGATGGATCTATTAAGCTTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGGTGCTACAATAACCATTTGCTAATGATGGATTACTTAGGTTTAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAATTTTGTAATTAGCTCATATTTAGTTCTTATAATTAGTATCCGAACATCCAATGTGACATGCTAAAGTTTAACCCTGGTATCCAAATGAAGTCTTATGAGAGTTTCATCACTCCGGTGGTATATGTACTTAGGCTCCGTTTTCTTCCACCGACTTATTTTTAGCACCCGTCACATTGAATGTTTAGATACTAATTAGAAGTATTAAACGTAGACTATTTACAAAATCCATTACATAAGACGAATCTAAACGGCGAGACGAATCTATTAAACCTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGTTGCTACAGTAAACATTTGCTAATGATGGATTAATTAGGCTTAATAGATTCGTCTCGCCGTTTAGCCTCCACTTATGTAATGGGTTTTCTAAACAATCTACGTTTAATACTCCTAATTAGTATCTAAATATTCAATGTGACACGTGCTAAAAATAAGTCAGTGGAAGGAAGAGAACGTCCCCTTAGTTTTCCATCTTATTAATTGTACGATGAAACTGTGCAGCCAGATGATTGACAATCGCAATACTTCAACTAGTGGGCCATGCACATCAGCGACGTGTAACGTCGTGAGTTGCTGTTCCCGTAGAGAAATATCAACTGGTGGGCCACGCACATCAGCGTCGTGTAACGTGGACGGAGGAGCCCCGTGACGGCGTCGACATCGAACGGCCACCAACCACGGAACCACCCGTCCCCACCTCTCGGAAGCTCCGCTCCACGGCGTCGACATCTAACGGCTACCAGCAGGCGTACGGGTTGGAGTGGACTCCTTGCCTCTTTGCGCTGGCGGCTTCCGGAAATTGCGTGGCGGAGACGAGGCGGGCTCGTCTCACACGGCACGGAAGACGTCACGGGTTCCTTCCCCACCTCTCCTCTTCCCCACCGCCATAAATAGCCGACCCCCTCGCCTTTCTCCCCAATCTCATCTCGTCTCGTGTTGTTCGGAGCACACCACCCGCCCCAAATCGTTCTTCCCGCAAGCCTCGGCGATCCTTCACCCGCTTCAAGGTACGGCGATCGTCTTCCTCCTCTAGATCGGCGTGATCTGCAAGTAGTTGATTTGGTAGATGGTTAGGATCTGTGCACTGAAGAAATCATGTTAGATCCGCGATGTTTCTGTTCGTAGATGGCTGGGAGGTGGAATTTTTGTGTAGATCTGATATGTTCTCCTGTTTATCTTGTCACGCTCCTGCGATTTGTGGGGATTTTAGGTCGTTGATCTGGGAATCGTGGGGTTGCTTCTAGGCTGTTCGTAGATGAGGTCGTTCTCACGGTTTACTGGATCATTGCCTAGTAGATCAGCTCGGGCTTTCGTCTTTGTATATGGTGCCCATACTTGCATCTATGATCTGGTTCCGTGGTGTTACCTAGGTTTCTGCGCCTGATTCGTCCGATCGATTTTGTTAGCATGTGGTAAACGTTTGGTCATGGTCTGATTTAGATTAGAGTCGAATAGGATGATCTCGATCTAGCTCTTGGGATTAATATGCATGTGTCACCAATCTGTTCCGTGGTTAAGATGATGAATCTATGCTTAGTTAATGGGTGTAGATATATATGCTGCTGTTCCTCAATGATGCCGTAGCTTTTACCTGAGCAGCATGGATCCTCCTGTTACTTAGGTAGATGCACATGCTTATAGATCAAGATATGTACTGCTACTGTTGGAATTCTTTAGTATACCTGATGATCATCCATGCTCTTGTTACTTGTTTTGGTATACTTGGATGATGGCATGCTGCTGCTTTTTGTTGATTTGAGCCCATCCATATCTGCATATGTCACATGATTAAGATGATTACGCTGTTTCTGTATGATGCCATAGCTTTTATGTGAGCAACATGCATCCTCCTGGTTATATGCATTAATAGATGGAAGATATCTATTGCTACAATTTGATGATTATTTTGTACATACGATGATCAAGCATGCTCTTCATACTTTGTTGATATACTTGGATAATGAAATGCTGCTGCACGTTCATTCTATAGCACTAATGATGTGATGAACACGCACGACCTGTTTGTGGCATCTGTTTGAATGTGTTGTTGCTGTTCACTAGAGACTGTTTTATTAACCTACTGCTAGATACTTACCCTTCTGTCTGTTTATTCTTTTGCAG(配列番号17)
の配列を含むまたはこの配列からなる。
TGCGTCTGGACGCACAAGTCATAGCATTATCGGCTAAAATTTCTTAATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCATTTCGTAGAACAAGAACAAGGTATCATATATATATATATATATAATATTTAAACTTTGTTAAGTGGAATCAAAGTGCTAGTATTAATGGAGTTTCATGTGCATTAAATTTTATGTCACATCAGCAATTTTGTTGACTTGGCAAGGTCATTTAGGGTGTGTTTGGAAGACAGGGGCTATTAGGAGTATTAAACATAGTCTAATTACAAAACTAATTGCACAACCGCTAAGCTGAATCGCGAGATGGATCTATTAAGCTTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGGTGCTACAATAACCATTTGCTAATGATGGATTACTTAGGTTTAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAATTTTGTAATTAGCTCATATTTAGTTCTTATAATTAGTATCCGAACATCCAATGTGACATGCTAAAGTTTAACCCTGGTATCCAAATGAAGTCTTATGAGAGTTTCATCACTCCGGTGGTATATGTACTTAGGCTCCGTTTTCTTCCACCGACTTATTTTTAGCACCCGTCACATTGAATGTTTAGATACTAATTAGAAGTATTAAACGTAGACTATTTACAAAATCCATTACATAAGACGAATCTAAACGGCGAGACGAATCTATTAAACCTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGTTGCTACAGTAAACATTTGCTAATGATGGATTAATTAGGCTTAATAGATTCGTCTCGCCGTTTAGCCTCCACTTATGTAATGGGTTTTCTAAACAATCTACGTTTAATACTCCTAATTAGTATCTAAATATTCAATGTGACACGTGCTAAAAATAAGTCAGTGGAAGGAAGAGAACGTCCCCTTAGTTTTCCATCTTATTAATTGTACGATGAAACTGTGCAGCCAGATGATTGACAATCGCAATACTTCAACTAGTGGGCCATGCACATCAGCGACGTGTAACGTCGTGAGTTGCTGTTCCCGTAGAGAAATATCAACTGGTGGGCCACGCACATCAGCGTCGTGTAACGTGGACGGAGGAGCCCCGTGACGGCGTCGACATCGAACGGCCACCAACCACGGAACCACCCGTCCCCACCTCTCGGAAGCTCCGCTCCACGGCGTCGACATCTAACGGCTACCAGCAGGCGTACGGGTTGGAGTGGACTCCTTGCCTCTTTGCGCTGGCGGCTTCCGGAAATTGCGTGGCGGAGACGAGGCGGGCTCGTCTCACACGGCACGGAAGACGTCACGGGTTCCTTCCCCACCTCTCCTCTTCCCCACCGCCATAAATAG(配列番号41)
の配列を含むまたはこの配列からなる。
TTGAATTTTAATTTCAAATTTTGCAGGGTAGTAGTGGACATCACAATACATATTTAGAAAAAGTTTTATAATTTTCCTCCGTTAGTTTTCATATAATTTTGAACTCCAACGATTAATCTATTATTAAATATCCCGATCTATCAAAATAATGATAAAAATTTATGATTAATTTTTCTAACATGTGTTATGGTGTGTACTATCGTCTTATAAAATTTCAACTTAAAACTCCACCTATACATGGAGAAATGAAAAAGACGAATTACAGTAGGGAGTAATTTGAACCAAATGGAATAGTTTGAGGGTAAAATGAACTAAACAATAGTTTAGGAGGTTATTCAGATTTTAGTTATAGTTGAGAGGAGTAATTTAGACTTTTTCCTATCTTGAATTGTTGACGGCTCTCCTATCGGATATCGGATGGAGTCTTTCAGCCCAACATAACTTCATTCGGGCCCAAACGTTCGTCCATCCAGCCTAGGGAGAACATTTTGCCCATGATATCTGTTTTTCTTTTTTTCTATTTTCACTGGTATTATAGGAGGGAAATATACAACGTGTTCACCTTTGGTTTCATTCTTGTTCCATCTGAATTTATCTAAAACTGTGTTTGAACTTCGTAAGAATTTTGTTCGATCTGTCCGGTACATCGTGTTGATAGGTGGCCTCCGAGATTCTTCTTTTTAACCGGCAAAGTAAAATAATCTCAGCTCCAGCCTAACGTCAATTATCAGAGAGAGAAAAAAATATTTTTTTATGATTGATCGGAAACCAACCGCCTTACGTGTCGATCCTGGTTCCTGGCCGGCACGGCGGAGGAAAGCGACCGACCTCGCAACGCCGGCGCACGGCGCCGCCGTGTTGGACTTGGTCTCCCGCGACTCCGTGGGCCTCGGCTTATCGCCGCCGCTCCATCTCAACCGTCCGCTTGGACACGTGGAAGTTGATCCGTCGCGCACCAGCCTCGGAGGTAACCTAACTGCCCGTACTATAAATCCGGGATCCGGCCTCTCCAATCCCCATCGCCACAAGTTCGCGATCTCTCGATTTCACAAATCGCCGAGAAGACCCGAGCAGAGAAGTTCCCTCCGATCGCCTTGCCAAGGTACTCCTACCTAATCCTCCTTAACTGATCTCTCCTCTATCACGTTGGTAATCTTCGAATGATCTGCTGCCTGGCTCGCTGTTCCCCCTCGTTATGCACTGTTTCCATCACGAGTTTTTTTTTTCATCATCTAATCTATGCGGTTGCGGAAGAATTGTGGCTAGTGGAGTAGTTTTCTGTGCTTGATCGGTAGATTCGATGTGTGGGTGTATGGATGTTTTCTGAAAAGTTGCTGGATTAGTTTACGCTTTCAGGCCGCAGGTCTGTTCGAAATTGATTATGAAGTCTATATGCTTTGGATCTATCGATTTCCAGTTTTATTCAGATGTAGGCCAAAAAATTGTCGGCATTTGTGTGGAATTAGTTGGCCTTTAGGTCTGCACATTCATGGTGACGGCACAGTTGCTGCTGGCTGTTGCGTGGGACGAGTTATTATAGTTGTTTTTGTTTTTCCCTGATTGATTCACATTTTCAATGATAACTAGCCTTTGTCACCTAACCAAGTCCAGGTTGATCCTATCTGTGTTCTTCAGCTACCAGTTTGCATAGATGATGGTGTATTCGATTGCTTTAGTAGGCCTTCTGATTTCACATCTAATTCTGTCATGAATATAGATAACTTTACATGCTTTTGATATACTTTATATTTGAACTGTTCACTGTCCAGCCTATTTTGGATAATTGAGTGCATTGGCTTTTGATGCCTGAATTATTCACATGTTCCTGGATAATTGACCTGTGTCACCTAGTTGACTGTTTTTTGAGGTGCCACCCGTCTGTTCAGCTGATTTGTGTATTCGATTGCTCTAGTTAATCTTTTGATTATGCAGCTAGTGCTTTGTCATATGTAGCTTTATAGGCTTCTGATGTCCTTGGATATAGTTCAGTCTACTTGTCAAGTTGCTTTACAAGTAGTAGCTCTGATTCTATTTGGCTTCCTGAGTCAGAGCTTTGCAAATTGCTTGTTGTTACATTACATCATATTACTTGAATTGCAGTTATTTAATGGTTGGATTGTTGCTGTTTACTTCTACATTTTTTGCTGTTTTATATTATACTAAAATGTTTGTGTTGCTGCTTTTCAG(配列番号39)
の配列を含むまたはこの配列からなる。
TGCGTCTGGACGCACAAGTCATAGCATTATCGGCTAAAATTTCTTAATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCATTTCGTAGAACAAGAACAAGGTATCATATATATATATATATATAATATTTAAACTTTGTTAAGTGGAATCAAAGTGCTAGTATTAATGGAGTTTCATGTGCATTAAATTTTATGTCACATCAGCAATTTTGTTGACTTGGCAAGGTCATTTAGGGTGTGTTTGGAAGACAGGGGCTATTAGGAGTATTAAACATAGTCTAATTACAAAACTAATTGCACAACCGCTAAGCTGAATCGCGAGATGGATCTATTAAGCTTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGGTGCTACAATAACCATTTGCTAATGATGGATTACTTAGGTTTAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAATTTTGTAATTAGCTCATATTTAGTTCTTATAATTAGTATCCGAACATCCAATGTGACATGCTAAAGTTTAACCCTGGTATCCAAATGAAGTCTTATGAGAGTTTCATCACTCCGGTGGTATATGTACTTAGGCTCCGTTTTCTTCCACCGACTTATTTTTAGCACCCGTCACATTGAATGTTTAGATACTAATTAGAAGTATTAAACGTAGACTATTTACAAAATCCATTACATAAGACGAATCTAAACGGCGAGACGAATCTATTAAACCTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGTTGCTACAGTAAACATTTGCTAATGATGGATTAATTAGGCTTAATAGATTCGTCTCGCCGTTTAGCCTCCACTTATGTAATGGGTTTTCTAAACAATCTACGTTTAATACTCCTAATTAGTATCTAAATATTCAATGTGACACGTGCTAAAAATAAGTCAGTGGAAGGAAGAGAACGTCCCCTTAGTTTTCCATCTTATTAATTGTACGATGAAACTGTGCAGCCAGATGATTGACAATCGCAATACTTCAACTAGTGGGCCATGCACATCAGCGACGTGTAACGTCGTGAGTTGCTGTTCCCGTAGCCGACCCCCTCGCCTTTCTCCCCAATCTCATCTCGTCTCGTGTTGTTCGGAGCACACCACCCGCCCCAAATCGTTCTTCCCGCAAGCCTCGGCGATCCTTCACCCGCTTCAAG(配列番号40)。
TGCGTCTGGACGCACAAGTCATAGCATTATCGGCTAAAATTTCTTAATTTCTAAATTAGTCATATCGGCTAAGAAAGTGGGGAGCACTATCATTTCGTAGAACAAGAACAAGGTATCATATATATATATATATATAATATTTAAACTTTGTTAAGTGGAATCAAAGTGCTAGTATTAATGGAGTTTCATGTGCATTAAATTTTATGTCACATCAGCAATTTTGTTGACTTGGCAAGGTCATTTAGGGTGTGTTTGGAAGACAGGGGCTATTAGGAGTATTAAACATAGTCTAATTACAAAACTAATTGCACAACCGCTAAGCTGAATCGCGAGATGGATCTATTAAGCTTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGGTGCTACAATAACCATTTGCTAATGATGGATTACTTAGGTTTAATAGATTCGTCTCGTGATTTAGCCTATGGGTTCTGCTATTAATTTTGTAATTAGCTCATATTTAGTTCTTATAATTAGTATCCGAACATCCAATGTGACATGCTAAAGTTTAACCCTGGTATCCAAATGAAGTCTTATGAGAGTTTCATCACTCCGGTGGTATATGTACTTAGGCTCCGTTTTCTTCCACCGACTTATTTTTAGCACCCGTCACATTGAATGTTTAGATACTAATTAGAAGTATTAAACGTAGACTATTTACAAAATCCATTACATAAGACGAATCTAAACGGCGAGACGAATCTATTAAACCTAATTAGTCCATGATTTGACAATGTGTTGCTACAGTAAACATTTGCTAATGATGGATTAATTAGGCTTAATAGATTCGTCTCGCCGTTTAGCCTCCACTTATGTAATGGGTTTTCTAAACAATCTACGTTTAATACTCCTAATTAGTATCTAAATATTCAATGTGACACGTGCTAAAAATAAGTCAGTGGAAGGAAGAGAACGTCCCCTTAGTTTTCCATCTTATTAATTGTACGATGAAACTGTGCAGCCAGATGATTGACAATCGCAATACTTCAACTAGTGGGCCATGCACATCAGCGACGTGTAACGTCGTGAGTTGCTGTTCCCGTAGAGAAATATCAACTGGTGGGCCACGCACATCAGCGTCGTGTAACGTGGACGGAGGAGCCCCGTGACGGCGTCGACATCGAACGGCCACCAACCACGGAACCACCCGTCCCCACCTCTCGGAAGCTCCGCTCCACGGCGTCGACATCTAACGGCTACCAGCAGGCGTACGGGTTGGAGTGGACTCCTTGCCTCTTTGCGCTGGCGGCTTCCGGAAATTGCGTGGCGGAGACGAGGCGGGCTCGTCTCACACGGCACGGAAGAC(配列番号42)
レポーター遺伝子としても記載されている種々の選択マーカーを、選択された発現ベクターに組み込んで形質転換した植物(「形質転換体」)の同定および選択を可能にすることができる。例えば、DNA配列決定およびPCR(ポリメラーゼ連鎖反応)、サザンブロット法、RNAブロット法、ベクターから発現したタンパク質、例えば、ホスフィノトリシン耐性を媒介する沈殿タンパク質を検出するための免疫学的方法、またはβ−グルクロニダーゼ(GUS)、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質(GFP)、黄色蛍光タンパク質(YFP)、DsRed、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)、アルカリホスファターゼなどをコードするレポーター遺伝子などの他のタンパク質の目視観察を含む多くの方法が、形質転換した植物中の選択マーカーの発現を確認するために利用可能である(その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Press, N. Y., 2001参照)。
植物の適当な形質転換方法には、DNAを細胞に導入することができる任意の方法、例えば、限定されないが、電気穿孔(例えば、米国特許第5384253号参照);微粒子銃(例えば、米国特許第5015580号、第5550318号、第5538880号、第6160208号、第6399861号および第6403865号参照);アグロバクテリウム(Agrobacterium)媒介形質転換(例えば、米国特許第5635055号、第5824877号、第5591616号、第5981840号および第6384301号参照);およびプロトプラスト形質転換(例えば、米国特許第5508184号参照)が含まれる。
実施形態では、植物中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンプロモーターを含む植物を成長させるステップを含む。実施形態では、植物中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチン5’−UTRを含む植物を成長させるステップを含む。実施形態では、植物中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンイントロンを含む植物を成長させるステップを含む。実施形態では、植物中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンプロモーター、ユビキチン5’−UTRおよびユビキチンイントロンを含む植物を成長させるステップを含む。実施形態では、植物中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチン3’−UTRを含む植物を成長させるステップを含む。実施形態では、植物組織または植物細胞中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンプロモーターを含む植物組織または植物細胞を培養するステップを含む。実施形態では、植物組織または植物細胞中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチン5’−UTRを含む植物組織または植物細胞を培養するステップを含む。実施形態では、植物組織または植物細胞中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンイントロンを含む植物組織または植物細胞を培養するステップを含む。実施形態では、植物組織または植物細胞中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンプロモーター、ユビキチン5’−UTRおよびユビキチンイントロンを含む植物組織または植物細胞を培養するステップを含む。実施形態では、植物組織または植物細胞中で少なくとも1つの導入遺伝子を発現させる方法が、少なくとも1つの導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチン3’−UTRを含む植物組織または植物細胞を培養するステップを含む。
実施形態では、植物、植物組織または植物細胞がユビキチンプロモーターを含む。実施形態では、ユビキチンプロモーターがパニクム・ヴィルガツム(Panicum virgatum)、ミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)またはアワ(Setaria italica)のユビキチンプロモーターであり得る。実施形態では、植物、植物組織または植物細胞がプロモーターを含む遺伝子発現カセットを含み、プロモーターが配列番号1、配列番号2、配列番号3または配列番号35と少なくとも80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%または100%同一であり、プロモーターが非ユビキチン導入遺伝子と作動可能に連結している。実施形態では、植物、植物組織または植物細胞が、非ユビキチン導入遺伝子と作動可能に連結している配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号35、配列番号15、配列番号16、配列番号17および配列番号39から選択される配列、または配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号35、配列番号15、配列番号16、配列番号17および配列番号39から選択される配列と90、95もしくは99.5%の配列同一性を有する配列を含む遺伝子発現カセットを含む。例示的実施形態では、植物、植物組織または植物細胞が導入遺伝子と作動可能に連結しているユビキチンプロモーターを含む遺伝子発現カセットを含み、導入遺伝子が殺虫剤耐性導入遺伝子、除草剤耐性導入遺伝子、窒素利用効率導入遺伝子、水利用効率導入遺伝子、栄養価導入遺伝子、DNA結合導入遺伝子、選択マーカー導入遺伝子またはこれらの組み合わせであり得る。
バイナリー発現ベクターを、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)菌株DAt13192(RecAマイナス三元菌株)(国際特許公開番号WO2012016222)に形質転換した。細菌コロニーを単離し、バイナリープラスミドDNAを単離し、制限酵素消化を介して確認した。
アグロバクテリウム(Agrobacterium)培養開始。アグロバクテリウム(Agrobacterium)培養液をグリセロールストックからアグロバクテリウム(AB)最少培地(その開示が参照により本明細書に組み込まれるWO2013090734に開示されている)上に面線接種し、暗所中20℃で3日間インキュベートした。次いで、アグロバクテリウム(Agrobacterium)培養液をYEP(WO2013090734参照)培地のプレート上に面線接種し、暗所中20℃で1日間インキュベートした。
トウモロコシユビキチンコード配列を、標的ゲノムとしてミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)およびアワ(Setaria italica)を用いて、Phytozome(Goodstein et al., 2012)データベースでBLASTx検索した。
トウモロコシユビキチン(ZM Ubi1)コード配列
4つのプロモーター配列を商業的に合成し、図3(pDAB113091)、図4(pDAB113092)、図5(pDAB113066)および図22(pDAB118238)に示されるプラスミドベクターに組み込んだ。同様に、4つの3’UTR/転写終結配列を商業的に合成し、図23(pDAB118237)、図24(pDAB118207)、図25(pDAB118208)および図26(pDAB118209)に示されるプラスミドベクターに組み込んだ。配列に、シームレスクローニング(seamless cloning)(GeneArt(登録商標)Seamless Cloning and Assembly Kit、Invitrogen、Carlsbad、CA)およびプロモーターフラグメントの単離用に挿入されるII型制限酵素部位のために、両端に15〜18個のヌクレオチド相同フラグメントを隣接させた。シームレスクローニング適合性トウモロコシ(Zea mays)Ubi1プロモーター(Christensen and Quail (1996) Transgenic Research. 5; 213-218; Christensen et al., (1992) Plant Molecular Biology. 18; 675-689)またはイネ(Oryzae sativa)アクチンプロモーター(McElroy et al., (1990) Plant Cell. 2; 163-71)、およびST−LS1イントロン(Vancanneyt et al., (1990) Mol Gen Genet. 220; 245-50)を含むPhiYFP(Shagin et al., (2004) Mol Biol Evol. 21; 841-50)コード配列、およびStPinIIまたは天然3’−UTR(An et al., 1989 Plant Cell. 1; 115-22.)フラグメントを、PCRまたはII型制限酵素を用いて得た。最後に、プロモーター::PhiYFP::StPinII 3’−UTRフラグメントを、シームレスクローニングを用いて組み立てて、一過性発現試験のための一過性発現ベクター(図6、pDAB113103;図7、pDAB113104;図8、pDAB113105;図9、pDAB113106;および図10、pDAB113107;図27、pDAB12043;図28、pDAB118234、図29、pDAB118235;および図30、pDAB118236)を創製した。これらの一過性発現ベクターを、Zm Ubi1プロモーターおよびAAD−1コード配列(国際特許公開第2005107437号)ならびにZm Lip 3’UTR(Paek et al., (1998) Molecules and Cells, 8(3): 336-342)を含むバイナリーベクターに組み込んだ。得られたバイナリーを、制限酵素消化および配列決定反応を介して確認した(図12、pDAB113117;図13、pDAB113118;図14、pDAB113119;図15、pDAB113120;図16、pDAB113121;図31、pDAB120400;図32、pDAB120404;図33、pDAB120401;および図34、pDAB120402)。
未成熟トウモロコシ(B104)胚の微粒子銃を用いて一過性発現を試験した。銃のために、ペトリ皿で1処理当たり、40個の胚を使用した。微粒子銃の一晩のインキュベーションの後、YFP像分析を行った。図19は、新規なプロモーターから得られたYFP発現レベルを示している。データは、新規なプロモーター(pDAB113103、pDAB113104およびpDAB113105)から得られたYFP発現レベルが、顕微鏡下で目視により観察されるようにZM Ubi1プロモーター(pDAB113106)およびOS Act1プロモーター(pDAB113107)から得られたYFP発現レベルに匹敵することを示している。植物組織をLeica EL6000−水銀メタルハライド(商標)顕微鏡で画像化した。共焦点および微分干渉(DIC)像をChroma 42003−ZsYellow 1(商標)フィルタを用いて取り込んだ。
加水分解プローブアッセイを介して、トランスジェニックトウモロコシ(Z. mays)植物のゲノム内へのyfp導入遺伝子の安定な取り込みを確認した。カルスから発達した安定に形質転換されたトランスジェニックトウモロコシ(Z. mays)小植物を得て、分析して低コピー数(1〜2コピー)の全長T鎖インサートを含むイベントを同定した。同定した小植物を温室に進め、成長させた。
タンパク質抽出
葉ELISAアッセイを用いて、T0植物をV4〜5でサンプリングした。試料を96ウェル収集管プレートに回収し、4枚の葉ディスク(紙の穴あけ器のサイズ)を各試料について取った。2つの4.5mm BBおよび200μL抽出緩衝液[0.05%Tween(登録商標)−20および0.05%BSA(Millipore Probumin(登録商標)、EMD Millipore Corp.、Billerica、MA)を補充した1×PBS]を各管に添加した。AAD1抽出のために、BSAの濃度を0.5%に増加させた。プレートを、全速力で3分間、KLECOビーズミルで処理した。抽出緩衝液をさらに200μLを各管に添加し、引き続いて反転させて混合した。プレートを3000rpmで5分間回転させた。上清を氷上で保管したディープウェル96の対応するウェルに移した。
Nunc(登録商標)96ウェルMaxi−Sorp Plate(Thermo Fisher Scientific Inc.、Rockford、IL)をELISAに使用した。プレートをマウスモノクローナル抗YFP捕捉抗体(OriGene Technologies Inc.、Rockville、MD)で被覆した。抗体をPBSに希釈し(1μg/mL)、1ウェル当たり希釈PBS 150μLを添加した。プレートを4℃で一晩インキュベートした。洗浄緩衝液[0.05%Tween(登録商標)−20(Sigma−Aldrich、St.Louis、MO)を補充した1×PBS]350μLで4回洗浄する前に、一晩プレートを室温で20〜30分間維持した。プレートを1ウェル当たりブロッキング緩衝液[0.05%Tween(登録商標)−20+0.5%BSA(Millipore Probumin(登録商標))を補充した1×PBS]200μLを用いて+37℃で最小1時間ブロッキングし、引き続いて洗浄緩衝液(Tomtec QuadraWash(商標)2、Tomec,Inc.、Hamden、CT)350μLで4回洗浄した。
低コピー数のバイナリープラスミドを含む全植物を温室で育てた。植物組織をLeica EL6000−水銀メタルハライド(商標)顕微鏡で画像化した。共焦点および微分干渉(DIC)像をChroma 42003−ZsYellow 1(商標)フィルタを用いて取り込んだ。本明細書に記載されるミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)ユビキチン1C、ミナトカモジグサ(Brachypodium distachyon)ユビキチン1およびアワ(Setaria italica)ユビキチン2プロモーターで形質転換したトウモロコシ(Z. mays)胚から得たトランスジェニックT0トウモロコシ植物のカルスおよび根組織中でのYFPの安定な発現の代表的な例を、図20および図21にそれぞれ提示する。プロモーターは、カルス(図20)と根(図21)植物組織の両方でyfpコード配列の強い発現を駆動した。
発現したYFPタンパク質のELISA解析から、追加のデータを作成した。ELISA解析により、新規なプロモーターが導入遺伝子の強い発現を駆動することがさらに確認された。新規なプロモーター構築物を含むトランスジェニック植物から得られたYFPタンパク質の定量的測定を図17および表6に示す。データは、新規なプロモーター(pDAB113117、pDAB113118およびpDAB113119)を含む植物中でのYFPタンパク質の発現が、Os Act1(イネアクチン1)プロモーター(pDAB113120)から得られたYFP発現よりも数倍高いことを示している。比較してみると、図18および表7は、類似のレベルのAAD1発現が全ての構築物から得られたことを示している。これは、AAD1が構築物の全てについてZm Ubi1プロモーターによって駆動されているためと予想される。
T0単一導入遺伝子コピー植物を、野生型B104トウモロコシ植物と戻し交雑してT1種子を得た。半接合性T1植物を分析に使用した。V4およびV12葉発現について1構築物当たり5つのイベントおよび1イベント当たり5〜10個の植物を使用した。他の組織型発現については、1構築物当たり3つのイベントおよび1イベント当たり3個の植物を使用した。接合状態分析をAAD1/YFPについて行った。
Claims (30)
- i)ポリリンカー配列;
ii)非ユビキチンの導入遺伝子または
iii)i)とii)の組み合わせ
と作動可能に連結しているプロモーターを含む核酸ベクターであって、前記プロモーターは配列番号3または配列番号3と90%の配列同一性を有する配列を含む、核酸ベクター。 - 前記プロモーターが長さ3kb未満である、請求項1に記載の核酸ベクター。
- 前記プロモーターが配列番号3または配列番号3と90%の配列同一性を有する配列からなる、請求項1に記載の核酸ベクター。
- 選択マーカーをコードする配列をさらに含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の核酸ベクター。
- 前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項4に記載の核酸ベクター。
- 前記導入遺伝子が殺虫剤耐性、除草剤耐性、窒素利用効率、水利用効率または栄養価を付与する選択マーカーまたは遺伝子産物をコードする、請求項5に記載の核酸ベクター。
- 配列番号6または配列番号6と90%の配列同一性を有する配列を含む3’非翻訳配列をさらに含み、前記3’非翻訳配列が前記ポリリンカーまたは前記導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項1から3または5のいずれかに記載の核酸ベクター。
- 配列番号13または配列番号13と90%の配列同一性を有する配列を含む5’非翻訳配列をさらに含み、前記5’非翻訳配列が前記プロモーター配列と前記ポリリンカーまたは導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、請求項1から3または5のいずれかに記載の核酸ベクター。
- 配列番号14または配列番号14と90%の配列同一性を有する配列を含む5’非翻訳配列をさらに含み、前記5’非翻訳配列が前記プロモーター配列と前記ポリリンカーまたは導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、請求項1から3または5のいずれかに記載の核酸ベクター。
- 前記5’非翻訳配列の後に挿入されたイントロン配列をさらに含む、請求項8または9に記載の核酸ベクター。
- 前記イントロン配列が配列番号9または配列番号10を含む、請求項10に記載の核酸ベクター。
- 前記プロモーターが配列番号17、配列番号40、配列番号41および配列番号42ならびに配列番号17、配列番号40、配列番号41および配列番号42と90%の配列同一性を有する配列からなる群から選択される配列からなり、前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項1に記載の核酸ベクター。
- 前記プロモーターが配列番号40または配列番号42の配列からなり、前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項1に記載の核酸ベクター。
- 前記プロモーターが配列番号17または配列番号17と90%の配列同一性を有する配列からなり、前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項1に記載の核酸ベクター。
- 配列番号6または配列番号6と90%の配列同一性を有する配列を含む3’非翻訳配列をさらに含み、前記3’非翻訳配列が前記導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項12、13または14に記載の核酸ベクター。
- 導入遺伝子と作動可能に連結している配列番号3または配列番号3と90%の配列同一性を有する配列を含む非セタリア属(Setaria)植物。
- トウモロコシ、コムギ、イネ、ソルガム、エンバク、ライムギ、バナナ、サトウキビ、ダイズ、ワタ、ヒマワリおよびセイヨウアブラナからなる群から選択される、請求項16に記載の植物。
- トウモロコシ(Zea mays)である、請求項16に記載の植物。
- 前記導入遺伝子が前記植物のゲノムに挿入されている、請求項16から18のいずれか一項に記載の植物。
- 配列番号13または配列番号13と90%の配列同一性を有する配列を含む5’非翻訳配列をさらに含み、前記5’非翻訳配列が前記プロモーターと前記導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、請求項16に記載の植物。
- 配列番号14または配列番号14と90%の配列同一性を有する配列を含む5’非翻訳配列をさらに含み、前記5’非翻訳配列が前記プロモーターと前記導入遺伝子との間に挿入されており、これらと作動可能に連結している、請求項16に記載の植物。
- 前記5’非翻訳配列の後に挿入されたイントロン配列をさらに含む、請求項20または21に記載の植物。
- 前記イントロン配列が配列番号9または配列番号10を含む、請求項22に記載の植物。
- 配列番号6または配列番号6と90%の配列同一性を有する配列を含む3’非翻訳配列をさらに含み、前記3’非翻訳配列が前記導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項20に記載の植物。
- 前記プロモーターが配列番号40、配列番号42、または配列番号40もしくは配列番号42と90%の配列同一性を有する配列からなり、前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項16に記載の植物。
- 前記プロモーターが配列番号17、配列番号41、または配列番号17もしくは配列番号41と90%の配列同一性を有する配列からなり、前記プロモーターが導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項16に記載の植物。
- 配列番号6または配列番号6と90%の配列同一性を有する配列を含む3’非翻訳配列をさらに含み、前記3’非翻訳配列が前記導入遺伝子と作動可能に連結している、請求項25または26に記載の植物。
- i)ポリリンカー配列;
ii)非ユビキチンの導入遺伝子または
iii)i)とii)の組み合わせ
と作動可能に連結している転写ターミネーターを含む核酸ベクターであって、前記転写ターミネーターは配列番号6または配列番号6と90%の配列同一性を有する配列を含む、核酸ベクター。 - 前記転写ターミネーターが長さ1kb未満である、請求項28に記載の核酸ベクター。
- 前記転写ターミネーターが配列番号6の3’UTR配列からなる、請求項29に記載の核酸ベクター。
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