JP2016521566A - 半生呼吸器合胞体ウイルスワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
麻疹及びいくつかのインフルエンザワクチンのものを含め、今日使用されるウイルスワクチンの多くは、弱毒化したウイルスに基づいており、良い、そして長期間持続する予防的な液性及び細胞性免疫反応を生じる(Amanna et al., N. Engl. J. Med. 357:1903−1915,2007)。このような生弱毒化ワクチンは、使用されるウイルスの病原性を減少させることによって、なおも生存状態を維持しながら(又は「生きている」)、作製される。
本発明によれば、本発明のゲノム複製欠損SeVベクターは、RSV感染及びRSV感染関連疾患に対するワクチンとしての使用に適した安全性の高いウイルスベクターを提供する。驚くべき事に、本発明のゲノム複製欠損SeVベクターは、ヒトへの使用に適した細胞を使用して、大量に高効率で産生することができることが見出された。これは、市販のワクチンのためにも最も重要である、本発明のウイルスワクチンベクターのコスト効率の高い製造を可能にする。さらに、本発明のゲノム複製欠損SeVベクターは、単純で再現可能な方法によって製造されることが可能であり、適当なその小さなゲノムサイズが、一定で、信頼性のある配列の監視を可能にする。
(i)本発明の宿主細胞を培養する工程、及び
(ii)該細胞培養物からゲノム複製欠損SeVベクターを回収する工程、
を含む。
(a)DNA分子を第一宿主細胞へと導入する工程であって、該DNA分子は、本発明のゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクターの核酸、又はその相補体をコードするものであって、
(b)該ゲノム複製欠損SeVベクターを製造するために、該第一宿主細胞を培養する工程、
(c)該第一細胞培養物から、ゲノム複製欠損SeVベクターを回収する工程、
(d)工程(c)で得られた該ゲノム複製欠損SeVベクターを、第二宿主細胞へと感染する工程、
(e)該ゲノム複製欠損SeVベクターを増幅するために、第二宿主細胞を培養する工程、
(f)該第二細胞培養物から、該ゲノム複製欠損SeVベクターを回収する工程、
を含む。
他の重要な標的群は、高齢者、ヒト免疫無防備状態の個体、移植レシピエント、特に臓器移植レシピエント、及び、慢性疾患を罹患する個体が含まれる。慢性疾患は、例えば、がん、慢性肝炎、虚血性心疾患、慢性腎不全、慢性呼吸器疾患(例えば、喘息、閉塞性肺疾患(COPD)、肺高血圧症)、慢性移植片対宿主病(GVHD)、及び自己免疫疾患(例えば、例えば、紅斑性狼瘡、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患(IBD)、クローン病)であってもよい。
以下の物質及び方法は、実施例1〜5において使用された。
発明の複製欠損SeVベクターの作製
逆遺伝学的手法を用いて、「rdSeV−FRSV/SeV」(replication−deficient SeV vector expressing chimeric RSV/SeV F protein)と名付けられた、ヒトRSVに対するSeVワクチンベクターが構築された。細胞質ドメインを除いて、SeV F ORFは、キメラRSV/SeV F表面タンパク質を与えるそのRSVカウンターパートと置換された(図1)。加えて、安全なワクチンベクターを開発するために、SeVバックボーンは、N末端76アミノ酸を欠損(Δ2−77)したリン酸化タンパク質(P)遺伝子中にて改変された。以前示されたように、欠損PΔ2−77を有するSeVベクターは、非ヘルパー細胞株中では新しいゲノム鋳型を合成できないが、主要な転写及び遺伝子発現は未だ有する(Bossow et al., Open Virol. J. 6:73−81,2012)。rdSeV−FRSV/SeVは、cDNAからうまく救出され、ヘルパー細胞株「P−HC」を使用して増幅された。
複製欠損SeVベクターの遺伝的安定性
本実施例において、ゲノム複製欠損SeVベクターの遺伝的安定性は、「rdPIRV」(replication−deficient PIV3/RSV SeV vector)と呼ばれる、特異的な複製欠損SeV構築物を使用して評価された。この構築物は、添付のクレームの範囲内ではないが、安定性に関して、この構築物のために得られた結果もまた、本発明のゲノム複製欠損SeVベクターに対して有効であると考えられる。
複製欠損SeVベクターの安全性
加えて、複製欠損SeVの安全性に関する研究、特に、in vivoの異なる組織に対する複製欠損及び生体分布は、実施例2で記載されたrdPIRVベクターを用いて実施された。さらに、安全性に関してrdPIRVベクターに対して得られた結果は、本発明のゲノム複製欠損SeVベクターに同様に適用することが考えられる。
生産効率
商業ワクチンの生産効率は、このような製品の市場潜在能力に大きな影響を有する。それゆえ、本発明のゲノム複製欠損SeVベクター(rdSeV−FRSV/SeVベクター)の生産効率が評価され、細胞質ドメインを欠損したrdSeV−FRSV/SeV−ΔCTのそれと比較された。
Claims (15)
- アミノ酸2〜77を欠損した変異Pタンパク質をコードするためのリン酸化タンパク質(P)遺伝子に改変された核酸を含む、ゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクターであって、該核酸は、さらに、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)F細胞外ドメイン又はそのフラグメント若しくは変異体、RSV F膜貫通ドメイン又はその機能的フラグメント若しくは変異体、及び、SeV F細胞質ドメイン又はその任意のフラグメント若しくは変異体、をコードするものであって、あるいは、該核酸は、さらに、RSV F細胞外ドメイン又はその免疫原性フラグメント若しくは変異体、及び、RSV F膜貫通ドメイン又はその機能的フラグメント若しくは変異体、を含むFタンパク質をコードする、ゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター。
- 該RSV細胞外ドメインは、RSV Fタンパク質のアミノ酸1〜524に対応し、及び/又は、該RSV膜貫通ドメインは、RSV Fタンパク質のアミノ酸525〜550に対応し、及び/又は、該SeV細胞質ドメインは、SeV Fタンパク質のアミノ酸524〜565に対応する、請求項1に記載のゲノム複製欠損SeVベクター。
- 該キメラFタンパク質は、本質的に、細胞外ドメインが欠損している、請求項1又は2に記載のゲノム複製欠損SeVベクター。
- 該核酸は、さらに、可溶RSV Fタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは変異体をコードする、請求項1〜3のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損SeVベクター。
- 該可溶RSV Fタンパク質が、RSV Fタンパク質の細胞外ドメイン又はその免疫原性フラグメント若しくは変異体である、請求項4に記載のゲノム複製欠損SeVベクター。
- 該核酸が、可溶RSV Fタンパク質又はその免疫原性フラグメント若しくは変異体をコードしない、請求項1〜3のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損SeVベクター。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター、請求項1〜6のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損SeVベクターの核酸若しくはその相補体、及び/又は、請求項1〜6のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損SeVベクターの核酸をコードするDNA分子、を含む宿主細胞。
- (i)請求項7に記載の宿主細胞を培養すること、及び
(ii)該細胞培養物から該ゲノム複製欠損SeVベクターを回収すること、を含む
請求項1〜6のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクターを製造する方法。 - 請求項1〜6のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター、及び、1以上の薬学的に許容される担体を含む、ワクチン。
- さらに、アジュバントを含む、請求項9に記載のワクチン。
- 哺乳動物において、RSV感染又はRSV感染関連疾患の治療に使用するための、請求項1〜6のいずれか1項に記載のゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター。
- 該哺乳動物が、ヒト被験体である、請求項11に記載の使用のためのゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター。
- 該ヒト被験体が、早産のヒト幼児若しくはRSV感染に対する入院のリスクがあるヒト幼児を含むヒト幼児又は小児、高齢者、ヒト免疫無防備状態の個体、移植レシピエント、あるいは、慢性疾患を罹患している個体、である、請求項11又は12に記載の使用のためのゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター。
- 該ワクチンが、非経口的、局所的又は粘膜的に投与される、請求項11〜13のいずれか1項に記載の使用のためのゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター。
- 該非経口投与が、皮下、静脈内、腹腔内又は筋肉注射によるものである、請求項14に記載の使用のためのゲノム複製欠損センダイウイルス(SeV)ベクター。
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