JP2016518374A - クロストリジウム・ディフィシルワクチン及び使用方法 - Google Patents
クロストリジウム・ディフィシルワクチン及び使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016518374A JP2016518374A JP2016509151A JP2016509151A JP2016518374A JP 2016518374 A JP2016518374 A JP 2016518374A JP 2016509151 A JP2016509151 A JP 2016509151A JP 2016509151 A JP2016509151 A JP 2016509151A JP 2016518374 A JP2016518374 A JP 2016518374A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tcdb
- toxin
- hist
- strain
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 title claims description 26
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 66
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims abstract description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 63
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 27
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 63
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 16
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 14
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 13
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 claims description 12
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000037384 Clostridium Infections Diseases 0.000 claims 1
- 206010009657 Clostridium difficile colitis Diseases 0.000 claims 1
- 206010054236 Clostridium difficile infection Diseases 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 51
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 16
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 11
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 8
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 8
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 6
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 6
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 6
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 6
- 102100021324 5-azacytidine-induced protein 2 Human genes 0.000 description 5
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 238000012656 cationic ring opening polymerization Methods 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 4
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- VSIVTUIKYVGDCX-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 VSIVTUIKYVGDCX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010824 Kaplan-Meier survival analysis Methods 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 description 2
- 231100001102 clostridial toxin Toxicity 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- AMHIJMKZPBMCKI-PKLGAXGESA-N ctds Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]2O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]1CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H]1O2 AMHIJMKZPBMCKI-PKLGAXGESA-N 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- -1 for example Proteins 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 231100000668 minimum lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[[(3s,4s,4ar,6ar,6bs,8r,8ar,12as,14ar,14br)-8a-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-[(3s,5s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@H]5CC(C)(C)CC[C@@]5([C@@H](C[C@@]4(C)[C@]3(C)CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)O)C(=O)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H]([C@@H]([C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@](O)(CO)CO3)O)[C@H](O)CO2)O)[C@H](C)O1)O)O)OC(=O)C[C@@H](O)C[C@H](OC(=O)C[C@@H](O)C[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](CO)O1)O)[C@@H](C)CC)C(O)=O)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 102000000340 Glucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010055629 Glucosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101150008132 NDE1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008951 colonic inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229930186900 holotoxin Natural products 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- ZZIZZTHXZRDOFM-XFULWGLBSA-N tamsulosin hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CCOC1=CC=CC=C1OCCN[C@H](C)CC1=CC=C(OC)C(S(N)(=O)=O)=C1 ZZIZZTHXZRDOFM-XFULWGLBSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1282—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Clostridium (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
- A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
本出願は、35U.S.C.§119(e)の下、2013年4月22日出願の米国仮出願第61/814,740号の利益を主張し、当該仮出願の全内容は、本明細書に完全に記載されたのと同様に本明細書に参照により援用される。
C.ディフィシルVPI 10463(630株と同一の配列を有するTcdBを産生する)及びC.ディフィシルリボタイプ027は、TcdBHIST及びTcdBHVの2種の毒素がそれぞれ精製された、ソース(source)として使用された。TcdBHVは、配列番号1のアミノ酸配列(図7)を有する。
C.ディフィシルは、既に記載されたように透析法を用いて培養され、そして、TcdBが、サイログロブリンアフィニティクロマトグラフィーの逐次工程、及び、その後の20mMTris−HCl、20mMCaCl2、pH8.0における陰イオン交換(Q-Sepharose)及び高分解能陰イオン交換(Mono-Q)クロマトグラフィーにより単離され、TcdAが除去された。精製工程の後、ブラッドフォード法(Bradford method)によるタンパク質の決定、SDS−PAGEによる270kDaのシングルバンドの可視化、及びLC/MS/MS分析(オクラホマ大学ヘルスサイエンスセンター)を行い、タンパク質の性質を確認した。
TcdBHIST及びTcdBHV最低致死用量における差異を決定するために、100μlのTcdBHIST又はTcdBHVのリン酸緩衝生理食塩水での希釈液100μlが27ゲージの針でBALB/cJマウスの尾部に静脈内注射された。20匹のマウスが、4匹ずつの群で、2μg、1μg、500ng、100ng、及び50ngの用量でTcdBHISTを投与された。更に20匹のマウスが、200ng、100ng、50ng、25ng、及び12.5ng用量のTcdBHVを投与された(n=4)。動物は、チャレンジ後、毒素作用及び致死率のために7日間までモニターされ、顕著に苦しんでいる又は瀕死の状態の場合、と殺された。生存は、GraphPad Prism(GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA)においてカプラン・マイヤー分析を使用してグラフ化された。
1日目に、ウサギは完全フロイントアジュバント中のTcdBのCTD断片0.1mgで免疫され、そして、14日目、21日目、及び49日目に、完全フロイントアジュバント中の0.1mgで追加免疫された。血液試料は、0日目、35日目、及び56日目に採取された。これらの実験は、Cocalico Biologicals Inc.(Reamstown, PA)により実施された。
動物の血清における抗体反応を測定するために、直接抗原ELISA(Direct antigen ELISAs)が使用された。ポリスチレンプレートのウェルあたり、1μgの精製されたTcdB又はCTD断片が、4℃で一晩コートされた。プレートは、洗浄され、そしてPBS中の0.1%BSAで、1時間、室温でブロックされた。そして、0.1%BSA含有PBS−Tween中に1:100及び1:1000で希釈されたウサギの血清は、トリプリケート(3回繰り返し)で添加され、室温で2〜3時間インキュベートされた。プレートは、PBS−Tweenで洗浄され、1:5,000に希釈されたアルカリホスファターゼにコンジュゲートした抗ウサギIgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc)と、室温で3時間インキュベートされ、その後、洗浄され、そして、p−ニトロフェニルホスファート基質(Sigma)で発色させた。プレートを、Tecanインフィニットプレートリーダー(Tecan Group, Ltd.)を使用して405nmで測定した。プレートは、ポジティブコントロールがOD1.0に達した場合プレートは測定され、ネガティブコントロールがOD2.0を超えた場合アッセイは無効であると考慮される。
細胞を、10%FBS(ATCC)含有DMEM又はF12−K(ATCC)中に、ウェルあたり1〜2×104細胞の密度で、96ウェルプレートに播種した。内皮細胞におけるTcdB感受性測定のために、各ウェルに対し、トリプリケートでTcdBHIST又はTcdBHVの希釈液が添加され、そして、細胞は、24時間インキュベートされ、生存率はCCK−8(Sigma)で測定された。TcdBの中和を測定するために、CTDに対しウサギで産生された血清、又はトキソイドに対するマウス血清の1:10希釈液が、F12−K培地(ATCC)中で、37℃で1時間、TcdBHIST又はTcdBHVと共に事前にインキュベートされた。CHO細胞は、毒素/抗血清混合物、又は毒素単体で処理され、37℃で24時間インキュベートされた。細胞は、細胞円形化(cell rounding)について2〜4時間後に顕微鏡下で分析され、そして24時間後に、CCK−8分析を用い、製造者の指示書に従って細胞生存率が測定された。
TcdBHISTからのCTD領域の長さをカバーする8アミノ酸により重複する358デカペプチドは、既に記載されるように、ポリエチレンピン上に共有結合的に合成され、改変ELISAアッセイによる抗体特異性のアッセイに使用される。室温で1時間、PBS中の3%ミルクでブロッキングを行い、ピンは、0.05%Tween含有3%ミルク−PBSで1:100に希釈した100μl/ウェルの血清中で、室温で2時間インキュベートされた。ピンは、PBS−Tween中で、軽く撹拌しながら8分間4回洗浄され、続いて、0.05%Tween含有3%ミルク−PBS中で、4℃で一晩、100μl/ウェルのアルカリホスファターゼにコンジュゲートした抗ウサギIgGの1:5,000希釈液とインキュベートした(Jackson ImmunoResearch Laboratories)。次に、前と同じように洗浄し、ピンELISAは、100mMグリシン、1mMMgCl2及び1mMZnCl2含有150mM炭酸バッファー(pH10.4)に溶解した、100μl/ウェルのp−ニトロフェニルホスファートの1mg/ml溶液を使用して発色させた。吸光度は、Tecanインフィニットプレートリーダー(Tecan Group, Ltd.)を使用して、405nmで測定され、そして、結果は、OD1.0を有する標準ポジティブコントロールペプチドにより標準化された。陽性のエピトープは、標準血清の平均値より高く、2より高い標準偏差を有する少なくとも2つの連続したペプチドとして定義されていた。
以前の研究において、我々は、TcdBHVが、TcdBHISTよりも細胞傷害性であり、ゼブラフィッシュの胚モデルにおいて、より広範な組織ダメージの原因となることを見出した;しかしながら、これがどのように致死用量に関連するのかは周知でない。本研究における第1組目の実験において、我々は、マウス全身性中毒モデルにおいて、TcdBHIST及びTcdBHVの致死用量を決定し、比較した。既に出版されたTcdBHISTについての220μg/kg(i.p.)という致死用量は、これらの処置のための毒素の濃度の範囲を確立するために使用されたが、我々が観察した、i.v.注射を介した致死性は、既に報告されていたよりも著しく高かった。結果として、TcdBHISTの2μg(結果を示さず)、1μg、及び500ngという初期用量は、予測したよりも著しく強力で、大変迅速に死亡をもたらした(図1A)。従って、残りのマウスは、TcdBHISTの、より低用量である100ng及び50ngに供された。TcdBHIST処置マウスの結果に基づき、TcdBHV群は、200ngの用量で開始し、12.5ngのTcdBHVまで、1:2希釈で継続した。マウスがTcdBHIST又はTcdBHVを投与された後、7日目まで経過観察され、そして、これらの実験の生存曲線は図1Bに示される。
ゼブラフィッシュモデルにおける我々の初期の知見と併せ、図1に示される結果は全て、TcdBHVがTcdBHISTよりも毒性があることを示している。最近の研究により、C.ディフィシルに感染した子ブタの血流に循環するTcdA及びTcdBが検出され、これは、毒素に対する抗体の受動投与によりブロックされ得る全身性作用に相関していた。これは、TcdBHVが、その高い有効性によって、TcdBHISTよりも更に深刻な全身性ダメージを引き起こすかどうかという疑問に我々を導いた。これを評価するため、マウスはTcdBHIST(50ngから1000ng)又はTcdBHV(12.5ngから200ng)を投与され、そして、組織病理が決定された。致死量より低用量の毒素が投与されたマウスからの組織及び器官の検査により、コントロールと異なる病理が示されなかった。一方、TcdBの致死用量により中毒になったマウスから得た、検査された主要器官の一部に、組織病理が見出された。TcdBHIST又はTcdBHVの何れかで処置されたマウスは、深刻な血だまり、実質細胞の喪失、及び出血の証拠を有する目立った肝臓ダメージを示した。より低い程度に、深刻な肝細胞の凝固壊死が観察され、そして、脾臓も、濾胞性壊死(follicular necrosis)及び生じる可能性のあるアポトーシス細胞と共に、出血の兆候を示した。更に、観察された全ての病理の重症度は、毒素の濃度よりも、毒素への曝露の時間の長さにより関連していた。図2Aは、ダメージが最低致死用量を受け、長期間生存したマウスにおいて最も深刻であることを説明する、TcdBHIST及びTcdBHV処置マウスからの代表的な肝臓切片を示す。
次に、脳出血における差異との考え得る相関として、2つの形態のTcdBの内皮細胞株における毒性を決定するために実験が実施された。我々は、はじめに、内皮細胞が、細胞傷害性アッセイに通常使用される上皮細胞(例えば、CHO細胞)と比較して、TcdBに対して高い感受性を示すかどうかを決定することを望んだ。TcdBHIST及びTcdBHVに曝露されたラットの大動脈の内皮細胞(RAEC)は、細胞傷害性作用においてわずかな差異を示した(図3A)。1.41×10−11MというTcdBHISTのTCD50用量は、既に報告されたCHO細胞における2.53×10−11MのTcdBHISTの毒性と同等であったが、4.04×10−12というTcdBHVのTCD50用量は、CHO細胞に対する2.37×10−13というTCD50よりも高かった。TcdBHIST及びTcdBHVの病理における主要な差異が脳で生じたため、我々は、2つ形態のTcdBに対する感受性の差異について、ラットの脳の微小血管内皮細胞(RBMVEC)を試験した。興味深いことに、TcdBHISTについての1.34×10−11MというTCD50に対し、1.21×10−13MのTCD50により、RBMVECにおいてTcdBHVの細胞傷害性の有意な差が認められた(図3B)。これらのデータは、TcdBが、内皮細胞において細胞変性及び細胞傷害性作用を引き起こすこと、そして、RBMVECはTcdBHVに対して増加した感受性を有することを示す。
TcdBHIST及びTcdBHVを標的とする細胞及び器官における差異を更に研究するため、我々は、細胞相互作用の促進において重要と考えられるCTDに着目した。我々は、この領域が、細胞標的化において確かに重要あり、そして、この領域におけるTcdBHISTとTcdBHVとの配列の差異が、毒素間での細胞指向性及び動物の病理における違いの重要な因子であり得るという、仮説を立てた。我々は、また、これらの差異が、CTDにおいて、抗原性エピトープのプロフィールを変化させ得ること、そして、おそらくエピトープを中和させることを予測した。我々は、これらの両方の可能性に取り組むための一連の実験を設計した。
TcdBHV及びTcdBHISTとの間のエピトープの詳細な差異を検出するために、我々は、固相ELISAを使用して、特定領域の免疫原性の多様性をマッピングした。全体で、8残基で重複し、かつCTDHIST配列全体をカバーしている、358のデカマーペプチドが合成され、CTDHIST及びCTDHV血清に対する反応性が試験された。αCTDHISTにより認識されるペプチドと、αCTDHVにより認識されるペプチドとを比較し、我々は、2つの抗血清により認識されるペプチドのパターンにおける全体的な相違を見出した(図5)。αCTDHV血清により認識されない、又は反応性の低下を示した、約14領域が、分析により同定された。同定されたペプチドの大多数は、CTDの開始点及び終点に向かって、CROPドメインに位置している。加えて、αCTDHISTとαCTDHVの間で認識が異なるエピトープの多くは、CTDのはじめの7つの反復内に、連続して位置している。図5にまとめるように、3つのエピトープは、たった1つのアミノ酸により異なり、4つのエピトープは2つのアミノ酸により異なり、2つのエピトープは、3つのアミノ酸により異なり、3つのエピトープは4つのアミノ酸により異なり、そして、1つのエピトープは5つのアミノ酸により異なっていた。我々は、αCTDHVによるペプチド認識の低下を示したが、配列のバリエーションを有さない領域、並びに、αCTDHV単独により認識された様々なペプチド領域を同定した(図5)。これらのデータは、TcdBHVの配列のバリエーションが、抗体の直線状エピトープ認識に影響を与えること、そして、立体構造エピトープにおける差異に寄与する可能性を示唆する。
TcdBHVのCTDが中和抗体作製のために不十分な標的であるという知見は、TcdBHVの全体的な免疫原性についての懸念を生じさせる。TcdBHIST及びTcdBHVの間のアミノ酸配列バリエーションの大多数は、CTDに生じ、よって、我々は、抗原としてホロ毒素を使用した抗体作製が、広範な中和に関しより高い可能性を有すると判断した。TcdBHIST及びTcdBHVの両方は、ホルムアルデヒドを使用して不活性化され、トキソイドBHIST及びトキソイドBHVが作製された。これらのトキソイドは、マウスと免疫するための抗原として使用され、TcdBに対する防御抗体として試験された。それに続く2回の追加免疫の後で、血清がマウスから採取され、中和作用がインビトロで試験された。図6Aにおけるデータは、トキソイドBHVに対するマウス抗血清が、TcdBHIST及びTcdBHVの両方の細胞傷害性作用に対し防御したこと、一方、TcdBHISTは交差中和せず、TcdBHISTで処置されたCHO細胞の細胞生存率のみを維持したことを示す。免疫されたマウスは、次に、TcdBHIST又はTcdBHVの2倍致死用量を使用し、インビボにおいてTcdBからの防御について試験された。インビトロでの中和データと一致して、トキソイドBHVで免疫された全マウスは、TcdBHIST及びTcdBHVの両方のi.v.チャレンジから完全に防御され(図6B及び6C)、すなわち、TcdBHVワクチンは、毒素/トキソイドが由来するC.ディフィシルの同種株に対する、並びに、C.ディフィシルの非関連異種株に対する、防御(交差中和)を与えることが可能であった。トキソイドBHISTによる免疫は、ほんの少しの、しかし顕著な防御効果を提供し、TcdBHISTを注射されたマウスにおける生存期間中央値を15時間から24時間に増加させたが、TcdBHVによるチャレンジを受けたマウスにおいて9時間から13時間に増加させるに留まった(図6B及び6C)。最終的に、トキソイドBHISTマウスは、TcdBHVの作用により死亡し、2匹のトキソイドBHISTマウスのみが、TcdBHISTから完全に防御された(図6B及び6C)。TcdBHVのCTDに対する抗血清は効果を示さなかったが、TcdBHVのトキソイド形態に対する抗体は成功裏に毒性を示し、TcdBHVに対する防御効果が存在し得ること、そして、重要な標的はCTD外であり得ることを示した。C.ディフィシル感染に対する防御特性に加え、TcdBHVのトキソイド形態も毒素の複数の形態に対する防御を示した。
Claims (17)
- クロストリジウム・ディフィシルに対する免疫応答を惹起させることにおいて有効なワクチン組成物であって、
(a)クロストリジウム・ディフィシルの高病原性株に由来する毒素、(b)前記毒素に由来するトキソイド、及び(c)前記毒素又は前記トキソイドの免疫原性断片のうちの少なくとも1つの免疫原として有効な量;及び
薬学的に許容可能な担体
を含み、
ワクチン組成物により惹起される免疫応答が、クロストリジウム・ディフィシルの高病原性株及び少なくとも1つの異種株に対して有効である、組成物。 - 高病原性株がリポタイプ027である、請求項1に記載の組成物。
- 毒素が毒素Bである、請求項1に記載の組成物。
- 毒素が組換えソースから発現される、請求項1に記載の組成物。
- 毒素が配列番号1、又はその免疫原性断片を含む、請求項1に記載の組成物。
- アジュバントを更に含む、請求項1に記載の組成物。
- クロストリジウム・ディフィシルの少なくとも1つの異種株が、VPI 10463株である、請求項1に記載の組成物。
- クロストリジウム・ディフィシルに対する、対象における免疫応答を刺激するための方法であって、前記対象に、請求項1に記載のワクチン組成物の、対象における免疫応答を誘導するために十分な量を投与することを含む方法。
- クロストリジウム・ディフィシルの高病原性株がリポタイプ027である、請求項8に記載の方法。
- 毒素が毒素Bである、請求項8に記載の方法。
- 毒素が組換えソースから発現される、請求項8に記載の方法。
- 毒素が配列番号1、又はその免疫原性断片を含む、請求項8に記載の方法。
- 組成物がアジュバントを更に含む、請求項8に記載の方法。
- クロストリジウム・ディフィシルの少なくとも1つの異種株が、VPI 10463株である、請求項8に記載の方法。
- 投与が、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、又は静脈内投与である、請求項8に記載の方法。
- クロストリジウム・ディフィシル感染を有する対象を処置する方法であって、
(a)クロストリジウム・ディフィシルの高病原性リポタイプ027株に由来する毒素B、
(b)前記毒素Bに由来するトキソイド、及び(c)前記毒素B又は前記トキソイドの免疫原性断片
のうちの少なくとも1つに対して作製された抗体の治療上有効量を、対象に投与することを含み、
抗体が、クロストリジウム・ディフィシルの高病原性リポタイプ027株、及び少なくとも1つの異種株に対し有効である、方法。 - クロストリジウム・ディフィシルの少なくとも1つの異種株が、VPI 10463株である、請求項16に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361814740P | 2013-04-22 | 2013-04-22 | |
US61/814,740 | 2013-04-22 | ||
PCT/US2014/035029 WO2014176276A1 (en) | 2013-04-22 | 2014-04-22 | Clostridium difficile vaccine and methods of use |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016518374A true JP2016518374A (ja) | 2016-06-23 |
Family
ID=51792344
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016509151A Ceased JP2016518374A (ja) | 2013-04-22 | 2014-04-22 | クロストリジウム・ディフィシルワクチン及び使用方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10226523B2 (ja) |
EP (1) | EP2988778A4 (ja) |
JP (1) | JP2016518374A (ja) |
CN (1) | CN105451762A (ja) |
AU (1) | AU2014257172B2 (ja) |
CA (1) | CA2910200A1 (ja) |
WO (1) | WO2014176276A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020509770A (ja) * | 2017-03-15 | 2020-04-02 | ノババックス,インコーポレイテッド | Clostridium difficileに対する免疫応答を誘導するための方法および組成物 |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017040885A1 (en) | 2015-09-03 | 2017-03-09 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Peptide inhibitors of clostridium difficile tcdb toxin |
US10668140B2 (en) | 2017-02-24 | 2020-06-02 | University Of South Floirida | Non-toxigenic Clostridium difficile spores for use in oral vaccination |
US10555992B2 (en) | 2017-05-31 | 2020-02-11 | University Of South Florida | Immunogenic proteins against clostridium difficile |
US10933126B2 (en) | 2018-05-03 | 2021-03-02 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Clostridium difficile immunogenic compositions and methods of use |
CN112442472B (zh) * | 2020-11-30 | 2023-05-26 | 四川大学华西医院 | 抗艰难梭菌的重组乳酸乳球菌、活载体疫苗及其制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120070859A1 (en) * | 2010-09-17 | 2012-03-22 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Bacterial cells, optimized nucleotide sequences and methods for improved expression of recombinant clostridium difficile toxin b |
JP2012510497A (ja) * | 2008-12-03 | 2012-05-10 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | ワクチンの生産方法 |
JP2013500479A (ja) * | 2009-07-27 | 2013-01-07 | バイオディクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 試料中における変異したc.ディフィシル菌株を検出および同定するための方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7226597B2 (en) * | 2002-06-17 | 2007-06-05 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Mutants of Clostridium difficile toxin B and methods of use |
JP5740714B2 (ja) * | 2009-02-20 | 2015-06-24 | ヘルス プロテクション エージェンシー | クロストリジウム・ディフィシル(Clostridiumdifficile)毒素に対する抗体 |
GB0921288D0 (en) * | 2009-12-04 | 2010-01-20 | Health Prot Agency | Therapies for preventing or suppressing clostridium difficile infection |
EP2558493B1 (en) * | 2010-04-15 | 2019-09-18 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies for the treatment of clostridium difficile-associated infection and disease |
GB201016742D0 (en) * | 2010-10-05 | 2010-11-17 | Health Prot Agency | Clostridium difficile antigens |
US9771416B2 (en) * | 2010-10-25 | 2017-09-26 | National Research Council Of Canada | Clostridium difficile-specific antibodies and uses thereof |
CN102181457B (zh) * | 2011-03-21 | 2012-07-04 | 王世霞 | 密码子优化的艰难梭菌外毒素b氨基端基因序列及其核酸疫苗 |
BR112013027229B1 (pt) * | 2011-04-22 | 2020-10-27 | Wyeth Llc | polipeptídeo imunogênico isolado e seu uso, composição imunogênica e seu uso, célula recombinante ou progênie da mesma, e método de produção de uma toxina de clostridium difficile mutante |
SI2714911T1 (sl) * | 2011-05-27 | 2017-03-31 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Imunogeni sestavek |
EA032475B1 (ru) * | 2011-09-16 | 2019-06-28 | Юсб Фарма С.А. | Фармацевтическая композиция для снижения продолжительности и/или тяжести диареи, заболеваемости и/или смертности пациента, инфицированного clostridium diffcile или имеющего риск указанного заражения, и ее применение |
AR089797A1 (es) * | 2012-01-27 | 2014-09-17 | Merck Sharp & Dohme | Vacunas contra clostridum difficile que comprenden toxinas recombinantes |
-
2014
- 2014-04-22 CA CA2910200A patent/CA2910200A1/en not_active Abandoned
- 2014-04-22 JP JP2016509151A patent/JP2016518374A/ja not_active Ceased
- 2014-04-22 CN CN201480035638.7A patent/CN105451762A/zh active Pending
- 2014-04-22 WO PCT/US2014/035029 patent/WO2014176276A1/en active Application Filing
- 2014-04-22 AU AU2014257172A patent/AU2014257172B2/en not_active Ceased
- 2014-04-22 EP EP14787743.5A patent/EP2988778A4/en not_active Withdrawn
- 2014-04-22 US US14/786,415 patent/US10226523B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012510497A (ja) * | 2008-12-03 | 2012-05-10 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | ワクチンの生産方法 |
JP2013500479A (ja) * | 2009-07-27 | 2013-01-07 | バイオディクス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 試料中における変異したc.ディフィシル菌株を検出および同定するための方法 |
US20120070859A1 (en) * | 2010-09-17 | 2012-03-22 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Bacterial cells, optimized nucleotide sequences and methods for improved expression of recombinant clostridium difficile toxin b |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
MOL GENE GENTIC., 1992, VOL.233 NO.1-2, P.260-268, JPN6019000182, ISSN: 0003953786 * |
NAUNYAN-SCHMIEDEBERG'S ARCHIVES OF PHARMACOLOGY, 2006, VOL.372 NO.SUPPL.1, P.57, JPN6019000184, ISSN: 0003953787 * |
SIDDIQUI, FARIDA ET AL.: "Vaccination With Parenteral Toxoid B Protects Hamsters Against Lethal Challenge With Toxin A-Negativ", THE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES, vol. 205, no. 1, JPN7018000369, 2012, pages 128 - 133, XP002762838, ISSN: 0003953785 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020509770A (ja) * | 2017-03-15 | 2020-04-02 | ノババックス,インコーポレイテッド | Clostridium difficileに対する免疫応答を誘導するための方法および組成物 |
JP7149285B2 (ja) | 2017-03-15 | 2022-10-06 | ノババックス,インコーポレイテッド | Clostridium difficileに対する免疫応答を誘導するための方法および組成物 |
JP2022179543A (ja) * | 2017-03-15 | 2022-12-02 | ノババックス,インコーポレイテッド | Clostridium difficileに対する免疫応答を誘導するための方法および組成物 |
JP7397145B2 (ja) | 2017-03-15 | 2023-12-12 | ノババックス,インコーポレイテッド | Clostridium difficileに対する免疫応答を誘導するための方法および組成物 |
US11938179B2 (en) | 2017-03-15 | 2024-03-26 | Novavax, Inc. | Methods and compositions for inducing immune responses against Clostridium difficile |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2910200A1 (en) | 2014-10-30 |
AU2014257172A1 (en) | 2015-12-10 |
US20160074496A1 (en) | 2016-03-17 |
EP2988778A4 (en) | 2016-12-14 |
AU2014257172B2 (en) | 2019-01-31 |
CN105451762A (zh) | 2016-03-30 |
EP2988778A1 (en) | 2016-03-02 |
WO2014176276A1 (en) | 2014-10-30 |
US10226523B2 (en) | 2019-03-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2016518374A (ja) | クロストリジウム・ディフィシルワクチン及び使用方法 | |
JP6872532B2 (ja) | 腸外病原性大腸菌に対する免疫防御のための方法および組成物 | |
RU2487890C2 (ru) | Слитый белок, способный индуцировать защитный иммунитет против стрептококка группы в, и вакцина, содержащая такой белок | |
EA014531B1 (ru) | Антиамилоидные иммуногенные композиции, способы и применения | |
US20150299298A1 (en) | Binding moieties for biofilm remediation | |
JP2021035950A (ja) | 変異体ブドウ球菌抗原 | |
US20240207382A1 (en) | Composition and method for generating immunity to borrelia burgdorferi | |
JP2017513849A (ja) | A群レンサ球菌ワクチン | |
MX2015002485A (es) | Polipeptidos de clostridium difficile como vacuna. | |
US8741302B2 (en) | Polypeptide derived from Enterococcus and its use for vaccination | |
JP2015519305A (ja) | ヒストフィルス・ソムニの外膜タンパク質とその方法 | |
Jiang et al. | Etx-Y71A as a non-toxic mutant of Clostridium perfringens epsilon toxin induces protective immunity in mice and sheep | |
KR20220133631A (ko) | SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및 면역글로불린의 Fc 유래 단백질을 포함하는 재조합 단백질 및 이의 용도 | |
WO2011103465A2 (en) | Botulinum neurotoxin antigenic compositions and methods | |
WO2015189422A1 (en) | Vaccine for immunocompromised hosts | |
KR102675881B1 (ko) | Pedv 스파이크 단백질 s1 유래 단백질 및 페리틴 유래 단백질을 포함하는 재조합 단백질 및 이의 용도 | |
KR20190082229A (ko) | 스타필로코커스 감염에 대한 백신 구성체 및 이의 용도 | |
JP2024512722A (ja) | 免疫原性融合タンパク質 | |
US11278609B2 (en) | Polypeptides derived from Enterococcus and their use for vaccination and the generation of therapeutic antibodies | |
WO2017026301A1 (ja) | 黄色ブドウ球菌不活化菌体とロイコシジンを混合したワクチン |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A529 | Written submission of copy of amendment under article 34 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A529 Effective date: 20151202 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170420 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180206 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180427 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180806 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190115 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190415 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190605 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190806 |
|
A045 | Written measure of dismissal of application [lapsed due to lack of payment] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A045 Effective date: 20191224 |