JP2016516722A - 第ｖｉｉｉ因子ポリペプチド製剤 - Google Patents
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Abstract
本発明は、第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド、例えば、ＦＶＩＩＩ−Ｆｃの製剤、及びその使用方法を提供する。ＦＶＩＩＩポリペプチドは、組換えＦＶＩＩＩタンパク質、短時間作用型ＦＶＩＩＩタンパク質、または長時間作用型ＦＶＩＩＩタンパク質であり得る。ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的製剤は、血友病の個々の予防、毎週の予防、発症時（オンデマンド）治療、または周術期管理のために使用され得る。薬学的組成物であって、（ａ）ＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、（ｄ）Ｌ−ヒスチジンと、（ｅ）塩化カルシウムと、（ｆ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、前記薬学的組成物。
Description
発明の背景
本発明は、一般に、止血障害の治療分野に関する。
本発明は、一般に、止血障害の治療分野に関する。
血友病Ａは、ＦＶＩＩＩ活性の欠損をもたらす第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）遺伝子における変異及び／または欠失に起因するＸ連鎖出血障害である（Ｐｅｙｖａｎｄｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １２：８２−８９（２００６）。この疾患は、突発性出血及び外傷後の過剰な出血によって特徴付けられる。長い期間にわたり、筋肉及び関節への反復的な出血（幼少期に始まることが多い）が、血友病性関節症及び不可逆的な関節損傷をもたらす。この損傷は進行性であり、関節の非常に限定された可動性、筋萎縮症、及び慢性痛を起こす可能性がある（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｍｅｒｃｈａｎ，Ｅ．Ｃ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２９：８７−９６（２００３）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。
Ａ２ドメインは、第ＶＩＩＩ因子分子の凝固促進活性に必要である。研究は、ブタ第ＶＩＩＩ因子がヒト第ＶＩＩＩ因子よりも６倍高い凝固促進活性を有し（Ｌｏｌｌａｒ，Ｐ．，ａｎｄ Ｅ．Ｔ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１２４８１−１２４８６（１９９１））、ヒト第ＶＩＩＩ因子とブタ第ＶＩＩＩ因子との間の凝集活性の差は、ヒトＡ２ドメイン及びブタＡ２ドメインにおける１つ以上の残基間のアミノ酸配列の差に基づくようであることを示す（Ｌｏｌｌａｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２３６５２−２３６５７（１９９２））、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
血友病Ａの治療は、ＦＶＩＩＩ活性を正常レベルの１〜５％まで回復させて、突発性出血を予防することを目的とする補充療法によるものである（Ｍａｎｎｕｃｃｉ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：１７７３−１７７９（２００１）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。出血症状をオンデマンドで治療する、または予防的に治療することにより起こる出血症状を予防するために利用可能な血漿由来の組換えＦＶＩＩＩ製剤がある。
死亡率の低下、関節損傷の予防、生活の質の改善は、血漿由来の組換えＦＶＩＩＩの開発による重要な成果である。出血からの長期間の保護は、血友病Ａ患者の治療における別の重要な進歩を示す。
死亡率の低下、関節損傷の予防、生活の質の改善は、血漿由来の組換えＦＶＩＩＩの開発による重要な成果である。出血からの長期間の保護は、血友病Ａ患者の治療における別の重要な進歩を示す。
Ｐｅｙｖａｎｄｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １２：８２−８９（２００６）
Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｍｅｒｃｈａｎ，Ｅ．Ｃ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２９：８７−９６（２００３）
Ｌｏｌｌａｒ，Ｐ．，ａｎｄ Ｅ．Ｔ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１２４８１−１２４８６（１９９１）
Ｌｏｌｌａｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２３６５２−２３６５７（１９９２）
Ｍａｎｎｕｃｃｉ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：１７７３−１７７９（２００１）
本発明は、（ａ）ＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物から選択される１つ以上の安定化剤と、（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、（ｄ）Ｌ−ヒスチジンと、（ｅ）塩化カルシウムと、（ｆ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、薬学的組成物を含む。一実施形態において、マンニトール、グリシン、アラニン、またはヒドロキシエチルデンプンは、薬学的組成物中に含まれない。別の実施形態において、ＮａＣｌは、唯一の充填剤である。他の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、長時間作用型ポリペプチドまたは短時間作用型ポリペプチドである。
他の実施形態において、本薬学的組成物は、約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロース、約１．３％（ｗ／ｖ）のスクロース〜約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロース、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロース、または約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロース、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロース、約１３ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのスクロース、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、または約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。依然として他の実施形態において、本薬学的組成物は、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌ、約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌ、約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌ、約２０５ｍＭのＮａＣｌ、約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１３ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌ、約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌ、約３０８ｍＭのＮａＣｌ、約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ〜約１９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、または約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む。
さらに他の実施形態において、本薬学的組成物は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジン、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジン〜約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジン、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン、または約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン〜約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンを含む。ある特定の実施形態において、本薬学的組成物は、約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウム、約５．４ｍＭの塩化カルシウム〜約８ｍＭの塩化カルシウム、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物、または約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物〜約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物を含む。
いくつかの実施形態において、本薬学的組成物は、約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、または約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、約０．１３％ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、または約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む。
他の実施形態において、本薬学的組成物は、ｒＦＶＩＩＩＦｃポリペプチドを含み、配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２０〜２５７８と少なくとも９０％または９５％同一であるアミノ酸配列を含む第１のサブユニットと、配列番号４のアミノ酸２１〜２４７と少なくとも９０％〜９５％同一であるアミノ酸配列を含む第２のサブユニットと、を含む。ある特定の実施形態において、ｒＦＶＩＩＩＦｃポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２０〜２５７８を含む第１のサブユニットと、配列番号４のアミノ酸２１〜２４７を含む第２のサブユニットと、を含む。
ある特定の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドの約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌ、例えば、８３ＩＵ／ｍｌ、１６７ＩＵ／ｍｌ、２５０ＩＵ／ｍｌ、３３３ＩＵ／ｍｌ、５００ＩＵ／ｍｌ、６６７ＩＵ／ｍｌ、１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌの濃度で薬学的組成物中に存在する。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドの約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌ、例えば、１５０ＩＵ／ｍｌ、２８７．５ＩＵ／ｍｌ、４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、５７５ＩＵ／ｍｌ、８６２．５ＩＵ／ｍｌ、１１５０ＩＵ／ｍｌ、１７２５ＩＵ／ｍｌ、２３００ＩＵ／ｍｌ、２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの濃度で薬学的組成物中に存在する。
他の実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｃ）約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌと、（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。他の実施形態において、本薬学的組成物は、約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌまたは約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌを含む。
さらに他の実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｃ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｄ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｆ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｃ）約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌと、（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。他の実施形態において、本薬学的組成物は、約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌを含む。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または約３４５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド、（とｂ）約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｃ）約３０８ｍＭのＮａＣｌと、（ｄ）約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約８ｍＭの塩化カルシウムと、（ｆ）約０．０２０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。他の実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、（ｃ）約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、（ｃ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｄ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｆ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。
他の実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、（ｃ）約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、（ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または約３４５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｂ）約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、（ｃ）約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｄ）約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｅ）約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｆ）約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｉｉ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物から選択される１つ以上の安定化剤と、（ｉｉｉ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、（ｉｖ）Ｌ−ヒスチジンと、（ｖ）塩化カルシウムと、（ｖｉ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、（ｂ）第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるべき注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える、薬学的キットを含む。他の実施形態において、薬学的キットは、（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える。
他の実施形態において、薬学的キットは、（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチドと、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える。
本発明はまた、出血症状の低下もしくは減少、または出血性病態の治療もしくは予防方法も含み、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物を投与することを含む。
本発明は、第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド、例えば、ＦＶＩＩＩ−Ｆｃの製剤、及びその使用方法を提供する。
Ｉ．定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲内で用いられる通り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、その文脈が他に明確に指示していない限り、複数の指示対象を含むことに留意が必要である。「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）という用語、ならびに「１つ以上」及び「少なくとも１つ」は、本明細書で互換的に使用され得る。
本明細書及び添付の特許請求の範囲内で用いられる通り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、その文脈が他に明確に指示していない限り、複数の指示対象を含むことに留意が必要である。「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）という用語、ならびに「１つ以上」及び「少なくとも１つ」は、本明細書で互換的に使用され得る。
「約」という用語は、ほぼ、おおよそ、およそ、またはその範囲内であることを意味するために、本明細書で使用される。「約」という用語が数値範囲と関連して使用される場合、記載された数値の上下の境界を拡張することによりその範囲を修正する。概して、「約」という用語は、数値を記載された値の上または下（より高いまたはより低い）１０パーセントの差異で修正するように、本明細書で使用される。
さらに、本明細書で使用される「及び／または」は、もう一方を含むまたは含まない２つの特定の特性または構成要素のそれぞれの特定の開示と考えられる。したがって、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」等の語句中で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」等の語句中で使用される「及び／または」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
実施形態が「を含む」という言葉で本明細書に記載される限り、そうでなければ、「〜からなる」及び／または「〜から本質的になる」に関して記載される同様の実施形態もまた、提供されることが理解される。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。
単位、接頭辞、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で許容される形態で示される。数値範囲は、範囲を定義する数値を包括する。別段に指定されない限り、アミノ酸配列は、左から右にアミノからカルボキシの配向で記載されている。本明細書中に提供される表題は、本開示の様々な態様または実施形態の限定ではなく、これは本明細書を全体として参照することにより行うことができる。したがって、直下に定義する用語は、本明細書全体を参照することにより、より完全に定義される。アミノ酸は、本明細書中では、一般に知られている三文字記号、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）によって推奨される一文字記号のいずれかによって参照される。ヌクレオチドも同様に、その一般に受入られている一文字コードにより参照される。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、共有結合しているアミノ酸残基からなる高分子化合物を指す。
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、互換的に使用され、共有結合しているヌクレオチド残基からなる高分子化合物を指す。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、一本鎖、または二重鎖、ベクター、プラスミド、ファージ、またはウイルスであり得る。ポリヌクレオチドは、表１１のポリペプチドをコードする表１０にあるものを含む（表１０を参照）。ポリヌクレオチドはまた、表１０のポリヌクレオチドの断片、例えば、表１１のポリペプチドの断片をコードするもの、例えば、第ＶＩＩＩ因子、Ｆｃ、シグナル配列、プロペプチド、及び表１１のポリペプチドの他の断片も含む。
本明細書で使用される「投与」とは、薬学的に許容される経路によって、対象に本発明の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドを含む薬学的組成物を禁止するまたは与えることを意味する。投与経路の例には、例えば、中心静脈アクセスを介して、静脈内、例えば、静脈内注射及び静脈内注入が含まれるが、これらに限定されない。投与のさらなる経路には、皮下、筋肉内、経口、経鼻、及び肺投与が含まれる。本発明の利点には、レジメンコンプライアンスの向上、出血による破壊の減少、出血からの関節の保護の増加、関節損傷の予防、罹患率の低下、死亡率の低下、出血からの長期間の保護、血栓事象の低減、及び生活の質の改善が含まれる。
「長時間作用型（ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ）」及び「長期間持続型（ｌｏｎｇ−ｌａｓｔｉｎｇ）」という用語は、本明細書で互換的に使用される。一実施形態において、「長時間作用型」または「長時間持続型」という用語は、「長時間作用型」ＦＶＩＩＩポリペプチドの投与の結果としてのＦＶＩＩＩ活性が、野生型ＦＶＩＩＩ（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）または血漿由来のＦＶＩＩＩ（「ｐｄＦＶＩＩＩ」））のＦＶＩＩＩ活性よりも長いことを示す。「より長い」ＦＶＩＩＩ活性は、例えば、ａＰＴＴアッセイ、発色アッセイ、ＲＯＴＥＭ（登録商標）、ＴＧＡ等の当該技術分野で任意に知られている方法によって測定することができる。一実施形態において、「より長い」ＦＶＩＩＩ活性は、Ｔ１／２ベータ（活性）によって示すことができる。別の実施形態において、「より長い」ＦＶＩＩＩ活性は、血漿中に存在するＦＶＩＩＩ抗原レベルによって、例えば、Ｔ１／２ベータ（抗原）によって示すことができる。他の実施形態において、長時間作用型または長時間持続型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、凝血カスケードにおいてより長く作用し、例えば、野生型ＦＶＩＩＩポリペプチド、すなわち、配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７からなるポリペプチド、すなわち、ＳＱ ＢＤＤ ＦＶＩＩＩ（ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標））または配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１からなるポリペプチド（ＡＤＶＡＴＥ（登録商標））と比較して、より長い期間中活性である。
「短時間作用型（ｓｈｏｒｔ−ａｃｔｉｎｇ）」及び「短時間持続型（ｓｈｏｒｔ−ｌａｓｔｉｎｇ）」という用語は、本明細書で互換的に使用される。「短時間作用型」及び「短時間持続型」という用語は、「短時間作用型」ＦＶＩＩＩポリペプチドの投与の結果としてのＦＶＩＩＩ活性が、野生型ＦＶＩＩＩ（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）（配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１）、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）（配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７）、あるいは血漿由来のＦＶＩＩＩ（「ｐｄＦＶＩＩＩ」））のＦＶＩＩＩ活性と同様であるか、または同一であるか、または長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドのＦＶＩＩＩ活性よりも短いことを示す。「より短い」ＦＶＩＩＩ活性は、例えば、ａＰＴＴアッセイ、発色アッセイ、ＲＯＴＥＭ（登録商標）、ＴＧＡ等の当該技術分野で任意に知られている方法によって測定することができる。例示的な短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドには、野生型成熟ＦＶＩＩＩポリペプチド（ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（登録商標）、またはＨＥＬＩＸＡＴＥ（登録商標））、またはＳＱ ＢＤＤ ＦＶＩＩＩ（ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）及びＸＹＮＴＨＡ（登録商標））等のＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩポリペプチド、またはＢドメインからの２１アミノ酸を含有するＦＶＩＩＩポリペプチド（すなわち、ＳＦＳＱＮＳＲＨＰＳＱＮＰＰＶＬＫＲＨＱＲ、配列番号１７）（例えば、ＮＯＶＯＥＩＧＨＴ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「キメラポリペプチド」という用語は、その中に、異なる源からの少なくとも２つのポリペプチド（または例えば部分配列もしくはペプチド等のその一部）を含むポリペプチドを意味する。キメラポリペプチドは、異なる遺伝子、異なるｃＤＮＡ、または異なる動物もしくは他の種等の異なる源からの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、またはそれ以上のポリペプチドまたはその一部を含むことができる。キメラポリペプチドは、異なるポリペプチドまたはその一部を連結する１つ以上のリンカーを含むことができる。したがって、ポリペプチドまたはその一部は、単一のキメラポリペプチド内で直接連結され得るか、またはリンカーを介して、間接的に連結され得るか、あるいはそれらの両方であり得る。キメラポリペプチドは、さらなるペプチド、例えば、シグナル配列、ならびにタンパク質の精製または検出に役立つ６Ｈｉｓ及びＦＬＡＧ等の配列等を含むことができる。加えて、キメラポリペプチドは、Ｎ末端及び／またはＣ末端にアミノ酸またはペプチド付加を有することができる。いくつかの実施形態において、キメラポリペプチドは、長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドである。本発明の例示的なキメラポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子−ＦｃＲｎ ＢＰキメラポリペプチド、例えば、第ＶＩＩＩ因子−Ｆｃポリペプチド、例えば、そのシグナル配列及びプロペプチドを含むまたは含まない配列番号２または６のＦＶＩＩＩＦｃ（表１１）である。
本明細書で使用される「ハイブリッド」ポリペプチド及びタンパク質は、キメラポリペプチドと第２のポリペプチドの組み合わせを意味する。ハイブリッドにおけるキメラポリペプチド及び第２のポリペプチドは、電荷−電荷または疎水性相互作用等のタンパク質−タンパク質相互作用を介して互いに結合することができる。ハイブリッドにおけるキメラポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合または他の共有結合（複数を含む）を介して互いに結合することができる。ハイブリッドは、ＷＯ２００４／１０１７４０及びＷＯ２００６／０７４１９９に記載されており、これらのそれぞれは、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。米国特許第７，４０４，９５６号及び同第７，３４８，００４号も参照されたく、これらのそれぞれは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。第２のポリペプチドは、同一のキメラポリペプチドの２つ目のコピーであり得るか、または同一でないキメラポリペプチドであり得る。表１１を参照のこと。一実施形態において、第２のポリペプチドは、ＦｃＲｎ結合パートナーを含むポリペプチドである。ＦｃＲｎ結合パートナーは、ＦｃＲｎに結合し、異化からの分子を含有するＦｃＲｎ結合パートナーを保護し、そのため、血漿中の半減期を延長する。別の実施形態において、キメラポリペプチドは、キメラ第ＶＩＩＩ因子−Ｆｃポリペプチドであり、第２のポリペプチドは、Ｆｃ、例えば、介在リンカー配列を含まないヒトＩｇＧ１の二量体Ｆｃドメインに融合される組換えＢドメイン欠失ヒトＦＶＩＩＩ（ＢＤＤ−ｒＦＶＩＩＩ）の単一分子からなるｒＦＶＩＩＩＦｃ組換え融合タンパク質から本質的になる。このハイブリッドポリペプチドは、本明細書では、ＦＶＩＩＩＦｃ単量体Ｆｃ融合タンパク質、ＦＶＩＩＩＦｃ単量体ハイブリッド、単量体ＦＶＩＩＩＦｃハイブリッド、及びＦＶＩＩＩＦｃ単量体−二量体と称される。表１１Ａを参照のこと。実施例は、このハイブリッドポリペプチドに対する前臨床及び臨床データを提供する。
ハイブリッド中の第２のポリペプチドは、シグナル配列を含まない、表１１Ａ（ｉｉ）に示されるアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸２１〜２４７）と少なくとも９０％または９５％同一である、またはシグナル配列を含む、表１１Ａ（ｉｉ）に示されるアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸１〜２４７）と少なくとも９０％または９５％同一である、配列を含み得るか、またはその配列から本質的になり得る。第２のポリペプチドは、シグナル配列を含まない、表１１Ａ（ｉｉ）に示されるアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸２１〜２４７）と同一である、またはシグナル配列を含む、表１１Ａ（ｉｉ）に示されるアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸１〜２４７）と同一である配列を含み得るか、またはその配列から本質的になり得る。
第ＶＩＩＩ因子凝集活性は、国際単位（複数を含む）（ＩＵ）として表される。１ＩＵの第ＶＩＩＩ因子活性は、１ミリリットルの正常ヒト血漿中の第ＶＩＩＩ因子の量にほぼ相当する。いくつかのアッセイが、第ＶＩＩＩ因子活性を測定するために利用可能であり、これには、一段階凝固アッセイ（活性化部分トロンボプラスチン時間；ａＰＴＴ）、トロンビン生成時間（ＴＧＡ）、及び回転トロンボエラストメトリー（ＲＯＴＥＭ（登録商標））が含まれる。
本発明に従って製剤に関連する本明細書で使用される「凍結乾燥された」という用語は、それ自体、当該術分野で知られているフリーズドライ法によって製造された製剤を示す。溶媒（例えば、水）は、凍結、続いて、真空下での昇華、高温での残留水の脱離によって除去される。製薬分野において、凍結乾燥体は、通常、約０．１〜５％（ｗ／ｗ）の残留水分を有しており、粉末または物理的に安定したケーキとして存在している。凍結乾燥体は、再構成媒体の添加後に容易に溶解することを特徴とする。
本明細書で使用される「再構成製剤」という用語は、凍結乾燥され、希釈剤の添加によって再溶解される製剤を示す。希釈剤は、注射用蒸留水（ＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌ）、グルコース溶液（例えば、５％のグルコース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）、及びそれらの組み合わせを含有し得るが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「投与間隔」は、対象に投与される複数回投与間で経過する時間の量を意味する。したがって、投与間隔は、範囲として示され得る。キメラＦＶＩＩＩ−ＦｃＲｎ ＢＰ、例えば、キメラＦＶＩＩＩ−Ｆｃを用いた本発明の方法における投与間隔は、ＦｃＲｎ ＢＰ、例えば、Ｆｃ部分を有しない第ＶＩＩＩ因子（すなわち、前述のＦＶＩＩＩからなるポリペプチド）の相当量（ＩＵ／ｋｇ）に必要な投与間隔よりも少なくとも約１．５〜８倍長い投与間隔であり得る。例えば、本発明の第ＶＩＩＩ因子−Ｆｃキメラポリペプチド（またはハイブリッド）を投与する場合の投与間隔は、ＦｃＲｎ ＢＰ、例えば、Ｆｃ部分を有しない第ＶＩＩＩ因子（すなわち、第ＶＩＩＩ因子からなるポリペプチド）の相当量に必要な投与間隔よりも少なくとも約１．５倍長い投与間隔であり得る。投与間隔は、例えば、Ｆｃ部分を有しない第ＶＩＩＩ因子（または第ＶＩＩＩ因子からなるポリペプチド）の相当量に必要な投与間隔よりも少なくとも約１．５〜８倍長くあり得る。
本明細書で使用される「投与頻度」という用語は、所定時間内にＦＶＩＩＩポリペプチドの投与を施す頻度を指す。投与頻度は、所定の時間当たりの投与の数、例えば、週に１回または２週間に１回として示され得る。
本明細書で使用される「１回以上の出血症状の予防」または「予防的治療」という用語は、対象の血漿中のＦＶＩＩＩ活性レベルを増加させるために、時間の経過とともに対象への複数回の投与においてＦＶＩＩＩポリペプチドを投与することを意味する。一実施形態において、「１回以上の出血症状の予防」は、１回以上の特発性または制御できない出血または出血症状の発生を予防または阻害するため、または１回以上の特発性または制御できない出血または出血症状の頻度を減少するためのＦＶＩＩＩポリペプチドの使用を示す。別の実施形態において、増加したＦＶＩＩＩ活性レベルは、特発性出血の発生を低減させるため、または不慮の負傷の場合に出血を予防するのに十分である。予防的治療は、出血症状、例えば、オンデマンド治療下で記載される出血症状を低減または予防する。予防的治療は、例えば、患者間の変動性を補うために、「投与間隔」下で論じられるように、個別化され得る。
本明細書で使用される「週に約２回」という用語は、およその数を意味し、「週に約２回」は、週に２回、例えば、３日間で第１の投与、３日間で第２の投与、３日間で第１の投与、４日間で第２の投与、４日間で第１の投与、３日間で第２の投与、４日間で第１の投与、４日間で第２の投与を含むことができる。「週に約２回」という用語はまた、３日毎、４日毎、または５日毎を含むこともできる。
本明細書で使用される「週に約１回」という用語は、およその数を意味し、「週に約１回」は、７日毎±２日、すなわち、５日毎〜９日毎を含むことができる。したがって、「週に１回」の投与頻度は、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、または９日毎であり得る。
本明細書で使用される「個別化した予防」または「予防的かつ個別化した」という用語は、１回以上の特発性及び／または制御できない出血または出血症状の発生を予防または阻害するため、または１回以上の特発性及び／または制御できない出血または出血症状の頻度を減少させるための、個別化した投与及び／または投与間隔もしくは頻度におけるＦＶＩＩＩポリペプチドの使用を意味する。予防の文脈内で「個別化した」は、本出願を通して「個人に合わせた」と同義で使用される。例えば、「個別化した予防」はまた、「個人に合わせた予防」を意味し、「予防的かつ個別化した」はまた、「予防的かつ個人に合わせた」を意味する。一実施形態において、「個別化した間隔」は、３日毎±２日、すなわち、毎日〜５日毎を含む。したがって、「個別化した間隔の予防」の投与頻度は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、または５日毎であり得る。
本明細書で使用される「オンデマンド治療」という用語は、短期間で行われることを意図され、出血症状等の現状に応じて、または予定されている手術等の予測される短期間の必要性に応える治療を意味する。「オンデマンド治療」は、「発症時」治療と互換的に使用される。オンデマンド治療を必要とし得る状態には、出血症状、関節血症、筋肉出血、口の出血、出血、筋肉への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷（ｔｒａｕｍａ ｃａｐｉｔｉｓ）、胃腸出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系の出血、咽頭後隙の出血、後腹膜腔内出血、または腸腰筋鞘（ｉｌｌｉｏｐｓｏａｓ ｓｈｅａｔｈ）内の出血が含まれる。これら以外の出血症状もまた、含まれる。対象は、外科的予防、周術期管理、または外科手術のための処置を必要とし得る。そのような手術には、小手術、大手術、抜歯、扁桃摘出術、他の歯科／胸−顔面手術、鼠径部ヘルニア切開術、滑膜切除術、人工膝関節全置換術、他の関節置換手術、開頭術、骨接合術、外傷外科手術、頭蓋内手術、腹腔内手術、または胸腔内手術が含まれる。これら以外の手術もまた、含まれる。
オンデマンド治療を必要とし得るさらなる状態には、軽度の出血、関節血症、浅層筋肉の出血、軟部組織出血、中等度の出血、切開による筋肉内もしくは軟部組織出血、粘膜出血、血尿、大出血、咽頭の出血、咽頭後部の出血、後腹膜腔（ｒｅｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｉｕｍ）の出血、中枢神経系出血、打撲、切り傷、引っ掻き傷、関節出血、鼻血、口の出血、歯茎からの出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、軽度の自発性出血、大外傷後の出血、中等度の皮膚損傷、または関節、筋肉、内臓器官、もしくは脳への自発性出血が含まれる。オンデマンド治療のためのさらなる理由には、手術のための周術期管理または抜歯、大手術、広範囲の口腔外科手術、泌尿器系手術、ヘルニア手術、膝、臀部、または他の大関節の置換等の整形外科手術における必要性が含まれる。
本明細書で使用される「治療」または「治療する」という用語は、血友病Ｂが含まれるが、これに限定されない、出血性疾患または障害のうちの１つ以上の症状の改善または減少を意味する。一実施形態において、出血性疾患または障害「の治療」または「を治療すること」には、出血性疾患または障害のうちの１つ以上の症状の予防が含まれる。ＦＶＩＩＩの欠乏（例えば、低ベースラインのＦＶＩＩＩ活性）によって引き起こされる出血性疾患または障害において、「治療」または「治療すること」という用語は、ＦＶＩＩＩ補充療法を意味する。対象に、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物を投与することによって、対象は、約１ＩＵ／ｄｌでまたは１ＩＵ／ｄｌを上回るＦＶＩＩＩ活性の血漿トラフレベルを達成する及び／または維持することができる。他の実施形態において、「治療」または「治療すること」は、出血性疾患または障害のうちの１つ以上の症状、例えば、特発性または制御できない出血症状の頻度の減少を意味する。しかしながら、「治療」は、必ずしも治癒である必要はない。
本明細書で使用される「周術期管理」という用語は、手術手技、例えば、外科手術前、それと同時に、またはその後のＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物の使用を意味する。１つ以上の出血症状の「周術期管理」のための使用は、手術前、手術中、手術後の１つ以上の出血もしくは出血症状を防ぐため、または特発性及び／もしくは制御できない出血症状を減少もしくは阻害するための、手術前（すなわち、術前）、手術中（すなわち、術中）、または手術後（すなわち、術後）の外科的予防を含む。
本明細書で使用される「ベースライン」は、投与量を投与する前に、対象における最低の測定された血漿第ＶＩＩＩ因子レベルである。ＦＶＩＩＩの血漿レベルは、スクリーニング訪問時及び投与直前の投与前の２つの時点で測定することができる。あるいは、（ａ）処置前のＦＶＩＩＩ活性が１％未満であり、検出可能なＦＶＩＩＩ抗原を有せず、ナンセンス遺伝子型を有する患者におけるベースラインは、０％として定義され得、（ｂ）処置前のＦＶＩＩＩ活性が１％未満であり、検出可能なＦＶＩＩＩ抗原を有する患者におけるベースラインは、０．５％で設定され得、（ｃ）処置前のＦＶＩＩＩ活性が１〜２％である患者におけるベースラインは、Ｃｍｉｎ（ＰＫ研究を通して最低活性）であり、（ｄ）処置前のＦＶＩＩＩ活性が２％以上である患者におけるベースラインは、２％で設定され得る。投与前にベースラインを上回る活性は、事前の治療からの薬物が残留していると見なされ得、ベースラインまで減衰させ、ｒＦＶＩＩＩＦｃ投与後、ＰＫデータから減算され得る。
本明細書で使用される「Ｔ１／２β」または「Ｔ１／２ベータ」または「ベータＨＬ」は、消失相と関連する半減期であり、ｔ１／２β＝（ｌｎ２）／終末相と関連する消失速度定数である。Ｔ１／２ベータは、ＦＶＩＩＩ活性によって、または血漿中のＦＶＩＩＩ抗原レベルによって測定することができる。活性に基づくＴ１／２ベータは、Ｔ１／２ベータ（活性）として示され、ＦＶＩＩＩ抗原レベルに基づくＴ１／２ベータは、Ｔ１／２ベータ（抗原）として示され得る。Ｔ１／２ベータ（活性）及びＴ１／２ベータ（抗原）の両方は、範囲または幾何平均として示され得る。
本明細書で使用される「トラフ」は、本発明のキメラポリペプチドまたは別のＦＶＩＩＩ分子の投与量を投与した後、及びもしあれば、次の投与量が投与される前に達する、最低血漿ＦＶＩＩＩ活性レベルである。トラフは、本明細書で「閾値」と互換的に使用される。ベースラインのＦＶＩＩＩレベルは、測定されたＦＶＩＩＩレベルから減算して、トラフレベルを計算する。
本明細書で使用される「年換算出血率」（「ＡＢＲ」）という用語は、所定の期間中、対象が経験した出血症状（特発性及び外傷性出血を含む）の数が１年に外挿されているものを指す。例えば、６カ月間で２回の出血は、４のＡＢＲを示し得る。中央値ＡＢＲは、すべての観察されたＡＢＲのうちで中央値を提供し、対象の半数が中央値以下の個々のＡＢＲを有し、残りの半数が中央値以上のＡＢＲを有する。
本明細書で使用される「四分位数範囲」（「ＩＱＲ」）という用語は、統計的分散の測定を指し、上位四分位点と下位四分位点との間の差異と等しい。（全）範囲とは異なり、四分位数範囲は、ロバスト統計であり、２５％のブレークダウンポイントを有し、そのため、しばしば、全範囲よりも好ましい。対称分布（中央値が中線と等しく、第１四分位数及び第３四分位数の平均）については、ＩＱＲの半分は、中央絶対偏差（ＭＡＤ）と等しい。中央値は、中心傾向の相当する測定値である。
本明細書で使用される「対象」は、ヒトを意味する。本明細書で使用される対象には、制御できない出血症状のうちの少なくとも１つの発生を有することが知られている個人、制御できない出血症状と関連する疾患もしくは障害、例えば、出血性疾患もしくは障害、例えば、血友病Ａであると診断される個人、制御できない出血症状、例えば、血友病にかかりやすい者、またはこれらの任意の組み合わせが含まれる。対象はまた、ある特定の活動、例えば、手術、スポーツ活動、または任意の活発な運動の前に、１回以上の制御できない出血症状の危険がある個人を含むこともできる。対象は、１％未満、０．５％未満、２％未満、２．５％未満、３％未満、または４％未満のベースラインのＦＶＩＩＩ活性を有し得る。対象はまた、小児ヒトも含む。小児ヒト対象は、出生〜２０歳、好ましくは出生〜１８歳、出生〜１６歳、出生〜１５歳、出生〜１２歳、出生〜１１歳、出生〜６歳、出生〜５歳、出生〜２歳、または２〜１１歳である。
本明細書で使用される「治療投与量」、「投与量」、「有効量」、または「投薬量」は、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物が投与される対象において、少なくとも約１ＩＵ／ｄｌまたは１ＩＵ／ｄｌを上回るＦＶＩＩＩ活性の血漿トラフレベルを達成する投与量を意味する。本発明の目的のために、一実施形態において、「投与量」は、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物の投与を通して、少なくとも約１ＩＵ／ｄｌまたは１ＩＵ／ｄｌを上回る、少なくとも約２ＩＵ／ｄｌまたは２ＩＵ／ｄｌを上回る、少なくとも約３ＩＵ／ｄｌまたは３ＩＵ／ｄｌを上回る、少なくとも約４ＩＵ／ｄｌまたは４ＩＵ／ｄｌを上回る、あるいは少なくとも約５ＩＵ／ｄｌまたは５ＩＵ／ｄｌを上回る、ＦＶＩＩＩ活性の血漿トラフレベルを維持する投与量の量を指す。別の実施形態において、「投与量」は、出血または出血障害の頻度を低下または低減させる。他の実施形態において、「投与量」は、持続している制御できない出血または出血症状を停止させる。依然として他の実施形態において、「投与量」は、そのような特発性出血または出血症状を起こしやすい対象における特発性出血または出血症状を防ぐ。「投与量」または「治療投与量」は、必ずしも血友病を治癒する必要はない。
「標的関節」という用語は、反復的な出血が生じる（６カ月連続した期間で同じ関節への３回以上の出血症状の頻度）大関節（例えば、臀部、肘、手関節、肩、膝、及び足関節）として定義される。
本明細書で使用される「出血症状」という用語は、出血症状の標準化された定義を採用する。出血症状が、出血の第１の兆候から始まり、出血に対する最終治療から７２時間後に終了し、この間に、同じ位置での出血の任意の症状、または７２時間以下の時間を経た注射は、同じ出血症状であると見なされた。先行の注射後、７２時間を超えて行われた出血症状を治療するための任意の注射は、同じ位置で新しい出血症状を治療するための第１の注射と見なされた。異なる位置での任意の出血は、最後の注射からの時間にかかわらず、別の出血症状と見なされた。この定義は、国際血栓止血学会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ）の標準基準小委員会（Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）であるＦＶＩＩＩ／ＦＩＸの小委員会によって提案され、血友病におけるＰｅｄＮｅｔ多施設研究によって使用されている。
本明細書で使用される「年換算出血率（ＡＢＲ）という用語は、以下の式を用いてそれぞれの患者について年換算される出血症状の数を指す。
本明細書で使用される「変異体」とは、元のポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるが、その基本的な性質、例えば第ＶＩＩＩ因子の凝固活性またはＦｃ（ＦｃＲｎ結合）活性を維持する、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを指す。概して、変異体は、全般的にほぼ同様であり、多くの領域では、元のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと同一である。変異体には、ポリペプチド及びポリヌクレオチドの断片、元のポリペプチドの欠失、挿入、及び修飾された変形が含まれる。
ＩＩ．薬学的組成物
本発明は、薬学的組成物として製剤化されたＦＶＩＩＩポリペプチドに関する。本薬学的組成物は、ヒトへの投与のために製剤化され得る。ＦＶＩＩＩポリペプチドは、短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドまたは長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドであり得る。本薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含み、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清タンパク質、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂が含まれる。本発明を製剤化する様々な方法が、当該技術分野でよく知られている。
本発明は、薬学的組成物として製剤化されたＦＶＩＩＩポリペプチドに関する。本薬学的組成物は、ヒトへの投与のために製剤化され得る。ＦＶＩＩＩポリペプチドは、短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドまたは長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドであり得る。本薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含み、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清タンパク質、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂が含まれる。本発明を製剤化する様々な方法が、当該技術分野でよく知られている。
本明細書で提供されるある特定の製剤において、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、静脈内（ＩＶ）投与用に、滅菌の防腐剤の入っていない、非発熱性の凍結乾燥された白色からオフホワイト色の粉末からケーキとして製剤化される。本製剤は、使い捨てのバイアル中に提供され得る。
ある特定の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）製剤は、適切な量の希釈剤での再構成後、約８３ＩＵ／ｍｌ、１６７ＩＵ／ｍｌ、２５０ＩＵ／ｍｌ、３３３ＩＵ／ｍｌ、５００ＩＵ／ｍｌ、６６７ＩＵ／ｍｌ、１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドを含有するように製造された使い捨てのバイアル中に提供される。希釈剤が約３ｍｌの最終体積になるまで添加されるある実施形態において、使い捨てのバイアルは、約２５０、約５００、約７５０、約１０００、約１５００、約２０００、約３０００、約４０００、約５０００、または約６０００国際単位（ＩＵ）のＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えばｒＦＶＩＩＩＦｃ）を名目上含有することができる。
ある特定の実施形態において、製剤は、活性ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えばｒＦＶＩＩＩＦｃ）に加えて、スクロース（安定剤として作用し得る）、塩化ナトリウム（充填剤として作用し得る）、Ｌ−ヒスチジン（緩衝液として作用し得る）、塩化カルシウム、及びポリソルベート２０またはポリソルベート８０（安定剤として作用し得る）を含む。本製剤は、滅菌塩化ナトリウム溶液を含む希釈剤とともに提供される。ある特定の実施形態において、希釈剤は、充填済み注射器中に提供される。
したがって、賦形剤スクロース、ＮａＣｌ、Ｌ−ヒスチジン、塩化カルシウム、及びポリソルベート２０またはポリソルベート８０とともに、指定量のＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）（国際単位）を含む薬学的組成物が本明細書で提供される。本明細書で提供される組成物は、種々の濃度の種々の賦形剤を含み、当該濃度は、様々な方法で表現され得る。例えば、所与の賦形剤の濃度は、モル濃度（例えば、ＭまたはｍＭ）、重量／体積パーセント（例えば、希釈剤１００ｍｌ当たりのグラム）、またはミリリットル当たりのミリグラム（ｍｇ／ｍｌ）として表現され得る。本明細書で提供される製剤は、おおよそ、例えば、単に１つの有効数字までで表現された濃度（例えば、約０．１％（ｗ／ｖ））から、またはさらなる精度をもった、例えば、２、３、４、５、もしくは６つの有効数字まで（例えば、３つの有効数字までの精度をもった、約３．８８ｍｇ／ｍｌ）の範囲の精度のレベルで指定量の種々の賦形剤を含有することができる。必要な精度のレベルは、例えば、所定の規制機関の要件、または製造プロセスに応じて様々であり得る。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、任意に希釈剤を伴って凍結乾燥体として提供され得る再構成された製剤を含む。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌのｒＦＶＩＩＩＦｃ、例えば、８３ＩＵ／ｍｌ、１６７ＩＵ／ｍｌ、２５０ＩＵ／ｍｌ、３３３ＩＵ／ｍｌ、５００ＩＵ／ｍｌ、６６７ＩＵ／ｍｌ、１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）を含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約１３．３ｍｇ／ｍｌまたは約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロース、約１２．０ｍｇ／ｍｌまたは約２０５ｍＭのＮａＣｌ、約１．０３ｍｇ／ｍｌまたは約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジン、約０．８０ｍｇ／ｍｌまたは約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物、及び約０．１３ｍｇ／ｍｌまたは約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む製剤中に、８３ＩＵ／ｍｌ、１６７ＩＵ／ｍｌ、２５０ＩＵ／ｍｌ、３３３ＩＵ／ｍｌ、５００ＩＵ／ｍｌ、６６７ＩＵ／ｍｌ、１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）を含む。
ある特定の実施形態において、凍結乾燥前の薬学的組成物は、約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌのｒＦＶＩＩＩＦｃ、例えば、１５０ＩＵ／ｍｌ、２８７．５ＩＵ／ｍｌ、４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、５７５ＩＵ／ｍｌ、８６２．５ＩＵ／ｍｌ、１１５０ＩＵ／ｍｌ、１７２５ＩＵ／ｍｌ、２３００ＩＵ／ｍｌ、２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）を含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約２０．０ｍｇ／ｍｌまたは約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロース、約１８．０ｍｇ／ｍｌまたは約３０８ｍＭのＮａＣｌ、約１．５５ｍｇ／ｍｌまたは約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジン、約１．１８ｍｇ／ｍｌまたは約８．０ｍＭの塩化カルシウム二水和物、及び約０．２ｍｇ／ｍｌまたは約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む製剤中に、１５０ＩＵ／ｍｌ、２８７．５ＩＵ／ｍｌ、４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、５７５ＩＵ／ｍｌ、８６２．５ＩＵ／ｍｌ、１１５０ＩＵ／ｍｌ、１７２５ＩＵ／ｍｌ、２３００ＩＵ／ｍｌ、２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）を含む。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される量のスクロースを含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）スクロース、好ましくは、約１．３％（ｗ／ｖ）〜約２％スクロース（ｗ／ｖ）、例えば、約１．３３％（ｗ／ｖ）スクロースまたは約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロース、好ましくは、約１３ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのスクロース、例えば、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースまたは約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。依然として他の実施形態において、トレハロース、ラフィノース及び／またはアルギニンのような安定化剤は、スクロースの代わりにまたはそれと組み合わせて、これらの濃度で使用することができる。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌ、約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌ、及び約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌ、例えば、約２０５ｍＭのＮａＣｌを含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、約１０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ〜約１３ｍｇ／ｍｌ、例えば、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む。ある特定の実施形態において、ＮａＣｌは、ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）を含む凍結乾燥体が中で再構成される希釈液中に、所望の濃度で提供される。
別の実施形態において、本発明の組成物は、マンニトール、グリシン、アラニン、またはヒドロキシエチルデンプン等の充填剤を含まない。他の実施形態において、ＮａＣｌは、唯一の充填剤である。
ある特定の実施形態において、凍結乾燥前の薬学的組成物は、約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌ、約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌ、例えば、約３０８ｍＭのＮａＣｌを含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ〜約１９ｍｇ／ｍｌ、例えば、約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される量のＬ−ヒスチジンを含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジン、例えば、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンまたは約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンを含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン、例えば、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンまたは約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンを含む。ある特定の実施形態において、Ｌ−ヒスチジンは、適切な量の希釈剤での再構成時に所望の濃度でＬ−ヒスチジンを提供する、凍結乾燥体の一部として提供される。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される量の塩化カルシウムを含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウム、例えば、約５．４ｍＭの塩化カルシウムまたは約８ｍＭの塩化カルシウムを含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物、例えば、約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物または約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物を含む。ある特定の実施形態において、塩化カルシウムは、適切な量の希釈剤での再構成時に所望の濃度で塩化カルシウムを提供する、凍結乾燥体の一部として提供される。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される量のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、例えば、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０または約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む。ある特定の関連する実施形態において、薬学的組成物は、約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、例えば、約０．１３％ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０または約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む。ある特定の実施形態において、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０は、適切な量の希釈剤での再構成時に所望の濃度でポリソルベート２０またはポリソルベート８０を提供する、凍結乾燥体の一部として提供される。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌと、約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、凍結乾燥体及び希釈剤として提供される。ある特定の実施形態において、凍結乾燥体の量は、所望の濃度で所望の成分を有する約３ｍｌの薬学的組成物を提供する。
ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、凍結乾燥体及び希釈剤として提供される。ある特定の実施形態において、凍結乾燥体の量は、所望の濃度で所望の成分を有する約３ｍｌの薬学的組成物を提供する。
例示的な組成物は、実施例の表１及び表２に提供される。
例えば、本開示は、約８３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物と、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。本開示は、約１６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物と、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約２５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物と、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物と、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物と、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウム二水和物と、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０ポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約１０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示はまた、約１３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、約１６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。他の実施形態において、本開示は、約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、約２０５ｍＭのＮａＣｌと、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。
本開示は、約８３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約１６７３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約２５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示は、約１０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物をさらに提供する。本開示はまた、約１３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。本開示は、約１６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。他の実施形態において、本開示は、約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、約０．１０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む薬学的組成物を提供する。
本開示はまた、薬学的キットの構成要素を提供する。このようなキットは、１つ以上の容器及び任意の付属物を含む。本明細書で提供されるキットは、必要性のある対象への有効量のＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）の投与を容易にする。ある特定の実施形態において、キットは、静脈内注入を介したＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）の投与を容易にする。ある特定の実施形態において、キットは、静脈内注入を介したＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）の自己投与を容易にする。
ある特定の実施形態において、本開示は、凍結乾燥粉末またはケーキを含む第１の容器であって、当該粉末またはケーキが、（ｉ）ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）スクロース（及び／またはトレハロース、ラフィノース、アルギニン）と、（ｉｉｉ）ＮａＣｌと、（ｉｖ）Ｌ−ヒスチジンと、（ｖ）塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるべき注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える、薬学的キットを提供する。ある特定の実施形態において、本明細書に開示される所望の性質を有する約３ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）製剤を生成するのに十分な希釈剤が提供される。ある特定の実施形態において、第２の容器は、第１の容器への希釈剤の添加、第１の容器の内容物の再構成、注射器中への再度の移し替えを可能にするためのプランジャと関連付けられる充填済み注射器である。ある特定の実施形態において、キットは、第１の容器に注射器を取り付けるためのアダプターをさらに提供する。ある特定の実施形態において、キットは、再構成されたＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）製剤を含有する注射器に取り付けられて製剤のＩＶ注入を可能にする、針及び注入チューブをさらに提供する。
ある特定の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）は、約２００ＩＵ〜約６０００ＩＵ、例えば、約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの総量で提供される。
一実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約２５０ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約８３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約５００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約７５０ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約２５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約１０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約１５００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約２０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約３０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約４０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約５０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約６０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約２５０ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約８３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約５００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約７５０ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約２５０ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約１０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約１５００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約５００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約２０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約３０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約４０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１３３３ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約５０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約１６６７ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
さらなる実施形態において、凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、（ｉ）約６０００ＩＵのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、（ｉｉｉ）約３６ｍｇのＮａＣｌと、（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約２．４ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む第１の容器と、注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、（ｉ）約２０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）と、（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロース、（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える薬学的キットが提供される。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される薬学的キットの第１の容器は、ゴム栓を備えるガラスバイアルである。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される薬学的キットの第２の容器は、プランジャと関連付けられる注射器本体である。ある特定の実施形態において、注射器は、希釈剤を含有する充填済み注射器である。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される薬学的キットは、ガラスバイアルを注射器本体に接続するためのアダプターをさらに備える。ある特定の実施形態において、本明細書で提供される薬学的キットは、静脈内注入に適している注射器に接続される針と連結する注入チューブをさらに備える。
ある特定の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチド（例えば、長時間作用型または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃ）の所望の投与は、本明細書で提供される１つの薬学的キットの使用によって達成することができる。ある特定の実施形態において、２つ以上の薬学的キットは、所望の投与を達成するために使用され得る。所望の投与を達成するために本明細書に提供されるように、２つ以上の薬学的キット中に含有される製剤を組み合わせるまたはプールする方法が本明細書に提供される。
いくつかの実施形態において、薬学的組成物のためのＦＶＩＩＩポリペプチドは、短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドである。他の実施形態において、薬学的組成物のためのＦＶＩＩＩポリペプチドは、長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、薬学的組成物において長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子部分及び非第ＶＩＩＩ因子部分、例えば、異種性部分を含む。一実施形態において、異種性部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドのインビボまたはインビトロ半減期を延長することが可能である。例示的な非第ＶＩＩＩ因子部分は、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（４つのＯ−グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、またはこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない。本発明の例示的な長時間作用型ポリペプチドは、例えば、第ＶＩＩＩ因子Ｆｃポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子アルブミンポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子ＰＡＳポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子トランスフェリンポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子ＣＴＰポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子ＰＥＧポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子ＨＥＳポリペプチド、第ＶＩＩＩ因子アルブミン結合ポリペプチドポリペプチド、または第ＶＩＩＩ因子アルブミン結合小分子ポリペプチドを含む。
第ＶＩＩＩ因子（長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドの第ＶＩＩＩ因子部分または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドのＦＶＩＩＩ）は、シグナル配列を含まない、表１１に示される第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７、配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得、第ＶＩＩＩ因子部分が第ＶＩＩＩ因子活性を有する。第ＶＩＩＩ因子（キメラポリペプチドの第ＶＩＩＩ因子部分）は、シグナル配列を含まない、表１１に示される第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７、配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１）と同一であり得る。
第ＶＩＩＩ因子（長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドの第ＶＩＩＩ因子部分または短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドのＦＶＩＩＩ）は、シグナル配列を含む、表１１に示される第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸１〜１４５７、配列番号６のアミノ酸１〜２３５１）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得、第ＶＩＩＩ因子部分が第ＶＩＩＩ因子活性を有する。第ＶＩＩＩ因子（長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドまたは短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドの第ＶＩＩＩ因子部分）は、シグナル配列を含む、表１１に示される第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸１〜１４５７及び配列番号６のアミノ酸１〜２３５１）と同一であり得る。
長時間作用型ポリペプチドは、シグナル配列を含まない、表１１Ａ（ｉ）に示される第ＶＩＩＩ因子及びＦｃアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるか、またはシグナル配列を含む、表１１Ａ（ｉ）に示される第ＶＩＩＩ因子及びＦｃアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸１〜１６８４）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である配列を含み得、当該配列が第ＶＩＩＩ因子活性を有する。第ＶＩＩＩ因子活性は、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイ、発色アッセイ、または他の既知の方法によって測定することができる。長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、シグナル配列を含まない、表１１Ａ（ｉ）に示される第ＶＩＩＩ因子及びＦｃアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４）と同一であるか、またはシグナル配列を含む、表１１Ａ（ｉ）に示される第ＶＩＩＩ因子及びＦｃアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸１〜１６８４）と同一である配列を含むことができる。
上で論じられるように、例示的な長時間作用型ポリペプチドはまた、１つ以上のアルブミンポリペプチド、アルブミン結合ポリペプチド、またはアルブミン結合小分子と融合された第ＶＩＩＩ因子を含む。一実施形態において、アルブミンは、ヒトアルブミンである。アルブミンまたはアルブミン結合タンパク質は、ＦＶＩＩＩのＮ末端またはＦＶＩＩＩのＣ末端のいずれかに融合するか、またはＦＶＩＩＩ中の２つのアミノ酸の間に挿入することができる。本発明において使用され得るアルブミンの例、例えばその断片は、知られている。例えば、米国特許第７，５９２，０１０号、米国特許第６，６８６，１７９号、及びＳｃｈｕｌｔｅ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．１２４ Ｓｕｐｐｌ．２：Ｓ６〜Ｓ８（２００９）（これらのそれぞれは、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
アルブミン結合ポリペプチドは、細菌アルブミン結合ドメイン、アルブミン結合ペプチド、またはアルブミンに結合することができるアルブミン結合抗体断片を損なうことができるが、これらに限定されない。Ｋｒａｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３７８：１９０−１９４（１９９６）及びＬｉｎｈｕｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１１：２０６−２１３（２００２）によって開示されている連鎖球菌のタンパク質Ｇのドメイン３は、細菌アルブミン結合ドメインの例である。アルブミン結合ペプチドの例としては、コア配列ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（配列番号７）を有する一連のペプチドが挙げられる。例えば、Ｄｅｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２，２７７：３５０３５−３５０４３（２００２）を参照されたい。アルブミン結合抗体断片の例は、Ｍｕｌｌｅｒ ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．９：３１９−３２６（２００７）；Ｒｏｏｖｅｒｓｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６：３０３−３１７（２００７）及びＨｏｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ Ｓｃｉ．，２１：２８３−２８８（２００８）（これらは、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に開示される。
ある特定の態様において、本発明の長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、非ポリペプチド小分子、変異体、またはそれらのアルブミンに結合できる誘導体のための少なくとも１つの結合部位を含む。このようなアルブミン結合部分の例は、Ｔｒｕｓｓｅｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０：２２８６−２２９２（２００９）によって開示されている２−（３−マレイミドプロパンアミド（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｐｒｏｐａｎａｍｉｄｏ））−６−（４−（４−ヨードフェニル）ブタンアミド）ヘキサン酸（「Ａｌｂｕ」タグ）である。
上で論じられるように、例示的な長時間作用型ポリペプチドはまた、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットの少なくとも１つのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、またはそれらの断片、変異体、もしくは誘導体に融合された第ＶＩＩＩ因子を含む。ＣＴＰは、第ＶＩＩＩ因子、ＦＶＩＩＩのＮ末端またはＦＶＩＩＩのＣ末端のいずれかに融合するか、またはＦＶＩＩＩ中の２つのアミノ酸の間に挿入することができる。組換えタンパク質に融合または挿入された１つ以上のＣＴＰペプチドは、タンパク質のインビボ半減期を増加させることが知られている。例えば、米国特許第５，７１２，１２２号（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例示的なＣＴＰペプチドは、ＤＰＲＦＱＤＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬ（配列番号８）またはＳＳＳＳＫＡＰＰＰＳＬＰＳＰＳＲＬＰＧＰＳＤＴＰＩＬＰＱ（配列番号９）を含む。例えば、参照によって組み込まれる、米国特許出願公開第２００９／００８７４１１ Ａ１号を参照されたい。
上で論じられるように、例示的な長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドはまた、少なくとも１つのＰＡＳ配列に融合された第ＶＩＩＩ因子、またはそれらの断片、変異体、もしくは誘導体を含む。ＰＡＳ配列は、ＦＶＩＩＩのＮ末端またはＦＶＩＩＩのＣ末端のいずれかに融合するか、またはＦＶＩＩＩ中の２つのアミノ酸の間に挿入することができる。本明細書で使用されるＰＡＳペプチドまたはＰＡＳ配列は、主にアラニン及びセリン残基を含む、または主にアラニン、セリン、及びプロリン残基を含む、アミノ酸配列を意味し、このアミノ酸配列は、生理的条件下でランダムコイル立体配座を形成する。したがって、ＰＡＳ配列は、キメラタンパク質において異種性部分の一部として使用され得る、アラニン、セリン、及びプロリンを含む、それらから本質的になる、またはそれらからなる、ビルディングブロック、アミノ酸重合体、または配列カセットである。アミノ酸重合体はまた、アラニン、セリン、及びプロリン以外の残基が副成分としてＰＡＳ配列において付加されるときにも、ランダムコイル立体配座を形成することができる。「副成分」とは、アラニン、セリン、及びプロリン以外のそのアミノ酸が、ＰＡＳ配列においてある程度、例えば、アミノ酸の最大約１２％、すなわち、ＰＡＳ配列の１００個のアミノ酸のうちの約１２個、最大約１０％、最大約９％、最大約８％、約６％、約５％、約４％、約３％、すなわち約２％、または約１％まで付加され得ることを意味する。アラニン、セリン、及びプロリンとは異なるアミノ酸は、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群から選択することができる。生理的条件下で、ＰＡＳペプチドは、ランダムコイル立体配座を形成し、それによって、本発明の組換えタンパク質に対して増加したインビボ及び／またはインビトロ安定性を媒介することができ、また凝血促進活性を有する。
ＰＡＳペプチドの非限定的な例としては、ＡＳＰＡＡＰＡＰＡＳＰＡＡＰＡＰＳＡＰＡ（配列番号１０）、ＡＡＰＡＳＰＡＰＡＡＰＳＡＰＡＰＡＡＰＳ（配列番号１１）、ＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳ（配列番号１２）、ＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号１３）、ＳＳＰＳＡＰＳＰＳＳＰＡＳＰＳＰＳＳＰＡ（配列番号１４）、ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号１５）、ＡＳＡＡＡＰＡＡＡＳＡＡＡＳＡＰＳＡＡＡ（配列番号１６）、またはそれらの任意の変異体、誘導体、断片、もしくは組み合わせが挙げられる。ＰＡＳ配列のさらなる例は、例えば、米国特許公開第２０１０／０２９２１３０ Ａ１号及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００８／１５５１３４ Ａ１号、欧州発行特許ＥＰ２１７３８９０により知られている。
上で論じられるように、例示的な長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドはまた、少なくとも１つのトランスフェリンペプチド、またはそれらの断片、変異体、もしくは誘導体に融合された第ＶＩＩＩ因子を含む。少なくとも１つのトランスフェリンペプチドは、ＦＶＩＩＩのＮ末端もしくはＦＶＩＩＩのＣ末端のいずれかに融合するか、またはＦＶＩＩＩ中の２つのアミノ酸の間に挿入することができる。任意のトランスフェリンは、本発明の組換えＦＶＩＩＩタンパク質に融合または挿入され得る。例として、野生型ヒトＴｆ（Ｔｆ）は、遺伝子重複に由来するように思われる、２つの主要なドメインＮ（約３３０個のアミノ酸）及びＣ（約３４０個のアミノ酸）を有する、およそ７５ＫＤａ（グリコシル化を考慮せず）の６７９個のアミノ酸のタンパク質である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ００１０６３、ＸＭ００２７９３、Ｍ１２５３０、ＸＭ０３９８４５、ＸＭ０３９８４７、及びＳ９５９３６（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）（これら全ては、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
トランスフェリンは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）媒介性エンドサイトーシスを通じて鉄を輸送する。鉄がエンドソーム区画中に放出され、Ｔｆ−ＴｆＲ複合体が細胞表面上に再循環された後、Ｔｆは、次の鉄輸送周期のために細胞外空間に再び放出される。Ｔｆは、１４〜１７日間を超過する、長い半減期を有する（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２３：２０６−２０９（２００２））。トランスフェリン融合タンパク質は、半減期延長、癌療法のための標的送達、経口送達、及びプロインスリンの持続的活性化について、研究されてきた（Ｂｒａｎｄｓｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．，２９：２３０−２３８（２０１１）、Ｂａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：７２９２-７２９６（２００５）、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，３３４：６８２−６９２（２０１０）、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １５５：３８６−３９２（２０１１））。
上で論じられるように、例示的な長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドはまた、少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に融合される第ＶＩＩＩ因子を含む。
ＰＥＧ化されたＦＶＩＩＩは、ＦＶＩＩＩと少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子との間に形成された複合体を指し得る。ＰＥＧは、多岐にわたる分子量及び平均分子量の範囲で市販されている。ＰＥＧの平均分子量の範囲の典型的な例としては、約２００、約３００、約４００、約６００、約１０００、約１３００〜１６００、約１４５０、約２０００、約３０００、約３０００〜３７５０、約３３５０、約３０００〜７０００、約３５００〜４５００、約５０００〜７０００、約７０００〜９０００、約８０００、約１００００、約８５００〜１１５００、約１６０００〜２４０００、約３５０００、約４００００、約６００００、及び約８００００ダルトンが挙げられるが、これらに限定されない。これらの平均分子量は、単に例として提供されるものであり、決して限定するようには意図されない。
本発明に有用な長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドをＰＥＧ化して、モノまたはポリ（例えば、２〜４個の）ＰＥＧ部分を含めることができる。ＰＥＧ化は、当該技術分野で既知のＰＥＧ化反応のいずれによっても実施され得る。ＰＥＧ化タンパク質産物を調製するための方法は、一般に、（ｉ）ポリペプチドを、ポリエチレングリコール（ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体等）と、本発明のペプチドが１個以上のＰＥＧ基に結合する条件下で反応させることと、（ｉｉ）反応産物（複数可）を得ることとを含む。一般に、反応のための最適な反応条件は、既知のパラメーター及び所望の結果に基づいて個別に決定される。
例えば、Ｍａｌｉｋ Ｆ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−３５（１９９２）、Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ３（２）：４−１０（１９９２）、欧州特許公開第ＥＰ０４０１３８４号、同第ＥＰ０１５４３１６号、及び同第ＥＰ０４０１３８４号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ９２／１６２２１号及び同第ＷＯ９５／３４３２６号等の、当業者に利用可能ないくつかのＰＥＧ結合方法がある。非限定な例として、ＦＶＩＩＩ変異体は、ＦＶＩＩＩにおいて１つ以上の挿入部位中にシステイン置換基を含有することができ、そのシステインは、ＰＥＧ重合体にさらに複合体化され得る。Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０−２７９（２０１０）及び米国特許第７，６３２，９２１号（これらは、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
上で論じられるように、例示的な長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドはまた、少なくとも１つのヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）重合体に融合される第ＶＩＩＩ因子を含む。ＨＥＳは、自然発生のアミロペクチンの誘導体であり、体内のαアミラーゼによって分解される。ＨＥＳは、有利な生物学的性質を示し、血液量補充剤として、及び血液希釈療法において診療所で使用される。例えば、Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｋｒａｎｋｅｎｈａｕｓｐｈａｒｍａｚｉｅ８：２７１−２７８（１９８７）、及びＷｅｉｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｚｎｅｉｍ．−Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ／Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．４１：４９４−４９８（１９９１）を参照されたい。
ＨＥＳは、分子量分布及び置換度によって主に特徴付けられる。ＨＥＳは、１〜３００ｋＤ、２〜２００ｋＤ、３〜１００ｋＤ、または４〜７０ｋＤの平均分子量（重量平均）を有する。ヒドロキシエチルデンプンは、ヒドロキシエチル基に関して、０．１〜３、０．１〜２、０．１〜０．９、または０．１〜０．８のモル置換度、及び２〜２０の範囲のＣ２：Ｃ６置換比をさらに示し得る。約１３０ｋＤの平均分子量を有するＨＥＳは、ＦｒｅｓｅｎｉｕｓのＶＯＬＵＶＥＮ（登録商標）である。ＶＯＬＵＶＥＮ（登録商標）は、例えば、血液量減少の治療法及び予防法のための治療的適応において使用される体積補充に用いられる、人工コロイドである。例えば、上に記載された同じＰＥＧ結合方法等の、当業者に利用可能ないくつかのＨＥＳ結合方法がある。
いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩ部分を含む長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、非ＦＶＩＩＩ部分を伴わない、同じＦＶＩＩＩ部分からなるポリペプチドよりも増大した半減期（ｔ１／２）を有する。増加したｔ１／２を伴う長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、本明細書において長期間持続型ＦＶＩＩＩと称され得る。長時間作用型キメラ第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、例えば、Ｆｃに融合される第ＶＩＩＩ因子（例えば、ＦＶＩＩＩＦｃ単量体−二量体ハイブリッド等のハイブリッドの形態でのキメラ第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドを含む；実施例、表１１Ａ、及び米国特許第７，４０４，９５６号及び同第７，３４８，００４号を参照されたい）と、アルブミンに融合される第ＶＩＩＩ因子と、を含む。
本明細書で使用される第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、別途明記されない限り、その正常な役割が凝固である、機能的第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドである。したがって、第ＶＩＩＩ因子という用語は、機能的である変異体ポリペプチドを含む。第ＶＩＩＩ因子タンパク質は、ヒト、ブタ、イヌ、及びマウス第ＶＩＩＩ因子タンパク質であり得る。完全長のポリペプチド及びポリヌクレオチド配列は、多くの機能的断片、変異体、及び修飾された変形のように知られている。ヒト第ＶＩＩＩ因子配列の例は、配列番号２または６において部分配列として示される（表１１）。第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドは、例えば、完全長の第ＶＩＩＩ因子、Ｎ端末でＭｅｔを欠く完全長の第ＶＩＩＩ因子、成熟第ＶＩＩＩ因子（シグナル配列を欠く）、Ｎ端末でさらなるＭｅｔを有する成熟第ＶＩＩＩ因子、及び／またはＢドメインを完全にまたは部分的に欠失した第ＶＩＩＩ因子を含む。第ＶＩＩＩ因子変異体は、部分的欠失であれ、完全な欠失であれ、Ｂドメイン欠失を含む。
非常に多くの機能的第ＶＩＩＩ因子変異体が、上及び下で論じられるように知られている。加えて、第ＶＩＩＩ因子における数百個の非機能的変異が血友病患者において特定され、第ＶＩＩＩ因子機能におけるこれらの変異の効果は、それらが置換の性質においてよりも第ＶＩＩＩ因子の３次元構造内に存在する場所という理由が大きいことが決定された（Ｃｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．１９：２７４−８（２００２）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。加えて、ヒト及び他の種由来の第ＶＩＩＩ因子間の比較は、機能に必要とされる可能性の高い、保存された残基を特定している（Ｃａｍｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７９：３１７−２２（１９９８）、ＵＳ６，２５１，６３２、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。
ヒト第ＶＩＩＩ因子遺伝子は、哺乳類細胞中に単離または発現され（Ｔｏｏｌｅ，Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：３４２−３４７（１９８４）、Ｇｉｔｓｃｈｉｅｒ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：３２６−３３０（１９８４）、Ｗｏｏｄ，Ｗ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：３３０−３３７（１９８４）、Ｖｅｈａｒ，Ｇ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：３３７−３４２（１９８４）、ＷＯ８７／０４１８７、ＷＯ８８／０８０３５、ＷＯ８８／０３５５８、米国特許第４，７５７，００６号、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）、アミノ酸配列はｃＤＮＡから推定された。米国特許第４，９６５，１９９号（Ｃａｐｏｎら）（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）は、哺乳類宿主細胞における第ＶＩＩＩ因子の生成及びヒト第ＶＩＩＩ因子の精製のためのＤＮＡ組換え方法を開示する。ＣＨＯ（チャイニーズハムスターの卵巣）細胞、及びＢＨＫ（ベビーハムスター腎臓細胞）におけるヒト第ＶＩＩＩ因子発現が報告されている。ヒト第ＶＩＩＩ因子は、Ｂドメイン（米国特許第４，９９４，３７１号及び同第４，８６８，１１２号、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）の一部または全てを欠失させるように修飾され、ヒト第ＶＩＩＩ因子Ｂドメインのヒト第Ｖ因子Ｂドメインによる置き換えが実施された（米国特許第５，００４，８０３号、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードするｃＤＮＡ配列及び予測されるアミノ酸配列がそれぞれ、米国特許出願公開第２００５／０１００９９０号（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）の配列番号１及び２に示される。
参照によってその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，８５９，２０４号（Ｌｏｌｌａｒ，Ｊ．Ｓ．）は、減少した抗原性及び減少した免疫反応を有する第ＶＩＩＩ因子の機能的変異体について報告している。参照によってその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，３７６，４６３号（Ｌｏｌｌａｒ，Ｊ．Ｓ．）はまた、第ＶＩＩＩ因子の変異体が減少した免疫反応を有することについて報告している。米国特許出願公開第２００５／０１００９９０号（Ｓａｅｎｋｏら）（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）は、第ＶＩＩＩ因子のＡ２ドメインにおける機能的変異を報告している。
Ｂドメイン欠失を含むいくつかの機能的第ＶＩＩＩ因子分子は、どちらもＢａｘｔｅｒに譲渡されたＵＳ６，３１６，２２６及びＵＳ６，３４６，５１３；Ｉｎ２Ｇｅｎに譲渡されたＵＳ７，０４１，６３５；Ｃｈｉｒｏｎに譲渡されたＵＳ５，７８９，２０３、ＵＳ６，０６０，４４７、ＵＳ５，５９５，８８６、及びＵＳ６，２２８，６２０；Ｂｉｏｖｉｔｒｕｍに譲渡されたＵＳ５，９７２，８８５及びＵＳ６，０４８，７２０；Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋに譲渡されたＵＳ５，５４３，５０２及びＵＳ５，６１０，２７８；Ｉｍｍｕｎｏ Ａｇに譲渡されたＵＳ５，１７１，８４４；Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ Ｓ．Ａ．に譲渡されたＵＳ５，１１２，９５０；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに譲渡されたＵＳ４，８６８，１１２に開示され、これらのそれぞれは、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
ブタ第ＶＩＩＩ因子配列が公開され（Ｔｏｏｌｅ，Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：５９３９−５９４２（１９８６）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）、ブタ脾臓ｃＤＮＡライブラリ由来の第ＶＩＩＩ因子配列のＰＣＲ増幅から得られた完全なブタｃＤＮＡ配列が報告されている（Ｈｅａｌｅｙ，Ｊ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８８：４２０９−４２１４（１９９６）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。全てのドメイン、全てのサブユニット、及び特定のアミノ酸配列の置換を有するハイブリッドヒト／ブタ第ＶＩＩＩ因子は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＬｏｌｌａｒ及びＲｕｎｇｅによる米国特許第５，３６４，７７１号、ならびにＷＯ９３／２００９３に開示された。さらに最近、対応するヒトドメインと置換されたブタＡ１及び／またはＡ２ドメインとともに、ブタ第ＶＩＩＩ因子及びキメラ第ＶＩＩＩ因子のＡ１及びＡ２ドメインのヌクレオチド及び対応するアミノ酸配列が、ＷＯ９４／１１５０３（参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）において報告された。米国特許第５，８５９，２０４号（Ｌｏｌｌａｒ，Ｊ．Ｓ．）はまた、ブタｃＤＮＡ及び推定されるアミノ酸配列を開示している。Ｅｍｏｒｙに譲渡された米国特許第６，４５８，５６３号（参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）は、Ｂドメイン欠失ブタ第ＶＩＩＩ因子を開示している。
本明細書で使用される第ＶＩＩＩ因子「Ｂドメイン」は、内部アミノ酸配列同一性及びトロンビンによるタンパク質分解切断部位（例えば、完全長の成熟ヒト第ＶＩＩＩ因子の残基Ｓｅｒ７４１−Ａｒｇ１６４８）により定義される、当該技術分野で既知のＢドメインと同じである。他のヒト第ＶＩＩＩ因子ドメインは、以下のアミノ酸残基：Ａ１、残基Ａｌａ１−Ａｒｇ３７２；Ａ２、残基Ｓｅｒ３７３−Ａｒｇ７４０；Ａ３、残基Ｓｅｒ１６９０−Ｉｌｅ２０３２；Ｃ１、残基Ａｒｇ２０３３−Ａｓｎ２１７２；Ｃ２、残基Ｓｅｒ２１７３−Ｔｙｒ２３３２によって定義される。Ａ３−Ｃ１−Ｃ２配列は、残基Ｓｅｒ１６９０−Ｔｙｒ２３３２を含む。残りの配列、残基Ｇｌｕ１６４９−Ａｒｇ１６８９は、通常、第ＶＩＩＩ因子軽鎖活性化ペプチドと称される。ブタ、マウス、イヌ第ＶＩＩＩ因子について、Ｂドメインを含む全てのドメインに対する境界の位置も当該技術分野で既知である。一実施形態において、第ＶＩＩＩ因子のＢドメインは、欠失している（「Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子」または「ＢＤＤ ＦＶＩＩＩ」）。ＢＤＤ ＦＶＩＩＩの一例は、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）（組換えＢＤＤ ＦＶＩＩＩ）であり、これは、表１１Ａ（ｉ）における配列の第ＶＩＩＩ因子部分としての配列（配列番号２のアミノ酸１〜１４５７または２０〜１４５７）を有する。別の実施形態において、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は無傷の細胞内プロセシング部位を含有し、これはＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子の残基７５４でのアルギニンに対応し、これは配列番号２のアルギニン残基７７３または完全長の第ＶＩＩＩ因子の残基１６４８に対応し、これは配列番号６のアルギニン残基１６６７に対応する。任意の配列番号を参照しない、本明細書で使用される配列残基番号は、別段に指定されない限り、シグナルペプチド配列（１９個のアミノ酸）を伴わない第ＶＩＩＩ因子配列に対応している。例えば、完全長の第ＶＩＩＩ因子のＳ７４３／Ｑ１６３８は、１９個のアミノ酸シグナルペプチド配列の結果、配列番号６のＳ７６２／Ｑ１６５７に対応する。他の実施形態において、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、完全長の第ＶＩＩＩ因子において、アルギニン１６４５に対応するアミノ酸位置での置換もしくは変異、アルギニン１６４８に対応するアミノ酸位置での置換もしくは変異、またはアルギニン１６４５及びアルギニン１６４８に対応するアミノ酸位置での置換もしくは変異を含む。いくつかの実施形態において、アルギニン１６４５に対応するアミノ酸位置で置換されたアミノ酸は、アルギニン１６４８に対応するアミノ酸位置で置換されたアミノ酸とは異なるアミノ酸である。ある特定の実施形態において、置換または変異は、アルギニン以外のアミノ酸、例えば、アラニンである。
「Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子」は、米国特許第６，３１６，２２６号、同第６，３４６，５１３号、同第７，０４１，６３５号、同第５，７８９，２０３号、同第６，０６０，４４７号、同第５，５９５，８８６号、同第６，２２８，６２０号、同第５，９７２，８８５号、同第６，０４８，７２０号、同第５，５４３，５０２号、同第５，６１０，２７８号、同第５，１７１，８４４号、同第５，１１２，９５０号、同第４，８６８，１１２号、及び同第６，４５８，５６３号（これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される完全なまたは部分的な欠失を有することができる。いくつかの実施形態において、本発明のＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子配列は、米国特許第６，３１６，２２６号の４列４行目〜５列２８行目及び実施例１〜５（同様に、ＵＳ６，３４６，５１３）に開示される欠失のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態において、本発明のＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、米国特許第５，７８９，２０３号の２列２６〜５１行目及び実施例５〜８（同様に、ＵＳ６，０６０，４４７、ＵＳ５，５９５，８８６、及びＵＳ６，２２８，６２０）に開示される欠失を有する。いくつかの実施形態において、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、米国特許第５，９７２，８８５号の１列２５行目〜２列４０行目；米国特許第６，０４８，７２０号の６列１〜２２行目及び実施例１；米国特許第５，５４３，５０２号の２列１７〜４６行目；米国特許第５，１７１，８４４号の４列２２行目〜５列３６行目；米国特許第５，１１２，９５０号の２列５５〜６８行目、図２、及び実施例１；米国特許第４，８６８，１１２号の２列２行目〜１９列２１行目及び表２；米国特許第７，０４１，６３５号の２列１行目〜３列１９行目、３列４０行目〜４列６７行目、７列４３行目〜８列２６行目、１１列５行目〜１３列３９行目；または米国特許第６，４５８，５６３号の４列２５〜５３行目に記載される欠失を有する。いくつかの実施形態において、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、ほとんどのＢドメインの欠失を有するが、ＷＯ９１／０９１２２（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるように、一次翻訳生成物の２つのポリペプチド鎖（すなわち、細胞内プロセシング部位）へのインビボタンパク質分解プロセシングに必須である、Ｂドメインのアミノ末端配列を依然として含有する。いくつかの実施形態において、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、アミノ酸７４７〜１６３８の欠失、すなわち、事実上、Ｂドメインの完全な欠失によって構築される。Ｈｏｅｂｅｎ Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（１３）：７３１８−７３２３（１９９０）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子はまた、第ＶＩＩＩ因子のアミノ酸７７１〜１６６６またはアミノ酸８６８〜１５６２の欠失を含有することができる。Ｍｅｕｌｉｅｎ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２（４）：３０１−６（１９８８）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。本発明の一部であるさらなるＢドメイン欠失は、例えば、アミノ酸９８２〜１５６２または７６０〜１６３９（Ｔｏｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：５９３９−５９４２（１９８６））、７９７〜１５６２（Ｅａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２５：８３４３−８３４７（１９８６））、７４１〜１６４６（Ｋａｕｆｍａｎ（ＰＣＴ公開出願第ＷＯ８７／０４１８７号））、７４７〜１５６０（Ｓａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ ６：５５３−５６４（１９８７））、７４１〜１６４８（Ｐａｓｅｋ（ＰＣＴ出願第８８／００８３１号））、８１６〜１５９８または７４１〜１６８９（Ｌａｇｎｅｒ（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．（１９８８）Ｎｏ８２：１６−２５、ＥＰ２９５５９７）の欠失を含み、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩはＢドメイン中に部分的欠失を含む、すなわち、米国特許出願公開第２０１００２８６０６７号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００９３８４０号（いずれも参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に開示される、Ｂドメイン由来の２１個のアミノ酸（すなわち、配列番号１７であるＳＦＳＱＮＳＲＨＰＳＱＮＰＰＶＬＫＲＨＱＲ）を有する。前述の欠失のそれぞれは、任意の第ＶＩＩＩ因子配列において行うことができる。
一実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドにおけるＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子部分は、金属結合によって接続される（または連結される）２つの鎖にプロセシングされ、このうち第１の鎖が重鎖（Ａ１−Ａ２−部分的Ｂ）を含み、第２の鎖が軽鎖（Ａ３−Ｃ１−Ｃ２）を含む。別の実施形態において、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子部分は、一本鎖第ＶＩＩＩ因子である。一本鎖第ＶＩＩＩ因子は、Ｂドメイン欠失の第ＶＩＩＩ因子の残基７５４（配列番号２の残基７７３）で、または完全長の第ＶＩＩＩ因子の残基１６４８（配列番号６の残基１６５７）で、アルギニンに対応する細胞内プロセシング部位を含むことができる。
重鎖と軽鎖との間の金属結合は、当該技術分野で既知の任意の金属であり得る。例えば、本発明に有用な金属は、二価金属イオンであり得る。重鎖及び軽鎖を連結するために使用することができる金属は、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、またはＣｕ２＋を含むが、これらに限定されない。Ｆａｔｏｕｒｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１５５（１）：１２１−１３１（１９９７）、Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ．２７９（１３）：１２６７７−１２６８４（２００４）。
本明細書で使用されるＦＶＩＩＩポリペプチドは、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子もしくは一本鎖第ＶＩＩＩ因子またはこれらの組み合わせを含むことができる。本明細書で使用されるとき、「プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子」は、アルギニン１６４８（完全長の第ＶＩＩＩ因子のための）またはアルギニン７５４（Ｂドメイン欠失の第ＶＩＩＩ因子のための）で、すなわち、細胞内プロセシング部位で切断された第ＶＩＩＩ因子を意味する。細胞内プロセシング部位での切断により、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子は、２つのポリペプチド鎖、重鎖である第１の鎖、及び軽鎖である第２の鎖を含む。例えば、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子Ｆｃ融合タンパク質（すなわち、Ｆｃに融合される重鎖及び軽鎖）は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてそれぞれおよそ９０ｋＤａ及び１３０ｋＤａで泳動し、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてそれぞれ９０ｋＤａ及び１０５ｋＤａで泳動する。したがって、一実施形態において、長時間作用型ポリペプチド中でまたは短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド中で、第ＶＩＩＩ因子部分の少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％は、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子である。別の実施形態において、長時間作用型ポリペプチド中でまたは短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド中で、第ＶＩＩＩ因子部分の約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％は、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子である。特定の実施形態において、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子を含むＦＶＩＩＩポリペプチドは、一本鎖第ＶＩＩＩ因子を含むポリペプチドから精製され（単離され）、長時間作用型ポリペプチド中でまたは短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド中で、第ＶＩＩＩ因子部分の少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％がプロセシングされた第ＶＩＩＩ因子である。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドは、一本鎖ＦＶＩＩＩポリペプチドの約１５％〜２５％と、プロセシングされたＦＶＩＩＩポリペプチドの約７５％〜約８５％とを含む。
本明細書で使用されるとき、「一本鎖第ＶＩＩＩ因子」、「ＳＣ第ＶＩＩＩ因子」、または「ＳＣＦＶＩＩＩ」は、アルギニン部位（完全長の第ＶＩＩＩ因子のための残基１６４８（すなわち、配列番号６の残基１６６７）で、またはＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子のための残基７５４（すなわち、配列番号２の残基７７３）で切断されていない第ＶＩＩＩ因子を意味する。したがって、本明細書で使用されるＦＶＩＩＩポリペプチド中の一本鎖第ＶＩＩＩ因子は、一本鎖を含む。一実施形態において、一本鎖第ＶＩＩＩ因子は、無傷の細胞内プロセシング部位を含有する。別の実施形態において、本発明の一本鎖第ＶＩＩＩ因子は、完全長の第ＶＩＩＩ因子においてアルギニン１６４５に対応するアミノ酸位置での置換もしくは変異、アルギニン１６４８に対応するアミノ酸位置での置換もしくは変異、またはアルギニン１６４５及びアルギニン１６４８に対応するアミノ酸位置での置換もしくは変異を含む。他の実施形態において、アルギニン１６４５に対応するアミノ酸位置で置換されるアミノ酸は、アルギニン１６４８に対応するアミノ酸位置で置換されるアミノ酸由来の異なるアミノ酸である。ある特定の実施形態において、置換または変異は、アルギニン以外のアミノ酸、例えば、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、セレノシステイン、セリン、チロシン、ヒスチジン、オルニチン、ピロリジン、またはタウリンである。一本鎖第ＶＩＩＩ因子Ｆｃ融合タンパク質は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいておよそ２２０ｋＤａで、及び還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいておよそ１９５ｋＤａで泳動することができる。
本明細書で使用されるＦＶＩＩＩポリペプチド中の第ＶＩＩＩ因子部分は、第ＶＩＩＩ因子活性を有する。第ＶＩＩＩ因子活性は、当該技術分野で既知の任意の方法で測定され得る。例えば、それらの方法の１つは、発色アッセイであり得る。発色アッセイ機構は、活性化された第ＶＩＩＩ因子が、活性化された因子ＩＸ、リン脂質、及びカルシウムイオンの存在下で因子Ｘの因子Ｘａへの変換を加速するという、血液凝血カスケードの原則に基づく。因子Ｘａ活性は、因子Ｘａに特異的なｐ−ニトロアニリド（ｐＮＡ）基質の加水分解によって評価される。４０５ｎＭで測定されるｐ−ニトロアニリンの初期の放出率は、因子Ｘａ活性に直接比例し、故に、試料中の第ＶＩＩＩ因子活性に直接比例する。発色アッセイは、国際血栓止血学会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ）（ＩＳＴＨ）の学術標準化委員会（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＳＳＣ）の第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子小委員会によって推奨される。１９９４年以来、発色アッセイはまた、ＦＶＩＩＩ濃縮物の効力の割り当てについて、欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）の参照方法となっている。したがって、一実施形態において、一本鎖第ＶＩＩＩ因子を含むＦＶＩＩＩポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子活性が発色アッセイによってインビトロで測定されるとき、プロセシングされた第ＶＩＩＩ因子を含むＦＶＩＩＩポリペプチドに同等の第ＶＩＩＩ因子活性を有する。
ある特定の実施形態において、長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩ単量体−二量体ハイブリッドである。ＦＶＩＩＩ単量体−二量体ハイブリッドを取得するために、ヒト組換えＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩのコード配列を、ＦＶＩＩＩ特異的プライマーを用いて、ヒト肝臓ポリＡ ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によって得た。ＦＶＩＩＩ配列は、ＦＶＩＩＩのための天然シグナル配列を含む。Ｂドメイン欠失は、セリン７４３（Ｓ７４３；２２８７ｂｐ）からグルタミン１６３８（Ｑ１６３８；４９６９ｂｐ）で、総欠失２６８２ｂｐであった。次いで、ヒト組換えＦｃのためのコード配列を、ＲＴ−ＰＣＲによって、Ｆｃ特異的プライマーを使用して、ヒト白血球ｃＤＮＡライブラリ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から得た。プライマーは、Ｂ−ドメイン欠失ＦＶＩＩＩ配列が、介在リンカーなしでＦｃ配列のＮ端末に直接融合されるように設計された。ＦＶＩＩＩＦｃＤＮＡ配列は、ＣＭＶプロモーターの制御下で、哺乳類二重発現ベクターｐＢＵＤＣＥ４．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にクローニングされた。マウスＩｇｋシグナル配列を含む第２の同一Ｆｃ配列を、ＲＴ−ＰＣＲによって得、発現ベクターｐＢＵＤＣＥ４．１において、第２のプロモーターＥＦ１αの下流にクローニングした。
一実施形態において、ＦｃＲｎ結合パートナーは、Ｆｃ領域であり得る。ＦｃＲｎ結合パートナーは、ＦｃＲｎ受容体によって特異的に結合され得、結果的に、ＦｃＲｎ結合パートナーのＦｃＲｎ受容体による活性な輸送が生じる、任意の分子である。したがって、Ｆｃという用語は、機能的であるＩｇＧ Ｆｃの任意の変異体を含む。ＦｃＲｎ受容体と結合するＩｇＧのＦｃ部分の領域は、Ｘ線結晶学に基づいて説明されてきた（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３７９（１９９４）、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。ＦｃＲｎとのＦｃの主な接触域は、ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとの接合部の近くにある。Ｆｃ−ＦｃＲｎ接触部は全て、１本のＩｇ重鎖内にある。ＦｃＲｎ結合パートナーは、例えば、全体のＩｇＧ、ＩｇＧのＦｃ断片、及びＦｃＲｎの完全な結合領域を含むＩｇＧの他の断片を含む。主な接触部位には、ＣＨ２ドメインのアミノ酸残基２４８、２５０〜２５７、２７２、２８５、２８８、２９０〜２９１、３０８〜３１１、及び３１４、ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５〜３８７、４２８、及び４３３〜４３６が含まれる。免疫グロブリンまたは免疫グロブリン断片、あるいは領域のアミノ酸番号付けに対して行う言及は全て、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ；ＭＤに基づき、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。（ＦｃＲｎ受容体は、ヒトを含む幾つかの哺乳類種から単離されている。ヒトＦｃＲｎ、ラットＦｃＲｎ、及びマウスＦｃＲｎの配列が知られている（Ｓｔｏｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：２３７７（１９９４）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。Ｆｃは、免疫グロブリンのヒンジ領域を含んでも含まなくても、免疫グロブリンのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むことができる。例示的なＦｃ変異体は、ＷＯ２００４／１０１７４０及びＷＯ２００６／０７４１９９に提供され、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
Ｆｃ（またはキメラポリペプチドのＦｃ部分）は、１つ以上の変異及び変異の組み合わせを含むことができる。
Ｆｃ（またはキメラポリペプチドのＦｃ部分）は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＯｇａｎｅｓｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６：１７５０（２００９）に開示されたＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びその組み合わせ；参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＶａｃｃａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１２８３（２００５）に開示されたＨ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｆ、及びその組み合わせ；参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２００９／０２６４６２７Ａ１の１〜２頁の段落［００１２］ならびに実施例９及び１０に開示された変異体；及び参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２００９０１６３６９９Ａ１の２頁の段落［００１４］〜［００２１］に開示された変異体等、増加した半減期を与える変異を含むことができる。
Ｆｃ（またはキメラポリペプチドのＦｃ部分）はまた、例えば、以下の変異を含む：部位特異的変異形成等のよく認識された手法に従って、ＩｇＧのＦｃ領域を修飾して、ＦｃＲｎによって結合されるであろう修飾ＩｇＧまたはＦｃ断片またはその部分を得ることも可能である。そのような修飾には、例えば、ＦｃＲｎ接触部位から遠く離れた修飾、ならびにＦｃＲｎへの結合を保持するかまたは増進しさえする、接触部位内の修飾が含まれる。例えば、ＦｃＲｎへのＦｃ結合親和性を著しく損なうことなく、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（Ｆｃｙ１）中の以下の単一アミノ酸残基：Ｐ２３８Ａ、Ｓ２３９Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｋ２４８Ａ、Ｄ２４９Ａ、Ｍ２５２Ａ、Ｔ２５６Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｔ２６０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｅ２６９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｅ２７２Ａ、Ｌ２７４Ａ、Ｎ２７６Ａ、Ｙ２７８Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｖ２８２Ａ、Ｅ２８３Ａ、Ｈ２８５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｔ２８９Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ａ、Ｅ２９３Ａ、Ｅ２９４Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｙ２９６Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｆ、Ｒ３０１Ａ、Ｖ３０３Ａ、Ｖ３０５Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｌ３０９Ａ、Ｑ３１１Ａ、Ｄ３１２Ａ、Ｎ３１５Ａ、Ｋ３１７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｓ３２４Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ａ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｔ３３５Ａ、Ｓ３３７Ａ、Ｋ３３８Ａ、Ｋ３４０Ａ、Ｑ３４２Ａ、Ｒ３４４Ａ、Ｅ３４５Ａ、Ｑ３４７Ａ、Ｒ３５５Ａ、Ｅ３５６Ａ、Ｍ３５８Ａ、Ｔ３５９Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｎ３６１Ａ、Ｑ３６２Ａ、Ｙ３７３Ａ、Ｓ３７５Ａ、Ｄ３７６Ａ、Ａ３７８Ｑ、Ｅ３８０Ａ、Ｅ３８２Ａ、Ｓ３８３Ａ、Ｎ３８４Ａ、Ｑ３８６Ａ、Ｅ３８８Ａ、Ｎ３８９Ａ、Ｎ３９０Ａ、Ｙ３９１Ｆ、Ｋ３９２Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｓ４００Ａ、Ｄ４０１Ａ、Ｄ４１３Ａ、Ｋ４１４Ａ、Ｒ４１６Ａ、Ｑ４１８Ａ、Ｑ４１９Ａ、Ｎ４２１Ａ、Ｖ４２２Ａ、Ｓ４２４Ａ、Ｅ４３０Ａ、Ｎ４３４Ａ、Ｔ４３７Ａ、Ｑ４３８Ａ、Ｋ４３９Ａ、Ｓ４４０Ａ、Ｓ４４４Ａ、及びＫ４４７Ａを置換することも可能であり、ここで、例えば、Ｐ２３８Ａは、位置番号２３８で野生型プロリンがアラニンによって置換されたことを示す。アラニンに加えて、他のアミノ酸が、上に明記する位置で野生型アミノ酸を置換することもできる。Ｆｃに単一変異を導入して、天然Ｆｃと異なる、１００を超えるＦｃＲｎ結合パートナーが生じることも可能である。さらに、これらの個々の変異のうちの２つ、３つ、またはそれ以上からなる組み合わせを、一緒に導入して、さらに数百のＦｃＲｎ結合パートナーが生じることも可能である。ある種のこれらの変異は、ＦｃＲｎ結合パートナーに新たな機能性を与えることも可能である。例えば、１つの実施形態は、Ｎ２９７Ａを取り込み、非常に保存されたＮ−グリコシル化部位を取り除く。この変異の影響は、免疫原性を減少させて、それによって、ＦｃＲｎ結合パートナーの循環半減期を向上させ、ＦｃＲｎ結合パートナーが、ＦｃＲｎへの親和性を損なうことなく、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩＡ、ＦｃｙＲＩＩＢ、及びＦｃｙＲＩＩＩＡに結合不能であるようにすることである（Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ ｅｔ ａｌ．１９９５，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６０：８４７、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる；Ｆｒｉｅｎｄ ｅｔ ａｌ．１９９９，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：１６３２、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。さらに、少なくとも３つのヒトＦｃガンマ受容体が、ヒンジ領域下部内にあるＩｇＧ上の結合部位、一般には、アミノ酸２３４〜２３７を認識するようである。したがって、新規機能性及び潜在的に減少した免疫原性の別の例は、この領域の変異から生じることも可能であり、例えば、ヒトＩｇＧ１のアミノ酸２３３〜２３６の「ＥＬＬＧ」を、ＩｇＧ２由来の対応する配列「ＰＶＡ」で置換することによって生じることも可能である（１つのアミノ酸欠失を伴う）。様々なエフェクター機能を仲介するＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、及びＦｃｙＲＩＩＩは、そのような変異が導入されるとき、ＩｇＧ１に結合しないことが示されている（Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｇｈｅｔｉｅ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２：７７（１９９５）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる；及びＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３（１９９９）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。上に記載される変異から生じる新たな機能性のさらなる例として、場合によっては、ＦｃＲｎに対する親和性を、野生型のものより増加させることも可能である。この親和性の増加は、「オン」速度の増加、「オフ」速度の減少、または「オン」速度の増加及び「オフ」速度の減少の両方を反映する可能性がある。ＦｃＲｎに対する親和性を増加させると考えられる変異は、例えば、Ｔ２５６Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、及びＮ４３４Ａを含む（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１（２００１）、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
Ｆｃ（またはキメラポリペプチドのＦｃ部分）は、表１１に示されるＦｃアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸１４５８〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２３５２〜２５７８）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。Ｆｃ（またはキメラポリペプチドのＦｃ部分）は、表１１に示されるＦｃアミノ酸配列と同一であり得る（配列番号２のアミノ酸１４５８〜１６８４及び配列番号６のアミノ酸２３５２〜２５７８）。
実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリペプチドが、本発明のヌクレオチド配列またはポリペプチドと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、既知のコンピュータプログラムを用いて、通常決定することができる。一実施形態において、グローバル配列アラインメントとしても称される、クエリー配列（参照または元の配列）と対象配列との間の最良の全体の一致を決定するための方法はまた、ＢｒｕｔｌａｇらのＣｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０）のアルゴリズムに基づいたＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを用いて決定することができ、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。配列アラインメントでは、クエリー及び対象配列は両方とも、ＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、Ｕ（ウリジン）をＴ（チミン）に転換することにより、比較することができる。前述のグローバル配列アラインメントの結果は、パーセント同一性で表される。別の実施形態において、パーセント同一性を計算するためのＤＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢアラインメントに使用されるパラメーターは、以下である：マトリックス＝単一、ｋ−タプル＝４、ミスマッチペナルティ＝１、結合ペナルティ＝３０、ランダム化グループ長＝０、カットオフスコア＝１、ギャップペナルティ＝５、ギャップサイズペナルティ０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さのどちらか短い方。
対象配列が、内部欠失ではなく、５′または３′欠失のため、クエリー配列よりも短い場合、結果に手作業による補正を行わなければならない。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、パーセント同一性を計算するとき、対象配列の５′及び３′短縮には対処しないためである。５′または３′末端で短縮された対象配列については、クエリー配列と比較して、一致／アライメントされない、対象配列の５′及び３′であるクエリー配列の塩基数をクエリー配列の総塩基のパーセントとして計算することによって、パーセント同一性が補正される。ヌクレオチドが、一致／アライメントされるかどうかは、ＦＡＳＴＤＢ配列アラインメントの結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、パーセント同一性から減算され、特定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算され、最終パーセント同一性スコアに到達する。この補正されたスコアは、本発明の目的のために使用されるものである。クエリー配列と一致／アライメントされない、ＦＡＳＴＤＢアラインメントによって示される、対象配列の５′及び３′塩基の外側の塩基のみが、パーセント同一性スコアの手作業による調節の目的のために計算される。
例えば、９０塩基の対象配列が、パーセント同一性を決定するために、１００塩基のクエリー配列とアライメントされる。欠失は、対象配列の５′末端で起こり、それ故に、ＦＡＳＴＤＢアラインメントは、５′末端における最初の１０塩基の一致／アラインメントを示さない。１０個の不対塩基が、配列の１０％（一致しない５′末端及び３′末端における塩基の数／クエリー配列における塩基の総数）を示すため、１０％が、ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから減算される。残りの９０塩基が、完全に一致した場合、最終パーセント同一性は、９０％である。別の例では、９０塩基の対象配列が、１００塩基のクエリー配列と比較される。今回は欠失が内部欠失であり、その結果、クエリーと一致／アラインしない、対象配列の５′末端または３′末端上の塩基は存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって計算されたパーセント同一性は、手作業で補正されない。再度、クエリー配列と一致／アラインしない、対象配列の塩基の５′及び３′への塩基のみが、手作業で補正される。他の手作業の補正は、本発明の目的のためには行われない。
本発明のクエリーアミノ酸配列と、少なくとも、例えば、９５％「同一である」アミノ酸配列を有するポリペプチドという表現によって、対象ポリペプチド配列がクエリーアミノ酸配列の各１００アミノ酸当たり最大５個のアミノ酸の変化を含むことができること以外は、対象ポリペプチドのアミノ酸配列が、クエリー配列と同一であることが意図される。つまり、クエリーアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、対象配列において、最大５％のアミノ酸残基が、挿入、欠失、（消失）、または別のアミノ酸で置換されてもよい。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置で、またはこれらの末端間の任意の位置に、参照配列中の残基間でばらばらに、もしくは参照配列内の１つ以上の連続する残基の群としてのどちらかで散在して生じ得る。
実際問題として、任意の特定のポリペプチドが、例えば、配列番号２（第ＶＩＩＩ因子部分、Ｆｃ部分、個々にもしくは一緒に）もしくは４のアミノ酸配列、または既知の第ＶＩＩＩ因子もしくはＦｃポリペプチド配列と、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、公知のコンピュータプログラムを用いて、通常決定することができる。一実施形態において、グローバル配列アラインメントとしても称される、クエリー配列（参照または元の配列）と対象配列との間の最良の全体の一致を決定するための方法は、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれるＢｒｕｔｌａｇらのＣｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０）のアルゴリズムに基づいたＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを用いて決定することができる。配列アラインメントでは、クエリー及び対象配列は、両方ともヌクレオチド配列であるか、両方ともアミノ酸配列であるかのいずれかである。該グローバル配列アラインメントの結果は、パーセント同一性で表される。別の実施形態において、ＦＡＳＴＤＢアミノ酸アラインメントにおいて使用されるパラメーターは、マトリックス＝ＰＡＭ ０、ｋ−タプル＝２、ミスマッチペナルティ＝１、結合ペナルティ＝２０、ランダム化グループ長＝０、カットオフスコア＝１、ウィンドウサイズ＝配列長、ギャップペナルティ＝５、ギャップサイズペナルティ＝０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または対象アミノ酸配列の長さのどちらか短い方である。
対象配列が、内部欠失ではなく、Ｎ末端またはＣ末端欠失のため、クエリー配列よりも短い場合、結果に手作業による補正を行わなければならない。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、グローバルパーセント同一性を計算するとき、対象配列のＮ末端及びＣ末端短縮には対処しないためである。Ｎ末端及びＣ末端で短縮された対象配列については、クエリー配列と比較して、対応する対象残基と一致／アライメントされない、対象配列のＮ末端及びＣ末端であるクエリー配列の残基数をクエリー配列の総塩基のパーセントとして計算することによって、パーセント同一性が補正される。残基が、一致／アライメントされるかどうかは、ＦＡＳＴＤＢ配列アラインメントの結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、パーセント同一性から減算され、特定のパラメーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算され、最終パーセント同一性スコアに到達する。この最終パーセント同一性スコアは、本発明の目的のために使用されるものである。クエリー配列と一致／アライメントされない、対象配列のＮ末端及びＣ末端に属する残基のみが、パーセント同一性スコアを手作業で調節する目的のためのものと見なされる。即ち、クエリー残基のみが、対象配列の最も遠いＮ末端及びＣ末端の残基の外側に位置合わせされる。
例えば、９０アミノ酸残基の対象配列が、パーセント同一性を決定するために、１００残基のクエリー配列とアライメントされる。欠失は、対象配列のＮ末端で起こり、それ故に、ＦＡＳＴＤＢアラインメントは、Ｎ末端における最初の１０残基の一致／アラインメントを示さない。１０個の不対残基が、配列の１０％（一致しないＮ末端及びＣ末端における残基の数／クエリー配列における残基の総数）を示すため、１０％が、ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから減算される。残りの９０残基が、完全に一致した場合、最終パーセント同一性は、９０％である。別の例では、９０残基の対象配列が、１００残基のクエリー配列と比較される。今回は欠失が内部欠失であり、その結果、クエリーと一致／アラインしない、対象配列のＮ末端及びＣ末端上の残基は存在しない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって計算されたパーセント同一性は、手作業で補正されない。繰り返しになるが、ＦＡＳＴＤＢアラインメントに示されるような、クエリー配列と一致／アラインしない、対象配列のＮ末端及びＣ末端の外側で位置合わせされる残基のみが、手作業で補正される。他の手作業の補正は、本発明の目的のためには行われない。
ポリヌクレオチド変異体は、コード領域、非コード領域、または両方に変化を含むことができる。一実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、サイレント置換、付加、または欠失を生成する変化を含むが、しかし、コードされるポリペプチドの性質または活性を変化させない。別の実施形態において、ヌクレオチド変異体は、遺伝コードの縮重に起因して、サイレント置換によって生成される。他の実施形態において、５〜１０個、１〜５個、または１〜２個のアミノ酸が任意の組み合わせにおいて置換、欠失、または付加される変異体。ポリヌクレオチド変異体は、例えば、特定の宿主に対してコドン発現を最適化すること（他のもの、例えば、大腸菌等の細菌宿主にヒトｍＲＮＡ中のコドンを変化させる）等の様々な理由で生成され得る。
自然発生の変異体は、「対立遺伝子変異体」と呼ばれ、生物体の染色体上の所与の座を占める遺伝子の幾つかの代替形態の１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立変異体は、ポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドレベルで異なってよく、かつ本発明に含まれる。あるいは、自然発生でない変異体は、突然変異誘発技法または直接合成によって生成することができる。
タンパク質工学及び組換えＤＮＡ技法の既知の方法を用いて、ポリペプチドの特徴を改善または改変するために変異体が作製され得る。例えば、生物学的機能の実質的な損失を伴わずに、分泌されたタンパク質のＮ末端またはＣ末端から、１つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。Ｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４−２９８８（１９９３）（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）は、３、８、または２７個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失した後でさえ、変異体ＫＧＦタンパク質がヘパリン結合活性を有するのを報告した。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から８〜１０個のアミノ酸残基を欠失した後、活性が最高１０倍まで高くなることが示された（Ｄｏｂｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９−２１６（１９８８）、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
さらに、変異体が、多くの場合、自然発生のタンパク質のものと類似する生物活性を維持することを、十分な証拠が立証している。例えば、Ｇａｙｌｅと共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１９９３）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの大規模な変異分析を行った。彼らは、ランダムな変異誘発を利用して、分子全長にわたって、１変異体当たり平均２．５個のアミノ酸の変化がある、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異体を作製した。起こり得る各アミノ酸位置について複数の変異を調べた。研究者らは、「分子の大部分が［結合または生物活性］のいずれにもほとんど影響を与えずに改変され得る」ことを見出した。（要約を参照）実際に、調べられた３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わずか２３個のユニークなアミノ酸配列のみが、野生型の活性とは著しく異なるタンパク質を生成した。
上で述べたように、ポリペプチド変異体には、例えば、修飾されたポリペプチドが含まれる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合による架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０−７９（２０１０）、参照によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、トランスファーＲＮＡが仲介するタンパク質へのアミノ酸の付加（例えば、アルギニル化）、及びユビキチン化が挙げられる。いくつかの実施形態において、第ＶＩＩＩ因子は、任意の便利な位置で、修飾される、例えば、ＰＥＧ化される。いくつかの実施形態において、第ＶＩＩＩ因子は、第ＶＩＩＩ因子の表面が暴露されたアミノ酸、例えば、操作されたシステインであり得る、表面が露出したシステインにおいてＰＥＧ化される。同上。いくつかの実施形態において、修飾された第ＶＩＩＩ因子、例えば、ＰＥＧ化された第ＶＩＩＩ因子は、長時間作用型第ＶＩＩＩ因子である。
ＩＩＩ．投与の方法
血友病Ａの治療は、ＦＶＩＩＩ活性を正常レベルの１〜５％まで回復させて、突発性出血を予防することを目的とする補充療法である（Ｍａｎｎｕｃｃｉ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：１７７３−９（２００１）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。
血友病Ａの治療は、ＦＶＩＩＩ活性を正常レベルの１〜５％まで回復させて、突発性出血を予防することを目的とする補充療法である（Ｍａｎｎｕｃｃｉ，Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：１７７３−９（２００１）、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。
本発明はまた、本発明の薬学的組成物を投与する方法を含む。本発明は、薬学的組成物をそれを必要とするヒト対象（例えば、ヒト患者）に投与する方法を提供し、これは、第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド、例えば、長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドもしくは短時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチド、例えば、第ＶＩＩＩ因子−Ｆｃポリペプチド、またはそのようなポリペプチドのハイブリッドを含む薬学的組成物の治療投与量を、対象に投与間隔で投与することを含む。
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物を使用して、１つ以上の出血症状または頻度（例えば、出血性病態）を、それを必要とする対象において、低下または減少させる。他の実施形態において、本発明の薬学的組成物を使用して、出血性病態の治療または予防を、それを必要とする対象において行う。
出血性病態は、血液凝固障害によって引き起こされ得る。血液凝固障害はまた、凝血障害とも称され得る。一例において、本開示の薬学的組成物で治療することができる血液凝固障害は、血友病である。別の例において、本開示の薬学的組成物で治療することができる血液凝固障害は、血友病Ａである。
いくつかの実施形態において、出血性病態に関連する出血の種類は、関節血症、筋肉出血、口腔出血（ｏｒａｌ ｂｌｅｅｄ）、出血、筋肉への出血、口腔出血（ｏｒａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）、外傷、頭部外傷、胃腸出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系の出血、咽頭後隙の出血、後腹膜腔内出血、または腸腰筋鞘内の出血から選択される。
他の実施形態において、出血性病態を患う対象は、例えば、外科的予防または周術期管理を含む、外科手術のための処置を必要とする。一例において、外科手術は、小手術及び大手術から選択される。例示的外科的手技には、抜歯、扁桃摘出術、鼠径部ヘルニア切開術、滑膜切除術、開頭術、骨接合術、外傷外科手術、頭蓋内手術、腹腔内手術、胸腔内手術、または関節置換手術（例えば、人工膝関節全置換術、人工股関節置換手術等）、心臓手術、及び帝王切開術が含まれる。
本発明はまた、対象に有効量のＦＶＩＩＩポリペプチドを投与することを含む、血友病を有する対象の年換算出血率（ＡＢＲ）を低下もしくは減少させる方法を提供する。一実施形態において、長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドは、３日以上毎の投与間隔で投与される。別の実施形態において、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇである。他の実施形態において、有効量は、２０〜３０ＩＵ／ｋｇ、３０〜４０ＩＵ／ｋｇ、４０〜５０ＩＵ／ｋｇ、５０〜６０ＩＵ／ｋｇ、６０〜７０ＩＵ／ｋｇ、７０〜８０ＩＵ／ｋｇ、または８０〜９０ＩＵ／ｋｇである。さらに他の実施形態において、有効量は、２０ＩＵ／ｋｇ、２５ＩＵ／ｋｇ、３０ＩＵ／ｋｇ、３５ＩＵ／ｋｇ、４０ＩＵ／ｋｇ、４５ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、５５ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、６５ＩＵ／ｋｇ、７０ＩＵ／ｋｇ、７５ＩＵ／ｋｇ、８０ＩＵ／ｋｇ、８５ＩＵ／ｋｇ、または９０ＩＵ／ｋｇである。
ある特定の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドの投与は、個別化した（個人に合わせた）予防のためであり、約５．５未満、約５．４未満、約５．３未満、約５．２未満、約５．１未満、約５．０未満、約４．９未満、約４．８未満、約４．７未満、約４．６未満、または約４．５未満のＡＢＲをもたらす。他の実施形態において、投与は、約４．７〜０のＡＢＲをもたらす。いくつかの実施形態において、ＡＢＲの中央値は、約１．６である。さらに他の実施形態において、ＡＢＲの平均は約２．９である。個別化した予防レジメンの一態様において、有効量は、３日毎または５日毎に与えられる約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。例えば、有効量は、３日毎に与えられる約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。別の態様において、有効量は、４日毎または５日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇである。他の態様において、有効量は、３日毎に最大６５ＩＵ／ｋｇである。さらに他の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドの有効量は、患者の薬物動態プロフィールにも続いて修正される。一実施例において、患者は、最初に、２回の投与量、１日目の２５ＩＵ／ｋｇの第１の投与量及び４日目の５０ＩＵ／ｋｇの第２の投与量を投与される。薬物動態データが、最初の２回の投与後、正常なＦＶＩＩＩ活性の１％未満のトラフレベルを示す場合、患者は、３日毎に約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇを投与される。別の実施例において、薬物動態データが、投与から５日間、正常なＦＶＩＩＩ活性の１％を超えるトラフレベルを示す場合、患者は、５日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇを投与される。患者が、５日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの投与後、８週間にわたって２回を超える特発性出血を依然として経験する場合、患者は、以下のうちの１つ：（１）３日毎に最大約６５ＩＵ／ｋｇ（通常の最大５％の標的トラフレベルについて）、（２）４日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ（通常の最大５％の標的トラフレベルについて）、または（３）３日毎に約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ（通常の最大１％〜３％の標的トラフレベルについて）を投与される。４日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇを受ける患者が、２回を超える突発性出血を依然として経験する場合、最大投与は、３日毎に最大約６５ＩＵ／ｋｇになり得る。いくつかの実施例において、個別化した予防レジメンについてのＡＢＲの四分位数範囲（ＩＱＲ）は、０〜４．７である。
いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドの投与は、週単位の予防のためであり、約９．０未満、約８．９未満、約８．８未満、約８．７未満、約８．６未満、約８．５未満、または約８．４未満のＡＢＲをもたらす。１つの実施例において、投与はＡＢＲ約８．４〜０をもたらす。別の実施例において、週単位の予防のためのＡＢＲの中央値は、約３．６である。他の実施例において、週単位の予防のためのＡＢＲの平均は、約８．８である。他の実施形態において、週単位の予防のための有効量は、毎週１回、例えば、５日毎に、６日毎に、７日毎に、８日毎に、または９日毎に約６５ＩＵ／ｋｇである。いくつかの実施例において、週単位の予防レジメンについてのＡＢＲのＩＱＲは、１．９〜８．４である。
他の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドの投与は、発症時またはオンデマンドの治療のためであり、約５５未満、約５４未満、約５３未満、約５２未満、約５１未満、約５０未満、約４９未満、約４８未満、または約４７未満のＡＢＲをもたらす。１つの実施例において、投与は、ＡＢＲ約４９〜０、例えば、４８．７〜０をもたらす。別の実施例において、発症時（オンデマンド）治療のためのＡＢＲの中央値は、約３３．５である。他の実施例において、発症時（オンデマンド）治療のためのＡＢＲの平均は、約３７．２３である。他の実施形態において、オンデマンド治療のための有効量は、１２〜２４時間毎に約１０ＩＵ／ｋｇ〜７５ＩＵ／ｋｇである。いくつかの実施例において、オンデマンド治療のためのＡＢＲのＩＱＲは、２１．１〜４８．７である。
いくつかの実施形態において、個別化した予防、週単位の予防、または発症時の治療のための有効量は、固定投与量または層別化した投与量である。一態様において、固定投与量は、投与量当たり約２，０００ＩＵ、投与量当たり約２，５００ＩＵ、投与量当たり約３，０００ＩＵ、投与量当たり約３，５００ＩＵ、または投与量当たり約４，０００ＩＵである。
長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドのための投与間隔は、非第ＶＩＩＩ因子部分を伴わない、例えば、Ｆｃ部分を伴わない、第ＶＩＩＩ因子（第ＶＩＩＩ因子部分からなるポリペプチド）の投与に同等な投与に必要な投与間隔より少なくとも約１．５〜６倍長く、１．５〜５倍長く、１．５〜４倍長く、１．５〜３倍長く、または１．５〜２倍長くあり得る。投与間隔は、非第ＶＩＩＩ因子部分を伴わない、例えば、Ｆｃ部分を伴わない、第ＶＩＩＩ因子（第ＶＩＩＩ因子部分からなるポリペプチド）の投与に同等な投与に必要な投与間隔よりも少なくとも約１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、または６倍長くあり得る。投与間隔は、約３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、１０日毎、１１日毎、１２日毎、１３日毎、１４日毎、またはそれ以上であり得る。
本発明の方法は、予防的治療またはオンデマンド治療を必要とする対象に対して実施することができる。
オンデマンド治療について、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物の投与間隔は、約２４〜３６、２４〜４８、２４〜７２、２４〜９６、２４〜１２０、２４〜１４４、２４〜１６８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、もしくは７２時間、またはそれ以上毎に１回である。
一実施形態において、対象は、オンデマンド（発症時）治療が必要である。別の実施形態において、オンデマンド（発症時）治療は、単一の投与において、８０％超（８０％超、８１％超、８２％超、８３％超、８４％超、８５％超、８６％超、８７％超、８８％超、８９％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、９９％超、または１００％）または８０〜１００％、８０〜９０％、８５〜９０％、９０〜１００％、９０〜９５％、もしくは９５〜１００％の出血（例えば、突発性出血）を解消する。別の実施形態において、８０％超（８１％超、８２％超、８３％超、８４％超、８５％超、８６％超、８７％超、８８％超、８９％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、または１００％）または８０〜１００％、８０〜９０％、８５〜９０％、９０〜１００％、９０〜９５％、または９５〜１００％の出血症状が、オンデマンド（発症時）治療後に医師によって非常に良いまたは良いと評価される。他の実施形態において、５％超（６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超、１５％超、１６％超、１７％超、１８％超、１９％超、２０％超）、または５〜２０％、５〜１５％、５〜１０％、１０〜２０％、もしくは１０〜１５％の出血症状が、オンデマンド治療後、医師によってまずまずであると評価される。
他の実施形態において、ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む薬学的組成物が予防のために使用される。予防は、より良好なＣｍａｘ、より良好なＴｍａｘ、及び／またはより良い平均滞留時間対短時間作用型ＦＶＩＩＩによって実証することができる。いくつかの実施形態において、予防は、注射（例えば、最後の注射）後、約２４、３６、４８、７２、または９６時間（例えば、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、９６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９６時間）以内に突発性出血症状をもたらさない。ある特定の実施形態において、予防は、週１回の投与量で（例えば、６５ＩＵ／ｋｇで）の年換算出血症状において、３０％超（例えば、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、９６、８７、８８、８９、または９０％超、例えば、５０％超）の平均減少をもたらす。
別の実施例において、対象がＦＩＸを用いて同時に治療される。本発明の化合物は、ＦＩＸａを活性化することができるので、対象へのＦＩＸａの投与前に、ＦＩＸａポリペプチドを予め活性化させるために使用され得る。
ＩＶ．製造方法
ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドをコードするベクターを含む宿主細胞中で製造することができる。一実施形態において、宿主細胞は、ＦＶＩＩＩポリペプチド及び第１のＦｃＲｎポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列と、第２のＦｃＲｎポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列と、任意にタンパク質転換酵素（例えば、ＰＣ５）をコードする第３のヌクレオチド配列とを含む１つ以上のベクターを用いて形質転換される。本明細書で使用されるとき、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入されるときに、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要な要素、またはＲＮＡウイルスベクターの場合、複製及び翻訳に必要な要素を含有する、任意の核酸構築物を指す。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス、及びそれらの誘導体を含むことができる。
ＦＶＩＩＩポリペプチドは、ＦＶＩＩＩポリペプチドをコードするベクターを含む宿主細胞中で製造することができる。一実施形態において、宿主細胞は、ＦＶＩＩＩポリペプチド及び第１のＦｃＲｎポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列と、第２のＦｃＲｎポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列と、任意にタンパク質転換酵素（例えば、ＰＣ５）をコードする第３のヌクレオチド配列とを含む１つ以上のベクターを用いて形質転換される。本明細書で使用されるとき、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入されるときに、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要な要素、またはＲＮＡウイルスベクターの場合、複製及び翻訳に必要な要素を含有する、任意の核酸構築物を指す。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス、及びそれらの誘導体を含むことができる。
本明細書で使用される遺伝子発現制御配列は、それが作動可能に連結されるコード核酸の効率的な転写及び翻訳を容易にする、プロモーター配列またはプロモーターエンハンサーの組み合わせ等の、任意の調節ヌクレオチド配列である。遺伝子発現制御配列は、例えば、構成的または誘導性プロモーター等の哺乳類またはウイルスプロモーターであり得る。構成的哺乳類プロモーターには、以下の遺伝子のためのプロモーターが含まれるが、これらに限定されない：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータ−アクチンプロモーター、及び他の構成的プロモーター。真核性細胞中で構成的に機能する、例示的ウイルスプロモーターには、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルスからのプロモーター、モロニー白血病ウイルス及び他のレトロウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが含まれる。他の構成的プロモーターは、当業者に知られている。本発明の遺伝子発現配列として有用なプロモーターにはまた、誘導性プロモーターが含まれる。誘導性プロモーターは、誘導剤の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、ある特定の金属イオンの存在下で転写及び翻訳を促進するように誘導される。他の誘導性プロモーターは、当業者に知られている。
ベクターの例としては、ウイルスベクターまたはプラスミドベクターが挙げられるが、これらに限定されない。プラスミドベクターは、当該技術分野において広く記載されており、当業者に周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照されたい。過去数年間に、プラスミドベクターは、宿主ゲノム中で複製され、それに統合されることができないことから、遺伝子を細胞インビボに送達するために特に有利であることが見出されている。しかしながら、宿主細胞と適合性のあるプロモーターを有するこれらのプラスミドは、プラスミド内で作動可能にコードされた遺伝子からペプチドを発現できる。商業的供給者から入手可能な通常使用されるいくつかのプラスミドとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、種々のｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、種々のｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０、及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが挙げられる。特定のプラスミドのさらなる例としては、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログ番号Ｖ７９０２０；ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログ番号Ｖ８７０２０；ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−Ｈｉｓ、カタログ番号Ｖ８６３２０；及びｐＢｕｄＣＥ４．１、カタログ番号Ｖ５３２２０（全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）製）が挙げられる。他のプラスミドが、当業者に周知である。さらに、プラスミドは、ＤＮＡの特定の断片を除去及び／または追加するために、標準分子生物学的技法を用いてカスタム設計することができる。
発現ベクターまたはベクターは、次いで、ポリペプチドを発現するであろう好適な標的細胞中にトランスフェクトまたは共トランスフェクトされる。当該技術分野で既知のトランスフェクション技法には、リン酸カルシウム沈殿（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７８）Ｃｅｌｌ １４：７２５）、エレクトロポレーション（Ｎｅｕｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８２）ＥＭＢＯ Ｊ １：８４１）、及びリポソームベースの試薬が含まれるが、これらに限定されない。多様な宿主−発現ベクター系を利用して、原核性細胞及び真核性細胞の両方を含む、本明細書に記載されるタンパク質を発現させることができる。これらには、適切なコード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡまたはプラスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された、細菌（例えば、大腸菌）等の微生物；適切なコード配列を含有する組換え酵母もしくは真菌発現ベクターで形質転換された、酵母もしくは糸状菌；適切なコード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染させられた、昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルスまたはタバコモザイクウイルス）で感染させられた、もしくは適切なコード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された、植物細胞系；または哺乳類細胞（例えば、ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ、Ｃｏｓ、ＨｅＬａ、ＨＫＢ１１、及びＢＨＫ細胞）を含む動物細胞系が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、宿主細胞は、真核性細胞である。本明細書で使用されるとき、真核性細胞は、決定的な核を有する任意の動物または植物細胞を指す。動物の真核性細胞には、脊椎動物、例えば、哺乳動物の細胞、及び無脊椎動物、例えば、昆虫の細胞が含まれる。植物の真核性細胞には具体的に、限定なしに、酵母細胞が含まれ得る。真核性細胞は、原核性細胞、例えば、細菌とは明確に異なる。
ある特定の実施形態において、真核性細胞は、哺乳類細胞である。哺乳類細胞は、哺乳動物に由来する任意の細胞である。哺乳類細胞は具体的に、哺乳類細胞株を含むが、これらに限定されない。一実施形態において、哺乳類細胞は、ヒト細胞である。別の実施形態において、哺乳類細胞は、ヒト胚性腎臓細胞株である、ＨＥＫ２９３細胞である。ＨＥＫ２９３細胞は、ＣＲＬ−１５３３としてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから、及びカタログ番号１１６３１−＋０１７の２９３−Ｈ細胞またはカタログ番号１１６２５−０１９の２９３−Ｆ細胞としてＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）から、入手可能である。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、網膜に由来するヒト細胞株である、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞である。ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞は、Ｃｒｕｃｅｌｌ（Ｌｅｉｄｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手可能である。他の実施形態において、哺乳類細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。ＣＨＯ細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ．から入手可能である。（例えば、ＣＨＯ−Ｋ１；ＣＣＬ−６１）。依然として他の実施形態において、哺乳類細胞は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞である。ＢＨＫ細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．から入手可能である。（例えば、ＣＲＬ−１６３２）。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、ＨＥＫ２９３細胞及びヒトＢ細胞株のハイブリッド細胞株である、ＨＫＢ１１細胞である。Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３４（２）：１６５−７８（２００６）。
本方法は、精製ステップをさらに含むことができる。様々な既知の精製ステップが当該技術分野で周知である。
実施例１．生成物についての説明
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）のＦｃドメインに共有結合しているヒト凝固第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）からなる長時間作用型完全組換え融合タンパク質である。ｒＦＶＩＩＩＦｃの第ＶＩＩＩ因子部分は、第ＶＩＩＩ因子の９０＋８０ｋＤａ形態（すなわち、Ｂドメイン欠失）と同等である一次アミノ酸配列及び翻訳後修飾を有する。ｒＦＶＩＩＩＦｃのＦｃドメインは、ＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域を含有する。ｒＦＶＩＩＩＦｃは、およそ２２０キロダルトンの見かけの分子量を有する１８８２個のアミノ酸を含有する。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）のＦｃドメインに共有結合しているヒト凝固第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）からなる長時間作用型完全組換え融合タンパク質である。ｒＦＶＩＩＩＦｃの第ＶＩＩＩ因子部分は、第ＶＩＩＩ因子の９０＋８０ｋＤａ形態（すなわち、Ｂドメイン欠失）と同等である一次アミノ酸配列及び翻訳後修飾を有する。ｒＦＶＩＩＩＦｃのＦｃドメインは、ＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域を含有する。ｒＦＶＩＩＩＦｃは、およそ２２０キロダルトンの見かけの分子量を有する１８８２個のアミノ酸を含有する。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、広範囲に特徴付けられているヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞株において、組換えＤＮＡ技法によって生成される。細胞株は、ｒＦＶＩＩＩＦｃを、動物またはヒト源に由来する任意のタンパク質を含有しない定義された細胞培養培地に発現する。ｒＦＶＩＩＩＦｃは、モノクローナル抗体の使用を必要としない一連のクロマトグラフィーステップによって精製される。プロセスは、界面活性剤のウイルス不活性化ステップと、親和性クロマトグラフィーステップ及び１５ｎｍのウイルス維持ナノ濾過ステップを含む複数のウイルスクリアランスステップとを含む。ヒトまたは動物添加剤は、細胞培養、精製、及び製剤プロセスにおいて使用されない。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、薬物療法群：止血薬、血液凝固第ＶＩＩＩ因子に入る。それは、充填済み注射器中の液体希釈剤を伴って、単回使用バイアル中の静脈内（ＩＶ）投与用に、滅菌の防腐剤の入っていない、非発熱性の凍結乾燥された白色からオフホワイト色の粉末からケーキとして提供される。ｒＦＶＩＩＩＦｃに加えて、薬学的組成物は、凍結乾燥体に、スクロースと、塩化ナトリウムと、Ｌ−ヒスチジンと、塩化カルシウムと、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０とを含み、注射用には滅菌水中に含まれる。それぞれの単回使用のバイアルは、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、または６０００国際単位（ＩＵ）のｒＦＶＩＩＩＦｃを名目上含有する。提供された希釈剤で再構成されるとき、生成物は、以下の賦形剤を含有する：下表１または表２に示される濃度でのスクロース、塩化ナトリウム、Ｌ−ヒスチジン、塩化カルシウム、及びポリソルベート２０またはポリソルベート８０。薬学的組成物は、再構成後にのみ静脈内投与のために製剤化される。
それぞれのパックは、栓（ブチル）及びフリップオフシール（アルミニウム）を有する粉末バイアル（１型ガラス）と、プランジャ栓（ブチル）を有する充填済み注射器（１型ガラス）中の３ｍｌの溶媒と、先端キャップ（ブチル）と、滅菌バイアルアダプター再構成装置とを含有する。
実施例２．製剤の方法
ｒＦＶＩＩＩＦｃ薬物生成物は、静脈内投与について意図される注射のための滅菌の凍結乾燥粉末である。それは、バイアル当たり２５０、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、及び６０００ＩＵを名目上含有する、無菌で充填済み単回使用バイアル中に供給する。バイアルは、２０ｍｍのテフロン（登録商標）コートのブチルゴム凍結乾燥栓及びアルミニウムフリップオフ圧着シールで密封された１０ｍＬの米国薬局方／欧州薬局方１型ガラスバイアルである。凍結乾燥前、２５０〜６０００ＩＵバイアルのための名目充填体積標的は３ｍＬである。凍結乾燥前の製剤賦形剤の組成物は、全ての投与量強度について同じである。注射用粉末は、滅菌事前充填済み注射器中に提供された注射用滅菌水を含む３ｍＬの希釈剤で再構成される。
ｒＦＶＩＩＩＦｃ薬物生成物は、静脈内投与について意図される注射のための滅菌の凍結乾燥粉末である。それは、バイアル当たり２５０、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、及び６０００ＩＵを名目上含有する、無菌で充填済み単回使用バイアル中に供給する。バイアルは、２０ｍｍのテフロン（登録商標）コートのブチルゴム凍結乾燥栓及びアルミニウムフリップオフ圧着シールで密封された１０ｍＬの米国薬局方／欧州薬局方１型ガラスバイアルである。凍結乾燥前、２５０〜６０００ＩＵバイアルのための名目充填体積標的は３ｍＬである。凍結乾燥前の製剤賦形剤の組成物は、全ての投与量強度について同じである。注射用粉末は、滅菌事前充填済み注射器中に提供された注射用滅菌水を含む３ｍＬの希釈剤で再構成される。
凍結乾燥前の薬物生成物溶液の組成物は、表３に表される。再構成に続く薬物生成物の組成物は、表１または表２に表される。（実施例１）。
実施例３．投与の投与量及び方法／初期の推定投与量を計算する方法
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、例えば、出血症状の制御及び予防と、出血症状の頻度を予防または低下させるための日常の予防と、及び周術期管理（外科的予防）とのために、血友病Ａ（先天性第ＦＶＩＩＩ因子欠乏症）を有する成人及び子供（１２歳以上）において示される長時間作用型抗血友病因子（組換え）である。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、例えば、出血症状の制御及び予防と、出血症状の頻度を予防または低下させるための日常の予防と、及び周術期管理（外科的予防）とのために、血友病Ａ（先天性第ＦＶＩＩＩ因子欠乏症）を有する成人及び子供（１２歳以上）において示される長時間作用型抗血友病因子（組換え）である。
ｒＦＶＩＩＩＦｃの投与は、この実施例において記載されるように推定することができるが、また、本明細書の別の箇所に記載されるＦＶＩＩＩ活性アッセイ等の標準試験によって決定することができる。
体重ｋｇ当たりの１ＩＵのｒＦＶＩＩＩＦｃは、第ＶＩＩＩ因子の循環レベルを２［ＩＵ／ｄＬ］増加すると予想される。ｒＦＶＩＩＩＦｃは、長期間の循環半減期を有するように示された。
患者が、彼らの薬物動態（例えば、半減期、インビボ回収）及びｒＦＶＩＩＩＦｃに対する臨床反応について様々であり得るため、第ＶＩＩＩ因子レベルで予想されるインビボピーク増加は、ＩＵ／ｄＬ（または通常の％）として表され、または必要な投与を以下の式を用いて推定することができる：
ＩＵ／ｄＬ（または通常の％）＝［全投与（ＩＵ）／体重（ｋｇ）］×２（ＩＵ／ｋｇ当たりＩＵ／ｄＬ）
または
投与（ＩＵ）＝体重（ｋｇ）×所望の第ＶＩＩＩ因子上昇（ＩＵ／ｄＬまたは通常の％）×０．５（ＩＵ／ｄＬ当たりＩＵ／ｋｇ）
ＩＵ／ｄＬ（または通常の％）＝［全投与（ＩＵ）／体重（ｋｇ）］×２（ＩＵ／ｋｇ当たりＩＵ／ｄＬ）
または
投与（ＩＵ）＝体重（ｋｇ）×所望の第ＶＩＩＩ因子上昇（ＩＵ／ｄＬまたは通常の％）×０．５（ＩＵ／ｄＬ当たりＩＵ／ｋｇ）
以下の表（表４）を使用して、出血症状における投与を案内することができる：
その後の投与量及び治療の継続期間は、個々の臨床反応と、第ＶＩＩＩ因子欠乏の重篤度と、出血の位置及び程度とに依存する。
以下の表（表５）を使用して、周術期管理（外科的予防）のための投与を案内することができる：
日常の予防について、推薦レジメンは、３〜５日毎に５０ＩＵ／ｋｇである。投与は、２５〜６５ＩＵ／ｋｇの範囲で患者の反応に基づいて調整することができる。
週単位の予防のための、推薦投与量は６５ＩＵ／ｋｇである。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、生成物またはその構成成分に対して、過敏症を含む重篤な過敏反応を明示した患者には禁忌である。重篤な過敏反応は、臨床試験で観察されなかったが、しかしながら、これらは、他の第ＶＩＩＩ因子補充因子の使用によって起こることが知られている。
ｒＦＶＩＩＩＦｃに対する臨床反応は様々である。出血が推薦投与量によって制御されない場合、第ＶＩＩＩ因子の血漿レベルが決定され、十分な投与量のｒＦＶＩＩＩＦｃが満足な臨床反応を達成するために投与され得る。患者の血漿第ＶＩＩＩ因子レベルが予想されるように上昇せず、または出血がｒＦＶＩＩＩＦｃ投与後に制御されない場合、阻害剤（中和抗体）の存在が疑われるべきであり、適切な試験を実施すべきである。ｒＦＶＩＩＩＦｃを使用する患者を、当業者に既知の適切な臨床観察及び実験室試験によって、第ＶＩＩＩ因子阻害剤の発生について監視することができる。
患者の血漿は、第ＶＩＩＩ因子活性レベルについて監視することができる（例えば、一段階凝固アッセイにより、臨床的に示された場合に、適切な第ＶＩＩＩ因子レベルが達成または維持されていることを確認する）。患者の血漿は、第ＶＩＩＩ因子阻害剤の発生についてさらに監視することができる。
実施例４．延長された半減期の組換えＦｃ融合第ＶＩＩＩ因子の第３相臨床試験（「Ａ−ＬＯＮＧ」研究）
Ａ−ＬＯＮＧ研究の要約
Ａ−ＬＯＮＧ研究において、１６５人の１２歳以上の男性患者が登録された。Ａ−ＬＯＮＧ研究は、３つの治療アーム：個別化した予防、週単位の予防、発症時（オンデマンド）治療（それぞれアーム１、２、及び３）を有した。治療アームにわたる患者のサブグループにおいて、ｒＦＶＩＩＩＦｃは、研究中に大きな外科的手技を必要とする患者の周術期管理において評価された。
Ａ−ＬＯＮＧ研究の要約
Ａ−ＬＯＮＧ研究において、１６５人の１２歳以上の男性患者が登録された。Ａ−ＬＯＮＧ研究は、３つの治療アーム：個別化した予防、週単位の予防、発症時（オンデマンド）治療（それぞれアーム１、２、及び３）を有した。治療アームにわたる患者のサブグループにおいて、ｒＦＶＩＩＩＦｃは、研究中に大きな外科的手技を必要とする患者の周術期管理において評価された。
概して、患者の９２．７パーセントが研究を完了した。組換えＦＶＩＩＩＦｃは、概ね、忍容性が良好であった。ｒＦＶＩＩＩＦｃの阻害剤は検出されず、過敏症の症例はいずれの患者においても報告されなかった（彼ら全てが、商業的に入手可能な第ＶＩＩＩ因子生成物から切り替えた）。いずれの深刻な有害事象も、研究者によって薬物に関係すると評価されなかった。
周術期管理期間外に発生した最も一般的な有害事象（５パーセント以上の発生率）は、鼻咽頭炎、関節痛、頭痛、上気道感染症であった。
特発性及び外傷性出血を含む中央値（平均）年換算出血率（ＡＢＲ）は、個別化した予防アームにおける１．６（２．９）、週単位の予防のためのアームにおける３．６（８．８）、及び発症時治療アームにおける３３．６（３７．２）であった。個別化した予防アームにおいて、中央値投与間隔は、３．５日であった。研究中の最後３カ月間、個別化した予防アームにおける患者の３０パーセントは、少なくとも５日間の平均投与間隔を達成した。
出血の制御は、研究中に出血症状を経験した全ての患者において評価された。概して、出血症状の９８パーセントは、ｒＦＶＩＩＩＦｃの１つまたは２つの注射によって制御された。
加えて、ｒＦＶＩＩＩＦｃは、９つの大きな外科的手技を行う９人の患者の周術期管理において評価された。治療医師は、これらの手術の１００％においてｒＦＶＩＩＩＦｃの止血有効性を優れているまたは良好であると評価した。
Ａ−ＬＯＮＧは、研究において全ての患者におけるｒＦＶＩＩＩＦｃの薬物動態（ＰＫ）分析を含めた。大規模なＰＫ試料採取による患者のプロトコル定義サブセットにおいて、ｒＦＶＩＩＩＦｃのおおよその最終半減期は、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）［抗血友病因子（組換え）、血漿／アルブミンを伴わない方法］についての１２．４時間に比較して１９．０時間であり、ｒＦＶＩＩＩＦｃの第１／２相研究において取得された結果と一致する。
Ａ−ＬＯＮＧ研究及びｒＦＶＩＩＩＦｃプログラムについて
Ａ−ＬＯＮＧは、静脈内注射されたｒＦＶＩＩＩＦｃの有効性、安全性、及び薬物動態を評価したグローバルな非盲検の多中心性の第３相研究であった。研究は、血友病Ａを有する患者における出血の制御及び予防、日常の予防、ならびに周術期管理でのｒＦＶＩＩＩＦｃを評価するように設計された。Ａ−ＬＯＮＧは、６大陸１９カ国において６０箇所の血友病治療センターを含めた。
Ａ−ＬＯＮＧは、静脈内注射されたｒＦＶＩＩＩＦｃの有効性、安全性、及び薬物動態を評価したグローバルな非盲検の多中心性の第３相研究であった。研究は、血友病Ａを有する患者における出血の制御及び予防、日常の予防、ならびに周術期管理でのｒＦＶＩＩＩＦｃを評価するように設計された。Ａ−ＬＯＮＧは、６大陸１９カ国において６０箇所の血友病治療センターを含めた。
Ａ−ＬＯＮＧ研究は、３つの治療アームを有した。アーム１（個別化した予防；ｎ＝１１７）において、患者は、出血を予防するために十分な因子トラフレベルを維持するために個別化された３〜５日毎の間隔で、２５〜６５ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃで治療された。アーム２（週単位の予防のための；ｎ＝２４）において、患者は、６５ＩＵ／ｋｇの週単位の投与量で処置された。アーム３（発症時治療；ｎ＝２３）において、患者は、必要に応じて出血のｒＦＶＩＩＩＦｃ発症時治療を受けた。治療アームにわたる患者のサブグループにおいて、ｒＦＶＩＩＩＦｃは、外科的設定において評価された。
１次有効性測定基準は、アーム１対アーム３の患者毎の年換算出血率及びｒＦＶＩＩＩＦｃ対ｒＦＶＩＩＩの薬物動態であった（一段階凝固［活性化部分トロンボプラスチン時間］アッセイ及び正常なヒトの参照血漿に対して較正される発色アッセイで、効力は世界保健機関（ＷＨＯ）標準に起因する）。安全性エンドポイントは、最大５４週間研究された患者における有害事象の発生及び阻害剤発生（ナイメーヘン修飾ベセスダアッセイ）を含む。２次有効性エンドポイントは、アーム２対アーム３におけるＡＢＲと、患者一人当たりの突発性及び関節出血症状の年換算数と、出血を解消するための注射数及び注射当たりの投与量と、出血対応尺度（手術サブグループのみ）を用いたｒＦＶＩＩＩＦｃでの手術に対する患者の反応、出血症状の治療及びｒＦＶＩＩＩＦｃ対ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）の薬物動態に対する患者の反応についての研究者らの評価と、を含む。非中和抗体（ＮＮＡ）は、電気化学発光ベースの抗ｒＦＶＩＩＩＦｃ結合抗体アッセイを用いて評価された。
ｒＦＶＩＩＩＦｃの現在進行中の臨床研究は、子供用のＡ−ＬＯＮＧ及びＡＳＰＩＲＥの研究を含む。子供用Ａ−ＬＯＮＧは、積極的に患者を募集している、１２歳未満の血友病Ａを有する以前に治療を受けた小児における第３相非盲検研究である。ＡＳＰＩＲＥは、Ａ−ＬＯＮＧ研究を完了したまたは子供用Ａ−ＬＯＮＧ研究を完了する患者のための長期の非盲検研究である。
Ａ−ＬＯＮＧ研究設計
設計：グローバルな非盲検の多中心性の第３相研究。研究プロトコルは、各参加機関について地元の施設内治験審査会によって承認され、研究は、良好な臨床実践のための整合化ガイドラインに関する国際会議に従って行われた。
設計：グローバルな非盲検の多中心性の第３相研究。研究プロトコルは、各参加機関について地元の施設内治験審査会によって承認され、研究は、良好な臨床実践のための整合化ガイドラインに関する国際会議に従って行われた。
目的：重篤な血友病Ａを有する個人における出血症状の制御及び予防、日常の予防、ならびに周術期管理における静脈内注射された組換え第ＶＩＩＩ因子Ｆｃ融合タンパク質（ｒＦＶＩＩＩＦｃ）の有効性及び安全性を評価すること。
重要な包含基準：
男性
１２歳以上及び少なくとも４０ｋｇ
１％未満（１ＩＵ／ｄＬ未満）内因性第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）活性として定義された重篤な血友病Ａの診断
以前に治療された患者（ＰＴＰ）：いずれかの現在市販されているＦＶＩＩＩ製品を用いた１５０以上の以前の文書化された暴露日（ＥＤ）の既往歴、ＦＶＩＩＩ製品による週２回以上の予防をしていること（アーム１についてのみ）、または発症時レジメン時の過去１２カ月間における経験された１２回以上の出血
測定可能な活性の現在／以前のＦＶＩＩＩ阻害剤はない。
阻害剤の既往歴、またはいかなるＦＶＩＩＩもしくは静脈内免疫グロブリン投与に関連する過敏または過敏症の既往歴もない
全ての対象（または未成年者の場合は保護者）は、研究に参加する前に書面によるインフォームドコンセントを与えた。
男性
１２歳以上及び少なくとも４０ｋｇ
１％未満（１ＩＵ／ｄＬ未満）内因性第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）活性として定義された重篤な血友病Ａの診断
以前に治療された患者（ＰＴＰ）：いずれかの現在市販されているＦＶＩＩＩ製品を用いた１５０以上の以前の文書化された暴露日（ＥＤ）の既往歴、ＦＶＩＩＩ製品による週２回以上の予防をしていること（アーム１についてのみ）、または発症時レジメン時の過去１２カ月間における経験された１２回以上の出血
測定可能な活性の現在／以前のＦＶＩＩＩ阻害剤はない。
阻害剤の既往歴、またはいかなるＦＶＩＩＩもしくは静脈内免疫グロブリン投与に関連する過敏または過敏症の既往歴もない
全ての対象（または未成年者の場合は保護者）は、研究に参加する前に書面によるインフォームドコンセントを与えた。
治療アーム：Ａ−ＬＯＮＧ研究設計の詳細は以下に記載される。
アーム１（個別化した予防）は、３〜５日毎（最大５日間の投与間隔）に２５〜６５ＩＵ／ｋｇを投与された。対象は、１日目の２５ＩＵ／ｋｇ及び４日目の５０ＩＵ／ｋｇの初期投与で治療され、これらは、その後、出血を予防するために十分な因子トラフレベルを維持するために調整された。対象が、連続８週間の期間にわたり２以上の中程度の／重篤な出血を経験した場合、７週目以の後に３〜５ＩＵ／ｄＬの標的トラフレベルまでのさらなる投与量調整が許容された；小さい出血症状において１０〜２０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ（標的２０〜４０ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ）；中程度から大きな出血症状において１５〜３０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ（標的３０〜６０ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ）；大きな出血症状から生命を脅かす出血症状において４０〜５０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ（標的８０〜１００ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ）。
アーム１（個別化した予防）は、３〜５日毎（最大５日間の投与間隔）に２５〜６５ＩＵ／ｋｇを投与された。対象は、１日目の２５ＩＵ／ｋｇ及び４日目の５０ＩＵ／ｋｇの初期投与で治療され、これらは、その後、出血を予防するために十分な因子トラフレベルを維持するために調整された。対象が、連続８週間の期間にわたり２以上の中程度の／重篤な出血を経験した場合、７週目以の後に３〜５ＩＵ／ｄＬの標的トラフレベルまでのさらなる投与量調整が許容された；小さい出血症状において１０〜２０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ（標的２０〜４０ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ）；中程度から大きな出血症状において１５〜３０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ（標的３０〜６０ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ）；大きな出血症状から生命を脅かす出血症状において４０〜５０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃ（標的８０〜１００ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ）。
アーム２（週単位の予防のための）は、６５ＩＵ／ｋｇの投与量を投与された。対象は、投与量または間隔調整なしで、週１回６５ＩＵ／ｋｇで治療された。
アーム３（発症時［オンデマンド］治療）は、１０〜５０ＩＵ／ｋｇを投与された。対象は、必要に応じて出血のｒＦＶＩＩＩＦｃ発症時治療を受けた。
周術期管理サブグループが確立された。このサブグループにおいて、ｒＦＶＩＩＩＦｃが、研究中に大きな外科的手技が必要な患者のサブセットにおいて、手術の前及び手術に続いて投与された。いずれかの治療アームにおける対象を手術サブグループに登録することができた。適性：大手術を必要とした；この期間に続いて及び手術前４週間以内に陰性阻害剤力価を有するｒＦＶＩＩＩＦｃへの１２暴露日以上；最小限、簡略なＰＫ試料採取を完了した。
周術期管理サブグループが確立された。このサブグループにおいて、ｒＦＶＩＩＩＦｃが、研究中に大きな外科的手技が必要な患者のサブセットにおいて、手術の前及び手術に続いて投与された。いずれかの治療アームにおける対象を手術サブグループに登録することができた。適性：大手術を必要とした；この期間に続いて及び手術前４週間以内に陰性阻害剤力価を有するｒＦＶＩＩＩＦｃへの１２暴露日以上；最小限、簡略なＰＫ試料採取を完了した。
全ての対象（順次的なＰＫサブグループを除く）は、スケジュールに従って、ｒＦＶＩＩＩＦｃ最大９６時間の事後注射とともに事前注射からのＰＫ試料採取を受けた：事前注射、注射の開始から３０（±３）分間、３時間（±１５分間）、７２（±２）時間（３日目）、及び９６（±２）時間（４日目）。
薬物動態（ＰＫ）評価が実施された。全てのアームにおいて全ての対象を、ｒＦＶＩＩＩＦｃのそれらの最初の投与後、初期ＰＫ評価した。アーム１からの対象のサブセットは、経時的にｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫ性質の安定性と、以下のような組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）［抗血友病因子（組換え）血漿／アルブミンを伴わない方法］、オクトグアルファ）の安定性とを比較するために、プロトコルが指定された順次的なＰＫサブグループに割り当てられた：
アーム１における治療前、ＰＫは、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）５０ＩＵ／ｋｇの単回投与後、評価された。ＰＫは、次いで、５０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃの単回投与後、これらの同じ対象において評価された。
ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫは、１２〜２４週間で繰り返された。
アーム１における治療前、ＰＫは、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）５０ＩＵ／ｋｇの単回投与後、評価された。ＰＫは、次いで、５０ＩＵ／ｋｇのｒＦＶＩＩＩＦｃの単回投与後、これらの同じ対象において評価された。
ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫは、１２〜２４週間で繰り返された。
順次的なＰＫサブグループ（アーム１）投与及びＰＫ試料採取の設計における詳細が図１に記載されている。
（最初の読み出しに含まれる）重要な有効性結果測定：
ａ．アーム１対アーム３における年換算出血率（ＡＢＲ）
ｂ．発症時治療アームと比較した個別化した予防アーム
ｃ．１つの出血症状を解消するために必要な注射の数
ｄ．複数の出血症状を解消するために必要な注射の数
ｅ．出血症状を解消するために必要な中央値投与量
ｆ．４点尺度を使用したｒＦＶＩＩＩＦｃでの手術に対する対象の反応についての治療医師の評価
ａ．アーム１対アーム３における年換算出血率（ＡＢＲ）
ｂ．発症時治療アームと比較した個別化した予防アーム
ｃ．１つの出血症状を解消するために必要な注射の数
ｄ．複数の出血症状を解消するために必要な注射の数
ｅ．出血症状を解消するために必要な中央値投与量
ｆ．４点尺度を使用したｒＦＶＩＩＩＦｃでの手術に対する対象の反応についての治療医師の評価
ＰＫ結果測定は以下を含む：
ａ．１次ＰＫ評価は、一段階凝固アッセイによって及び発色アッセイによって、商業的に入手可能な血漿標準に対して、中央実験室で決定されたＦＶＩＩＩ活性レベルに基づいた。
ｂ．ｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）のＰＫ
ｃ．ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫ性質は、ｒＦＶＩＩＩ（ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）；順次的なＰＫサブグループ）と比較された。概して、研究継続期間は、全ての対象について７５週間以下であった。１次有効性エンドポイントは、年換算出血率（ＡＢＲ；アーム１及び２対アーム３）であった。予防投与及び間隔、出血症状の治療に必要な注射の数、ならびに周術期の止血が評価された。
ａ．１次ＰＫ評価は、一段階凝固アッセイによって及び発色アッセイによって、商業的に入手可能な血漿標準に対して、中央実験室で決定されたＦＶＩＩＩ活性レベルに基づいた。
ｂ．ｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）のＰＫ
ｃ．ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫ性質は、ｒＦＶＩＩＩ（ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）；順次的なＰＫサブグループ）と比較された。概して、研究継続期間は、全ての対象について７５週間以下であった。１次有効性エンドポイントは、年換算出血率（ＡＢＲ；アーム１及び２対アーム３）であった。予防投与及び間隔、出血症状の治療に必要な注射の数、ならびに周術期の止血が評価された。
重要な安全性結果測定は以下を含む：
ａ．阻害剤生成の発生。研究は、阻害剤形成の２症例が観察された場合、Ｃｌｏｐｐｅｒ−Ｐｅａｒｓｏｎの正確な方法を用いて、２面の９５％の信頼区間を有する阻害剤の発生を検出するために作動された。
ｂ．周術期管理期間外で起こる有害事象（ＡＥ）の発生
ａ．阻害剤生成の発生。研究は、阻害剤形成の２症例が観察された場合、Ｃｌｏｐｐｅｒ−Ｐｅａｒｓｏｎの正確な方法を用いて、２面の９５％の信頼区間を有する阻害剤の発生を検出するために作動された。
ｂ．周術期管理期間外で起こる有害事象（ＡＥ）の発生
治療の順守（順守測定）が、患者の電子日記を用いて評価された。
Ａ−ＬＯＮＧ結果
対象
合計１６５人の対象が研究に登録された。中央値の年齢は、３０歳（１２〜６５の範囲）であり、８％が１８歳未満であった。研究のそれぞれのアームにおける患者数は以下であった：アーム１（個別化した予防）、ｎ＝１１８；アーム２（週単位の予防のための）、ｎ＝２４；アーム３（発症時治療）、ｎ＝２３；及び周術期管理サブグループ、ｎ＝９、９手術（アーム１からの８人の対象及びアーム２からの１人）。それぞれの治療アームからの対象は、彼らが大手術を必要とする場合、手術サブグループに入る資格があり、この期間に続いて及び手術前に４週間以内にｒＦＶＩＩＩＦｃに対して１２ＥＤ以上及び陰性の阻害剤力価を有した。以前の発症時治療を受けた患者は、研究前の１２カ月間で出血症状のより高い中央値を有し、アーム２及び３においてより高い割合の患者は、標的関節を有した。以前予防を行った患者について、８７％が少なくとも週３回注射されたことが報告された。
対象
合計１６５人の対象が研究に登録された。中央値の年齢は、３０歳（１２〜６５の範囲）であり、８％が１８歳未満であった。研究のそれぞれのアームにおける患者数は以下であった：アーム１（個別化した予防）、ｎ＝１１８；アーム２（週単位の予防のための）、ｎ＝２４；アーム３（発症時治療）、ｎ＝２３；及び周術期管理サブグループ、ｎ＝９、９手術（アーム１からの８人の対象及びアーム２からの１人）。それぞれの治療アームからの対象は、彼らが大手術を必要とする場合、手術サブグループに入る資格があり、この期間に続いて及び手術前に４週間以内にｒＦＶＩＩＩＦｃに対して１２ＥＤ以上及び陰性の阻害剤力価を有した。以前の発症時治療を受けた患者は、研究前の１２カ月間で出血症状のより高い中央値を有し、アーム２及び３においてより高い割合の患者は、標的関節を有した。以前予防を行った患者について、８７％が少なくとも週３回注射されたことが報告された。
対象の９２．７％が研究を完了した。全体的には、１５３人（およそ９３％）の対象が研究を完了した；アーム１において１１２／１１８（９５％）、アーム２において１９／２４（７９５）、及びアーム３において２２／２３（９６％）。早まった停止の理由：アーム１−対象の中止（ｎ＝２）、医師の判断（ｎ＝２）、その他（ｎ＝１）、死亡（ｎ＝１）；アーム２−対象の中止（ｎ＝２；研究薬物に関係する有害事象（ＡＥ）が寄与し得た）、ＡＥ（ｎ＝２）、その他（ｎ＝１）；アーム３−その他（ｎ＝１）。
対象の年齢、人種、地理は、表６に要約されているように、治療へのアクセスを有するグローバルな血友病Ａ集団を表していた。
対象は、それぞれ、３２．１（９、５４）、２８．０（１未満、３８）、ならびに２８．９（１５、３２）週間のアーム１、２、及び３において、中央値（最小〜最大）で３０．５（１未満〜５４）週間の中央値（最小〜最大）についてｒＦＶＩＩＦｃを受けた。全体的には、１１１人の対象（６７．７％）は、薬物を研究するために、５０以上のＥＤを有した。合計９３５６本の注射が、９１７０ＥＤ（暴露の１００．２人年）に対応するように、研究中に投与された。概して、患者の９３．６％は、予防アームにおいて、指示された投与及び間隔の両方を遵守した。
概して、対象の９３．６％は、予防治療アームにおいて指示された投与及び指示された投与間隔の両方を順守した。
有効性
全体的には、１６３人の対象は有効性分析において含まれた。１つの対象が、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）（アーム１）を受けただけなので排除され、別の対象が有効性評価（アーム２）以前に中止した。第２５及び第７５百分位数（四分位数範囲［ＩＱＲ］）を有する中央値ＡＢＲは、以下の通りであった：アーム１−個別化した予防アーム：１．６（０．０、４．７）；アーム２−週単位の予防のためのアーム：３．６（１．９、８．４）；及びアーム３−発症時治療アーム：３３．６（２１．１、４８．７）。ほとんどの出血症状は、突発性であった。アーム１、２、及び３において、それぞれ、４５．３％、１７．４％、及び０％が出血症状を有せず、１３．７％、３４．８％、及び０％が１つの出血症状を有した。
全体的には、１６３人の対象は有効性分析において含まれた。１つの対象が、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）（アーム１）を受けただけなので排除され、別の対象が有効性評価（アーム２）以前に中止した。第２５及び第７５百分位数（四分位数範囲［ＩＱＲ］）を有する中央値ＡＢＲは、以下の通りであった：アーム１−個別化した予防アーム：１．６（０．０、４．７）；アーム２−週単位の予防のためのアーム：３．６（１．９、８．４）；及びアーム３−発症時治療アーム：３３．６（２１．１、４８．７）。ほとんどの出血症状は、突発性であった。アーム１、２、及び３において、それぞれ、４５．３％、１７．４％、及び０％が出血症状を有せず、１３．７％、３４．８％、及び０％が１つの出血症状を有した。
中央値投与間隔：
ａ．個別化した予防アームにおいて、中央値投与間隔は、研究における最後の３カ月間、３．５日間であった。
ｂ．個別化した予防アームにおける患者の３０パーセントは、少なくとも５日間の平均投与間隔を達成した。
ｃ．概して、少なくとも１〜３ＩＵ／ｄＬ（プロトコルにおいて許容される最大５日間の投与間隔）のＦＶＩＩＩトラフを達成することを目指す個別化予防による中央値（ＩＱＲ）投与間隔は、７８（７２〜９１）ＩＵ／ｋｇの中央値（ＩＱＲ）週単位投与に基づいて３．５（３．２〜４．４）日間（表７）であった。
ｄ．対象のおよそ３０％は、研究における最後の３カ月にわたって、５日間の平均投与間隔を達成した。対象の１００％は、研究を通して平均投与間隔２日間以上を有した。
ａ．個別化した予防アームにおいて、中央値投与間隔は、研究における最後の３カ月間、３．５日間であった。
ｂ．個別化した予防アームにおける患者の３０パーセントは、少なくとも５日間の平均投与間隔を達成した。
ｃ．概して、少なくとも１〜３ＩＵ／ｄＬ（プロトコルにおいて許容される最大５日間の投与間隔）のＦＶＩＩＩトラフを達成することを目指す個別化予防による中央値（ＩＱＲ）投与間隔は、７８（７２〜９１）ＩＵ／ｋｇの中央値（ＩＱＲ）週単位投与に基づいて３．５（３．２〜４．４）日間（表７）であった。
ｄ．対象のおよそ３０％は、研究における最後の３カ月にわたって、５日間の平均投与間隔を達成した。対象の１００％は、研究を通して平均投与間隔２日間以上を有した。
アーム３発症時レジメンのための１回の注射当たりの中央値投与は２６．５ＩＵ／ｋｇ（ｎ＝２３）であり、出血症状当たりの中央値総投与量は２７．４ＩＵ／ｋｇ（ｎ＝２３）であった。
出血の制御：出血症状のおよそ９８％（９７．７％）は、１回または２回のｒＦＶＩＩＩＦｃの注射によって制御された。出血の８７．３％は、１回の注射によって制御された。１．７％は、３回の注射を必要とした。
周術期管理：概して、膝関節形成（ｎ＝５）、腹腔鏡下鼠径ヘルニア修復（ｎ＝２）、虫垂切除（ｎ＝１）、及び関節鏡検査（ｎ＝１）を含めて、９つの大手術が９人の対象において実施された（アーム１からの８人の対象；アーム２からの１人の対象）。治療医師は、これらの手術の１００％においてｒＦＶＩＩＩＦｃの止血有効性を優れている（８／９）または良好である（１／９）と評価した。７／９の手術のために利用可能な中央値（最小、最大）推定失血は、手術中に１５．０（０、６００）ｍＬであり、手術後に０．０（０、１１００）ｍＬ（外科手術後ドレナージ）であった。
ＰＫ
アーム１順次的ＰＫサブグループにおいて２８人の対象から入手可能なｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）について比較のＰＫデータは、表７に要約されている。
ａ．ｒＦＶＩＩＩＦｃは、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）に関するｒＦＶＩＩＩＦｃクリアランスにおける３５％減少のために、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）（Ｐ＜０．００１）と比較しておよそ５０％長い排出半減期（図２）及び平均滞留時間を実証した。
ｂ．５０−ＩＵ／ｋｇの投与に続く１ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ活性に対する幾何平均時間は、ｒＦＶＩＩＩＦｃについてのおよそ５日間対ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）についてのおよそ３日間であった（Ｐ＜０．００１；表７、図２）
ｃ．ｒＦＶＩＩＩＦｃのための増分リカバリはＡＤＶＡＴＥ（登録商標）と臨床的に同等であった。
ｄ．ベースラインと繰り返しｒＦＶＩＩＩＦｃ ＰＫプロフィールとの間の同等のＰＫ性質によって証明されるように、ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫ性質においてシフトがなかった。
ｅ．分析が発色ＦＶＩＩＩアッセイに基づくとき、同様のＰＫ結果が得られた。
ｆ．一段階及び発色凝固アッセイは、商業的に入手可能な血漿ＦＶＩＩＩ標準を利用して、ｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）の両方を正確かつ精密に測定した。
アーム１順次的ＰＫサブグループにおいて２８人の対象から入手可能なｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）について比較のＰＫデータは、表７に要約されている。
ａ．ｒＦＶＩＩＩＦｃは、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）に関するｒＦＶＩＩＩＦｃクリアランスにおける３５％減少のために、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）（Ｐ＜０．００１）と比較しておよそ５０％長い排出半減期（図２）及び平均滞留時間を実証した。
ｂ．５０−ＩＵ／ｋｇの投与に続く１ＩＵ／ｄＬのＦＶＩＩＩ活性に対する幾何平均時間は、ｒＦＶＩＩＩＦｃについてのおよそ５日間対ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）についてのおよそ３日間であった（Ｐ＜０．００１；表７、図２）
ｃ．ｒＦＶＩＩＩＦｃのための増分リカバリはＡＤＶＡＴＥ（登録商標）と臨床的に同等であった。
ｄ．ベースラインと繰り返しｒＦＶＩＩＩＦｃ ＰＫプロフィールとの間の同等のＰＫ性質によって証明されるように、ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫ性質においてシフトがなかった。
ｅ．分析が発色ＦＶＩＩＩアッセイに基づくとき、同様のＰＫ結果が得られた。
ｆ．一段階及び発色凝固アッセイは、商業的に入手可能な血漿ＦＶＩＩＩ標準を利用して、ｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）の両方を正確かつ精密に測定した。
ｒＦＶＩＩＩＦｃの幾何平均（９５％信頼区間）最終半減期は、およそ１９．０時間（１７．０、２１．１）時間であり、これは、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）のもの（およそ１２．４（１１．１、１３．９）時間）よりも１．５３倍長い。
ｒＦＶＩＩＩＦｃの５０ＩＵ／ｋｇに続く１％ＦＶＩＩＩ活性までの幾何平均時間（ＩＱＲ）は、およそ５日間（４．９２（４．４３、５．４６）日間であった）。ｒＦＶＩＩＩＦｃの同等のＰＫプロフィールが１４週目に観察された。個別化した予防による中央値投与間隔は３．５日間であり、週当たりの中央値投与は７８ＩＵ／ｋｇであった；対象のおよそ３０％が、表８に示されるように、研究の最後３カ月にわたって５日間以上の平均投与間隔を達成した（研究において６カ月以上の対象）。出血症状の９８％が１〜２本の注射によって制御された。
安全性
阻害剤はｒＦＶＩＩＩＦｃに検出されず、アナフィラキシー、アレルギー、または深刻な血栓事象の症例は報告されなかった。
阻害剤はｒＦＶＩＩＩＦｃに検出されず、アナフィラキシー、アレルギー、または深刻な血栓事象の症例は報告されなかった。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、概ね、十分に許容され、深刻な有害事象は、ｒＦＶＩＩＩＦｃに関連していると評価されなかった。
周術期管理期間外で起こる（発生５％以上）最も一般的なＡＥは、因果関係に関係なく、表９に要約されているように鼻咽頭炎、関節痛（関節の痛み）、頭痛、上気道感染症であった。
１２人の対象（７．３％）が、周術期管理期間外で少なくとも１つの深刻なＡＥ（ＳＡＥ）を経験した。
ＳＡＥは、研究者によって薬物に関係すると評価されるものはなかった。
非中和抗体（ＮＮＡ）の些細な発生は、ベセスダアッセイよりも約２０倍の感度であるＮＮＡアッセイで観察された。５人の対象は、ベースラインにおいてＮＮＡについて陽性であることが見出されたが、全て、研究中に少なくとも１つの陰性の評価を持った。６人の対象、アーム１研究における４人及びアーム２研究における２人は、研究中に陽性になった。しかしながら、ほとんど全ての場合において、抗体は一過性かつ低力価であり、すべての場合において、抗体はＦＶＩＩＩに対して向けられた。
概して、１４（８．５％）人の対象がＳＡＥと報告された。ＳＡＥは、研究者によって薬物の研究と関係すると決定されたものはなく、報告されたＳＡＥは、２人以上の対象において経験されなかった。研究中に１人が死亡し、これは各種薬物の過剰投与に起因し、研究者によってｒＦＶＩＩＩＦｃと無関係であると評価された。
要約
個別化した週単位の予防的レジメンが、低い一桁の中央値年換算出血率をもたらした。
個別化した週単位の予防的レジメンが、低い一桁の中央値年換算出血率をもたらした。
個別化した予防アームにおいて、中央値の投与間隔は３．５日間であった。研究の最後３カ月間中、個別化した予防アームにおける患者の３０パーセントは、少なくとも５日間の平均投与間隔を達成した。
出血症状の９８％は、ｒＦＶＩＩＩＦｃの１回または２回の注射によって制御された。全体的には、７５７の出血症状（アーム１＝２０９、アーム２＝９２、アーム３＝４５６）が、１６４人の対象のうちの１０６人において治療された。８７．３％が解消のためにｒＦＶＩＩＩＦｃの単回注射を必要とし、９７．８％が２以上の注射を必要とした。出血症状の合計８５．６％、８０．４％、及び８９．５％は、それぞれ、アーム１、２、及び３においてｒＦＶＩＩＩＦｃの１回の注射によって解消された。
手術中のｒＦＶＩＩＩＦｃの止血有効性は、治療医師によって手術の１００％において優れているまたは良好であると評価された。
ｒＦＶＩＩＩＦｃの半減期は、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）についての１２．４時間に比較しておよそ１９．０時間であった。
阻害剤を発生した対象はなく、またはｒＦＶＩＩＩＦｃに対する過敏症反応を経験した対象はなかった。
組換えＦＶＩＩＩＦｃは、概ね、忍容性が良好であった。
Ａ−ＬＯＮＧは、これまでに実施された重篤な血友病Ａにおける長期間持続型ｒＦＶＩＩＩの最大の登録された世界的に重要な第３相研究であった。研究は、ｒＦＶＩＩＩＦｃが、重篤な血友病Ａを有する患者における顕著に低下した注射頻度、減少した治療負担、出血の予防の臨床結果における改善の可能性を提供していることを示した。
研究設計の目標：研究は、重篤な血友病Ａを有する対象における出血症状の制御及び予防、日常の予防、ならびに周術期管理において、ｒＦＶＩＩＩＦｃの有効性及び安全性を評価するように設計された。加えて、研究は、予防のためのｒＦＶＩＩＩＦｃの有効量及び間隔、ならびに６５ＩＵ／ｋｇの投与での週単位の治療の実現可能性を評価するように設計された。
発症時治療は、出血が始まった後に出血症状を治療するために必要とされるときだけの、補充因子の投与である。予防的治療は、出血症状を予防するための補充因子の定期的投与である。
開始レジメンは、１日目に２５ＩＵ／ｋｇ、４日目に５０ＩＵ／ｋｇであった。治療の投与及び頻度は、対象のＰＫプロフィールに基づいて調整することができ、目標は、２５ＩＵ／ｋｇ〜６５ＩＵ／ｋｇの投与及び３〜５日間の治療間隔を用いて、出血症状を予防するために十分な因子トラフレベルを維持することであった。
米国における重篤な血友病患者の半分以上は、一部には治療負担の理由から、依然として予防レジメンに従っていない。したがって、週単位の投与レジメンを、このレジメンが発症時レジメンと比較してより低いＡＢＲをもたらすかどうかを評価するために、Ａ−ＬＯＮＧ研究において含む。週単位のレジメンにおける中央値ＡＢＲは、発症時治療の３３．６（ＩＱＲ２１．１、４８．７）と比較して３．５９（ＩＱＲ１．９、８．４）であった。
全ての対象は、血友病Ａを有する患者の代表的な集団において、ｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫを特徴付ける初期ＰＫ評価を有した。
さらに広範囲のＰＫ試料採取が、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）（５０ＩＵ／ｋｇ）の単回投与後、及び４日間の洗い流し、続くｒＦＶＩＩＩＦｃ（５０ＩＵ／ｋｇ）の単回投与の後、ベースラインで個別化した予防アーム（アーム１）において対象のサブセットにおいて行われた。血液試料は、７２時間の期間にわたって、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）について採取された。血液試料は、次いで、１２０時間の期間にわたってｒＦＶＩＩＩＦｃについて採取された。このサブセットにおいてｒＦＶＩＩＩＦｃのＰＫ評価は、同じＰＫ試料採取スケジュールで１２〜２４週間で繰り返された。
周術期管理において、ｒＦＶＩＩＩＦｃの単回注射は、５１．４ＩＵ／ｋｇの中央値投与で、全ての大手術の終了日／時間まで止血を維持するために十分であった。中央値のｒＦＶＩＩＩＦｃ消費（それぞれの参照期間中に全ての注射にわたって要約された）は、大手術の日に８０．６ＩＵ／ｋｇ、手術に続く１〜３日目に１６１．３ＩＵ／ｋｇ、及び手術に続く４〜１４日目に３８７．１ＩＵ／ｋｇであった。ｒＦＶＩＩＩＦｃでの周術期の止血は、全ての９つの大手術について優れているまたは良好であると評価された。術後またはリハビリテーション期間中に出血症状が報告された対象はいなかった。概して、７つの有害事象（ＡＥ）が、手術サブグループにおいて４人（４４．４％）の対象において報告され、そのうちの６つのＡＥは、軽度または中程度の重篤度であり、１つのＡＥは重篤と考えられた。２つの深刻なＡＥ（鼠径ヘルニア及び虫垂炎）が、２人の対象において報告された。周術期の期間中の全てのＡＥは、研究者らによってｒＦＶＩＩＩＦｃ治療と無関係であると評価された。
治療医師は、優れている、良好、まずまず、及び貧弱／評価なしを含む４点尺度で、手術の１００％におけるｒＦＶＩＩＩＦｃの止血有効性を優れているまたは良好であると評価した。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、週単位の予防のためのアームにおいて３．５９の、個別化した間隔予防アームにおいて１．６０の低い中央値ＡＢＲをもたらした。対照的に、発症時治療アームは、３３．５７の中央値ＡＢＲを有した。
個別化した予防アームにおいて、中央値の投与間隔は、研究の最後３カ月間７７．７ＩＵ／ｋｇの中央値投与で３．５日間であった。
最終半減期は、ｒＦＶＩＩＩＦｃについておよそ１８．９７時間、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）についておよそ１２．３時間であった。
出血症状の９７．８％は、１回または２回の注射によって制御された。
周術期管理のためのｒＦＶＩＩＩＦｃの止血有効性は、治療医師によって手術の１００％において優れているまたは良好であると評価された。
アーム２は、週単位の投与レジメンであった。それは、予防療法における患者にとっての有益性を調査して、発症時治療レジメンを使用する対象をこれらの結果と比較するように設計された。アーム２における中央値ＡＢＲは、発症時治療レジメン（アーム３）についての３３．５７と比較して３．５９であった。
出血の解消のために必要な１本の注射当たり中央値の投与は２７．４ＩＵ／ｋｇであり、必要な中央値の総投与は２８．２ＩＵ／ｋｇであった。
出血症状の解消に必要とされる注射の中央値数は、出血の種類または位置に関わらず、治療が出血開始の８時間以内に投与されるとき、一貫して１．０であった。概して、アーム１においてｒＦＶＩＩＩＦｃ注射の７８．８％、アーム２において６４．８％、及びアーム３において注射の７９．７％が、対象によって優れているまたは良好である反応を生じると評価された。アーム１からの３．５日間の中央値の投与間隔は、大多数の患者によって達成され得る投与間隔を表す：患者の３０％は、少なくとも５日間の投与間隔を達成することができた。何人かの患者は、３．５９の出血症状の中央値ＡＢＲを有する週単位の予防のためのレジメン（アーム２）を達成することができた。
個別化した予防アームにおける対象は、１日目に２５ＩＵ／ｋｇ及び４日目に５０ＩＵ／ｋｇの初期投与を受けた。研究設計は、標的因子トラフレベルを維持し、出血を予防するために、投与間隔及び投与量の調節を可能にした。我々は、研究の最後６カ月に基づいた中央値の投与間隔及び投与量は、個別化した予防レジメンを最も表していると考えている。
出血症状の８７．３％は、ｒＦＶＩＩＩＦｃの１回の注射で解消され、９７．８％が１回または２回の注射で解消された。解消のために２回以上の注射を必要とする９６（１２．７％）の出血症状について、第１の注射と第２の注射との間の中央値の間隔は３０．９時間であった。
対象に割り当てられたｒＦＶＩＩＩＦｃレジメンに対する対象反応についての研究者らのグローバル評価は、それぞれ、アーム１、２、及び３において対象訪問の９９．４％、１００％、及び９８．１％について素晴らしいまたは有効であると評価された。
Ａ−ＬＯＮＧにおいて、凝固因子活性は、一段階（ａＰＴＴ）凝固アッセイ及び発色アッセイを使用して測定された。報告された半減期は、一段階凝固アッセイの結果に基づいている。ｒＦＶＩＩＩＦｃ及びＡＤＶＡＴＥ（登録商標）の半減期は両方とも発色アッセイで若干長めのものであったが、一方で生成物間の比は、２つのアッセイの間で一貫していた。
実施形態
Ｅ１．血友病を有する対象における年換算出血率を低下させる方法であって、対象に、約３日間以上の投与間隔で、有効量の長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドを投与することを含む、方法。
Ｅ１．血友病を有する対象における年換算出血率を低下させる方法であって、対象に、約３日間以上の投与間隔で、有効量の長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドを投与することを含む、方法。
Ｅ２．投与が予防的投与であり、対象に合わせて個別化され、約５．０未満、約４．９未満、約４．８未満、約４．７未満、約４．６未満、または約４．５未満の年換算出血率をもたらす、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ３．年換算出血率の中央値が約１．６である、実施形態Ｅ２に記載の方法。
Ｅ４．投与が予防的投与であり、毎週、約９．０未満、約８．９未満、約８．８未満、約８．７未満、約８．６未満、約８．５未満、または約８．４未満の年換算出血率をもたらす、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ５．年換算出血率の中央値が約３．６である、実施形態Ｅ４に記載の方法。
Ｅ６．投与がオンデマンドまたは発症時の投与であり、約５５未満、約５４未満、約５３未満、約５２未満、約５１未満、約５０未満、約４９未満、約４８未満、または約４７未満の年換算出血率をもたらす、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ７．年換算出血率の中央値が約３３．６である、実施形態Ｅ６に記載の方法。
Ｅ８．有効量が、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇである、実施形態Ｅ１〜Ｅ７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９．有効量が、２０〜３０ＩＵ／ｋｇ、３０〜４０ＩＵ／ｋｇ、４０〜５０ＩＵ／ｋｇ、５０〜６０ＩＵ／ｋｇ、６０〜７０ＩＵ／ｋｇ、７０〜８０ＩＵ／ｋｇ、または８０〜９０ＩＵ／ｋｇである、実施形態Ｅ１〜Ｅ８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０．有効量が、２０ＩＵ／ｋｇ、２５ＩＵ／ｋｇ、３０ＩＵ／ｋｇ、３５ＩＵ／ｋｇ、４０ＩＵ／ｋｇ、４５ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、５５ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、６５ＩＵ／ｋｇ、７０ＩＵ／ｋｇ、７５ＩＵ／ｋｇ、８０ＩＵ／ｋｇ、８５ＩＵ／ｋｇ、または９０ＩＵ／ｋｇである、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１．投与が予防的投与であり、週に２回もしくは３日毎に約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、または４日もしくは５日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの有効量で個別化される、実施形態Ｅ８〜Ｅ１０のいずれかに記載の方法。
Ｅ１２．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドの第１の投与量が約２５ＩＵ／ｋｇであり、長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドの第２の投与量が約５０ＩＵ／ｋｇである、実施形態Ｅ１１に記載の方法。
Ｅ１３．投与が予防的投与であり、毎週６５ＩＵ／ｋｇの有効量で毎週行われる、実施形態Ｅ８〜Ｅ１０のいずれかに記載の方法。
Ｅ１４．投与が、１２〜２４時間毎に１０ＩＵ／ｋｇ〜７５ＩＵ／ｋｇの有効量でのオンデマンドまたは発症時の投与である、実施形態Ｅ８〜Ｅ１０のいずれかに記載の方法。
Ｅ１５．有効量が、全体重にわたって標準的である固定投与量である、実施形態Ｅ１〜Ｅ７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６．固定投与量が、１回の投与当たり約２，０００ＩＵ、約２，５００ＩＵ、約３，０００ＩＵ、約３，５００ＩＵ、または約４，０００ＩＵである、実施形態Ｅ１５に記載の方法。
Ｅ１７．有効量が層別化した投与である、実施形態Ｅ１〜Ｅ７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドのトラフレベルが、通常の１％超、２％超、または３％超である、実施形態Ｅ１〜Ｅ１７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、約７時間〜約４８時間、約６時間〜約４９時間、約５時間〜約５０時間のＴ１／２ベータ（活性）を有する、実施形態Ｅ１〜Ｅ１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０．長時間作用型ＦＶＩＩＩが、少なくとも約１５時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約１７時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約１９時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２１時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２３時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２５時間のＴ１／２ベータ（活性）平均を有する、実施形態Ｅ１９に記載の方法。
Ｅ２１．Ｔ１／２ベータ（活性）平均が約１９時間である、実施形態Ｅ２０に記載の方法。
Ｅ２２．Ｔ１／２ベータ（活性）平均が、配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７、配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１からなるポリペプチド、またはＡＤＶＡＴＥ（登録商標）よりも少なくとも約１．５倍高い、実施形態Ｅ１９またはＥ２０に記載の方法。
Ｅ２３．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドの血漿トラフレベルが、対象におけるベースラインを約１％〜約５％、約１％〜約６％、約１％〜約７％、約１％〜約８％、約１％〜約９％、約１％〜約１０％、約１％〜約１１％、約１％〜約１２％、約１％〜約１３％、約１％〜約１４％、約１％〜約１５％上回るように維持される、実施形態Ｅ１〜Ｅ２２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、ＦＶＩＩＩポリペプチド及び異種性部分を含む長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドである、実施形態Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５．異種性部分がＦｃＲｎ結合パートナーである、実施形態Ｅ２４に記載の方法。
Ｅ２６．ＦｃＲｎ結合パートナーがＦｃ領域を含む、実施形態Ｅ２５に記載の方法。
Ｅ２７．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、第２のＦｃＲｎ結合パートナーをさらに含む、実施形態Ｅ２５またはＥ２６に記載の方法。
Ｅ２８．第２のＦｃＲｎ結合パートナーが第２のＦｃ領域を含む、実施形態Ｅ２７に記載の方法。
Ｅ２９．ＦｃＲｎ結合パートナー及び第２のＦｃＲｎ結合パートナーが結合している、実施形態Ｅ２７またはＥ２８に記載の方法。
Ｅ３０．結合が共有結合である、実施形態Ｅ２９に記載の方法。
Ｅ３１．共有結合が、ジスルフィド結合である、実施形態Ｅ３０に記載の方法。
Ｅ３２．第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、ペプチド結合によってアミノ酸配列に結合されない、実施形態Ｅ２７〜Ｅ３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３３．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、ＦＶＩＩＩ単量体−二量体ハイブリッドである、実施形態Ｅ１〜Ｅ３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３４．長時間作用型ポリペプチドにおけるＦＶＩＩＩポリペプチドがヒトＦＶＩＩＩである、実施形態Ｅ２４〜Ｅ３３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３５．長時間作用型ポリペプチドにおけるＦＶＩＩＩポリペプチドが、完全長ＦＶＩＩＩまたはＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩである、実施形態Ｅ２４〜Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３６．ＦＶＩＩＩポリペプチドが一本鎖である、実施形態Ｅ２４〜Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３７．ＦＶＩＩＩポリペプチドがプロセシングされていない、実施形態Ｅ２４〜Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３８．ＦＶＩＩＩポリペプチドが、２つの鎖、ＦＶＩＩＩポリペプチドの重鎖を含む第１の鎖及びＦＶＩＩＩポリペプチドの軽鎖を含む第２の鎖内にある、実施形態Ｅ２４〜Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３９．キメラポリペプチドにおけるＦｃＲｎ結合パートナーが、ヒトＦｃである、実施形態Ｅ２５〜Ｅ３８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４０．ＦＶＩＩＩポリペプチドが、シグナル配列を含まない、表１１Ａまたは１１Ｂに示されるＦＶＩＩＩアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７または配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、実施形態Ｅ２４〜Ｅ３９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４１．ＦｃＲｎ結合パートナーが、シグナル配列を含まない、表１１Ｂに示されるＦｃアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸２１〜２４７）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、実施形態Ｅ２５〜Ｅ４０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４２．キメラポリペプチドにおける第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、ヒトＦｃである、実施形態Ｅ２７〜Ｅ４１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４３．第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、シグナル配列を含まない、表１１Ｂに示されるＦｃアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸２１〜２４７）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、実施形態Ｅ４２に記載の方法。
Ｅ４４．凝固因子の固定投与量が、出血症状の周術期管理のためである、実施形態Ｅ１〜Ｅ４３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４５．対象が、出血または出血症状の管理または予防を必要とする、実施形態Ｅ１〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４６．対象が、軽度の出血、関節血症、浅層筋肉の出血、軟部組織出血、中等度の出血、切開による筋肉内もしくは軟部組織出血、粘膜出血、血尿、大出血、咽頭の出血、咽頭後部の出血、後腹膜腔（ｒｅｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｉｕｍ）の出血、中枢神経系出血、打撲、切り傷、引っ掻き傷、関節出血、鼻血、口の出血、歯茎からの出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、軽度の自然発症型出血、大外傷後の出血、中等度の皮膚損傷、または関節、筋肉、内臓器官、もしくは脳への自然発症型出血における出血の管理または予防を必要とする、実施形態Ｅ４５に記載の方法。
Ｅ４７．対象が、外科手術または抜歯と関連する出血の管理を必要とする、実施形態Ｅ４６に記載の方法。
Ｅ４８．対象が、大手術を、行うであろう、行っている、または行ったことがある、実施形態Ｅ４７に記載の方法。
Ｅ４９．大手術が、整形外科手術、広範囲の口腔外科手術、泌尿器系手術、またはヘルニア手術である、実施形態Ｅ４８に記載の方法。
Ｅ５０．整形外科手術が、膝、臀部、または他の大関節の置換である、実施形態Ｅ４９に記載の方法。
Ｅ５１．対象が、長期的治療を必要とする、実施形態Ｅ１〜Ｅ５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５２．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、静脈内または皮下に投与される、実施形態Ｅ１〜Ｅ５１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５３．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、
（ａ）長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、
（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、
（ｄ）Ｌ−ヒスチジンと、
（ｅ）塩化カルシウムと、
（ｆ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、薬学的組成物に製剤化される、実施形態Ｅ１〜Ｅ５２のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、
（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、
（ｄ）Ｌ−ヒスチジンと、
（ｅ）塩化カルシウムと、
（ｆ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、薬学的組成物に製剤化される、実施形態Ｅ１〜Ｅ５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５４．薬学的組成物が、マンニトール、グリシン、アラニン、またはヒドロキシエチルデンプンを含まない、実施形態Ｅ５３に記載の方法。
Ｅ５５．薬学的組成物が、唯一の充填剤としてＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ５３またはＥ５４に記載の方法。
Ｅ５６．薬学的組成物が、スクロースを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５７．薬学的組成物が、約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む、実施形態Ｅ５６に記載の方法。
Ｅ５８．薬学的組成物が、約１．３％（ｗ／ｖ）のスクロース〜約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む、実施形態Ｅ５７に記載の方法。
Ｅ５９．薬学的組成物が、約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースまたは約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む、実施形態Ｅ５８に記載の方法。
Ｅ６０．薬学的組成物が、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、実施形態Ｅ５６に記載の方法。
Ｅ６１．薬学的組成物が、約１３ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、実施形態Ｅ６０に記載の方法。
Ｅ６２．薬学的組成物が、約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースまたは約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、実施形態Ｅ６１に記載の方法。
Ｅ６３．薬学的組成物が、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６４．薬学的組成物が、約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ６３に記載の方法。
Ｅ６５．薬学的組成物が、約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ６４に記載の方法。
Ｅ６６．薬学的組成物が、約２０５ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ６５に記載の方法。
Ｅ６７．薬学的組成物が、約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６８．薬学的組成物が、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１３ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ６７に記載の方法。
Ｅ６９．薬学的組成物が、約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ６８に記載の方法。
Ｅ７０．薬学的組成物が、約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７１．薬学的組成物が、約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ７０に記載の方法。
Ｅ７２．薬学的組成物が、約３０８ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７３．薬学的組成物が、約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７４．薬学的組成物が、約１６ｍｇ／ｍｌ〜約１９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ７３に記載の方法。
Ｅ７５．薬学的組成物が、約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ７４に記載の方法。
Ｅ７６．薬学的組成物が、約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ７５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７７．薬学的組成物が、約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンまたは約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンを含む、実施形態Ｅ７６に記載の方法。
Ｅ７８．薬学的組成物が、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ７５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７９．薬学的組成物が、約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンまたは約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンを含む、実施形態Ｅ７８に記載の方法。
Ｅ８０．薬学的組成物が、約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムを含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８１．薬学的組成物が、約５．４ｍＭの塩化カルシウムまたは約８ｍＭの塩化カルシウムを含む、実施形態Ｅ８０に記載の方法。
Ｅ８２．薬学的組成物が、約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ７９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８３．薬学的組成物が、約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物または約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物を含む、実施形態Ｅ８２に記載の方法。
Ｅ８４．薬学的組成物が、約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ８３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８５．薬学的組成物が、約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０、または約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む、実施形態Ｅ８４に記載の方法。
Ｅ８６．薬学的組成物が、約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ８３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８７．薬学的組成物が、約０．１３％ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０または約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む、実施形態Ｅ８６に記載の方法。
Ｅ８８．ｒＦＶＩＩＩＦｃポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２０〜２５７８と少なくとも９０％または９５％同一であるアミノ酸配列を含む第１のサブユニットと、配列番号４のアミノ酸２１〜２４７と少なくとも９０％〜９５％同一であるアミノ酸配列を含む第２のサブユニットと、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ８７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８９．ｒＦＶＩＩＩＦｃポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２０〜２５７８を含む第１のサブユニットと、配列番号４のアミノ酸２１〜２４７を含む第２のサブユニットと、を含む、実施形態Ｅ８８に記載の方法。
Ｅ９０．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの濃度で存在する、実施形態Ｅ５３〜Ｅ８９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９１．薬学的組成物が、８３ＩＵ／ｍｌ、１６７ＩＵ／ｍｌ、２５０ＩＵ／ｍｌ、３３３ＩＵ／ｍｌ、５００ＩＵ／ｍｌ、６６７ＩＵ／ｍｌ、１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む、実施形態Ｅ９０に記載の方法。
Ｅ９２．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの濃度で存在する、実施形態Ｅ５３〜Ｅ８９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９３．薬学的組成物が、１５０ＩＵ／ｍｌ、２８７．５ＩＵ／ｍｌ、４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、５７５ＩＵ／ｍｌ、８６２．５ＩＵ／ｍｌ、１１５０ＩＵ／ｍｌ、１７２５ＩＵ／ｍｌ、２３００ＩＵ／ｍｌ、２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む、実施形態Ｅ９２に記載の方法。
Ｅ９４．薬学的組成物が、
（ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９５．薬学的組成物が、約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ９４に記載の方法。
Ｅ９６．薬学的組成物が、約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ９５に記載の方法。
Ｅ９７．薬学的組成物が、
（ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ９６に記載の方法。
（ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ９８．薬学的組成物が、
（ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９９．薬学的組成物が、約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ９８に記載の方法。
Ｅ１００．薬学的組成物が、
（ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約３０８ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約８ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．０２０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ９９に記載の方法。
（ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約３０８ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約８ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．０２０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ９９に記載の方法。
Ｅ１０１．薬学的組成物が、
（ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０２．薬学的組成物が、約１０ｍｇ／ｍｌ〜１３ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ１０１に記載の方法。
Ｅ１０３．薬学的組成物が、
（ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ１０２に記載の方法。
（ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ１０２に記載の方法。
Ｅ１０４．薬学的組成物が、
（ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ５３〜Ｅ５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０５．薬学的組成物が、約１６ｍｇ／ｍｌ〜約１９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ１０４に記載の方法。
Ｅ１０６．薬学的組成物が、
（ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ１０５に記載の方法。
（ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、実施形態Ｅ１０５に記載の方法。
Ｅ１０７．長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、薬学的キットであって、
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、
（ｉ）長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、
（ｉｉｉ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、
（ｉｖ）Ｌ−ヒスチジンと、
（ｖ）塩化カルシウムと、
（ｖｉ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、
（ｂ）第１の容器の当該凍結乾燥粉末と組み合わされるべき注射用の滅菌水を含む第２の容器と、を備える、薬学的キット中に詰められる、実施形態Ｅ１〜Ｅ５２のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、
（ｉ）長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、
（ｉｉｉ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、
（ｉｖ）Ｌ−ヒスチジンと、
（ｖ）塩化カルシウムと、
（ｖｉ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、
（ｂ）第１の容器の当該凍結乾燥粉末と組み合わされるべき注射用の滅菌水を含む第２の容器と、を備える、薬学的キット中に詰められる、実施形態Ｅ１〜Ｅ５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０８．薬学的キットが、マンニトール、グリシン、アラニン、またはヒドロキシエチルデンプンを含まない、実施形態Ｅ１０７に記載の方法。
Ｅ１０９．薬学的キットが、唯一の充填剤としてＮａＣｌを含む、実施形態Ｅ１０７またはＥ１０８に記載の方法。
Ｅ１１０．薬学的キットが、
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、
（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、
（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、
（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、
（ｖ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、
（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、
（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、または約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を含む、実施形態Ｅ１０７〜Ｅ１０９のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、
（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、
（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、
（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、
（ｖ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、
（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、
（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、または約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を含む、実施形態Ｅ１０７〜Ｅ１０９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１１．薬学的組成物が、
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、
（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、
（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、
（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、
（ｖ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、
（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、
（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウムと、
（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を含む、実施形態Ｅ１０７〜Ｅ１０９のいずれか１つに記載の方法。
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、当該粉末が、
（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、
（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、
（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、
（ｖ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、第１の容器と、
（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、第１の容器の凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、
（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウムと、
（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、注射用滅菌水を含む第２の容器と、を含む、実施形態Ｅ１０７〜Ｅ１０９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１２．第１の容器が、ゴム栓を備えるガラスバイアルである、実施形態Ｅ１０７〜Ｅ１１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１３．第２の容器が注射器本体であり、注射器本体がプランジャと関連付けられる、実施形態Ｅ１０７〜Ｅ１１２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１４．薬学的キットが、ガラスバイアルを注射器本体に接続するためのアダプターをさらに備える、実施形態Ｅ１１３に記載の方法。
Ｅ１１５．薬学的キットが、静脈内注射に適している注射器に接続される針と連結する注入チューブをさらに備える、実施形態Ｅ１１３または実施形態Ｅ１１４に記載の方法。
Ｅ１１６．薬学的組成物が、凍結乾燥前の組成物である、実施形態Ｅ７０〜Ｅ７５、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｅ９８〜Ｅ１００、及びＥ１０４〜Ｅ１０６のいずれか１つに記載の方法。
＊＊＊
具体的な実施形態の上述の説明は、他の者が当業者の技能の範囲内で知識を適用することによって、過度の実験を用いずに、本発明の一般的概念から逸脱することなく、かかる具体的な実施形態の種々の適用のために、容易に修正及び／または適合させることができる本発明の一般的性質を十分に明らかにするであろう。したがって、かかる適合及び修正は、本明細書に提示される教示及び手引きに基づいて、開示される実施形態の均等物の意味及び範囲内にあることが意図される。本明細書における表現法または用語法は、本明細書の用語法または表現法が教示及び手引きを考慮して当業者によって解釈されるものであるように、限定目的ではなく説明目的のためのものであることを理解されたい。
本発明の他の実施形態は、本明細書に開示される本発明の明細及び実施を考慮することから、当業者に明らかとなろう。明細及び実施例は、単なる例示に過ぎないと見なされることが意図され、本発明の真の範囲及び趣旨は以下の特許請求の範囲によって示される。
本明細書で引用される全ての特許及び刊行物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
Claims (116)
- 薬学的組成物であって、
（ａ）ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、
（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、
（ｄ）Ｌ−ヒスチジンと、
（ｅ）塩化カルシウムと、
（ｆ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、前記薬学的組成物。 - マンニトール、グリシン、アラニン、またはヒドロキシエチルデンプンが含まれない、請求項１に記載の薬学的組成物。
- ＮａＣｌが唯一の充填剤である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。
- スクロースを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む、請求項４に記載の薬学的組成物。
- 約１．３％（ｗ／ｖ）のスクロース〜約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む、請求項５に記載の薬学的組成物。
- 約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロース〜約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースを含む、請求項６に記載の薬学的組成物。
- 約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、請求項４に記載の薬学的組成物。
- 約１３ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、請求項８に記載の薬学的組成物。
- 約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースまたは約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、請求項９に記載の薬学的組成物。
- 約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
- 約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
- 約２０５ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１３に記載の薬学的組成物。
- 約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１３ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項１５に記載の薬学的組成物。
- 約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項１６に記載の薬学的組成物。
- 約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１８に記載の薬学的組成物。
- 約３０８ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１９に記載の薬学的組成物。
- 約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約１６ｍｇ／ｍｌ〜約１９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項２１に記載の薬学的組成物。
- 約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項２２に記載の薬学的組成物。
- 約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンを含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンまたは約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンを含む、請求項２４に記載の薬学的組成物。
- 約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンを含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンまたは約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンを含む、請求項２６に記載の薬学的組成物。
- 約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムを含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約５．４ｍＭの塩化カルシウムまたは約８ｍＭの塩化カルシウムを含む、請求項２８に記載の薬学的組成物。
- 約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物または約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物を含む、請求項３０に記載の薬学的組成物。
- 約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０または約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む、請求項３２に記載の薬学的組成物。
- 約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 約０．１３％ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０または約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０を含む、請求項３４に記載の薬学的組成物。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２０〜２５７８と少なくとも９０％または９５％同一であるアミノ酸配列を含む第１のサブユニットと、配列番号４のアミノ酸２１〜２４７と少なくとも９０％〜９５％同一であるアミノ酸配列を含む第２のサブユニットと、を含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸２０〜１６８４または配列番号６のアミノ酸２０〜２５７８を含む第１のサブユニットと、配列番号４のアミノ酸２１〜２４７を含む第２のサブユニットと、を含む、請求項３６に記載の薬学的組成物。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- ８３ＩＵ／ｍｌ、１６７ＩＵ／ｍｌ、２５０ＩＵ／ｍｌ、３３３ＩＵ／ｍｌ、５００ＩＵ／ｍｌ、６６７ＩＵ／ｍｌ、１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む、請求項３８に記載の薬学的組成物。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
- １５０ＩＵ／ｍｌ、２８７．５ＩＵ／ｍｌ、４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、５７５ＩＵ／ｍｌ、８６２．５ＩＵ／ｍｌ、１１５０ＩＵ／ｍｌ、１７２５ＩＵ／ｍｌ、２３００ＩＵ／ｍｌ、２８７５ＩＵ／ｍｌ、または３４５０ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む、請求項４０に記載の薬学的組成物。
- （ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。 - 約１７５ｍＭ〜約２２５ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項４２に記載の薬学的組成物。
- 約２００ｍＭ〜約２１０ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項４３に記載の薬学的組成物。
- （ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、１３３３ＩＵ／ｍｌ、１６６７ＩＵ／ｍｌ、または２０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項４４に記載の薬学的組成物。 - （ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１％（ｗ／ｖ）〜約２．５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約２５０ｍＭ〜約３５０ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約５ｍＭ〜約１０ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．００８％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。 - 約２７５ｍＭ〜約３２５ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項４６に記載の薬学的組成物。
- （ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または約３４５０ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約２．０％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｃ）約３０８ｍＭのＮａＣｌと、
（ｄ）約９．８ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約８ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｆ）約０．０２０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項４７に記載の薬学的組成物。 - （ａ）約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２５００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約８．８ｍｇ／ｍｌ〜約１４．６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。 - 約１０ｍｇ／ｍｌ〜１３ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項４９に記載の薬学的組成物。
- （ａ）約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項５０に記載の薬学的組成物。 - （ａ）約１００ＩＵ／ｍｌ〜約４０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１４．６ｍｇ／ｍｌ〜約２０．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約０．７５ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ〜約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。 - 約１６ｍｇ／ｍｌ〜約１９ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌを含む、請求項５２に記載の薬学的組成物。
- （ａ）約１５０ＩＵ／ｍｌ、約２８７．５ＩＵ／ｍｌ、約４３１．２５ＩＵ／ｍｌ、約５７５ＩＵ／ｍｌ、約８６２．５ＩＵ／ｍｌ、約１１５０ＩＵ／ｍｌ、約１７２５ＩＵ／ｍｌ、約２３００ＩＵ／ｍｌ、約２８７５ＩＵ／ｍｌ、または約３４５０ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｂ）約２０．０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｃ）約１８．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｄ）約１．５５ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｅ）約１．１８ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物と、
（ｆ）約０．２０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、請求項５３に記載の薬学的組成物。 - 薬学的キットであって、
（ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、前記粉末が、
（ｉ）前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、及びこれらの混合物からなる群から選択される１つ以上の安定化剤と、
（ｉｉｉ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）と、
（ｉｖ）Ｌ−ヒスチジンと、
（ｖ）塩化カルシウムと、
（ｖｉ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、前記第１の容器と、
（ｂ）前記第１の容器の前記凍結乾燥粉末と組み合わされるべき注射用の滅菌水を含む第２の容器と、を備える、前記薬学的キット。 - マンニトール、グリシン、アラニン、またはヒドロキシエチルデンプンが含まれない、請求項５５に記載の薬学的キット。
- ＮａＣｌが唯一の充填剤である、請求項５５または５６に記載の薬学的キット。
- （ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、前記粉末が、
（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、
（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、
（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、
（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、前記第１の容器と、
（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、前記第１の容器の前記凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、
（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約１．３３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
（ｉｉｉ）約２０５ｍＭのＮａＣｌと、
（ｉｖ）約６．６４ｍＭのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約５．４ｍＭの塩化カルシウムと、
（ｖｉ）約０．０１３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、前記注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の薬学的キット。 - （ａ）凍結乾燥粉末を含む第１の容器であって、前記粉末が、
（ｉ）約２５０ＩＵ、約５００ＩＵ、約７５０ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、または３０００ＩＵ、約４０００ＩＵ、約５０００ＩＵ、または約６０００ＩＵの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約４０ｍｇのスクロースと、
（ｉｉｉ）約３６ｍｇの塩化ナトリウムと、
（ｉｖ）約３．１ｍｇのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約２．４０ｍｇの塩化カルシウム二水和物と、
（ｖｉ）約０．４０ｍｇのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、前記第１の容器と、
（ｂ）注射用滅菌水を含む第２の容器であって、前記第１の容器の前記凍結乾燥粉末と組み合わされるとき、
（ｉ）それぞれ、約８３ＩＵ／ｍｌ、約１６７ＩＵ／ｍｌ、約２５０ＩＵ／ｍｌ、約３３３ＩＵ／ｍｌ、約５００ＩＵ／ｍｌ、約６６７ＩＵ／ｍｌ、約１０００ＩＵ／ｍｌ、約１３３３ＩＵ／ｍｌ、約１６６７ＩＵ／ｍｌ、または約２０００ＩＵ／ｍｌの前記ＦＶＩＩＩポリペプチドと、
（ｉｉ）約１３．３ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｉｉｉ）約１２．０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌと、
（ｉｖ）約１．０３ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジンと、
（ｖ）約０．８０ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウムと、
（ｖｉ）約０．１３ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０と、を含む、溶液を生成するのに十分な体積で、前記注射用滅菌水を含む第２の容器と、を備える、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の薬学的キット。 - 前記第１の容器が、ゴム栓を備えるガラスバイアルである、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載の薬学的キット。
- 前記第２の容器が注射器本体であり、前記注射器本体がプランジャと関連付けられる、請求項５５〜６０のいずれか一項に記載の薬学的キット。
- 前記注射器本体に前記ガラスバイアルを接続するためのアダプターをさらに備える、請求項６１に記載の薬学的キット。
- 静脈内注射に適している前記注射器に接続される針と連結する注入チューブをさらに備える、請求項６１または６２に記載の薬学的キット。
- 血友病を有する対象における年換算出血率を低下させる方法であって、前記対象に、約３日間以上の投与間隔で、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
- 前記投与が予防的投与であり、前記対象に合わせて個別化され、約５．０未満、約４．９未満、約４．８未満、約４．７未満、約４．６未満、または約４．５未満の年換算出血率をもたらす、請求項６４に記載の方法。
- 前記年換算出血率の中央値が約１．６である、請求項６５に記載の方法。
- 前記投与が予防的で、毎週、約９．０未満、約８．９未満、約８．８未満、約８．７未満、約８．６未満、約８．５未満、または約８．４未満の年換算出血率をもたらす、請求項６４に記載の方法。
- 前記年換算出血率の中央値が約３．６である、請求項６７に記載の方法。
- 前記投与がオンデマンドまたは発症時の投与であり、約５５未満、約５４未満、約５３未満、約５２未満、約５１未満、約５０未満、約４９未満、約４８未満、または約４７未満の年換算出血率をもたらす、請求項６４に記載の方法。
- 前記年換算出血率の中央値が約３３．６である、請求項６９に記載の方法。
- 前記薬学的組成物が、約２０ＩＵ／ｋｇ〜約９０ＩＵ／ｋｇである、有効量の前記ＦＶＩＩＩポリペプチドを含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記有効量が、２０〜３０ＩＵ／ｋｇ、３０〜４０ＩＵ／ｋｇ、４０〜５０ＩＵ／ｋｇ、５０〜６０ＩＵ／ｋｇ、６０〜７０ＩＵ／ｋｇ、７０〜８０ＩＵ／ｋｇ、または８０〜９０ＩＵ／ｋｇである、請求項７１に記載の方法。
- 前記有効量が、２０ＩＵ／ｋｇ、２５ＩＵ／ｋｇ、３０ＩＵ／ｋｇ、３５ＩＵ／ｋｇ、４０ＩＵ／ｋｇ、４５ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、５５ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、６５ＩＵ／ｋｇ、７０ＩＵ／ｋｇ、７５ＩＵ／ｋｇ、８０ＩＵ／ｋｇ、８５ＩＵ／ｋｇ、または９０ＩＵ／ｋｇである、請求項７２に記載の方法。
- 前記投与が予防的投与であり、週に２回もしくは３日毎に約２５ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇ、または４日もしくは５日毎に約５０ＩＵ／ｋｇ〜約６５ＩＵ／ｋｇの有効量で個別化される、請求項７１〜７３のいずれかに記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドの第１の投与量が約２５ＩＵ／ｋｇであり、前記ＦＶＩＩＩポリペプチドの第２の投与量が約５０ＩＵ／ｋｇである、請求項７４に記載の方法。
- 前記投与が予防的投与であり、毎週６５ＩＵ／ｋｇの有効量で毎週行われる、請求項７１〜７３のいずれかに記載の方法。
- 前記投与が、１２〜２４時間毎に１０ＩＵ／ｋｇ〜７５ＩＵ／ｋｇの有効量でのオンデマンドまたは発症時の投与である、請求項７１〜７３のいずれかに記載の方法。
- 前記薬学的組成物が、全体重にわたって標準的である固定投与量である有効量を含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記固定投与量が、１投与量当たり約２，０００ＩＵ、約２，５００ＩＵ、約３，０００ＩＵ、約３，５００ＩＵ、約４，０００ＩＵ、約５，０００ＩＵ、または約６，０００ＩＵである、請求項７８に記載の方法。
- 前記薬学的組成物が、層別化した投与量である有効量を含む、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドのトラフレベルが、前記投与後、通常の１％超、２％超、または３％超である、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、約７時間〜約４８時間、約６時間〜約４９時間、約５時間〜約５０時間のＴ１／２ベータ（活性）を有する、請求項６４〜８１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、少なくとも約１５時間、少なくとも約１６時間、少なくとも約１７時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約１９時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２１時間、少なくとも約２２時間、少なくとも約２３時間、少なくとも約２４時間、または少なくとも約２５時間のＴ１／２ベータ（活性）平均を有する、請求項８２に記載の方法。
- 前記Ｔ１／２ベータ（活性）平均が約１９時間である、請求項８３に記載の方法。
- 前記Ｔ１／２ベータ（活性）平均が、配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７、配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１からなるポリペプチド、またはＡＤＶＡＴＥ（登録商標）よりも少なくとも約１．５倍高い、請求項８２または８３に記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドの前記血漿トラフレベルが、前記投与後、前記対象におけるベースラインを約１％〜約５％、約１％〜約６％、約１％〜約７％、約１％〜約８％、約１％〜約９％、約１％〜約１０％、約１％〜約１１％、約１％〜約１２％、約１％〜約１３％、約１％〜約１４％、約１％〜約１５％上回るように維持される、請求項６４〜８５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、ＦＶＩＩＩポリペプチド及び異種性部分を含む長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドである、請求項１〜３５または３８〜５４のいずれか一項に記載の薬学的組成物、請求項５５〜６３のいずれか一項に記載の薬学的キット、または請求項６４〜８６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記異種性部分が、ＦｃＲｎ結合パートナーである、請求項８７に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦｃＲｎ結合パートナーが、Ｆｃ領域を含む、請求項８８に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、第２のＦｃＲｎ結合パートナーをさらに含む、請求項８８または８９に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、第２のＦｃ領域を含む、請求項９０に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦｃＲｎ結合パートナー及び前記第２のＦｃＲｎ結合パートナーが結合している、請求項９０または９１に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記結合が、共有結合である、請求項９２に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記共有結合が、ジスルフィド結合である、請求項９３に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、ペプチド結合によってはアミノ酸配列に結合されない、請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記長時間作用型ＦＶＩＩＩポリペプチドが、ＦＶＩＩＩ単量体−二量体ハイブリッドである、請求項８７〜９５のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記長時間作用型ポリペプチドにおける前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、ヒトＦＶＩＩＩである、請求項８７〜９６のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記長時間作用型ポリペプチドにおける前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、完全長のＦＶＩＩＩまたはＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩである、請求項８７〜９７のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、一本鎖である、請求項８７〜９７のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドがプロセシングされていない、請求項８７〜９７のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、前記ＦＶＩＩＩポリペプチドの重鎖を含む第１の鎖及び前記ＦＶＩＩＩポリペプチドの軽鎖を含む第２の鎖の、２本の鎖内にある、請求項８７〜９７のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- キメラポリペプチドにおける前記ＦｃＲｎ結合パートナーが、ヒトＦｃである、請求項８８〜１０１のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、シグナル配列を含まない、表１１Ａまたは１１Ｂに示されるＦＶＩＩＩアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸２０〜１４５７または配列番号６のアミノ酸２０〜２３５１）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、請求項８７〜１０２のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記ＦｃＲｎ結合パートナーが、シグナル配列を含まない、表１１Ｂに示されるＦｃアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸２１〜２４７）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、請求項８８〜１０３のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記キメラポリペプチドにおける前記第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、ヒトＦｃである、請求項９０〜１０４のいずれか一項に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記第２のＦｃＲｎ結合パートナーが、シグナル配列を含まない、表１１Ｂに示されるＦｃアミノ酸配列（配列番号４のアミノ酸２１〜２４７）と少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、請求項１０５に記載の薬学的組成物、薬学的キット、または方法。
- 前記薬学的組成物が、出血症状の周術期管理のための薬学的組成物である、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の薬学的組成物、請求項５５〜６３のいずれか一項に記載の薬学的キット、または請求項６４〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、出血または出血症状の管理または予防を必要とする、請求項６４〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、軽度の出血、関節血症、浅層筋肉の出血、軟部組織出血、中等度の出血、切開による筋肉内もしくは軟部組織出血、粘膜出血、血尿、大出血、咽頭の出血、咽頭後部の出血、後腹膜腔（ｒｅｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｉｕｍ）の出血、中枢神経系出血、打撲、切り傷、引っ掻き傷、関節出血、鼻血、口の出血、歯茎からの出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、軽度の自然発症型出血、大外傷後の出血、中等度の皮膚損傷、または関節、筋肉、内臓器官、もしくは脳への自然発症型出血における出血の管理または予防を必要とする、請求項１０８に記載の方法。
- 前記対象が、外科手術または抜歯と関連する出血の管理を必要とする、請求項１０９に記載の方法。
- 前記対象が、大手術を、行うであろう、行っている、または行ったことがある、請求項１１０に記載の方法。
- 前記大手術が、整形外科手術、広範囲の口腔外科手術、泌尿器系手術、またはヘルニア手術である、請求項１１１に記載の方法。
- 前記整形外科手術が、膝、臀部、または他の大関節の置換である、請求項１１２に記載の方法。
- 前記対象が、長期的治療を必要とする、請求項６４〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＦＶＩＩＩポリペプチドが、静脈内または皮下に投与される、請求項６４〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記薬学的組成物が、凍結乾燥前の組成物である、請求項１８〜２３、４０、４１、４６〜４８、及び５２〜５４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
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