JP2016510985A - 新規ラクトバチルス株及びその使用 - Google Patents
新規ラクトバチルス株及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016510985A JP2016510985A JP2015562132A JP2015562132A JP2016510985A JP 2016510985 A JP2016510985 A JP 2016510985A JP 2015562132 A JP2015562132 A JP 2015562132A JP 2015562132 A JP2015562132 A JP 2015562132A JP 2016510985 A JP2016510985 A JP 2016510985A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lactic acid
- food
- lactobacillus
- acid bacterium
- acid bacteria
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 81
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 66
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 58
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 35
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 34
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 248
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 134
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 124
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 124
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 73
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 55
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 33
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 32
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 claims description 30
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 claims description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 20
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 19
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 11
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 8
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 8
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 claims description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 6
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 5
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 4
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 claims description 2
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 claims description 2
- 241000186839 Lactobacillus fructivorans Species 0.000 claims description 2
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 2
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 claims description 2
- YTAHJIFKAKIKAV-XNMGPUDCSA-N [(1R)-3-morpholin-4-yl-1-phenylpropyl] N-[(3S)-2-oxo-5-phenyl-1,3-dihydro-1,4-benzodiazepin-3-yl]carbamate Chemical compound O=C1[C@H](N=C(C2=C(N1)C=CC=C2)C1=CC=CC=C1)NC(O[C@H](CCN1CCOCC1)C1=CC=CC=C1)=O YTAHJIFKAKIKAV-XNMGPUDCSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 71
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 64
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 11
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 11
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 11
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 10
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 9
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 8
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 8
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 8
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 7
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 241001507677 Penicillium commune Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 4
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 3
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 3
- -1 diacetyl Chemical compound 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 238000009920 food preservation Methods 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- OSNSWKAZFASRNG-WNFIKIDCSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol;hydrate Chemical compound O.OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O OSNSWKAZFASRNG-WNFIKIDCSA-N 0.000 description 2
- AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 3-Hydroxypropionaldehyde Chemical compound OCCC=O AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000206600 Carnobacterium maltaromaticum Species 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000831743 Lactobacillus parafarraginis Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229940077731 carbohydrate nutrients Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 2
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- JYVXNLLUYHCIIH-UHFFFAOYSA-N (+/-)-mevalonolactone Natural products CC1(O)CCOC(=O)C1 JYVXNLLUYHCIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOXXWSYKYCBWHO-UHFFFAOYSA-N 3-phenyllactic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC1=CC=CC=C1 VOXXWSYKYCBWHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 1
- 241000132177 Aspergillus glaucus Species 0.000 description 1
- 241000228230 Aspergillus parasiticus Species 0.000 description 1
- 101710142635 Bacteriocin sakacin-A Proteins 0.000 description 1
- 241001465180 Botrytis Species 0.000 description 1
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 description 1
- 241001149956 Cladosporium herbarum Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000168141 Geotrichum candidum Species 0.000 description 1
- 235000017388 Geotrichum candidum Nutrition 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000202368 Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis Species 0.000 description 1
- 241000186685 Lactobacillus hilgardii Species 0.000 description 1
- 241000186612 Lactobacillus sakei Species 0.000 description 1
- 244000025090 Lactobacillus sanfrancisco Species 0.000 description 1
- 235000013864 Lactobacillus sanfrancisco Nutrition 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- RHYBFKMFHLPQPH-UHFFFAOYSA-N N-methylhydantoin Chemical compound CN1CC(=O)NC1=O RHYBFKMFHLPQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXSBGUZTAOTBBS-UHFFFAOYSA-N O.O.O.O.O.O.O.[Mg] Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg] BXSBGUZTAOTBBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 241000228153 Penicillium citrinum Species 0.000 description 1
- 241001507673 Penicillium digitatum Species 0.000 description 1
- 241001123663 Penicillium expansum Species 0.000 description 1
- 240000000064 Penicillium roqueforti Species 0.000 description 1
- 235000002233 Penicillium roqueforti Nutrition 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- JYVXNLLUYHCIIH-ZCFIWIBFSA-N R-mevalonolactone, (-)- Chemical compound C[C@@]1(O)CCOC(=O)C1 JYVXNLLUYHCIIH-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000221662 Sclerotinia Species 0.000 description 1
- 241000122799 Scopulariopsis Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000787 affinity precipitation Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001046 anti-mould Effects 0.000 description 1
- 239000002546 antimould Substances 0.000 description 1
- BWKOZPVPARTQIV-UHFFFAOYSA-N azanium;hydron;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [NH4+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O BWKOZPVPARTQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 238000009932 biopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000012716 cod liver oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003026 cod liver oil Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 239000008150 cryoprotective solution Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229960002737 fructose Drugs 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000020603 homogenised milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 description 1
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020121 low-fat milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- OQTQHQORDRKHFW-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);sulfate;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O OQTQHQORDRKHFW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940057061 mevalonolactone Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000004108 pentose phosphate pathway Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003016 pheromone Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N piperazine-2,5-dione Chemical compound O=C1CNC(=O)CN1 BXRNXXXXHLBUKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000018612 quorum sensing Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004763 spore germination Effects 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004152 substrate-level phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/121—Brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/10—General cosmetic use
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/24—Lactobacillus brevis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Birds (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
本発明は、新規ラクトバチルス株、並びに、特に食品、動物飼料、医薬組成物及び／又は化粧品組成物を保存するためのその使用に関する。【選択図】なし
Description
本発明は、新規ラクトバチルス株、並びに、特に食品、動物飼料、医薬組成物及び／又は化粧品組成物を保存するためのその使用に関する。
食品及び動物飼料は、それらの栄養組成のために、微生物にとって良好な基質である。同様の考察が、医薬組成物及び化粧品組成物にしばしば含有されるガレヌス物質又は担体及び補助剤のために、医薬組成物及び化粧品組成物に当てはまる。これらの微生物の多く、特に真菌は、食品及び動物飼料の腐敗のみならず、医薬組成物又は化粧品組成物の腐敗のもっとも頻繁な理由の1つである。特に微生物によって形成される毒性かつ発癌性の真菌毒は、特に重大な意味を持ち、かかる真菌毒は、ヒトの健康にとって危険である。この影響に加えて、食品の腐敗は、毎年莫大な経済的影響を有する。微生物による腐敗によって、毎年およそ5 %〜10 %の食品が破壊されていると考えられている。
例えば、食品及び動物飼料の腐敗を避けるために、それら食品及び動物飼料は、加工、又は化学的若しくは生物学的保存剤の添加によって、より耐久性のあるものとされている。多くの消費者が化学的保存剤を避けようと努めているため、生物学的保存剤に対する要求が特に増加している。
これらの生物学的保存剤は、例えば、乳酸菌に属する。これらの細菌は通常人間に対して無害であり、食品の保存において歴史的に何世紀も使用されてきた。それらの安全性及び無害さは、アメリカ食品医薬品局（Food and Drug Administration：FDA）からそれらのいわゆるGRASステータス（Generally Recognized As Safe）により表される。さらに、多くの食品において、乳酸菌は既に自然に生じている。
バイオプリザベーションの機構は、競合的増殖又は拮抗性かつ抗菌性の代謝産物の生合成のいずれかによってもたらされる可能性がある。主に、乳酸菌の保存効果は、乳酸等の有機酸の生成に起因する。そのため、pH値が低下し、低下したpH値によって、多くの微生物の増殖が阻害される。
乳酸に加えて、酢酸、過酸化水素、ジアセチル、ロイテリン（reuterin）並びに食品及び動物飼料の保存のために重要ないわゆるバクテリオシン等の一連のその他の代謝産物が存在する。
これらの代謝産物のなかには、細菌及び真菌の増殖を阻害する、乳酸及びロイテリン等の代謝産物もあり、細菌の増殖をもっぱら阻害する、バクテリオシン等のその他の物質もあり、また更に、真菌に対してのみ作用するその他の物質もある。乳酸菌の抗真菌活性に関する研究において、多数の阻害性物質を同定することができた：カプロン酸、プロピオン酸、酪酸、酢酸、ギ酸及び吉草酸（非特許文献1）、メチルヒダントイン及びメバロノラクトン（非特許文献2）、様々なヒドロキシ脂肪酸（非特許文献3）、3-フェニル乳酸（非特許文献4）、並びにジケトピペラジン（非特許文献2、上記を参照されたい）。しかし、抗真菌活性を有するなんらかのタンパク質を構成する（proteinogenic）成分は同定することができなかった（非特許文献5）。
代謝産物の多くが乳酸菌の細胞増殖に伴って形成される一方、代謝産物のなかには、誘導の後にのみ生成するものがあることが知られている。この機構は一般的に、自己誘導又は「クオラムセンシング」と称される。この効果は、カルノバクテリウム・ピスシコラ（Carnobacterium piscicola）（非特許文献6）、ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）（非特許文献7）、ラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）（非特許文献8）及びエンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）（非特許文献9）等のいくつかのバクテリオシンについて既に知られている。
しかしながら、バークホルデリア属（Burkholderia）及びシュードモナス属（Pseudomonas）の種の細菌は、GRASステータスを有しておらず、それゆえ食品又は動物飼料における使用には適していない。
PatraFalguniら（非特許文献10）は、食品における有効なバイオプリザバティブ（bio preservative）及び非スターター乳酸菌（non starter LAB）として使用可能な、広い抗真菌スペクトルを有するラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）株を開示している。この株の主な制限は、この株は抗真菌物質を産生するためには栄養分に富む培地を必要とするということである。例えば、抗真菌物質の産生は、脱脂乳中では微々たるものであった。それゆえ、このラクトバチルス・ブレビス株は、乳製品における食品添加物としての使用には適していない。
特許文献1は、チーズコーティング中のペニシリウム属（Penicillium）及びアスペルギルス属（Aspergillus）に対する、ラクトバチルス・プランタルム株の生菌の抗真菌効果を開示している。それゆえこの抗真菌効果は好気条件下で起こっていた。嫌気条件下での抗真菌効果は示されなかった。しかし乳製品中の食品添加物としての使用のためには、抗真菌効果が好気条件下及び嫌気条件下で存在することが重要である。
この背景を考えると、抗真菌代謝産物を形成し、真菌の増殖を阻害し、したがって現行の技術水準の制限及び不利益がない、保存剤として適している、GRAS認可微生物を提供することが望ましいであろう。
Corsetti, A.G., Antimould activity of sourdough lactic acidbacteria: identification of a mixture of organic acids produced byLactobacillus sanfrancisco CB1, Applied Microbiology and Biotechnology (50),pp. 253-256, (1998)
Niku-Paavola, M.L., New types of antimicrobial compounds produced byLactobacillus plantarum, Journal of Applied Microbiology (86), pp. 29-35,(1999)
Sjoegren,J.M., Antifungal 3-hydroxy fatty acids from Lactobacillus plantarum MiLAB 14,Applied and Environmental Microbiology (69), pp. 7554-7557, (2003)
Lavermicocca, P.V., Purification and characterization of novelantifungal compounds from the sourdough Lactobacillus plantarum strain 21B,Applied and Environmental Microbiology (66), pp. 4084-90, (2000)
Magnusson, J., Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis strainSi3 produces a broad-spectrum proteinaceous antifungal compound, Applied andEnvironmental Microbiology (67), pp. 1-5, (2001)
Kleerebezem, M.K., A two-component signal transduction cascade inCarnobacterium piscicola LV17B: two signaling peptides and onesensor-transmitter, Peptides (22), pp. 1597-1601, (2003)
Diep, D.B., The synthesis of the bacteriocin sakacin A is atemperature-sensitive process regulated by a pheromone peptide through a three-componentregulatory system, Microbiology (146), pp. 2155-2160, (2000)
Maldonado, A.J.-D., Induction of Plantaricin Production inLactobacillus plantarum NC8 after Coculture with Specific Gram-PositiveBacteria Is Mediated by an Autoinduction Mechanism, J. Bacteriol., 5 (186), pp.1556-1564 (2003)
Nilsen, T.I., An exported inducer peptide regulates bacteriocinproduction in Enterococcus faecium CTC 492, J. Bacteriol. (180), pp. 1848-1854,(1998)
"Productions of proteinaceous antifungal substances formLactobacillus brevis NDCD 02", International Journal of Dairy Technologyvol. 63, No. 1, 1 February 2010, pages 70-76
それゆえ本発明の技術的課題は、真菌の増殖を阻害し、食品、動物飼料、医薬組成物及び／又は化粧品組成物において使用するのに適した微生物を提供することである。
本発明の基礎及び好ましい実施の形態
この課題は独立請求項の特徴によって解決される。本発明の好ましい実施の形態は従属請求項によって提供される。
この課題は独立請求項の特徴によって解決される。本発明の好ましい実施の形態は従属請求項によって提供される。
この技術的課題を達成するために、本発明は、食品添加物としての使用のための乳酸菌の群に属する微生物又はその断片を教示し、この乳酸菌はヘテロ乳酸性（heterolactic）のものであり、かつこの乳酸菌は少なくとも1つの真菌生物（fungal organism）の増殖を阻害するものである。
乳酸菌は、分類学的観点から、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）及びラクトコッカス属（Lactococcus）の細区分へと分けられる。本発明の微生物はラクトバチルス種であることが好ましい。乳酸菌群のメンバーは、通常ポルフィリン及びチトクロームを欠いており、電子伝達リン酸化を行わず、したがってエネルギーを基質レベルのリン酸化によってのみ得る。即ち、乳酸菌においてATPは炭水化物の発酵を介して合成される。すべての乳酸菌は嫌気的に生育するが、多くの嫌気性菌とは異なり、ほとんどの乳酸菌は酸素に感受性ではなく、したがって酸素の存在下及び酸素の非存在下において生育することができる。したがって、本発明の細菌は、ラクトバチルス属に属する耐気性嫌気性乳酸菌であるのが好ましい。
嫌気条件下で生育する能力は、現行の技術水準において知られている株と比較して主要な利点である。それゆえ、このたび、乳製品のコーティング中のみならず、ミルク、ヨーグルト又はカッテージチーズといった製品自体の中においても、本発明の乳酸菌を食品添加物として使用することが可能となる。
本発明の乳酸菌は、その抗真菌活性を発揮するために、いかなる特別な栄養培地も必要としない。実験により、本発明の乳酸菌はまた、脱脂乳中で少なくとも1つの真菌生物の増殖を阻害することもできることが示された。それゆえ本発明の乳酸菌は、食品添加物としての使用に不利益と考えられる追加的な栄養分をなんら添加することなく、様々な種類の乳製品において使用することができる。この事実により、本発明の微生物は、従来技術、特に非特許文献10において知られている微生物と比較して優れている。
本発明の乳酸菌の群に属する微生物は、細長い桿菌から短く曲がった桿菌まで様々である桿状であるのが好ましく、不動及び／又は胞子無形成のものであるのが更に好ましい。本発明の乳酸菌は、分離しているか、又は対になっているのが好ましい。本発明の乳酸菌は、発酵代謝の主要な生成物又は唯一の生成物として、乳酸を産生するものであるのが好ましい。本発明の乳酸菌は、グルコースからペントースリン酸経路を介して、少なくとも50 %の量の、乳酸、好ましくは乳酸のDL-異性体を産生するのが好ましい。本発明の乳酸菌はまた、二酸化炭素及びエタノールを産生することもできる。本乳酸菌は15℃又は45℃の温度で可変性の増殖を示すのが好ましい。本乳酸菌は、その細胞壁においてグリセロールタイコ酸を有するのが更に好ましい。
上記の特徴に基づくと、本発明の乳酸菌はラクトバチルス属に属するとして分類することができる。古典的な分類学を使用することにより、例えば、"Bergey's Manual of Systematic Bacteriology" (Williams &Wilkins Co., 1984)における関連する記載を参照することにより、本発明の乳酸菌は、ラクトバチルス属に属すると決定することができる。代替的に、本発明の乳酸菌は、当該技術分野において知られている方法によって、例えば、本発明の乳酸菌の代謝フィンガープリント、即ち、本発明の微生物（複数の場合もあり）の糖を代謝する能力の比較可能な全体像によって、又は、例えば、Schleifer et al., System. Appl. Microb., 18 (1995), 461-467若しくはLudwig et al., System. Appl. Microb., 15 (1992), 487-501に記載されているその他の方法によって、ラクトバチルス属に属すると分類することができる。本発明の微生物は、ラクトバチルス属に属する微生物について、典型的であり、かつ当該技術分野において知られている糖源を代謝することができる。しかしながら、好ましい実施の形態では、本発明の乳酸菌は、下記のものからなる群から選択される代謝フィンガープリントを有する：
（i）乳酸菌がD-ラクトースを代謝するが、L-ソルボース及び／又はD-サッカロース及び／又はD-イヌリンを代謝しない、
（ii）乳酸菌がイヌリンを代謝する、
（iii）乳酸菌がL-ソルボースを代謝するが、D-ラクトース及び／又はD-サッカロース及び／又はイヌリンを代謝しない、並びに、
（iv）乳酸菌がL-ソルボース、D-ラクトース及びイヌリンを代謝する。
（i）乳酸菌がD-ラクトースを代謝するが、L-ソルボース及び／又はD-サッカロース及び／又はD-イヌリンを代謝しない、
（ii）乳酸菌がイヌリンを代謝する、
（iii）乳酸菌がL-ソルボースを代謝するが、D-ラクトース及び／又はD-サッカロース及び／又はイヌリンを代謝しない、並びに、
（iv）乳酸菌がL-ソルボース、D-ラクトース及びイヌリンを代謝する。
本発明の乳酸菌は、下記のものからなる群から選択される代謝フィンガープリントを有することが好ましい：
（i）乳酸菌がD-ラクトースを代謝するが、L-ソルボース、D-サッカロース及びイヌリンを代謝しない、
（ii）乳酸菌がL-ソルボース、D-ラクトース及びイヌリンを代謝するが、D-サッカロースを代謝しない、
（iii）乳酸菌がL-ソルボースを代謝するが、D-ラクトース、D-サッカロース及びイヌリンを代謝しない、並びに、
（iv）乳酸菌がL-ソルボース、D-ラクトース、D-サッカロースを代謝するが、イヌリンを代謝しない。
（i）乳酸菌がD-ラクトースを代謝するが、L-ソルボース、D-サッカロース及びイヌリンを代謝しない、
（ii）乳酸菌がL-ソルボース、D-ラクトース及びイヌリンを代謝するが、D-サッカロースを代謝しない、
（iii）乳酸菌がL-ソルボースを代謝するが、D-ラクトース、D-サッカロース及びイヌリンを代謝しない、並びに、
（iv）乳酸菌がL-ソルボース、D-ラクトース、D-サッカロースを代謝するが、イヌリンを代謝しない。
もちろん、本発明の乳酸菌は、上記の代謝フィンガープリントパターンにおいて述べた糖の代謝に限定されず、ラクトバチルス種によって通常代謝される更なる糖を代謝することができる可能性がある。
本発明の微生物のラクトバチルス属への所属（affiliation）はまた、当該技術分野において知られているその他の方法を使用することによって、例えば、決定される種の全タンパク質のSDS-PAGEゲル電気泳動の使用と、それらとラクトバチルス属の既知であってかつ既に特徴づけられた株との比較とによって、特徴付けることもできる。上記のような全タンパク質プロファイルを作製する技法と、かかるプロファイルの数値解析とは、当業者によく知られている。しかしながら、その結果はそのプロセスの各段階が十分に標準化されている限りにおいてのみ信頼できるものである。微生物のラクトバチルス属への帰属（attachment）を決定する場合に正確性の要求に直面した際、1994年9月12日〜16日にベルギーのゲント大学にて欧州連合によって開催された「ワークショップ」（細菌の分類及び同定のためのフィンガープリント技法、全細胞タンパク質のSDS-PAGE）の間に提示されたように、標準化手順は、Potらの著者等のそれら標準化手順の著者らにより通常に公衆に利用可能とされる。SDS-PAGE電気泳動ゲルを分析する技法において使用されるソフトウェアは、種の間の相関度が、このソフトウェアによって用いられるパラメータ及びアルゴリズムに依存するために非常に重要である。理論的詳細には立ち入らないが、濃度計により測定され、コンピュータにより正規化される、バンドの定量的比較は、ピアソンの相関係数を用いて為されるのが好ましい。こうして得られる類似性マトリックスは、もっとも類似するプロファイルを分類することを可能とするのみならず、樹状図（dendrograms）を構築することも可能とする、UPGMA（非加重平均結合法（unweighted pair group method usingaverage linkage））アルゴリズムの助けをかりて構築することができる（Kersters,Numerical methods in the classification and identification of bacteria byelectrophoresis, in Computer-assisted Bacterial Systematics, 337-368, M.Goodfellow, A. G. O'Donnell Ed., John Wiley and Sons Ltd, 1985を参照されたい）。
代替的に、本発明の上記微生物のラクトバチルス属への所属は、いわゆるRiboprinter（商標）においてリボソームRNAに関して特徴付けることができる。より好ましくは、本発明の新たに同定された種のラクトバチルス属への所属は、本発明の細菌の16SリボソームRNA又は16SリボソームRNAをコードする本発明の細菌のゲノムDNAのヌクレオチド配列と、現在までに知られているその他の属及び種の乳酸菌の16SリボソームRNA又は16SリボソームRNAをコードするそれらその他の属及び種の乳酸菌のゲノムDNAのヌクレオチド配列とを比較することにより実証される。本発明の新たに同定された種のラクトバチルス属への帰属を決定するためのその他の好ましい選択肢は、16S-23S rRNAスペーサー領域を標的にする種特異的PCRプライマーの使用である。その他の好ましい選択肢は、本発明に従って同定された微生物のラクトバチルス属への所属を決定することを可能とする株特異的DNAパターンが作製されることのために、RAPD-PCR（Nigatu et al. in Antonie van Leenwenhoek (79), 1-6, 2001）である。本発明の微生物のラクトバチルス属への所属を決定するのに有用な更なる技法は、制限断片長多型（RFLP）（Giraffa et al., Int. J. FoodMicrobiol. 82 (2003), 163-172）、反復エレメントのフィンガープリンティング（Geverset al., FEMS Microbiol. Lett. 205 (2001) 31-36）又は細菌細胞の脂肪酸メチルエステル（FAME）パターンの分析（Heyrman et al., FEMS Microbial.Lett. 181 (1991), 55-62）である。代替的に、ラクトバチルス（lactobacilli）は、レクチンタイピングによって（Annuk et al., J. Med. Microbiol. 50 (2001), 1069-1074）又はそれらの細胞壁タンパク質の分析によって（Gatti et al., Lett. Appl. Microbiol. 25 (1997), 345-348）決定することができる。
特に好ましい実施の形態において、本発明は、以下：
a）基質を準備することと、
b）調査対象の乳酸菌を含む調製物を準備することと、
c）前記乳酸菌を含む前記調製物を前記基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行うことと、
d）予め定めた数の真菌胞子を工程c）の生成物に添加することと、
e）工程d）において得た試験サンプルの、予め定めた期間、予め定めた温度でのインキュベーションと、
f）検出し、任意にその後に真菌増殖の評価を行うことと、
g）少なくとも1つの乳酸菌の単離と、
を含むプロセスによって調製される、単離された乳酸菌又はその断片に関する。
a）基質を準備することと、
b）調査対象の乳酸菌を含む調製物を準備することと、
c）前記乳酸菌を含む前記調製物を前記基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行うことと、
d）予め定めた数の真菌胞子を工程c）の生成物に添加することと、
e）工程d）において得た試験サンプルの、予め定めた期間、予め定めた温度でのインキュベーションと、
f）検出し、任意にその後に真菌増殖の評価を行うことと、
g）少なくとも1つの乳酸菌の単離と、
を含むプロセスによって調製される、単離された乳酸菌又はその断片に関する。
真菌増殖が検出可能ではない場合、その乳酸菌は本発明による乳酸菌である。それゆえ真菌増殖が検出可能ではない場合（no）、工程g）を行うのが好ましい。
さらに、工程c）が省略された上で対照試験サンプルと比較して真菌増殖の低下が検出される場合、その乳酸菌は同様に本発明の種のものである。ここで「低下」という表現は、少なくとも20 %、より良好には少なくとも50 %、好ましくは少なくとも90 %の真菌増殖の低下を意味する。
本発明の乳酸菌は、以下の工程：
A）基質を作製する工程と、
B）調査対象の乳酸菌を含む調製物を作製する工程と、
C）乳酸菌を含む調製物を基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行う工程と、
D）工程C）の生成物を、サンプル保持器へと採取し、そのなかで試験サンプルを形成させる工程と、
E）予め定めた数の真菌胞子を少なくとも1つの試験サンプルに添加する工程と、
F）工程E）において得た試験サンプルのインキュベーションを、予め定めた期間、予め定めた温度で行う工程と、
G）検出し、任意にその後に真菌増殖の評価を行う工程と、
に従ってアッセイすることができることを特徴とすることもまた好ましい。
A）基質を作製する工程と、
B）調査対象の乳酸菌を含む調製物を作製する工程と、
C）乳酸菌を含む調製物を基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行う工程と、
D）工程C）の生成物を、サンプル保持器へと採取し、そのなかで試験サンプルを形成させる工程と、
E）予め定めた数の真菌胞子を少なくとも1つの試験サンプルに添加する工程と、
F）工程E）において得た試験サンプルのインキュベーションを、予め定めた期間、予め定めた温度で行う工程と、
G）検出し、任意にその後に真菌増殖の評価を行う工程と、
に従ってアッセイすることができることを特徴とすることもまた好ましい。
工程F）の後の試験サンプルのカメラ画像撮影（camera shot）又は目視検査と、真菌増殖の評価とを行うことによって、真菌増殖を検出するのが好ましい。
真菌増殖が検出可能ではない場合、その乳酸菌は本発明による乳酸菌である。さらに、工程C）が省略された上で対照試験サンプルと比較して真菌増殖の低下が検出される場合、その乳酸菌は同様に本発明による種のものである。ここで「低下」という表現は、少なくとも20 %、より良好には少なくとも50 %、好ましくは少なくとも90 %の真菌増殖の低下を意味する。所定のコントラスト設定でのカメラ画像撮影と真菌被覆に関連する画素の自動計数とを行うことにより定量を行うことができ、ここで真菌被覆に関連する画素の数を、試験サンプルのカメラ画像（camera shot）の全画素数と関係づける。カメラ画像は白黒であるのが好ましいであろう。いくつかの場合において、例えば、基質が白色のヨーグルト基質であり、かつ真菌も同様に白色を呈する場合、基質に対する真菌のコントラストを増強するために、基質を濃色色素又は着色料（濃色色素又は着色料は微生物学的に不活性であるのが好ましい）で染色することが助けとなるであろう。特に、試験アッセイは、実施例1.2、最終段落において概要を述べるようにして行うことができる。カメラとしては、以下の設定を用いるFluorChem（商標）FC2 Imaging System（Alpha Innotech/CellBiosciences、Santa Clara、USA）システムが有用である：露光時間：100 ms〜150 ms、開口数（aperture）：8、コントラスト設定：黒色レベル：55000、白色レベル：60000、ガンマ：3.0、光設定：透過光「オン」、反射光「オン」、化学ディスプレイ（chemi display）「オン」、速度／解像度：通常／超（ultra）。画像はAlphaEaseFCソフトウェアを用いて解析した。
代替的又は付加的な対照試験サンプルとして、食品保存の技術分野において通常の予め定めた量（例えば、1グラムあたり0.2 mg）のソルビン酸カリウムを、工程c）において上記の工程c）の代わりに用いる、試験サンプルを使用することができる。この対照試験サンプルは次いで基準として働くことができ、即ち、本発明の乳酸菌は、この対照試験サンプルと少なくとも同じ量の真菌増殖の阻害をもたらす。
細胞は、該当する場合、細胞が添加される予定であるか、又はその上に細胞が適用される予定である、それぞれの基質との共培養において、DSMZ「ドイツ微生物細胞培養コレクション（Deutsche Sammlung von Mikroorganismenund Zellkulturen GmbH））」、ドイツ国、ブラウンシュヴァイクの生存能についての試験に耐えれば、それら細胞は生存能力がある。
乳酸菌は乳酸菌生菌（live lactic acid bacterium）であるのが好ましい。本発明による生きている微生物が食品製品に有害に作用することなく強い抗真菌能力を示すことは驚くべきことであった。
乳酸菌は、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・ヒルガルディー（Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・フルクティボランス（Lactobacillus fructivorans）又はラクトバチルス・パラファラギニス（Lactobacillus parafarraginis）であるのが特に好ましい。
本発明によると、微生物は、ラクトバチルス属、より好ましくは本明細書に記載するラクトバチルス種に属する乳酸菌である。本発明のラクトバチルスはラクトバチルス・ブレビスであるのが更により好ましい。その他の好ましいラクトバチルスは、ラクトバチルス・パラファラギニス（L. parafarraginis）である。しかしながら、ラクトバチルス種は、これらに限定されない。特に好ましい実施の形態において、本発明の微生物は、「単離された」又は「精製された」ものである。「単離された」という用語は、物質が、その本来の環境、例えば、その物質が天然起源である場合、自然環境から取り出されていることを意味する。例えば、自然系において共存している物質のいくらか又はすべてから分離されている、天然起源微生物、好ましくは、ラクトバチルス種は、単離されたものである。かかる微生物は組成物の一部であることができ、その組成物がその自然環境の一部でないという点でこれもまた単離されたものであるとみなされるべきである。
「精製された」という用語は、完全に純粋であることを要求するわけではなく、それは相対的な定義であることが意図される。ライブラリーから得られた個々の微生物は、微生物学的に均一となるまで従来法により精製されており、即ち、それら微生物は、当該技術分野において知られている方法によって寒天プレート上に画線培養された場合、シングルコロニーとして生育する。この目的のために使用される寒天プレートは、ラクトバチルス種について選択的なものであるのが好ましい。かかる選択的寒天プレートは当該技術分野において知られている。
本乳酸菌は、DSM 22721として提出された乳酸菌又はその断片、突然変異体及び／又は誘導体であって、該断片、突然変異体又は誘導体が真菌生物の増殖を阻害する能力を保持するものであるのが特に好ましい。
本発明の特に好ましい実施の形態において、本発明の乳酸菌は、DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体からなる群から選択され、ここで該突然変異体又は誘導体は真菌生物の増殖を阻害する能力を保持しているものである。「DSMZ受託番号を有するラクトバチルス・ブレビス」という用語は、ドイツ微生物細胞培養コレクション（「DSMZ」）に2009年6月26日に寄託され、かつ以下の寄託番号DSM 22721を有する、ラクトバチルス・ブレビス種に属する微生物の細胞に関する。DSMZは、ドイツ国ブラウンシュヴァイクD-38124、マシェローダー（Mascheroder）ヴェク1bに位置している。上記のDSMZ寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約（Budapesttreaty on the international recognition of the deposit of microorganisms forpurposes of patent procedure）の条項に従って行った。
食品の真菌混入は食品生産産業にとっての主要問題として一般的である。化学物質の使用等の現行の技術水準において知られている食品保存方法は、食品に対して望ましくない性質を与える可能性がある。さらに、かかる方法は消費者の間に懸念をもたらす可能性がある。したがって、代替となる保存方法の必要性が食品分野にとって重要な課題となってきた。それゆえ本発明、特にDSM 22721として提出された乳酸菌は、なんら副作用のない食品保存の代替となる効率的な方法を可能とするため、特に重要である。
本発明の乳酸菌、好ましくは寄託されたラクトバチルス・ブレビスの「突然変異体又は誘導体」は、好ましくは、寄託された各株と同じ特徴を有するものであり、即ち、突然変異体又は誘導体は、好ましくは本明細書に上記する阻害特性により、真菌生物の増殖を阻害する能力を保持するものである。例えば、該誘導体は遺伝子改変されたものであることができる。本発明の文脈において、「遺伝子改変された」という用語は、広義には、遺伝子修飾が行われ、遺伝子が組換えDNA技術によって変化するように、所望の核酸をin vitro及びin vivoで修飾するための当業者に知られている方法について用いられる。したがって、該方法は、組換え核酸のクローニング、配列決定及び形質転換を含むのが好ましい。ラクトバチルス種用の発現ベクターを含むこの目的のために適切なベクターは（are）、例えば、欧州特許第506789号、欧州特許第316677号、欧州特許第251064号、欧州特許第218230号、欧州特許第133046号又は国際公開第89/01970号に記載されている。
本発明の文脈において用いられる場合、「本発明の乳酸菌」という用語はまた、真菌生物の増殖を阻害する上記の能力を保持している、該微生物（複数の場合もあり）の、本明細書に記載する膜画分等の、誘導体又は突然変異体又は類似体又は断片も包含する。「誘導体」、「突然変異体」、「類似体」及び「断片」という用語は、本明細書のいずれかの場所に記載されている。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体は、以下の特徴により特徴付けられる。本生物は、30℃〜37℃で好気条件又は嫌気条件下で最適増殖を示す。増殖は42℃を超えると検出することができない。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体の好気的発酵は、より高い細胞密度をもたらす。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体の標準的条件（例えば、MRS培地、37℃、嫌気条件）下での培養は、pH3.5〜pH3.7の酸性化をもたらす。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体は、分離している桿菌として又は対になっているものとして又は稀には短い鎖（2 μm〜10 μm）として存在する。標準的条件下では、それらはわずかに無光沢な外観及びわずかに構造化された表面を有する白色からクリーム色のコロニーを形成する傾向がある。
驚くべきことに、本発明の乳酸菌、好ましくはDSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体の添加は、食糧、特にヨーグルトのテクスチャー又は色を変化させない。
本発明の乳酸菌、好ましくはDSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体は、以下の配列1（配列番号1）：
GCGACTTTTCGGATTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAGGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGGAGAAGGGCATCGGAAACCGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTCTGCTAACCTAAGAGATTAGGCGTTCCCTTCGGGGACGGAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTCAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTGGCGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGTCGCGAAACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCGTTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGCCCGTGAGGTAACCTTCGGGAACCAGCCGTCTAAGTGGGACAGATGATTAGGTGAAGTCGAC
を有する16S rDNAを含むのが好ましい。
GCGACTTTTCGGATTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAGGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGGAGAAGGGCATCGGAAACCGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTCTGCTAACCTAAGAGATTAGGCGTTCCCTTCGGGGACGGAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTCAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTGGCGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGTCGCGAAACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCGTTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGCATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGCCCGTGAGGTAACCTTCGGGAACCAGCCGTCTAAGTGGGACAGATGATTAGGTGAAGTCGAC
を有する16S rDNAを含むのが好ましい。
本発明の乳酸菌、好ましくはDSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体の別の利点は、この株を少なくとも6ヵ月間、およそ-20℃又はおよそ-80℃で冷凍貯蔵することが可能であることである。これらの細菌は安定なままであり、真菌生物の増殖を阻害するそれら細菌の能力を失わない。本発明の乳酸菌を凍結乾燥の後に保存することもまた可能である（図2もまた参照されたい）。
1つの利点は、特にDSM 22721として提出された本発明の乳酸菌又はそれらの断片、変異体及び／又は誘導体が、ペニシリウム、特にペニシリウム・コンミュネ（penicillium commune）又はペニシリウム・ロックフォルティ（penicilliumroqueforti）、アスペルギルス属及びアルテルナリア（alternaria）属、特にアルテルナリア・アルテルナータ（alternaria alternata）、ペニシリウム・エキスパンサム（penicilliumexpansum）、ペニシリウム・シトリナム（penicillium citrinum）、ペニシリウム・ジギタタム（penicillium digitatum）、ペニシリウム・イタリクム（penicilliumitalicum）、スコプラリオプシス・ブレビアカウリス（scopulariopsis breviacaulis）、アスペルギルス・フラブス（aspergillus flavus）、アスペルギルス・パラジチカス（aspergillusparasiticus）、ボトリチス・シネレア（botrytis cinerea）、リゾプス属（rhizopus）の一種、ムコール属（mucor）の一種、ユーロチウム・ヘルバリオラム（eurotium herbariorum）、ゲオトリクム・カンジドゥム（geotrichumcandidum）、クラドスポリウム・ヘルバルム（cladosporium herbarum）、フザリウム・サンシナム（fusarium sambucinum）、フィトフォラ・インフェスタンス（phytophorainfestans）並びにスクレロチニア・スセロチオラム（sclerotinia scerotiorum）の生育を阻害することである。
別の好ましい実施の形態では、本発明は、食品組成物、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物の生産のための、前記乳酸菌又はその断片の使用であって、前記乳酸菌、好ましくは乳酸菌生菌、又はその断片が、食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物に添加される、使用に関する。
ラクトバチルス・ブレビスは、通常、ヘテロ発酵代謝を使用し、それゆえヘテロ乳酸性であることが知られている。ヘテロ発酵代謝は、通常、ガス及び酸の生成により特徴付けられる。両方の効果は、食品、医薬品又は化粧品の生産にとって有害である。それゆえ本発明の乳酸菌、特にDSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体が、化粧品組成物若しくは医薬組成物又は食品、例えば、乳製品、好ましくはヨーグルト中で培養した場合にホモ発酵性の特徴を示すことは非常に驚くべきことであった。
本発明による医薬組成物のガレヌス調製物はこの技術において通常である方法で作ることができる。好適な固体ガレヌス調製物形態又は液体ガレヌス調製物形態は、例えば、顆粒剤、粉末剤、糖衣錠、錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、ジュース剤、懸濁剤又は乳剤であり、それらの製造には、通常の手段、例えば、担体物質、爆発性物質、結合剤、コーティング剤、膨張剤、摺動剤又は潤滑剤、呈味剤、甘味料及びメディエーターの溶液が使用される。本明細書では、補助的な物質として、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニット及び他の糖、タルカム、乳タンパク質、ゼラチン、デンプン、セルロース及び誘導体、動物油及び植物油、例えば、タラ肝油、ヒマワリ油、ピーナッツ油又はゴマ油、ポリエチレングリコール並びに溶媒、例えば、滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセリンが挙げられる。本発明による医薬組成物は、本発明による乳酸菌を、所定の用量で、医薬上適した生理的に良好に耐容性の担体と、おそらく更に適した活性の付加的又は補助的な物質と混合することによって生産することができ、所望の投与の形態に調製される。担体は、特に「マルトデキストリン、微結晶セルロース、デンプン、特にコーンスターチ、レブロース、ラクトース、デキストロース、及びそのような物質の混合物」を含む群から選択される物質である。組成物は、細胞と担体との全量に対して、0.1重量%〜95重量%の担体と5重量%〜99.9重量%の凍結乾燥した乳酸菌とを含有することができ、又はそれらからなることができる。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体は、標準的条件下（例えば、発酵培地又はMRS培地、嫌気条件下）でヘテロ発酵性である。これは、この生物が、標準的条件下で培養される場合、発酵の際にガスを生成することを意味する。
それゆえDSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体が、乳製品、好ましくはヨーグルト中で培養した場合にホモ発酵性の特徴を示すことは非常に驚くべきことであった。「標準的ヨーグルト」を、標準的発酵スターターを用いて、43℃、pH4.5〜pH4.7で、脱脂粉乳を富化した脱脂乳を用いて、生産した。その後ヨーグルトを7℃で保存する。DSMZ受託番号DSM22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体をヨーグルトに添加した場合、ガス生成（ガス泡又は凸蓋）は観察することができない。30日後、異風味をHPLC又はヘッドスペース分析によって測定した。乳製品におけるホモ発酵性の特徴の驚くべき効果は、製品の異風味に変化がないという利点を有する。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体の別の特徴は、これら生物は標準的条件下（MRS培地）と発酵条件下とのいずれにおいてもH2O2を生成しないということである。これはH2O2試験片を用いて試験した。
別の利点は、有機酸の組成が、DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体を添加したヨーグルトにおいては非常に安定であるということである。pH変化はほとんど観察されない。これは食糧における使用にとって特に重要である。
DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体は、ヨーグルト中で静的な増殖を示す。「標準的ヨーグルト」を、標準的発酵スターターを用いて、43℃で、脱脂粉乳を富化した脱脂乳を用いて、最終的pH4.5〜pH4.7で生産した。DSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビスを添加した。生産したヨーグルトを7℃で3週間保存した。この3週間の後、本発明の細菌の増加は観察されなかった。
医薬組成物又は化粧品組成物において使用する場合、もちろん、組成物は、本発明により用いられる細胞の生存能及び／又は（and/or）本発明により用いられる細胞、化合物、それらの断片若しくは上清の活性を実質的に障害する、いかなる物質、特にいかなる活性物質も含有しないことが要求される。それぞれの物質又は活性物質についての当業者であれば、例えばDSMZによって提案されているような、生存能試験を、それぞれの組成物中のそのままの濃度にてそれぞれの物質又は活性物質との共培養においてのみ行うことによって、これを容易に決定することができる。この試験が陽性であれば、本発明による細胞を成功裏に使用することができる。この試験が陰性であれば、本発明による効果が達成されないか、又は低い程度でしか達成されないため、それぞれの組成物の適用は除外される。活性に関しては例えば、本発明の微生物を特徴付ける、上記のような阻害活性について試験するアッセイに、医薬組成物又は化粧品組成物を供することが可能である。
化粧品組成物は、例えば、シャンプー、モイスチャークリーム、モイスチャーローション、グリコールクリーム、グリコールローション、クレンザー、色付メーキャップファンデーション（colored makeup foundation）、色付メーキャップパウダー（coloredmakeup powder）又は色付メーキャップコンシーラー（colored makeup concealer）である。
本発明の乳酸菌は直接播種製品として使用することができる。それゆえ、本細菌を、食品、化粧品組成物又は医薬組成物に、なんら先行する加工工程を行うことなく添加することができる。本発明の細菌は、それ自体の発酵上清中で凍結保存するのが好ましい。凍結保存は製品の生産を促進し、それゆえ時間及びコストの節減に寄与する。
更に好ましい実施の形態において、本発明は、食糧と上記乳酸菌又はその断片とを含む、食品組成物に関する。
食品組成物、動物飼料、医薬組成物又は化粧品組成物は、絶対量で、又は細胞を含有する食品、動物飼料若しくは医薬組成物100 gに対して、102〜1015の、好ましくは106若しくは108〜1012の、特に108〜1010の乳酸菌細胞又はその断片を含有するのが好ましい。これらの量は、なんらの有害効果もなく、真菌の増殖の非常に有効な阻害を可能とするために、特に有利である。
本乳酸菌は0.0001 %以上の濃度で存在するのが好ましい。これらの濃度は食品製品中の真菌増殖の効率的な阻害を提供するために特に有利である。
食品組成物は、肉製品又は乳製品、好ましくはヨーグルト、ミルク、チーズ、クリーム、及び／又はカッテージチーズ（curd cheese）であるのがまた好ましい。これらの製品は一般的にカビが生えやすい傾向があり、このため本発明の乳酸菌、好ましくはDSMZ受託番号DSM 22721を有するラクトバチルス・ブレビス又はその突然変異体若しくは誘導体の使用が特に有利である。1つの付加的な利点は、真菌増殖を阻害する効果は、乳製品（dairy）、特にヨーグルトの生産に使用される、スターターカルチャー及び／又は脱脂粉乳の種類に依存しないことである。それゆえ本発明の乳酸菌は、有利な効果を失うことなく様々な食品製品において使用することができる。
別の好ましい実施の形態では、本発明は、食糧、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を保存する方法であって、前記乳酸菌が、前記食糧、動物飼料、又は医薬組成物に添加される、食糧、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を保存する方法に関する。
本発明による乳酸菌を用いる保存について、原則として、生産からか又は貯蔵の際の混入によるかいずれかの真菌生物を含有する可能性のある、すべての食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を用いることができる。
食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物100 gあたり、102〜1015の、好ましくは106若しくは108〜1012の、特に108〜1010の乳酸菌細胞又はその断片が添加されるのが好ましい。
前記乳酸菌が0.0001 %〜0.01 %、好ましくは0.001 %の濃度で存在するのがまた好ましい。これらの濃度は、食品製品における真菌増殖の効率的な阻害を提供するために、特に有利である。0.0001 %以上、好ましくは0.001 %の濃度で乳酸菌を添加することにより、真菌増殖が持続的に阻害され、それにより食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を、真菌増殖を阻止する能力を失うことなく長期間保存することができる。
0.0001%〜0.01 %、好ましくは0.001 %の、ペレット化され、冷凍保存された本発明のラクトバチルス培養物を、好ましくはヨーグルト発酵に添加するのが特に好ましい。ペレット化され、冷凍保存されたラクトバチルス培養物の使用は、工業生産に有利である。
1mlの冷凍保存されたラクトバチルス培養物は0.5×1010 CFU（コロニー形成単位）を含有するのがまた好ましい。
別の好ましい実施の形態では、本発明は、以下：
h）基質を準備することと、
i）調査対象の乳酸菌を含む調製物を準備することと、
j）前記乳酸菌を含む前記調製物を前記基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行うことと、
k）予め定めた数の真菌胞子を工程j）の生成物に添加することと、
l）工程k）において得た試験サンプルの、予め定めた期間、予め定めた温度でのインキュベーションと、
m）検出して、任意にその後に真菌増殖の評価を行う、検出と、
を含む、上記乳酸菌を同定する方法に関する。
h）基質を準備することと、
i）調査対象の乳酸菌を含む調製物を準備することと、
j）前記乳酸菌を含む前記調製物を前記基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行うことと、
k）予め定めた数の真菌胞子を工程j）の生成物に添加することと、
l）工程k）において得た試験サンプルの、予め定めた期間、予め定めた温度でのインキュベーションと、
m）検出して、任意にその後に真菌増殖の評価を行う、検出と、
を含む、上記乳酸菌を同定する方法に関する。
本発明の別の態様は、加熱により不活化されたか又は凍結乾燥された上記乳酸菌の類似体又は断片であり、ここで該類似体又は断片は、真菌生物の増殖を阻害する能力を保持しているものである。類似体又は断片は、特に本発明の微生物又はかかる微生物の断片の培養物の上清に存在している可能性がある。その能力は本発明の微生物の特徴決定について概要を上述したようにして測定可能である。
本発明の微生物を特徴決定するための更なる選択肢として、文献、P. Raspor et al., Food Technol. Biotechnol. 48(3):336-343 (2010)に記載の生物防除（biocontrol）アッセイを用いることが可能であり、ここで、このアッセイは検査対象の微生物を使用して行い、微生物の非存在下での対照実験及び／又は微生物が所定の濃度の従来の化学的抗カビ化合物に置き換えられた対照実験と比較される。
本発明による細胞無しでの真菌生物の培養により、同じ培養条件下での真菌生物と本発明による細胞との共培養と比較して、真菌生物用培養培地上の所定の時間内の定着密度として測定される、真菌生物の増殖が少なくとも10 %、好ましくは少なくとも50 %増加する場合、真菌生物の増殖は阻害される。上記の1例としてのみ記載した特定のアッセイに更なる言及がなされる。
プライマー、酵素、更に中間コンストラクトのクローニング用の宿主細胞等を使用することができ、これらは当業者に知られている。遺伝子改変された突然変異体は、それらの細菌染色体若しくは（1又は複数の）プラスミドに含まれるか、又はそれらの細菌染色体及び／又は（1又は複数の）プラスミドに含まれるかのいずれかである、組換え核酸を担持する、本発明の微生物の細胞、好ましくは寄託されたラクトバチルス種の細胞を含むのが好ましい。該組換え核酸は本発明の微生物に対して外来性であるのが好ましい。「外来性」とは、ポリヌクレオチド又は核酸分子が、宿主細胞に関して異種である（これは異なるゲノム背景を有する細胞又は生物に由来することを意味する）か、又は宿主細胞に関して同種（homologous）であるが該核酸分子の天然起源対応物とは異なるゲノム環境に位置しているかのいずれかであることを意味する。これは核酸分子が宿主細胞に関して同種である場合、その核酸分子が該宿主細胞のゲノムにおけるその天然の位置に位置しておらず、特にその核酸分子が異なる遺伝子に囲まれていることを意味する。この場合、ポリヌクレオチドは、それ自身のプロモーターの制御下又は異種プロモーターの制御下のいずれかにある可能性がある。宿主細胞中に存在する、本発明によるベクター又は核酸分子は、宿主細胞のゲノム中に組み込まれているか、又は染色体外でなんらかの形態で維持されているかのいずれかの可能性がある。この点で、本発明の核酸分子は、相同組換えを介して突然変異遺伝子を回復させるか又は作成するために使用することができることも理解すべきである。
本発明の微生物の突然変異体、好ましくは寄託されたラクトバチルス株の突然変異体は、人為的に突然変異されたものであるのが好ましい。本発明によると、「突然変異」という用語は、例えば、自然に、又は物理的手段又はEMS若しくはENU等の化学的化合物／物質／作用物質によりもたらされる、遺伝子材料、即ち、核酸の（1又は複数の）永続的修飾を意味する。該修飾は、塩基転位又は塩基転換といった点突然変異、1又は複数の塩基の核酸／遺伝子／染色体内での欠失／挿入／付加を含み、それによって核酸／遺伝子／染色体が修飾され、かかる修飾は、とりわけ、異常な遺伝子発現／転写／翻訳又は不活性な遺伝子産物、例えば、ドミナントネガティブ効果をもたらす構成的に活性／不活性な遺伝子産物をもたらす可能性がある。突然変異は真菌生物の増殖を阻害する能力の向上を導くのが好ましい。したがって、（1又は複数の）突然変異を（1又は複数の）所望の遺伝子中に担持するか、又は（1又は複数の）所望の遺伝子中に（1又は複数の）突然変異が当業者に知られている方法によって誘導されている、寄託された微生物の突然変異細胞がまた好ましい。突然変異されたか又は遺伝子改変された細菌細胞は、いずれかの適した方法／表現型によって選択することができることもまた、従来技術において知られている。本発明の文脈において、真菌生物の増殖を阻害する能力が向上している突然変異体は、本明細書中の実施例において記載する方法に従って試験することができる。しかしながら、「突然変異体」という用語はまた、天然起源の自発性突然変異をそのゲノム、即ち、細菌染色体中に担持する、本発明の微生物の細胞、好ましくは寄託された微生物の細胞も含む。「自発性突然変異」は、自然に、即ち、人間によって直接遺伝子操作されずに、又は突然変異原への曝露によらずに生じる突然変異である。自発性突然変異体の選択は、株を培養し、所望の変異体を、例えば、変異体細菌の増殖の向上を示す能力によって選択することによって達成することができる。自発性突然変異体の選択についての方法は当該技術分野においてよく知られている（例えば、Sambrook, Russell "Molecular Cloning, A Laboratory Manual",Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (2001)、Ausubel, "CurrentProtocols in Molecular Biology", Green Publishing Associates and WileyInterscience, N.Y. (1989)を参照されたい）。例えば、かかる突然変異は、培養の最中、例えば、DNA複製を伴う通常の細胞分裂プロセスの最中又は本発明の微生物の突然変異体を継代培養及び／又は保存する最中に起こる可能性がある。
その他の態様において、本発明は、加熱により不活化されたか又は凍結乾燥された、本発明の微生物の類似体又は断片に関し、ここで該類似体は、真菌生物の増殖を阻害する能力を保持するものである。
本発明によると、「本発明の微生物の類似体」という用語はまた、ラクトバチルス属に属する微生物に特異的なプレート上でもはやシングルコロニーを形成することができない、本発明の微生物、好ましくは本明細書に開示するラクトバチルス種の死細胞又は不活化された細胞も含む。該死細胞又は不活化された細胞は、インタクトであるか又は破壊されたかのいずれかである細胞膜を有する可能性がある。本発明の微生物の細胞を死滅させるか又は不活化する方法は当該技術分野において知られている。EI-Nezami et al., J. Food Prot. 61 (1998), 466-468には、UV-照射によってラクトバチルス種を不活化する方法が記載されている。本発明の微生物の細胞は、加熱により不活化されているか又は凍結乾燥されているのが好ましい。本発明の細胞の凍結乾燥は、真菌生物の増殖を阻害する本発明の細胞の能力を保持しつつ、本発明の細胞を容易に保存し、取り扱うことができるという利点を有する。さらに、凍結乾燥された細胞は当該技術分野において知られている条件下で適切な液体又は固体培地に適用されると再び生育することができる。凍結乾燥は、当該技術分野において知られている方法によって行われる。凍結乾燥は、室温、即ち、16℃〜25℃の任意の温度で少なくとも2時間行うのが好ましい。さらに、本発明の微生物の凍結乾燥された細胞は、本明細書に記載する真菌生物を依然として阻害する程度に、4℃の温度で少なくとも4週間安定である。加熱による不活化は、本発明の微生物の細胞を170℃の温度で少なくとも2時間インキュベートすることにより達成することができる。しかし、加熱による不活化は、該細胞を121℃の温度で少なくとも20分間、飽和蒸気の存在下で2 barの気圧でオートクレーブすることにより達成するのが好ましい。別の選択肢において、本発明の微生物の細胞の加熱による不活化は、該細胞を少なくとも4週間、3週間、2週間、1週間、12時間、6時間、2時間又は1時間、-20℃で凍結させることにより達成される。本発明の微生物の類似体の細胞の少なくとも70 %、75 %又は80 %、より好ましくは85 %、90 %又は95 %、特に好ましくは少なくとも97 %、98 %、99 %、より特に好ましくは99.1 %、99.2 %、99.3 %、99.4 %、99.5 %、99.6 %、99.7 %、99.8 %又は99.9%、もっとも特に好ましくは100 %が、死滅されているか又は不活化されており、しかしながら、本発明の微生物の類似体の細胞が依然として真菌生物の増殖を阻害する能力を有しているのが好ましい。本発明の微生物の類似体又は断片が実際に死滅されているか又は不活化されているか否かは、当該技術分野において知られている方法、例えば、生存能についての試験によって、試験することができる。
「本発明の微生物の類似体」という用語は、本発明の微生物、好ましくは本明細書に開示するラクトバチルス種の、溶解物又は画分を包含する。本発明によると、「溶解物」という用語は、破壊されている本発明の微生物の細胞の水性媒体中の溶液又は懸濁液を意味する。しかしながら、この用語は、いかなるようにも限定的に解釈してはならない。細胞溶解物は、例えば、DNA、RNA、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質等のような高分子、及び／又は、アミノ酸、糖、脂質酸（lipid acids）等のような低分子、又はその画分を含む。さらに、該溶解物は、平滑又は粒状構造のものである可能性がある細胞片を含む。微生物の細胞溶解物を調製する方法は当該技術分野において知られており、例えば、フレンチプレス、ガラス若しくは鉄ビーズを用いる細胞粉砕器（cells mill）又は酵素的細胞溶解等を用いることによって調製する。さらに、細胞を溶解することは、細胞の開口／破壊のための当該技術分野において知られている様々な方法に関する。細胞を溶解する方法は重要ではなく、本発明の微生物の細胞の溶解を達成することができる任意の方法を使用することができる。適切な方法は当業者が選択することができ、例えば、細胞の開口／破壊は、酵素的、化学的又は物理的に行うことができる。酵素及び酵素カクテルについての非限定的な例は、プロテイナーゼKのようなプロテアーゼ、リパーゼ又はグリコシダーゼであり、化学物質についての非限定的な例は、イオノフォア、ドデシル硫酸ナトリウムのような洗浄剤、酸又は塩基であり、物理的手段の非限定的な例は、フレンチプレス処理のような高圧、浸透圧、高温又は低温のような温度である。さらに（Additionally）、タンパク分解酵素以外の酵素、酸、塩基等の適切な組合せを用いる方法もまた利用することができる。例えば、本発明の微生物の細胞は、凍結及び解凍、より好ましくは-70℃より低温での凍結及び30℃より高温での解凍により溶解され、特に-75℃より低温での凍結が好ましく、35℃より高温での解凍が好ましく、凍結温度が-80℃より低温であり、解凍温度が37℃より高温であるのがもっとも好ましい。該凍結／解凍を少なくとも1回、より好ましくは少なくとも2回、更により好ましくは少なくとも3回、特に好ましくは少なくとも4回、もっとも好ましくは少なくとも5回繰り返すこともまた好ましい。
したがって、当業者であれば、上記一般的説明を参照し、必要であればかかる方法を適切に改変又は変更することにより、所望の溶解物を調製することができる。記載される溶解物のために使用される水性媒体は、水、生理食塩水、又は緩衝液であるのが好ましい。細菌細胞溶解物の利点は、必要な技術的設備が少なくて済むために、コスト効率よく、容易に生産し、保存することができることである。
本発明によると、溶解物はまた、上記の溶解物からの分子の画分の調製物である。これらの画分は当業者に知られている方法、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、及びカラム若しくはバッチ方法でその他のクロマトグラフィー材料を用いるクロマトグラフィーを例えば含む、クロマトグラフィー、その他の分画方法、例えば、ろ過方法、例えば、限外ろ過、透析、遠心分離におけるサイズ排除を伴う透析及び濃縮、密度勾配若しくは工程マトリックス中での遠心分離、沈殿法、例えば、アフィニティー沈殿法、塩入法若しくは塩析法（硫酸アンモニウム沈殿法）、アルコール沈殿法又は溶解物の上記成分を分離するその他のタンパク質化学的、分子生物学的、生化学的、免疫学的、化学的若しくは物理的方法によって得ることができる。
「本発明の微生物の断片」は、本発明の微生物の細胞のあらゆる部分を包含する。該断片は膜調製物により得られた膜画分であるのが好ましい。ラクトバチルス属に属する微生物の膜調製物は、当該技術分野において知られている方法によって、例えば、Rollan et al., Int. J. Food Microbiol. 70 (2001), 303-301、Matsuguchi et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10 (2003), 259-266又はStentz et al., Appl. Environ. Microbiol. 66 (2000), 4272-4278又はVarmanen et al., J. Bacteriology 182 (2000), 146-154に記載の方法を用いることによって得ることができる。代替的に、全細胞調製物もまた考えられる。本明細書に記載の本発明の微生物の誘導体又は断片は、本明細書に詳細に記載する真菌生物の増殖を阻害する能力を保持するものであるのが好ましい。
本発明は、第一に、真菌増殖の阻害によって、ヨーグルトの有効期間を延ばすことができる、ラクトバチルス株の発見に基づく。かかるラクトバチルス株を使用することにより、今までに用いられていた保存剤であるソルビン酸カリウムに取って代わることができる。実験において、ペニシリウム属、アスペルギルス属及びアルテルナリア属の種の真菌に関するラクトバチルス細胞の阻害活性を試験した。まず、抗真菌活性に関して、生きているラクトバチルス細胞を使用した。試験した真菌株の増殖を阻害することができる、ラクトバチルス株（ラクトバチルス・ブレビス）を同定した。この細菌を「ラクトバチルス・アンチモールド（Lactobacillus antimold）」と命名し、DSMZ（ドイツ微生物細胞培養コレクション）に名称DSM 22721として2009年6月26日に提出した。
別の実験において、このラクトバチルス株を食品中で試験した。この目的のために、このラクトバチルス株を、ヨーグルトスターターカルチャーとともに、ヨーグルト生産用の出発培地に添加した。ヨーグルトの発酵の後、真菌胞子を添加し、ヨーグルトを7℃で保存した。保存剤としてソルビン酸カリウムを添加した対照バッチ及び添加しなかった対照バッチと比較して、本発明のラクトバチルスを有するバッチにおいて、耐用期間の大幅な延長が達成されたこと、即ち、真菌の増殖をソルビン酸カリウムによるよりも、明らかにより長期間阻害することができたことが判明した。
食品、動物飼料又は医薬組成物若しくは化粧品組成物の保存のためにかかるラクトバチルス株を使用することは、通常の保存方法と比べて決定的な利点を有する。かかるラクトバチルス株は、食品の風味又はテクスチャーを変化させない生物学的保存剤である。
本発明は更に、食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物に本発明による微生物細胞が添加される、保存食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を生産するための本発明による微生物細胞の使用、及び、食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物に本発明による微生物細胞が添加される、食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を保存する方法に関する。
本発明による微生物細胞の適用は簡便であり、食品の場合は、本発明の細菌の（生）細胞、又は断片若しくは類似体を、特定の量で食品に添加する。同様の考えが動物飼料又は医薬組成物にあてはまる。
実施例
以下において、本発明を実施例に言及してより詳細に説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものではない。
以下において、本発明を実施例に言及してより詳細に説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものではない。
実施例1：食品中の真菌の阻害
使用した材料：
使用した培養物は以下であった：ヨーグルトスターターカルチャーYo-Mix 401（Danisco、Denmark）、ラクトバチルスDSM 22721、ペニシリウム・コンミュネ、ペニシリウム・ロックフォルティ、アルテルナリア（alternaria）・アルテルナータ及びアスペルギルス属等のその他の独自の単離菌。
使用した材料：
使用した培養物は以下であった：ヨーグルトスターターカルチャーYo-Mix 401（Danisco、Denmark）、ラクトバチルスDSM 22721、ペニシリウム・コンミュネ、ペニシリウム・ロックフォルティ、アルテルナリア（alternaria）・アルテルナータ及びアスペルギルス属等のその他の独自の単離菌。
使用した化学物質又は培地は、
例えば、Campina Mark Brandenburg製の超高温処理均質化乳、1.5 %脂肪分、
Granovita GmbH（D-87751 Heimertingen）製のインスタント脱脂粉乳「frema Reform」（Reformhaus Demskiから入手可能）、
ソルビン酸カリウム溶液20 mg/ml（VWRInternational GmbH，Darmstadt）、滅菌ろ過、
YDAブイヨン（酵母エキスPTU（Ohly GmbH）25.0 g/l、D(+)グルコース一水和物（Merck，Darmstadt）20.0g/l、Tween 80（Merck，Darmstadt）1.0 g/l、クエン酸水素二アンモニウム（Merck，Darmstadt）2.0g/l、酢酸ナトリウム（Merck，Darmstadt）5.0 g/l、硫酸マグネシウム七水和物（Merck，Darmstadt）0.1 g/l、硫酸マンガン（II）一水和物（Sigma-Aldrich，Seelze）0.05 g/l、リン酸水素二カリウム（Merck，Darmstadt）2.0g/l、121℃で20分オートクレーブ、オートクレーブの後pH 5.7、
人工ヨーグルト培地（aYH培地）、D(+)グルコース一水和物（Merck，Darmstadt）22g/l、Biospringer 0207/0-MG-L酵母エキス（Biospringer，Maisons-Afort Cedex，France）15 g/l、脱脂粉乳（GranovitaGmbH，Heimertingen）20 g/l、Tween 80（Merck，Darmstadt）1.0 g/l、クエン酸水素二アンモニウム（Merck，Darmstadt）2.0 g/l、酢酸ナトリウム（Merck，Darmstadt）5.0g/l、硫酸マンガン七水和物（Merck，Darmstadt）0.1 g/l、硫酸マンガン（II）一水和物（Sigma-Aldrich，Seelze）0.05 g/l、リン酸水素二カリウム（Merck，Darmstadt）2.0 g/l、
ヨーグルト培地（超高温処理乳（1.5 %脂肪分）＋2.0 %w/w Bio skimmed milk）、
MRSブイヨン（MRS Lactobacilli broth（BD Difco，Augsburg）55g/l、pH 6.5）、
ポテトデキストロース寒天培地（potato dextrose broth（BD Difco，Augsburg）24g/l、寒天、顆粒（BD Difco，Augsburg）1.5 g/l、pH 5.1）、並びに、
凍結保護溶液（グルコース一水和物（Merck，Darmstadt）80 g/l、ペプトントリプチケース（BD Difco，Augsburg）2 g/l、マグネシウム七水和物（Merck，Darmstadt）10g/l、リン酸二水素カリウム（Merck，Darmstadt）4 g/l、硝酸ナトリウム（Merck，Darmstadt）6 g/l、塩化カリウム（Merck，Darmstadt）1 g/l、硫酸鉄（II）七水和物（Merck，Darmstadt）0.02 g/l、グリセリン（85 %）（Merck，Darmstadt）200 g/l、pH 5.6）であった。
例えば、Campina Mark Brandenburg製の超高温処理均質化乳、1.5 %脂肪分、
Granovita GmbH（D-87751 Heimertingen）製のインスタント脱脂粉乳「frema Reform」（Reformhaus Demskiから入手可能）、
ソルビン酸カリウム溶液20 mg/ml（VWRInternational GmbH，Darmstadt）、滅菌ろ過、
YDAブイヨン（酵母エキスPTU（Ohly GmbH）25.0 g/l、D(+)グルコース一水和物（Merck，Darmstadt）20.0g/l、Tween 80（Merck，Darmstadt）1.0 g/l、クエン酸水素二アンモニウム（Merck，Darmstadt）2.0g/l、酢酸ナトリウム（Merck，Darmstadt）5.0 g/l、硫酸マグネシウム七水和物（Merck，Darmstadt）0.1 g/l、硫酸マンガン（II）一水和物（Sigma-Aldrich，Seelze）0.05 g/l、リン酸水素二カリウム（Merck，Darmstadt）2.0g/l、121℃で20分オートクレーブ、オートクレーブの後pH 5.7、
人工ヨーグルト培地（aYH培地）、D(+)グルコース一水和物（Merck，Darmstadt）22g/l、Biospringer 0207/0-MG-L酵母エキス（Biospringer，Maisons-Afort Cedex，France）15 g/l、脱脂粉乳（GranovitaGmbH，Heimertingen）20 g/l、Tween 80（Merck，Darmstadt）1.0 g/l、クエン酸水素二アンモニウム（Merck，Darmstadt）2.0 g/l、酢酸ナトリウム（Merck，Darmstadt）5.0g/l、硫酸マンガン七水和物（Merck，Darmstadt）0.1 g/l、硫酸マンガン（II）一水和物（Sigma-Aldrich，Seelze）0.05 g/l、リン酸水素二カリウム（Merck，Darmstadt）2.0 g/l、
ヨーグルト培地（超高温処理乳（1.5 %脂肪分）＋2.0 %w/w Bio skimmed milk）、
MRSブイヨン（MRS Lactobacilli broth（BD Difco，Augsburg）55g/l、pH 6.5）、
ポテトデキストロース寒天培地（potato dextrose broth（BD Difco，Augsburg）24g/l、寒天、顆粒（BD Difco，Augsburg）1.5 g/l、pH 5.1）、並びに、
凍結保護溶液（グルコース一水和物（Merck，Darmstadt）80 g/l、ペプトントリプチケース（BD Difco，Augsburg）2 g/l、マグネシウム七水和物（Merck，Darmstadt）10g/l、リン酸二水素カリウム（Merck，Darmstadt）4 g/l、硝酸ナトリウム（Merck，Darmstadt）6 g/l、塩化カリウム（Merck，Darmstadt）1 g/l、硫酸鉄（II）七水和物（Merck，Darmstadt）0.02 g/l、グリセリン（85 %）（Merck，Darmstadt）200 g/l、pH 5.6）であった。
使用した方法：
スターターカルチャーを、1 gの凍結乾燥したヨーグルトスターター（Yo-Mix 401、Danisco、Denmark）を500ml容の超高温処理した低脂肪ミルクに溶解し、それを環境温度で20分間膨らませることにより、調製した。
スターターカルチャーを、1 gの凍結乾燥したヨーグルトスターター（Yo-Mix 401、Danisco、Denmark）を500ml容の超高温処理した低脂肪ミルクに溶解し、それを環境温度で20分間膨らませることにより、調製した。
本発明によるラクトバチルスの前培養を、9 mlのYDAブイヨンに1.5 mlの冷凍貯蔵培養液を播種し、次いで37℃で48時間、嫌気性インキュベーションすることにより行った。
本発明によるラクトバチルスの本培養を、30 mlのYDAブイヨンに8 mlの前培養液からのペレットを播種し、次いで37℃で24時間、嫌気性インキュベーションすることにより行った。
本発明によるラクトバチルスの発酵を、28 mlの本培養液を5分間4500rpmで遠心分離することにより行い、上清を捨てた。得られたペレットを5 mlの無菌0.9 % NaCl溶液に再懸濁し、0.5 lのaYH培地が入った1 l容の三角フラスコに完全に移した。次いで、嫌気性インキュベーションを37℃で24時間、攪拌器上にて150rpmで行った。発酵の後、2 MのKOHを用いてpH値を5.5±0.1の値に調整した。
ヨーグルトを生産するために、100 mlの超高温処理したミルク（1.5 %の脂肪分）+2.0 gの脱脂粉乳（2重量%）を、ショット（Schott）フラスコに入れた。次いで混合物をオートクレーブ中で110℃で15分間加熱した。42℃まで冷却した後、0.5mlの新たに生産したヨーグルトスターターカルチャーを添加した。その後、嫌気性インキュベーションを42℃で行い、4.6±0.1のpH値を得た。更に使用するまで貯蔵を7℃で行った。
低温真菌胞子懸濁液を生産するために、真菌サンプルをポテトデキストロース寒天培地上に蒔き、その後、1週間〜4週間、25℃〜30℃で好気条件下にて胞子形成まで培養した。次いで培養物を10 mlの凍結保護培養液中に入れ、液体上清を取り出し、クライオチューブ中に移した。凍結培養物の貯蔵を-80℃で行った。
バイオアッセイ用の真菌を調製するために、0.1 mlの低温真菌胞子懸濁液をポテトデキストロース寒天培地上に蒔き、その後、1週間〜4週間、25℃〜30℃で好気条件下にて胞子形成まで培養した。次いで培養物を10 mlの0.1 % Tween 80溶液中に入れた。液体上清をファルコンチューブ中に移し、4℃〜6℃で保存した。懸濁液の希釈を、蒸留水（H2Odist）を用いて250胞子/mlとなるまで行った。
ポテトデキストロース寒天培地上でのラクトバチルスによる真菌の阻害についてのバイオアッセイを、250胞子/mlの200 μlの胞子懸濁液をポテトデキストロース寒天プレート上に蒔くことによって行った。乾燥させた後、コルクドリル（cork drill）によって寒天プレートに5つの穴を開けた。各40 μlの以下の混合物をピペットで入れた（pipetted）：
1）MRS培地中の24時間ラクトバチルス培養物、
2）MRS培地中の24時間ラクトバチルス培養物からの上清、
3）MRS中の24時間培養物からの、粒状化し、PBSバッファー中に再懸濁したラクトバチルス（→PBS中の細胞）、
4）MRS培地、
5）PBS。
1）MRS培地中の24時間ラクトバチルス培養物、
2）MRS培地中の24時間ラクトバチルス培養物からの上清、
3）MRS中の24時間培養物からの、粒状化し、PBSバッファー中に再懸濁したラクトバチルス（→PBS中の細胞）、
4）MRS培地、
5）PBS。
次いでプレートの嫌気培養を環境温度で最大14日間まで行った。
ラクトバチルスによるヨーグルト中の真菌の阻害を証明するためのバイオアッセイを、40 mlのヨーグルト培地をファルコンチューブに入れることにより行った。次いで0.2mlのスターターカルチャーを添加した。サンプルとして以下を準備した：
1）1×108のラクトバチルス細胞を添加したもの、
2）ラクトバチルスを含まない対照A、及び、
3）ラクトバチルスを含まず、発酵後に0.4 mlのソルビン酸カリウム溶液を添加した、対照B。
1）1×108のラクトバチルス細胞を添加したもの、
2）ラクトバチルスを含まない対照A、及び、
3）ラクトバチルスを含まず、発酵後に0.4 mlのソルビン酸カリウム溶液を添加した、対照B。
その後、1つあたり各42℃で最大pH=4.6±0.1となるまでの発酵を行い、次いで7℃まで冷却し、6ウェルプレートに各8mlのサンプルを入れ、1つのサンプルあたり50の胞子を添加し（対照には胞子は添加しない）、7℃でインキュベーションし、真菌増殖についての目視検査を毎日行った。目視検査の代わりとして、自動評価をデジタルカメラを用いて行うことができ、その場合は真菌を下にある基質から識別する、予め調節したコントラスト設定を使用する。これにより予め定めた輝度閾値より低いか又は高く、したがって、真菌増殖に関連するような画素の画素計数を行うことが可能となる。画素数は次いでサンプルに関連する全画素数に対する比に換算することができ、試験したサンプル中に存在する真菌の量の定量的評価基準を与えることができる。カメラとしては、以下の設定の、FluorChem（商標）FC2 Imaging System（Alpha Innotech/CellBiosciences、Santa Clara、USA）システムが適している：露光時間：100 ms〜150 ms、開口数：8、コントラスト設定：黒色レベル：55000、白色レベル：60000、ガンマ：3.0、光設定：透過光「オン」、反射光「オン」、化学ディスプレイ「オン」、速度／解像度：通常／超。画像はAlphaEaseFCソフトウェアを用いて解析した。
本発明によるラクトバチルス細胞による真菌増殖の阻害
ヨーグルト中での本発明によるラクトバチルスによる真菌増殖の阻害を確認するためのバイオアッセイを行ったところ、以下の結果が得られた。7日後、ラクトバチルス又はソルビン酸カリウムのいずれも含まないサンプル（対照A）において、目視検査により真菌増殖が検出された。9日後、ソルビン酸カリウムを含むサンプル（対照B）においても、目視検査により真菌増殖が検出された。しかしながら、28日後にはじめて、本発明によるラクトバチルス細胞を含むサンプルにおいても真菌増殖が検出された。結果は、本発明によるラクトバチルス細胞により、真菌増殖の明瞭な低下、したがってヨーグルトの耐用期間の実質的な延長が達成されるということである。
ヨーグルト中での本発明によるラクトバチルスによる真菌増殖の阻害を確認するためのバイオアッセイを行ったところ、以下の結果が得られた。7日後、ラクトバチルス又はソルビン酸カリウムのいずれも含まないサンプル（対照A）において、目視検査により真菌増殖が検出された。9日後、ソルビン酸カリウムを含むサンプル（対照B）においても、目視検査により真菌増殖が検出された。しかしながら、28日後にはじめて、本発明によるラクトバチルス細胞を含むサンプルにおいても真菌増殖が検出された。結果は、本発明によるラクトバチルス細胞により、真菌増殖の明瞭な低下、したがってヨーグルトの耐用期間の実質的な延長が達成されるということである。
実施例2
播種されたヨーグルト表面から真菌胞子を収集し、真菌最適化培地（ポテトデキストロース寒天培地）上で、最適条件（25℃、好気、5日間）下で培養した。0.1 %のラクトバチルス・ブレビスDSM 22721の使用の結果、真菌増殖はまったく起こらなかった（図1を比較されたい；13）。ラクトバチルス・ブレビスDSM 22721の効果は、殺真菌性（fungicidal）であり、静真菌性ではない。この実験はまた、ラクトバチルス・ブレビスDSM 22721の効果はソルビン酸カリウムよりも優れているということも示した（図1を比較されたい：ソルビン酸カリウム11、ソルビン酸カリウム無し10）。
播種されたヨーグルト表面から真菌胞子を収集し、真菌最適化培地（ポテトデキストロース寒天培地）上で、最適条件（25℃、好気、5日間）下で培養した。0.1 %のラクトバチルス・ブレビスDSM 22721の使用の結果、真菌増殖はまったく起こらなかった（図1を比較されたい；13）。ラクトバチルス・ブレビスDSM 22721の効果は、殺真菌性（fungicidal）であり、静真菌性ではない。この実験はまた、ラクトバチルス・ブレビスDSM 22721の効果はソルビン酸カリウムよりも優れているということも示した（図1を比較されたい：ソルビン酸カリウム11、ソルビン酸カリウム無し10）。
実施例3
胞子懸濁液の準備：
低温真菌胞子懸濁液を生産するために、真菌サンプルをポテトデキストロース寒天培地上に蒔き、次いで、1週間〜4週間、25℃〜30℃で好気条件下にて胞子形成まで培養した。次いで培養物を10 mlの凍結保護培養液中に入れ、液体上清を取り出し、クライオチューブ中に移した。凍結培養物の貯蔵を-80℃で行った。
胞子懸濁液の準備：
低温真菌胞子懸濁液を生産するために、真菌サンプルをポテトデキストロース寒天培地上に蒔き、次いで、1週間〜4週間、25℃〜30℃で好気条件下にて胞子形成まで培養した。次いで培養物を10 mlの凍結保護培養液中に入れ、液体上清を取り出し、クライオチューブ中に移した。凍結培養物の貯蔵を-80℃で行った。
バイオアッセイ用の胞子の準備のために、胞子懸濁液をポテトデキストロースブロス中5×106/mLとなるように調製した。
ラクトバチルス細胞の準備：
ラクトバチルス培養物をYDA培地中で24時間、37℃で培養した。次いで細胞を4000×gでの遠心分離によって収集した後、細胞を蒸留水（dH2O）で洗浄した。その後、細胞を蒸留水中で10倍濃縮した。
ラクトバチルス培養物をYDA培地中で24時間、37℃で培養した。次いで細胞を4000×gでの遠心分離によって収集した後、細胞を蒸留水（dH2O）で洗浄した。その後、細胞を蒸留水中で10倍濃縮した。
共インキュベーションアッセイの準備：
共インキュベーションアッセイのために、980 μlのペニシリウム・コンミュネ（P.commune）の5×106/mLの胞子を含有する胞子懸濁液と、20 μlの10倍ラクトバチルス濃縮液とを、25℃で24時間、24ウェルプレート中で共インキュベートした（co-incubated）。胞子の発芽率を、トーマチャンバー中でのサンプルの顕微鏡評価により様々な時点で決定した。したがって、少なくとも100の胞子を評価し、発芽した胞子のパーセンテージを算出した。胞子は、伸長の長さが胞子の直径を上回った場合に発芽したものと決定した。
共インキュベーションアッセイのために、980 μlのペニシリウム・コンミュネ（P.commune）の5×106/mLの胞子を含有する胞子懸濁液と、20 μlの10倍ラクトバチルス濃縮液とを、25℃で24時間、24ウェルプレート中で共インキュベートした（co-incubated）。胞子の発芽率を、トーマチャンバー中でのサンプルの顕微鏡評価により様々な時点で決定した。したがって、少なくとも100の胞子を評価し、発芽した胞子のパーセンテージを算出した。胞子は、伸長の長さが胞子の直径を上回った場合に発芽したものと決定した。
結果を図5に示す：ラクトバチルス細胞有り及び無しでの共インキュベーションの後のペニシリウム・コンミュネ胞子の発芽率［%］。発芽の阻害は少なくとも10 %の胞子の発芽が阻害された場合に有意であるとみなした。
図2
stability of lyophilized Lactobacillusantimold 凍結乾燥したラクトバチルス・アンチモールドの安定性
(#OB-110308 used for challenge study) （負荷研究に使用した#OB-110308）
storage [months] at 39°F/4℃ 39°F/4℃での貯蔵[月]
図3
stability testing of LB anti-mold ラクトバチルス・アンチモールド（LB anti-mold）の安定性試験
#2012-16OB-FL0002-FsC10 stored at -20℃ -20℃で保存した#2012-16OB-FL0002-FsC10
storage [months] 貯蔵[月]
inhibition 阻害
external 外部
internal 内部
図4
stability testing of LB anti-mold ラクトバチルス・アンチモールドの安定性試験
#2012-16OB-FL0002-FsC10 stored at -80℃ -80℃で保存した#2012-16OB-FL0002-FsC10
storage [months] 貯蔵[月]
inhibition 阻害
external 外部
internal 内部
図5
Incubation-time [h] インキュベーション時間[時間]
without Lactobacillus ラクトバチルス無し
with negative Lactobacillus strain 陰性ラクトバチルス株有り
with Lactobacillus DSM 22721 ラクトバチルスDSM 22721有り
stability of lyophilized Lactobacillusantimold 凍結乾燥したラクトバチルス・アンチモールドの安定性
(#OB-110308 used for challenge study) （負荷研究に使用した#OB-110308）
storage [months] at 39°F/4℃ 39°F/4℃での貯蔵[月]
図3
stability testing of LB anti-mold ラクトバチルス・アンチモールド（LB anti-mold）の安定性試験
#2012-16OB-FL0002-FsC10 stored at -20℃ -20℃で保存した#2012-16OB-FL0002-FsC10
storage [months] 貯蔵[月]
inhibition 阻害
external 外部
internal 内部
図4
stability testing of LB anti-mold ラクトバチルス・アンチモールドの安定性試験
#2012-16OB-FL0002-FsC10 stored at -80℃ -80℃で保存した#2012-16OB-FL0002-FsC10
storage [months] 貯蔵[月]
inhibition 阻害
external 外部
internal 内部
図5
Incubation-time [h] インキュベーション時間[時間]
without Lactobacillus ラクトバチルス無し
with negative Lactobacillus strain 陰性ラクトバチルス株有り
with Lactobacillus DSM 22721 ラクトバチルスDSM 22721有り
Claims (15)
- 食品添加物としての使用のための乳酸菌又はその断片であって、前記乳酸菌がヘテロ乳酸性のものであり、かつ、前記乳酸菌が少なくとも1つの真菌生物の増殖を阻害する、乳酸菌又はその断片。
- 以下：
a）基質を準備することと、
b）調査対象の乳酸菌を含む調製物を準備することと、
c）前記乳酸菌を含む前記調製物を前記基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行うことと、
d）予め定めた数の真菌胞子を工程c）の生成物に添加することと、
e）工程d）において得た試験サンプルの、予め定めた期間、予め定めた温度でのインキュベーションと、
f）検出し、任意にその後に真菌増殖の評価を行うことと、
g）少なくとも1つの乳酸菌の単離と、
を含むプロセスによって調製される、単離された乳酸菌又はその断片。 - 前記乳酸菌が乳酸菌生菌である、請求項1又は2に記載の乳酸菌。
- ラクトバチルスがラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・ヒルガルディー、ラクトバチルス・プランタルム又はラクトバチルス・フルクティボランスである、請求項1〜3のいずれか一に記載の乳酸菌又はその断片。
- DSM22721として提出された、請求項1〜4のいずれか一に記載の乳酸菌又はその断片、その突然変異体及び／又は誘導体であって、該突然変異体又は誘導体が、真菌生物の増殖を阻害する能力を保持するものである、請求項1〜4のいずれか一に記載の乳酸菌又はその断片、その突然変異体及び／又は誘導体。
- 前記真菌生物が、ペニシリウム属若しくはペニシリウム・コンミュネ又はペニシリウム・ロックフォルティ、アスペルギルス属及びアルテルナリア属若しくはアルテルナリア・アルテルナータ、ペニシリウム・エキスパンサム、ペニシリウム・シトリナム、ペニシリウム・ジギタタム、ペニシリウム・イタリクム、スコプラリオプシス・ブレビアカウリス、アスペルギルス・フラブス、アスペルギルス・パラジチカス、ボトリチス・シネレア、リゾプス属の種、ムコール属の種、ユーロチウム・ヘルバリオラム、ゲオトリクム・カンジドゥム、クラドスポリウム・ヘルバルム、フザリウム・サンシナム、フィトフォラ・インフェスタンス及びスクレロチニア・スセロチオラムを含む群から選択される、請求項1〜5のいずれか一に記載の乳酸菌又はその断片。
- 食品組成物、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物の生産のための、請求項1〜6のいずれか一に記載の乳酸菌又はその断片の使用であって、前記乳酸菌若しくは乳酸菌生菌、又はその断片が、食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物に添加される、使用。
- 食糧と、請求項1〜6のいずれか一に記載の乳酸菌又はその断片とを含む、食品組成物。
- 請求項8に記載の食品組成物、動物飼料、医薬組成物又は化粧品組成物であって、前記食品組成物、動物飼料、前記医薬組成物又は化粧品組成物が、102〜1015の若しくは106若しくは108〜1012の若しくは108〜1010の乳酸菌細胞又はその断片を含有する、食品組成物、動物飼料、医薬組成物又は化粧品組成物。
- 前記乳酸菌が0.0001 %〜0.01 %若しくは0.001%の濃度で存在する、請求項8又は9に記載の食品組成物。
- 前記食品組成物が、肉製品若しくは乳製品、又は、ヨーグルト、ミルク、チーズ、クリーム、及び／又はカッテージチーズである、請求項8〜10のいずれか一に記載の食品組成物。
- 食糧、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を保存する方法であって、請求項1〜6のいずれか一に記載の乳酸菌が、前記食糧、動物飼料、化粧品組成物又は医薬組成物に添加される、食糧、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物を保存する方法。
- 食品、動物飼料、又は医薬組成物若しくは化粧品組成物100 gあたり、102〜1015の、若しくは106若しくは108〜1012の、若しくは108〜1010の乳酸菌細胞又はその断片が添加される、請求項12に記載の方法。
- 前記乳酸菌が0.0001 %〜0.01 %、若しくは0.001%の濃度で添加される、請求項12又は13に記載の方法。
- 以下：
h）基質を準備することと、
i）調査対象の乳酸菌を含む調製物を準備することと、
j）前記乳酸菌を含む前記調製物を前記基質に添加し、任意にその後に発酵工程を行うことと、
k）予め定めた数の真菌胞子を工程j）の生成物に添加することと、
l）工程k）において得た試験サンプルの、予め定めた期間、予め定めた温度でのインキュベーションと、
m）検出し、任意にその後に真菌増殖の評価を行うことと、
を含む、請求項1〜6のいずれか一に記載の乳酸菌を同定する方法。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361779246P | 2013-03-13 | 2013-03-13 | |
| EP13159061.4 | 2013-03-13 | ||
| EP13159061.4A EP2777405B1 (en) | 2013-03-13 | 2013-03-13 | Novel Lactobacillus strains and the uses thereof |
| US61/779,246 | 2013-03-13 | ||
| PCT/EP2014/054879 WO2014140123A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-03-12 | Novel lactobacillus strains and the uses thereof |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017240626A Division JP6709208B2 (ja) | 2013-03-13 | 2017-12-15 | 新規ラクトバチルス株及びその使用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016510985A true JP2016510985A (ja) | 2016-04-14 |
| JP6263205B2 JP6263205B2 (ja) | 2018-01-17 |
Family
ID=47845850
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015562132A Active JP6263205B2 (ja) | 2013-03-13 | 2014-03-12 | 新規ラクトバチルス株及びその使用 |
| JP2017240626A Active JP6709208B2 (ja) | 2013-03-13 | 2017-12-15 | 新規ラクトバチルス株及びその使用 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017240626A Active JP6709208B2 (ja) | 2013-03-13 | 2017-12-15 | 新規ラクトバチルス株及びその使用 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11053474B2 (ja) |
| EP (2) | EP2777405B1 (ja) |
| JP (2) | JP6263205B2 (ja) |
| KR (1) | KR101831040B1 (ja) |
| CN (1) | CN105357979B (ja) |
| AU (1) | AU2014230777B2 (ja) |
| BR (1) | BR112015022833B1 (ja) |
| CA (1) | CA2903940C (ja) |
| DK (1) | DK2777405T3 (ja) |
| ES (1) | ES2710435T3 (ja) |
| MX (1) | MX2015012379A (ja) |
| PL (1) | PL2777405T3 (ja) |
| RU (1) | RU2681437C2 (ja) |
| WO (1) | WO2014140123A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107410463A (zh) * | 2017-04-09 | 2017-12-01 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种果菜类保鲜剂的配制方法 |
| CN106819094A (zh) * | 2017-04-09 | 2017-06-13 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种果菜类保鲜剂的配制方法 |
| CN107079984A (zh) * | 2017-04-09 | 2017-08-22 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种果菜类保鲜剂的配制方法 |
| CN107079983A (zh) * | 2017-04-09 | 2017-08-22 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种果菜类保鲜剂的配制方法 |
| CN106942355A (zh) * | 2017-04-09 | 2017-07-14 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种果菜类保鲜剂的配制方法 |
| CN107027877A (zh) * | 2017-04-09 | 2017-08-11 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种果菜类保鲜剂的配制方法 |
| CN107047746A (zh) * | 2017-04-24 | 2017-08-18 | 湖南易科生物工程有限公司 | 一种水果保鲜剂的配制方法 |
| KR102100367B1 (ko) * | 2019-03-18 | 2020-04-14 | 재단법인 발효미생물산업진흥원 | 장 부착능이 우수하고, 항노화 활성 및 프로바이오틱스 특성을 가지는 락토바실러스 브레비스 srcm103306 균주 및 이의 용도 |
| WO2020214685A1 (en) * | 2019-04-16 | 2020-10-22 | Locus Ip Company, Llc | Microbe-based emulsifying food additives |
| CN109971687B (zh) * | 2019-05-05 | 2020-12-08 | 西南大学 | 一株乳酸菌Lactobacillus sucicola及其应用 |
| CN110331104B (zh) * | 2019-07-05 | 2020-12-18 | 四川大学 | 一种植物乳杆菌cv10d1及其应用 |
| CN110200899B (zh) * | 2019-07-05 | 2022-03-25 | 欧诗漫生物股份有限公司 | 一种防腐剂及其制备方法和应用 |
| WO2021099655A1 (es) * | 2019-11-19 | 2021-05-27 | Inbiolev, S.L. | Procedimiento para el tratamiento de mostos y vinos y producto para la puesta en práctica del mismo |
| CN111334455B (zh) * | 2020-03-13 | 2022-04-15 | 江南大学 | 一种丝状真菌抑制剂及其应用 |
| CN114774327B (zh) * | 2022-05-12 | 2023-08-15 | 河北科技大学 | 一种植物乳杆菌hb13-2及其应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0361453A (ja) * | 1988-11-14 | 1991-03-18 | Valio Meijerien Keskusosuuslike | 飼料保存方法 |
| JPH07115948A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Tamon Shuzo Kk | 食品用保存剤 |
| JPH08507497A (ja) * | 1993-03-10 | 1996-08-13 | コモンウェルス・サイエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサーチ・オーガニゼイション | 農業用生体制御剤 |
| JPH08289770A (ja) * | 1995-04-20 | 1996-11-05 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JP2009261249A (ja) * | 2008-04-03 | 2009-11-12 | Oriental Yeast Co Ltd | ラクトバチルス・プランタラムの新菌株、並びに、それを含む飲食品、それを用いた製パン用種及び製パン法 |
| JP2010521136A (ja) * | 2007-03-16 | 2010-06-24 | キリンホールディングス株式会社 | 腸内細菌叢改善用組成物 |
| JP2010215641A (ja) * | 2004-03-04 | 2010-09-30 | Elc Management Llc | ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）抽出物による皮膚の処置方法 |
| JP2011505162A (ja) * | 2007-12-04 | 2011-02-24 | コンパニ・ジェルベ・ダノン | 抗真菌剤としてのエル・カゼイ亜種パラカゼイの使用 |
| EP2543246A1 (en) * | 2011-07-04 | 2013-01-09 | CSK Food Enrichment B.V. | Cheese coating compositions having biopreservative properties |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6030686A (ja) | 1983-07-30 | 1985-02-16 | Yakult Honsha Co Ltd | 乳酸桿菌属の細菌に供与ｄνａを導入する方法 |
| US4918014A (en) | 1985-10-11 | 1990-04-17 | Microlife Technics, Inc. | Method for producing mucoid and phage resistant group N streptococcus strains from non-mucoid and phage sensitive parent strains |
| FI77056C (fi) | 1986-06-24 | 1989-01-10 | Valio Meijerien | Vektorplasmid som laempar sig foer syrningsmedel, speciellt foer mejerisyrningsmedel. |
| EP0311469A3 (en) | 1987-09-02 | 1990-05-30 | Plant Genetic Systems N.V. | Transformed lactic acid bacteria |
| EP0316677A3 (en) | 1987-11-13 | 1990-04-25 | Miles Inc. | Method for cloning in lactic acid bacteria |
| WO1991009131A1 (en) | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Valio Finnish Cooperative Dairies Association | Cloning vector for use in lactic acid bacteria |
| DE19947620A1 (de) | 1999-10-04 | 2001-04-05 | Valeo Auto Electric Gmbh | Wischeinrichtung |
| AU776045B2 (en) | 2000-01-19 | 2004-08-26 | Bridgestone Corporation | Rubber crawler |
| EP1133046A3 (en) | 2000-03-02 | 2002-02-27 | Moriyama Kogyo Kabushiki Kaisha | Multipolar magnet type generator for internal combustion engines |
| EP1308506A1 (en) * | 2001-11-06 | 2003-05-07 | Eidgenössische Technische Hochschule Zürich | Mixtures of Propionibacterium jensenii and Lactobacillus sp. with antimicrobial activities for use as a natural preservation system |
| US6612809B2 (en) | 2001-11-28 | 2003-09-02 | General Electric Company | Thermally compliant discourager seal |
| US20050125036A1 (en) | 2003-08-14 | 2005-06-09 | Mark Roby | Heterogeneous yarns for surgical articles |
| US20090130073A1 (en) * | 2005-09-19 | 2009-05-21 | Basf Se | Microorganisms Inhibiting the Formation of Foot Malodor |
| JP2010004787A (ja) | 2008-06-26 | 2010-01-14 | Kaneka Corp | ラクトバチルス・ブレビス菌の培養方法 |
| WO2010119874A1 (ja) * | 2009-04-15 | 2010-10-21 | 三井物産株式会社 | ラクトバチルス属菌株および防黴性を有する食品 |
| CN102093965B (zh) | 2010-11-26 | 2012-10-03 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 一株乳酸菌及其应用 |
| EP2592158A1 (en) * | 2011-11-14 | 2013-05-15 | University College Cork, National University of Ireland, Cork | Lactobacillus plantarum species possessing broad spectrum anti-fungal activity and exhibiting high heat tolerance and osmotolerance |
| CN102747009B (zh) | 2012-04-18 | 2014-07-30 | 北京和美科盛生物技术有限公司 | 一株植物乳杆菌及其在发酵乳制品中的使用方法 |
-
2013
- 2013-03-13 ES ES13159061T patent/ES2710435T3/es active Active
- 2013-03-13 PL PL13159061T patent/PL2777405T3/pl unknown
- 2013-03-13 EP EP13159061.4A patent/EP2777405B1/en active Active
- 2013-03-13 DK DK13159061.4T patent/DK2777405T3/en active
-
2014
- 2014-03-12 CA CA2903940A patent/CA2903940C/en active Active
- 2014-03-12 RU RU2015137764A patent/RU2681437C2/ru active
- 2014-03-12 US US14/774,713 patent/US11053474B2/en active Active
- 2014-03-12 CN CN201480015059.6A patent/CN105357979B/zh active Active
- 2014-03-12 EP EP14709662.2A patent/EP2967120A1/en not_active Withdrawn
- 2014-03-12 KR KR1020157027979A patent/KR101831040B1/ko active IP Right Grant
- 2014-03-12 MX MX2015012379A patent/MX2015012379A/es active IP Right Grant
- 2014-03-12 WO PCT/EP2014/054879 patent/WO2014140123A1/en active Application Filing
- 2014-03-12 JP JP2015562132A patent/JP6263205B2/ja active Active
- 2014-03-12 BR BR112015022833-0A patent/BR112015022833B1/pt active IP Right Grant
- 2014-03-12 AU AU2014230777A patent/AU2014230777B2/en active Active
-
2017
- 2017-12-15 JP JP2017240626A patent/JP6709208B2/ja active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0361453A (ja) * | 1988-11-14 | 1991-03-18 | Valio Meijerien Keskusosuuslike | 飼料保存方法 |
| JPH08507497A (ja) * | 1993-03-10 | 1996-08-13 | コモンウェルス・サイエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサーチ・オーガニゼイション | 農業用生体制御剤 |
| JPH07115948A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Tamon Shuzo Kk | 食品用保存剤 |
| JPH08289770A (ja) * | 1995-04-20 | 1996-11-05 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JP2010215641A (ja) * | 2004-03-04 | 2010-09-30 | Elc Management Llc | ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）抽出物による皮膚の処置方法 |
| JP2010521136A (ja) * | 2007-03-16 | 2010-06-24 | キリンホールディングス株式会社 | 腸内細菌叢改善用組成物 |
| JP2011505162A (ja) * | 2007-12-04 | 2011-02-24 | コンパニ・ジェルベ・ダノン | 抗真菌剤としてのエル・カゼイ亜種パラカゼイの使用 |
| JP2009261249A (ja) * | 2008-04-03 | 2009-11-12 | Oriental Yeast Co Ltd | ラクトバチルス・プランタラムの新菌株、並びに、それを含む飲食品、それを用いた製パン用種及び製パン法 |
| EP2543246A1 (en) * | 2011-07-04 | 2013-01-09 | CSK Food Enrichment B.V. | Cheese coating compositions having biopreservative properties |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| ACTA ALIMENTARIA, vol. 36(4), JPN6016038539, 2007, pages 495 - 499, ISSN: 0003414529 * |
| APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 66(9), JPN7016002983, 2000, pages 4084 - 4090, ISSN: 0003414526 * |
| APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 67(1), JPN7016002984, 2001, pages 1 - 5, ISSN: 0003414527 * |
| APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 69(12), JPN7016002982, 2003, pages 7554 - 7557, ISSN: 0003414525 * |
| INTERNATIONAL JOURNAL OF DAIRY TECHNOLOGY, vol. 63(1), JPN6016038529, 2010, pages 70 - 76, ISSN: 0003414523 * |
| INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY, vol. 83(1), JPN6016038531, 2003, pages 63 - 74, ISSN: 0003414524 * |
| MICROBIOLOGICAL RESEARCH, vol. 159, JPN6016038538, 2004, pages 339 - 346, ISSN: 0003414528 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20160024459A1 (en) | 2016-01-28 |
| RU2015137764A (ru) | 2017-04-17 |
| EP2777405B1 (en) | 2018-11-21 |
| AU2014230777A1 (en) | 2015-09-24 |
| CN105357979A (zh) | 2016-02-24 |
| RU2681437C2 (ru) | 2019-03-06 |
| MX2015012379A (es) | 2016-11-14 |
| DK2777405T3 (en) | 2019-03-11 |
| JP2018078895A (ja) | 2018-05-24 |
| US11053474B2 (en) | 2021-07-06 |
| AU2014230777B2 (en) | 2017-03-09 |
| BR112015022833A2 (pt) | 2017-11-07 |
| WO2014140123A1 (en) | 2014-09-18 |
| EP2967120A1 (en) | 2016-01-20 |
| CA2903940A1 (en) | 2014-09-18 |
| CN105357979B (zh) | 2020-10-23 |
| PL2777405T3 (pl) | 2019-05-31 |
| ES2710435T3 (es) | 2019-04-25 |
| KR20150126931A (ko) | 2015-11-13 |
| EP2777405A1 (en) | 2014-09-17 |
| BR112015022833B1 (pt) | 2021-09-21 |
| CA2903940C (en) | 2018-01-02 |
| JP6263205B2 (ja) | 2018-01-17 |
| JP6709208B2 (ja) | 2020-06-10 |
| KR101831040B1 (ko) | 2018-02-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6709208B2 (ja) | 新規ラクトバチルス株及びその使用 | |
| Hemme et al. | Leuconostoc, characteristics, use in dairy technology and prospects in functional foods | |
| Ogunbanwo et al. | Influence of cultural conditions on the production of bacteriocin by Lactobacillus brevis OG1 | |
| Arasu et al. | In vitro antifungal, probiotic and antioxidant properties of novel Lactobacillus plantarum K46 isolated from fermented sesame leaf | |
| Valan Arasu et al. | Isolation and characterization of antifungal compound from Lactobacillus plantarum KCC‐10 from forage silage with potential beneficial properties | |
| Arasu et al. | Identification and characterization of Lactobacillus brevis P68 with antifungal, antioxidant and probiotic functional properties | |
| Joshi et al. | Production, purification, stability and efficacy of bacteriocin from isolates of natural lactic acid fermentation of vegetables | |
| Djossou et al. | Robusta coffee beans post-harvest microflora: Lactobacillus plantarum sp. as potential antagonist of Aspergillus carbonarius | |
| AU2005233240B2 (en) | Method for reducing the content of pathogenic organisms present in food materials | |
| Olasupo et al. | Occurrence of nisin Z production in Lactococcus lactis BFE 1500 isolated from wara, a traditional Nigerian cheese product | |
| WO2011105335A1 (ja) | 新規ビフィドバクテリウム属細菌の作出方法 | |
| Nora et al. | Antifungal activity of newly isolates of lactic acid bacteria | |
| Nithya et al. | Characterization of bacteriocin producing lactic acid bacteria and its application as a food preservative | |
| KR101451810B1 (ko) | 감마-아미노부티르산 생산능이 우수한 신규한 락토바실러스 플랜타룸 ｋ255 균주 | |
| Nallala et al. | Probiotic evaluation of antimicrobial Lactobacillus plantarum VJC38 isolated from the crop of broiler chicken | |
| Adesokan et al. | Influence of cultural conditions on hydrogen peroxide production by lactic acid bacteria isolated from some Nigerian traditional fermented foods | |
| Nallala et al. | Molecular characterization of bacteriocinogenic, antifungal and probiotic lactic acid bacteria isolated from chicken gastrointestinal tract | |
| Tharmaraj et al. | Antimicrobial effects of probiotic bacteria against selected species of yeasts and moulds in cheese‐based dips | |
| Teneva et al. | Antimicrobial activity of Lactobacillus plantarum strains against Salmonella pathogens | |
| Khider et al. | Extending the shelf life of Camembert cheese via controlling over-ripening by bacteriocin of newly lactic acid bacterial isolate LAB100 | |
| Abiona et al. | Molecular characteristics of probiotics lactic acid bacteria isolated from soursop, cowmilk, goatmilk yoghurts and cheese | |
| Elsanhoty | Screening of some lactobacillus strains for their antifungal activities against aflatoxin producing aspergilli in vitro and maize | |
| Das | Starter culture development of sindol-a fermented fish product of Assam | |
| Marwati et al. | Inhibitory activity of bacteriocin produced from Lactobacillus SCG 1223 toward L. monocytogenes, S. thypimurium and E. coli | |
| Kalam | THERMAL STABILITY AND PH TOLERANCE OF AN ANTIMICROBIAL PRODUCING BACTERIA ISOLATED FROM SPOILED FOOD |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20160914 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161005 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20161128 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170404 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170404 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20170907 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171017 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20171116 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171215 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6263205 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |