JP2016510051A - ブルトン型チロシンキナーゼの阻害剤 - Google Patents
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Abstract
Description
(式中、
nは、1又は2であり;
R1は、−C(=O)R1’、−S(=O)2R1’、又は−OC(R1’)2CH2OHであり;
R1’は、メチル又はモルホリンであり;
R2は、H又はFであり;
R3は、クロロ又はC(CH2)2R3’であり;
R3’は、メチル、シアノ、又はヒドロキシメチルであり;
Xは、CH、CH2、又はNであり;
X2は、CH又はNであり;
X3は、CH又はNであり;
Yは、CH又はOであるが、
ただし、nが2であるとき、両Xは、CH2である)
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
定義
語句「a」又は「an」実体とは、本明細書で使用されるとき、その実体の1つ以上を指し、例えば、「a」化合物とは、1つ以上の化合物又は少なくとも1つの化合物を指す。このように、用語「a」(又は「an」)、「1つ以上の」、及び「少なくとも1つの」は、本明細書において互換的に用いることができる。
である。
、アミド/イミド酸
、及びアミジン
互変異性体が挙げられる。後者2つは、ヘテロアリール及び複素環式環において特に一般的であり、そして、本発明は、化合物の全ての互変異性型を包含する。
本願は、式I:
(式中、
nは、1又は2であり;
R1は、−C(=O)R1’、−S(=O)2R1’、又は−OC(R1’)2CH2OHであり;
R1’は、メチル又はモルホリンであり;
R2は、H又はFであり;
R3は、クロロ又はC(CH2)2R3’であり;
R3’は、メチル、シアノ、又はヒドロキシメチルであり;
Xは、CH、CH2、又はNであり;
X2は、CH又はNであり;
X3は、CH又はNであり;
Yは、CH又はOであるが、
ただし、nが2であるとき、両Xは、CH2である)
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
2−[2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−1−オキソ−3,4−ジヒドロイソキノリン−6−イル]−2−メチルプロパンニトリル;
2−[8−フルオロ−2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[5−[[5−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)オキシピリジン−2−イル]アミノ]−1−メチル−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−1−オキソイソキノリン−6−イル]−2−メチルプロパンニトリル;
4−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[(5−メチルスルホニルピリジン−2−イル)アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−8−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)−2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾオキサゼピン−5−オン;
5−クロロ−N−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリジン−3−イル]フェニル]−1,3−ジヒドロイソインドール−2−カルボキサミド;
6−tert−ブチル−2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリジン−3−イル]フェニル]−3,4−ジヒドロ−2,7−ナフチリジン−1−オン;
6−tert−ブチル−2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−3,4−ジヒドロ−2,7−ナフチリジン−1−オン;
6−tert−ブチル−8−フルオロ−2−[2−メチル−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]フタラジン−1−オン;
8−tert−ブチル−4−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾオキサゼピン−5−オン;及び
8−tert−ブチル−4−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[(5−メチルスルホニルピリジン−2−イル)アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾオキサゼピン−5−オン。
本発明によって包含され、そして、本発明の範囲内である代表的な化合物の例を、以下の表に提供する。これらの例及び下記調製は、当業者が本発明をより明確に理解し、そして、実施できるようにするために提供されるものである。これらは、本発明の範囲を限定するとみなすべきではなく、単に、その例示及び代表例である。
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製され得る。これらの化合物を合成するのに適切なプロセスは、実施例に提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームに従って調製され得る。
本発明の化合物は、広範な経口投与剤形及び担体に処方され得る。経口投与は、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル、液剤、乳剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形態であり得る。本発明の化合物は、他の投与経路の中でも、持続(点滴静注)局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮(浸透促進剤を含んでいてもよい)、バッカル、経鼻、吸入、及び坐剤投与を含む他の投与経路によって投与されたときに有効である。好ましい投与態様は、一般的に、苦痛の程度及び活性成分に対する患者の応答に従って調整することができる簡便な毎日の投与レジメンを用いる経口である。
一般式Iで表される化合物は、ブルトン型チロシンキナーゼ(BTK)を阻害する。上流のキナーゼによるBTKの活性化により、ホスホリパーゼ−Cγが活性化され、これは、続いて、前炎症性メディエーターの放出を刺激する。式Iで表される化合物は、関節炎、並びに他の抗炎症及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Iに係る化合物は、関節炎の処置に有用である。式Iで表される化合物は、細胞内のBTKを阻害するため及びB細胞の発生を調節するために有用である。本発明は更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤と混合された、式Iで表される化合物を含有する医薬組成物を含む。
本願は、炎症及び/又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の式Iで表される化合物を投与することを含む方法を提供する。
共通して用いられる略記としては、以下が挙げられる:アセチル(Ac)、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル(AIBN)、雰囲気(Atm)、9−ボラビシクロ[3.3.1]ノナン(9−BBN又はBBN)、2,2’−ビス(ジフェニルホスフィノ)−1,1’−ビナフチル(BINAP)、tert−ブトキシカルボニル(Boc)、ジ−tert−ブチルピロカーボナート又は無水boc(BOC2O)、ベンジル(Bn)、ブチル(Bu)、ケミカルアブストラクト登録番号(CASRN)、ベンジルオキシカルボニル(CBZ又はZ)、カルボニルジイミダゾール(CDI)、1,4−ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン(DABCO)、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド(DAST)、ジベンジリデンアセトン(dba)、1,5−ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ−5−エン(DBN)、1,8−ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ−7−エン(DBU)、N,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、1,2−ジクロロエタン(DCE)、ジクロロメタン(DCM)、2,3−ジクロロ−5,6−ジシアノ−1,4−ベンゾキノン(DDQ)、ジエチルアゾジカルボキシラート(DEAD)、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシラート(DIAD)、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム(DIBAL又はDIBAL−H)、ジ−イソ−プロピルエチルアミン(DIPEA)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、4−N,N−ジメチルアミノピリジン(DMAP)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、1,1’−ビス−(ジフェニルホスフィノ)エタン(dppe)、1,1’−ビス−(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(dppf)、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI)、2−エトキシ−1−エトキシカルボニル−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)、エチル(Et)、酢酸エチル(EtOAc)、エタノール(EtOH)、2−エトキシ−2H−キノリン−1−カルボン酸エチルエステル(EEDQ)、ジエチルエーテル(Et2O)、エチルイソプロピルエーテル(EtOiPr)、O−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸(HATU)、酢酸(HOAc)、1−N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)、高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)、イソプロパノール(IPA)、イソプロピルマグネシウムクロリド(iPrMgCl)、ヘキサメチルジシラザン(HMDS)、液体クロマトグラフィー質量分析(LCMS)、リチウムヘキサメチルジシラザン(LiHMDS)、メタ−クロロペルオキシ安息香酸(m−CPBA)、メタノール(MeOH)、融点(mp)、MeSO2−(メシル又はMs)、メチル(Me)、アセトニトリル(MeCN)、m−クロロ過安息香酸(MCPBA)、質量スペクトル(ms)、メチルt−ブチルエーテル(MTBE)、メチルテトラヒドロフラン(MeTHF)、N−ブロモスクシンイミド(NBS)、n−ブチルリチウム(nBuLi)、N−カルボキシ無水物(NCA)、N−クロロスクシンイミド(NCS)、N−メチルモルホリン(NMM)、N−メチルピロリドン(NMP)、ピリジニウムクロロクロマート(PCC)、ジクロロ−((ビス−ジフェニルホスフィノ)フェロセニル)パラジウム(II)(Pd(dppf)Cl2)、酢酸パラジウム(II)(Pd(OAc)2)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(Pd2(dba)3)、ピリジニウムジクロマート(PDC)、フェニル(Ph)、プロピル(Pr)、イソプロピル(i−Pr)、ポンド/平方インチ(psi)、ピリジン(pyr)、1,2,3,4,5−ペンタフェニル−1’−(ジ−tert−ブチルホスフィノ)フェロセン(Q−Phos)、室温(周囲温度、rt又はRT)、sec−ブチルリチウム(sBuLi)、tert−ブチルジメチルシリル又はt−BuMe2Si(TBDMS)、テトラ−n−ブチルアンモニウムフルオリド(TBAF)、トリエチルアミン(TEA又はEt3N)、2,2,6,6−テトラメチルピペリジン1−オキシル(TEMPO)、トリメチルシリルエトキシメチル(SEM)、トリフラート又はCF3SO2−(Tf)、トリフルオロ酢酸(TFA)、1,1’−ビス−2,2,6,6−テトラメチルヘプタン−2,6−ジオン(TMHD)、O−ベンゾトリアゾール−1−イル−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート(TBTU)、薄層クロマトグラフィー(TLC)、テトラヒドロフラン(THF)、トリメチルシリル又はMe3Si(TMS)、p−トルエンスルホン酸一水和物(TsOH又はpTsOH)、4−Me−C6H4SO2−又はトシル(Ts)、並びにN−ウレタン−N−カルボキシ無水物(UNCA)。接頭辞ノルマル(n)、イソ(i−)、二級(sec−)、三級(tert−)、及びネオを含む従来の命名法は、アルキル部分とともに用いられるとき、それらの慣例の意味を有する。(J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.)。
本発明の化合物は、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって、市販の出発物質で始めて調製することができる。以下の概要は、このような化合物を調製するのに適切な反応スキームである。更なる例示は、具体的な実施例に見出すことができる。
boc tert−ブトキシカルボニル
CH2Cl2 ジクロロメタン
Cs2CO3 炭酸セシウム
DCM ジクロロメタン
DMF N,N−ジメチルホルムアミド
DMSO ジメチルスルホキシド
EtOAc 酢酸エチル
HATU O−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ヒューニッヒ塩基 N,N−ジイソプロピルエチルアミン
HCl 塩化水素
LC−MS 液体クロマトグラフィー質量分析
HPLC 高圧液体クロマトグラフィー
MeOH メチルアルコール
MgSO4 硫酸マグネシウム
nBuLi n−ブチルリチウム
NaCl 塩化ナトリウム
Na2CO3 炭酸ナトリウム
NaOMe ナトリウムメトキシド
Na2SO4 硫酸ナトリウム
NH4OH 水酸化アンモニウム
NMP 1−メチル−2−ピロリドン
NMR 核磁気共鳴
Pd(OAc)2 酢酸パラジウム(II)
TFA トリフルオロ酢酸
THF テトラヒドロフラン
TLC 薄層クロマトグラフィー
TMSCl トリメチルシリルクロリド
試薬は、Aldrich、Oakwood、Matrix、又は他の供給業者から購入し、更に精製することなく用いた。加熱のためにマイクロ波照射を用いる反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを用いて実施した。数ミリグラム〜数グラムの規模の精製は、シリカゲルフラッシュカラムの溶離等の当業者に公知の方法によって実施し;また、場合によっては、CombiFlashシステムで溶離させる使い捨ての予め充填されたマルチグラムシリカゲルカラム(RediSep)を使用することによって、分取フラッシュカラム精製を行った。また、Biotage(商標)及びISCO(商標)も、中間体の精製のために、本発明で用いてもよかったフラッシュカラム装置である。
DCM(168mL)中の5−フルオロ−インダン−1−オン(15g、104.83mmol)の撹拌した溶液にメタンスルホン酸(120mL)を0℃で加えた。この清澄な溶液にナトリウムアジド(9.5g、146.76mmol)を−10℃で40分間かけて分割して加えた。混合物を−10℃で2時間撹拌し、20%NaOH水溶液を0℃で滴下して、15分間撹拌した(TLC、シリカ;ヘキサン中の50%酢酸エチル、Rf=0.3)。DCMを分離した後、水性部分をDCM(2×50mL)で抽出し、有機部分を乾燥させ濃縮し、粗生成物を通常のカラムクロマトグラフィー(シリカゲル100−200、生成物をヘキサン中の60%酢酸エチルで溶離した)によって精製して、6−フルオロ−3,4−ジヒドロ−2H−イソキノリン−1−オン(12.0g、69.31%)を白色の固体として得た。LC−MS:166.0(M+H).
乾燥THF(30mL)中の6−フルオロ−3,4−ジヒドロ−2H−イソキノリン−1−オン(2.5g、15.14mmol)の撹拌した溶液にイソブチロニトリル(3)(5.4mL、60.54mmol)を加えた。この溶液にトルエン中の0.5(M)KHMDS(104mL、52mmol)を0℃でゆっくりと加えると、これは黄色を帯びた粘性液体に変わった。混合物を70℃で4時間加熱した(LCMSによってモニタリングした)。室温に冷却し、イソブチロニトリルの第2ロット(3mL、33.42mmol)を加え、もう一度70℃で加熱し16時間撹拌した(TLC、シリカ;ヘキサン中の50%酢酸エチル、Rf=0.25)。反応混合物を冷やし;氷冷水(50mL)でクエンチし、酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。合わせた有機部分を濃縮し、得られた粗生成物をCombiFlashカラム(ヘキサン中の40−60%酢酸エチルを溶離剤として使用した)によって精製して、2−メチル−2−(1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル)−プロピオニトリル(2.5g,77.09%)を白色の固体として得た。LC−MS:215.2(M+H).
乾燥ジオキサン(50mL)中の2−メチル−2−(1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル)−プロピオニトリル(2.5g,11.68mmol)の撹拌した溶液に、2,6−ジブロモ−ベンズアルデヒド(4.6g,17.52mmol)、Cs2CO3(7.6g、23.36mmol)を加えた。反応混合物をアルゴンで脱気し、Pd(dba)2(134mg、0.234mmol)及びキサントホス(206mg、0.35mmol)を加え、もう一度脱気した。混合物を100℃で3時間加熱し、室温に冷却し、セライトパッドで濾過し;酢酸エチル(3×50mL)で洗浄した。混合物を濃縮し、CombiFlashカラム(ヘキサン中の40%酢酸エチルで溶離した)によって精製して、2−[2−(3−ブロモ−2−ホルミル−フェニル)−1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(2.5g,53.87%)を明褐色の固体として得た。LC−MS:397.2(M+H).
ジオキサン(35mL)中の、6−クロロ−2−メチル−4−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−2H−ピリダジン−3−オン(1.5g,4.29mmol)(米国特許出願公開第2012/40949号)、ビス(ピナコラト)ジボロン(1.4g、5.57mmol)及びKOAc(乾燥)(1.3g、12.86mmol)の反応混合物をアルゴン下で脱気し、X−Phos(307mg、0.64mmol)及びPd(OAc)2(96mg、0.43mmol)を加え、98℃で15分間撹拌した。褐色の反応混合物は緑がかった褐色の溶液に変わった(LCMSによってモニタリングした)。フラスコを加熱浴から引き上げ、冷却し、ジオキサン−水(1:1;90mL)、n−BuOH(10.5mL)中の2−[2−(3−ブロモ−2−ホルミル−フェニル)−1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(1.53g,3.86mmol)及びK2CO3(2.37g、17.15mmol)の脱気した懸濁液を含む第2のフラスコの中へアルゴン下でセライトの短いプラグを通して濾過した。反応混合物をアルゴンで脱気し、トリシクロヘキシルホスフィン(359mg、1.28mmol)、及びPd(dba)2(369mg、0.642mmol)を加え、もう一度脱気し、110℃で1時間加熱した。反応系を室温に冷却し、セライトのプラグを通して濾過し;酢酸エチル(3×100mL)で洗浄した。濾液を濃縮し、合わせた粗生成物を通常のカラムクロマトグラフィー(通常のシリカゲル100−200メッシュ、DCM中の2〜2.5%MeOHで溶離した)によって精製して、2−[2−(2−ホルミル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−イリダジン−3−イル}−フェニル)−1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(1.5g、55.56%)を明褐色の固体として得た。LC−MS:632.6(M+H).
DCM(55mL)及びMeOH(36mL)中の2−[2−(2−ホルミル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−イリダジン−3−イル}−フェニル)−1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(3g,4.75mmol)の撹拌した溶液に、水(3.6mL)中の水素化ホウ素ナトリウム(360mg、9.51mmol)の溶液を0℃で加えた。反応混合物を同じ温度で20分間撹拌した。反応をTLCによりモニタリングした(シリカ、UV/DNP、DCM中の5%MeOH、Rf=0.35)。反応を氷でクエンチし、有機部分を分離し乾燥させ濃縮した)。粗生成物を通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィー(シリカ、100−200、DCM中の2−2.5%MeOHで溶離した)により精製した。精製した物質をDCM及びヘキサンで再結晶して2−[2−(2−ヒドロキシメチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−フェニル)−1−オキソ−1,2,3,4−テトラヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(2.1g、69.7%)を白色の固体として得た。LC−MS:634.6(M+H).
1−ブロモ−3,5−ジフルオロベンゼン(300g、1.55mol、当量:1.00)、イソブチロニトリル(215g、3.11mol、当量:2)及びTHF(1.2L)を5Lの3首フラスコに室温で装填した。1M LiHMDS(1.71L、1.71mol、当量:1.1)溶液を冷水浴下で温度範囲15−22℃で滴下し;添加に2.5時間要した。2.5時間後、HPLCによると91%変換されていた(SM9%及びジアルキル化12%)。更にLiHMDS溶液0.1当量を加えた。一晩撹拌すると97%変換された(SM3%及びジアルキル化21%)。反応を6N HClでpH約3−4にクエンチした。トルエンで抽出し(2回);次に合わせた有機物を濃縮し;更なるトルエンを使用して水及び過剰イソブチロニトリルも除去した。ジアルキル化した副生物が濃縮中に現れ;n−ヘプタンおよそ600mLを加え、次に室温で一晩撹拌した。溶液を濾過しほとんどの副生物を固体として除去し;ヘプタンで洗浄した。濾液を濃縮して90%HPLC純度を有する2−(3−ブロモ−5−フルオロフェニル)−2−メチルプロパンニトリル(337.9g、1.26mol、80.8%収率)を得た(SMは無くジアルキル化9%)。
2−(3−ブロモ−5−フルオロフェニル)−2−メチルプロパンニトリル(172g、710mmol、当量:1.00)をTHF(1.03L)中に溶解し、次に溶液を−75℃に冷やした。2M LDA(373mL、746mmol、当量:1.05)を溶液に滴下し、−70℃未満の温度に維持した。更に2時間撹拌し、アリコートをドライアイスを用いて試験し;完全に変換されていた。別の3Lの丸底フラスコにドライアイス及びTHFを加えた。ドライアイスで逆クエンチし;アニオン溶液全体を移すのに30分要し、−50℃未満(−60〜−50℃)に温度を維持した。更なる1時間の撹拌の後、室温まで温まるにまかせた。水を加え、6N HCl溶液(pH3−4)で酸性化した。
相を分離しMTBE及びDCMで抽出した。合わせた有機物を濃縮した。2−ブロモ−4−(2−シアノプロパン−2−イル)−6−フルオロ安息香酸(246g、765mmol、108%収率)を油状物(約89%のHPLC純度)として得た。更なる精製をすることなく次反応へ移した。
CDI(3.33g、20.6mmol、当量:1.4)を2−ブロモ−4−(2−シアノプロパン−2−イル)−6−フルオロ安息香酸(4.2g、14.7mmol、当量:1.00)のTHF(42mL)溶液に室温で分割して加えた。3時間撹拌した。水酸化アンモニウム(17.1g、19.1mL、147mmol、当量:10)を混合物に加えた。2時間撹拌した。20%K2CO3溶液で洗浄し、未反応出発物質を除去し、次に1N HClで洗浄した。EtOAc/ヘプタンから結晶化して2−ブロモ−4−(2−シアノプロパン−2−イル)−6−フルオロベンズアミド(3.4g、11.9mmol、81.2%収率)を得た。
ジオキサン−水(7:1;16mL)中の2−ブロモ−4(シアノ−ジメチル−メチル)−6−フルオロ−ベンズアミド(2g,7.018mmol)及び2−((E)−2−エトキシ−ビニル)−4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン(1.783mL、8.421mmol)の撹拌した溶液に、K2CO3(1.94gm、14.04mmol)、続いてトリシクロヘキシルホスフィン(157mg、0.561mmol)を加えた。反応混合物を窒素でよく脱気した。この反応混合物にPd(dba)2(161mg、0.281mmol)を加え、もう一度窒素で脱気し、90℃で16時間加熱し、6N HCl(6mL)を加え、40℃に5時間加熱した(シリカTLC;ヘキサン中50%酢酸エチル、Rf=0.3)。反応混合物からジオキサンを減圧下で除去し、得られた粗残留物をヘキサン中の10%EtOAcで洗浄することによって精製して2−(8−フルオロ−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−イソキノリン−6−イル)−2−メチル−プロピオニトリル(1.26g、77.98%)を褐色の固体として得た。LC−MS:229.2(M−H).
DMA(28mL)中の2−(8−フルオロ−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−イソキノリン−6−イル)−2−メチル−プロピオニトリル(1.26gm、5.478mmol)の撹拌した溶液に、2−ブロモ−6−フルオロ−ベンズアルデヒド(1.66gm、8.217mmol)、炭酸カリウム(1.512gm、10.957mmol)、続いて塩化テトラエチルアンモニウム(118mg、0.712mmol)を、アルゴン下で加えた。反応混合物を78℃で24時間加熱し(シリカTLC;ヘキサン中50%酢酸エチル、Rf=0.50)、水を加えDCM(2×90mL)で抽出した。合わせた抽出物を濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィー(通常のシリカゲル100−200メッシュ;ヘキサン中25%EtOAcを溶離剤として使用した)により精製して、2−[2−(3−ブロモ−2−ホルミル−フェニル)−8−フルオロ−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(840mg、37.11%)を明黄色の固体として得た。LC/MC:412.8(M+)、414.8(M+2).
ジオキサン(50mL)中の、6−クロロ−4−[5−(2−ヒドロキシ−1,1−ジメチル−エトキシ)−ピリジン−2−イルアミノ]−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(1g、3.08mmol)(国際公開第2012020008A1号)、ビス(ピナコラト)ジボロン(1.06g、4.00mmol)及びKOAc(乾燥)(907mg、9.23mmol)の反応混合物をアルゴン下で脱気した。X−Phos(220mg、0.46mmol)及びPd(OAc)2(69mg、0.31mmol)を加え、98℃で15分間撹拌した(LCMSによってモニタリングした)。フラスコを加熱浴から引き上げ、冷却し、2−[2−(3−ブロモ−2−ホルミル−フェニル)−8−フルオロ−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(1.14g、2.77mmol)及びK2CO3(1.7g、12.31mmol)の脱気した懸濁液、ジオキサン(15.6mL)、水(15mL)、n−BuOH(3.7mL)を含む第2のフラスコの中へアルゴン下でセライトの短いプラグを通して濾過した。反応混合物をもう一度アルゴンで脱気し、トリシクロヘキシルホスフィン(257mg、0.92mmol)、Pd(dba)2(264mg、0.46mmol)を不活性雰囲気下で加え、反応混合物を110℃で1時間加熱した。反応系を室温に冷却し、セライトのプラグを通して濾過し、酢酸エチル(3×100mL)で洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、得られた粗生成物を通常のシリカカラムクロマトグラフィー(シリカゲル100−200メッシュ、DCM中2−2.5%MeOHで溶離した)により精製して、2−[8−フルオロ−2−(2−ホルミル−3−{5−[5−(2−ヒドロキシ−1,1−ジメチル−エトキシ)−ピリジン−2−イルアミノ]−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−フェニル)−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(1.1g、57.38%、400mgの混合物)を褐色の粘着性固体として得た。LC−MS:622.2(M+H).
DCM(46.7mL)及びMeOH(30.8mL)中の2−[8−フルオロ−2−(2−ホルミル−3−{5−[5−(2−ヒドロキシ−1,1−ジメチル−エトキシ)−ピリジン−2−イルアミノ]−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−フェニル)−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−イソキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(2.4g、3.85mmol)の撹拌した溶液に、水(3.4mL)中の水素化ホウ素ナトリウム(292mg、7.70mmol)の溶液を0℃で加えた。反応混合物を同じ温度で15分間撹拌した(シリカTLC;DCM中5%MeOH、Rf=0.4)。反応を氷(100g)でクエンチし、有機部分をDCM(200mL)で希釈し、分離し、乾燥させ濃縮した。得られた粗生成物を通常のシリカカラムクロマトグラフィー(シリカ、100−200、DCM中2%MeOHで溶離した)により精製した。精製した物質をDCM及びエーテルで再結晶して2−[8−フルオロ−2−(3−{5−[5−(2−ヒドロキシ−1,1−ジメチル−エトキシ)−ピリジン−2−イルアミノ]−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−2−ヒドロキシメチル−フェニル)−1−オキソ−1,2−ジヒドロ−soキノリン−6−イル]−2−メチル−プロピオニトリル(1.6g、66.45%)を白色の固体として得た。LC−MS:625.3(M+H).
ACN(80mL)中の6−アミノ−ピリジン−3−オール(4gm、36.364mmol)の撹拌した溶液に炭酸セシウム(47.41gm、145.45mmol)を加え、室温で1時間撹拌し、2−ブロモ−2−メチル−プロピオン酸エチルエステル(5.66gm、38.18mmol)を加え16時間撹拌した(シリカTLC;ヘキサン中50%EtOAc、Rf=0.5)。反応系に水(200mL)を加え、酢酸エチル(3×100mL)で抽出した。合わせた抽出物を濃縮し、得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー(通常のシリカゲル100−200メッシュ、ヘキサン中18〜22%EtOAcを溶離剤として使用した)により精製して2−(6−アミノ−ピリジン−3−イルオキシ)−2−メチル−プロピオン酸エチルエステル(4.4g、53.96%)を明黄色の固体として得た。LC/MS:224.8(M+H).
乾燥ジオキサン(80mL)中の2−(6−アミノ−ピリジン−3−イルオキシ)−2−メチル−プロピオン酸エチルエステル(2g、8.929mmol)及び4−ブロモ−6−クロロ−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(2.588gm、11.607mmol)の撹拌した溶液に、Cs2CO3(10.188gm、31.25mmol)を加えた。反応混合物をアルゴンでよく脱気し、キサントホス(774mg、1.339mmol)及びPd2(dba)3(654mg、0.714mmol)をアルゴン雰囲気下で加え、90℃で18時間加熱した。反応混合物を冷やし、セライトのプラグを通して濾過し;ジオキサン(50mL)で洗浄した。合わせた抽出物を濃縮し、粗生成物を得、これを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより溶離剤としてヘキサン中の18%EtOAcを使用して精製して、2−[6−(6−クロロ−2−メチル−3−オキソ−2,3−ジヒドロ−ピリダジン−4−イルアミノ)−ピリジン−3−イルオキシ]−2−メチル−プロピオン酸エチルエステル(2.7gm、82.44%)を黄色の固体として得た。LC−MS:367.0(M+H).
乾燥THF(25mL)中の2−[6−(6−クロロ−2−メチル−3−オキソ−2,3−ジヒドロ−ピリダジン−4−イルアミノ)−ピリジン−3−イルオキシ]−2−メチル−プロピオン酸エチルエステル(1g、2.73mmol)の撹拌した溶液に、LAH[3.8mL、3.8mmol、THF中1(M)溶液]を−40℃で(15分かけてシリンジを介して)滴下した。反応混合物を同じ温度で1時間撹拌した(シリカTLC;ヘキサン中50%EtOAcを溶離剤として使用;Rf=0.2)。水(0.1mL)を加えることによりクエンチし、10分間撹拌し、5%NaOH溶液(0.2mL)を加え、10分間撹拌し、もう一度水(0.2mL)を加え、10分間撹拌し、清澄な有機部分を分離し、乾燥させ濃縮し、粗生成物を通常のシリカカラムクロマトグラフィー(シリカゲル100−200メッシュ、ヘキサン中40−50%酢酸エチルで溶離した)により精製して6−クロロ−4−[5−(2−ヒドロキシ−1,1−ジメチル−エトキシ)−ピリジン−2−イルアミノ]−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(650mg、73.42%)をオフホワイトの固体として得た。LC−MS:325.2(M+H).
メタノール(150mL)中の4−メトキシベンズアルデヒド(20g、147.05mmol)の撹拌した溶液に、アミノエタノール(35.88g、588.23mmol)、酢酸(40.58g、676.47mmol)を加え、室温で20時間撹拌し、反応系にシアノ水素化ホウ素ナトリウム(5.54g、88.23mmol)を加え、室温で36時間撹拌した(シリカTLC;DCM中5%MeOHを溶離剤として使用した;Rf=0.2)。反応混合物に水(500mL)中の飽和NaHCO3を加え、EtOAc(3×300mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、減圧下で濃縮して2−(4−メトキシ−ベンジルアミノ)−エタノール(6.0g、22.51%)を赤色油状物として得た。LC−MS:182.2(M+H).
DCM(20mL)中の2−(4−メトキシベンジルアミノエタノール(1.0g、5.52mmol)の撹拌した溶液に、4−ブロモ−2−フルオロ安息香酸(1.21g、5.52)、DIPEA(1.18mL、7.18mmol)及びHATU(2.1g、5.52mmol)を加え、室温で16時間撹拌した(シリカTLC;移動相としてDCM中5%MeOH;Rf=0.5)。反応混合物を濃縮し;残留物に、飽和水性NH4Cl(50mL)を加えEtOAc(3×20mL)で抽出した。合わせた有機相を1%水性HCl(30mL)及び水(20mL)で洗浄した。分離した有機部分を乾燥させ、濃縮して粗製の固まりを得、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン中40%EtOAcで溶離した)により精製して4−ブロモ−2−フルオロ−N−(2−ヒドロキシ−エチル)−N−(4−メトキシ−ベンジル)−ベンズアミド(0.5g、23.68%)を黄色の液体として得た。LC−MS:382.2(M+)、384.2(M+2).
DMF(10mL)中の4−ブロモ−2−フルオロ−N−(2−ヒドロキシエチル)−N−(4−メトキシベンジル)−ベンズアミド(1.0g、2.61mmol)の撹拌した溶液に、NaH[(パラフィン油中60%);0.125g、3.14mmol]を室温で加え、アルゴン下で16時間撹拌した(シリカTLC;ヘキサン中50%EtOAc、Rf=0.5)。反応混合物に水性飽和NH4Cl(30mL)を加えEtOAc(3×25mL)で抽出した。合わせた抽出物を水(50mL)、続いてブライン(30mL)で洗浄し;乾燥させ濃縮して粗製の固まりを得、これをフラッシュクロマトグラフィー(通常のシリカゲル、ヘキサン中25%EtOAcを溶離剤として使用した)により精製して、8−ブロモ−4−(4−メトキシ−ベンジル)−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オン(0.6g、63.28%)を白色の固体として得た。LC−MS:362.2(M+)、264.2(M+2).
密閉したチューブ中で、8−ブロモ−4−(4−メトキシ−ベンジル)−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オン(2g、5.52mmol)、BINAP(0.206g、0.33mmol)及びCs2CO3(4.67g、14.36mmol)をジオキサン(35mL)中に取った。反応混合物をアルゴンで5分間脱気し、イソブチルアルデヒド(27)(1.03g、14.36mmol)及びPd(OAc)2(50mg、0.22mmol)をアルゴン雰囲気下で加えた。反応混合物を80℃にゆっくりと加熱し、16時間撹拌した(シリカTLC;ヘキサン中40%EtOAc、Rf=0.4)。反応混合物に水性飽和NH4Cl(50mL)を室温で加え、EtOAc(2×40mL)で抽出し、合わせた抽出物を水(50mL)で洗浄し、乾燥させ濃縮した。得られた粗生成物混合物を、フラッシュクロマトグラフィー(通常のシリカゲル、移動相としてヘキサン中25%EtOAcを使用した)により精製して純粋な2−[4−(4−メトキシ−ベンジル)−5−オキソ−2,3,4,5−テトラヒドロ−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−8−イル]−2−メチル−プロピオンアルデヒド(1.0g、51.22%)を白色の固体として得た。LC−MS:354.0(M+H).
TFA(66.77mL、866.85mmol)中の2−[4−(4−メトキシ−ベンジル)−5−オキソ−2,3,4,5−テトラヒドロ−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−8−イル]−2−メチル−プロピオンアルデヒド(1.5g、4.24mmol)の撹拌した溶液を密閉したチューブに取り、反応混合物を100℃で1時間加熱した(シリカTLC;ヘキサン中60%EtOAc、Rf=0.2)。揮発物を減圧下で除去し;残留物を水性飽和NaHCO3で中和し、EtOAc(2×200mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ濃縮して、粗残留物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー(通常のシリカゲル、ヘキサン中60%EtOAcを溶離剤として使用した)により精製して2−メチル−2−(5−オキソ−2,3,4,5−テトラヒドロ−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−8−イル)−プロピオンアルデヒド(0.7g、70.6%)を白色の固体として得た。LC−MS:234.4(M+H).
ジオキサン(15mL)中の2−メチル−2−(5−オキソ−2,3,4,5−テトラヒドロ−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−8−イル)−プロピオンアルデヒド(0.5g、2.14mmol)及び2−ブロモ−6−クロロ−ベンズアルデヒド(30)(1.175g、5.36mmol)の撹拌した溶液に、Cs2CO3(1.74g、5.36mmol)を加えアルゴンで5分間脱気した。脱気した反応混合物に、キサントホス(0.124g、0.215mmol)及びPd(dba)2(0.062g、0.107mmol)をアルゴン下で加えた。反応系を密閉条件下で105℃に6時間加熱し、続いて室温で16時間撹拌した。反応混合物をEtOAc(300mL)で希釈し、水(100mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗残留物をフラッシュクロマトグラフィー(通常のシリカゲル、ヘキサン中30%EtOAc)により精製して、2−クロロ−6−[8−(1,1−ジメチル−2−オキソ−エチル)−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル]−ベンズアルデヒド(0.45g、56.4%)をオフホワイトの固体として得た。LC−MS:372.2(M+)、374.2(M+2).
6−クロロ−4−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(0.75g、2.38mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(1.2g、4.76mmol)、(X−phos)(0.17g、0.357mmol)及びKOAc(0.7g、7.14mmol)の撹拌した溶液を乾燥ジオキサン(75mL)中に取り、減圧下に置き、アルゴンで充填しなおした。これに酢酸パラジウム(0.053g、0.238mmol)を加え、フラスコを排気し、アルゴンで充填しなおした。混合物を油浴中で100℃に加熱し、30分間撹拌した(LCMSによってモニタリングした)。少量の脱Cl物質が観察された。加熱を80℃まで下げた。フラスコを加熱浴から引き上げたが、撹拌を続け、以下の試薬:2−クロロ−6−[8−(1,1−ジメチル−2−オキソ−エチル)−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル]−ベンズアルデヒド(0.883g、2.38mmol)、K2CO3(1.64g、11.90mmol)、水(5mL;別々に脱気した)、トリシクロヘキシルホスフィン(200mg、0.71mmol)及びPd(dba)2(205mg、0.36mmol)を加えた。フラスコを撹拌し、80℃で2時間加熱し、次に室温に冷却した。水(100mL)に注ぎ、EtOAc(3×150mL)で抽出し、合わせた抽出物をブライン(200mL)で洗浄し、水性部分をDCM(200mL)中5%MeOHで再抽出した。有機抽出物の両方を合わせ、乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン中70%EtOAc)により精製して、2−[8−(1,1−ジメチル−2−オキソ−エチル)−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル]−6−[5−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル]−ベンズアルデヒド(0.55g、37.5%)をオフホワイトの固体として得た。LC−MS:616.2(M+H).
メタノール(90mL)及びジクロロメタン(150mL)中の2−[8−(1,1−ジメチル−2−オキソ−エチル)−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル]−6−[5−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル]−ベンズアルデヒド(2.5g、4.065mmol)の撹拌した溶液を氷浴で冷やした。これに水素化ホウ素ナトリウム(0.92g、24.39mmol)を加えた。混合物を10分間撹拌し(シリカTLC;EtOAcのみを溶離剤として使用した;Rf=0.2)、水(600mL)で希釈しジクロロメタン(2×600mL)で抽出した。合わせた有機層をブライン(600mL)で洗浄し、乾燥させ減圧下で濃縮した。得られた残留物をヘキサン中80%EtOAcで洗浄して、8−(2−ヒドロキシ−1,1−ジメチル−エチル)−4−{2−ヒドロキシメチル−3−[5−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル]−フェニル}−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オン(2g、79.39%)をオフホワイトの固体として得た。LC−MS:620.4(M+H).
DCM(220mL)中の2−クロロ−ベンズアルデヒド(10g、71.42mmol)の撹拌した溶液に、O−メチル−ヒドロキシルアミン塩酸塩(35)(7.11g、85.71mmol)及びピリジン(23mL)を加えた。反応混合物を室温で1時間撹拌した(シリカTLC;ヘキサン中15%EtOAc、Rf=0.6)。反応混合物を濃縮し、得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサン中10%EtOAcを溶離剤として使用して精製して[(2−クロロフェニル)メチリデン](メトキシ)アミン(9g、74.3%)を無色の油状物として得た。LC−MS:170.4(M+H).
密閉したチューブ中で[(2−クロロフェニル)メチリデン](メトキシ)アミン(5g、29.58mmol)をDCE(100mL)中に取り、続いてN−ブロモスクシンイミド(5.23g、29.58mmol)、トリフルオロ酢酸銀(0.65g、2.95mmol)、酢酸パラジウム(0.66g、2.95mmol)及び酢酸(1.77g、29.58mmol)を加えた。得られた混合物を120℃に24時間加熱した。室温で水(150mL)及びDCM(300mL)を加え、混合物をセライトパッドで濾過した。有機層を分離し、水層をジクロロメタン(200mL)で再抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濃縮し、得られた粗製の固まりをフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサンのみを使用して精製して、[(2−ブロモ−6−クロロフェニル)メチリデン](メトキシ)アミン(4.0g、54.4%)を黄色に着色した液体として得た。
密閉したチューブ中で[(2−ブロモ−6−クロロフェニル)メチリデン](メトキシ)アミン(4.0g、16.12mmol)をTHF−H2O(10:1;110mL)中に取った。反応混合物に、PTSA(6.12g、32.25mmol)、続いてパラホルムアルデヒド(4.83g、161.29mmol)を加え、100℃に30分間加熱した(シリカTLC;ヘキサンのみを溶離剤として使用した;Rf=0.3)。反応混合物をEtOAc(500mL)で希釈し、水(200mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた粗残留物をフラッシュクロマトグラフィーによりヘキサン中5%EtOAcを溶離剤として使用して精製して2−ブロモ−6−クロロ−ベンズアルデヒド(3.0g、84.75%)を黄色の固体として得た。
アルゴン下の丸底フラスコに、5−ブロモ−ピリジン−2−イルアミン(10g、57.8mmol)、メタンスルフィン酸ナトリウム(9.4g、92.48mmol)、銅(I)トリフラート−ベンゼン錯体(1.74g、3.468mmol)、ラセミtrans−1,2−ジアミノシクロヘキサン(40)(1.41mL、11.742mmol)及びDMSO(50mL)を入れた。反応混合物を110℃で16時間加熱した。反応の完了後、混合物を氷冷した水に注ぎ、水層をEtOAc(3×100mL)で抽出した。合わせた有機層を飽和ブライン溶液で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ減圧下で濃縮した。粗製の固まりを、EtOAc−ヘキサンで溶離させる通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミン(4.0g、40.18%)を褐色の固体として得た。
THF(40mL)中の5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミン(1.9g、11.047mmol)の溶液にカリウムtert−ペントキシド(THF中2M溶液)(4.2mL、8.4mmol)を滴下した。混合物を室温で10分間撹拌し、次に、氷浴中で冷却し、4−ブロモ−6−クロロ−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(2.96g、13.256mmol)をTHF(20mL)中に溶解し、先の混合物に滴下した。混合物全体をもう一度室温に暖め、1.5時間撹拌した。反応の完了後、それを1M HClでクエンチし、混合物をDCM中に取り、焼結式漏斗で濾過した。濾液を飽和ブライン溶液で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ減圧下で濃縮して粗製の6−クロロ−4−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(1.0g、28.76%)をオフホワイトの固体として得、これを更なる精製をすることなく次の工程に直接使用した。
DCM(150mL)中の(2−ブロモ−6−ニトロ−フェニル)−メタノール(15.0g、64.65mmol)の溶液に、tert−ブチルジメチルシリルクロリド(29.233g、193.94mmol)及びTEA(19.6mL、193.94mmol)を順次加えた。得られた混合物を60℃で40時間撹拌した。反応をTLCによりモニタリングした(酢酸エチル:ヘキサン=1:9;Rf=0.7)。溶媒を減圧下で除去した。反応混合物を酢酸エチル(1.5L)と水(1.0L)との間で分配した。有機層を乾燥させ、濾過し濃縮した。粗生成物を、ヘキサンからヘキサン中5%酢酸エチルで溶離するシリカゲル(通常の、100−200メッシュ)カラムクロマトグラフィーで精製して純粋な(2−ブロモ−6−ニトロ−ベンジルオキシ)−tert−ブチル−ジメチル−シラン(21.0gm、93.81%)を明黄色の液体として得た。LC−MS:346.4(M+)、348.4(M+2).
エタノール−水(1:1;340mL)中の、(2−ブロモ−6−ニトロ−ベンジルオキシ)−tert−ブチル−ジメチル−シラン(7.0gm、20.29mmol)、鉄粉末(3.83gm、68.58mmol)及び塩化アンモニウム(6.121gm、114.44mmol)の混合物を90℃で4時間加熱した(シリカTLC;酢酸エチル:ヘキサン=1:19、Rf=0.4)。反応混合物を焼結式漏斗中のセライトパッドで濾過し、酢酸エチル(2×20mL)で洗浄した。合わせた濾液と洗浄液を濃縮し、酢酸エチル(1.5L)を粗生成物に加え水(700mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し濃縮し、得られた粗生成物を、ヘキサン〜ヘキサン中2%酢酸エチルで溶離する中性アルミナカラムクロマトグラフィーによって精製して、純粋な3−ブロモ−2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−フェニルアミン(5.8gm、90.37%)を明橙色の液体として得た。
ジオキサン(60.0mL)中の3−ブロモ−2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−フェニルアミン(1.0gm、3.164mmol)の溶液に、4,4,5,5,4’,4’,5’,5’−オクタメチル−[2,2’]ビ[[1,3,2]ジオキサボロラニル](4.018gm、15.821mmol)及びKOAc(0.932gm、9.493mmol)を加えた。混合物をアルゴンで脱気し、この混合物にPd(OAc)2(71mg、0.316mmol)及びX−Phos(211mg、0.443mmol)を加え、脱気をアルゴンを用いて更に5分間続け、次に、90℃で3時間加熱した(シリカTLC;酢酸エチル:ヘキサン=1:19、Rf=0.4)。反応混合物をセライトパッドで濾過し、ジオキサン(2×5mL)で洗浄し濾液と合わせた。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を、ヘキサン〜ヘキサン中2%酢酸エチルで溶離する中性アルミナカラムクロマトグラフィーにより精製して純粋な2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミン(350mg、30.44%)を明橙色の固体として得た。LC−MS:364.2(M+H).
密閉したチューブ中でジオキサン(52.0mL)中の2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミン(1.3g、3.58mmol)及び5−ブロモ−1−メチル−3−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−1H−ピリジン−2−オン(1.407g、3.58mmol)の撹拌した混合物に、1(M)K2CO3水溶液(10.7mL)を加えアルゴンで脱気した。S−Phos(220mg、0.54mmol)及びPd(PPh3)4(207mg、0.18mmol)を加え、続いてもう一度アルゴンで脱気し;密閉し90℃で2.5時間加熱した(シリカTLC;酢酸エチルのみ、Rf=0.5)。反応混合物を室温に冷却し酢酸エチル(250mL)を加えた。有機部分を水(120mL)及びブライン(120mL)で洗浄し、乾燥させ濾過し、真空中で濃縮して粗製の固まりを得、これを通常のシリカゲル(通常の、100−200メッシュ)カラムクロマトグラフィーによりヘキサン中50%酢酸エチルから純酢酸エチルへの勾配極性溶離液を使用して精製して、純粋な5−[3−アミノ−2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−フェニル]−1−メチル−3−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−1H−ピリジン−2−オン(1.31g、66.61%)をオフホワイトの固体として得た。LC−MS:550.4(M+H).
DCM(70.0mL)中の5−[3−アミノ−2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−フェニル]−1−メチル−3−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−1H−ピリジン−2−オン(700mg、1.27mmol)の溶液にトリエチルアミン(0.44mL、3.18mmol)を加え氷浴で0℃に冷却し、続いてホスゲン溶液[0.8mL、1.53mmol(トルエン中20%)]を添加し、0℃で10分間撹拌し、続いて5−クロロ−2,3−ジヒドロ−1H−イソインドール(489mg、3.18mmol)を加え、更に30分間撹拌した(シリカTLC;酢酸エチル100%、Rf=0.45)。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗生成物をシリカゲル(通常の、100−200メッシュ)カラムクロマトグラフィーによりヘキサン中50%酢酸エチルから100%酢酸エチルへの勾配溶離液を使用して精製して、5−クロロ−1,3−ジヒドロ−イソインドール−2−カルボン酸(2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−フェニル)−アミド(910mg、97.99%)を褐色の粘着性固体として得た。LC−MS:729.4(M+H).
メタノール(45.0mL)及びDCM(18.0mL)中の5−クロロ−1,3−ジヒドロ−イソインドール−2−カルボン酸(2−(tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル)−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−フェニル)−アミド(900mg、1.23mmol)の溶液に12(N)HCl(0.9mL)を室温で加え、10分間撹拌した(シリカTLC;メタノール:DCM=1:19を溶離剤として使用した、Rf=0.4)。飽和NaHCO3溶液を泡立ちが止まるまで滴下した。反応物の固まりをDCM(600mL)で希釈し、水(100mL)、ブライン(100mL)で洗浄し、乾燥させ真空中で濃縮して粘着性の粗製の固まりを得、これをDCM−ヘキサン混合物から再結晶により精製して純粋な5−クロロ−1,3−ジヒドロ−イソインドール−2−カルボン酸(2−ヒドロキシメチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−フェニル)−アミド(620mg、81.69%)を灰色固体として得た。LC−MS:615.2(M+H).
10%H2SO4(82mL)中のニコチンアミド(10.0g、81.88mmol)の撹拌した溶液に、2,2−ジメチル−プロピオン酸(41.8g、409.4mmol)及びAgNO3(4.2g、24.564mmol)を加え、混合物を撹拌しながら70℃で加熱した。H2O(122mL)中の(NH4)2S2O8(56.1g、245.64mmol)の溶液を、CO2発生が止まるまで加えた。反応系をアルゴン雰囲気下で同じ温度で更に1時間撹拌した。TLCによりモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却し、水性NH3の添加によりpH約9に調整し、EtOAc(3×200mL)で抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製化合物をCombiFlashカラムクロマトグラフィーにより溶離溶媒としてEtOAc−ヘキサンを使用して精製して6−tert−ブチル−ニコチンアミド(9.6g、66%)をオフホワイトの固体として得た。LCMS:179.0(M+H).
10%H2SO4(90mL)中の6−tert−ブチル−ニコチンアミド(2g、11.221mmol)の撹拌した溶液に、3−フタリミドプロパン酸(9.84g、44.883mmol)、AgNO3(1.91g、11.221mmol)、(NH4)2S2O8(20.5g、89.767mmol)及びセチルトリメチルアンモニウムブロミド(1.8g、4.937mmol)をそれぞれ加え、混合物全体を90℃で30分間加熱した。この混合物を70℃に冷却し、ACN−H2O(3:7)(100mL)中の(NH4)2S2O8(20.5g、89.767mmol)の溶液を加え、混合物をもう一度90℃で3時間加熱した。混合物をもう一度70℃に冷却し、ACN−H2O(3:7)(100mL)中の(NH4)2S2O8(20.5g、89.767mmol)の溶液を加え、90℃に16時間維持した。RMをSiO2TLCによりモニタリングし、少量のSMがなお存在していたので、混合物をもう一度70℃に冷却し、ACN−H2O(3:7)(100mL)中の(NH4)2S2O8(20.5g、89.767mmol)の溶液を加え、更に6時間90℃に維持した。ある程度の量の出発物質が混合物中に存在し、これは長時間の加熱後でも消費されなかった。反応混合物を室温に冷却し、水性NH3の添加によりpH約7に中和し、DCM(2×300mL)で抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ減圧下で濃縮して粗製の固まりを得、これを通常のシリカゲルカラムの小さなベッドに通して所望でない不純物を除去し、6−tert−ブチル−4−[2−(1,3−ジオキソ−1,3−ジヒドロ−イソインドール−2−イル)−エチル]−ニコチンアミド(1.7gの粗製)を褐色の粘性油状物として他のいくつかの不純物と一緒に得た。この純粋でない物質を更なる精製をすることなく次の工程に直接使用した。LCMS:353.0(M+H).
CH3CN(40mL)中の(2.55g粗生成物、7.256mmol)の撹拌した溶液に、NH2NH2.H2O(0.68mL、14.513mmol)を加え混合物を3時間還流した。SiO2TLCによってモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却し、焼結式漏斗で濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。粗化合物を通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてEtOAc−ヘキサンを使用して精製して6−tert−ブチル−3,4−ジヒドロ−2H−[2,7]ナフチリジン−1−オン(165mg、2ステップで4.5%)をオフホワイトの固体として得た。LCMS:205.0(M+H).
6−tert−ブチル−3,4−ジヒドロ−2H−[2,7]ナフチリジン−1−オン(0.46g、2.252mmol)、2,6−ジブロモ−ベンズアルデヒド(2.97g、11.26mmol)、キサントホス(65.2mg、0.113mmol)及びCs2CO3(1.03g、3.153mmol)を1,4−ジオキサン(4.5mL)に取り、10分間混合物にアルゴンガスを通してバブリングした。Pd(dba)2(38.8mg、0.068mmol)をそれに加え、100℃で4時間撹拌した。(TLCによりモニタリングして)反応の完了後、得られた混合物を室温に冷却し、これをEtOAcと水との間で分配した。有機層を集め、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーでEtOAc−ヘキサンを使用して精製して2−ブロモ−6−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−ベンズアルデヒド(416.0mg、47.7%)をオフホワイトの固体として得た。LCMS:387.0(M)及び389.0(M+2).
乾燥1,4−ジオキサン(22mL)中の、5−クロロ−1−メチル−3−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−1H−ピリジン−2−オン(506mg、1.29mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(424.7mg、1.67mmol)、X−phos(92mg、0.193mmol)及びKOAc(379mg、3.86mmol)の溶液を減圧下に置き、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(OAc)2(31.7mg、0.142mmol)をそれに加え、フラスコを排気し、5分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを0.5時間還流し、次に室温に冷却した。固体をセライトベッドで濾別し、濾液を次反応のために直接使用した。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−n−ブタノール(1:1:0.4)(13.6mL)中の、2−ブロモ−6−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−ベンズアルデヒド(0.5g、1.29mmol)、K2CO3(888mg、6.44mmol)及びCy3P(108mg、0.39mmol)の混合物を脱気し、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(dba)2(111mg、0.193mmol)、続いて先の反応の粗溶液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を110℃で1時間加熱した。TLC及びLC−MSによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてMeOH−EtOAcを使用して粗生成物を得て2−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−6−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−ベンズアルデヒド(488mg、2ステップで61%)をオフホワイトの固体として得た。LCMS:621.2(M+H).
メタノール−DCM(2:3)(15.2mL)中の2−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−6−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−ベンズアルデヒド(1130mg、1.82mmol)の溶液を0℃に冷却し、水(3.8mL)中のNaBH4(344g、9.11mmol)の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を5分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム(344g、9.11mmol)を分割して加え、10分間撹拌した。LCMSによってモニタリングして反応の完了後、水で希釈し、DCMで抽出し、Na2SO4で乾燥させ減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュシリカゲルでDCM中の塩基性溶液(60:10:1のDCM−MeOH−NH4OH)を使用して、6−tert−ブチル−2−(2−ヒドロキシメチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−フェニル)−3,4−ジヒドロ−2H−[2,7]ナフチリジン−1−オンを得、これをジエチルエーテル及びn−ペンタンで洗浄することによって更に精製し、オフホワイトの固体として6−tert−ブチル−2−(2−ヒドロキシメチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリジン−3−イル}−フェニル)−3,4−ジヒドロ−2H−[2,7]ナフチリジン−1−オン(215mg、18.96%)を得た。LCMS:623.2(M+H).
乾燥1,4−ジオキサン(12.5mL)中の、6−クロロ−2−メチル−4−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−2H−ピリダジン−3−オン(280mg、0.801mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(264.3mg、1.041mmol)、X−phos(57.2mg、0.12mmol)及びKOAc(235.7mg、2.402mmol)の溶液を減圧下に置き、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(OAc)2(19.7mg、0.088mmol)をそれに加え、フラスコを排気し5分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを16分間還流し、次に室温に冷却した。固体をセライトベッドで濾別し、濾液を次反応のために直接使用した。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−n−ブタノール(1:1:0.25)(8.1mL)中の、2−ブロモ−6−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−ベンズアルデヒド(56)(305.0mg、0.788mmol)、K2CO3(543.4mg、3.938mmol)及びCy3P(66.3mg、0.236mmol)の混合物を脱気し15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(dba)2(67.9mg、0.118mmol)、続いて先の反応の粗溶液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を110℃で1時間加熱した。TLC及びLC−MSによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗製の固まりを得、これを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてEtOAcを使用して精製して2−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−6−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−ベンズアルデヒド(291.0mg、2ステップで59.44%)を黄色の固体として得た。LCMS:622.6(M+H).
メタノール−DCM(2:3)(22.2mL)中の2−(6−tert−ブチル−1−オキソ−3,4−ジヒドロ−1H−[2,7]ナフチリジン−2−イル)−6−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−ベンズアルデヒド(700mg、1.13mmol)の溶液を0℃に冷却し、水(4mL)中のNaBH4(213mg、5.63mmol)の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を5分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム(213mg、5.63mmol)を分割して加え、もう一度その温度で10分間撹拌した。LCMSによってモニタリングして反応の完了後、水を加えDCMで抽出した。合わせた有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュシリカゲルでDCM中の4−6%マジック溶液(比率60:10:1のDCM−MeOH−NH4OH)を使用して精製して6−tert−ブチル−2−(2−ヒドロキシメチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−フェニル)−3,4−ジヒドロ−2H−[2,7]ナフチリジン−1−オンを得、これをジエチルエーテル及びn−ペンタンで洗浄することによって更に精製してオフホワイトの固体(322mg、46.00%)を得た。LCMS:624.4(M+H).
DMSO(10mL)中の、6−tert−ブチル−8−フルオロ−2H−フタラジン−1−オン(58)(1g、4.545mmol)、1,3−ジブロモ−2−メチル−ベンゼン(2.27g、9.091mmol)、CuI(0.26g、1.364mmol)及びK2CO3(0.63g、4.545mmol)の懸濁液を脱気し、続いて密閉したチューブ中で15分間アルゴンで充填しなおし、混合物を140℃で18時間加熱した。LC−MSによってモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却し、EtOAc−H2Oで希釈した。有機層を飽和ブライン溶液で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルで溶離溶媒としてEtOAc−ヘキサンを使用して精製して2−(3−ブロモ−2−メチル−フェニル)−6−tert−ブチル−8−フルオロ−2H−フタラジン−1−オン(4.65g、43%)を明黄色の固体として得た。LCMS:389.0(M+)、391.2(M+2).
2−(3−ブロモ−2−メチル−フェニル)−6−tert−ブチル−8−フルオロ−2H−フタラジン−1−オン(1.55g、3.985mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(2.02g、7.969mmol)、X−phos(0.23g、0.398mmol)及びKOAc(0.9g、9.165mmol)の混合物を、密閉したチューブ中でジオキサン(12mL)に取り、脱気し、続いて15分間アルゴンで充填しなおした。それにPd(OAc)2(54mg、0.239mmol)を加え、80℃で6時間加熱した。反応はLC−MS及びTLCによれば完了していなかったので、試薬全量の半分をもう一度加え、同じ温度で16時間加熱し続けた。TLC及びLC−MSによりモニタリングして反応の完了後、混合物を室温に冷却しセライトのベッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗製の固まりをEtOAc−ヘキサンを使用する通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーの小さなベッドを通して、半純粋な6−tert−ブチル−8−フルオロ−2−[2−メチル−3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−2H−フタラジン−1−オン(0.8g、約46.01%)を得、これを更なる精製をすることなく次反応に直接使用した。LCMS:437.0(M+H).
10%水性ジオキサン(69mL)中の6−tert−ブチル−8−フルオロ−2−[2−メチル−3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−2H−フタラジン−1−オン(2.4g、5.51mmol)及び6−クロロ−2−メチル−4−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−2H−ピリダジン−3−オン(1.54g、4.4mmol)の溶液に、Cs2CO3(6.75g、20.8mmol)を加え、この混合物をマイクロ波条件下に120℃で3時間加熱した。反応の完了後、混合物をセライトのベッドで濾過し、EtOAcで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、粗生成物をDCM中の10%マジック溶液(DCM:MeOH:NH4OH、比率60:10:1)を使用するフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、6−tert−ブチル−8−フルオロ−2−(2−メチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−フェニル)−2H−フタラジン−1−オン(1.5g、43.7%)をオフホワイトの固体として得た。LC−MS:624.2(M+H).
水(20mL)中の水酸化ナトリウム(3.46g、86.667mmol)の撹拌した溶液に3−tert−ブチルフェノール(10g、66.667mmol)を加え、得られた混合物を室温で30分間撹拌した。それに2−(2−ブロモ−エチル)−[1,3]ジオキサン(14.3g、73.33mmol)を加え、得られた混合物を41時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、次にEtOAc(150mL)を加え、撹拌しながら酢酸を加えてpH約4にし、続いて水(100mL)及びEtOAc(150mL)で希釈した。分配後に層を分離し、有機層を水(3×100mL)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮して2−[2−(3−tert−ブチル−フェノキシ)−エチル]−[1,3]ジオキサン(16gの粗生成物、約90.79%)を得、これを更なる精製をすることなく次の工程に直接使用した。GC−MS:264.0(M+).
濃HCl(80mL)を氷浴で冷やし、それにTHF(40mL)を加えた。THF(40mL)中の2−[2−(3−tert−ブチル−フェノキシ)−エチル]−[1,3]ジオキサン(10g粗製、37.879mmol)を撹拌しながらその温度でゆっくりと加えた。添加の完了後、氷浴を取り除き、得られた混合物を室温で3時間撹拌した。出発物質全部が消費された後、エーテル(100mL)を混合物に加え、層を分離した。合わせた有機層を水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ濃縮して、粗製の7−tert−ブチル−クロマン−4−オール(7.0g、粗製)を明黄色の油状物として得、これを更なる精製をすることなく次の工程に移した。
7−tert−ブチル−クロマン−4−オール(7g粗製、33.981mmol)をDCM(300mL)に取り、撹拌しながらPCC(14.65g、67.961mmol)を分割して加えた。添加完了後、反応混合物を室温で3時間撹拌した。(LCMSによってモニタリングして)反応の完了後、ヘキサンを反応混合物に加え、セライトベッドで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗製の固まりを、通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーで溶離溶媒としてEtOAc−ヘキサンを使用して精製して7−tert−ブチル−クロマン−4−オン(3.8g、2ステップで49.18%)を明褐色の固体として得た。LCMS:205.2(M+H).
7−tert−ブチル−クロマン−4−オン(5.0g、24.51mmol)及びメタンスルホン酸(7.5mL)をDCM(12mL)に取り、0℃に冷却した。固体ナトリウムアジド(3.2g、49.02mmol)をこの混合物に加え、得られた混合物をその温度で3時間撹拌した。反応混合物をNaOHの20%水溶液に0℃で注ぎ、もう一度10分間撹拌した。水性部分全体をCH2Cl2(3×50mL)で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーでEtOAc−ヘキサンを使用して精製して8−tert−ブチル−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オン(5.0g、93.03%)をオフホワイトの固体として得た。LCMS:220.2(M+H).
8−tert−ブチル−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オン(0.92g、4.201mmol)、2,6−ジブロモ−ベンズアルデヒド(4.99g、18.904mmol)、キサントホス(109.4mg、0.189mmol)及びCs2CO3(1.91g、5.881mmol)を1,4−ジオキサン(15mL)に取り、アルゴンガスを混合物に通して10分間バブリングした。Pd(dba)2(72.5mg、0.126mmol)をそれに加え、100℃で3時間撹拌した。TLCによりモニタリングして反応の完了後、得られた混合物を室温に冷却し、これをEtOAcと水との間で分配した。有機層を回収し、無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりを通常のシリカゲルカラムクロマトグラフィーでEtOAc−ヘキサンを使用して精製して2−ブロモ−6−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−ベンズアルデヒド(1.1g、65.09%)を明褐色の固体として得た。LCMS:402.0(M−H)及び404.0(M+H).
乾燥1,4−ジオキサン(30mL)中の、6−クロロ−2−メチル−4−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−2H−ピリダジン−3−オン(0.86g、2.464mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(1001.4mg、3.943mmol)、X−phos(176.2mg、0.37mmol)及びKOAc(725.6mg、7.393mmol)の溶液を減圧下に置き、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(OAc)2(55.3mg、0.246mmol)をそれに加え、フラスコを排気し、5分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを100℃で30分間加熱し、次に室温に冷却した。固体をセライトベッドで濾別し、濾液を次の反応に直接使用した(M+H:316.2)。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−n−ブタノール(1:1:0.4)(24mL)中の、2−ブロモ−6−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−ベンズアルデヒド(1g、2.481mmol)、K2CO3(1.03g、7.444mmol)及びCy3P(0.21g、0.744mmol)の混合物を脱気し、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(dba)2(0.21g、0.372mmol)、続いて先の反応の粗製の濾液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を110℃で1.5時間加熱した。TLC及びLC−MSによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗製の固まりを得、これを溶離溶媒としてMeOH−EtOAcを使用するCombiFlashカラムクロマトグラフィーにより精製して、2−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−6−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−ベンズアルデヒド(1.0g、2ステップで63.3%)を白色の固体として得た。LCMS:637.6(M+H).
メタノール−DCM(2:3)(69mL)中の2−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−6−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−ベンズアルデヒド(4.6g、3.145mmol)の溶液を0℃に冷却し、水(6.9mL)中のNaBH4(1.38g、15.723mmol)の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を10分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム(2.7g、31.447mmol)を分割して加え、もう一度その温度で1時間撹拌した。(LCMSによってモニタリングして)反応の完了後、水を加えDCMで抽出した。合わせた有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりをDCM中10−30%マジック溶液(比率60:10:1のDCM−MeOH−NH4OH)を使用するフラッシュシリカゲルで精製して8−tert−ブチル−4−(2−ヒドロキシメチル−3−{1−メチル−5−[5−(モルホリン−4−カルボニル)−ピリジン−2−イルアミノ]−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル}−フェニル)−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オンを得、これをジエチルエーテル及びn−ペンタンで洗浄することによって更に精製してオフホワイトの固体(2.12g、45.87%)を得た。LCMS:639.2(M+H).
乾燥1,4−ジオキサン(70mL)中の、6−クロロ−4−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−2−メチル−2H−ピリダジン−3−オン(0.78g、2.484mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(1009.5mg、3.975mmol)、X−phos(177.6mg、0.373mmol)及びKOAc(731.4mg、7.452mmol)の溶液を減圧下に置き、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(OAc)2(55.8mg、0.248mmol)をそれに加え、フラスコを排気し、5分間アルゴンでもう一度充填しなおした。これを100℃で1時間加熱し、次に室温に冷却した。この溶液を次の反応に直接使用した(M+H:323.6)。別の丸底フラスコ中で、ジオキサン−水−n−ブタノール(1:1:0.25)(27mL)中の、2−ブロモ−6−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−ベンズアルデヒド(1g、2.481mmol)、K2CO3(1.71g、12.407mmol)及びCy3P(0.21g、0.744mmol)の混合物を脱気し、15分間アルゴンで充填しなおした。Pd(dba)2(0.21g、0.372mmol)、続いて先の反応の粗製の溶液をそれぞれ、それに加え、混合物全体を110℃で1.5時間加熱した。TLC及びLC−MSによりモニタリングして反応の完了後、反応系を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗製の固まりを得、これを溶離溶媒としてMeOH−EtOAcを使用するCombiFlashカラムクロマトグラフィーにより精製して、2−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−6−[5−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル]−ベンズアルデヒド(510mg、2ステップで34.16%)を明黄色の固体として得た。LCMS:602.2(M+H).
メタノール−DCM(2:3)(30mL)中の2−(8−tert−ブチル−5−オキソ−2,3−ジヒドロ−5H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−4−イル)−6−[5−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル]−ベンズアルデヒド(1g、1.572mmol)の溶液を0℃に冷却し、水(3mL)中のNaBH4(0.3g、7.862mmol)の溶液をそれに滴下した。得られた混合物を10分間撹拌し、追加の固体水素化ホウ素ナトリウム(0.59g、15.723mmol)を分割して加え、もう一度その温度で1時間撹拌した。LCMSによってモニタリングして反応の完了後、水を加えDCMで抽出した。合わせた有機層を無水Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製の固まりをDCM中の10−30%マジック溶液(比率60:10:1のDCM−MeOH−NH4OH)を使用するフラッシュシリカゲルで精製して8−tert−ブチル−4−{2−ヒドロキシメチル−3−[5−(5−メタンスルホニル−ピリジン−2−イルアミノ)−1−メチル−6−オキソ−1,6−ジヒドロ−ピリダジン−3−イル]−フェニル}−3,4−ジヒドロ−2H−ベンゾ[f][1,4]オキサゼピン−5−オンを得、これをジエチルエーテル及びn−ペンタンで洗浄することによって更に精製してオフホワイトの固体(540mg、56.89%)を得た。LCMS:604.4(M+H).
ブルトン型チロシンキナーゼ(BTK)阻害アッセイ
このアッセイは、濾過を通した放射性33Pリン酸化生成物の捕捉である。BTK、ビオチン化SH2ペプチド基質(Src相同)、及びATPの相互作用により、ペプチド基質がリン酸化される。ビオチン化生成物を、ストレプトアビジンセファロースビーズに結合させる。全ての結合している放射標識された生成物をシンチレーションカウンターで検出する。
a.) 500gで遠心分離することによってビーズをすすぐ。
b.) 該ビーズをPBS及びEDTAで再構成して20%ビーズスラリーを生成する。
a. 3×NaCl 250μL
b. 3×1%リン酸を含有するNaCl 250μL
c. 1×H2O 250μL
cpmの生データから%活性を計算する。
%活性=(サンプル−bkg)/(総活性−bkg)×100
1サイト用量応答シグモイドモデルを用いて、%活性からIC50を計算する。
y=A+((B−A)/(1+((x/C)D))))
x=化合物の濃度、y=%活性、A=最小、B=最大、C=IC50、D=1(ヒル勾配)
このBTK競合アッセイは、FRET(フェルスター/蛍光共鳴エネルギー転移)技術を用いて、ブルトン型チロシンキナーゼの不活性化状態についての化合物の力価(IC50)を測定する。50nM BTK-Bioease(商標):10nM Eu−ストレプトアビジン(Perkin-Elmer カタログ番号AD0062)の開始濃度で用いる1時間前に、BTK−Eu複合体を氷上でインキュベートした。アッセイバッファは、20mM HEPES(pH 7.15)、0.1mM DTT、10mM MgCl2、3%キナーゼ安定化剤(Fremont Biosolutions、カタログ番号STB−K02)を含む0.5mg/mL BSAからなっていた。1時間後、上記で得られた反応混合物をアッセイバッファ中10倍希釈して、5nM BTK:1nM Eu−ストレプトアビジン複合体(ドナーフルオロフォア)を作製した。次いで、0.11nM BTK−Eu及び0.11nM キナーゼトレーサー178(Invitrogen、カタログ番号PV5593)の混合物 18μLを、ネガティブコントロールなしとしてのBTK−Euのみと共に、384ウェル平底プレート(Greiner、784076)に分注した。アッセイにおいて試験する化合物は、10倍濃縮物として調製し、そして、10点曲線を作成するために半対数増分の連続希釈をDMSO中で行った。FRET反応を開始させるために、DMSO中の10倍ストックとして調製した化合物をプレートに添加し、該プレートを14℃で18〜24時間インキュベートした。
%最大FRET=100×[(FSR化合物−FSR平均最小値)/(FSR平均最大値−FSR平均最小値)]
(式中、FSR=FRETシグナル比)。%最大FRET曲線をActivity Base(Excel)にプロットし、そして、IC50(%)、ヒル勾配、z’及び%CVを決定した。Microsoft Excelを用いて二連曲線(2つの独立な希釈液から得た1本の阻害曲線)から平均IC50及び標準偏差を得る。
ヒト血液におけるB細胞のB細胞受容体媒介活性化を抑制するBTK阻害剤の能力を試験するための手順は、以下のとおりである:
本発明の化合物によるB細胞活性化の阻害は、抗IgMで刺激されたB細胞の応答に対する試験化合物の効果を決定することによって示される。
増殖培地:L−グルタミン(Invitrogen、カタログ番号61870−010)、10%牛胎児血清(FBS、Summit Biotechnology、カタログ番号FP−100−05);1mM ピルビン酸ナトリウム(Invitrogen、カタログ番号11360−070)を含むRPMI1640培地。
100μMの最大最終アッセイ濃度を達成するために、10mM 化合物ストック溶液(DMSO中に作製)24μLをFLIPRバッファ 576μLに直接添加する。(Biomek 2000ロボットピペッターを用いて)FLIPRバッファ中に試験化合物を希釈し、以下の希釈スキームを得る:ビヒクル、1.00×10−4M、1.00×10−5、3.16×10−6、1.00×10−6、3.16×10−7、1.00×10−7、3.16×10−8。
カルシウムの細胞内増加を、最大−最小統計値(Molecular DevicesのFLIPRコントロール及び統計学的エクスポートソフトウェアを用いて刺激性抗体の添加によって引き起こされるピークから静止ベースラインを減じる)を用いて報告した。非線形曲線フィット(GraphPad Prismソフトウェア)を用いてIC50を決定した。
0日目に、完全フロイントアジュバント(CFA)中II型コラーゲンのエマルションをマウスの尾の付け根又は背中の数ヶ所に注射する(i.d.)。コラーゲン免疫後、動物は、約21〜35日目に関節炎を発症する。関節炎の発症は、21日目に不完全フロイントアジュバント(IFA;i.d.)中コラーゲンを全身投与することによって同期(追加免疫)される。追加免疫に対するシグナルである軽度の関節炎(スコア1又は2;以下のスコアの詳細を参照)の任意の発症について、20日目後から毎日動物を検査する。追加免疫後、マウスをスコアリングし、所定の期間(典型的には、2〜3週間)及び投与頻度(1日1回(QD)又は1日2回(BID))で投与する。
0日目に、不完全フロイントアジュバント(IFA)中ウシII型コラーゲンのエマルションをラットの背中の数ヶ所に皮内(i.d.)注射する。約7日目、尾の付け根又は背中の別の部位にコラーゲンエマルションの追加免疫注射(i.d.)を行う。関節炎は、一般的に、最初のコラーゲン注射の12〜14日後に観察される。14日目以降、下記(関節炎の評価)のとおり関節炎の発症について動物を評価し得る。2回目のチャレンジ時点から始めて、所定の期間(典型的には、2〜3週間)及び投与頻度(1日1回(QD)又は1日2回(BID))で、動物に候補治療剤を予防的に投与する。
両モデルにおいて、下記基準に従って4本の足を評価することを含む採点システムを用いて、足及び肢関節の発症している炎症を定量する。
2=2つ以上の関節における腫脹
3=2つ超の関節を含む、足の肉眼的腫脹
4=足及び指全体の重篤な関節炎
雄性Brown-Norwayラットを、ミョウバン 0.2mL中OA(オボアルブミン) 100μgで3週間にわたって週1回(0、7、及び14日目)i.p.感作する。21日目(最後の感作の1週間後)に、OAエアゾールでチャレンジ(1%OAで45分間)する0.5時間前に、ラットにビヒクル又は化合物処方物のいずれかを皮下q.d.投与し、そして、チャレンジの4又は24時間後に終了する。供死時に、それぞれ血清検査及びPKのために全ての動物から血清及び血漿を回収する。気管カニューレを挿入し、そして、肺をPBSで3回洗浄する。BAL液を全白血球数及び白血球百分率について分析する。細胞のアリコート(20〜100μL)中の全白血球数は、Coulter Counterにより決定する。白血球百分率については、サンプル 50〜200μLをCytospinで遠心分離し、そして、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を用いて光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球及びリンパ球の割合を計数し、そして、百分率として表す。BTKの代表的な阻害剤は、対照レベルと比較して、OA感作及びチャレンジしたラットのBALにおいて全白血球数の減少を示す。
Claims (21)
- R2が、Hである、請求項1に記載の化合物。
- R3が、tert−ブチルである、請求項1又は2に記載の化合物。
- X3が、CHである、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
- X2が、Nである、請求項1〜4のいずれか一項記載の化合物。
- R1が、−C(=O)R1’であり、R1’が、モルホリンである、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
- nが、1である、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
- Xが、CH又はCH2である、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
- Yが、CH又はCH2である、請求項1〜8のいずれか一項記載の化合物。
- nが、2であり、Yが、Oである、請求項5に記載の化合物。
- R1が、−S(=O)2R1’であり、R1’が、メチルであるか、又は、R1が、−C(=O)R1’であり、R1’が、モルホリンである、請求項10に記載の化合物。
- 2−[2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−1−オキソ−3,4−ジヒドロイソキノリン−6−イル]−2−メチルプロパンニトリル;
2−[8−フルオロ−2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[5−[[5−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)オキシピリジン−2−イル]アミノ]−1−メチル−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−1−オキソイソキノリン−6−イル]−2−メチルプロパンニトリル;
4−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[(5−メチルスルホニルピリジン−2−イル)アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−8−(1−ヒドロキシ−2−メチルプロパン−2−イル)−2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾオキサゼピン−5−オン;
5−クロロ−N−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリジン−3−イル]フェニル]−1,3−ジヒドロイソインドール−2−カルボキサミド;
6−tert−ブチル−2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリジン−3−イル]フェニル]−3,4−ジヒドロ−2,7−ナフチリジン−1−オン;
6−tert−ブチル−2−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−3,4−ジヒドロ−2,7−ナフチリジン−1−オン;
6−tert−ブチル−8−フルオロ−2−[2−メチル−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]フタラジン−1−オン;
8−tert−ブチル−4−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[[5−(モルホリン−4−カルボニル)ピリジン−2−イル]アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾオキサゼピン−5−オン;及び
8−tert−ブチル−4−[2−(ヒドロキシメチル)−3−[1−メチル−5−[(5−メチルスルホニルピリジン−2−イル)アミノ]−6−オキソピリダジン−3−イル]フェニル]−2,3−ジヒドロ−1,4−ベンゾオキサゼピン−5−オン
からなる群より選択される、請求項1〜11のいずれか一項記載の化合物。 - 炎症及び/又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
- 炎症状態を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
- 関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
- 喘息を処置するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的に有効な量の請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、方法。
- 少なくとも1つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
- 炎症及び/又は自己免疫状態の処置における、請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 炎症及び/又は自己免疫状態を処置するための医薬を調製するための、請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 炎症及び/又は自己免疫状態の処置において使用するための、請求項1〜12のいずれか一項記載の化合物。
- 本明細書に記載される発明。
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