JP6118453B2 - ブルトンチロシンキナーゼの阻害剤 - Google Patents
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Description
本発明は、Btkを阻害し、かつ、異常なB細胞活性化によって引き起こされる腫瘍性、自己免疫及び炎症性疾患の処置に有用である、新規化合物の使用に関する。
プロテインキナーゼは、ヒトの酵素の最も大きなファミリーの1つを構成し、そして、リン酸基をタンパク質に付加することによって、多くの異なるシグナル伝達プロセスを調節する(T. Hunter, Cell 1987 50:823-829)。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール部分でタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の成長、移動及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫及び炎症性疾患を含む、様々なヒトの疾患に関与している。プロテインキナーゼは、細胞のシグナル伝達の重要な調節因子の1つであるので、これらは、小分子キナーゼ阻害剤で細胞機能をモジュレートするためのターゲットを提供し、そのために良好な薬物設計ターゲットとなる。キナーゼ媒介疾患過程の処置に加えて、選択的かつ効果的なキナーゼ活性阻害剤もまた、細胞のシグナル伝達プロセスの調査及び治療上関心の高いその他の細胞ターゲットの同定に有用である。
本願は、本明細書において以下に記載する通り、式Iで表されるBtk阻害化合物、その使用方法を提供する。
(式中、
R1は、ベンジル又は低級アルキルであり、それぞれ、場合により1つ以上のR1’で置換されており;
各R1’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり;
Xは、CH又はNR4であり;
R4は、C(=O)C(=O)nR4’であり;
R4’は、低級アルキル又は低級アルケニルであり;
nは、0又は1であり;
----は、単結合又は二重結合のいずれかを表し;
mは、0又は1であり;
rは、0又は1であり;
Yは、CN(R3)C(=O)R2、CH2、又はNであり;
R2は、低級アルキル、低級アルケニル、C(=O)、又はシクロアルキルであり、それぞれ、場合により1つ以上のR2’で置換されており;
各R2’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであり;そして
R3は、H又は低級アルキルである)
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
本願は、少なくとも1つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Iの化合物を含む医薬組成物を提供する。
定義
本明細書において使用されるように、表現「一つ(「a」又は「an」)の実体」は、一つ以上のその実体を指す;例えば、化合物(a compound)は、一つ以上の化合物又は少なくとも一つの化合物を指す。そのため、用語「a」(又は「an」)、「一つ以上」、及び「少なくとも一つ」は、本明細書では、互換的に使用され得る。
環系中に引かれる結合(明確な頂点で連結されたものと対照をなす)は、結合が適切な環原子のいずれかに結合され得ることを示す。
本願は、式I:
(式中、
R1は、ベンジル又は低級アルキルであり、それぞれ、場合により1つ以上のR1’で置換されており;
各R1’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり;
Xは、CH又はNR4であり;
R4は、C(=O)C(=O)nR4’であり;
R4’は、低級アルキル又は低級アルケニルであり;
nは、0又は1であり;
----は、単結合又は二重結合のいずれかを表し;
mは、0又は1であり;
rは、0又は1であり;
Yは、CN(R3)C(=O)R2、CH2、又はNであり;
R2は、低級アルキル、低級アルケニル、C(=O)、又はシクロアルキルであり、それぞれ、場合により1つ以上のR2’で置換されており;
各R2’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであり;そして
R3は、H又は低級アルキルである)
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
発明に包含され、本発明の範囲内である代表的な化合物の例を、以下の表で提供する。
これらの下記の実施例及び調製例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することを可能とするために提供される。これらは、本発明の範囲を制限するものではなく、本発明の例示及び代表例としてのみ考えられるべきである。
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製することができる。これら化合物を合成するのに好適なプロセスは、実施例に提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームにしたがって調製することができる。
R1は、ベンジル又は低級アルキルであってよく、それぞれ、場合により1つ以上のR1’で置換されており;各R1’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり;R2は、低級アルキル、低級アルケニル、C(=O)、又はシクロアルキルであってよく、それぞれ、場合により1つ以上のR2’で置換されており;各R2’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであってよく;R3は、H又は低級アルキルであってよく;Xは、CH又はNR4であってよく;R4は、C(=O)C(=O)nR4’であってよく;R4’は、低級アルキル又は低級アルケニルであってよく;nは、0又は1であってよく;----は、単結合又は二重結合のいずれかを表してよく;そして、Yは、C、CH2、又はNであってよい。
本発明の化合物は、多種多様な経口投与用の剤形及び担体で処方してよい。経口投与は、錠剤、コート錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤、シロップ剤又は懸濁剤の形態であり得る。本発明の化合物は、その他の投与経路の中でも、連続的(点滴)局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮(浸透促進剤を含み得る)、口腔内、鼻腔内、吸入及び坐剤投与を含む他の投与経路によって投与されたときに効果的である。好ましい投与方法は、一般的に、苦痛の程度及び有効成分に対する患者の反応にしたがって調整され得る慣用の一日用量レジメンを使用する経口である。
一般式Iで表される化合物は、ブルトンチロシンキナーゼ(Btk)を阻害する。上流のキナーゼによるBtkの活性化により、ホスホリパーゼ−Cγが活性化され、続いて、前炎症性メディエーターの放出が刺激される。式Iで表される化合物は、関節炎、ならびに他の抗炎症及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Iに係る化合物は、関節炎の処置に有用である。式Iで表される化合物は、細胞内のBtkを阻害するため及びB細胞の発生を調節するために有用である。本発明は、更に、薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Iで表される化合物を含有する医薬組成物を含む。
本願は、炎症性及び/又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Iの化合物を投与することを含む方法を提供する。
一般的な略記
一般的に用いられる略記としては、以下が挙げられる:アセチル(Ac)、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル(AIBN)、気圧(Atm)、9−ボラビシクロ[3.3.1]ノナン(9−BBN又はBBN)、2,2’−ビス(ジフェニルホスフィノ)−1,1’−ビナフチル(BINAP)、tert−ブトキシカルボニル(Boc)、ジ−tert−ブチルピロカーボナート又はboc無水物(BOC2O)、ベンジル(Bn)、ブチル(Bu)、ケミカルアブストラクト登録番号(CASRN)、ベンジルオキシカルボニル(CBZ又はZ)、カルボニルジイミダゾール(CDI)、1,4−ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン(DABCO)、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド(DAST)、ジベンジリデンアセトン(dba)、1,5−ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ−5−エン(DBN)、1,8−ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ−7−エン(DBU)、N,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、1,2−ジクロロエタン(DCE)、ジクロロメタン(DCM)、2,3−ジクロロ−5,6−ジシアノ−1,4−ベンゾキノン(DDQ)、ジエチルアゾジカルボキシラート(DEAD)、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシラート(DIAD)、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム(DIBAL又はDIBAL−H)、ジ−イソ−プロピルエチルアミン(DIPEA)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、4−N,N−ジメチルアミノピリジン(DMAP)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、1,1’−ビス−(ジフェニルホスフィノ)エタン(dppe)、1,1’−ビス−(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(dppf)、1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI)、2−エトキシ−1−エトキシカルボニル−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)、エチル(Et)、酢酸エチル(EtOAc)、エタノール(EtOH)、2−エトキシ−2H−キノリン−1−カルボン酸エチルエステル(EEDQ)、ジエチルエーテル(Et2O)、エチルイソプロピルエーテル(EtOiPr)、O−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸(HATU)、酢酸(HOAc)、1−N−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)、高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)、イソプロパノール(IPA)、イソプロピルマグネシウムクロリド(iPrMgCl)、ヘキサメチルジシラザン(HMDS)、液体クロマトグラフィー質量分析(LCMS)、リチウムヘキサメチルジシラザン(LiHMDS)、メタ−クロロペルオキシ安息香酸(m−CPBA)、メタノール(MeOH)、融点(mp)、MeSO2−(メシル又はMs)、メチル(Me)、アセトニトリル(MeCN)、m−クロロ過安息香酸(MCPBA)、質量スペクトル(ms)、メチルt−ブチルエーテル(MTBE)、メチルテトラヒドロフラン(MeTHF)、N−ブロモスクシンイミド(NBS)、n−ブチルリチウム(nBuLi)、N−カルボキシ無水物(NCA)、N−クロロスクシンイミド(NCS)、N−メチルモルホリン(NMM)、N−メチルピロリドン(NMP)、ピリジニウムクロロクロマート(PCC)、ジクロロ−((ビス−ジフェニルホスフィノ)フェロセニル)パラジウム(II)(Pd(dppf)Cl2)、酢酸パラジウム(II)(Pd(OAc)2)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(Pd2(dba)3)、ピリジニウムジクロマート(PDC)、フェニル(Ph)、プロピル(Pr)、イソプロピル(i−Pr)、ポンド/平方インチ(psi)、ピリジン(pyr)、1,2,3,4,5−ペンタフェニル−1’−(ジ−tert−ブチルホスフィノ)フェロセン(Q−Phos)、室温(周囲温度、rt又はRT)、sec−ブチルリチウム(sBuLi)、tert−ブチルジメチルシリル又はt−BuMe2Si(TBDMS)、テトラ−n−ブチルアンモニウムフルオリド(TBAF)、トリエチルアミン(TEA又はEt3N)、2,2,6,6−テトラメチルピペリジン1−オキシル(TEMPO)、トリメチルシリルエトキシメチル(SEM)、トリフラート又はCF3SO2−(Tf)、トリフルオロ酢酸(TFA)、1,1’−ビス−2,2,6,6−テトラメチルヘプタン−2,6−ジオン(TMHD)、O−ベンゾトリアゾール−1−イル−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート(TBTU)、薄層クロマトグラフィー(TLC)、テトラヒドロフラン(THF)、トリメチルシリル又はMe3Si(TMS)、p−トルエンスルホン酸一水和物(TsOH又はpTsOH)、4−Me−C6H4SO2−又はトシル(Ts)、ならびにN−ウレタン−N−カルボキシ無水物(UNCA)。接頭辞ノルマル(n)、イソ(i−)、二級(sec−)、三級(tert−)、及びネオを含む従来の命名法は、アルキル部分と共に用いられるときの慣習上の意味を有する。(J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.)。
本発明の化合物は、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって、市販の出発物質で始めて調製することができる。以下の概要は、このような化合物を調製するのに好適な反応スキームである。更なる例示は、具体的な実施例に見出すことができる。
CDCl3 重水素化クロロホルム
CH2Cl2 ジクロロメタン
CH3CN アセトニトリル
CO2 二酸化炭素
Conc 濃度
Cs2CO3 炭酸セシウム
DIPEA ジイソプロピルエチルアミン
DMF N,N−ジメチルホルムアミド
DMSO ジメチルスルホキシド
EtOAc 酢酸エチル
EtOH エタノール
HCl 塩酸
K2CO3 炭酸カリウム
LDA リチウムジイソプロピルアミド
LiAlH4 水素化アルミニウムリチウム
MeOH メタノール
NaBH4 水素化ホウ素ナトリウム
NaOH 水酸化ナトリウム
Na2SO4 硫酸ナトリウム
NaH 水素化ナトリウム
NaNO2 亜硝酸ナトリウム
Pd(OAc)2 酢酸パラジウム(II)
Pd(PPh3)4 テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)
SOCl2 塩化チオニル
THF テトラヒドロフラン
試薬は、Aldrich、Oakwood、Matrix、又は他の供給業者から購入し、そして、更に精製することなく用いた。加熱のためにマイクロ波照射を用いる反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを用いて実施した。数ミリグラム〜数グラムの規模の精製は、シリカゲルフラッシュカラムによる溶離等の当業者に公知の方法によって実施し;また、場合によっては、数グラムのシリカゲルが充填された使い捨てカラム(RediSep)を使用し、CombiFlash systemで溶離させて分取フラッシュカラム精製を行った。また、Biotage(商標)及びISCO(商標)は、中間体の精製のために本発明で用いることができるフラッシュカラム装置である。
以下の実施例は、説明目的のものであり、いかなる形であれ本発明を限定するものではない。
ジクロロメタン(300mL)中の5−アミノ−7−アザインドール(5g、37.6mmol)とDIPEA(13mL、75mmol)の混合物を、室温で撹拌した。クロロギ酸ベンジル(5.8mL、38.3mmol)を、撹拌しながら滴下した。反応物を室温で30分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次にEtOAcに溶解し、そして希釈した(0.2〜0.3N)HCl水溶液及びブラインで洗浄した。有機溶液をNa2SO4で乾燥させ、濃縮した。残留物を少量のTHFに溶解し、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル60、230〜400メッシュ、ヘキサン中0〜80% EtOAc)により精製して、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸ベンジルエステル(7.55g、収率75%)を明褐色の固体として与えた。C15H13N3O2についてのLCMS計算値(m/e)267、実測値268(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸イソプロピルエステルを、5−アミノ−7−アザインドール及びクロロギ酸イソプロピルから調製した。C11H13N3O2についてのLCMS計算値(m/e)219、実測値220(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルを、5−アミノ−7−アザインドール及び2−クロロ−ベンジルクロロホルマートから調製した。C15H12ClN3O2についてのLCMS計算値(m/e)301、実測値302(M+H)。
3−シアノベンジルアルコール(2g、15mmol)を、乾燥THF(50mL)中のホスゲン(14.4mL、19.5mmol、THF中15%)の溶液に一度に加えた。反応混合物を室温で2時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。粗物質、3−シアノベンジルクロロホルマートを、無色の油状物として得て、これをさらに後処理及び精製することなく次の工程において使用した。
上記と同様の方法を用いて、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルを、5−アミノ−7−アザインドール、(3−フルオロ−フェニル)−メタノール及びホスゲンから調製した。C15H12FN3O2についてのLCMS計算値(m/e)285、実測値286(M+H)。
工程1: ジクロロメタン(300mL)中の(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸ベンジルエステル(7.55g、28.2mmol)とN−ヨードスクシンイミド(8.26g、36.7mmol)の混合物を、室温で2時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次にEtOAcに溶解し、そして飽和NaHCO3水溶液及びブラインで洗浄した。有機溶液をNa2SO4で乾燥させ、濃縮して、(3−ヨード−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸ベンジルエステル(11.1g、収率100%)を明褐色の固体として与えた。C15H12IN3O2についてのLCMS計算値(m/e)393、実測値394(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、3−(2−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸ベンジルエステル及び2−アミノフェニルボロン酸から調製した。C26H26N4O4についてのLCMS計算値(m/e)458、実測値459(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、3−(3−アミノ−フェニル)−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸イソプロピルエステル及び3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミンから調製した。C22H26N4O4についてのLCMS計算値(m/e)410、実測値411(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(2−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステル及び3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミンから調製した。C26H25ClN4O4についてのLCMS計算値(m/e)492、実測値493(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステル及び3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミンから調製した。C27H25N5O4についてのLCMS計算値(m/e)483、実測値484(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、(1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステル及び3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミンから調製した。C26H25FN4O4についてのLCMS計算値(m/e)476、実測値477(M+H)。
ジクロロメタン(10mL)中の3−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)アニリン(200mg、0.91mmol)、(2E)−4−(ジメチルアミノ)ブタ−2−エン酸塩酸塩(181mg、1.1mmol)、1−プロパンホスホン酸環状無水物(T3P)(815μL、EtOAc中50%、1.37mmol)及びトリエチルアミン(254μL、1.83mmol)の混合物を、室温で30分間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル60、230〜400メッシュ、DCM中0〜20% MeOH)により精製して、(E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エン酸 [3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−アミド(155mg、51%)を明黄色の固体として与えた。C18H27BN2O3についてのLCMS計算値(m/e)330、実測値331(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、2−シアノ−N−[3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−アセトアミドを、3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニルアミン及びシアノ−酢酸から調製した。C15H19BN2O3についてのLCMS計算値(m/e)286、実測値287(M+H)。
工程1: ジクロロメタン(150mL)中の3−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)アニリン(2g、9.13mmol)、3−メトキシプロパノイルクロリド(1.12g、9.13mmol)及びトリエチルアミン(2.54mL、18.3mmol)の混合物を、室温で30分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル60、230〜400メッシュ、ヘキサン中0〜50% EtOAc)により精製して、3−メトキシ−N−[3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−プロピオンアミド(2.03g、73%)を明黄色の固体として与えた。C16H24BNO4についてのLCMS計算値(m/e)305、実測値306(M+H)。
5−アミノ−7−アザインドール(2.9g、21.8mmol)を、メタノール(80mL)に溶解した。1−BOC−4−ピペリドン(5.95g、29.8mmol)及びナトリウムメトキシド(11.8g、12.5mL、54.4mmol)を加えた。反応混合物を80℃で2時間加熱した。反応物を濃縮した。残留物をEtOAcで希釈した。有機層を飽和NaHCO3及びブラインで洗浄し、乾燥させ、そして濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜8% MeOH)により精製して、4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(6.13g、90%)を明黄色の固体として与えた。C17H22N4O2についてのLCMS計算値(m/e)314、実測値315(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、5−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,4−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、5−アミノ−7−アザインドール及び1−BOC−3−ピペリドンから調製した。C17H22N4O2についてのLCMS計算値(m/e)314、実測値315(M+H)。
混合溶媒MeOH:EtOAc(1:1)(20mL)中の4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(200mg、0.636mmol)、酸化パラジウム(65mg、93μmol)及び酢酸(0.1mL、1.75mmol)の懸濁液を、水素1atm下、室温で1時間撹拌した。反応物をセライトパッドで濾過し、濾液を濃縮した。粗4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを得、次にさらに精製することなく次の工程において使用した。
5−アミノ−7−アザインドール(1.0g、7.51mmol)を、メタノール(30mL)に溶解した。1−BOC−3−アゼチジノン(1.54g、9.01mmol)及び水酸化カリウム(0.52g、9.29mmol)を加えた。反応混合物を75℃で3日間加熱した。反応物を濃縮した。残留物をEtOAcで希釈した。有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、そして濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中5〜8% MeOH)により精製して、3−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3−ヒドロキシ−アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(0.79g、35%)を明黄色の固体として与えた。C15H20N4O3についてのLCMS計算値(m/e)の計算値304、実測値305(M+H)。
THF(5mL)中の4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(0.35g、1.11mmol)及びトリエチルアミン(169mg、1.67mmol)の混合物を、0℃に冷却した。THF(2mL)中の2−クロロベンジルクロロホルマート(228mg、1.11mmol)の溶液を滴下した。反応混合物を室温まで温め、室温で1時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次にEtOAcに溶解し、そして水及びブラインで洗浄した。有機溶液をNa2SO4で乾燥させ、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0%〜5% MeOH)により精製して、4−[5−(2−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(0.35g、65%)をオフホワイトの固体として与えた。C25H27ClN4O4についてのLCMS計算値(m/e)483、実測値484(M+H)。
3−フルオロフェニル−メタノール(1g、7.93mmol)を、乾燥THF(25mL)中のホスゲン(5.7mL、10.3mmol、THF中20%)の溶液に一度に加えた。反応混合物を室温で2時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。粗物質、3−フルオロ−ベンジルクロロホルマートを得た。これをさらに後処理及び精製することなく次の工程において使用した。
上記と同様の方法を用いて、4−[5−(3−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル、3−シアノベンジルアルコール及びホスゲンから調製した。 C26H27N5O4についてのLCMS計算値(m/e)473、実測値474(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、4−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。C25H28N4O4についてのLCMS計算値(m/e)448、実測値449(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、5−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,4−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、5−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,4−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。C25H28N4O4についてのLCMS計算値(m/e)448、実測値449(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、4−(5−イソプロポキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸イソプロピルから調製した。C21H30N4O4についてのLCMS計算値(m/e)402、実測値403(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、4−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、4−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。C25H30N4O4についてのLCMS計算値(m/e)450、実測値451(M+H)。
上記と同様の方法を用いて、3−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3−ヒドロキシアゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを、3−(5−アミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3−ヒドロキシ−アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びクロロギ酸ベンジルから調製した。C23H26N4O5についてのLCMS計算値(m/e)438、実測値439(M+H)。
{3−[3−((E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
ジクロロメタン(3mL)中の3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(60mg、0.13mmol)、(2E)−4−(ジメチルアミノ)ブタ−2−エン酸(34mg、0.26mmol)、1−プロパンホスホン酸環状無水物(T3P)(117μL、EtOAc中50%、0.2mmol)及びトリエチルアミン(37μL、0.26mmol)の混合物を、室温で30分間撹拌した。
[3−(3−アクリロイルアミノ−フェニル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(3−アクリロイルアミノ−フェニル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C24H20N4O3についてのLCMS計算値(m/e)412、実測値413(M+H)。
[3−(3−アクリロイルアミノ−フェニル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(3−アクリロイルアミノ−フェニル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸イソプロピルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C20H20N4O3についてのLCMS計算値(m/e)364、実測値365(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソブタン酸から調製した。C25H22N4O4についてのLCMS計算値(m/e)442、実測値443(M+H)。
{3−[3−((E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−((E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルを、3−ヨード−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び(E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エン酸 [3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−アミドから調製した。C23H27N5O3についてのLCMS計算値(m/e)421、実測値422(M+H)。
{3−[3−(アクリロイル−メチル−アミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(アクリロイル−メチル−アミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルを、3−ヨード−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びN−メチル−N−[3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−アクリルアミドから調製した。C21H22N4O3についてのLCMS計算値(m/e)378、実測値379(M+H)。
(3−{3−[(3−メトキシ−プロピオニル)−メチル−アミノ]−フェニル}−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、(3−{3−[(3−メトキシ−プロピオニル)−メチル−アミノ]−フェニル}−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸イソプロピルエステルを、3−ヨード−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び3−メトキシ−N−メチル−N−[3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−プロピオンアミドから調製した。C22H26N4O4についてのLCMS計算値(m/e)410、実測値411(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソブタン酸から調製した。C21H22N4O4についてのLCMS計算値(m/e)394、実測値395(M+H)。
{3−[3−(2−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−トリフルオロメチル−アクリル酸から調製した。C25H19F3N4O3についてのLCMS計算値(m/e)480、実測値481(M+H)。
{3−[3−(3,3−ジメチル−2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(3,3−ジメチル−2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び3,3−ジメチル−2−オキソ−酪酸から調製した。C27H26N4O4についてのLCMS計算値(m/e)470、実測値471(M+H)。
{3−[3−(3−メチル−2−オキソ−ペンタノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(3−メチル−2−オキソ−ペンタノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び3−メチル−2−オキソ−ペンタン酸から調製した。C27H26N4O4についてのLCMS計算値(m/e)470、実測値471(M+H)。
{3−[3−(4−メチル−2−オキソ−ペンタノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(4−メチル−2−オキソ−ペンタノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び4−メチル−2−オキソ−ペンタン酸から調製した。C27H26N4O4についてのLCMS計算値(m/e)470、実測値471(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−2−フェニル−アセチルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−2−フェニル−アセチルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びオキソ−フェニル−酢酸から調製した。C29H22N4O4についてのLCMS計算値(m/e)490、実測値491(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−プロピオニルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−プロピオニルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(2−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−プロピオン酸から調製した。C24H19ClN4O4についてのLCMS計算値(m/e)462、実測値463(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(2−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−酪酸から調製した。C25H21ClN4O4についてのLCMS計算値(m/e)476、実測値477(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−酪酸から調製した。C25H21FN4O4についてのLCMS計算値(m/e)460、実測値461(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−プロピオニルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−プロピオニルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−プロピオン酸から調製した。C24H19FN4O4についてのLCMS計算値(m/e)446、実測値447(M+H)。
{3−[3−(2−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−トリフルオロメチル−アクリロイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−トリフルオロメチル−アクリル酸から調製した。C25H18F4N4O3についてのLCMS計算値(m/e)498、実測値499(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−ブチリルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−酪酸から調製した。C26H21N5O4についてのLCMS計算値(m/e)値467、実測値468(M+H)。
{3−[3−(2−オキソ−プロピオニルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−オキソ−プロピオニルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−(3−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−ピロロ[2,3b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−プロピオン酸から調製した。C25H19N5O4についてのLCMS計算値(m/e)453、実測値454(M+H)。
(3−{3−[(1−シアノ−シクロプロパンカルボニル)−アミノ]−フェニル}−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、(3−{3−[(1−シアノ−シクロプロパンカルボニル)−アミノ]−フェニル}−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル)−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(3−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び1−シアノ−シクロプロパンカルボン酸から調製した。C26H21N5O3についてのLCMS計算値(m/e)451、実測値452(M+H)。
{3−[3−(2−シアノ−アセチルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[3−(2−シアノ−アセチルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸イソプロピルエステルを、3−ヨード−5−イソプロポキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−シアノ−N−[3−(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−フェニル]−アセトアミドから調製した。C20H19N5O3についてのLCMS計算値(m/e)377、実測値378(M+H)。
{3−[2−((E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[2−((E)−4−ジメチルアミノ−ブタ−2−エノイルアミノ)−フェニル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(2−アミノ−フェニル)−5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ピロロ[2,3−b]ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び(2E)−4−(ジメチルアミノ)ブタ−2−エン酸から調製した。C27H27N5O3についてのLCMS計算値(m/e)469、実測値470(M+H)。
{3−[1−(2−オキソ−プロピオニル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルの調製
4−[5−(2−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(0.33g、0.68mmol)を、DCM(5mL)に溶解した。TFA(1.56g、13.7mmol、当量:20)を加えた。反応混合物を室温で1時間撹拌した。反応物を濃縮した。
C23H21ClN4O4についてのLCMS計算値(m/e)452、実測値453(M+H)。
{3−[1−(2−オキソ−ブチリル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[1−(2−オキソ−ブチリル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 2−クロロ−ベンジルエステルを、4−[5−(2−クロロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−酪酸から調製した。C24H23ClN4O4についてのLCMS計算値(m/e)466、実測値467(M+H)。
{3−[1−(2−オキソ−ブチリル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[1−(2−オキソ−ブチリル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルを、4−[5−(3−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−酪酸から調製した。C24H23FN4O4についてのLCMS計算値(m/e)450、実測値451(M+H)。
{3−[1−(2−オキソ−ブチリル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[1−(2−オキソ−ブチリル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸ベンジルエステルを、4−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−酪酸から調製した。C24H24N4O4についてのLCMS計算値(m/e)432、実測値433(M+H)。
{3−[1−(2−オキソ−プロピオニル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[1−(2−オキソ−プロピオニル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−フルオロ−ベンジルエステルを、4−[5−(3−フルオロ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−プロパン酸から調製した。C23H21FN4O4についてのLCMS計算値(m/e)436、実測値437(M+H)。
{3−[1−(2−オキソ−プロピオニル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、{3−[1−(2−オキソ−プロピオニル)−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル]−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル}−カルバミン酸 3−シアノ−ベンジルエステルを、4−[5−(3−シアノ−ベンジルオキシカルボニルアミノ)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル]−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及び2−オキソ−プロパン酸から調製した。C24H21N5O4についてのLCMS計算値(m/e)443、実測値444(M+H)。
[3−(1−アクリロイル−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(1−アクリロイル−1,2,3,6−テトラヒドロ−ピリジン−4−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルを、4−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,6−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C23H22N4O3についてのLCMS計算値(m/e)402、実測値403(M+H)。
[3−(1−アクリロイル−ピペリジン−4−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(1−アクリロイル−ピペリジン−4−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルを、4−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C23H24N4O3についてのLCMS計算値(m/e)404、実測値405(M+H)。
[3−(1−アクリロイル−ピペリジン−4−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸イソプロピルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(1−アクリロイル−ピペリジン−4−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸イソプロピルエステルを、4−(5−イソプロポキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C19H24N4O3についてのLCMS計算値(m/e)356、実測値357(M+H)。
[3−(1−アクリロイル−1,4,5,6−テトラヒドロ−ピリジン−3−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(1−アクリロイル−1,4,5,6−テトラヒドロ−ピリジン−3−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルを、5−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3,4−ジヒドロ−2H−ピリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C23H22N4O3についてのLCMS計算値(m/e)402、実測値403(M+H)。
[3−(1−アクリロイル−3−ヒドロキシ−アゼチジン−3−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
上記と同様の方法を用いて、[3−(1−アクリロイル−3−ヒドロキシ−アゼチジン−3−イル)−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−5−イル]−カルバミン酸ベンジルエステルを、3−(5−ベンジルオキシカルボニルアミノ−1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−3−イル)−3−ヒドロキシアゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル及びアクリル酸から調製した。C21H20N4O4についてのLCMS計算値(m/e)392、実測値393(M+H)。
ブルトンチロシンキナーゼ(BTk)阻害アッセイ
このアッセイでは、濾過を通して放射性33Pリン酸化生成物を捕捉する。BTk、ビオチン化SH2ペプチド基質(Src相同)、及びATPの相互作用により、ペプチド基質がリン酸化される。ビオチン化生成物を、ストレプトアビジンセファロースビーズに結合させる。すべての結合している放射標識生成物をシンチレーションカウンターで検出する。
1) 500gで遠心分離することによってビーズをすすぐ。
2) 該ビーズをPBS及びEDTAで再構成して20%ビーズスラリーを生成する。
3) 30℃で15分間、基質を含まない反応ミックス(アッセイバッファ、DTT、ATP、33P ATP)及び基質を含むミックス(アッセイバッファ、DTT、ATP、33P ATP、ペプチド基質)をプレインキュベートする。
4) アッセイを開始するために、酵素バッファ(イミダゾール、グリセロール−2−リン酸、BSA)中BTk 10μL及び試験化合物 10μLを室温で10分間プレインキュベートする。
5) 基質を含まないか又は含む反応混合物 30μLをBTk及び化合物に添加する。
6) 全アッセイミックス 50μLを30℃で30分間インキュベートする。
7) アッセイ 40μLをフィルタープレート中のビーズスラリー 150μLに移して、反応を停止させる。
8) 30分後、以下の工程を用いてフィルタープレートを洗浄する
3×NaCl 250μL
3×1%リン酸を含有するNaCl 250μL
1×H2O 250μL。
9) 65℃で1時間又は室温で一晩プレートを乾燥させる。
10) microscint−20 50μLを添加し、そして、シンチレーションカウンターで33P(cpm)を計数する。
生データ(cpm)から活性率(%)を計算する。
活性率=(サンプル−bkg)/(総活性−bkg)×100
1サイト用量反応シグモイドモデルを用いて、活性率からIC50を計算する。
y=A+((B−A)/(1+((x/C)D))))
x=化合物の濃度、y=活性率(%)、A=最低、B=最高、C=IC50、D=1(ヒル勾配)
このBTK競合アッセイでは、FRET(フェルスター/蛍光共鳴エネルギー転移)技術を用いて、ブルトンチロシンキナーゼの不活化状態についての化合物の効力(IC50)を測定する。BTK−Eu複合体を氷上で1時間インキュベートした後、50nM BTK-Bioease(商標):10nM Eu−ストレプトアビジン(Perkin-Elmer カタログ番号AD0062)の開始濃度で用いた。アッセイバッファは、20mM HEPES(pH7.15)、0.1mM DTT、10mM MgCl2、3%キナーゼ安定剤(Fremont Biosolutions、カタログ番号STB−K02)を含む0.5mg/mL BSAからなっていた。1時間後、上記で得られた反応混合物をアッセイバッファで10倍希釈して、5nM BTK:1nM Eu−ストレプトアビジン複合体(ドナーフルオロフォア)を作製した。次いで、0.11nM BTK−Eu及び0.11nM キナーゼトレーサー178(Invitrogen、カタログ番号PV5593)の混合物 18μLを、非ネガティブコントロールとしてのBTK−Euのみと共に、384ウェル平底プレート(Greiner、784076)に分配した。アッセイにおいて試験する化合物は、10倍濃縮物として調製し、そして、10点曲線を作成するために半対数増分でDMSOによって連続希釈した。FRET反応を開始させるために、10倍DMSO原液として調製した化合物をプレートに添加し、該プレートを14℃で18〜24時間インキュベートした。
最高FRET(%)=100×[(FSR化合物−FSR平均最低)/(FSR平均最高−FSR平均最低)]
(式中、FSR=FRETシグナル比)。最高FRET(%)曲線をActivity Base(Excel)にプロットし、そして、IC50(%)、ヒル勾配、z’、及びCV(%)を決定した。Microsoft Excelを用いて二連曲線(2つの独立な希釈液から得た1本の阻害曲線)から平均IC50及び標準偏差を得る。
ヒト血液におけるB細胞のB細胞受容体媒介活性化を抑制するBTk阻害剤の能力を試験するための手順は、以下の通りである。
本発明の化合物によるB細胞活性化の阻害を、抗IgMで刺激されたB細胞の応答に対する試験化合物の効果を決定することによって示す。
成長培地:L−グルタミン(Invitrogen、カタログ番号61870−010)、10%牛胎児血清(FBS、Summit Biotechnology、カタログ番号FP−100−05);1mM ピルビン酸ナトリウム(Invitrogen、カタログ番号11360−070)を含むRPMI1640培地。
100μLの最高最終アッセイ濃度を達成するために、10mM 化合物原液(DMSOで作製)24μLをFLIPRバッファ 576μLに直接添加する。(Biomek2000ロボットピペッターを用いて)試験化合物をFLIPRバッファで希釈し、以下の希釈スキームを得る:ビヒクル、1.00×10−4M、1.00×10−5、3.16×10−6、1.00×10−6、3.16×10−7、1.00×10−7、3.16×10−8。
カルシウムの細胞内増加は、最高−最低統計値(Molecular DevicesのFLIPRコントロール及び統計値エクスポートソフトウェアを用いて刺激性抗体の添加によって引き起こされるピークから静止ベースラインを減じる)を用いて報告した。非線形曲線当てはめ(GraphPad Prismソフトウェア)を用いてIC50を決定した。
0日目に、完全フロインドアジュバント(CFA)中II型コラーゲンのエマルションをマウスの尾の付け根又は背中の数ヶ所に注射する(i.d.)。コラーゲン免疫後、動物は、約21〜35日で関節炎を発現する。関節炎の発症は、21日目に不完全フロインドアジュバント(IFA;i.d.)中コラーゲンを全身投与することによって同期(追加免疫)される。追加免疫に対するシグナルである軽度の関節炎(スコア1又は2;以下のスコアの説明を参照)の任意の発症について、20日後から毎日動物を検査する。追加免疫後、マウスにスコアをつけ、規定の期間(典型的に、2〜3週間)及び投与頻度(1日1回(QD)又は1日2回(BID))で候補治療剤を投与する。
0日目に、不完全フロインドアジュバント(IFA)中ウシII型コラーゲンのエマルションをラットの背中の数ヶ所に皮内(i.d.)注射する。約7日目、尾の付け根又は背中の別の部位にコラーゲンエマルションの追加免疫注射(i.d.)を行う。関節炎は、一般的に、最初のコラーゲン注射の12〜14日後に観察される。14日目以降、下記(関節炎の評価)の通り関節炎の発現について動物を評価してよい。2回目の抗原曝露時から始めて、規定の期間(典型的に、2〜3週間)及び投与頻度(1日1回(QD)又は1日2回(BID))で、動物に候補治療剤を予防的に投与する。
両モデルにおいて、下記基準にしたがって4本の足を評価することを含む採点システムを用いて、足及び肢関節の炎症発現を定量する。
2=2つ以上の関節における腫脹
3=2つ超の関節を含む、肉眼で見える足の腫脹
4=足及び指全体の重篤な関節炎
雄のBrown-Norwayラットを、ミョウバン 0.2mL中OA(オボアルブミン) 100μgで3週間にわたって週1回(0、7、及び14日目)i.p.感作する。21日目(最後の感作の1週間後)に、OAエアゾールで抗原曝露(1%OAで45分間)する0.5時間前に、ラットにビヒクル又は化合物調合剤のいずれかを1日1回皮下投与し、そして、抗原曝露の4又は24時間後に終了する。殺処分時に、それぞれ血清検査及びPKのためにすべての動物から血清及び血漿を回収する。気管カニューレを挿入し、そして、肺をPBSで3回洗浄する。BAL液を全白血球数及び白血球分画について分析する。細胞のアリコート(20〜100μL)中の全白血球数は、Coulter Counterで測定する。白血球分画については、サンプル 50〜200μLをCytospinで遠心分離し、そして、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を用いて光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球、及びリンパ球の比率を計数し、そして、百分率として表す。BTkの代表的な阻害剤は、対照レベルと比較して、OA感作及び抗原曝露したラットのBALにおいて全白血球数の減少を示す。
Claims (25)
- 式(I):
(式中、
R1は、ベンジル又は低級アルキルであり、それぞれ、場合により1つ以上のR1’で置換されており;
各R1’は、独立して、低級アルキル、ハロ、又はシアノであり;
Xは、CH又はNR4であり;
R4は、C(=O)[C(=O)] nR4’であり;
R4’は、低級アルキル又は低級アルケニルであり;
nは、0又は1であり;
----は、単結合又は二重結合のいずれかを表し;
mは、0又は1であり;
rは、0又は1であり;
Yは、CN(R3)C(=O)R2、CH2、又はNであり、ただしXがCHの場合はYはNではない;
R2は、低級アルキル、低級アルケニル、C(=O)、又はシクロアルキルであり、それぞれ、場合により1つ以上のR2’で置換されており、ただしR 2 がC(=O)の場合は1つ以上のR 2’ で置換されており;
各R2’は、独立して、低級アルキル、低級アルケニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロ低級アルキル、又はシアノであり;そして
R3は、H又は低級アルキルである)
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。 - Xが、CHである、請求項1に記載の化合物。
- R3が、Hである、請求項1又は2のいずれか一項記載の化合物。
- R1が、ベンジルであり、場合により1つ以上のR1’で置換されている、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
- R1が、低級アルキルであり、場合により1つ以上のR1’で置換されている、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
- R2が、低級アルケニルであり、場合により1つ以上のR2’で置換されている、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
- R2が、C(=O)であり、1つ以上のR2’で置換されている、請求項1〜6のいずれか一項記載の化合物。
- Xが、NR4である、請求項1に記載の化合物。
- Yが、CH2である、請求項8に記載の化合物。
- R4が、C(=O)R4’である、請求項8又は9に記載の化合物。
- R4’が、低級アルケニルである、請求項10に記載の化合物。
- R4が、C(=O)C(=O)R4’である、請求項8又は9に記載の化合物。
- R4’が、低級アルキルである、請求項12に記載の化合物。
- 少なくとも1つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
- 炎症性及び/又は自己免疫状態を処置するための請求項15に記載の医薬組成物。
- 炎症性状態を処置するための請求項15に記載の医薬組成物。
- 関節リウマチを処置するための請求項15に記載の医薬組成物。
- 喘息を処置するための請求項15に記載の医薬組成物。
- 増殖性疾患を処置するための請求項15に記載の医薬組成物。
- 増殖性疾患が、癌である、請求項20に記載の医薬組成物。
- 増殖性疾患が、T細胞増殖性疾患である、請求項20に記載の医薬組成物。
- 増殖性疾患が、B細胞増殖性疾患である、請求項20に記載の医薬組成物。
- 化学療法剤若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心血管疾患を処置するための剤、糖尿病を処置するための剤、及び免疫不全疾患を処置するための剤から選択される追加の治療剤を更に含む、請求項15に記載の医薬組成物。
- 炎症性及び/又は自己免疫状態を処置する医薬を調製するための、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物の使用。
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