JP2016502524A - ウィルス疾患の治療で有用なホスホヌクレオシド類 - Google Patents

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Abstract

本発明の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ（式中、基は特許請求の範囲で定義されている。）に関するものである。本発明のさらなる態様は、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物、およびウィルス疾患を治療するための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物の使用に関するものである。

Description

本発明は、修飾されたホスホヌクレオシドに関する。より具体的には、本発明は、ＤＮＡおよびＲＮＡウィルスなどの１以上のウィルス疾患を治療することができる修飾されたホスホヌクレオシドに関するものであるが、それに限定されるものではない。
ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）は、１９８３年に後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の病原体であると最初に確認された［１］。２０１０年終了時で、世界的にレトロウィルス感染して生きている人が３４００万人と推算され、２００９年のみで約２７０万人が新たに感染した［２］。１９９６年の薬物投与法ＨＡＡＲＴ（高活性抗レトロウィルス療法）の導入によって、ＨＩＶは致死的感染から管理可能な慢性状態となり、ＨＩＶ関連の罹患率および死亡率はかなり低下した［３−６］。しかしながら、レトロウィルスは遺伝的変異性が高いために、現在の薬物療法に対する抵抗性が大きな問題であり、ＨＩＶに加えて、Ｂ型およびＣ型肝炎ならびにヒトＴ−リンパ球指向性ウィルス１（ＨＴＬＶ−１）などの多くの他の慢性的ウィルス感染がある［７］。世界的に約１２人に一人、すなわちほぼ５億人が慢性ウィルス性肝炎に罹患して生きている［２］。これを考慮すると、これまで膨大な時間および労力が抗ウィルス剤、最も顕著にはヌクレオシド類似体の設計および合成に投入されており、新たなより効率的な抗ウィルス剤を開発することが非常に重要である。
ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）は最初の種類の承認抗ＨＩＶ薬であり、多くの他の種類の抗ＨＩＶ剤（すなわちヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、細胞侵入阻害剤およびコレセプター阻害剤）が発見されているにも拘わらず、それらはＨＩＶ治療において極めて重要な役割を果たし続けている［８］。ＮＲＴＩは二つの異なる機構、すなわちｄＮＴＰ基質に関してＨＩＶ ＲＴの競争的阻害およびＤＮＡ鎖終止によってウィルス複製を妨害する［９，１０］。しかしながら、これを行うため、これらの化合物は最初に、一連の宿主細胞キナーゼを介して、それらの活性三リン酸型に変換されなければならない［１０−１２］。次に、三リン酸化薬剤分子が真正のヌクレオチドと競合して、成長するＤＮＡ鎖に受容され、そして組み込まれると、ＮＲＴＩが内因性ヌクレオシドの３’−ＯＨ基を持たないことから鎖延長は終止する［１０］。リン酸結合の不安定性に加え細胞膜透過性が低いために、活性三リン酸化型の医薬のウィルスに感染した細胞への直接送達は起こらない［１３］。この問題は、ホスホルアミデート、シクロサル（ＣｙｃｌｏＳａｌ）またはアルコキシアルキルプロドラッグ技術［１４−１７］の使用、更にはリン酸結合への安定なアイソスターとしてのホスホネートの発見によって一部克服された［１８，１９］。
広スペクトラム抗ウィルス剤としての（Ｓ）−ＨＰＭＰＡの発見により、急速に新たな種類の抗ウィルス剤；ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤（ＮｔＲＴＩ）の開発に至った［１９，２０］。テノホビル（ＰＭＰＡ）は、ＨＩＶおよびＨＢＶの治療のためにＦＤＡによって現在承認されている唯一のヌクレオチド逆転写酵素阻害剤である。それは、イン・ビボで加水分解されてテノホビルとなるプロドラッグフマル酸テノホビルジソプロキシル（ＴＤＦ）として市販されている［８，１０］。ホスホネート基の存在によって、化合物は、多くの場合律速段階である初期リン酸化を回避することができ、活性なテノホビル−ジホスフェートを作るのに必要なリン酸化は２回のみである［８］。
炭素環ヌクレオシドは、フラノース環の酸素がメチレン基によって置き換わっているＮＲＴＩの重要な下位分類である［２１−２３］。この置換によって、天然ヌクレオシドの不安定なグリコシド結合を持たないために、これらの化合物は細胞内ホスホリラーゼおよび加水分解酵素による開裂に対して安定となる。炭素環ヌクレオシドは、従来のヌクレオシドと比較して高い親油性も示し、イン・ビボ半減期の延長、経口効率の上昇および細胞膜透過の増加をもたらす［２２］。この種類の天然化合物には、強力な抗腫瘍活性および抗ウィルス活性を有するアリステロマイシン１およびネプラノシンＡ２などがある［２４］。合成炭素環誘導体には、抗ウィルス剤であるアバカビル３［２５］および炭素環−ｄｄＡ４［２６］などがある。
Figure 2016502524
ホスホノヌクレオシド５［２７］および炭素環ホスホノヌクレオシド６［２８］は、かなりの抗ＨＩＶ活性を有する。二リン酸化炭素環ホスホノヌクレオシド誘導体７も、強力にＨＩＶ−ＲＴを阻害する［１８］。これに加えて、ホスホノギ酸（ＰＦＡ）８およびホスホノ酢酸（ＰＡＡ）９の抗ウィルス特性が、ほぼ３０年前に確立されている［２９］。マッケンナ（ＭｃＫｅｎｎａ）らは後に、さまざまなハロゲン置換およびメチル置換されたＰＡＡの誘導体を合成しており、そのうちの多くが強力な抗ウィルス活性を有することが認められた。興味深いことに、カルボニル誘導体１０は、９より有意に活性が高かった［３０］。
Figure 2016502524
概して、ホスホノヌクレオシド研究には、簡単なＣＨ２ＰＯ（ＯＨ）２置換基を有する化合物が関与する。しかしながら、ホスホン酸部分に対してジェミナルである置換基を有する誘導体についての報告がいくつかある［３１−３６］。ギルバートら（Ｇｉｌｂｅｒｔ ａｎｄ ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓ）は、ヌクレオシド三リン酸模倣体となり得るものとしてヌクレオシドのクエン酸誘導体の合成について報告している［３７，３８］。それらの化合物は不活性であることが認められ、それはクエン酸部分がリン酸基についての良好な代替部分ではないことを示している。ベドラスら（Ｖｅｄｒａｓ ｅｔ ａｌ．）は、ヌクレオシド二リン酸アイソスターの可能性があるものとしてのヌクレオシドジカルボキシレートの合成を報告している［３９］。最近、ジャネバ（Ｊａｎｅｂａ）は、別の遠いカルボン酸官能基を組み込んだ非環状ヌクレオシドホスホネートについて記載しているが、これらの化合物は抗ウィルス活性を全く示さなかった［４０］。３ＴＣの５’−ＯおよびＮ−位へのエステルおよびアミド結合によるＰＡＡおよびＰＦＡの結合については既報であるが、得られた誘導体は親化合物よりＨＩＶ−１に対する活性が低かった［４１］。
本発明は、さらなるホスホノヌクレオシド誘導体、特にはＨＩＶなどのＤＮＡおよびＲＮＡウィルスのようなウィルス疾患の治療における治療用途を有するものを提供することを目的とする。
本発明の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグに関するものである。
Figure 2016502524
式中、
Ｘは、ＯおよびＮＲ９から選択され；
Ｙは、直接結合、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＮＣＨ３、Ｃ＝ＣＨ２または（ＣＲ８Ｒ８’）ｎであり、ｎは１または２であり；
Ｚは、直接結合または（ＣＲ２Ｒ２’）ｐであり、ｐは１、２、３または４であり；
Ｑは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨおよびＣ≡Ｃから選択され；
ｒは０、１、２または３であり；
ｓは０、１、２または３であり；
ｔは０または１であり；
ｑは０、１、２、３、４または５であり；
ｐが１、２、３または４である場合、「ａ」は単結合、または二重結合（その場合、Ｒ２およびＲ２’のうちの一方が存在せず、Ｒ３およびＲ３’のうちの一方が存在しない）であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８およびＲ８’はそれぞれ独立に、Ｈ、ＯＲ１０，ハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、Ｎ３、ＳＲ１３、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニルおよびアリールから選択され、またはＲ２およびＲ２’のうちの一方がＲ３およびＲ３’のうちの一方とともに、エポキシドを形成しており；
Ｒ５は、Ｈ、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２およびＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
Ｒ９〜Ｒ１３はそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
Ｂａｓｅは天然または非天然の核酸塩基である。
主要な段階として遷移金属触媒Ｏ−Ｈ挿入を用いる一連の新規な炭素環ヌクレオシドのホスホネート誘導体の合成に関して、合成方法が開発されている。その構造の重要な新規性は、ホスホン酸に隣接するカルボン酸部分の組み込みである。一連のラセミ体についての方法が開発され、続いて両方のエナンチオマーにそれを使用拡大することが、エナンチオマー豊富原料の使用によって行われた。各新規化合物の完全な特性決定が行われ、３１Ｐへのカップリングのために特徴的である分光学的特徴が構造割り当てにおいて特に有用である。多くの新規な誘導体がＨＩＶ−ＲＴに対して顕著な阻害活性を示しており、ヌクレオシドホスホネートの分野における非常に面白い新たな主要化合物が得られている。
本発明の第２の態様は、医薬として許容される希釈剤、賦形剤または担体と混合された上記で定義の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関するものである。
本発明の別の態様は、医薬品で使用するための、上記で定義の式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグに関するものである。
本発明の別の態様は、ウィルス疾患治療で使用するための、上記で定義の式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグに関するものである。
本発明の更に別の態様は、ウィルス疾患を治療するための医薬品の製造における、上記で定義の式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグの使用に関するものである。
本発明の更に別の態様は、治療上有効量の上記で定義の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグを、哺乳動物に投与することを含む、ウィルス疾患の治療方法に関するものである。
本発明の別の態様は、ＨＩＶ−ＲＴを阻害する能力を有するさらなる候補化合物を確認するためのアッセイにおける、上記で定義の式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグの使用に関するものである。
本発明の更に別の態様は、本発明による化合物の製造方法に関するものである。
本発明は、上記で定義される式（Ｉ）のホスホノヌクレオシド誘導体およびその治療的使用に関するものである。
一般式（Ｉ）およびそれに関連する定義から明らかになるように、置換基の性質に応じて、本願で特許請求されるホスホヌクレオシド類に１個もしくは数個の不斉炭素原子が存在し得る。そのホスホヌクレオシド類は、いずれかおよび全ての不斉炭素原子（環上の、そしてそれの側鎖上の置換基を含む）の存在によって生じる全ての立体異性体、ならびにラセミ混合物などのそれらの混合物を含むものである。しかしながら、５員環または６員環を考慮すると、ある種の立体化学配置、例えば下記で記載の式（Ｉｄ）および（Ｉｅ）の化合物が特に興味深いと考えられる。
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、置換されていても（一置換または多置換）、置換されていなくとも良い飽和の直鎖および分岐の両方のアルキル基を含む。好ましくは、アルキル基は、Ｃ１−２０アルキル基、より好ましくはＣ１−１５、更により好ましくはＣ１−１２アルキル基、更により好ましくはＣ１−６アルキル基、より好ましくはＣ１−３アルキル基である。特に好ましいアルキル基には、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルなどがある。好適な置換基には、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２，ＣＦ３、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２、アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、Ｎ３、ＣＯ２−アルキル、ＣＯ２Ｈから選択される１以上の基がある。アルキル基は置換されていないことが好ましい。
本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、置換されていても（一置換または多置換）、置換されていなくとも良いＣ６−１２芳香族基を指す。より好ましくは、アリール基はＣ６−１０芳香族基である。代表的な例には、フェニルおよびナフチルなどがある。好適な置換基には、アルキル、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２，ＣＦ３、ＮＨアルキル、Ｎ（アルキル）２、アルコキシ、ハロゲン、Ｎ３、ＣＮ、ＣＯ２−アルキルおよびＣＯ２Ｈから選択される１以上の基などがある。
本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、分岐もしくは分岐していない、置換されていても（一置換または多置換）、置換されていなくとも良い１以上の炭素−炭素二重結合を含む基を指す。アルケニル基は、好ましくはＣ２−２０アルケニル基であり、より好ましくはＣ２−１５アルケニル基であり、更により好ましくはＣ２−１２アルケニル基であり、また好ましくはＣ２−６アルケニル基であり、より好ましくはＣ２−３アルケニル基である。好適な置換基には、アルキル、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２，ＣＦ３、ＮＨアルキル、Ｎ（アルキル）２、アルコキシ、ハロゲン、Ｎ３、ＣＮ、ＣＯ２−アルキルおよびＣＯ２Ｈから選択される１以上の基などがある。好ましくは、アルケニル基は置換されていない。
本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、分岐もしくは分岐していない、置換されていても（一置換または多置換）、置換されていなくとも良い１以上の三重結合を含む基を指す。好ましくはアルキニル基はＣ２−２０アルキニル基であり、より好ましくはＣ２−１５アルキニル基であり、更により好ましくはＣ２−１０アルキニル基であり、また好ましくはＣ２−６アルキニル基である。好適な置換基には、アルキル、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２，ＣＦ３、ＮＨアルキル、Ｎ（アルキル）２、アルコキシ、ハロゲン、Ｎ３、ＣＮ、ＣＯ２−アルキルおよびＣＯ２Ｈから選択される１以上の基などがある。アルケニル基は置換されていないことが好ましい。
本明細書で使用される場合、ハロゲンには、クロロ、ブロモ、ヨードおよびフルオロなどがある。
好適な一実施形態において、ｑは０、１、２または３であり、より好ましくは、０または１である。更に好適な一実施形態において、ｑは０である。
好適な一実施形態において、ｔは０である。すなわち当該化合物は、式（Ｉ’）のものであるか、それの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグである。
Figure 2016502524
式中、
Ｘは、ＯおよびＮＲ９から選択され；
Ｙは、直接結合、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＮＣＨ３、Ｃ＝ＣＨ２または（ＣＲ８Ｒ８’）ｎであり、ｎは１または２であり；
Ｚは直接結合または（ＣＲ２Ｒ２’）ｐであり、ｐは１、２、３または４であり；
ｑは０、１、２、３、４または５であり；
ｐが１、２、３または４である場合、「ａ」は単結合または二重結合（その場合、Ｒ２およびＲ２’のうちの一方は存在せず、Ｒ３およびＲ３’のうちの一方は存在しない）であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８およびＲ８’はそれぞれ独立に、Ｈ、ＯＲ１０，ハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、Ｎ３、ＳＲ１３、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニルおよびアリールから選択され、またはＲ２およびＲ２’のうちの一方がＲ３およびＲ３’のうちの一方とともにエポキシドを形成しており；
Ｒ５は、Ｈ、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２およびＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
Ｒ９〜Ｒ１３はそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
Ｂａｓｅは天然または非天然の核酸塩基である。
好適な一実施形態において、当該化合物は、式（Ｉａ）もの、またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグである。
Figure 2016502524
他の好適な実施形態において、当該化合物は、式（Ｉｂ）のもの、またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグである。
Figure 2016502524
好適な一実施形態において、当該化合物は式（Ｉａ）の化合物および式（Ｉｂ）の化合物のラセミ混合物である。
好適な一実施形態において、当該化合物は、炭素環ホスホヌクレオシド、すなわちＹが（ＣＲ８Ｒ８’）ｎである化合物である。特に、炭素環類似体は、天然のヌクレオシド一リン酸と等比体積である中心構造を含むことから、本発明者らの以前のホスホノヌクレチド類［４２、４３］より天然基質により近いものと推定される（下記参照）。
Figure 2016502524
特に好適な一実施形態において、Ｙは（ＣＲ８Ｒ８’）ｎであり、ｎは１である。すなわち当該化合物は、式（Ｉｃ）の炭素環化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグである。
Figure 2016502524
 式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ８’、Ｒ６、Ｒ５、Ｒ９〜Ｒ１３およびＢａｓｅは上記で定義の通りである。
好適な一実施形態において、Ｒ８およびＲ８’はいずれもＨであり、すなわちＹはＣＨ２ＣＨ２またはＣＨ２である。更に好ましくは、ＹはＣＨ２である。
ホスホノヌクレオシドに関する以前の研究［４２、４３］後に、本出願人による研究によって、炭素環ホスホノヌクレオシドの構造的特徴を併せ持った９（上記参照）およびその誘導体の抗ウィルス特性の組み合わせが、ホスホネートが抗ウィルス活性を示すα−カルボン酸置換基を有する新規な一連の化合物１１ａ−ｅを提供することが明らかになっている。これらの誘導体は、α−カルボン酸置換基が第２のリン酸塩模倣体（またはα−カルボン酸置換基がγ−リン酸塩模倣体として作用できる場合は三リン酸塩模倣体）として作用してもしなくても良い、潜在的な一リン酸または二リン酸塩模倣体である。一リン酸化ホスホノヌクレオシド（遊離カルボン酸１２およびメチルエステル１３の両方）も、三リン酸塩模倣体として評価される対象化合物である。二リン酸化誘導体１４および１５も、カルボン酸部分がリン酸基を模倣するのではなく単に置換基として作用する場合に評価される興味深いものである。
Figure 2016502524
スキームＡ
好適な一実施形態において、Ｂａｓｅはプリンまたはピリミジン核酸塩基である。
本発明の文脈において、「核酸塩基」という用語は、天然核酸塩基ならびに非天然核酸塩基を網羅するものである。以前は「非天然」と考えられてきた各種核酸塩基が後に自然界で認められていることは当業者には明らかなはずである。従って、「核酸塩基」には、公知のプリンおよびピリミジン複素環だけでなく、それの複素環類似体および互変異性体も含まれる。核酸塩基の実例としては、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシル、プリン、キサンチン、ジアミノプリン、８−オキソ−Ｎ６−メチルアデニン、７−デアザキサンチン、７−デアザグアニン、Ｎ４，Ｎ４−エタノシトシン、Ｎ６，Ｎ６−エタノ−２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ３−Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、シュードイソシトシン（ｐｓｅｕｄｏｉｓｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）、２−ヒドロキシ−Ｓ−メチル−４−トリアゾロピリジン、イソシトシン、イソグアニン、イノシンおよびベンナー（Ｂｅｎｎｅｒ）らの米国特許第５，４３２，２７２号に記載の「非天然」核酸塩基がある。「核酸塩基」という用語は、これら全ての例、ならびにそれらの類似体および互変異性体を網羅するものである。特に興味深い核酸塩基は、アデニン、グアニン、チミン、シトシンおよびウラシルであり、それらはヒトでの治療的および診断的利用に関して天然核酸塩基と考えられる。
より好適な実施形態において、Ｂａｓｅは、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、５−メチルシトシン（ＭｅＣ）、イソシトシン、シュードイソシトシン、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）、５−ブロモウラシル、５−プロピニルウラシル、５−フルオロウラシル、５−（２−ハロビニル）ウラシル、Ｎ−４置換されたシトシン（すなわち、ヒドロキシルアミン）、５−プロピニル−６−フルオロウラシル、５−メチルチアゾール−ウラシル、６−アミノプリン、２−アミノプリン、イノシン、２，６−ジアミノプリン、７−プロピン−７−デアザアデニン、７−プロピン−７−デアザグアニン、５−チアゾリルウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、５−プロピニル−シトシン、５−チアゾリルシトシン、フェノキサジン、Ｇ−ｃｌａｍｐ、Ｎ２−アミノプロピルグアニンおよび２−クロロ−６−アミノプリンから選択される核酸塩基である。
特に好適な一実施形態において、Ｂａｓｅは、Ａ、Ｃ、ＭｅＣ、Ｇ、Ｔ、５−フルオロウラシルおよびＵから選択される核酸塩基である。
好適な一実施形態において、ＸはＯであり、Ｒ６はＨまたはＭｅである。メチルエステル（Ｒ６がＭｅである）は、遊離カルボン酸化合物のプロドラッグであることができる。細胞内に入ると、そのメチルは除去され得る。
好適な一実施形態において、ｐは２である。すなわち、Ｚは（ＣＲ２Ｒ２’）２である。別のより好ましい実施形態において、ｐは１であり、すなわちＺはＣＲ２Ｒ２’である。
好適な一実施形態において、ＹはＯまたは（ＣＲ８Ｒ８’）ｎである。
他の好適な実施形態において、ｐは１であり、Ｙは直接結合である。
他の好適な実施形態において、Ｚは直接結合であり、ＹはＯまたは（ＣＲ８Ｒ８’）ｎである。
特に好適な一実施形態において、ｐは１であり、ＹはＯまたは（ＣＲ８Ｒ８’）ｎである。
他の好適な実施形態において、ｐは１であり、「ａ」は二重結合であり、Ｒ２’およびＲ３’はいずれも存在しない。
他の好適な実施形態において、ｐは１であり、「ａ」は単結合であり、Ｒ２’およびＲ３’はいずれもＯＨである。
特に好適な一実施形態において、ｐは１であり、「ａ」は単結合である。
より好ましくは、ＸはＯであり、Ｒ６はＨである。
好適な一実施形態において、Ｒ５はＨである。
好適な一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８およびＲ８’はいずれもＨである。
好適な一実施形態において、当該化合物は、式（Ｉｄ）のものであるか、それの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグである。
Figure 2016502524
ある特に好ましい実施形態において、当該化合物は式（Ｉｅ）のものであるか、またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグである。
Figure 2016502524
好適な一実施形態において、当該化合物は、式（Ｉｄ）の化合物および式（Ｉｅ）の化合物のラセミ混合物である。
特に好適な一実施形態において、本発明の化合物は、下記のものならびにそれらの医薬として許容される塩およびプロドラッグから選択される。
Figure 2016502524
更に好適な一実施形態において、本発明の化合物は、下記のものならびにそれの医薬として許容される塩およびプロドラッグから選択される。
Figure 2016502524
 式中、Ｂａｓｅは、チミン、ウラシル、シトシン、アデニンおよびグアニンから選択される。
特に好適な一実施形態において、当該化合物は（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１である。
好適な一実施形態において、本発明の化合物は無細胞ＨＩＶ−ＲＴアッセイでＨＩＶ−ＲＴを阻害する能力を有する。より具体的には、本発明の化合物は、ホモポリマーまたはヘテロポリマー鋳型／プライマーへの［３Ｈ］ｄＮＴＰのＨＩＶ−ＲＴ触媒取り込みを阻害する能力を有する。このアッセイのさらなる詳細については、添付の実施例セクションに記載されている。ある特に好ましい実施形態において、本発明の化合物は、このアッセイで約１００μｇ／ｍＬ未満、より好ましくは約５０μｇ／ｍＬ未満、更により好ましくは約２０μｇ／ｍＬ未満、更により好ましくは約１０μｇ／ｍＬ未満、より好ましくは約５μｇ／ｍＬまたは２μｇ／ｍＬ未満のＩＣ５０値を示す。特に好適な一実施形態において、本発明の化合物は、このアッセイで約１μｇ／ｍＬ未満、更により好ましくは約０．５μｇ／ｍＬ未満、更により好ましくは約０．１μｇ／ｍＬ未満のＩＣ５０値を示す。
一態様において、式（Ｉ）の化合物は下記のものとすることができる。
Figure 2016502524
式中、Ｘは、ＯおよびＮＲ９から選択され；
Ｙは、Ｏまたは（ＣＲ８Ｒ８’）ｎであり、ｎは１または２であり；
Ｚは、（ＣＲ２Ｒ２’）ｐでありｐは０または１であり；
Ｑは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨおよびＣ≡Ｃから選択され；
ｍは０または１であり；
ｒは０、１、２または３であり；
ｓは０、１、２または３であり；
ｔは０または１であり；
ｑは０、１、２、３、４または５であり；
ｐが１である場合、「ａ」は単結合または二重結合であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８およびＲ８’はそれぞれ独立にＨ、ＯＲ１０、ハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、Ｎ３、ＳＲ１３、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニルおよびアリールから選択され、または「ａ」が二重結合である場合、Ｒ２およびＲ２’のうちの一方は存在せず、Ｒ３およびＲ３’のうちの一方は存在せず；
Ｒ５は、Ｈ、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２およびＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
Ｒ９〜Ｒ１３はそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
Ｂａｓｅは天然または非天然の核酸塩基である。
治療的使用
本発明の化合物はウィルス複製に必要なウィルス酵素、特に逆転写酵素を阻害することから、ウィルス疾患の治療において治療的利用の可能性があることが認められた。
従って、本発明の一態様は、ウィルス疾患の治療または予防で使用される、式（Ｉ）の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグに関するものである。
本発明の別の態様は、ウィルス疾患の治療または予防のための医薬品の製造における本発明の化合物またはそれの医薬として許容される塩の使用に関するものである。
本発明の更に別の態様は、ウィルス疾患の治療方法であって、処置を必要とする対象者に対して、本発明の化合物またはそれの医薬として許容される塩もしくはプロドラッグを投与することを含む方法に関するものである。好ましくは、そのウィルス疾患はＲＮＡ−またはＤＮＡ−依存性ウィルス疾患である。
本明細書で使用される場合、「医薬品の製造」という表現は、更に別の抗ウィルス薬のスクリーニングプログラムでの、またはそのような医薬品の製造におけるいずれかの段階でのそれに使用に加えて、医薬品として直接の、１以上の上記化合物の使用を含む。
従って、好適な一実施形態は、ウィルス疾患の治療における１以上の本発明の化合物の使用に関するものである。好ましくは、そのウィルス疾患はＲＮＡウィルスまたはＤＮＡウィルスによるものである。
好適な一実施形態において、ウィルス疾患はＲＮＡウィルスによるものである。
好適な一実施形態において、ウィルス疾患はＤＮＡウィルスによるものである。
好適な一実施形態において、ウィルスは、ヒトサイトメガロウィルス（ＨＣＭＶ）、単純ヘルペスウィルス１型（ＨＳＶ−１）および２型（ＨＳＶ−２）、ヒト免疫不全ウィルス１型（ＨＩＶ−１）および２型（ＨＩＶ−２）、ＨＴＬＶ−ＩまたはＩＩ、水痘帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）、インフルエンザウィルス（ＩＮＦ）および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）などの呼吸器系ウィルス、フラビウィルス（すなわち、デングウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス）、Ｂ型肝炎ウィルス、コロナウィルスから選択される。
ある特別に好ましい実施形態において、ウィルスはＨＩＶ−１である。
本明細書で定義のように、本発明の範囲内の抗ウィルス効果は、無細胞ＨＩＶ−ＲＴアッセイでＨＩＶ−ＲＴを阻害する能力によって示すことができる。このアッセイは、それの実施方法を含めて、添付の実施例により詳細に記載されている。そのようなアッセイを用いて、化合物が本発明における抗ウィルス性であるか否かを決定することができる。
好適な一実施形態において、当該化合物は、ｐｏｌｙ ｒＡ／ｏｌｉｇｏ ｄＴ鋳型／プライマーでの［３Ｈ］ｄＴＴＰのＨＩＶ−１−ＲＴ触媒取り込みを阻害することができる。
好適な一実施形態において、当該化合物は、ｐｏｌｙ ｒＩ／ｏｌｉｇｉ ｄＣ鋳型／プライマーでの［３Ｈ］ｄＣＴＰのＨＩＶ−１−ＲＴ触媒取り込みを阻害することができる。
好適な一実施形態において、当該化合物は、ｐｏｌｙ ｒＵ／ｏｌｉｇｏ ｄＡ鋳型／プライマーでの［３Ｈ］ｄＡＴＰのＨＩＶ−１−ＲＴ触媒取り込みを阻害することができる。
一実施形態において、本発明の化合物は、無細胞ＨＩＶ−ＲＴアッセイにおいてＨＩＶ−１−ＲＴを阻害するのに十分な量で投与される。
無細胞ＨＩＶ−１−ＲＴアッセイを用いて化合物１１ａ〜ｄ、（＋）−１１ａ〜ｄ、（−）−１１ａ〜ｄ、２６ａ、（＋）−２６ａおよび（−）−２６ａを評価し、重要な点として、多くの化合物がＨＩＶ−１ ＲＴを強力に阻害することが認められた（表５）。最も顕著には、ｐｏｌｙ ｒＡ／ｏｌｉｇｏ ｄＴ鋳型／プライマーでの［３Ｈ］ｄＴＴＰのＨＩＶ−１−ＲＴ触媒取り込みの潜在的阻害剤として調べた場合、「非天然」Ｌ−チミンおよびＬ−ウラシルヌクレオシドに相当する１１ａおよび１１ｂの（−）エナンチオマーは強力な阻害活性を示し、それらの（＋）−１１ａおよび（＋）−１１ｂ対応物よりかなり活性が高かった。チミン誘導体１１ａおよびウラシル誘導体１１ｂは、２００μｇ／ｍＬでｐｏｌｙ ｒＩ／ｏｌｉｇｏ ｄＣでの［３Ｈ］ｄＣＴＰの取り込みおよびｐｏｌｙ ｒＵ／ｏｌｉｇｏ ｄＡでの［３Ｈ］ｄＡＴＰの取り込みにごく小さいわずかな阻害を示し、それは［３Ｈ］ｄＴＴＰと特異的競合があるが、［３Ｈ］ｄＣＴＰまたは［３Ｈ］ｄＡＴＰとは特異的競合がないことを示している。同様に、シトシン誘導体（−）−１１ｃは、［３Ｈ］ｄＣＴＰ−ｐｏｌｙ ｒＩ／ｄＣ系で強い阻害を示したが、他の系では示さなかった。最後に、アデニン誘導体１１ｄは、［３Ｈ］ｄＡＴＰ−ｐｏｌｙ ｒＵ／ｄＡ系ではＨＩＶ−１ＲＴの強力な阻害剤であることが示されたが、他の系ではそうではないことが明らかになった。あらゆる場合で、（−）−エナンチオマーは（＋）−エナンチオマーよりはるかに優れており、それはＨＩＶ−１ ＲＴ阻害に関してこれら化合物の高度のエナンチオマー特異性を示している。

Figure 2016502524
Figure 2016502524
マクルーア（ＭｃＣｌｕｒｅ）らは、無細胞ＨＩＶ−ＲＴアッセイを用いて、ライセンスされた６種類のＮＲＴＩの抗ＨＩＶ活性を比較した［４４］。直接の比較ではないが、マクルーア（ＭｃＣｌｕｒｅ）が報告の結果は、本発明者らの最も活性名ホスホノヌクレオシド誘導体（−）−１１ａ（ＩＣ５０＝０．１５μｇ／ｍＬ）が、ＡＺＴ（ＩＣ５０＝０．１μｇ／ｍＬ）を例外として、彼らの研究で試験された全てのＮＲＴＩ（ＩＣ５０＝０．３１６〜１０μｇ／ｍＬ）より大きい抗ＨＩＶ−ＲＴ活性を有することを示している。これは、多くの新規なホスホノヌクレオシド誘導体１１ａ〜ｄの顕著な効力を良好に示している。
医薬組成物
本発明の更に別の態様は、医薬として許容される１以上の希釈剤、賦形剤または担体と混合された本発明の化合物を含む医薬組成物に関するものである。本発明の化合物（それの医薬として許容される塩、エステルおよび医薬として許容される溶媒和物を含む）は単独で投与することができるが、それらは特にヒト療法において、医薬担体、賦形剤または希釈剤と混合して投与される。その医薬組成物は、医学および獣医学においてヒトまたは動物への使用のためとすることができる。
本明細書に記載された各種の異なる形態の医薬組成物に好適な賦形剤の例が、A WadeおよびPJ Weller編集の「Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994）」に記載されている。
治療使用に許容される担体または希釈剤は医薬業界で公知であり、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985)に記載されている。
好適な担体の例には、乳糖、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどがある。好適な希釈剤の例には、エタノール、グリセリンおよび水などがある。
医薬担体、賦形剤または希釈剤の選択は、所期の投与経路および標準的な製薬上の実務に応じて選択することができる。医薬組成物は、担体、賦形剤もしくは希釈剤としてまたはそれらに加えて、いずれか好適な結合剤、潤滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含むことができる。
好適な結合剤の例には、デンプン；ゼラチン；グルコースなどの天然糖；無水ラクトース；自由流動ラクトース；β−ラクトース；コーン甘味料；アカシア、トラガカントもしくはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成ガム；カルボキシメチルセルロース；およびポリエチレングリコールなどがある。
好適な潤滑剤の例には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどがある。
保存剤、安定剤、色素、更には香味剤を医薬組成物に提供することができる。保存剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルなどがある。酸化防止剤および懸濁剤も用いることができる。
塩／エステル
本発明の化合物は、塩またはエステルとして、特には医薬として許容される塩またはエステルとして存在することができる。
本発明の化合物の医薬として許容される塩は、それの好適な酸付加塩または塩基塩を含む。好適な医薬塩の総覧が、Berge et al, J Pharm Sci, 66, 1-19 (1977)にある。塩は、例えば鉱酸、例えば硫酸、リン酸もしくはハロゲン化水素酸などの無機強酸と；置換されていないか置換された（例えば、ハロゲンによって置換）炭素原子数１〜４個のアルカンカルボン酸などの有機強カルボン酸（例えば酢酸）と；飽和もしくは不飽和のジカルボン酸、例えばシュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸またはテレフタル酸と；ヒドロキシカルボン酸、例えばアスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸またはクエン酸と；アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸と；安息香酸と；または有機スルホン酸、例えばメタンスルホン酸もしくはｐ−トルエンスルホン酸などの、置換されていないか置換されている（例えば、ハロゲンによって）（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−またはアリール−スルホン酸と形成される。
エステルは、エステル化される官能基に応じて、有機酸またはアルコール／水酸化物を用いて形成される。有機酸には、置換されていないか置換されている（例えば、ハロゲンにより）炭素原子数１〜１２個のアルカンカルボン酸などのカルボン酸（例えば酢酸）；飽和もしくは不飽和ジカルボン酸、例えばシュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸またはテレフタル酸；ヒドロキシカルボン酸、例えばアスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸またはクエン酸；アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸；安息香酸；または有機スルホン酸、例えば置換されていないか置換されている（例えば、ハロゲンによって）（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−またはアリールスルホン酸、例えば、メタン−またはｐ−トルエンスルホン酸などがある。好適な水酸化物には、無機水酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウムなどがある。アルコールには、置換されていないか置換されていても良い（例えばハロゲンによって）炭素原子数１〜１２のアルカンアルコール類などがある。
エナンチオマー／互変異性体
これまで述べた本発明の全ての態様において、本発明は、適切な場合、本発明の化合物の全てのエナンチオマーおよび互変異性体を含む。光学特性（１以上のキラル炭素原子）または互変異的特徴を有する化合物は、当業者には確認できるであろう。相当するエナンチオマーおよび／または互変異性体は、当業界で公知の方法によって単離／製造することができる。
立体異性体および幾何異性体
本発明の化合物の一部は立体異性体および／または幾何異性体として存在することができ、例えばそれらは１以上の不斉中心および／または幾何中心を有することができることから、２個以上の立体異性体型および／または幾何異性体型で存在することができる。本発明は、阻害剤の個々の立体異性体および幾何異性体全て、ならびにそれらの混合物の使用を想到するものである。特許請求の範囲で使用される用語は、適切な機能活性を保持するのであれば（必ずしも同程度である必要はないが）、これらの形態を包含する。
本発明は、薬剤またはそれの医薬として許容される塩の全ての好適な同位体型も包含する。本発明の薬剤またはそれの医薬として許容される塩の同位体型は、少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが通常自然界で見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子よって置き換わっているものと定義される。当該薬剤およびそれの医薬として許容される塩に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体などがあり、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌである。当該薬剤およびそれの医薬として許容される塩のある種の同位体型、例えば３Ｈまたは１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれたものは、薬剤および／または基質組織分布研究において有用である。トリチウム化（すなわち３Ｈ）、および炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体が、製造が容易であり検出可能であることから特に好ましい。更に、重水素、すなわち２Ｈなどの同位体による置換によって、代謝安定性が高くなることである種の治療的利点、例えばイン・ビボ半減期の増加または必要な用量の低減が得られる可能性があることから、状況によっては好ましい場合がある。本発明の薬剤およびそれの医薬として許容される塩の同位体型は、好適な試薬の適切な同位体型を用いて従来の手順によって製造することができる。
溶媒和物
本発明は、本発明の化合物の溶媒和物型も含む。特許請求の範囲で使用される用語は、これらの形態を包含するものである。
多形体
本発明は更に各種結晶型、多形体型および（無水型）水和型での本発明の化合物に関するものでもある。そのような化合物の合成的製造で症される溶媒からの精製および／または単離方法を若干変えることで、そのような形態のいずれかで単離可能であることは、製薬業においては明らかである。
プロドラッグ
本発明は更に、プロドラッグ型での本発明の化合物も含む。そのようなプロドラッグは通常、１以上の適切な基が修飾されて、その修飾がヒトまたは哺乳動物の対象者に投与した時に元に戻ることができるようになっている本発明の化合物である。そのような再生は通常（必ずとは限らない）、そのような対象者において天然に存在する酵素によって行われるが、そのようなプロドラッグとともに第２の薬剤を投与して、イン・ビボでその再生を行うようにすることも可能である。そのような修飾の例にはエステル（例えば、上記で記載のもの）などがあり、その場合に再生はエステラーゼなどによって行われ得る。他のそのような系については、当業者には公知である。
本発明の好適な一実施形態において、プロドラッグは、ホスホルアミデート誘導体、ＳＡＴＥ（Ｓ−アシル−２−チオエチル）エステル誘導体、ピバロイルオキシメチル（ＰＯＭ）誘導体、イソプロピルオキシメチルカルボニル（ＰＯＣ）誘導体およびシクロサル（ｃｙｃｌｏＳａｌ）誘導体、アルキルオキシアルキル誘導体から選択される。
好適なホスホルアミデート誘導体は、当業者には周知であり、例を挙げると、下記式（II）の化合物などがある。
Figure 2016502524
式中、Ｒ１５はアミノ酸のいずれかの側鎖（より好ましくは、アルキル）であり、Ｒ１４はアルキルまたはアリールであり、Ｚは存在しても良い置換基（例えばアルキル、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２，ＣＦ３、ＮＨ−アルキル、Ｎ（アルキル）２、アルコキシ、Ｎ３、ＮＯ２、ハロゲン、ＣＮ、ＣＯ２−アルキルおよびＣＯ２Ｈから選択される１以上の基）である［４５］。
代替の好ましい実施形態において、プロドラッグは下記式（III）のものである。
Figure 2016502524
 式中、Ｒ１４はアルキルまたはアリールであり、Ｒ１６はアミノ酸のいずれかの側鎖（より好ましくはアルキル）である［４６］。
好適なＰＯＭ誘導体［４７］は当業者には周知であり、例を挙げると、下記式（IV）の化合物などがある。
Figure 2016502524
好適なＳＡＴＥ誘導体［４８］は当業者には周知であり、例を挙げると、下記式（Ｖ）の化合物などがある。
Figure 2016502524
好適なＰＯＣ誘導体［４９］は当業者には周知であり、例を挙げると、下記式（VI）の化合物などがある。
Figure 2016502524
好適なシクロサル型誘導体［５０］は当業者には周知であり、例を挙げると、下記式（VII）の化合物などがある。
Figure 2016502524
 式中、ＡはＯ（「シクロサル」誘導体）またはＮＨ（「ｃｙｃｌｏＡＭｂ」誘導体）であり、ＪはＣ１−６−アルキルおよびハロゲンから選択される置換基であり、アルキル基は１以上の別の基によって更に置換されていてもよく、アルキルオキシ、ＣＯ２−アルキル、ＯＣＯ−アルキル、ＣＯ２ＣＨ２ＯＣＯ−アルキルおよびＣＯ２ＣＨ２ＯＣＯＯ−アルキルなどである。好ましくは、ＡはＯである。
好ましくは、置換基Ｊは、Ｍｅ、メトキシ、ｔＢｕ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｃ１−６−アルキル、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＯＣ１−６−アルキル、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２ＣＨ２ＯＣＯＣ１−６−アルキルおよびＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２ＣＨ２ＯＣＯＯＣ１−６−アルキルから選択される。
特に好適な一実施形態において、シクロサル部分は、下記のものから選択され、波線は分子の残りの部分への結合箇所を示す。
Figure 2016502524
 式中、Ｃ１−６−アルキルは、例えば、ＭｅまたはｔＢｕ［５１］であり、またはアミノ酸のいずれかの側鎖である。
アルコキシアルキル誘導体などの他のヌクレオシドプロドラッグについては、当業者には周知である［５２］。
投与
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、非経口、筋肉、腹腔内、動脈、くも膜下、気管支内、皮下、経皮、静脈、鼻腔、経膣、口腔または舌下の投与経路に適応させることができる。
経口投与においては、特に使用されるものは、圧縮錠、丸薬、錠剤、ゲル剤（ｇｅｌｌｕｌｅｓ）、滴剤およびカプセルである。好ましくは、これらの組成物は、用量当たり有効成分１〜２５０ｍｇ、より好ましくは１０〜１００ｍｇを含む。
他の投与形態は、静脈注射、動脈注射、くも膜下注射、皮下注射、経皮注射、腹腔内注射または筋肉注射することができ、無菌液もしくは滅菌可能な液から調製される溶液または乳濁液を含む。本発明の医薬組成物は、坐剤、膣リング、ペッサリー、懸濁液、乳濁液、ローション、軟膏、クリーム、ゲル、噴霧剤、液剤または散布剤の形態とすることもできる。
経皮投与の別手段は、皮膚貼付剤の使用によるものである。例えば、ポリエチレングリコール類または液体パラフィンの水系乳濁液からなるクリームに有効成分を組み込むことができる。有効成分は、１〜１０重量％の濃度で、必要に応じて安定剤や保存剤とともに白ロウまたは白軟パラフィン基剤からなる軟膏に組み込むこともできる。
注射剤は、用量当たり有効成分１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜２５０ｍｇを含むことができる。
組成物は、単位製剤で、すなわち単位用量または複数単位用量もしくは部分単位用量を含む個別の部分の形態で製剤することができる。
用量
当業者であれば、不必要な実験を行わずに対象者に対して投与すべき本組成物の一つの適切な用量を容易に決定することができる。代表的には、医師が、個々の患者に最も好適な実際の用量を決定するものであり、それは使用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与の形態および時間、排泄速度、併用薬剤、特定の状態の重度、および個々の受ける治療法などの各種要素によって決まる。本明細書に開示の用量は、平均的な場合の例である。当然のことながら、それより高いまたは低い用量範囲が有益である個々の場合があり得るものであり、それは本発明の範囲に含まれる。
必要に応じて、薬剤は０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。
例示的な実施形態において、１０〜３００ｍｇ／日、またはより好ましくは１０〜１５０ｍｇ／日の１以上の用量を、患者に投与してウィルス疾患の治療を行う。
併用
特に好ましい実施形態において、１以上の本発明の化合物は、１以上の他の活性薬剤、例えば上市されている既存の抗ウィルス薬または薬理的促進剤と併用投与される。そのような場合、本発明の化合物は、１以上の他の活性薬剤と連続して、同時に、または順次投与することができる。
抗ウィルス薬は概して、併用する場合により効果的である。特に、併用療法は主要な毒性の重複を回避するために望ましく、相補的な抵抗性機序を提供する。更に、ほとんどの薬剤を最大耐量で、そのような投与間の時間間隔を最小として投与することも望ましい。薬剤併用の主要な利点は、それが生化学的相互作用によって相加的または可能な相乗的効果を促進することができ、更には抵抗性発生を低減することも可能であるという点である。
アッセイ
本発明の別の態様は、ＨＩＶ−１−ＲＴを阻害する能力を有するさらなる候補化合物を確認するためのアッセイにおける上記で定義の本発明の化合物の使用に関するものである。
より好ましくは、アッセイは競争的結合アッセイである。
好ましくは、候補化合物は、本発明の化合物の従来のＳＡＲ修飾によって形成される。
本明細書で使用される場合、「従来のＳＡＲ修飾」という用語は、化学的誘導体化によって所定の化合物を変える当業界で公知の標準的な方法を指す。
従って、一態様において、確認された化合物は、他の化合物の開発のためのモデル（例えば、鋳型）として使うことができる。そのような試験で用いられる化合物は、溶液で遊離状態であるか、固体支持体上に固定されているか、細胞表面に保持されているか、細胞内にあることができる。活性の消滅または化合物と調べる薬剤間の結合複合体の形成を測定することができる。
本発明のアッセイは、多くの薬剤を調べるためのスクリーニングであることができる。１態様において、本発明のアッセイ方法は、高スループットスクリーニングである。
本発明はまた、化合物に特異的に結合することができる中和抗体が化合物への結合に関して試験化合物と競合する、競合的薬剤スクリーニングアッセイの使用を想到するものである。
別のスクリーニング技術は、物質に対する好適な結合アフィニティを有する薬剤の高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）を提供するものであり、ＷＯ８４／０３５６４に詳細に記載された方法に基づくものである。
本発明のアッセイ方法は、試験化合物の小規模スクリーニングおよび大規模スクリーニングの両方、ならびに定量的アッセイに好適であるものと予想される。
合成
本発明の別の態様は、Ｒ６がＨまたはＣ１−６−アルキルであり、Ｂａｓｅが天然または非天然の核酸塩基である式（Ｉｆ）または（Ｉｇ）の化合物：
Figure 2016502524
の製造方法であって、
（ｉ）酢酸ロジウム（II）またはトリフ酸銅（II）触媒の存在下、式１６の化合物を式（IX）の化合物と反応させて、式（Ｘ）の化合物を形成する工程；
（ii）好適な溶媒中においてパラジウム（０）触媒の存在下、前記式（Ｘ）の化合物Ｂａｓｅと反応させて、式（XI）の化合物を形成する工程；
（iv）パラジウムを担持した活性炭の存在下、前記式（XI）の化合物を水素化して、式（XII）の化合物を形成する工程；
（ｖ）ＭｅＣＮ中、前記式（XII）の化合物をＴＭＳＢｒで処理して、式（Ｉｆ）の化合物を形成する工程；および
（vi）適宜に前記式（Ｉｆ）の化合物を加水分解して、式（Ｉｇ）の化合物を形成する工程
を含む方法に関するものである。
式（Ｉ）の化合物を得る手法には、二つの方法:シクロペンタノール核上へのＯ−Ｈ挿入とその後のヌクレオシド塩基の導入、あるいは最初に塩基を挿入した後のＯ−Ｈ挿入を想到することができる。後者の手法は実行可能であるが、電子豊富塩基でのカルベン反応を遮断するのにより多くの保護基を用いる必要がある。
Ｏ−Ｈ挿入反応
本願人は、ロジウム触媒Ｏ−Ｈ挿入によって、ホスホネート基を好適に保護されたヌクレオシドに結合させる温和かつ中性の方法が提供されることが最近報告されている［４２、４３］。表１にまとめたように、酢酸ロジウム（II）またはトリフ酸銅（II）の存在下にホスホノ−ジアゾ酢酸トリエチルおよびトリメチルを用いて、Ｏ−Ｈ挿入反応を実施した。
Figure 2016502524
脱保護手順における加水分解の異なる速度を有効に使って、カルボン酸エステルを開裂させずにホスホネートの選択的加水分解を行うために、メチルエステルおよびエチルエステルの両方の使用を検討した。最初に、反応液を終夜加熱還流した（１７〜２４時間）。後に、反応は実質的に４〜５時間以内に完了することが確認された。しかしながら、より長い反応時間が収率に悪影響を与えるわけではない。Ｏ−Ｈ挿入反応は円滑に進行し、粗生成物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムからわかるように、所望の生成物への変換が良好に行われた。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムは、少量の水挿入生成物２１（２％、４．３ｐｐｍでｄ、ＪＰＨ＝１８．６）および還元生成物２２（４％、３．０ｐｐｍでｄ、ＪＰＨ＝２１．６）を含み、所望の生成物２０は、〜９０ｍｏｌ％で存在する。トリエチル誘導体１９の場合、トリフ酸銅（ＩＩ）（エントリー１）または酢酸ロジウム（ＩＩ）（エントリー３）を触媒として用いた場合に、Ｏ−Ｈ挿入反応は等しく進行して、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによる精製後に７７〜７８％の収率が得られる。しかしながら、トリメチル誘導体２０の場合、酢酸ロジウム（ＩＩ）は、トリフ酸銅（ＩＩ）（７８％、エントリー２）と比較して、わずかに良好な収率を与えるように見える（９２％、エントリー４）。これらの反応は何度も行ったが、結果は完全に再現性のあるものであった。この作業は、ジアゾホスホン酸トリエチルおよびトリメチル１７および１８の両方を用いて、Ｏ−Ｈ挿入反応を、数グラム規模で良好な収率で行うことができることを示している。トリエチル誘導体１９は、溶離液としてジエチルエーテルを用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製することができるが、この溶離液を用いて相当するトリメチル誘導体２０を精製する試みは不首尾であり、化合物はカラムに残留した。しかしながら、２０は、５％メタノール／ジクロロメタンを用いて容易に溶出される。
生成物１９および２０のそれぞれが、リンに隣接するＣＨについての１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトラムにおおける特徴的シグナルから分光学的に容易に確認されるジアステレオマーの等モル混合物として形成される。
塩基挿入反応
次に、核酸塩基のアリル酢酸エステル１９への導入を行った。本明細書で報告のもの以外の他の核酸塩基は、同様の方法を用いて導入することができる。辻−トロスト型パラジウム（０）触媒アリル置換は、核酸塩基の温和な結合方法を提供するものであり、位置選択性および立体選択性の利点を更に有する［５３−５６］。表２に示したように、パラジウム触媒および反応条件を変えながら広範囲の至適化を行い、最終的に各塩基を挿入することによる所望の一連のホスホノヌクレオシド誘導体２３および２４の取得を行った。
Figure 2016502524
Figure 2016502524
表２に示した結果から、ピリミジン誘導体２４ａ〜ｃの場合、Ｐｄ（ｄｂａ）２またはＰｄ２（ｄｂａ）３・ＣＨＣｌ３およびｄｐｐｂ配位子の使用によって、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４と比較して非常に良好な収率が得られ、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４での収率はバッチおよび使用される触媒の経過時間に応じて大きく変動したが、触媒としてのＰｄ２（ｄｂａ）３・ＣＨＣｌ３またはＰｄ（ｄｂａ）２によって得られた収率は再現性があったことは明らかである。概して、Ｐｄ（ｄｂａ）２またはＰｄ２（ｄｂａ）３・ＣＨＣｌ３とｄｐｐｂの使用ならびに反応温度５０〜５５℃により、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４を用いた場合と比較して、望ましくないヒドロキシホスホネート副生成物２１が少なかった。特に、５種類のヌクレオシド誘導体２４ａ〜ｅ全てが、触媒としてＰｄ（ｄｂａ）２／ｄｐｐｂを用いて中等度ないし良好な収率で再現性良く製造可能である（表２、エントリー９〜１３）。
反応時間を短縮し、反応効率を高めるために、塩基挿入反応をマイクロ波照射下でも行った。マイクロ波装置において５５℃で撹拌しながら、４５分以内に反応がほぼ完了していることが認められ、この条件下で反応が加速されることが確認された（表２、エントリー１４〜１６）。しかしながら、概して、熱反応と比較して、やや収率が低いことが認められた。混合物を窒素によってパージしてからマイクロ波管を密閉することで、良好な反応進行を確実に行うようにすることが非常に重要である。概して、これらのマイクロ波反応は１００〜２００ｍｇの規模で行ったが、アデニン誘導体２３との反応はアリル酢酸エステル１７ １．５ｇを用いて実施し、やはり４５分以内にほぼ完結した（表２、エントリー１６）。
ホスホノヌクレオシドの特性決定、精製および安定性
いずれの場合も、塩基挿入反応の粗生成物のジアステレオマー比は、原料のアリル酢酸エステルのものと同じであった。これは、原料のアリル酢酸エステルのジアステレオマー比が１:１から逸脱する多くの例から明らかであり、ジアステレオマー比がパラジウム介在反応によって影響されないことがわかる。Ｏ−Ｈ挿入の生成物についてすでに認められているように、１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲシグナルの大半が、二つの個々のジアステレオマーで非常に良好に区別される。これら化合物の精製は簡単であり、そのヌクレオシドは、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物中に存在する不純物から容易に分離される。チミンおよびウラシル誘導体２３ａ〜ｂおよび２４ａ〜ｂは５％メタノール／ジクロロメタンを用いて溶離したが、シトシン、アデニンおよび２−アミノ−クロロプリン誘導体２３ｃ〜ｄおよび２４ｃ〜ｅでは、純粋なヌクレオシドを溶離するのに、１０％メタノール／ジクロロメタンというより極性の高い溶媒系が必要であった。ヌクレオシドの安定性はかなり異なるものであり、概して、トリエチル誘導体の方が、相当するトリメチルヌクレオシドより安定である。トリエチルおよびトリメチル誘導体２３ａ〜ｄおよび２４ａ〜ｂは安定であり、長期間にわたり、室温で無希釈でまたは溶液で放置可能であって、検出可能な分解は起こらない。しかしながら、トリメチル誘導体２４ｃ〜ｅは、かなり不安定であることが認められた。特に、トリメチルシトシン誘導体２４ｃは溶液では不安定で、同定できない生成物の複合混合物を生じることが認められた。
水素化反応
脱保護反応について調べる前に、飽和化合物２５ａ〜ｄおよび２６ａ〜ｄがそれのアリル対応物２３ａ〜ｄおよび２４ａ〜ｄより安定であると予想されたことから、最初に飽和を行った。これらの飽和化合物は、パラジウム担持炭素触媒で３０〜５０ｐｓｉでの水素化によって得た（表３）。水素化反応は、ピリミジン誘導体については良好に進行し（表３、エントリー１〜３）、精製後の収率は８０〜９５％であった。チミンおよびウラシル誘導体２５ａ〜ｂおよび２６ａ〜ｂの場合、その反応は２０〜３０ｐｓｉで１．５時間以内に完了し、実質的に定量的であり、ただしこれらの化合物はクロマトグラフィー後に若干低い収率で単離された。シトシン誘導体２５ｃおよび２６ｃは若干長い反応時間および多い触媒負荷量を必要とし、チミンおよびウラシル誘導体より低い収率で得られた。アデニン誘導体２５ｄおよび２６ｄも、より強い条件を必要とした。
Figure 2016502524
脱保護反応
トリエチルチミン誘導体２５ａの脱保護を、最初にＴＭＳＢｒを用いて試みた（スキーム１）［５７］。ホスホノヌクレオシド２５ａを０℃で７当量のＴＭＳＢｒによって処理し、徐々に室温に戻し、次に終夜撹拌した。水を加えて、得られたシリルエステルを加水分解し、反応混合物を濃縮した（スキーム１）。得られた残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、ホスホネートエステルが完全に開裂し、カルボン酸エステル部分が変化せずに残っていることで、２７ａが得られていることが確認された。
スキーム１ ２５ａの脱保護
Figure 2016502524
一連のヌクレオシドの脱保護について本発明者らが報告しているものと実質的に同じ手順である、４種類全ての誘導体２６ａ〜ｄに良好に適用できる一般手順（スキーム２）を考案した［４２，４３］。それらの誘導体を過剰のＴＭＳＢｒで処理し、次に水を加え、次に５０℃でＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、１０当量）によって処理した（スキーム２）。アデニン誘導体の場合、５０℃でＮａＯＨ水溶液とともに長時間撹拌した後であっても（３日）、少量のカルボン酸メチルエステルが必ず変化せずに残った（〜５％）。過剰の塩基の存在は、完全脱保護生成物１１ａ〜ｄの純度に悪影響を与えない。
スキーム２ ホスホノヌクレオシド２６ａ〜ｄの脱保護の一般手順
Figure 2016502524
親油性側鎖を有するプロドラッグの合成の可能性があることから、部分保護された２８ａ〜ｄの単離についても検討した（スキーム３）。化合物２８ａ〜ｄも、ＴＭＳＢｒ（５当量）による処理後に単離し、中性ｐＨで、またはアンモニウム塩として保存した場合に長期間にわたって安定であることが認められた。反応で発生したＨＢｒがカルボキシエステルを開裂させるのを防止するため、１０％水酸化ナトリウムで反応混合物のｐＨを７に調節してから、アセトニトリルとの共留去によって３０℃以下の温度で水を除去することが重要である。高温での減圧濃縮によって、カルボン酸エステルの部分加水分解が生じる。活性炭クロマトグラフィー後に化合物２８ａを収率４５％でアンモニウム塩として単離し、化合物２８ｂ〜ｄのナトリウム塩を、定量的収率で単離してから、活性炭クロマトグラフィーを行った。
スキーム３． ２６の部分脱保護
Figure 2016502524
新規なホスホノヌクレオシド１１ａ〜ｄを、活性炭クロマトグラフィーを用いて精製した（スキーム４）。完全に脱保護された化合物１１ａ〜ｄは酸性溶液中では安定ではないことから、各場合で、塩基触媒脱保護から単離された取得物を最小量の水に溶かし、溶液をｐＨ１〜２．５に調節してから、ただちに活性炭カラムに吸着させた。次に、活性炭層を水で洗浄して無機不純物を除去してから、２０％アンモニア水溶液で洗浄して、純粋なホスホノヌクレオシドをそれのアンモニウム塩として放出した。１１ａ〜ｄのアンモニウム塩を、このようにして透明または淡ピンクのガム状物として５７〜７１％で単離した。凍結乾燥後、これらの塩を微細な白色固体として単離し、それは室温で１年以上保存可能であって、認知可能な分解はない。
スキーム４
Figure 2016502524
カルボン酸エステルは変化を受けない部分的に加水分解された誘導体２８ａ〜ｄも、１０:１０:３エタノール／水／水酸化アンモニウムで溶離を行う活性炭カラムクロマトグラフィーによって精製することができる（スキーム５）。
スキーム５
Figure 2016502524
モノおよびジホスホリル化
ホスホノヌクレオシド１１ａ〜ｄは１個のリン酸基を模倣するカルボン酸を有する二リン酸もしくは三リン酸模倣体であり得ると予想されたことから、モノリン酸化ホスホノヌクレオシドが重要な合成標的となり、それは遊離カルボン酸１２ａ〜ｄおよびα位でのメチルエステル１３ａ〜ｄの両方であった。１４ａ〜ｄおよび１５ａ〜ｄならびにそれらのプロドラッグも、特許の一部である。
Figure 2016502524
２８ａからイン・サイツで生成したトリブチルアンモニウム塩２９を、過剰の１，１−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）で処理した。未反応のＣＤＩをメタノールで失活させ、活性化５’−ホスホロイミダゾリデート３０を、過剰のリン酸トリブチルアンモニウムと反応させた（スキーム６）。反応混合物を終夜撹拌してから、水で反応停止した。次に、溶液を直接イオン交換カラムＤＥＡＥ Ａ−２５に乗せ、重炭酸アンモニウム（５０〜１００ｍＭ）で溶離し、純粋な生成物１３ａを含む分画を減圧下に濃縮して、化合物を白色固体として得た（５２％）。
デバージ（Ｄｅｂａｒｇｅ）ら［４２］に記載の方法に従った、ＮａＯＨ水溶液を用いる１３ａのエステル部分の加水分解の試みとそれに続くイオン交換クロマトグラフィーによって、イオン交換クロマトグラフィー後に単一の回収物として１１ａを得た。そうして、メチルエステルの脱保護を、イオン交換精製した１３ａのサンプルで試みた。この場合、単離された取得物についての特徴的な３１Ｐ ＮＭＲシグナルおよびＨＲＭＳによって明らかなように、ＮａＯＨ水溶液による１３ａの加水分解後に、完全に脱保護された化学種１２ａが得られた。
エナンチオマー豊富の一連のホスホノヌクレオシドの合成
次に、優れた純度で良好に単離されたラセミ体のホスホノヌクレオシド１１ａ〜ｄを用い、エナンチオマー的に純粋な形（「天然」および「非天然」エナンチオマー）でのこれら誘導体の合成に着手した。これらのエナンチオマー的に純粋な化合物の取得は、プロキラルな二酢酸エステル３１の酵素的脱対称化を用いて行い、それによって、一連の二つの相補的エナンチオマーの主要な原料であるシス−４−ヒドロキシ−２−シクロペンチル酢酸エステル１６が得られるものと考えられる（スキーム７）。酵素スクリーニング後に、本願人は、選択酵素としてＣＡＬ−ＢおよびＰＬＥを選んで、それぞれ（＋）−および（−）−エナンチオマーが得られるようにした。
スキーム６． ３１の脱対称化とエナンチオマー的に純粋な一連の化合物の合成
Figure 2016502524
次に、トリメチルアリル酢酸エステル２０の相当するエナンチオマーを介し、一連のラセミ体について記載の至適化された経路を用い、一連のエナンチオマー豊富ホスホノヌクレオシド（＋）−１１ａ〜ｄおよび（−）−１１ａ〜ｄのそれぞれを、類似の前駆体（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６または（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６から得ることができた。ホスホノヌクレオシド（＋）−１１ａ〜ｄはそれぞれ、非常に良好なエナンチオマー純度（≧９８％ｅｅ）で単離した。
ホスホノヌクレオシド（＋）−１１ａ〜ｄおよび（−）−１１ａ〜ｄを、相当するラセミ誘導体１１ａ〜ｄについて記載のものと各合成段階で同様の収率で単離した。可能である場合は必ず、各段階で比旋光度を記録し、不飽和もしくは飽和のホスホノヌクレオシド２４ａ〜ｄおよび２６ａ〜ｄ、更には最終ホスホン酸誘導体１１ａ〜ｄに関して、キラル固定相についてのＨＰＬＣ条件の開発を行った。アルケンおよびアルカン中間体２４ｂおよび２６ｂのエナンチオマーは、キラルセル（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ；登録商標）ＯＪ−Ｈカラムを用いることで容易に分離され、４個全てのピークが明瞭に分離された。飽和チミン誘導体２６ａのエナンチオマーの分離は、キラルパック（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ；登録商標）ＡＳ−Ｈカラムを用いてある程度成功したが、四種類全てのピークの完全な分離はできなかった。キラルＨＰＬＣおよび比旋光度によるエナンチオマー豊富チミンおよびウラシル誘導体１１ａおよび１１ｂの合成における多くの中間体のエナンチオマー純度の追跡により、飽和誘導体２６ａおよび２６ｂのエナンチオマー純度が、各場合で原料のアセトキシアルコール１６のものと同じであることが明瞭に示され、それによって、前駆体１６の立体化学的整合性が合成手順を通じて保持されることが確認される。
本発明は更に、下記の実施例により、本発明について更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実験
酢酸（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−４−ヒドロキシシクロペンタ−２−エン−１−イル（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６
シス−３，５−ジアセトキシシクロペンテン３１（６２４ｍｇ、３．３９ｍｍｏｌ）、リン酸緩衝液（１５ｍＬ、０．１Ｍ、ｐＨ７）および固定化カンジダ・アンタルチカ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｔｉｃａ）リパーゼＢ（６２ｍｇ、１０重量％）を１００ｍＬ三角フラスコに入れ、３．５時間後にＴＬＣ分析（ジエチルエーテル）によって反応が完結していると判断されるまで振盪した。反応混合物を濾過して酵素を除去し、得られた水溶液をジエチルエーテルで洗浄した（２５ｍＬで３回）。エーテル層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジエチルエーテル）によって精製して、純粋な化合物（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−１６を得た（４１５ｍｇ、収率８５％、９８％ｅ．ｅ．）。
m.p. 49-52 °C; [α]D 20 +65.54 (c 1.0, dichloromethane), Lit.58 [α] D 20 + 66.0 (c 1.0, chloroform); δH (400 MHz, CDCl3): 1.63 (1H, dt, J = 6.8, 4.4), 2.06 (3H, s), 1.82 (1H, br s), 2.77 (1H, dt, J = 11.1, 7.2), 4.70-4.77 (1H, m), 5.48-5.51 (1H, m), 5.97-6.01 (1H, m), 6.10-6.14 (1H, m). HPLC conditions: CHIRALCEL(登録商標) OJ-H, hexane/i-PrOH = 95:5, 1 mL/min, 4-7 °C, λ = 210 nm, (+)-(1R, 4S)-16 19.4 min, (-)-(1S, 4R)-16 20.8 min.
注：ＣＡＬ ＢはｐＨ感受性でないようである。
酢酸（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシシクロペンタ−２−エン−１−イル（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６
シス−３，５−ジアセトキシシクロペンテン３１（１．１８５ｍｇ、６．４３ｍｍｏｌ）、リン酸緩衝液（３０ｍＬ、０．１Ｍ、ｐＨ７）およびブタ肝臓エステラーゼ（１２０ｍｇ、１０重量％）を１００ｍＬ丸底フラスコに入れ、フラスコを振盪した。水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ）を連続して加えることでｐＨを一定に維持し、１９時間後にＴＬＣ分析（ジエチルエーテル）によって反応混合物の反応完了と判断された。反応混合物を濾過して酵素を除去し、得られた水溶液をジエチルエーテルで洗浄した（６０ｍＬで３回）。エーテル層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジエチルエーテル）によって精製して、純粋な化合物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６を得た（６８８ｍｇ、収率７５％）。
m.p. 49-51 °C; [α]D 20 - 50.27 (c 0.56, dichloromethane), Lit.58 [α] D 20 -69 (c 1.0, chloroform); δH (400 MHz, CDCl3): 1.65 (1H, dt, J =14.7, 3.9), 2.06 (3H, s), 2.77 (1H, dt, J = 14.4, 3.9, 4.69-4.76 (1H, m), 5.46-5.53 (1H, m), 5.95-6.01 (1H, m), 6.08-6.14 (1H, m). HPLC conditions: CHIRALCEL(登録商標) OJ-H, hexane/i-PrOH = 95:5, 1 mL/min, 4-7 °C, λ = 210 nm, (+)-(1R,4S)-16 19.4 min, (-)-(1S,4R)-16 20.8 min.
注：ＰＬＥはｐＨ感受性である。この反応をｐＨ７に維持せずに実施したら、変換率は大幅に低かった（〜４０％）。
Ｏ−Ｈ挿入反応
シス−１−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］−４−アセトキシシクロペンタ−２−エン１９
アセトキシアルコール１６（２５９ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）およびジアゾホスホノ酢酸トリエチル１７（５００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のベンゼン（２０ｍＬ）中溶液を、予め活性化した３Åモレキュラーシーブス粉末（３３６ｍｇ）の入った火炎乾燥５０ｍＬ丸底フラスコに加えた。溶液を脱気してから、トリフルオロメタンスルホン酸銅（ＩＩ）（２８ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、４ｍｏｌ％）を加え、窒素雰囲気下に１９時間にわたり予め平衡としておいた油浴（９２℃）で加熱した。次に、混合物を放冷して室温としてから、重力濾過してモレキュラーシーブス粉末を除去した。次に、溶液を減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析は、主成分が所望の挿入生成物１９（〜８５％、ｄｒ１：１）であることを示しており、還元化合物（〜１０％）も認められた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジエチルエーテル）による精製によって、１９を無色油状物として得た（４５９ｍｇ、収率６９％＊、ｄｒ１．２：１）。
υmax/cm-1 (film) 3459, 2986 (CH), 2939 (CH), 1737 (C=O), 1645 (C=C), 1442, 1371, 1248 (P=O), 1113 (C-N), 1024 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.10-1.42 (9H, m) 1.71-1.80 (0.4H, dt, J = 14.4, 4.2) 1.82-1.91 (0.6 H, dt, J = 15.0, 3.6), 2.04 (1.2H, s), 2.05 (1.8H, s), 2.77 (1H, overlapping dt, J = 15.0, 7.2), 4.16-4.35 (6H, m), 4.42 (0.4H, d, JPH = 19.2), 4.45 (0.6 H, d, JPH = 18.0), 4.60-4.65 (0.4H, m), 4.69-4.74 (0.6H, m), 5.45-5.50 (1H, m), 6.03-6.08 1H, m), 6.10-6.15 (1H, m); δC (150.9 MHz, CDCl3): 14.1, 16.39, 16.43, 21.06, 21.09, 36.8, 36.9, 61.88, 61.93, 63.7, 63.8, 73.9 (d, JPC = 158.6), 74.4 (d, JPC = 158.9), 76.3, 76.4, 83.90 (d, JPC = 11.6), 83.91 (d, JPC = 12.4), 134.1, 134.7, 134.9, 135.5, 167.8 (br d, JPC〜2.0), 167.9 (br d, JPC〜2.3), 170.68, 170.70; δP (121.5 MHz, CDCl3): 14.2, 16.5; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C15H26O8P [M+H]+ 365.1365; Found:365.1372. m/z (ES+) 751.0 [(dimer + Na)+, 40%], 729.0 (dimer, 30%). 574.2 (20%), 387.1 [(M + Na)+, 90%], 365.1 [(M + H)+, 100%], 305.1 (95%), 125.2 (100%).
＊ １Ｈ ＮＭＲ分析により純度〜９５％、１Ｈ ＮＭＲスペクトラムで２．９８ｐｐｍ（ｄ、ＪＰＣ＝２１．６）に〜２％の還元生成物が認められ、４．５６（ｂｒｓ）に未知の不純物が認められた。
シス−１−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］−４−アセトキシシクロペンタ−２−エン ２０
酢酸ロジウム（ＩＩ）を触媒として用いた以外は、１９について上記で記載の手順に従って、化合物２０を製造した。アセトキシアルコール１６（２．３０９g、１６．２４ｍｍｏｌ）およびジアゾホスホノ酢酸トリメチル１８（３．７１２ｇ、１７．８５ｍｍｏｌ）のベンゼン（３５ｍＬ）中溶液を脱気し、それに酢酸ロジウム（ＩＩ）（８ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ、１ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下に加熱還流しながら５時間撹拌した。粗油状物の１Ｈ ＮＭＲ分析は、主成分が所望の挿入生成物２０（〜８５％、ｄｒ１：１）であることを示したが、酢酸への挿入による副生成物（〜１３％）および微量の還元された副生成物（〜２％）も認められた。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、２０を淡黄色油状物として得た（３．８７３ｇ、７８％収率＊、ｄｒ１：１）。
νmax/cm-1 (film) 2960 (CH), 1733 (C=O), 1438, 1373, 1244 (P=O), 1111, 1031 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.75 (0.5H, dt, J = 14.7, 3.9), 1.86 (0.5H, dt, J = 15.0, 3.9), 2.05 (0.5H, s), 2.06 (0.5H, s), 2.71-2.84 (1H, m), 3.81-3.89 (6H, m), 3.87-3.91 (3H, m), 4.49 (0.5H, d, JPH = 20.4), 4.52 (0.5H, d, JPH = 19.8), 4.60-4.67 (0.5H, m), 4.69-4.76 (0.5H, m), 5.45-5.52 (1H, m), 6.04-6.16 (2H, m); δC (75.5 MHz, CDCl3): 21.05, 21.07, 36.7, 36.8, 52.9, 54.2-54.4 (m), 73.3 (d, JPC = 159.5), 73.9 (d, JPC = 159.8), 76.2, 76.3, 84.00 (br d, JPC ~ 11.3), 84.04 (br d, JPC ~ 12.0), 134.37, 134.42, 135.18, 135.23, 168.1 (d, JPC = 2.6), 168.2 (d, JPC = 2.8), 170.6 170.7; δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.5, 16.8; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C12H20O8P [M+H]+ 323.0896; Found:323.0909. m/z (ES-) 90.9 [100%], 124.9 [80%], 151.0 [85%], 345.0 [(M + Na), 30%] 447.1 [30%].
＊１ Ｈ ＮＭＲ分析により純度〜９８％、１Ｈ ＮＭＲスペクトラムで、〜２％の還元生成物が３．００ｐｐｍに認められた（ｄ、ＪＰＣ＝２１．６）。
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］−４−アセトキシシクロペンタ−２−エン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２０
ベンゼン（３５ｍＬ）中のアセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−１６（１．４９１ｇ、１０．４９ｍｍｏｌ）およびジアゾホスホノ酢酸トリメチル１８（２．２０９ｇ、１０．６２ｍｍｏｌ）ならびにスパチュラ先端量の酢酸ロジウム（II）酢酸を用い、１９について上記に記載の手順を用いて、これを合成した。反応液を還流下に加熱しながら１７時間撹拌した。粗油状物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、主生成物が所望の挿入生成物（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−１９であることが示された（〜９０％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−１９を淡黄色油状物として得た（２．８２０ｇ、８８％収率＊、９８％ｅ．ｅ．＊＊、ｄｒ１：１）；［α］Ｄ ２０−１０．５８（ｃ ０．９５、ジクロロメタン）。
＊ １Ｈ ＮＭＲ分析により、純度〜９７％であり、１Ｈ ＮＭＲスペクトラムで〜３％のアセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−１６が存在すると推算された。
＊＊ （−）−（１Ｓ、４Ｒ）−２０のエナンチオマー純度は直接測定せずに、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−１６および塩基挿入生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｂのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］−４−アセトキシシクロペンタ−２−エン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２０
ベンゼン（２０ｍＬ）中のアセトキシアルコール（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−１６（２６２ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ、３０％ｅ．ｅ．）およびトリメチルジアゾホスホネート１８（４１５ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）および酢酸ロジウム（ＩＩ）（８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、１ｍｏｌ％）から、１９について上記で記載の手順を用い、これを合成した。反応混合物を、加熱還流しながら６時間撹拌した。粗油状物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、主成分が所望の挿入生成物（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−２０（〜９０％、ｄｒ１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製後に、生成物（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−２０を透明油状物として単離した（５４５ｍｇ、収率９２％、３０％ｅ．ｅ．＊、ｄｒ１：１）；［α］Ｄ ２０＋３．５０（ｃ ０．３、ジクロロメタン）。
＊ （＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−２０のエナンチオマー純度は直接測定せずに、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−１６および塩基挿入生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｂのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
塩基挿入反応
シス−１−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝チミン２３ａ
チミン（２１２ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．７ｍＬ、〜１．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中懸濁液を窒素雰囲気下に１０分間撹拌してから、アセトニトリル（１０ｍＬ）中のアリル酢酸エステル１９（ｄｒ１．２：１）（４１５ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物に窒素を５分間吹き込み、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を６６℃で４．５時間撹拌してから、追加の５ｍｏｌ％のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６６ｍｇ）を加えた。反応混合物を６６℃で更に１５時間撹拌し、放冷して室温としてから、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加えた。得られた沈澱を重力濾過によって除去し、溶液を減圧下に濃縮した。粗生成物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムの主成分は、所望の生成物２３ａ（〜３０％、ｄｒ１．２：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜６０％、４．５７ｐｐｍ、ｄ、ＪＰＣ＝１０．８）およびトリフェニルホスフィンオキサイド（〜１０％）であった。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物２３ａをクリーム色固体として得た（１７２ｍｇ、３５％、ｄｒ１．３：１）。
m.p. 135-137 °C; (Found: C, 50.00; H, 6.34; N, 6.56. C18H27N2O8P requires C, 50.23; H, 6.32; N, 6.56%); νmax /cm-1 (KBr) 3165 (NH), 3043, 2994 (CH), 1742 (C=O), 1690 (C=O), 1667 (C=O), 1641 (C=C), 1470 (CH), 1263 (P=O), 1102 (C-N), 1022 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3) 1.27-1.40 (9H, m), 1.74-1.85 (1H, m), 1.94 (3H, s with unresolved splitting), 2.72-2.87 (1H, m), 4.14-4.38 (6H, m), 4.45 (0.6H, d, JPH = 19.5), 4.48 (0.4H, d, JPH = 18.9), 4.57-4.64 (0.6H, m), 4.64-4.71 (0.4H, m), 5.64-5.73 (1H, m), 5.91-5.98 (1H, m), 6.24-6.36 (1H, m), 7.30 (0.4H, br q, J ~ 1.2, 7.36 (0.6H, br q J ~ 1.2), 9.21 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 12.3, 14.10, 14.12, 16.35, 16.43, 37.0, 37.1, 57.7, 57.8, 62.1, 63.5 (d, JPC = 6.3), 63.9 (d, JPC = 6.6), 75.3 (d, JPC = 158.5), 84.6 (d, JPC = 10.5), 84.7 (d, JPC = 11.9), 111.5, 111.6, 134.6, 134.7, 135.5, 136.0, 137.2, 137.4, 151.2, 164.1, 167.2 (d, JPC = 2.1), 167.5 (d, JPC = 2.0); δP (121.5 MHz, CDCl3): 13.9, 14.1; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C18H28N2O8P [M+H]+ 431.1583; Found: 431.1593. m/z (ES+) [M+H]+ 861.0 (dimer 20%), 453.0 [(M+Na)+, 30%)] 431.1 [(M+H)+, 100%)], 350.1 (50%), 191.2 (70%), 110.1 (50%).
シス−１−｛［４−（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝チミン２４ａ
炭酸ナトリウム水溶液の脱気溶液（２Ｍ、０．３５ｍＬ、〜０．７ｍｍｏｌ）をチミン（１１２ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中懸濁液に加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を、窒素雰囲気下で１５分間撹拌してから、アリル酢酸エステル２０（ｄｒ１．１：１）（１８６ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を脱気し、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５４ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、８ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を６６℃で２４時間撹拌し、放冷して室温としてから、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加えた。混合物を重力濾過して、得られた沈澱を除去し、溶液を減圧下で濃縮した。１Ｈ ＮＭＲ分析により、粗取得物の主成分が所望の化合物４ａ（〜３５％、ｄｒ１．１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜５５％）およびトリフェニルホスフィンオキサイド（〜１０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物２４ａをクリーム色固体として得た（１１５ｍｇ、５１％、ｄｒ１．２：１）。
m.p. 134-138 °C; (Found: C, 46.27; H, 5.45; N, 6.86. C15H21N2O8P requires C, 46.40; H, 5.38; N, 7.21%); νmax /cm-1(KBr) 3176 (NH), 3042, 2959 (CH), 1754 (C=O), 1689 (C=O), 1663 (C=O), 1640 (C=C), 1470 (CH), 1264 (P=O), 1102 (C-N), 1029 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.73-1.85 (1H, m), 1.94 (3H, d, J = 1.2), 2.73-2.87 (1H, m), 3.81-3.90 (9H, m), 4.50 (0.55H, d, JPH = 19.8), 4.53 (0.45H, d, JPH = 19.2), 4.58-4.64 (0.55H, m), 4.64-4.71 (0.45H, m), 5.62-5.73 (1H, m), 5.91-6.00 (1H, m), 6.25-6.35 (1H, m), 7.27 (0.45H, br q, J ~ 1.2), 7.32 (0.55H, br q, J ~ 1.2), 9.13 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 12.3, 36.9, 37.1, 53.0, 53.9-54.3 (m), 57.8, 57.9, 74.86 (d, JPC = 159.6), 74.93 (d, JPC = 159.5), 84.7 (d, JPC = 10.0), 84.8 (d, JPC = 11.6), 111.5, 111.6, 134.7, 134.9, 135.4, 135.9, 137.1, 137.2, 151.1, 163.9, 167.6 (br d, JPC ~ 2.5), 167.9 (br d, JPC ~ 2.3); δP (CDCl3): 16.3, 16.5; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C15H22N2O8P [M+H]+ 389.1114; Found: 389.1086. m/z (ES+) [M+H]+ 777.2 (30%), 406.1 (20%) 389.0 (100%), 82.9 (28%).
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝チミン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ａ
チミン（７１４ｍｇ、５．６６ｍｍｏｌ）をアリル酢酸エステル（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−２０（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）（１．２５１ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）中脱気溶液に加え、次に炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、２．２５ｍＬ、〜４．５０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（１１２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、６ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（１８２ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ、１１ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下、５０℃で５．５時間撹拌した。反応混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（６０ｍＬ）を加えた。重力濾過によって得られた沈澱を除去し、溶液を減圧下で濃縮した。１Ｈ ＮＭＲ分析により、粗取得物の主成分が所望の生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ａ（〜５５％、ｄｒ１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２７５（〜１５％）、原料のアリル酢酸エステル２０（〜１０％）およびジベンジリデンアセトン（〜２０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ａをクリーム色固体として得た（８３１ｍｇ、５５％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１．２）；融点１３４〜１３５℃；［α］Ｄ ２０＋４３．７０（ｃ １．００、ジクロロメタン）。（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ａのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６および飽和生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ａのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝チミン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ａ
チミン（２３４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を、アリル酢酸エステル（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−２０（７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）（３９５ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中脱気溶液に加え、次に炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．７ｍＬ、〜１．４０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（５４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、８ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（６０ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ、１１ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下に５０℃で５．５時間撹拌した。反応混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタンを加えた（６０ｍＬ）。重力濾過によって得られた沈澱を除去し、溶液を減圧下に濃縮した。１Ｈ ＮＭＲ分析により、粗取得物が所望の生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ａ（〜４０％、ｄｒ１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜４０％）およびジベンジリデンアセトン（〜２０％）からなることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製により、化合物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ａをクリーム色固体として得た（２６１ｍｇ、５５％、７０％ｅ．ｅ、ｄｒ１．２：１）；融点１３６〜１３７℃；［α］Ｄ ２０−３３．２２（ｃ ０．９０、ジクロロメタン）。（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ａのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６および飽和生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ａのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−１−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝ウラシル２３ｂ
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）・クロロホルム（８９ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（９０ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ、１１ｍｏｌ％）を、アリル酢酸エステル２０（ｄｒ１．２：１）（７００ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中脱気溶液に加えた。溶液を窒素雰囲気下に室温で５分間撹拌してから、ウラシル（３４０ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、１ｍＬ、〜２．００ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を暗赤色混合物に２分間吹き込み、混合物を５５℃で２０時間撹拌した。混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈した。得られた沈澱を重力濾過により除去し、溶液を減圧下に濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、主成分が所望の生成物２３ｂ（〜３０％、ｄｒ１．２：１）、原料のアリル酢酸エステル１９（〜５５％）およびジベンジリデンアセトン（〜１５％）であることが示された。粗取得物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノールのジクロロメタン溶液）によって精製して、生成物２３ｂを淡黄色の吸湿性固体として得た（２４２ｍｇ、２９％、ｄｒ１．２：１）。
m.p. 107-110 °C; (Found: C, 48.80; H, 6.01; N; 6.66. C17H25N2O8P requires C, 49.04; H, 6.05; N, 6.73%); νmax/cm-1 (KBr) 3172 (NH), 3055 (CH), 2985 (CH), 1743 (C=O), 1681, 1462 (CH), 1262 (P=O), 1096 (C-N), 1021 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.28-1.39 (9H, m), 1.78 (0.45H, apparent dt, J ~ 4.8, 3.0), 1.83 (0.55H, apparent dt, J ~ 5.1, 3.0), 2.80 (1H, apparent dt, J ~ 15.0, 7.8), 4.12-4.37 (6H, m), 4.46 (0.55H, d, JPH = 19.5), 4.48 (0.45H, d, JPH = 18.9), 4.59-4.65 (0.55H, m), 4.65-4.72 (0.45H, m), 5.64-5.74 (1H, m), 5.74 (1H, br d, J ~ 8.7), 5.91-5.99 (1H, m), 6.27-6.32 (0.55H, m), 6.32-6.37 (0.45H, m), 7.52 (0.45H, d, J = 8.1), 7.55 (0.55H, d, J = 8.4), 9.72 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 14.1, 16.37, 16.44, 37.0, 37.3, 58.0, 58.1, 62.1, 63.5 (br d, JPC ~ 6.6), 63.6 (br d, JPC ~ 6.6), 63.8 (br d, JPC ~ 6.6), 63.9 (br d, JPC ~ 6.6), 75.3 (d, JPC = 158.6), 75.4 (d, JPC = 158.8), 84.4 (d, J = 10.0), 84.6 (d, J = 11.7, 102.9, 134.1, 134.4, 136.0, 136.4, 141.7, 151.2, 163.5, 163.6, 167.2 (br d, JPC ~ 2.1), 167.5 (br d, JPC ~ 2.1); δp (161.9 MHz, CDCl3): 13.9, 14.1; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C17H26N2O8P [M+H]+ 417.1427; Found: 417.1415. m/z (ES+) 833.2 [dimer, 40%], 434.1 [(M+ Na) +, 15%], 417.1 [(M + H)+, 100%].
この反応を後日、溶媒としてアセトニトリルを用いて繰り返して、収率５７％を得た。
シス−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝ウラシル ２４ｂ
炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．６ｍＬ、〜１．２ｍｍｏｌ）を、ウラシル（１７１ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中懸濁液に加え、混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌してから、アリル酢酸エステル２０（ｄｒ１：１）（３２４ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に５分間吹き込み、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５８ｍｇ、ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を窒素雰囲気下で６６℃で２４時間撹拌した。混合物を放冷して室温としてから、ジクロロメタン（４０ｍＬ）を加えた。得られた沈澱を重力濾過によって除去し、溶液を減圧下で濃縮して暗赤色油状物を得た。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、主成分が所望の生成物２４ｂ（〜３５％、ｄｒ１：１，）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜５５％）およびトリフェニルホスフィンオキサイド（〜１０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、純粋な生成物２４ｂをクリーム色ガム状物として得た（１４８ｍｇ、３８％、ｄｒ１．２：１）。
νmax/cm-1 (film) 3480, 3177 (NH), 3057 (CH), 2961 (CH), 1750 (C=O), 1689, 1625, 1462, 1380, 1260 (P=O), 1105 (C-N), 1032 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.74-1.86 (1H, 2 × overlapping apparent dt, J = 10.8, 2.7, 8.1, 3.0), 2.74-2.87 (1H, apparent dt, J = 15.3, 7.5), 3.80-3.90 (9H, m), 4.50 (0.5H, d, JPH = 19.8), 4.53 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.59-4.65 (0.5H, m), 4.66-4.72 (0.5H, m), 5.64-5.72 (1H, m), 5.74 (1H, br d, J ~ 8.1), 5.93-6.01 (1H, m), 6.28-6.37 (1H, m), 7.49 (0.5H, d, J = 8.1), 7.51 (0.5H, d, J = 8.1), 9.46 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 36.9, 37.3, 53.0, 54.1 (2 × overlapping d, JPC ~ 6.6, 6.6), 54.2 (d, JPC = 6.3), 54.3 (d, JPC = 6.2), 58.08, 58.11, 74.78 (d, JPC = 159.8), 74.81 (d, JPC = 160.1), 84.5 (d, JPC = 9.6), 84.6 (d, JPC = 11.7), 102.9, 134.2, 134.6, 135.8, 136.4, 141.6, 151.1, 163.4, 167.5 (br d, JPC ~ 2.5), 167.8 (br d, JPC ~ 2.5); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.3, 16.5; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C14H20N2O8P [M+H]+ 375.0957; Found:375.0952. m/z (ES+) 749.1 [dimer, 50%], 397.0 [(M+Na), 25%] 375.0 [(M+H)+, 100%], 177.0 [30%], 82.9 [40%].
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝ウラシル（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｂ
ウラシル（２０８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）をアリル酢酸エステル（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２０（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（３９５ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中脱気溶液に加え、次に炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．７ｍＬ、〜１．４０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（３８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、６ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下で５０℃で５．５時間撹拌してから、放冷して室温とした。ジクロロメタン（３０ｍＬ）を加え、得られた沈澱を濾過によって除去し、溶液を減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望の生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｂ（〜６０％、ｄｒ１．１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜３０％）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）であることが示された。粗取得物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｂをクリーム色吸湿性ガム状物として得た（２９４ｍｇ、６４％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）。
[α]D 20 +19.56 (c 2.30, dichloromethane); HPLC conditions: CHIRALCEL(登録商標) OJ-H column, 30:70 isopropanol:hexane, 0.7 mL/min. 49.2 min, 59.3 min, 83.6 min, 115.0 min.
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝ウラシル（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｂ
ウラシル（４２２ｍｇ、３．７７ｍｍｏｌ）をアリル酢酸エステル（＋）−（１Ｒ、４Ｓ）−２０（３０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（８０１ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中脱気溶液に加え、次に炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、１．４ｍＬ、〜２．８０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（９４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、７ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（１０７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下、５５℃で２．５時間撹拌した。混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈した。混合物を重力濾過して、得られた沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望の生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｂ（〜６０％、ｄｒ１．１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜３０％）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）が示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｂをクリーム色吸湿性ガム状物として得た（５１１ｍｇ、５５％、３０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）。
[α] D 20 -5.87 (c 2.23, dichloromethane); HPLC conditions: CHIRALCEL(登録商標) OJ-H column, 30:70 isopropanol:hexane, 0.7 mL/min. 49.2 min, 59.3 min, 83.6 min, 115.0 min.
シス−１−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝シトシン２３ｃ
シトシン（１０３ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）およびアリル酢酸エステル１９（ｄｒ１：１）（２２５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中混合物を撹拌しながら、それに脱気した炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．３５ｍＬ、〜０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、クロロホルム（２３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、７ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（２７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を５５℃で２８時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残留物にジクロロメタン（２５ｍＬ）を加え、得られた沈澱を重力濾過によって除去し、溶液を減圧下で濃縮した。１Ｈ ＮＭＲ分析によって、粗取得物の主成分が所望の化合物２３ｃ（〜５０％、ｄｒ１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜３５％）およびジベンジリデンアセトン（〜１５％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、純粋なホスホノヌクレオシド２３ｃを淡橙赤色固体として得た（１０１ｍｇ、３９％、ｄｒ１．１：１）。
m.p. 155-159 °C; (Found: C, 48.71; H, 6.27; C17H26N3O7P requires C, 49.16; H, 6.31%); υmax/cm-1 (KBr) 3381 (NH), 3101 (CH), 2986 (CH), 1735 (C=O), 1647, 1492, 1384, 1261 (P=O), 1105 (C-N), 1019 (C-O); dH (300 MHz, CDCl3) 1.24-1.39 (9H, m), 1.67-1.79 (1H, 2 × overlapping dt, J = 8.4, 3.0, 8.4, 3.0), 2.76-2.89 (1H, dt, J = 15.0, 7.5), 4.11-4.37 (6H, m), 4.42 (0.5H, d, JPH = 19.5), 4.44 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.55-4.62 (0.5H, m), 4.63-4.70 (0.5H, m), 4.99-7.00 (2H, br s), 5.74-5.85 (2H, m & d at 5.82, J = 7.2), 5.92-6.00 (1H, m), 6.21-6.29 (1H, m), 7.51 (0.5H, d, J = 7.5), 7.54 (0.5H, d, J = 7.2); δC (75.5 MHz, CDCl3) 14.13, 14.15, 16.4 (2 overlapping d, JPC ~ 5.8, 5.8), 37.6, 37.9, 58.78, 58.83, 62.1, 63.59, (d, JPC ~ 6.7), 63.64 (d, JPC ~ 6.7), 63.87 (CH3, d, JPC ~ 6.5), 63.91 (d, JPC ~ 6.5), 75.3 (d, JPC = 158.9), 84.86 (d, JPC = 10.2), 84.94 (d, JPC = 12.2), 95.0, 134.9, 135.2, 135.5, 135.6, 142.9, 143.0, 156.6, 165.4, 167.3 (d, JPC = 2.3), 167.6 (d, JPC = 2.1); δP (121.5 MHz, CDCl3): 14.0, 14.3; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C17H27N3O7P [M+H]+, 416.1587. Found 416.1532; m/z (ES+) [M+H]+ 831.3 [dimer, 20%], 416.1 [(M+H)+, 100%].
シス−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝シトシン２４ｃ
マイクロ波管において、シトシン（１２８ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）およびアリル酢酸エステル２０（ｄｒ１：１．１）（２５５ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中混合物を撹拌しながら、それに脱気した炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．４５ｍＬ、〜０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）−パラジウム（０）（２５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、６ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（３６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を脱気し、管を密閉し、マイクロ波装置に入れて撹拌しながら５５℃で１時間経過させた。混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈した。混合物を重力濾過して、得られた沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望の生成物２４ｃ（〜３５％、ｄｒ１：１．１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜５５％）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物２４ｃをクリーム色吸湿性ガム状物として得た（１０５ｍｇ、３６％、ｄｒ１：１、Ａ：Ｂ）。
νmax/cm-1 (film) 3423 (NH), 3194 (CH), 2957 (CH), 2853 (CH), 1736 (C=O), 1723 (C=O), 1649, 1233 (P=O), 1101 (C-N), 1051 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.67-1.80 (1H, 2 overlapping dt, J = 10.2, 2.7, 10.2, 3.0), 2.76-2.90 (1H, m), 3.79-3.99 (9H, m), 4.47 (0.5H, d, JPH = 19.8), 4.50 (0.5H, d, JPH = 19.5), 4.56-4.62 (0.5H, m), 4.65-4.71 (0.5H, m), 5.10-7.00 (2H, br s), 5.76-5.88 (2H, m & d at 5.83, J ~ 7.2), 5.94-6.02 (1H, m), 6.23-6.30 (1H, m), 7.52 (0.5H, d, J = 7.2), 7.54 (0.5H, d, J = 7.2); δC (75.5 MHz, CDCl3): 37.5, 37.8, 53.0, 54.1-54.4, 58.77, 58.83, 74.65 (d, JPC = 160.0), 74.72 (d, JPC = 159.8, PCH), 85.0 CH, d, J ~ 9.7), 86.0 (br d, J ~ 12.5), 95.2, 134.8, 135.2, 135.5, 135.8, 142.7, 156.3, 165.2, 167.7 (br d, JPC ~ 2.7), 167.9 (br d, JPC ~ 2.3); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.4, 16.8; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C14H21N3O7P [(M+H)+], 374.1117. Found 374.1114. m/z (ES+) 747.2 [dimer, 100%], 597.1 (10%), 459.1 (10%), 388.1 (15%), 374.1 [(M + H)+, 50%].
このホスホノヌクレオシド２４ｃは、ジクロロメタン、重クロロホルムおよびメタノールなどの溶媒中で容易に分解する。重クロロホルム中の２４ｃのサンプルで、室温で３６時間後にかなりの分解が認められた。
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝シトシン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｃ
アセトニトリル（２５ｍＬ）中アリル酢酸エステル（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−２０（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（３９０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、シトシン（２０２ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．６６ｍＬ、〜１．３２ｍｍｏｌ）、ビス（ジベンジリデンアセトン）−パラジウム（０）（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）から、５５℃で３時間にて、２３ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｃ（〜４０％、ｄｒ１．１：１）、原料のアリル酢酸エステル（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２０（〜２５％、ｄｒ１．１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜２５％）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、純粋な生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｃを明褐色ガム状物として得た（１７８ｍｇ、収率３９％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）；［α］Ｄ ２０＋２４．５０（ｃ ０．１、ジクロロメタン）。（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｃのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝シトシン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｃ
シトシン（４４１ｍｇ、３．９７ｍｍｏｌ）を、アリル酢酸エステル（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２０（７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）（８４８ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（４５ｍＬ）中脱気溶液に加えた。炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、１．５ｍＬ、〜３．０ｍｍｏｌ）を加え、窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）−パラジウム（０）（１０４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、７．５ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（１１４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を脱気し、窒素雰囲気下、５５℃で６．５時間撹拌した。反応混合物を放冷して室温としてから、ジクロロメタン（６０ｍＬ）で希釈し、混合物を重力濾過して、得られた沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望の生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｃ（〜３５％、ｄｒ１：１）、原料のアリル酢酸エステル（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２０（〜３０％）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜２５％）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｃを淡褐色ガム状物として得た（３５６ｍｇ、３６％、７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）；［α］Ｄ ２０−１８．２５（ｃ ０．２、ジクロロメタン）。（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｃのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−９−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝アデニン ２３ｄ
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）・クロロホルム（５３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（４１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を、アリル酢酸エステル１９（ｄｒ１：１）（３４５ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中脱気溶液に加え、反応混合物を窒素雰囲気下で５分間撹拌した。アデニン（１９５ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加え、次に炭酸セシウム水溶液（２Ｍ、０．５ｍＬ、〜１ｍｍｏｌ）を加え、窒素を混合物に２分間吹き込んだ。少量の不溶物を含む反応混合物を５０℃で２６時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残留物にジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、得られた沈澱を重力濾過によって除去し、溶液を減圧下で濃縮した。１Ｈ ＮＭＲ分析によって、粗取得物の主成分が所望の化合物Ｎ−９−２３ｄ（〜５５％、ｄｒ１：１）、Ｎ−７−２３ｄ（〜５％）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜３０％）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物Ｎ−９−２３ｄをクリーム色吸湿性固体として得た（２０６ｍｇ、４９％、ｄｒ１：１．３）。
m.p. 142-144 °C; νmax /cm-1 (KBr) 3394 (NH), 3334 (NH), 3174, 2984 (CH), 1749 (C=O), 1663,1599 (C=C), 1573, 1478 (CH), 1262 (P=O), 1098 (C-N), 1019 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.26-1.40 (9H, m), 2.03-2.16 (1H, 2 overlapping dt, J = 14.4, 2.7, 14.4, 2.7) 2.85-3.00 (1H, m), 4.11-4.39 (6H, m), 4.50 (0.4H, d, JPH = 19.8), 4.57 (0.6H, d, JPH = 19.2), 4.70-4.77 (0.4H, m), 4.78-4.85 (0.6H, m), 5.61-5.70 (1H, m), 6.11-6.20 (1H, m), 6.24 (2H, br s), 6.32-6.40 (1H, m, ), 8.12 (0.6 H, s), 8.15 (0.4H, s), 8.35 (1H, s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 14.08, 14.13, 16.3-16.5 (m), 38.3, 38.7, 56.46, 56.50, 62.0, 62.1, 63.6 (2 overlapping d, JPC ~ 6.7, 6.5), 63.89 (br d, JPC ~ 6.6), 63.94 (br d, JPC ~ 6.6, 75.1 (d, JPC = 158.6), 75.3 (d, JPC = 158.7), 84.3 (d, JPC = 10.6), 84.6 (d, JPC = 11.9), 119.5, 134.4, 134.9, 135.0, 135.6, 139.65, 139.73, 149.6, 152.8, 155.7, 167.4 (d, JPC = 2.0), 167.6 (d, JPC = 2.1); δP (121.5 MHz, CDCl3): 13.9, 14.2; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C18H27N5O6P [M+H]+ 440.1699; Found: 440.1695. m/z (ES+) 442.3 (5%) 441.3 [20%] 440.3 [(M + H)+, 100%].
溶媒としてアセトニトリルを用いてこの反応を繰り返した場合に、収率６０％が得られた。
シス−９−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝アデニン ２４ｄ
アリル酢酸エステル２０（ｄｒ１：１）（４５８ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中脱気溶液にアデニン（３１６ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）を加え、次に炭酸セシウム水溶液（２Ｍ、０．７ｍＬ、〜１．４３ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、トリス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）・クロロホルム（８０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、６ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（６７ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、１１ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下に５０℃で５．５時間撹拌した。混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈し、重力濾過により、得られた沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、生成物の複合混合物が示されたが、所望の化合物２４ｄ（ｄｒ１：１）のピークが存在した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、ホスホノヌクレオシド２４ｄをクリーム色吸湿性ガム状物として得た（１５３ｍｇ、２７％、ｄｒ１：１）。
νmax/cm-1 (film) 3392 (NH), 3185, 2958 (CH), 1749 (C=O), 1655, 1599 (C=C), 1235 (P=O), 1104 (C-N), 1035 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 2.01-2.17 (1H, 2 dt, J = 9.6, 3.0, 9.3, 3.0), 2.84-3.00 (1H, m), 3.78-3.92 (9H, m), 4.55 (0.5H, d, JPH = 20.1), 4.65 (0.5H, d, JPH = 19.5), 4.70-4.77 (0.5H, m), 4.79-4.86 (0.5H, m), 5.61-5.70 (1H, m), 6.10-6.31 (3H, m), 6.34-6.41 (1H, m), 8.10 (0.5H, s), 8.11 (0.5H, s), 8.35 (1H, s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 38.2, 38.6, 53.06, 53.08, 54.0-54.5 [4 overlapping d, J ~ 6.7, 6.8, 6.7, 6.6), 56.5, 56.6, 74.5 (d, JPC = 159.6), 74.6 (d, JPC = 159.8), 84.5 (d, JPC = 10.5), 84.8 (d, JPC = 11.8), 119.46, 119.48, 134.5, 134.8, 135.2, 135.6, 139.59, 139.64, 149.52, 149.54, 152.9, 155.59, 155.61, 167.7 (d, JPC = 2.2), 167.9 [d, JPC = 2.5); δP (CDCl3): 16.3, 16.6; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C15H21N5O6P [M+H]+ 398.1229 ; Found: 398.1215 m/z (ES+) [M+H]+ 398.2 [(M+H)+, 100%], 412.1 [10%].
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−９−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝アデニン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｄ
アリル酢酸エステル（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２０（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）、（７０１ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７０ｍＬ）中脱気溶液にアデニン（５２１ｍｇ、３．８６ｍｍｏｌ）を加え、次に炭酸セシウム水溶液（２Ｍ、１．３５ｍＬ、〜２．７ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（７５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、７ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（１２３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１３ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下で５０℃で５時間撹拌した。反応混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（７０ｍＬ）で希釈し、重力濾過により、得られた沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、所望の化合物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｄ（〜３０％、ｄｒ１：１）およびジベンジリデンアセトン（〜１０％）が同定可能な化合物の混合物が示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｄをクリーム色吸湿性ガム状物として得た（２７９ｍｇ、３２％、９８％ｅ．ｅ．ｄｒ１．１：１）。（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｄのエナンチオマー純度は直接測定せず、原料のアセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−９−｛４−［（メトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタ−２−エン−１−イル｝アデニン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｄ
アリル酢酸エステル（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２０（７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（５５１ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中脱気溶液にアデニン（３５２ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を加え、次に炭酸セシウム水溶液（２Ｍ、１．０ｍＬ、〜２．０ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（６２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、６ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（８０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１１ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下、５５℃で２．５時間撹拌した。反応混合物を放冷して室温とし、ジクロロメタン（７０ｍＬ）で希釈した。得られた沈澱を重力濾過によって除去し、溶液を減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、主成分が所望の生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｄ（〜３５％、ｄｒ１．１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜３５％）、ジベンジリデンアセトン（〜２０％）および未知不純物（〜１０％、５．３３ｐｐｍ、ｔ、Ｊ＝２．１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｄをクリーム色吸湿性ガム状物として得た（２６８ｍｇ、４０％、７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）。（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｄのエナンチオマー純度は直接測定せず、原料のアセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−２−アミノ−９−［｛４−（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ｝シクロペンタ−２−エン−１−イル］−６−クロロプリン Ｎ−９−２４ｅおよび
シス−２−アミノ−７−［｛４−（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ｝シクロペンタ−２−エン−１−イル］−６−クロロプリン Ｎ−７−２４ｅ
２−アミノ−６−クロロプリン（４３２ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を、アリル酢酸エステル２０（ｄｒ１．１：１）（５５０ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中脱気溶液に加え、次に炭酸セシウム水溶液（２Ｍ、０．９５ｍＬ、〜１．８９ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に２分間吹き込んでから、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）および１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（７３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）を加えた。少量の不溶物を含む反応混合物を窒素雰囲気下に４５℃で６．５時間撹拌してから、それを放冷して室温とし、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈した。混合物を重力濾過して、得られた沈澱を除去し、減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分がＮ−９−２４ｅ（〜３５％、ｄｒ１．１：１）、Ｎ−７−２４ｅ（〜３５％、ｄｒ１．１：１）、α−ヒドロキシホスホネート２１（〜１５％）およびジベンジリデンアセトン（〜１５％）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、淡黄色油状物としてのＮ−９−２４ｅ（１０１ｍｇ、１４％、ｄｒ１．２：１）および黄色油状物としてのＮ−７−２４ｅ（２５３ｍｇ、３５％、ｄｒ１．２：１）を得た。
N-9-24e δH (300 MHz, CDCl3): 2.09 (0.45H, dt, J = 15.0, 3.3), 2.32 (0.55H, dt, J = 15.0, 4.5), 2.83-3.02 (1H, m), 3.79-3.89 (9H, m), 4.78 (0.45H, d, JPC = 20.4), 4.79-4.86 (0.45H, m), 4.99-5.06 (0.55H, m), 5.25-5.39 (2.1H, m), 5.41-5.48 (1H, m), 5.54 [1H, br s), 6.04-6.12 (1H, m), 6.22-6.28 (0.55H, m), 6.34-6.39 (0.45H, m), 7.88 (0.55H, br s), 7.97 (0.45H, br s).
N-7-24e (Found: C, 39.50; H, 4.47; N, 15.87 C12H17O6P.1.2H2O requires C, 39.74; H, 4.76; N, 15.45%); νmax /cm-1 (KBr) 3440, 3401, 3327 (NH), 3209 (CH), 2958 (CH), 1749 (C=O), 1626, 1544, 1496 (CH), 1378, 1257, 1226 (P=O), 1107 (C-N), 1028 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.98-2.14 (1H, 2 dt, J = 14.7, 2.7, 15.0, 3.0), 2.87-3.03 (1H, m), 3.72-3.90 (9H, m), 4.48 (0.55H, d, JPC = 19.8), 4.52 (0.45H, d, JPC = 19.2), 4.69-4.75 (0.55H, m), 4.77-4.83 (0.45H, m), 5.33 (2H, br s), 5.76-5.86 (1H, m), 6.21-6.29 (1H, m), 6.43-6.51 (1H, m), 8.19 (0.45H, br s), 8.20 (0.55H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 39.4, 39.8, 53.08, 53.10, 54.1-54.5 (m), 59.7, 59.8, 74.89 (d, JPC = 159.6), 74.94 (d, JPC = 159.8), 84.5 (d, JPC = 10.7), 84.7 (d, JPC = 12.3), 132.7, 133.3, 134.0, 136.4, 137.1, 143.1, 146.9, 159.3, 164.4, 167.6 (d, J = 2.2), 167.8 (d, J = 2.5); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.0, 16.2
１３Ｃ ＮＭＲスペクトラムにおいて１４１．８、１５９．１ｐｐｍに、１Ｈ ＮＭＲで５．５１−５．５３（０．２Ｈ、ｍ）および８．１０（０．２Ｈ、ｓ）に未知不純物（〜１０％）によるピークが認められる。
水素化反応
シス−１−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン ２５ａ
パラジウム（炭素担持品５％、２３ｍｇ）を水素化容器に加え
次にアルケン２３ａ（ｄｒ１．２：１）（５３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の無水エタノール（１０ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温にて３時間にわたり３０ｐｓｉの水素下で振盪し、その時点で混合物を１Ｈ ＮＭＲで調べたところ、反応が完結したと判断された。パラジウム触媒を、セライト（登録商標）の短いカラムでの濾過によって除去し、カラムをエタノールで洗浄し（１０ｍＬで２回）、濾液を減圧下で濃縮した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、アルカン２５ａが主要成分（〜９０％、ｄｒ１．１：１）であることが明らかになった。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物２５ａをクリーム色固体として得た（４６ｍｇ、８９％、ｄｒ１．２：１）。
m.p. 133-135 °C; νmax/cm-1(KBr) 3174 (NH), 3054, 2991 (CH), 1742 (C=O), 1691 (C=O), 1667 (C=O), 1643 (C=C), 1470 (CH), 1257 (P=O), 1105 (C-N), 1022 (C-O); δH (600 MHz, CDCl3): 1.29-1.40 (9H, m), 1.53-1.64 (1H, m), 1.78-1.88 (2H, m), 1.98 (1.35H, s), 1.99 (1.65H, s), 2.01-2.07 (0.55H, br dd, J ~ 6.0, 7.2), 2.08-2.14 (0.45H, br dd, J ~ 6.0, 7.2), 2.16-2.24 (1H, m), 2.33-2.42 (1H, m, 4.14-4.34 (7H, m), 4.35 (0.55H, d, JPH = 18.6), 4.40 (0.45H, d, JPH = 19.8), 5.22-5.31 (1H, m), 7.70 (0.45H, s), 7.86 (0.55H, s), 8.79 (1H, br s); δC (125.8 MHz, CDCl3): 12.26, 12.28, 14.10, 14.12, 16.3-16.5 (m), 30.10, 30.14, 30.6, 31.4, 38.5, 38.7, 53.1, 53.2, 61.98, 62.05, 63.4 (d, JPC = 6.7), 63.6 (d, JPC = 6.5), 63.9 (d, JPC = 6.5), 73.9 (d, JPH = 159.6), 74.6 (d, JPH = 158.8), 81.8 (d, JPH = 11.6), 82.7 (d, JPH = 8.6), 111.67, 111.75, 138.1, 138.3, 151.3, 151.4, 163.76, 163.78, 167.3 (br d, JPC ~ 1.6,), 167.5 (br d, JPC ~ 2.4), δP (CDCl3): 14.1, 14.6; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C18H30N2O8P [M+H]+ 433.1740; Found: 433.1749. m/z (ES+) [M+H]+ 865.2 (dimer 5%), 721.1 (5%), 676.3 (10%), 505.0 (5%), 483.0 [(M+Na)+, 15%)] 433.1 [(M+H)+, 100%)], 352.2 (20%), 289.2 (40%).
未知不純物によるピークが、１Ｈ ＮＭＲスペクトラムで２．４５ｐｐｍ（見かけのｔ、ＪＰＣ＝２１．６）に認められた。その不純物は、１３Ｃ ＮＭＲスペクトラムで６２．６ｐｐｍ（見かけのｔ、ＪＰＣ＝２．５）に、そして３１Ｐ ＮＭＲで１９．４ｐｐｍにも見られた。
シス−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン２６ａ
メタノール（１０ｍＬ）中のアルケン２４ａ（ｄｒ１．２：１）（１０８ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持の炭素（５４ｍｇ）から、上記の２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムによって、所望のアルカン２６ａが主要成分（９５％、ｄｒ１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物２６ａをクリーム色固体として得た（１００ｍｇ、９２％、ｄｒ１．１：１）。
m.p. 130-133 °C; (Found: C, 45.91; H, 5.84; N, 6.90. C15H23N2O8P requires C, 46.16; H, 5.94; N, 7.18%); νmax/cm-1(KBr) 3183 (NH), 3053, 2960 (CH), 1748 (C=O), 1689 (C=O), 1662 (C=O), 1644 (C=C), 1469 (CH), 1261 (P=O), 1113 (C-N), 1023 (C-O); δH (600 MHz, CDCl3): 1.55-1.66 (1H, m), 1.76-1.90 (2H, m), 1.98 (1.5H, s), 2.00 (1.5H, s), 2.02-2.07 (0.5H, br dd, J ~ 6.6, 7.2), 2.08-2.14 (0.5H, br, dd, J ~ 6.6, 7.2), 2.16-2.25 (1H, m), 2.35-2.43 (1H, m), 3.83-3.90 (9H, m), 4.15-4.19 (0.5H, m), 4.20-4.24 (0.5H, m), 4.40 (0.5H, d, JPH = 18.6), 4.46 (0.5H, d, JPH = 19.8), 5.22-5.31 (1H, m), 7.66 (0.5H, s), 7.80 (0.5H, s), 8.75 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 12.25, 12.27, 30.0, 30.1, 30.6, 31.4, 38.4, 38.7, 52.97, 53.00, 53.02, 53.2, 53.8-54.4 (m), 73.3 (d, JPC = 160.8), 74.1 (d, JPC = 160.1), 82.0 (d, JPC = 11.3), 82.8 (d, JPC = 9.1), 111.67, 111.8, 138.0, 138.1, 151.45, 151.48, 163.9, 167.7 (d, J = 2.3), 167.9 (d, J = 2.3); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.8, 17.0; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C15H24N2O8P [M+H]+, 391.1270. Found 390.1263. m/z (ES+) 803.2 (10%) 598 (10%), 464 (8%) 413 [(M+Na)+, 100%], 391 [(M+H)+, 40%].
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ａ
メタノール（２５ｍＬ）中のアルケン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ａ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）（６３６ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担時の炭素（２１７ｍｇ）から、上記の２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムによって、主成分が所望のアルカン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ａ（９５％、ｄｒ１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ａを白色固体として得た（５８４ｍｇ、９１％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）。
m.p. 133-135 °C; [α]D 20 -8.48 (c 0.67 , dichloromethane); HPLC conditions: CHIRALPAK(登録商標) AS-H column 25:75 IPA:hexane, flow 0.8 mL/min. Retention times: 48.5 min (not resolved), 84.1 min, 102.7 min.
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ａ
メタノール（１５ｍＬ）中のアルケン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ａ（５０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）（１６７ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（７６ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗生成物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムによって、所望のアルカン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ａが主成分（〜９５％、ｄｒ１．２：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ａをクリーム色固体として得た（１４３ｍｇ、８５％、５０％ｅ．ｅ、ｄｒ１：１）。
m.p. 129-130 °C; [α] D 20 +6.11 (c 1.24, dichloromethane); HPLC conditions: CHIRALPAK(登録商標) AS-H column 25:75 IPA:hexane, flow 0.8 mL/min. Retention times: 48.5 min (not resolved), 84.1 min, 102.7 min.
シス−１−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル ２５ｂ
無水エタノール（１５ｍＬ）中のアルケン２３ｂ（ｄｒ１．２：１）（１５６ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持の炭素（５０ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、この化合物を製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、アルカン２５ｂが主成分（〜９０％、ｄｒ１．２：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物２５ｂをクリーム色固体として得た（１３１ｍｇ、８２％、ｄｒ１．１：１）。
m.p. 106-108 °C; (Found: C, 48.80; H, 6.39; N; 6.30. C17H27N2O8P requires C, 48.80; H, 6.50; N, 6.70%); νmax/cm-1 (KBr) 3174 (NH), 3057 (CH), 2996 (CH), 1755 (C=O), 1702, 1682, 1460, 1273, 1260 (P=O), 1106 (C-N), 1019 (C-O); δH (600 MHz, CDCl3): 1.28-1.38 (9H, m), 1.53-1.65 (1H, m), 1.78-1.89 (2H, m), 2.06 (0.5H, br dd, J ~ 6.6, 7.8), 2.13 (0.5H, br dd, J ~ 6.6, 6.6, 2.20-2.29 (1H, m), 2.33-2.42 (1H, m), 4.15-4.36 (7H, m), 4.33 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.39 (0.5H, d, JPH = 19.8), 5.22-5.31 (1H, m), 5.74 (0.5H, d, J = 7.8), 5.79 (0.5H, d, J = 7.8), 7.95 (0.5H, d, J = 8.4), 8.06 (0.5H, d, J = 8.4), 8.39 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 14.1, 16.39 (br d, JPC ~ 5.9), 16.44 (br d, JPC ~ 5.6), 30.3, 30.4, 30.6, 31.6, 38.5, 39.0, 53.3, 53.4, 62.0, 62.1, 63.5 (2 d, JPC ~ 6.6, 6.6), 63.7 (d, JPC = 6.6), 64.0 (d, JPC = 6.6), 73.8 (d, JPC = 159.8), 74.5 (d, JPC = 158.9), 81.7 (d, JPC = 11.5), 82.6 (d, JPC = 9.1), 102.9, 103.1, 142.7, 142.8, 151.4, 151.5, 163.4 167.2 (br d, JPC ~ 1.7), 167.5 (br d, JPC ~ 2.3); δp (161.9 MHz, CDCl3): 14.4, 14.6; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C17H28N2O8P [M+H]+ 419.1583; Found: 419.1586. m/z (ES+) 837.4 [dimer, 40%], 437.2 [(M+ Na)+, 15%] 419.2 [(M + H)+, 100%)], 325.1 (10%).
シス−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル ２６ｂ
メタノール（１０ｍＬ）中のアルケン２４ｂ（ｄｒ１．２：１）（７５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（５０ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順を用いて、この化合物を製造した。粗生成物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムによって、アルカン２６ｂが主成分（〜９０％、ｄｒ１．２：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物２６ｂを白色吸湿性ガム状物として得た（６９ｍｇ、８６％、１．１：１）。
νmax/cm-1 (film) 3425 (NH), 3198, 2959, 2921 (CH), 1744 (C=O), 1688, 1255 (P=O), 1111 (C-N), 1034 (C-O); δH (600 MHz, CDCl3): 1.57-1.67 (1H, m), 1.78-1.90 (2H, m), 2.04-2.14 [1H, 2 dd , J ~ 6.6, 6.6, 6.6, 6.6,), 2.19-2.29 (1H, m), 2.34-2.43 (1H, m), 3.83-3.89 (9H, m), 4.17-4.22 (1H, m), 4.39 (0.55H, d, JPH = 19.2), 4.44 (0.45H, d, JPH = 19.8), 5.21-5.30 (1H, m, 5.75 (0.45H, br d, J ~ 7.8)], 5.80 (0.55H, br d, J ~ 7.8), 7.89 (0.45H, br d, J ~ 8.4), 7.98 (0.55H, br d, J ~ 7.8), 8.87 (1H, br s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 30.2, 30.6, 31.6, 38.3, 38.9, 53.01, 53.02, 53.4, 53.5, 53.9 (d, JPC = 6.6), 54.0 (d, JPC = 6.8), 54.1 (d, JPC = 6.6), 54.4 (d, JPC = 6.6), 73.4 (JPC = 160.8), 74.1 (d, JPC = 160.0), 82.0 (d, JPC = 11.2, 82.7 (d, JPC = 9.3), 102.9, 103.1, 142.4, 142.5, 151.38, 151.41, 163.3, 167.6 (br d, JPC ~ 2.0), 167.9 (br d, JPC ~ 2.6); δp (121.5 MHz, CDCl3): 16.8, 17.0; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C14H22N2O8P [M+H]+ 376.1114; Found:376.1114. m/z (ES+) 753.2 [dimer, 30%], 394.1 [20%] 377.1 [(M + H)+, 100%].
この化合物は、検知できる分解を生じることなく室温で長期間保管することができた。約２年間経ったサンプルは、１Ｈ ＮＭＲ分析により純度９５％であった。
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｂ
メタノール（３５ｍＬ）中のアルケン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｂ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（２３１ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（１８１ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムによって、アルカン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｂが主成分（〜９５％、ｄｒ１．１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｂをクリーム色ガム状物として得た（２０９ｍｇ、９０％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）。
[α]D 20 -4.55 (c 0.62, dichloromethane); HPLC Conditions: CHIRALCEL(登録商標) OJ-H column 30:70 IPA:hexane, flow 0.7 mL/min. Retention times: 42.2 min, 47.5 min, 60.6 min, 68.5 min.
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｂ
メタノール（３０ｍＬ）中のアルケン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｂ（３０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（３５１ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（１２０ｍｇ）から、２３ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムによって、アルカン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｂが主成分（９５％、１．１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｂを白色吸湿性ガム状物として得た（３３１ｍｇ、９４％、３０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）。
[α] D 20 +1.46 (c 1.13, dichloromethane); HPLC conditions: CHIRALCEL(登録商標) OJ-H column 30:70 IPA:hexane, flow 0.7 mL/min. Retention times : 42.2 min, 47.5 min, 60.6 min, 68.5 min.
シス−１−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン ２５ｃ
純粋エタノール（１５ｍＬ）中のアルケン２３ｃ（ｄｒ１．２：１）（１５６ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（６８ｍｇ）から、２３ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗生成物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、主成分が所望のアルカン２５ｃ（〜７５％、ｄｒ１．２：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、飽和生成物２５ｃを吸湿性白色固体として得た（１２８ｍｇ、８２％、ｄｒ１．１：１）。
υmax/cm-1 (KBr): 3334 (NH), 3114 (CH), 2984 (CH), 1747 (C=O), 1655, 1618 (C=C), 1525, 1481 (CH), 1368, 1282, 1258 (P=O), 1107, 1027 (C-O); dH (400 MHz, CDCl3): 1.29-1.39 (9H, m), 1.56-1.70 (1H, m), 1.71-1.87 (2H, m), 1.99-2.11 (1H, m), 2.18-2.29 (1H, m), 2.34-2.46 (1H, m), 4.13-4.35 (7H, m), 4.34 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.39 (0.5H, d, JPH = 19.2), 5.00-7.01 (2H, br s), 5.33-5.46 (1H, m), 5.82 (0.5H, d, J = 7.2), 5.86 (0.5H, d, J = 7.6), 7.92 (0.5H, d, J = 7.6), 8.03 (0.5H, d, J = 7.6); δC (75.5 MHz, CDCl3): 14.1, 16.4 (d, JPC ~ 5.9), 30.6, 30.8, 30.9, 31.7, 38.6, 39.1, 54.0, 54.1, 61.99, 62.04, 63.5 (2 d, JPC ~ 6.3, 6.5), 63.7 (d, JPC = 6.6), 64.0 (d, JPC = 6.6), 74.1 (d, JPC = 159.8), 74.6 (d, JPC = 158.9), 82.0 (d, JPC = 11.7), 82.8 (d, JPC = 9.8), 94.9, 95.2, 143.6, 143.8, 156.91, 156.94, 165.1, 167.4 (br d, JPC ~ 1.9), 167.6, [C, br d, JPC ~ 2.3); δP (125.5 MHz, CDCl3) 14.5, 14.6; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C17H29N3O7P [M+H]+, 418.1743. Found 418.1728; m/z (ES+) [M+H]+ 835.3 [dimer, 100%], 440.1 [(M+Na)+, 15%], 418.1 [(M+H)+, 85%].
シス−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン ２６ｃ
メタノール（１０ｍＬ）中のアルケン２４ｃ（ｄｒ１．１：１）（９７ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（６０ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望のアルカン２６ｃ（〜８０％、ｄｒ１．１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物２６ｃを白色吸湿性ガム状物として得た（７８ｍｇ、８０％、ｄｒ１．１：１）。
νmax/cm-1 (film) 3421 (NH), 3198 (CH), 2958 (CH), 1744 (C=O), 1718, 1651, 1531, 1491 (CH), 1260, 1233 (P=O), 1109 (C-N), 1050 (C-O), 1030; δH (300 MHz, CDCl3): 1.58-1.90 (3H, m), 1.97-2.12 (1H, m), 2.15-2.30 (1H, m), 2.34-2.48 (1H, m), 3.81-3.90 (9H, m), 4.12-4.20 (1H, m), 4.40 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.44 (0.5H, d, JPH = 19.8), 5.27-5.44 (1H, m), 5.50-7.31 (2H, br s), 5.90 (0.5H, d, J = 7.5), 5.93 (0.5H, d, J = 7.5), 7.86 (0.5H, d, J = 7.5), 7.94 (0.5H, d, J = 7.5); δC (75.5 MHz, CDCl3): 30.6, 30.7, 31.7, 38.5, 39.0, 53.01, 53.04, 53.9-54.3 (m), 73.5 (d, JPC = 160.7), 74.1 (d, JPC = 160.0), 82.3 (d, JPC = 11.2, 82.9 (d, JPC = 9.5), 95.2, 95.4, 143.4, 143.6, 156.9, 164.9, 167.8 (d, JPC = 2.3), 168.0 (d, JPC = 2.7); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.9, 17.0, HRMS (ES+): Exact mass calculated for C14H23N3O7P [M+H]+ 376.1274. Found 376.1263. m/z (ES+) 751.3 [dimer, 100%], 398.1 [(M + Na)+, 20%] 374.1 [(M + H)+, 50%].
このホスホノヌクレオシド２６ｃは、ジクロロメタン、重クロロホルムおよびメタノールなどの溶媒中で容易に分解する。重クロロホルム中の２６ｃのサンプルに、室温で１６時間後に、かなりの分解が認められた。
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｃ
メタノール（２５ｍＬ）中のアルケン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｃ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（１６７ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持の炭素（８３ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、この化合物を製造した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、主成分がアルカン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｃ（〜７０％、ｄｒ１．１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｃが無色吸湿性ガム状物として得られた（９８ｍｇ、５８％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）。溶液での（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｃが不安定であるために旋光度は測定できない。（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｃのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｃ
メタノール（３５ｍＬ）中のアルケン（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｃ（ｄｒ１．２：１）（７０％ｅ．ｅ．、１７１ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持の炭素（８６ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析により、主成分が（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｃ（〜７５％、ｄｒ１．２：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｃを無色ガム状物として得た（１０６ｍｇ、６２％、７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）。溶液での（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｃが不安定であるために旋光度は測定できない。（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｃのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−９−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン ２５ｄ
無水エタノール（１０ｍＬ）中のアルケンＮ−９−２３ｄ（ｄｒ１．２：１）（１３５ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（６５ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲは、主として所望のアルカン２５ｄ（〜８５％、ｄｒ１．２：１）および未知不純物（〜１５％、ｍ ａｔ ３．６４−３．７６ｐｐｍ）からなるものであった。その取得物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、飽和化合物２５ｄを白色固体として得た（１０５ｍｇ、７７％、ｄｒ１：１）。
m.p. 145-147 °C, νmax/cm-1 (KBr) 3405, 3194 (NH), 3108 (CH), 2954 (CH), 1739 (C=O), 1649, 1600, 1579, 1508, 1417, 1338, 1234 (P=O), 1108 (C-N), 1069, 1050 (C-O); δH (600 MHz, CDCl3): 1.30-1.40 (9H, m) 1.77-1.89 (1H, m), 2.11-2.23 (3H, m), 2.36-2.45 (1H, m), 2.50-2.60 (1H, m), 4.19-4.36 (7H, m), 4.40 (0.5H, d, JPH =18.6), 4.45 (0.5H, d, JPH = 19.8), 5.14-5.24 (1H, m), 6.32 (1H, br s,), 6.37 (1H, br s), 8.34 (1H, s), 8.40 (0.5H, s), 8.54 (0.5H, s); δC (150.9 MHz, CDCl3): 14.1, 16.4-16.5 (m), 30.8, 31.8, 32.1, 32.3, 39.9, 40.4, 52.4, 62.0, 63.6, 63.8 (d, JPC = 6.5), 64.0 (d, JPC = 6.6), 74.0 (d, JPC = 159.2), 74.5 (d, JPC = 158.5), 81.8 (d, JPC = 11.8), 82.6 (d, JPC = 9.8), 119.38, 119.41, 140.0, 140.2, 150.0, 150.01, 152.7, 155.70, 155.72, 167.4, 167.6 δP (162.0 MHz, CDCl3): 14.3, 14.4; HRMS (ES+) Exact mass calulated for C18H29N5O6P [M+H]+ 442.1855; Found: 442.1841. m/z (ES+) [M+H]+ 442.2 [(M+H)+, 100%], 443.2 [30%], 464.1 [(M+Na)+, 10%].
シス−９−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン ２６ｄ
メタノール（１５ｍＬ）中のアルケンＮ−９−２４ｄ（ｄｒ１：１）（２１０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（７５ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順を用いて、この化合物を製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲにより、アルカン２５ｄが主成分（９５％、ｄｒ１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物２５ｄを白色吸湿性ガム状物として得た（１６９ｍｇ、８０％、ｄｒ１：１）；
νmax /cm-1 (film) 3362, 3280 (NH), 3108, 2953, 2922 (CH), 1738 (C=O), 1672, 1601 (C=C), 1230 (P=O), 1108 (C-N), 1073, 1048 (C-O); δH (300 MHz, CDCl3): 1.78-1.94 (1H, m), 2.06-2.27 (3H, m), 2.33-2.48 (1H, m), 2.49-2.64 (1H, m), 3.82-3.92 (9H, m), 4.26-4.35 (1H, m), 4.40 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.49 (0.5H, d, JPH = 19.8), 5.11-5.24 (1H, m), 6.02 (1H, br s), 6.05 (1H, br s), 8.35 (1.5 H, s), 8.46 (0.5H, s); δC (75.5 MHz, CDCl3): 30.7, 31.8, 32.0, 32.1, 39.7, 40.3, 52.4, 52.5, 53.0, 54.1 (d, JPC = 6.6), 54.3 (d, JPC = 6.6), 54.5 (d, JPC = 6.6), 73.8 (d, JPC = 160.4), 74.5 (d, JPC = 159.7), 82.0, 82.8, 119.3, 139.8, 139.9, 149.9, 152.8, 155.76, 155.78, 167.7 (d, JPC = 2.0), 168.0 (d, JPC = 2.3); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.6, 16.8; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C15H23N5O6P [M+H]+ 400.1386; Found: 400.1379. m/z (ES+) 422.1 [(M+ Na) +, 10%] 401.1 [20%] 400.1 [(M + H)+, 100%] 220.1 [5%], 150.0 [10%].
（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−９−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｄ
メタノール（２５ｍＬ）中のアルケン、（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｄ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）（１５８ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）および５％パラジウム担持の炭素（７５ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、所望のアルカン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｄが主成分（〜８０％、ｄｒ１：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｄを淡黄色吸湿性ガム状物として得た（１１８ｍｇ、７４％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）；［α］Ｄ ２０−１４．３３（ｃ ０．１５、ジクロロメタン）。（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｄのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−９−｛４−［（エトキシカルボニル）ジエチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｄ
メタノール（２０ｍＬ）中のアルケン（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｄ（７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）（２５３ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持の炭素（１００ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。反応混合物を室温で２０時間にわたり、４０ｐｓｉの水素下で振盪した。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、アルカン（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｄが主成分（〜９０％、ｄｒ１．２：１）であることが示された。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｄを淡黄色吸湿性ガム状物として得た（１８９ｍｇ、７４％、７０％ｅ．ｅ、ｄｒ１．１：１）；［α］Ｄ ２０＋１０．００（ｃ ０．２、ジクロロメタン）。注：１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにおいて２．４ｐｐｍ（〜０．６Ｈ）に不純物が認められる。（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｄのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−２−アミノ−７−｛４−［（メトキシカルボニル）ジメチルホスホノメトキシ］シクロペンタン−１−イル｝−６−クロロプリン ２６ｅ
メタノール（１０ｍＬ）中のアルケンＮ−７−２４ｅ（ｄｒ１．２：１）（１６１ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム担持の炭素（５４ｍｇ）から、２５ａについて記載の手順に従って、これを製造した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、飽和化合物Ｎ−７−２６ｅをクリーム色固体として得た（２１ｍｇ、１７％、ｄｒ１：１）；
δH (300 MHz, CDCl3): 1.80-2.61 (6H, m), 3.81-3.90 (9H, m), 4.26-4.38 (1H, m), 4.40 (0.5H, d, JPC = 19.2), 4.45 (0.5H, d, JPC = 20.1), 5.13 (1H, br s), 5.14 (1H, br s), 5.31-5.44 (1H, m), 8.57 (0.5H, br s), 8.64 (0.5H, br s). Signals for the alkene N-7-24e were seen at 5.78-5.89 (0.1H, m), 6.20-6.27 (0.1H, m), 6.44-6.50 (0.1H, m), 8.19 (0.04H, s) and 8.20 (0.06H, s).
この生成物は、溶液では４日以内にかなり分解し、それ以上の分析は出来なかった。少量の不飽和化合物Ｎ−７−２４ｅの存在が、合成のこの時点での全ての誘導体の分解を引き起こすように思われる。
脱保護反応
活性炭クロマトグラフィーによるホスホン酸類の精製の一般的手順
活性炭を充填した焼結ガラス漏斗から作った活性炭Ｇ−６０を用いて活性炭カラムを準備し、ブフナー漏斗に乗せ、真空源に連結した。最初に、セライト（登録商標）の薄層（〜２ｍｍ）を焼結ガラス漏斗に乗せ、次に活性炭（精製を必要とするサンプルの、〜１０から２０倍の質量）をセライト（登録商標）の頂部に充填した。真空を用いて、カラムを溶離した。使用前に、活性炭層にアンモニア水（２０％、活性炭層の高さの〜４倍）、水（活性炭層の高さの〜６倍）、最後にメタノール（活性炭層の高さの〜４倍）を流した。完全に脱保護された化合物１１ａからｄは酸性溶液中では安定ではないことから、各場合で、塩基触媒脱保護から単離された取得物を最小量の水に溶かし、溶液をｐＨ１〜２．５に調節してから、直ちに活性炭カラムに吸着させた。ホスホン酸の吸着後に、活性炭層を水（サンプル１００ｍｇについて１５０ｍＬ）で洗浄して無機不純物を除去し、次に２０％アンモニア水溶液で溶離して、純粋なホスホノヌクレオシドをそれのアンモニウム塩として遊離させた。分画をＴＬＣプレートにスポット添加し、ＵＶ活性な分画を合わせ、減圧下で濃縮した。部分的に脱保護された化合物２９８ａを、１０：１０：３エタノール／水／アンモニアで溶離した。
シス−１−｛４−［メトキシカルボニル（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン ２８ａ
窒素雰囲気下で２６ａ（ｄｒ１．２：１）（１３５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにブロモトリメチルシラン（０．２３ｍＬ、２６５ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。反応混合物を６時間にわたり終夜撹拌してから、水（１ｍＬ）を加えた。撹拌を３０分間続け、反応混合物を３０℃で減圧下に濃縮して、淡橙色ガム状物を得た（１２１ｍｇ、９６％）。酸性残留物を活性炭カラムによって精製して、２８ａをアンモニウム塩として得た（８６ｍｇ、４５％、１：１）。
δH (300 MHz, D2O): 1.51-2.04 (5H, m), 1.787 (1.5H, s), 1.790 (1.5H, s), 2.26-2.36 (1H, m), 3.66 (1.5H, s), 3.67 (1.5H, s), 3.99-4.10 (1H, m), 4.24 (0.5H, d, JPH = 18.6), 4.27 (0.5H, d, JPH = 18.9), 4.78-4.92 (1H, m), 7.73 (0.5H, br q, J = 0.9), 7.82 (0.5H, br q, J = 0.9); δP (121 MHz, D2O): 9.1, 9.5.
シス−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン １１ａ
２６ａ（ｄｒ１．２：１）（１３３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を窒素雰囲気下、０℃で撹拌しながら、それにブロモトリメチルシラン（２６０ｍｇ、０．２２ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。反応混合物を徐々に昇温させて室温とし、終夜撹拌した。暗橙色溶液を水（１ｍＬ）で処理し、反応混合物を３０分間撹拌して、ミルク状溶液を得た。水酸化ナトリウム（１Ｍ、３．５ｍＬ、〜３．５ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌してから、減圧下で濃縮して白色固体を得た。粗取得物の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムにより、生成物１１ａが主成分（〜９５％、ｄｒ１：１）であることが示された。酸性残留物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、ホスホネートを含む分画を凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート１１ａをアンモニウム塩として得た（５６ｍｇ、４５％、１：１）。
m.p. 228-230 °C; νmax/cm-1(KBr) 3152 (NH), 3025 (CH), 1691 (C=O), 1405, 1273 (P=O), 1058; δH (600 MHz, D2O): 1.53-1.62 (0.5H, m), 1.62-1.75 (2.5H, m), 1.76 (3H, s), 1.80-1.98 (2H, m), 2.24-2.31 (1H, m), 3.92 (0.5H, d, PCH, JPC = 18.6), 3.95-4.02 (1.5H, m), 4.73-4.84 (1H, m), 7.70 (0.5H, s), 7.72 (0.5H, s); δC (150.9 MHz, D2O): 11.4, 11.5, 29.1, 29.2, 29.5, 30.6, 36.6, 37.5, 54.6, 54.8, 77.5 (d, JPC = 143.5), 78.2 (d, JPC = 143.4), 79.9 (d, JPC = 11.2), 80.6 (d, JPC = 10.9), 111.3, 111.4, 140.3, 140.5, 152.57, 152.59, 166.6, 176.3, 176.5; δP (121.5 MHz, CDCl3): 12.4, 12.6; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C12H18N2O8P [M+H]+, 349.0801. Found 349.0804. m/z (ES+) 719.1 (30%), 445.0 (5%), 349.0 [(M+H)+, 10%], 371.0 [(M+Na)+, 20%], 99.9 (30%), 58.9 (100%).
（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ａ
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（３７１ｍｇ、０．３２ｍＬ、２．４２ｍｍｏｌ）、（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ａ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１．２）（１８７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を原料として上記の方法に従って、これを製造した。混合物を終夜撹拌してから、水（０．３ｍＬ）を加えた。撹拌を続け３０分間および水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、５ｍＬ、〜５．０ｍｍｏｌ、１０当量）を加えた。混合物を５０℃で終夜撹拌してから、減圧下で濃縮した。１Ｈ ＮＭＲ分析によって、粗取得物の主成分が所望の脱保護化合物（〜９５％、ｄｒ１：１．２）であることが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１をそれのアンモニウム塩（８１ｍｇ、４６％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）として得た。
m.p. 225-227 °C; νmax/cm-1(KBr) 3204 (NH), 3025 (CH), 1691 (C=O), 1588 (C=C), 1433 (CH), 1273 (P=O), 1157 (C-N), 1057 (C-O); δH (300 MHz, D2O): 1.65-2.17 (5H, m), 1.93 (3H, s), 2.36-2.50 (1H, m), 4.04-4.21 (2H, m), 4.87-5.05 (1H, m), 7.89 (1H, br s).
（＋）−（１’Ｓ、４’Ｒ）−１１ａのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６および飽和生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ａのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ａ
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（２３１ｍｇ、０．２ｍＬ、１．５１ｍｍｏｌ）、（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６（７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）（１１８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）と次に水（０．２ｍＬ）、次に水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、３ｍＬ、〜３ｍｍｏｌ、１０当量）から上記の方法に従って、これを製造した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望の脱保護された化合物（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ａ（〜９５％、ｄｒ１：１）であることが示された。粗残留物を活性炭カラムクロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ａをアンモニウム塩として得た（６３ｍｇ、５７％、７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１．１）；融点２２９−２３０℃。（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ａのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６および飽和生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ａのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［メトキシカルボニル（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル（１Ｓ，４Ｒ）−２８ｂ
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（３０２ｍｇ、０．２６ｍＬ、１．９７ｍｍｏｌ）、（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｂ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）（１４７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）からこれを製造した。終夜撹拌後、暗橙色溶液を水（０．２ｍＬ）で処理し、得られたミルク状溶液を１０分間撹拌してから、減圧下に濃縮して、（１Ｓ，４Ｒ）−２８ｂを得た（１３１ｍｇ、収率９６％、９８％ｅ．ｅ．）。
シス−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル １１ｂ
０℃で窒素雰囲気下に平衡としておいたジクロロメタン（２０ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（２０９ｍｇ、０．１８ｍＬ、１．３７ｍｍｏｌ）、２６ｂ（ｄｒ１．５：１）（１０３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）からこれを製造した。反応混合物を徐々に昇温させて室温とし、１５時間撹拌した。溶液を水（０．１ｍＬ）で処理し、１０分間撹拌した。水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、５ｍＬ、〜５．０ｍｍｏｌ、１８当量）を加え、混合物を５０℃で終夜撹拌してから、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が所望の化合物１１ｂ（〜９５％、ｄｒ１．５：１）であることが示された。粗残留物を活性炭によって精製した。純粋なホスホネートを含む分画を凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート１１ｂをアンモニウム塩として得た（５５ｍｇ、５８％、ｄｒ１．１：１）。
νmax/cm-1 (KBr) 3201 (OH), 3052 (CH), 1686 (C=O), 1273 (P=O), 1152 (C-O), 1062 (C-N); δH (600 MHz, D2O): 1.51-1.60 (0.5H, m), 1.60-177 (2.5H, m), 1.82-1.93 (1H, m), 1.94-2.02 (1H, m), 2.21-2.31 (1H, m), 3.90 (0.5H, d, JPC = 18.6), 3.91-4.03 (1.5H, m), 4.80-4.88 (1H, m), 5.74 (0.5H, br d, J ~ 7.8), 5.75 (0.5H, br d, J ~ 7.2), 7.99 (1H, br d, J ~ 7.8); δC (150.9 MHz, D2O): 29.5, 29.7, 31.1, 36.5, 37.7, 54.9, 55.1, 77.5 (br d, JPC ~ 144.0)*, 78.1 (br d, JPC ~ 143.5)*, 80.0 (d, JPC = 11.3, 80.7 (d, JPC = 11.5), 102.1, 102.2, 145.35, 145.38, 152.6, 152.7, 166.5, 176.4, 176.6; δp (161.9 MHz, CDCl3): 12.17, 12.23; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C11H16N2O8P [M+H]+ 335.0644; Found: 335.0628. m/z (ES+) 667.2 (dimer, 50%), 333.0 [(M + H)+, 100%].
＊通常の１３Ｃ ＮＭＲスペクトラムではＰＣＨシグナルは認められなかったが、これらのピークはＤＥＰＴスペクトラムで見ることができた。ＰＣＨについてのカップリング定数は、ＤＥＰＴ９０スペクトラムから得たものである。
（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｂ
（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−２８ｂ＊（９８％ｅ．ｅ、ｄｒ１：１）（１３１ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液を撹拌しながら、それに水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、５ｍＬ、〜５ｍｍｏｌ、１８当量）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌してから、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、所望の化合物（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｂが主成分（〜９８％、ｄｒ１：１）であることが示された。粗残留物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｂをそれのアンモニウム塩として得た（６３ｍｇ、４８％、９８％ｅ．ｅ．、１：１）；［α］Ｄ ２０＋８．３０（ｃ ０．２４、水）。
＊サンプルは、精製せずに上記の実験から直接用いた。
（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｂのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６、ホスホヌクレオシド（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２４ｂおよび飽和生成物（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｂのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝ウラシル（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｂ
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（３４８ｍｇ、０．３０ｍＬ、２．２７ｍｍｏｌ）および（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｂ（３０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）（１８３ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を用いてこれを製造した。１８時間後、溶液を水（０．２ｍＬ）で１０分間処理し、混合物を減圧下で濃縮した。橙色残留物を５０℃にて水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、４．９ｍＬ、〜４．９０ｍｍｏｌ、１０当量）で終夜処理した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、ホスホン酸（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｂが主成分（〜９５％、ｄｒ１：１）として存在することが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｂをそれのアンモニウム塩として得た（８１ｍｇ、４５％、３０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）；［α］Ｄ ２０−１．２３（ｃ ０．２９、水）。（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｂのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６、ホスホノヌクレオシド（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２４ｂおよび飽和生成物（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｂのエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−１−｛４−［メトキシカルボニル（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン ２８ｃ
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（０．２３ｍＬ、１．７０ｍｍｏｌ、７当量）および２６ｃ（ｄｒ１．２：１）（９５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）からこれを製造した。混合物を還流下に８時間加熱してから、水（０．１ｍＬ）で処理した。撹拌を１０分間続け、溶液を減圧下で濃縮して、２８ｃ（８８ｍｇ、１００％、ｄｒ１：１）を得た。
δH (300 MHz, D2O): 1.49-1.80 (3H, m), 1.80-1.97 (1H, m), 2.03-2.14 (1H, m), 2.19-2.31 (1H, m), 3.65 (2.6H, s), 4.00-4.12 (1H, m), 4.33 (0.5H, d, JPH = 19.2), 4.37 (0.5H, d, JPH = 19.5), 4.83-5.02 (1H, m), 6.06 (0.5H, d, J = 7.8), 6.13 (0.5H, d, J = 7.8), 8.11 (0.5H, d, J = 7.8), 8.16 (0.5H, d, J = 8.1).
カルボキシルエステルの部分加水分解による別のピークが、スペクトラムで８．０６ｐｐｍ（ｄ、Ｊ＝８．１）に認められる（１０％）。これにより、３．６５ｐｐｍでのカルボン酸メチルエステルシグナルの積分が低いことが説明される。
シス−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン １１ｃ
２８ｃ＊（８８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、ｄｒ１：１）の水溶液（水１０ｍＬ）を撹拌しながら、それに水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、２．５ｍＬ、〜２．５ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、反応混合物を４０℃で２８時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が完全に脱保護された化合物１１ｃ（〜９０％、ｄｒ１：１）であることが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート１１ｃを得た（５８ｍｇ、６６％、ｄｒ１：１）。
m.p. > 250 °C; υmax/cm-1 (KBr): 3432 (br, NH), 2966 (CH), 1723 (C=O), 1650, 1595 (C=C), 1490, 1399, 1286 (P=O), 1172 (C-N), 1087 (C-O); δH (600 MHz, D2O): 1.52-1.60 (0.5H, m), 1.60-1.72 (2.5H, m), 1.81-1.92 (1H, m), 1.93-2.01 (1H, m), 2.19-2.31 (1H, m), 3.88 (0.5H, d, JPH = 18.0), 3.91-3.95 (0.5H, m), 3.92 (0.5H, d, JPH = 18.6), 3.96-4.00 (0.5H, m), 4.82-4.90 (1H, m), 5.915 (0.5H, d, J = 7.2), 5.923 (0.5H, d, J = 7.8), 7.96 (0.5H, d, J = 7.2), 7.97 (0.5H, d, J = 7.2; δC (150 MHz, D2O): 29.4, 30.0, 30.3, 31.1, 36.6, 37.9, 55.3, 55.6, 77.7 (d, JPC = 142.1,), 78.4 (d, JPC = 141.4, 79.8 (d, JPC = 11.5), 80.5 (d, JPC = 11.8), 96.30, 96.34, 144.7, 144.8, 158.42, 158.45, 165.35, 165.37, 176.8, 177.1; δP (121.5 MHz, D2O): 11.3, 11.5; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C11H17N3O7P [M+H]+ 334.0804; Found: 334.0802. m/z (ES-), 523.0 (20%), 332.0 [(M - H)-, 100%], 80.8 (30%).
＊２８ｃのサンプルを、精製せずに上記の実験から直接用いた。
（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｃ
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（０．１８ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ、５当量）および（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−２６ｃ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）（９８ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）と、次に水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、２．６ｍＬ、〜２．６ｍｍｏｌ、１０当量）から製造した。５０℃で１８時間経過してから、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が完全に脱保護された化合物（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｃ（〜９０％、ｄｒ１．１：１）であることが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、生成物を微細クリーム色固体（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｃ（５１ｍｇ、収率５６％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）として得た。融点＞２５０℃。
（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝シトシン（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｃ
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（０．１２ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ、５当量）、（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｃ（７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．２：１）（６７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と、次に水酸化ナトリウム（１Ｍ、１．８ｍＬ、〜１．８ｍｍｏｌ、１０当量）を用いて５０℃で１８時間にわたり製造してから、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、主成分が完全に脱保護された化合物（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｃ（〜７０％、ｄｒ１．１：１）であることが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｃを微細クリーム色固体として得た（２６ｍｇ、４１％、７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）；融点>２５０℃。（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｃのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
シス−９−｛４−［メトキシカルボニル（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン ２８ｄ
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（０．０８ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２６ｄ（ｄｒ１．１：１）（４５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を還流下に９時間用い、次に水（０．１ｍＬ）を用いて製造した。１０分間撹拌を続けてから、反応混合物を室温で減圧下に濃縮して、化合物２８ｄ（３８ｍｇ、９３％、ｄｒ１：１）を得た。
δH (300 MHz, D2O): 1.77-2.26 (4H, m), 2.20-2.37 (1H, m), 2.41-2.55 (1H, m), 3.67 (1.5H, s), 3.70 (1.5H, s), 4.16-4.27 (1H, m), 4.37 (0.5H, d, JPC = 18.9), 4.42 (0.5H, d, JPC = 19.2), 4.94-5.08 (1H, m), 8.32 (1H, s), 8.63 (0.5H, s), 8.71 (0.4H, s).
シス−９−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン １１ｄ
ブロモトリメチルシラン（２４０ｍｇ、０．２１ｍＬ、１．５７ｍｍｏｌ）、２６ｄ（ｄｒ１．１：１）（１２５ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１５ｍＬ）から、還流下に７時間にわたり、これを製造した。次に水（０．１ｍＬ）を加えて１０分間経過させ、水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、３．１ｍＬ、３．１０ｍｍｏｌ、１０当量）を加えて５０℃で終夜経過させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥させて、完全に脱保護されたホスホネート１１ｄをそれのアンモニウム塩として得た（８６ｍｇ、７１％、ｄｒ１．２：１）。
m.p. 236-240 °C; νmax/cm-1 (KBr) 3342 (NH), 3198, 2961 (CH), 1603 (C=O), 1396, 1176 (C-N), 1071 (C-O); δH (600 MHz, D2O): 1.86-2.23 (5H, m), 2.55-2.64 (1H, m), 3.91 (0.55H, d, JPC = 16.8), 3.96 (0.45H, d, JPC = 16.8), 4.09-4.17 (1H, m), 4.75-4.83 (1H, m [partially obscured by water]), 8.11 (0.45H, s), 8.12 (0.55H, s), 8.45 (0.45H, s), 8.50 (0.55H, s); δC (150 MHz, D2O): 29.3, 30.5, 30.6, 30.7, 37.5, 38.6, 53.6, 53.8, 77.4 (d, JPC = 145.9), 78.1 (d, JPC = 148.8), 79.9 (d, JPC = 10.3), 80.5 (d, JPC = 10.7), 117.8, 117.9, 141.11, 141.14, 148.2, 151.2, 154.5, 154.6, 176.6, 176.8; δP (121.5 MHz, D2O): 11.7, 11.8; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C12H17N5O6P [M+H]+ 358.0916; Found: 358.0898. m/z (ES-), 370.1 (20%), 356.1 [(M - H)-, 40%], 90.9 (50%), 77.8 (80%), 44.9 (100%).
１年後に調べた１１ｄのサンプルは、〜１０％の分解を示した。
（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−９−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｄ
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（２１８ｍｇ、０．１９ｍＬ、１．４３ｍｍｏｌ）および（−）−（１Ｓ、４Ｒ）−２６ｄ（９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１：１）（１１４ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、次に水（０．１ｍＬ）および水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、２．９ｍＬ、〜２．９０ｍｍｏｌ、１０当量）から５０℃で製造してから、減圧下で濃縮した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、所望の化合物（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｄが主成分（〜８５％、ｄｒ１：１）であることが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｄをアンモニウム塩として得た（８８ｍｇ、７８％、９８％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）；融点２３４〜２３９℃；［α］Ｄ ２０＋１３．５０（ｃ ０．２、ジクロロメタン）。（＋）−（１Ｓ，４Ｒ）−１１ｄのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（＋）−（１Ｒ，４Ｓ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−９−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝アデニン（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｄ
ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のブロモトリメチルシラン（２３９ｍｇ、０．２１ｍＬ、１．５５ｍｍｏｌ）および（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−２６ｄ（７０％ｅ．ｅ、ｄｒ１．１：１）（１２２ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）から還流下に９時間、次に水（０．１ｍＬ）と次に水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ、３．０ｍＬ、〜３．０ｍｍｏｌ、１０当量）から５０℃で終夜にて製造した。粗残留物の１Ｈ ＮＭＲ分析によって、所望のホスホネート（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｄが主要生成物（〜９０％、ｄｒ１．１：１）であることが示された。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、凍結乾燥して、完全に脱保護されたホスホネート（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｄをアンモニウム塩（５９ｍｇ、５９％、７０％ｅ．ｅ．、ｄｒ１．１：１）として得た。融点２３７−２４１℃；［α］Ｄ ２０−６．７０（ｃ １．００、ジクロロメタン）。（−）−（１Ｒ，４Ｓ）−１１ｄのエナンチオマー純度は直接測定せず、アセトキシアルコール（−）−（１Ｓ，４Ｒ）−１６のエナンチオマー純度に基づいて割り当てた。
リン酸化反応［４２、５９］
シス−１−｛４−［メトキシカルボニル（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン・１リン酸 １３
２８ａのこのモノリン酸化は、文献（Ｈｏａｒｄ ｅｔ ａｌ．［５９］［５９］およびＤｅｂａｒｇｅ ｅｔ ａｌ．［４２］［４２］）に記載の手順に従って行った。窒素雰囲気下に２６ａ（ｄｒ１．１：１）（１４１ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにブロモトリメチルシラン（０．２４ｍＬ、２７８ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。反応混合物を６時間にわたり終夜撹拌してから、水（１ｍＬ）を加えた。撹拌を３０分間続け、反応混合物を３０℃で減圧下で濃縮した。得られた残留物をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、溶液をトリブチルアミン（０．２６ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を３０分間撹拌してから、３０℃で減圧下に濃縮し、残留物を真空ポンプで終夜乾燥させた。得られた残留物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶かし、１，１−カルボニルジイミダゾール（２３５ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を終夜撹拌してから、メタノール（０．２ｍＬ）で処理し、撹拌を３０分間続けた。リン酸トリブチルアンモニウム（１Ｍ無水ＤＭＦ中溶液）（２．２ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を終夜続けた。水（２０ｍＬ）を加えることで反応を停止し、次に溶液を５０ｍＭ重炭酸アンモニウムで平衡としておいたＤＥＡＥ ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５（２ｇ）のカラムに直接乗せた。次に、カラムを５０ｍＭ重炭酸アンモニウム２５０ｍＬで溶離し、次に所望の生成物を１００ｍＭ重炭酸アンモニウム１００ｍＬで溶離した。分画を合わせ、減圧下に濃縮して、所望のモノリン酸化化合物１３ａを微細白色固体として得た（８１ｍｇ、５２％、１．２：１）。
δH (300 MHz, D2O): 1.60-2.13 (5H, m), 1.87 (3H, s), 2.30-2.45 (1H, m), 3.745 (1.35H, s), 3.751 (1.65H, s), 4.08-4.17 (0.45H, m), 4.17-4.26 (0.55H, m), 4.51 (0.28H, d, JPH = 19.2,), 4.60 (0.23H, d, JPH = 19.2), 4.84-4.98 (1H, m), 7.79 (0.45H, s), 7.91 (0.55H, s) (Slow deuterium/hydrogen exchange of the PCH proton seen in the 1H NMR spectrum with the PCH proton integrating for 0.5 protons); δC (125.8 MHz, D2O): 11.6, 29.2, 29.3, 30.1, 30.3, 37.3, 37.6, 53.0, 54.7, 54.8, 75.7 (br d, JPC ~ 151.0), 76.2 (br d, JPC ~ 154.0), 81.5 (d, JPC = 9.8), 82.1 (d, JPC = 8.7), 111.4, 111.5, 140.6, 140.7, 152.7, 166.7, 172.2, 172.4; δP (121.5 MHz, D2O): 0.6 (m), -10.1 (m); HRMS (ES+): Exact mass calculated for C13H21N2O11P2 [M+H]+, 443.0629. Found 443.0621. m/z (ES+) 884.8 (dimer, 60%), 443.0 [(M + H)+, 100%], %), 363.1 (phosphonate, 25%), 345.1 (40%), 59.1 (30%).
シス−１−｛４−［カルボキシ（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン・１リン酸 １２ａ
同様の化合物についてＤｅｂａｒｇｅ ｅｔ ａｌ．［４２］に記載の手順に従い、１３ａ＊（４５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の水溶液（水５ｍＬ）に水酸化ナトリウム（１Ｍ、０．５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌してから、減圧下に濃縮して、生成物１２ａ（４８ｍｇ、ｄｒ１：１）を白色固体として得た。
δH (300 MHz, D2O): 1.68-2.14 (5H, m), 1.91 (3H, s), 2.36-2.55 (1H, m, 4.10-4.25 (1H, m), 4.17 (0.5H, d, JPH = 18.9), 4.22 (0.5H, d, JPH = 18.9,), 4.80-4.98 (1H, m), 7.68 (0.5H, s), 7.70 (0.5H, s); δC (75.5 MHz, D2O): 12.6, 28.9, 29.0, 29.7, 30.0, 36.9, 37.3, 54.4, 54.5, 80.0 (d, JPC = 11.7), 80.2 (d, JPC = 11.2), 111.4, 111.5, 139.0, 159.7, 175.0, 176.9; δP (121.5 MHz, D2O): 4.5, 4.2, -5.0 (d, J = 2.9), -5.2 (d, J = 2.7)
＊サンプルを、上記で記載の実験から直接用いた。
シス−１−｛４−［メトキシカルボニル（ホスホノ）メトキシ］シクロペンタン−１−イル｝チミン・２リン酸 １５ａ
Ｈｏａｒｄ ｅｔ ａｌ．［５９］およびＤｅｂａｒｇｅ ｅｔ ａｌ．［４２］に記載の手順に従って、２８ａの二リン酸化を行った。
２４ａ（ｄｒ１：１）（１０１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）中溶液を窒素雰囲気下に撹拌しながら、それにブロモトリメチルシラン（０．１７ｍＬ、１９７ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。反応混合物を７時間撹拌してから、水（１ｍＬ）を加えた。撹拌を３０分間続け、反応混合物を減圧下で３０℃で濃縮した。得られた残留物をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、溶液をトリブチルアミン（０．７ｍＬ、０．２９ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を３０分間撹拌してから、減圧下で３０℃で濃縮し、残留物を真空ポンプで終夜乾燥させた。得られた残留物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶かし、１，１−カルボニルジイミダゾール（２５８ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５時間撹拌してから、メタノール（０．２ｍＬ、４．１８ｍｍｏｌ）で処理し、撹拌を３０分間続けた。ピロリン酸トリブチルアンモニウム（８２０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を終夜続けた。水（１５ｍＬ）を加えることで反応停止し、溶液を５０ｍＭ重炭酸アンモニウム中で平衡としておいたＤＥＡＥ ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５（２ｇ）のカラムに直接乗せた。次に、そのカラムを５０ｍＭ重炭酸アンモニウム２５０ｍＬで溶離し、所望の生成物を１００ｍＭ重炭酸アンモニウム１００ｍＬで溶離した。分画を合わせ、減圧下で濃縮して、所望の二リン酸化化合物１５ａを微細白色固体として得た（２８ｍｇ、２２％、ｄｒ１：１．２）。
δH (500 MHz, D2O): 1.71-2.17 (5H, m), 1.93 (3H, s), 2.38-2.51 (1H, m), 3.82 (1.65H, s), 3.83 (1.35H, s), 4.17-4.25 (0.55H, m), 4.25-4.32 (0.45H, m), 4.56 (0.45H, d, JPH = 20.0), 4.62 (0.55H, d, JPH = 20.0), 4.91-5.01 (1H, m), 7.84 (0.55H, s), 7.96 (0.45H, s); δC (125.8 MHz, D2O): 11.6, 29.1, 29.2, 30.1, 30.3, 37.4, 37.6, 53.1, 54.7, 54.8, 81.6 (d, JPC = 10.1), 82.2 (d, JPC = 8.8), 111.4, 111.5, 140.5, 140.7, 152.7, 166.7, 172.0 [C, CO2CH3, one diastereomer], 172.2 [C, CO2CH3, one diastereomer]; δP (121.5 MHz, D2O): 0.27*, -9.0, -21.5, -22.6; HRMS (ES+): Exact mass calculated for C13H22N2O14P3 [M+H]+, 523.0284. Found 523.0305. m/z (ES+) 544.8 [(M + Na)+, 30%], 522.9 [(M+H)+, 20%], 464.9 [monophosphate + Na)+, 30%], 442.9 (monophosphate, 20%), 363.1 (phosphonate, 30%), 110.1 (30%), 69.1 (50%), 64.0 (100%).
＊０．２７に、無機リン酸塩による、または１リン酸化合物１３ａへのゆっくりとした加水分解によるピーク。
不飽和および酸素化誘導体
Figure 2016502524
シス−１−｛４’−［（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］シクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン ３２
シス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］シクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン２３ａ（０．２３ｇ、０．６ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬマイクロ波管に、アセトニトリル（３ｍＬ）、２，６−ルチジン（２８４μＬ、０．２６ｇ、２．４ｍｍｏｌ）およびＴＭＳＢｒ（３２５μＬ、０．３８ｇ、２．４ｍｍｏｌ）とともに入れ、混合物に５０℃で１０分間照射を行った。その後、ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（９５：５）を加えることで反応停止し、混合物を減圧下で濃縮した。酸性とした後、残留物を活性炭クロマトグラフィーによって精製して、琥珀色ガラス状物を得て（０．２１ｇ）、それをメタノール／エーテルから結晶化させて、所望の生成物をクリーム色固体として得た（０．１７ｇ、７８％）。δＨ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）。
シス−１−｛４’−［（カルボキシル）ホスホノメトキシ］シクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン ３３
シス−１−｛４’−［（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］シクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン（１１３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の水溶液（水２．５ｍＬ）に、水酸化リチウム（６３ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を６０℃で４．２５時間撹拌した。減圧下に濃縮後、残留物を酸性とし、活性炭クロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を白色固体として得た（８４ｍｇ、７８％）。δＨ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）。
シス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］−２’，３’−ジヒドロキシシクロペンタン−１’−イル｝チミン ３４
シス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］シクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン（４５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍＬ）に懸濁させ、４％四酸化オスミウム水溶液（８１０μＬ、８１０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を２４時間撹拌してから、５％Ｎａ２Ｓ２Ｏ５で反応停止し、減圧下に濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、所望の生成物を白色固体として得た（２６ｍｇ、５３％）。δＨ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）。
シス−１−｛４’−［（カルボキシル）ホスホノメトキシ］−２’，３’−ジヒドロキシシクロペンタン−１’−イル｝チミン３５
１０ｍＬマイクロ波管にシス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］−２’，３’−ジヒドロキシシクロペンタン−１’−イル｝チミン（２３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＢｒ（２８μＬ、３２ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２ｍＬ）を入れ、混合物を５０℃で１０分間照射した。その後、ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（９５：５）で反応停止し、混合物を減圧下に濃縮した。残留物を水（２ｍＬ）に溶かし、水酸化リチウム（７ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を６０℃で３．５時間撹拌した。減圧下での濃縮および酸性化後に、残留物を活性炭クロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を白色固体として得た（ｍｇ、％）。δＨ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）。
シス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］−２’，３’−エポキシシクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン３６
シス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］シクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン（３９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍＬ）に溶かし、ベンゾニトリル（２５８μＬ、２５８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、次に３０％過酸化水素水（２５６μＬ、２８５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。その後、反応混合物を３時間撹拌し、水で反応停止し、ジクロロメタンで抽出した（３０ｍＬで３回）。合わせた有機抽出液をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、所望のエポキシドを白色固体として得た（１０ｍｇ、２５％）。δＨ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）。
シス−１−｛４’−［（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］−２’，３’−エポキシシクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン３７
シス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］−２’，３’−エポキシシクロペンタ−２’−エン−１’−イル｝チミン（６ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１ｍＬ）、２，６−ルチジン（７μＬ、６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびＴＭＳＢｒ（８μＬ、９ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）とともに１０ｍＬマイクロ波管に入れ、混合物を５０℃で１０分間照射した。その後、ＣＨ３ＯＨ−Ｈ２Ｏ（９５：５）を加えることで反応停止し、混合物減圧下に濃縮した。残留物を活性炭クロマトグラフィーによって精製して所望の化合物を得た（４ｍｇ、６９％）。
δH (400.1 MHz, D2O) 1.37-1.50 (1H, m), 1.82-1.92 (3H, m), 2.24-2.45 (1H, m), 3.72-3.88 (5H, m), 4.16-4.30 (1H, m), 4.38-4.51 (1H, m), 4.81-4.96 (1H, m), 7.69-7.74 (1H, m); m/z (ES-) 375.2 [M-H]-; HRMS (ES+) Exact mass calculated for C13H18N2O9P [M+H]+ 377.0750; found 377.0741.
フルオロウラシル誘導体
Figure 2016502524
２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（４−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）酢酸メチル ３８
５−フルオロウラシル（１１３ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中懸濁液に、炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．３５ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を窒素雰囲気下に１０分間撹拌してから、アセトニトリル（５ｍＬ）中のアリル酢酸エステル２０（１８６ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を加えた。窒素を反応混合物に１５分間吹き込み、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５４ｍｇ、０，０４６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素雰囲気下に６０℃で２時間３０撹拌した。混合物を放冷して室温としてから、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を加えた。得られた沈澱を濾過によって除去し、溶液を減圧下に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、３％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、純粋な生成物をベージュ固体として得た（９４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、４１％、１：１、ｄ．ｒ．）。
Rf (DCM/MeOH 92/8) : 0.61; m.p. 141°C; μmax/cm-1 (film): 3486, 3171 (NH), 3066 (CH), 2961 (CH), 1750, 1713 (C=O), 1665, 1467, 1438, 1389, 1260 (P=O), 1104 (C-N), 1033 (C-O); dH (300 MHz, CDCl3): 1.80-1.87 (1H, m), 2.67-2.80 (1H, m), 3.81-3.87 (9H, m), 4.51 (0.5H, d, J = 20.0), 4.53 (0.5H, d, J = 19.3), 4.58-4.60 (0.5H, m), 4.66-4.67 (0.5H, m), 5.65-5.71 (1H, m)], 5.94-6.00 (1H, m), 6.30-6.37 (1H, m), 7.64 (0.5H, d, J = 6.8z), 7.66 (0.5H, d, J = 6.6Hz), 9.93 [1H, br s); dC (75.5 MHz, CDCl3): 36.6, 36.9, 53.2, 54.18, 54.26, 54.31, 54.35, 58.69, 58.74, 74.8 (d, J = 159.7), 84.3 (d, J = 9.6), 84.6 (d, J = 11.5), 125.9 (d, J = 33.5), 126.0 (d, J = 33.4), 134.4, 134.7, 136.2, 136.7, 140.9 (d, J = 237.7), 149.8, 157.1 [d, J = 26.5), 167.6 (d, J = 2.5), 167.8 (d, J = 2.4Hz); dP (121.5 MHz, CDCl3): 16.26, 16.45; dF (282.4 MHz, CDCl3): -164.23, -164.16; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C14H19FN2O8P [M+H]+ 393.0863; Found : 393.0858. MS (ES-) : [M-H]- 391.2 (46%), 244.3 (60%), 129.3 (92%), 45.2 (100%).
２−（（４−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）−２−ホスホノ酢酸３９
ホスホネートエステル３８（９４ｍｇ、０．２４０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中溶液に、ブロモトリメチルシラン（１４７ｍｇ、１２４μＬ、０．９６０ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（１０３ｍｇ、１１２μＬ、０．９６０ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。溶液を、マイクロ波照射下に５０℃で１０分間加熱した。水（３００μＬ）およびメタノール（３００μＬ）を加え、混合物を室温で２０分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水酸化リチウム（５７ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）の水溶液（水５ｍＬ）に溶かした。混合物を５０℃で１時間加熱してから、減圧下に濃縮した。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、ホスホネートを含む分画を濃縮して、完全に脱保護されたホスホネート３９をそれのアンモニウム塩として得た（７１ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ、８１％、１：１ｄ．ｒ．）。
dH (300 MHz, D2O): 1.74-1.82 (1H, m), 2.87-2.97 (1H, m), 4.14 (0.50H, d, J = 18.5), 4.17 (0.5H, d, J = 17.9), 4.66-4.78 (1H, m), 5.49-5.55 (1H, m), 5.96-6.00 (1H, m), 6.40 (0.5H, d, J = 5.6), 6.46 (0.5H, d, J = 5.5), 7.98 (0.5H, d, J = 6.5), 7.99 (0.5H, d, J = 6.4); dC (75.5 MHz, D2O) : 36.2, 36.5, 59.76, 59.85, 78.6 (d, J = 133,6), 83.2 (d, J = 13.2), 128.1 (d, J = 33.5), 128.2 (d, J = 33.4), 132.0, 132.1, 137.3, 137.8, 140.9 (d, J = 232.2), 150.9, 159.8 (d, J = 25.4), 176.9; dP (121.5 MHz, D2O): 12.08, 12.31; dF (282.4 MHz, D2O): -166.20, -166.16; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C11H13FN2O8P [M+H]+ 351.0394; Found : 351.0407.
２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）酢酸メチル ４０
化合物３８（６１ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）中溶液にパラジウム（炭素担持品５％、３０ｍｇ）を加えた。混合物を水素雰囲気下に１６時間撹拌し、セライト（登録商標）で濾過した。セライト（登録商標）をメタノールで洗浄し（５ｍＬで３回）、濾液を減圧下に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、３％メタノール／ジクロロメタン）による精製により、飽和化合物を白色ガム状物として得た（５９ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ、９７％、１：１ｄ．ｒ．）。
Rf (DCM/MeOH 92/8) : 0.57; νmax/cm-1 (film) : 3490, 3174 (NH), 3067, 2961, 2857, 2825 (CH), 1749, 1700 (C=O), 1469, 1438, 1394, 1359, 1319 (C-H), 1265, 1109, 1032 (C-O, C-N, P-O); dH (300 MHz, CDCl3) : 1.47-2.42 (6H, m), 3.82-3.87 (9H, m), 4.15-4.17 (0.5H, m), 4.21-4.23 (0.5H, m), 4.39 (0.5H, d, J = 19.0), 4.45 (0.5H, d, J = 20.3), 5.24-5.33 (1H, m), 8.06 (0.5H, d, J = 6.7), 8.18 (0.5H, d, J = 6.7), 9.34 (1H, m); dC (75.5 MHz, CDCl3) : 30.1, 30.2, 30.5, 31.4, 38.7, 39.0, 53.1, 53.4, 53.9, 54.0, 54.2, 54.3, 73.1 (d, J = 160.5), 74.1 (d, J = 159.3), 81.9 (d, J = 11.4), 83.0 (d, J = 8.6), 126.8 (d, J = 34.3), 140.9 (d, J = 236.2), 141.0 (d, J = 236.1), 150.1, 156.9 (d, J = 26.6), 167.5 (d, J = 2.0), 167.9 (d, JPC = 2.9); dP (121.5 MHz, CDCl3) : 16.64, 16.92; dF (282.4 MHz, CDCl3) : -164.08, -164.06; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C14H21FN2O8P [M+H]+ 395.1020; Found : 395.1013. MS (ES-) : [M-H]- 394.3 (92%), 379.2 (100%).
２−（（３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）−２−ホスホノ酢酸 ４１
ホスホネートエステル４０（５１ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中溶液に、ブロモトリメチルシラン（７９ｍｇ、６７μＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。溶液を、マイクロ波照射下、５０℃で１０分間加熱した。水（１００μＬ）およびメタノール（１００μＬ）を加え、混合物を室温で２０分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水酸化リチウム（３１ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）の水溶液（水３ｍＬ）に溶かした。混合物を５０℃で２時間加熱してから、減圧下で濃縮した。粗取得物を活性炭クロマトグラフィーによって精製し、ホスホネートを含む分画を濃縮して、約４０％のＤ−交換生成物を含む完全に脱保護されたホスホネート４１をそれのアンモニウム塩として得た（２５ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ、５２％、１：１ｄ．ｒ．）。
m.p.: 243°C; dH (300 MHz, D2O) : 1.69-2.17 (5H, m), 2.40-2.51 (1H, m), 3.99-4.14 (2H, m), 4.93-5.01 (1H, m), 8.33 (0.3H, d, J = 8.4Hz, possible D-exchange), 8.35 (0.3H, d, J = 8.8Hz, possible D-exchange); dP (121.5 MHz, D2O): 12.09, 12.32; .dF (282.4 MHz, D2O) : -165.89, -165.86, -165.60 (possible D-exchange compound), -165.57 (possible D-exchange compound); HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C11H15FN2O8P [M+H]+ 353.0550; Found : 353.0535. Exact mass calculated for C11H14DFN2O8P [M+H]+ 354.0613; Found : 354.0597.
プロドラッグ化合物：
Figure 2016502524
（（（２−メトキシ−１−（（３−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）−２−オキソエチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ビス（２，２−ジメチルプロパノエート） ４２
１０ｍＬマイクロ波管にシス−１−｛４’−［ジメチル（メトキシカルボニル）ホスホノメトキシ］シクロペンタン−１’−イル｝チミン（０．２３ｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＴＭＳＢｒ（３０６μＬ、０．３５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（３ｍＬ）を入れ、混合物を５０℃で１０分間照射した。その後、ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（９５：５）で反応停止し、混合物を減圧下で濃縮した。得られた琥珀色油状物をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶かし、ヒューニッヒ塩基（５５６μＬ、０．４２ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を加え、次にＰＯＭヨージド（０．４５ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を終夜撹拌した。懸濁した固体を濾過によって除去し、濾液を減圧下で濃縮した後に、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、所望の生成物を油状物として得た（０．３２ｇ、９４％）。
dH (600 MHz, CDCl3) : 1.22-1.23 (18H, m), 1.57-1.62 (1H, m), 1.77-1.88 (3H, m), 1.98-1.99 (3H, s), 2.16-2.20 (1H, m), 2.36-2.41 (1H, m), 3.82 (3H, s), 4.20-4.22 (0.5H, m), 4.26-4.28 (0.5H, m), 4.44-4.46 (0.5H, d, JPH = 18), 4.48-4.50 (0.5H, d, JPH = 18.6Hz), 5.22-5.24 (1H, m), 5.65-5.78 (4H, m), 7.64 (0.5H, br), 7.74 (0.5H, br), 7.80 (1H, br s); dC (150.9 MHz, CDCl3) : 12.30, 26.81-26.92, 29.70, 29.98, 30.03, 30.76, 31.17, 38.74, 38.31, 38.44, 53.07, 53.11 53.21, 73.24 [d, JPC = 164), 74.33 [d, JPC = 163), 82.08, 82.12-82.81, 111.71, 111.78, 138.02 138.22, 150.15, 151.19, 166.58, 166.62,166.58, 166.62, 166.8, 166.99, 176.70, 176.88; dP (121.5 MHz, CDCl3): 13.79, 13.87; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C25H40N2O12P [M+H]+ 591.2319; Found : 591.2319.
（（（１−（（３−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）−２−オキソ−２−（（ピバロイルオキシ）メトキシ）エチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ビス（２，２−ジメチルプロパノエート） ４３
トリメチルホスホネートエステル、２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（（１Ｒ，３Ｓ）−３−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）酢酸メチル（５８ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍＬ）中溶液に、ブロモトリメチルシラン（１００μＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。溶液を、５０Ｗのマイクロ波照射下、５０℃で１０分間加熱した。冷却してから、水（５０μＬ）およびメタノール（９５０μＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を乾燥アセトニトリル（５ｍＬ）に溶かした。ＤＩＰＥＡ（１１０μＬ、１．１５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）中溶液およびＰＯＭ−ヨージド（１２０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、トリス−ピバロイルオキシメチルプロドラッグを黄色ガム状物として得た（１４ｍｇ、１４％）。
dH (300 MHz, CDCl3) : 1.21-1.23 (27H, m), 1.76-2.40 (6H, m), 1.98-1.99 (3H, s), 4.17-4.26 (1H, m), 4.42-4.54 (1H, m), 5.17-5.26 (1H, m), 5.63-5.88 (6H, m), 7.57-7.62 (1H, m), 8.26 (1H, br s); HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C30H47N2NaO14P [M+Na]+ 713.2663; Found : 713.2652.
（（（１−（（３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）−２−メトキシ−２−オキソエチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ビス（２，２−ジメチルプロパノエート） ４５
ホスホネートエステル４０（８１ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中溶液に、ブロモトリメチルシラン（１２６ｍｇ、１０６μＬ、０．８２０ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。溶液をマイクロ波照射下、５０℃で１０分間加熱した。水（２００μＬ）およびメタノール（２００μＬ）を加え、混合物を室温で２０分間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を乾燥アセトニトリル（１３ｍＬ）に溶かした。ＤＩＰＥＡ（１４６ｍｇ、１９６μＬ、１．１２７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２．６ｍＬ）中溶液およびＰＯＭ−ヨウ化物（１５４ｍｇ、０．６３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２．６ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、ビス−ＰＯＭプロドラッグを無色ガム状物４５として得た（３８ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ、３１％、１：１ｄ．ｒ．）。
νmax/cm-1 (film) : 3500, 3185 (NH), 3071, 2978, 2876, (CH), 1757, 1701 (C=O), 1482, 1464, 1436, 1438, 1397, 1367 (C-H), 1267, 1230, 1137, 1057, 1024, 1004, (P-O, C-O).; Rf (DCM/MeOH 92/8) : 0.59; dH (300 MHz, CDCl3) : 1.22-1.23 (18H, m), 1.49-2.43 (6H, m), 3.81 (3H, s), 4.19-4.22 (0.5H, m), 4.29-4.31 (0.5H, m), 4.46 (0.5H, d, J = 19.2), 4.49 (0.5H, d, J = 20.6), 5.22-5.32 (1H, m), 5.62-5.81 (4H, m), 8.05 (0.5H, d, J = 6.6) 8.18 (0.5H, d, J = 6.6), 9.21 (1H, m); dC (75.5 MHz, CDCl3) : 26.9, 30.1, 30.8, 31.0, 31.2, 38.7, 38.86, 38.90, 53.21, 53.23, 54.14, 54.21, 73.6 (d, J = 164.8), 74.1 (d, J = 162.9), 82.3, 82.4, 82.5, 82.6, 82.9 (d, J = 7.6), 126.9 (d, J = 37.9), 141.0 (d, J = 231.1), 150.1, 156.9 (d, J = 26.6), 166.8 (d, J = 2.4), 167.0 (d, J = 3.1), 176.8, 177.0; dP (121.5 MHz, CDCl3) : 13.60, 13.80; dF (282.4 MHz, CDCl3) : -163.88, -163.72; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C24H37FN2O12P [M+H]+ 595.2068; Found : 595.2068.
２，２’−（（（１−（（（１Ｒ，３Ｓ）−３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）−２−メトキシ−２−オキソエチル）ホスホリル）ビス（アザネジイル））ジプロパン酸ジイソプロピル ４６
ホスホネートエステル、２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（（１Ｒ，３Ｓ）−３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）酢酸メチル（５０ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍＬ）中溶液に、ブロモトリメチルシラン（７０μＬ、０．５０ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。溶液を５０Ｗでのマイクロ波照射下に５０℃で１０分間加熱した。溶液を冷却して室温とし、減圧下に濃縮して乾固させ、残留物をピリジン（１ｍＬ）に溶かした。トリエチルアミン（０．２５ｍＬ、１．７９ｍｍｏｌ）およびＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（８４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、透明溶液が得られるまで（代表的には５分）混合物を６０℃に加熱した。調製したばかりのａｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２（１６６ｍｇ、０．７５６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１９８ｍｇ、０．７５６ｍｍｏｌ）のピリジン（１ｍＬ）中溶液を、上記の反応混合物に加えた。反応液を６０℃で終夜撹拌し、冷却して室温とし、減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル（２５ｍＬ）に溶かし、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し（２５ｍＬで４回）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、ビスアミデートプロドラッグを透明ガム状物として得た（１１ｍｇ、１５％）。
δH (600 MHz, CDCl3): 1.12-1.42 (12H, m), 1.56-2.48 (6H, m), 3.48-3.61 (2H, m), 3.82-3.84 (3H, m), 3.99-4.08 (2H, m), 4.18-4.19 (0.4H, m), 4.33-4.36 (0.6H, m), 4.39-4.52 (1H, m), 4.96-5.03 (2H, m), 5.22-5.23 (1H, br), 8.09-8.12 (0.4H, m), 8.24-8.29 (0.6H, m), 8.83 (1H, br s); δP (121.5 MHz, CDCl3): 16.37; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C24H39FN4O10P [M+H]+ 593.2388; Found : 593.2404.
２−（（（１−（（（１Ｒ，３Ｓ）−３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）−２−メトキシ−２−オキソエチル）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパン酸イソプロピル ４７
ホスホネートエステル、２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（（１Ｒ，３Ｓ）−３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）酢酸メチル（４５ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍＬ）中溶液に、ブロモトリメチルシラン（６０μＬ、０．４３ｍｍｏｌ）を注射器によって加えた。溶液を、５０Ｗでのマイクロ波照射下、５０℃で１０分間加熱した。溶液を冷却して室温とし、減圧下で濃縮して乾固させ、残留物をピリジン（１ｍＬ）に溶かした。トリエチルアミン（０．２０ｍＬ、１．４３ｍｍｏｌ）およびＬ−アラニンイソプロピルエステル塩酸塩（３４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびフェノール（４７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、透明溶液が得られるまで（代表的には５分間）混合物を６０℃に加熱した。調製したばかりのＡｌｄｒｉｔｈｉｏｌ−２（１３０ｍｇ、０．５９０ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１５０ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）のピリジン（１ｍＬ）中溶液を上記反応混合物に加えた。反応を６０℃で終夜撹拌し、冷却して室温とし、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチル（２５ｍＬ）に溶かし、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し（２５ｍＬで４回）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）による精製によって、フェノキシアミデートプロドラッグを褐色ガム状物として得た（１５ｍｇ、２４％）。
dH (300 MHz, CDCl3): 1.17-2.42 (6H, m), 1.17-1.20 (6H, m), 1.33-1.40 (3H, m), 3.81-3.90 (3H, m), 4.09-4.18 (1H, m), 4.25-4.33 (1H, m), 4.46-4.58 (1H, m), 4.90-5.02 (1H, m), 5.17-5.28 (1H, m), 7.16-7.35 (5H, m), 8.05-8.15 (1H, m); dP (121.5 MHz, CDCl3): 14.95, 15.21, 15.64; HRMS (ES+) : Exact mass calculated for C24H32N3FO9P [M+H]+ 556.1860; Found : 556.1864.
Figure 2016502524
（ジメチルホスホノ）ジアゾ酢酸ベンジル
（ジメチルホスホノ）酢酸ベンジル（２．０１ｇ、７．７８ｍｍｏｌ）およびドデシルベンゼンスルホニルアジド（２．７３ｇ、７．７８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中溶液をトリエチルアミン（１．１ｍＬ、０．７９ｇ、７．７８ｍｍｏｌ）で処理し、室温で終夜、次に４０℃で２時間撹拌した。シリカゲル（約１０ｇ）を加え、揮発物を減圧下に除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、所望の生成物を黄色油状物として得た（１．３ｇ、５９％）。
dH (400 MHz, CDCl3) 3.81 (6H, d, J = 11.8), 5.25 (2H, s), 7.32-7.40 (5H, m).
２−（（（１Ｓ，４Ｒ）−４−アセトキシシクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）−２−（ジメトキシホスホリル）酢酸ベンジル ４８
酢酸４−ヒドロキシシクロペンタ−２−エン−１−イル（０．４９ｇ、３．４５ｍｍｏｌ）および（ジメトキシホスホノ）ジアゾ酢酸ベンジル（１．０８ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）の混合物をベンゼン（２０ｍＬ）に溶かし、窒素下にパージした。モレキュラーシーブス（４Å）を加え、混合物を２分間撹拌した。酢酸ロジウム（１５ｍｇ）を加え、反応液を２４時間加熱還流した。反応混合物を冷却して室温とし、濾過し、溶媒を除去して緑色残留物を得て、それをクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、所望の生成物４８を透明油状物として得た（０．２１ｇ、１５％）。
dH (300 MHz, CDCl3) : 1.68-1.88 (1H, m), 2.00 (3H, s), 2.67-2.78 (1H, m), 3.72-3.84 (6H, m), 4.40-4.83 (2H, m, overlapping signals), 5.19-5.34 (2H, m), 5.43-5.49 (1H, m), 6.02-6.11 (2H, m), 7.31-7.39 (5H, m).
２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（（１Ｓ，４Ｒ）−４−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）酢酸ベンジル ４９
２−（（４−アセトキシシクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）−２−（ジメトキシホスホリル）酢酸ベンジル４８（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）および２Ｍ Ｎａ２ＣＯ３溶液（０．２８ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中脱気溶液に、チミン（１００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を更に５分間脱気し、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（６０ｍｇ、５ｍｏｌ％）を加えた。得られた懸濁液を、５０Ｗでのマイクロ波照射下、５０℃で２時間にわたり加熱した。反応混合物を冷却して室温とし、重力濾過し、減圧下に濃縮して紫色残留物を得て、それをクロマトグラフィーによって精製して、標記の化合物４９を褐色油状物として得た（５０ｍｇ、２１％）。
dH (300 MHz, CDCl3) : 1.72-1.77 (1H, m), 1.92 (3H, s), 2.68-2.83 (1H, m), 3.71-3.81 (6H, m), 4.46-4.66 (2H, m, overlapping signals), 5.12-5.34 (2H, m), 5.60-5.69 (1H, m), 5.88-5.96 (1H, m), 6.20-6.31 (1H, m), 7.33-7.42 (6H, m, overlapping signals), 8.24 (1H, bs).
（（（２−（ベンジルオキシ）−１−（（（１Ｓ，４Ｒ）−４−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）−２−オキソエチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ビス（２，２−ジメチルプロパノエート） ５０
ブロモトリメチルシラン（５６μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）およびルチジン（５０μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）をその順で注射器により、２−（ジメトキシホスホリル）−２−（（４−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）酢酸ベンジル４９（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍＬ）中溶液に加えた。溶液を５０Ｗでのマイクロ波照射下、５０℃で１０分間加熱した。冷却してから、水（５０μＬ）およびメタノール（９５０μＬ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かした。ＤＩＰＥＡ（１００μＬ、１．０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液およびＰＯＭ−ヨージド（１４５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、ビス−ピバロイルオキシメチル生成物を、いくつかの不純物を含む黄色ガム状物として得た。このガム状物を、ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶かし、１Ｍ ＨＣｌ溶液（５ｍＬで２回）およびブライン（５ｍＬで２回）で洗浄することで更に精製した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮して、所望の生成物５０を黄色ガム状物として得た（１０ｍｇ、１４％）。
dH (300 MHz, CDCl3) : 1.21-1.29 (18H, s), 1.72-1.77 (1H, m), 1.90 (3H, s), 2.69-2.83 (1H, m), 4.50-4.71 (2H, m, overlapping signals), 5.17-5.32 (1H, m), 5.54-5.74 (5H, m, overlapping signals), 5.89-5.94 (1H, m), 6.18-6.32 (1H, m), 7.33-7.40 (5H, m), 7.65-7.72 (1H, m); dP (121.5 MHz, CDCl3): 13.13, 13.35.
２−（ビス（（ピバロイルオキシ）メトキシ）ホスホリル）−２−（（（１Ｒ，３Ｓ）−３−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンチル）オキシ）酢酸 ４４
（（（２−（ベンジルオキシ）−１−（（４−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロペンタ−２−エン−１−イル）オキシ）−２−オキソエチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ビス（２，２−ジメチルプロパノエート）５０（１０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶かし、窒素を流した。パラジウム担持の炭素５％（１０ｍｇ）を加え、懸濁液を水素充填風船下に室温で２４時間撹拌した。ＮＭＲによる粗混合物の分析によって、生成物および原料の両方の存在が示された。第２回目のパラジウム担持の炭素５％（２０ｍｇ）を加え、懸濁液を水素充填風船下に室温で更に２４時間撹拌した。反応混合物をセライト（登録商標）層で濾過し、濃縮して、生成物４４を無色ガム状物として得た（５ｍｇ、５８％）。
dH (300 MHz, CDCl3) : 1.22-1.23 (18H, s), 1.52-1.62 (3H, m), 1.82 (3H, m), 2.12-2.38 (3H, m), 4.25-4.31 (1H, m), 4.44-4.53 (1H, m), 5.22-5.24 (1H, m), 5.52-5.77 (4H, m), 7.67 (0.5H, s), 7.87 (0.5H, s), 9.03 (1H, bs). dP (121.5 MHz, CDCl3): 14.34, 14.43; m/z (ES+) : C24H38N2O12P [M+H]+ 577; HRMS exact mass calculated for C24H38N2O12P 577.2162; found 577.2164.
６員環誘導体
Figure 2016502524
ベンジル（３−ヒドロキシシクロヘキシル）カルバメート シス／トランス混合物 ５２
ベンジル（３−オキソシクロヘキシル）カルバメート５１［６０］（５．０ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）中溶液を氷で冷却し、ＮａＢＨ４（０．３１ｇ、８．１ｍｍｏｌ）で１回で処理した。１５分間撹拌した後、溶液を減圧下で溶媒留去し、更にメタノール２回（それぞれ２５ｍＬ）から溶媒留去した。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）および２Ｍ ＨＣｌ（５０ｍＬ）で分配し、相を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、やや黄色の固体を得て（４．５ｇ、９０％）、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。１Ｈ ＮＭＲスペクトラムは、シスおよびトランス異性体の〜７：３混合物に当てはまるものであった。
dH (400 MHz, CDCl3) 1.2-2.2 (8H, m), 3.54-3.67 (0.7H, m), 3.70-3.79 (0.7H, m), 3.89-4.00 (0.3H, m), 4.01-4.06 (0.3H, m), 4.62-4.78 (0.3H, br s), 5.08, 5.10 (2.7H, two overlapping br s), 7.27-7.40 (5H, m).
シス−ベンジル（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）カルバメート ５３
ベンジル（３−ヒドロキシシクロヘキシル）カルバメート（４．０ｇ、１６ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（１．６３ｇ、２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１６ｍＬ）中混合物を撹拌しながら、それに固体ＴＢＳＣｌ（２．６６ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）を加えた。３時間後、混合物を２Ｍ ＨＣｌ（１００ｍＬ）とＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で分配した。層を分離し、水相をＥｔ２Ｏで抽出した（５０ｍＬで２回）。合わせた有機抽出液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望のシスジアステレオマー５３を得た（２．９９ｇ、原料における７：３ｄｒに基づいて７３％）。
dH (400 mHz, CDCl3) 0.06 (6H, s), 0.89 (9h, s), 1.28-1.51 (4H, m), 1.60-1.71 (2H, m), 1.75-1.85 (1H, m), 1.86-1.93 (1H, m), 3.70-3.80 (1H, m), 3.83-3.92 (1H, m), 5.08 (2H, distorted ABq), 5.70 (1H, br s), 7.27-7.37 (5H, m); dC (150 mHz, CDCl3) -5.0, -4.8, 18.0, 25.8, 31.4, 34.0, 39.4 br, 47.4, 66.2, 68.9, 127.8, 127.85, 155.5, 128.4, 136.9; m/z (ES+) 364.3 [M+H+; HRMS (ES+) exact mass calculated for C20H34NO3Si [M+H]+, 364.2308; found 364.2301. The stereochemistry was confirmed by conversion of a sample to the known cis-benzyl (3-hydroxycyclohexyl)carbamate by TBAF deprotection: dH (400 MHz, CDCl3) 1.10-1.39 (4H, m), 1.67-1.89 (3H, m), 2.20-2.29 (1H, m), 3.53-3.89 (1H, m), 3.69-3.81 (1H, m), 5.09 (3H, br s), 7.27-7.40 (5H, m).61
３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシルアミン ５４
シス−ベンジル（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）カルバメート（１．０ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）および５％Ｐｄ／Ｃ（０．２ｇ）のメタノール（４０ｍＬ）中混合物を水素風船下に６時間撹拌した。セライトでの濾過によって触媒を除去し、得られた溶液を濃縮して、アミン５４を無色油状物として得て（０．６３ｇ、ほぼ定量的）、それ以上精製せずに次に用いた。
dH (400 MHz, CDCl3) 0.06 (6H, s), 0.88 (9H, s), 0.96-1.11 (1H, m), 1.12-1.30 (3H, m), 1.69-1.83 (3H, m), 1.97-2.06 (1H, m), 2.21 (2H, br) 2.67-2.78 (1H, m) 3.65-3.66 (1H, m); dC (150 mHz, CDCl3) -4.7, 18.2, 21.5, 25.9, 35.0, 35.5, 45.5 br, 49.1, 70.1.
（Ｅ）−Ｎ−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）カルバモイル）−３−メトキシ−２−メチルアクリルアミド ５５
（Ｅ）−３−メトキシ−２−メチルアクリル酸（０．６４ｇ、５．５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにオキサリルクロライド（０．５１ｍＬ、０．７６ｇ、６ｍｍｏｌ）を滴下した。１時間後、揮発物を減圧下で除去し、残留物をベンゼン（１０ｍＬ）に溶かし、それをシアン酸銀（１．６５ｇ、１１ｍｍｏｌ）のベンゼン（５ｍＬ）中懸濁液を撹拌したものに加え、得られた混合物を還流下に１時間加熱し、次に放冷して室温として静置した。上清溶液（約１１ｍＬ）を注射器で抜き取り、３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシルアミン５４（０．６１ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら氷冷したものに滴下し、混合物を終夜撹拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、所望の生成物５５を無色固体として得た（０．４６ｇ、４７％）。
dH (400 MHz, CDCl3) 0.05 (3H, s), 0.06 (3H, s), 0.87 (9H, s), 1.06-1.33 (4H, m), 1.74-1.85 (2H, m), 1.76 (3H, d, J=1.2), 1.89-1.97 (1H, m), 2.11-2.18 (1H, m), 3.58-3.69 (1H, m), 3.69-3.79 (1H, m), 3.85 (3H, s), 7.29 (1H, q, J=1.2), 7.46 (1H, br s), 8.59 (1H, d, J=7.9); dC (75 MHz, CDCl3) -4.7, -4.6, 8.8, 18.1, 23.0, 25.8, 32.2, 35.1, 42.4, 47.4, 61.4, 69.8, 107.3, 153.4, 158.3, 169.3; m/z (ES+) 371.4 [M+H]+; HRMS (ES+) exact mass calculated for C18H35N2O4Si [M+H]+ 371.2366; found 371.2358.
１−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン ５６
（Ｅ）−Ｎ−（（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）カルバモイル）−３−メトキシ−２−メチルアクリルアミド５５（０．４５ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、エタノール（２．５ｍＬ）、および濃アンモニア水（２．５ｍＬ）の混合物を密封管に入れ、１００℃で予め平衡としておいた浴で２４時間加熱した。揮発物を減圧下で除去して、所望の生成物５６を骨白色固体（０．４１ｇ、ほぼ定量的）を得たが、それは次の段階で直接用いるのに十分な純度のものであった。
dH (400 MHz, CDCl3) 0.06 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.88 (9H, s), 1.17-1.54 (4H, m), 1.80-1.97 (3H, m), 1.93 (3H, d, J=1.1) 2.01-2.10 (1H, m), 3.70 (1H, apparent tt, J= 10.5, 4.3), 4.48 (1H, apparent tt, J= 12.4, 3.7), 7.04 (1H, unresolved q, J = ~1), 8.34 (1H, br s); dC (150 MHz, CDCl3) -4.7, 12.6, 18.1, 21.9, 25.8, 30.8, 35.0, 41.2, 52.0, 69.9, 110.8, 136.3, 150.8, 163.5; m/z (ES-) 337.4 [M-H]-.
３−ベンゾイル−１−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン ５７
１−（３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）シクロヘキシル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン５６（２００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（２０６μＬ、１５３ｍｇ）、およびＤＭＡＰ（１４ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中溶液を塩化ベンゾイル（１０２μＬ、１２４ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）で処理し、マイクロ波リアクター（２００Ｗ、７５℃）で３０分間照射し、等体積の飽和ＮａＨＣＯ３とともに３０分間撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３（２５ｍＬ）とで分配し、分離し、水相を追加のＣＨ２Ｃｌ２で２回（各２０ｍＬ）抽出した。合わせた有機抽出液をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、所望の生成物５７を無色固体として得た（０．２２ｇ、８０％）。
dH (400 MHz, CDCl3) 0.06 (6H, two overlapping s), 0.88 (9H, s), 1.17-1.41 (3H, m), 1.49-1.59 (1H, m), 1.79-1.98 (3H, m), 1.97 (3H, d, J= 1.1), 2.07-2.14 (1H, m), 3.69 (1H, apparent tt, J= 10.4, 4.4), 4.49 (1H, apparent tt, J= 12.6, 3.6), 7.14 (1H, unresolved q, J= ~1.1), 7.46-7.52 (2H, m), 7.61-7.66 (1H, m), 7.90-7.94 (2H, m); dC (150 MHz, CDCl3) 4.7, -4.6, -12.7, 18.1, 21.8, 25.8, 30.9, 35.0, 41.1, 52.4, 69.8, 110.9, 129.1, 130.4, 131.7, 134.9, 136.0, 149.9, 162.6, 169.2 m/z (ES+) 443.3 [M+H]+; HRMS (ES+) exact mass calculated for C24H35N2O4Si [M+H]+ 443.2366; found 443.2353.
３−ベンゾイル−１−（３−ヒドロキシシクロヘキシル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン ５８
ＴＢＳ誘導体５７（２００ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにＴＢＡＦの溶液（ＴＨＦ中 １Ｍ、０．５ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を加えた。終夜撹拌後、溶媒を減圧下に除去し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｎＬ）と２Ｍ ＨＣｌ（２５ｍＬ）で分配した。層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出した（各１５ｍＬ）。合わせた有機抽出液をブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、所望の生成物５８を白色泡状物として得た（１１７ｍｇ、７９％）。
dH (400 MHz, CDCl3) 1.20-1.29 (1H, m), 1.32-1.46 (2H, m), 1.46-1.56 (1H, m), 1.70 (1H, br s), 1.87-1.94 (2H, m), 1.97 (3H, d, J= 1.1), 2.01-2.08 (1H, m), 2.20-2.27 (1H, m), 3.76 (1H, apparent tt, J= 10.7, 4.3), 4.46 (1H, apparent tt, J= 12.2, 3.4), 7.16 (1H, unresolved q, J= ~1), 7.46-7.52 (2H, m), 7.61-7.67 (1H, m), 7.88-7.94 (2H, m); dC (75 MHz, CDCl3) 12.6, 21.9, 30.6, 34.3, 40.6, 52.7, 69.1, 111.0, 129.2, 130.4, 131.7, 135.0, 136.2, 149.8, 162.6, 169.2; m/z (ES+) 329.3 [M+H]+; HRMS (ES+) exact mass calculated for C18H21N2O4 [M+H]+ 329.1501; found 329.1489.
２−（（３−（３−ベンゾイル−５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロヘキシル）オキシ）−２−（ジメトキシホスホリル）酢酸メチル ５９
３−ベンゾイル−１−（３−ヒドロキシシクロヘキシル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン５８（１１７ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ）およびトリメチルジアゾフォノアセテート１８（８２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のベンゼン（５ｍＬ）中溶液を窒素で１０分間パージし、活性化４Åモレキュラーシーブス（約１／２ｔｓｐ）とともに１時間撹拌した。酢酸ロジウム（２ｍｇ、４．２μｍｏｌ）を加え、混合物を９０℃で予め平衡としておいた浴に１８時間入れた。溶媒を減圧下に除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）によって精製して生成物８５ｍｇを得たが、それは分離できない水挿入生成物を含んでいた（約１５％）。
dH (400 MHz, CDCl3) 1.24-1.52 (3H, m), 1.55-1.70 (1H, m), 1.86-1.96 (2H, m), 1.97 (3H, s), 2.10-2.19 (1H, m), 2.29-2.38 (1H, m), 3.46-3.56 (1H, m), 3.82-3.91 (9H, m), 4.40-4.50 (1H, m), 4.47 (0.5H, d, J= 19.9), 4.49 (0.5H, d, J= 19.8), 7.12-7.15 (1H, m), 7.47-7.54 (2H, m), 7.62-7.68 (1H, m), 7.89-7.94 (2H, m).
水挿入生成物の存在は、特徴的なｄｄ（δＨ４．６１、Ｊ＝１６．０、６．８）によって示された。
２−（（３−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロヘキシル）オキシ）−２−ホスホノ酢酸 ６０
２−（（３−（３−ベンゾイル−５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロヘキシル）オキシ）−２−（ジメトキシホスホリル）酢酸メチル５９（８０ｍｇ、〜８０％純度、約０．１５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）に溶かし、ＴＭＳＢｒ（７９μＬ、９２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物をマイクロ波リアクター（５０Ｗ、５０℃）で２０分間照射し、減圧下に濃縮した。残留物をＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、３ｍＬ）に取り、室温で２２時間撹拌した。濃ＨＣｌを滴下することで混合物を酸性とし、、減圧下に濃縮し、残留物を活性炭クロマトグラフィーによって精製して白色固体（４２ｍｇ、アンモニウム塩として〜７５％）を得て、それは１Ｈ ＮＭＲによって純粋であった。
dH (400 MHz, D2O) 1.06-1.31 (2H, m), 1.33-1.45 (1H, m), 1.45-1.57 (1H, m) 1.73-1.83 (1H, m), 1.77 (3H, s), 1.92-2.06 (1H, m), 2.26-2.20 (1H, m), 3.36-4.37 (1H, m), 4.01, (0.5H, d, J= 18.8), 4.03 (0.5H, d, J= 18.8), 4.18-4.29 (1H, m), 7.50 (1H, two overlapping s); dC (150 MHz, D2O) 11.4, 21.3, 21.4, 29.9, 30.2, 30.9, 36.1, 36.7, 53.2, 78.5, 110.9, 128.3, 128.8, 139.5, 139.6, 152.2, 166.5, 177.0.
上記の実験セクションに記載のプロトコールに従う同じ方法によって、下記の化合物を製造することができる。
２−（２−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロプロポキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（２−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロプロポキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（２−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロプロポキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（２−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロプロポキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（２−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）シクロプロポキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（３−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロブトキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（３−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロブトキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（２−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロブトキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（３−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）シクロブトキシ）−２−ホスホノ酢酸；
２−（３−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）シクロブトキシ）−２−ホスホノ酢酸；
ならびに他の関連する核酸塩基誘導体。
人工的鋳型／プライマーの存在下でのＨＩＶ−１ ＲＴアッセイ
ＲＴ実験用の鋳型／プライマーを調製するため、０．１５ｍＭ ｐｏｌｙ（Ｕ）、ｐｏｌｙ（Ａ）、およびｐｏｌｙ（Ｉ）を、それぞれ等体積の０．０３７５ｍＭ ｏｌｉｇｏ（ｄＡ）、ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）およびｏｌｉｇｏ（ｄＣ）と混合した。ＲＴ反応混合物における鋳型の最終濃度は、０．０１５ｍＭであった。反応混合物（５０μＬ）は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．８）、５ｍＭジチオスレイトール、３００ｍＭグルタチオン、５００μＭ ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、ウシ血清アルブミン１．２５μｇ、適切な濃度の標識（トリチウム化）基質ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰまたはｄＡＴＰ（２μＣｉ／アッセイ）、固定濃度の鋳型／プライマーｐｏｌｙ（Ａ）・ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（０．０１５ｍＭ）、ｐｏｌｙ（Ｉ）・ｏｌｉｇｏ（ｄＣ）（０．０１５ｍＭ）およびｐｏｌｙ（Ｕ）・ｏｌｉｇｏ（ｄＡ）（０．０１５ｍＭ）、０．０６％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、阻害剤溶液（各種濃度の化合物含有）１０μＬ、およびＲＴ調製液１μＬを含むものであった。反応混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、その時点で酵母ＲＮＡ（１ｍｇ／ｍＬ）１００μＬおよびＮａ４Ｐ２Ｏ７（０．０２Ｍ）／トリクロロ酢酸（５体積％）１ｍＬを加えた。溶液を氷上に３０分間維持し、その後に酸不溶物を洗浄し、比放射能について分析した。
試験化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を求める実験においては、固定濃度の１．２５μＭ［３Ｈ］ｄＴＴＰ、１．７５μＭ［３Ｈ］ｄＡＴＰ、または２．５μＭ［３Ｈ］ｄＣＴＰを用いた。
本発明の範囲および精神から逸脱しない限りにおいて、本発明の記載の態様の各種改変および変形形態は、当業者には明らかであろう。以上、具体的な好ましい実施形態との関連で本発明について説明したが、特許請求の本発明がそのような具体的な実施形態に必要以上に限定されるべきではないものと理解すべきである。実際、関連する分野における当業者に自明である記載された本発明の実施形態に対する各種変更は、添付の特許請求の範囲に包含されるものである。
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Claims (26)

  1. 下記式（Ｉ）の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ。
    Figure 2016502524
     ［式中、
    Ｘは、ＯおよびＮＲ９から選択され；
    Ｙは、直接結合、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＮＣＨ３、Ｃ＝ＣＨ２または（ＣＲ８Ｒ８’）ｎであり、ｎは１または２であり；
    Ｚは、直接結合または（ＣＲ２Ｒ２’）ｐであり、ｐは１、２、３または４であり；
    Ｑは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨおよびＣ≡Ｃから選択され；
    ｒは０、１、２または３であり；
    ｓは０、１、２または３であり；
    ｔは０または１であり；
    ｑは０、１、２、３、４または５であり；
    ｐが１、２、３または４である場合、「ａ」は単結合、または二重結合（その場合、Ｒ２およびＲ２’のうちの一方は存在せず、Ｒ３およびＲ３’のうちの一方は存在しない）であり；
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８およびＲ８’はそれぞれ独立に、Ｈ、ＯＲ１０，ハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１１Ｒ１２、Ｎ３、ＳＲ１３、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ２−６−アルキニルおよびアリールから選択され、またはＲ２およびＲ２’のうちの一方がＲ３およびＲ３’のうちの一方とともに、エポキシドを形成しており；
    Ｒ５は、Ｈ、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２およびＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２から選択され；
    Ｒ６は、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
    Ｒ９〜Ｒ１３はそれぞれ独立に、ＨおよびＣ１−６−アルキルから選択され；
    Ｂａｓｅは天然または非天然の核酸塩基である。］
  2. 下記式（Ｉａ）のものである請求項１記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ。
    Figure 2016502524
     ［式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８、Ｒ８’、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９〜Ｒ１３およびＢａｓｅは請求項１で定義の通りである。］
  3. 前記Ｂａｓｅがプリンまたはピリミジン核酸塩基である請求項１または請求項２記載の化合物。
  4. 前記Ｂａｓｅが、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、５−メチルシトシン（ＭｅＣ）、イソシトシン、シュードイソシトシン、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）、５−ブロモウラシル、５−フルオロウラシル、５−プロピニルウラシル、５−プロピニル−６−フルオロウラシル、５−メチルチアゾール−ウラシル、６−アミノプリン、２−アミノプリン、イノシン、２，６−ジアミノプリン、７−プロピニル−７−デアザアデニン、７−プロピニル−７−デアザグアニン、５−チアゾリルウラシル、２−チオチミン、５−プロピニル−シトシン、５−チアゾリルシトシン、フェノキサジン、Ｇ−ｃｌａｍｐ、Ｎ２−アミノプロピルグアニン、２−クロロ−６−アミノプリン、４−チオチミン、５−（２−ハロビニル）ウラシルおよびＮ−４−置換されたシトシンから選択される核酸塩基である前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物。
  5. ＸがＯであり、Ｒ６がＨまたはＣ１−６−アルキル、より好ましくはＨまたはＭｅである前記請求項１に記載の化合物。
  6. Ｒ５がＨである前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物。
  7. Ｒ８およびＲ８’がいずれもＨである前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物。
  8. Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ８およびＲ８’がいずれもＨである前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物。
  9. 下記式（Ｉｄ）のものである前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ。
    Figure 2016502524
  10. 下記式（Ｉｅ）のものである請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ。
    Figure 2016502524
  11. 式（Ｉｄ）の化合物および式（Ｉｅ）の化合物のラセミ混合物である前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物。
  12. 下記のものから選択される前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩およびプロドラッグ。
    Figure 2016502524
  13. 下記のものから選択される前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩およびプロドラッグ。
    Figure 2016502524
     ［式中、Ｂａｓｅは、チミン、ウラシル、シトシン、アデニンおよびグアニンから選択される。］
  14. 前記プロドラッグが、ホスホルアミデート誘導体、ＳＡＴＥ（Ｓ−アシル−２−チオエチル）エステル誘導体、ピバロイルオキシメチル（ＰＯＭ）誘導体、イソプロピルオキシメチルカルボニル（ＰＯＣ）誘導体、シクロサル誘導体およびアルキルオキシアルキル誘導体から選択される前記請求項のうちのいずれか１項に記載の化合物。
  15. 医薬として許容される希釈剤、賦形剤または担体と混合された、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグを含む医薬組成物。
  16. 医薬品で使用するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ。
  17. ウィルス疾患治療で使用するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグ。
  18. 前記ウィルス疾患がＲＮＡウィルスまたはＤＮＡウィルスによるものである請求項１７記載の使用のための化合物。
  19. 前記ウィルスが、ヒトサイトメガロウィルス（ＨＣＭＶ）、単純ヘルペスウィルス１型（ＨＳＶ−１）および２型（ＨＳＶ−２）、ヒト免疫不全ウィルス１型（ＨＩＶ−１）および２型（ＨＩＶ−２）、ＨＴＬＶ−ＩまたはＩＩ、水痘帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）、インフルエンザウィルス（ＩＮＦ）および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）などの呼吸器系ウィルス、フラビウィルス（すなわち、デングウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス）、Ｂ型肝炎ウィルスおよびコロナウィルスから選択される請求項１７記載の使用のための化合物。
  20. ウィルス疾患を治療するための医薬品製造における請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグの使用。
  21. 前記化合物を１以上の他の抗ウィルス化合物と組み合わせて投与する請求項２０記載の使用。
  22. 治療上有効量の請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグを、哺乳動物に投与することを含む、ウィルス疾患の治療方法。
  23. ＨＩＶ−ＲＴを阻害する能力を有するさらなる候補化合物を確認するためのアッセイにおける、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグの使用。
  24. 前記アッセイが競争的結合アッセイである請求項２３記載の使用。
  25. 請求項１〜１４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物または該化合物の医薬として許容される塩もしくはプロドラッグと、さらなる活性薬剤とを含む組み合わせ。
  26. 下記式（Ｉｆ）または（Ｉｇ）の化合物［式中、Ｒ６はＨまたはＣ１−６−アルキルであり、Ｂａｓｅは天然もしくは非天然の核酸塩基である。］の製造方法であって、
    Figure 2016502524
     （ｉ）酢酸ロジウム（II）またはトリフ酸銅（II）触媒の存在下、式１６の化合物を式（IX）の化合物と反応させて、式（Ｘ）の化合物を形成する工程；
    （ii）好適な溶媒中においてパラジウム（０）触媒の存在下、前記式（Ｘ）の化合物をＢａｓｅと反応させて、式（ＸＩ）の化合物を形成する工程；
    （iv）パラジウムを担持した活性炭の存在下、前記式（XI）の化合物を水素化して、式（XII）の化合物を形成する工程；
    （ｖ）ＭｅＣＮ中、前記式（XII）の化合物をＴＭＳＢｒで処理して、式（Ｉｆ）の化合物を形成する工程；および
    （vi）適宜に前記式（Ｉｆ）の化合物を加水分解して、式（Ｉｇ）の化合物を形成する工程を含む方法。
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