JP2016220595A - 放射線照射食品の識別方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】食品中からDNAを抽出し、DNA合成反応に適用可能な鋳型DNA量を定量して、放射線によるDNAの損傷程度から放射線照射の有無を判定する。この際に、定量ポリメラーゼ連鎖反応法によるDNA合成反応を用いて、特定のDNA断片を選択的に増幅させることができる。更に、複数種類のプライマーセットを用いて複数の増幅開始位置を指定することができる。
【選択図】図5
Description
放射線を照射すると、物質内に電子とホールが生成される。初期状態では、これらが周囲の物質と反応し、ラジカル化容易な物質に次々と変換されて、より安定なラジカルが蓄積する。ESR法を用いると、これら放射線由来のラジカルによるESR信号が放射線量に比例して現れる。ESR法では、この信号を放射線照射食品検知に利用している(非特許文献1、特許文献1参照)。
珪酸塩などの電気の伝導性の悪い物質に放射線を照射すると、その物質がイオン化しても、自由に電子が移動できないために、電子と電子孔(Electron Hole)が対になって生成され、それが物質内に捕捉される。これを加熱して、この電子が自由に動けるだけの運動エネルギーを与えると、電子はその捕捉された場所から移動して電子孔に捕捉され、光を放出する。そこで、このTL法では、この光を温度上昇の関数として観測し、照射の有無を評価している。実際には食品サンプルに付着している結晶性の鉱物分を溶媒で抽出し、測定サンプルとして使用する(非特許文献2、特許文献2参照)。
赤外線の照射による励起で食品から発生する可視光領域の光(発光)と食品への放射線照射の履歴との間に関係があることを利用して、放射線照射の有無を判別する(非特許文献3参照)。このPSL法では、食品そのものを用いることができるため、TL法のような前処理は不要である。
Primer-forward:GACCTCCCAGCTCCATCAAACATCTCA
Primer-reverse:CTAGAAAAGTGTAAGACCCGTAATATAAG
DNA量の定量(ステップ210)
DNAのモデルとして哺乳動物(ここでは牛)のミトコンドリアのDNA、CARD15を用いた。分光光度計により0.1ng/mlの濃度に希釈し、この溶液1μlをサンプルとした。
次の条件でPCR反応を行った。反応溶液10μlを1%アガロースゲル電気泳動により分画し、核酸染色溶液である臭化エチジウムにより蛍光染色を行った後、バンドを検出した。
臭化エチジウムによる蛍光染色によって得られたCARD15遺伝子の画像を図13に示す。図13から明らかなように、吸収線量が少ないとPCR反応のサイクル数が増えるに従ってバンドの画像が明るくなるのに対して、吸収線量が増えるとPCR反応のサイクル数が多くなってもバンドの画像があまり明るくならず、照射した線量の増加に伴い、PCR増幅が阻害されていることが分かる。これはγ線の照射により鋳型となるDNA鎖に損傷が起こり、PCR反応が阻害された結果である。放射線照射によるDNA鎖切断量は吸収線量に比例し、切断量を反映すると考えられる。この結果は、DNA鎖切断を指標とした照射食品の識別は可能であることを示している。
12…プライマー
14…DNA合成酵素(DNAポリメラーゼ)
16…精製水
Claims (4)
- 食品中からDNAを抽出し、DNA合成反応に適用可能な鋳型DNA量を定量して、放射線によるDNAの損傷程度から放射線照射の有無を判定することを特徴とする放射線照射食品の識別方法。
- 前記鋳型DNAを定量する際に、定量ポリメラーゼ連鎖反応法によるDNA合成反応を用いて、特定のDNA断片を選択的に増幅させることを特徴とする請求項1に記載の放射線照射食品の識別方法。
- 前記定量ポリメラーゼ連鎖反応法でDNA断片を増幅する際に、増幅開始位置を指定するプライマーの配列が、哺乳動物が保存しているリボソームやミトコンドリアのDNA配列であることを特徴とする請求項2に記載の放射線照射食品の識別方法。
- 前記定量ポリメラーゼ連鎖反応法でDNA断片を増幅する際に、複数種類のプライマーセットを用いて複数の増幅開始位置を指定することを特徴とする請求項2又は3に記載の放射線照射食品の識別方法。
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Title |
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