JP2016204397A - アルツハイマー病予防薬 - Google Patents
アルツハイマー病予防薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016204397A JP2016204397A JP2016179734A JP2016179734A JP2016204397A JP 2016204397 A JP2016204397 A JP 2016204397A JP 2016179734 A JP2016179734 A JP 2016179734A JP 2016179734 A JP2016179734 A JP 2016179734A JP 2016204397 A JP2016204397 A JP 2016204397A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- extract
- secretase
- disease
- food
- alzheimer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 35
- 230000002554 disease preventive effect Effects 0.000 title 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 65
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 19
- 241000207199 Citrus Species 0.000 claims 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 34
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 abstract description 29
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 16
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 244000025221 Humulus lupulus Species 0.000 abstract description 4
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 abstract 3
- 241000393483 Dryopteris crassirhizoma Species 0.000 abstract 2
- 241000545403 Tripterygium regelii Species 0.000 abstract 2
- 241001148501 Adiantum pedatum Species 0.000 abstract 1
- 241000068415 Cynanchum bungei Species 0.000 abstract 1
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 abstract 1
- 241000246044 Sophora flavescens Species 0.000 abstract 1
- 241001369613 Stephania tetrandra Species 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 15
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 8
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 7
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 7
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 7
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 7
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 Eisai) Chemical compound 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 6
- 239000003540 gamma secretase inhibitor Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- DWJXYEABWRJFSP-XOBRGWDASA-N DAPT Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)C(=O)CC1=CC(F)=CC(F)=C1 DWJXYEABWRJFSP-XOBRGWDASA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 229940125373 Gamma-Secretase Inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000011977 dual antiplatelet therapy Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 208000025688 early-onset autosomal dominant Alzheimer disease Diseases 0.000 description 3
- 208000015756 familial Alzheimer disease Diseases 0.000 description 3
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000012676 herbal extract Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 102100039556 Galectin-4 Human genes 0.000 description 2
- 101000608765 Homo sapiens Galectin-4 Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 244000115721 Pennisetum typhoides Species 0.000 description 2
- 235000007195 Pennisetum typhoides Nutrition 0.000 description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 235000008515 Setaria glauca Nutrition 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- XWAIAVWHZJNZQQ-UHFFFAOYSA-N donepezil hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].O=C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC1CC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 XWAIAVWHZJNZQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- LDDHMLJTFXJGPI-UHFFFAOYSA-N memantine hydrochloride Chemical compound Cl.C1C(C2)CC3(C)CC1(C)CC2(N)C3 LDDHMLJTFXJGPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 101001033280 Homo sapiens Cytokine receptor common subunit beta Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010070047 Notch Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005650 Notch Receptors Human genes 0.000 description 1
- XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N Rivastigmine Chemical compound CCN(C)C(=O)OC1=CC=CC([C@H](C)N(C)C)=C1 XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229940039856 aricept Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 238000003287 bathing Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002439 beta secretase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N donepezil Natural products O=C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC1CC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003135 donepezil hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 229960002024 galantamine hydrobromide Drugs 0.000 description 1
- QORVDGQLPPAFRS-XPSHAMGMSA-N galantamine hydrobromide Chemical compound Br.O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CC[C@]23[C@@H]1C[C@@H](O)C=C2 QORVDGQLPPAFRS-XPSHAMGMSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000055647 human CSF2RB Human genes 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229960000967 memantine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229940041672 oral gel Drugs 0.000 description 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 229960004136 rivastigmine Drugs 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 230000037426 transcriptional repression Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Description
カンジュウは植物名オシダ(ゼンマイ)であり、特にその根茎をエキスの原料として用いる。オシダのエキス、特にオシダの根茎エキスは、市販されているものであってもよい(例えば製造元:栄進商事、品番:A50)。
ライコウトウは植物名クロヅルであり、特にその根、葉および花をエキスの原料として用いる。ライコウトウのエキス、特にライコウトウの根、葉または花エキスは、市販されているものであってもよい(例えば製造元:栄進商事、品番:H34)。
フンボウイは植物名シマハスノハカズラであり、特にその蔓性の根茎および茎をエキスの原料として用いる。フンボウイのエキス、特にフンボウイの根茎または茎エキスは、市販されているものであってもよい(例えば製造元:栄進商事、品番:A27)。
クレンピは植物名センダンであり、特にその樹皮および根皮をエキスの原料として用いる。クレンピのエキス、特にクレンピの樹皮または根皮エキスは、市販されているものであってもよい(例えば製造元:栄進商事、品番:C15)。
カダンリュウは植物名オキナワクジャクシダであり、特にその全草または根茎をエキスの原料として用いる。カダンリュウのエキス、特にカダンリュウの全草または根茎エキスは、市販されているものであってもよい(例えば製造元:栄進商事、品番:H22)。
ハクシュウは植物名ダイコンゴヒショウであり、特にその根をエキスの原料として用いる。ハクシュウのエキス、特にハクシュウの根エキスは、市販されているものであってもよい(例えば製造元:栄進商事、品番:A3)。
本発明において、「飲料」は、動物、特にヒトが飲用するものであれば特にその範囲が限定されず、例えば水、茶、栄養補助飲料、アルコール飲料等を含む。
本発明において、「食品/飲料添加剤」は、それのみを喫食することを意図しないが、食品または飲料と共に喫食されるものを意味し、例えば調味料等を含む。
本発明の「食品」、「飲料」および「食品/飲料添加剤」は、食品工学の分野において通常用いられる成分を含んでいてよく、またその分野における当業者が通常実施するとおりに製造することができる。
本発明において、「アルツハイマー病の予防」は、アルツハイマー病またはアルツハイマー型認知症の発症の予防を意味する。
本発明において、「治療上有効量」は、アルツハイマー病の処置および/または予防に有効な量を意味し、具体的な量は、様々な要因、例えば、用いる具体的なエキス、患者の性別、体重、年齢、さらに、患者の一般的な健康状態、疾患の程度、剤形、投与経路、投与回数などの種々の条件に応じて適宜設定することができる。例えば、γセクレターゼ阻害剤の1日の投与量は、体重1kg当たり10〜640mg(エキス質量)となるように設定することが好ましく、20〜480mg(エキス質量)となるように設定することがより好ましく、40〜320mg(エキス質量)となるように設定することがさらに好ましい。なお、投与は1日数回に分けてすることができ、1回の投与で使用される薬剤中に含まれる組成物の含有量は、投与回数にあわせて適宜調整することができる。
Aβの前駆体であるAPPのC−末部位に酵母の転写因子であるGAL4のDNA結合領域と単純ヘルペスウイルスの転写活性化領域を融合したGAL4−VP16(G4V16)を付加した蛋白質(APP−G4V16)を発現させるベクターを構築した。このGAL4−VP16は、転写研究領域で汎用されている強力な転写因子で、その活性は、プロモーター領域にGAL4認識配列(UAS)を4個挿入したルシフェラーゼのレポーター(TK 4x(UAS)LUC)で測定することができる。このAPP−G4V16とTK 4x(UAS)LUCを培養細胞にトランスフェクションし、24時間後に細胞を回収し、その抽出液のルシフェラーゼ活性を測定した。このルシフェラーゼ活性は、既存のγセクレターゼの阻害剤であるDAPTを添加することで減少したので、γセクレターゼによって膜に存在するAPP−G4V16が切断された結果、G4V16が核に移行してレポーターの転写を活性化していることが確認できた。従って、このアッセイ(以下レポーターアッセイ)を用いることで、γセクレターゼに対する阻害活性をルシフェラーゼの活性を指標に評価することが可能となった。レポーターアッセイの概略を図1に示す。
上記レポーターアッセイを用いて、現在ヒトに対して使用されている漢方薬の原材料となっている約1600種類の植物エキスに対して、それらのエキスがγセクレターゼの阻害活性を含んでいるかどうかを検証した。このアッセイでは、非特異的な転写抑制作用が擬陽性になるため、サイトメガロウイルス(CMV)のプロモーターでβガラクトシダーゼ(βgal)を発現させるプラスミッド(pCMV−βgal)を同時にトランスフェクションし、βgal 活性に変化を与えずルシフェラーゼ活性を低下させるものをポジティブと判定した。このスクリーニングによって、ヒシュカと他に幾つかの漢方薬エキスがルシフェラーゼ活性の特異的な低下を示した。結果を図2に示す。有意差検定は、student’s t−testで行った。
スクリーニングした漢方薬エキスが実際にγセクレターゼの阻害活性があることを下記ELISA法によって確認した。
方法:家族性アルツハイマー病で同定されたLondon変異(V717F)をもつ変異APPを発現させるベクターとβgalを発現させるベクターをHEK293A細胞にトランスフェクションし、24時間後に、エキスを培地に投与した。さらに24時間後、βgalの活性の定量とAβ40およびAβ42の産生量の定量を、WAKO humanβ amiloid ELISAキットを用いて行った。トランスフェクション効率を補正するため、Aβ40およびAβ42の産生量は、βgalの活性で補正した。γセクレターゼ阻害のポジティブコントロールには、既知のβセクレターゼ阻害剤であるDAPTを用いた。また、βgalを発現させるベクターのみをトランスフェクションし変異APPを発現させていない時(mock)のAβ40およびAβ42の産生量も測定し、βgalの活性で補正した。結果を図3および4に示す。有意差検定は、student’s t−testで行った。
ヒシュカエキスをBligh Dyer法により水溶性、脂溶性の2層に分離した後、レポーターアッセイによりエキス中のγセクレターゼ阻害活性が脂溶性分画に移行していることを確認した。続いて、この脂溶性分画をSilica Cartridgesを使用した固相抽出により3分画に分離した。用いた溶媒は(1)ヘキサン:クロロホルム=50:50、(2)クロロホルム:メタノール=99:1、(3)100%メタノールで、レポーターアッセイによりγセクレターゼ阻害活性が、(2)クロロホルム:メタノール=99:1分画に移行していることを確認した。
次に、(2)の分画を5CN−MS順相カラムにより、ヘキサン:クロロホルム=50:50の溶媒からスタートし、毎分1%ずつメタノール濃度を上昇させるプロトコールでHPLCを実施した。結果、5分〜7分の分画に活性成分が溶出していることを確認した。さらに、この順相HPLCで得た分画を5C18−AR−IIカラム、及びπ−NAPカラムにより逆相HPLCを行うことでさらに分離した。アセトニトリル:水=80:20からスタートし、毎分アセトニトリル濃度を1%ずつ上昇させるプロトコールで行い、これら2種類のカラムで合計3回(5C18−AR−IIカラムで1回とπ−NAPカラムで2回)の逆相HPLCを行うことで、活性成分をシングルピークになるまで精製することに成功した。
一連の実験を8mgのエキスからスタートすることで、約20μgの精製物を得ることができた。このサイクルを約100回繰り返し、最終的に2mgの極めて純度の高い化合物を得た。質量分析によりこの化合物の分子量は416であり、下記核磁気共鳴(NMR)により、構造を式:
1H NMRはJEOL社JNM-LA 500 (500 MHz)により重クロロホルムを溶媒に用いて測定した。残存CHCl3 (δ = 7.27 ppm)を内部標準物質として化学シフトを報告した。
13C NMRはJEOL社JNM-LA 500 (125 MHz)により重クロロホルムを溶媒に用いて測定した。重クロロホルム(δ = 77.0 ppm)を内部標準物質として化学シフトを報告した。
各種二次元NMR (COSY, HMQC, HMBC, NOESY)は重クロロホルムを溶媒にしてJNM-LA 500 (500 MHz)により測定した。
NMR測定値
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.81-4.76 (m, 3H), 3.64 (m, 1H), 2.93 (dd, J = 14.4, 10.9 Hz, 1H), 2.82 (dd, J = 14.4, 8.0 Hz, 1H), 2.70-2.59 (m, 4H), 1.57 (s, 6H), 1.52 (s, 6H), 1.30 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.23 (d, J = 6.3Hz, 3H), 1.21 (d, J = 6.9Hz, 3H); 13C NMR (125MHz, CDCl3) δ 204.8, 202.3, 199.3, 158.1, 135.2, 135.0, 118.1, 117.7, 108.9, 102.3, 92.5, 72.0, 61.8, 39.2, 37.4, 34.9, 26.5, 25.8, 25.7, 25.1, 24.3, 20.1, 18.8, 17.9, 17.7; HRMS (FAB) C25H37O5 [(M+H)+]の計算値 417.2641、実測値417.2632.
神経特異的エノラーゼ(neuron−specific enolase:NSE)遺伝子のプロモーターの支配下に家族性アルツハイマー病で同定されたLondon変異(V717F)をもつ変異APPを発現させるトランスジーンをマウスの受精卵にインジェクションをおこない、トランスジェニックマウスを得た。
それぞれ2ヶ月齢および6ヶ月齢のトランスジェニック(TG)マウスおよび野生型(WT)マウスを用いて、モリスの水迷路試験を行った。試験1日目〜5日目まで1日3回ずつ、白濁させたプールでマウスを泳がせ、プラットホームへたどり着くまでの時間を測定した。このモリスの水迷路試験の結果は平均値と標準誤差(SEM)で示した(図5)。たどりつくまでの時間の測定は、60秒を最大として、それ以上の測定は行っていない。それぞれのマウスには、6週齢より水またはヒシュカエキス0.2%を含む水を自由に飲ませた。群間で飲水量に有意差はなく、一日あたり約5mlであった。また、群間で体重の変化にも有意な差はなかった。WTマウスでは、2ヶ月齢および6ヶ月齢のいずれであっても、ヒシュカエキスの摂取の有無に拘わらず、プラットホームにたどりつくまでに要した時間は5日間の間で短縮され、また2ヶ月齢のTGマウスでも短縮されたが、6ヶ月齢のTGマウスでは、ヒシュカエキスを摂取しなかった群では、プラットホームにたどりつくまでに要した時間は5日間の間で短縮されず、ヒシュカエキスを摂取した群では、時間が短縮され、5日目にstudent’s t−testで差が見られた(P<0.1)。
上記と同様、6週齢より水またはヒシュカエキス0.2%を含む水を自由に飲ませたトランスジェニック(TG)マウスに対して、9ヶ月齢で、初めてモリスの水迷路試験を行った。上記と同様、試験1日目〜5日目まで1日3回ずつ、白濁させたプールでマウスを泳がせ、プラットホームへたどり着くまでの時間を測定した。このモリスの水迷路試験の結果は平均値と標準誤差(SEM)で示した(図6)。この試験では、マウスは初めてモリスの水迷路試験を経験するため、過去の経験・記憶の影響を一切受けない状態での現在の記憶・学習能力を反映している。また、この実験では、水槽の回りの模様に異なる色を付け、マウスが水槽内での自分の位置をより確認し易くした。9ヶ月齢のTGマウスでは、ヒシュカエキスを摂取しなかった群では、プラットホームにたどりつくまでに要した時間は5日間の全てで60秒以上を要し、全く短縮されなかった。一方、ヒシュカエキスを摂取した群では、日を追うごとに時間が短縮され、3〜5日にわたりstudent’s t−testで有意な差が見られた(P<0.05及びP<0.01)。
Claims (3)
- カンジュウ、ライトコウ、フンボウイ、クジン、クレンピ、カダンリュウおよびハクシュウからなる群より選択される1種または2種以上の植物のエキスを含むγ−セクレターゼ阻害組成物。
- カンジュウおよびライトコウからなる群より選択される1種または2種の植物のエキスを含むγ−セクレターゼ阻害組成物。
- アルツハイマー病の発症抑制のための、請求項1または2記載の組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016179734A JP2016204397A (ja) | 2016-09-14 | 2016-09-14 | アルツハイマー病予防薬 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016179734A JP2016204397A (ja) | 2016-09-14 | 2016-09-14 | アルツハイマー病予防薬 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014129478A Division JP6009498B2 (ja) | 2014-06-24 | 2014-06-24 | アルツハイマー病予防薬 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016204397A true JP2016204397A (ja) | 2016-12-08 |
Family
ID=57488989
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016179734A Pending JP2016204397A (ja) | 2016-09-14 | 2016-09-14 | アルツハイマー病予防薬 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2016204397A (ja) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07304681A (ja) * | 1994-05-06 | 1995-11-21 | Especial Farmaceut Centrum Sa | 認識機能不全及び/又は神経免疫機能不全の治療における働きを有する薬学的組成物 |
WO2009019815A1 (ja) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | 新規γセクレターゼ阻害剤 |
WO2011042497A1 (en) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Senexis Limited | Pyrrolo [3,2 -e] [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyrimidines derivatives as inhibitors of microglia activation |
-
2016
- 2016-09-14 JP JP2016179734A patent/JP2016204397A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07304681A (ja) * | 1994-05-06 | 1995-11-21 | Especial Farmaceut Centrum Sa | 認識機能不全及び/又は神経免疫機能不全の治療における働きを有する薬学的組成物 |
WO2009019815A1 (ja) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | 新規γセクレターゼ阻害剤 |
WO2011042497A1 (en) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Senexis Limited | Pyrrolo [3,2 -e] [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyrimidines derivatives as inhibitors of microglia activation |
JP2013507340A (ja) * | 2009-10-09 | 2013-03-04 | ビーティージー・インターナショナル・リミテッド | ミクログリア活性化の阻害剤としてのピロロ[3,2−e][1,2,4]トリアゾロ[1,5−a]ピリミジン誘導体 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
GLIA, vol. 57(11), JPN6017016260, 15 August 2009 (2009-08-15), pages 1227-1238 * |
SHENGLI XUEBAO, vol. 56(1), JPN6017016261, 2004, pages 73-78 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP3560506A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising indigo pulverata levis extract or fraction thereof as effective ingredient for preventing or treating inflammatory bowel disease | |
KR102182724B1 (ko) | 풀무치 추출물을 함유하는 항염증용 조성물 | |
KR101026528B1 (ko) | 해조류 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방또는 치료용 조성물 | |
KR20170003395A (ko) | 고수 추출물을 유효성분으로 하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
WO2021155633A1 (zh) | 烷基间苯二酚类化合物在制备预防或治疗阿兹海默症的药物的应用 | |
JPH11246398A (ja) | 生体内過酸化脂質増加に起因する疾患の予防または治療剤 | |
JP6009498B2 (ja) | アルツハイマー病予防薬 | |
JP2013053076A (ja) | アルツハイマー病予防薬 | |
US10406187B2 (en) | Method for treating neuroinflammation with a pharmaceutical composition containing Portulaca grandiflora hook. extract or fraction thereof as active ingredient | |
KR20120025826A (ko) | 곰취 추출물을 포함하는 뇌신경세포 보호용 조성물 | |
KR101029699B1 (ko) | 생약추출물을 유효성분으로 함유하는 알쯔하이머 치매 치료 및 예방용 조성물 | |
KR101188581B1 (ko) | 향부자 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 패혈증 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR20200046772A (ko) | 풀무치 추출물을 함유하는 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
JP2016204397A (ja) | アルツハイマー病予防薬 | |
KR101046126B1 (ko) | 석류 추출물을 포함하는 신경계 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR20100002836A (ko) | 뇌 신경 세포 보호물질을 포함하는 질경이 추출물을포함하는 조성물 | |
KR101554343B1 (ko) | 퇴행성 뇌신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
KR100965305B1 (ko) | Hsp 27의 과발현에 의해 매개되는 질병의 예방 또는치료용 조성물 | |
KR20160081189A (ko) | 대황 추출물을 포함하는 알츠하이머성 치매 질환 예방 및 치료용 조성물 | |
US9968576B2 (en) | Composition for preventing or treating neurodegenerative diseases, containing Ramalin | |
KR20120060678A (ko) | 오미자 씨앗 추출물을 함유하는 알츠하이머씨병 예방 및 치료용 조성물 | |
KR100965304B1 (ko) | Hsp 27의 과발현에 의해 매개되는 질병의 예방 또는치료용 조성물 | |
KR102429980B1 (ko) | 풀무치 추출물을 함유하는 신경염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR101722367B1 (ko) | 대황 추출물을 포함하는 알츠하이머성 치매 질환 예방 및 치료용 조성물 | |
KR101637240B1 (ko) | 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160914 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20161028 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20161028 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170509 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20171219 |