JP2016153376A

JP2016153376A - シリマリン含有組成物

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Publication number: JP2016153376A
Application number: JP2015031454A
Authority: JP
Inventors: 達雄中村; Tatsuo Nakamura
Original assignee: Fancl Corp
Current assignee: Fancl Corp
Priority date: 2015-02-20
Filing date: 2015-02-20
Publication date: 2016-08-25

Abstract

【課題】シリマリン含有水分散性組成物であって、シリマリンの生体吸収性の高い組成物を提供することを課題とする。
【解決手段】シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上とヒドロキシプロピルメチルセルロースと、ダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）を含有する水分散性組成物。
【選択図】図３

Description

本発明は、体内吸収性の良いシリマリン含有組成物に関する。

近年、フラボノイドやカテキン、植物性色素のようなポリフェノール化合物の機能性に着目して、これらを含有する組成物が多く開発されている。
シリマリンは、このようなポリフェノール化合物をふくむ天然成分のひとつであり、マリアアザミ（学名：Ｓｉｌｙｂｕｍｍａｒｉａｎｕｍ）と呼ばれる植物の種子から抽出されたエキスである。シリマリンは、その構成成分としてフラボノリグナンに分類されるシリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンを含むことが知られている。

シリマリンは肝臓機能強化や老化防止に有用であり、さらには紅斑、火傷、皮膚又は粘膜のジストロフィー状態、皮膚炎等の治療における治癒を促進し、外部環境からの刺激（放射線、風、太陽等）から皮膚を保護するのに有用であることが知られている（特許文献１）。また、シリマリンの皮脂分泌抑制効果（特許文献２）、表皮透過バリア強化効果（特許文献３）、乾癬及びアトピー性皮膚炎の治療効果（特許文献４）、表皮の扁平化改善効果（特許文献５）が知られている。

一方、シリマリンは、水にはほとんど溶解しないため、水系の組成物には配合し難いという課題点を有しており、これに対しシリマリンを分散させた飲料の技術が開示されている（例えば、特許文献６）。また、シリマリンをリン脂質錯体とすることにより生体適性を有利にする技術が開示されている（例えば、特許文献１）。この脂質錯体はシリマリンフィトソーム（商品名）の名称で化粧品用途として一般に流通している。しかし、このシリマリンフィトソームは食品など経口投与では使用できない原料を用いており、食品用途や経口投与を目的とする医薬用途には不適である。
また、シリマリンのアルコール溶液と、糖アルコール水溶液を混合し、これを凍結乾燥又は噴霧乾燥して溶解性を向上させる技術が開示されている（特許文献７）。またシリマリンを、平均分子量が５００〜５０００のコラーゲンペプチドと乳化剤を含む安定なシリマリン分散溶液とする技術が開示されている（特許文献８）。
しかし、これらの技術を用いてもシリマリンの生体内利用率を必ずしも高めているとは言い難い場合がある。特に分散溶液の場合、経時的にシリマリンに分散物が凝集し、沈殿する現象が発生する。またシリマリンの凝集沈殿やシリマリンの析出を抑制できたとしても、処方設計上の制約がある。シリマリンの生体利用率を高めるため、あるいは、シリマリンの析出を防ぐための新たなシリマリンの分散化又は可溶化技術が必要である。
本発明者らは、これらの課題を解決した新規組成物としてシリマリンと、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、エリスリトール又はトレハロースを含む水分散性組成物を提案している（特願２０１４−１７８６２１号及び非特許文献1参照）。この組成物は、高圧晶析装置を用いてヒドロキシプロピルメチルセルロースをシリマリンと共存状態で微小な非晶質体とし、さらに、エリスルトール又はトレハロースとシリマリンの粉末を混合し、凍結乾燥して調製している。このようにして調製されたシリマリンを含む組成物は、速やかに水に分散し、凝集沈殿しないという性質を有している。さらに、経口投与したとき、組成物中のシリマリンは、生体内へ速やかに、且つ効率的に吸収されることを本発明者らは、動物試験により確認している（非特許文献１参照）。

特開平１−１００１３２号公報特開２０００−１６９３３２号公報特開２０００−１６９３２８号公報特開平５−２８６８６４号公報特開２００４−９１３９７号公報特開２００２−３４５０５号公報特表２００５−５１９８６３号公報特開２０１１−１３６９１５号公報

粉体工学会刊行、粉体工学会2014年度春期研究発表会講演要旨集、６８〜６９ページ、２０１４年５月２９日発行

本発明者らは、前記のヒドロキシプロピルメチルセルロースと、エリスルトール又はトレハロースとシリマリンの組み合わせからなる組成物についてさらに研究を進めた結果、エリスリトール又はトレハロースに代えて、公知の２糖類であるダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）を配合することで、よりシリマリンの吸収性に優れた組成物を得ることができることを見いだした。
そこで、本発明は、シリマリンを含有する組成物であって分散性に優れたシリマリン含有水分散性組成物であって、シリマリンの生体吸収性の高い組成物を提供することを課題とする。

本発明の主な構成は、次のとおりである。
１．シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、ダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）を含有する水分散性組成物。
２．シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンがマリアアザミ由来であることを特徴とする１に記載の組成物。
３．組成物中のシリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上とヒドロキシプロピルメチルセルロースとの混合物の非晶性物と、ダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）の含有比率が１：０．７〜１：０．５〜１である１又は２に記載の組成物。
４．１〜３のいずれかに記載の組成物を分散させた水溶液。
５．１〜３のいずれかに記載の組成物を配合した飲食品または健康食品。
６．１〜３のいずれかに記載の組成物を配合した経口用医薬品。

本発明によれば、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上のシリマリン類を含む、シリマリン類の吸収性に優れた組成物が提供される。さらにこの組成物を経口投与した場合、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンなどの成分の吸収性が向上し、血中濃度の持続性が高い。
また本発明の組成物を配合した飲食品や医薬品は、吸収性が高いため、従来のシリマリンと同様の薬理効果や作用を発揮させる場合、その配合量を減らすことができ、経済的にも有用である。

高圧晶析装置の構造と機能を示した模式図である。実施例１の製造工程のフロー図である。本発明の組成物、シリマリン原末、シリマリンフィトソームを経口投与した動物の血中シリビンの濃度変化を示したグラフである。本発明の組成物、シリマリン原末、シリマリンフィトソームの腸管由来細胞Ｃａｃｏ２培養膜の透過性を測定した結果を示すグラフである。

本発明は、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースの非晶性物と、ダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）を含む、シリマリン類の高吸収性組成物に関する発明である。
シリマリン（Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ；ＣＡＳＮｏ．６５６６６−０７−１）は、キク科マリアアザミ（学名シリバム・マリアナムＳｉｌｙｂｕｍｍａｒｉａｎｕｍ、別名オオアザミ、オオヒレアザミ、ミルクアザミ；ＣＡＳＮｏ．８４６０４−２０−６）から抽出されるフラボノリグナンの総称であり、分子式Ｃ₂₅Ｈ₂₂Ｏ₁₀で表される、シリビン（Ｓｉｌｙｂｉｎ；ＣＡＳＮｏ．２２８８８−７０−６）、シリジアニン（Ｓｉｌｙｄｉａｎｉｎ；ＣＡＳＮｏ．２９７８２−６８−１）、シリクリスチン（Ｓｉｌｙｃｈｒｉｓｔｉｎ；ＣＡＳＮｏ．３３８８９−６９−９）、イソシリビン（Ｉｓｏｓｉｌｙｂｉｎ；ＣＡＳＮｏ．７２５８１−７１−６）などを含有している組成物である（天然薬物事典、奥田拓男編、廣川書店、昭和６１年３月３日発行参照）。

本発明においては、シリマリンを含む植物体から抽出した抽出物に含有されるこれらのフラボノリグナンを含有している組成物を従来技術と同様、シリマリンと呼ぶ。例えば、シリマリンを含む植物体から抽出した抽出物としては、マリアアザミ抽出物がある。シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンなどの成分を、本発明においてはシリマリン類と総称する。
またシリマリンは前記の通りフラボノリグナンの混合物であり、シリマリンとしての植物抽出物や植物中の含有量は、分光光度計による測定に基づいた方法（Ｗａｇｎｅｒ，Ｈ．，ｅｔａｌ．，Ａｒｚｎｅｉｎ．Ｆｏｒｓｃｈ，１８，６９６，１９６８．）、薄層クロマトグラフィーによる方法（Ｗａｇｎｅｒ，Ｈ．，ｅｔａｌ．，Ａｒｚｎｅｉｎ．Ｆｏｒｓｃｈ，２４，４６６，１９７４．）、高速液体クロマトグラフィーによる方法（Ｔｉｔｔｅｌ，Ｇ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，１３５，４９９，１９７７．、Ｔｉｔｔｅｌ，Ｇ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，１５３，２２７，１９７８．、Ｑｕｅｒｃｉａ，Ｖ．，ｅｔａｌ．，ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｍｅｎｔａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，ＦｒｉｇｅｒｉｏＡ．（Ｅｄ）．，ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８３，ｐ１．）により測定可能である。これらの測定法の中でも、分光光度計による測定に基づいた方法の一つである２,４−ジニトロヒドラジン分析は、ドイツ薬局方（Ｓｉｌｙｂｕｍｍａｒｉａｎｕｍの果実に関するモノグラフ）に報告されており、広く用いられている。

シリマリンをマリアアザミの果実から高純度で単離する方法として、７０〜８０％の純度で単離する方法や９０〜９６％の純度で単離する方法（特公昭６３−４１３９６号公報）が既に報告されている。シリマリンは通常マリアアザミの種実からエタノール、酢酸エチル、アセトンなどにより抽出し、スプレードライにより乾燥粉末として得られる抽出物原料として市販されている。本発明に使用するシリマリンはこのようにして調製されて、市販されているシリマリンをそのまま用いることができる。また、マリアアザミからシリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンなどのシリマリンの構成成分を濃縮した抽出物及びそれらを単離、精製して化合物として用いることができる。
本発明におけるシリマリンを含む植物体は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）などの地上部、根、塊茎などの地下部、種子、樹脂などのすべての部位が使用可能である。
本発明におけるシリマリン及びそれを含む植物体は、それら自体を乾燥させた乾燥物及びそれらを各種溶媒を用いて溶解した溶解物として使用できる。例えば、水又はエタノール、メタノールなどのアルコール類、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどの多価アルコール、エーテル、アセトン、酢酸エチルなどの有機溶媒を用いて溶解した溶解物をシリマリンの原料として使用できる。

本発明におけるシリマリン原料の植物体は、天然乾燥、熱風乾燥、凍結乾燥させたり、醗酵させたりしたものをそのまま使用することができる。また植物抽出物を調製する場合は常法に従って、抽出、濃縮、粉末化などの処理を行って得ることができる。

［ヒドロキシプロピルメチルセルロース］
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（以下ＨＰＭＣという）は、メチルセルロース（MC）に 2-ヒドロキシプロピル基を導入したセルロースエーテルであり、食品添加物公定書に収載されているカルボキシメチルセルロースナトリウム（CMC-Na）やカルボキシメチルセルロースカルシウム（CMC-Ca）と同じ範疇にあるセルロースの誘導体（セルロースエーテル類）であり、メチルセルロースと同様、欧米を中心に一般食品用添加物若しくはダイエタリーサプリメント用のカプセル基剤、錠剤の結合剤、又はコーティング剤として広く使用されている。一般食品用については、例えば可食性フィルムとして使用され、冷凍ピザ（トッピングから生地への水分の移行防止、トッピングの形状保持）、ナッツ製品（酸化防止効果）、肉製品（保水性、退色の防止）、フライドポテト（吸油の防止）等に応用されており、これらの食品添加物用を原料として用いることができる。

［ダイフラクトースアンハイドライドIII（以下ＤＦＡIII）］
ＤＦＡとは、２個のフラクトースが、互いに２点ずつで結合したアンヒドロ化環状二糖である。従来、カラメルなどに存在することが知られていたが、工業的には、イヌリンをイヌリン分解酵素、例えば、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ.Ｈ６５−７株が産生するイヌリンフラクトトランスフェラーゼ（ＥＣ２.４.１.９３）により発酵させたり、レヴァンをＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｎｉｃｏｔｉｎｏｖｏｒａｎｓＧＳ−９が産生するレヴァンフルクトトランスフェラーゼ（ＥＣ２.４.１.１０）により発酵させたりすることにより製造することができる。二分子のフラクトースの結合様式の差異により、誘導体が５種類存在し、それぞれ、ＤＦＡＩ、ＤＦＡII、ＤＦＡIII、ＤＦＡIV、ＤＦＡＶと称される。本発明においてはＤＦＡIII（ｄｉ−Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｅ−１,２‘ ：２,３’ ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ＤＦＡIV（ｄｉ−Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｅ−２,６‘ ：６,２’ ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ）が好ましく使用される。
本発明において用いるＤＦＡIIIは、精製されたものが好ましいが、未精製のＤＦＡIIIであっても良い。

本発明の組成物において好ましくは、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上と、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）と、ＤＦＡIIIの各成分の含有比率が１：０．７〜１：０．５〜１である。ＨＰＭＣが０．６以下になると得られる粒子のサイズが１μｍ以上となる恐れがある。またＤＦＡIIIの比率が０．４以下となると、粒子径が１μｍ以上となる恐れがある。
ＨＰＭＣはまた、その水に溶解したときの粘度が重要である。ＨＰＭＣは、その２％水溶液の粘度が２０℃のとき５０ｍＰａｓ・ｓ以上であるようなものが好ましい。このようなＨＰＭＣとしては、市販品では信越化学株式会社のメトローズ６０ＳＨ５０を例示することができる。

本発明においては、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上を含む有機溶媒溶液と、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を含む水溶液を、高圧晶析装置を用いて、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上を含むシリマリンとＨＰＭＣを晶析させて回収し、さらにＤＦＡIIIを添加して乾燥させることによって、目的とする組成物を得ることができる。
晶析とは、水を含む各種の溶媒に対して各々の物質が溶解できる量は、その物質固有の値を持ち、これは温度により変化するため、ある温度で一定量溶解していた物質を、溶液の温度を上げ下げすることで溶解度の低い状態にし、その物質が溶けきれなくさせることで溶液と目的物質を液体と固体という形で分離するものである。
本発明においては、単独の成分を晶析させるのではなく、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上と、ＨＰＭＣを含む組成物をナノメートルサイズの粒子として晶析させ、これにＤＦＡIIIを添加して乾燥させることで水分散性の良い組成物の粉末を得ることができる。高圧晶析装置は、水相と有機相を個別に送液し、晶析直後に強い圧力をかけ、衝突噴流場に急速に送液することで高いせん断力を発生させ、晶析した粒子の凝集を防ぎ均一な懸濁液を調製する装置である。装置の構造の簡単な模式図を図１に示した。
このような高圧晶析装置としては、市販の装置を使用することができる。高圧晶析装置としてはパウレック社のＰｕｒｅＮａｎｏや株式会社神戸製鋼社製の高圧晶析装置を使用して行なうことができる。

本発明の組成物を得るためには、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上（以下「シリマリン類」と略記する。）を溶解させた有機溶媒溶液、（良溶媒としてはメタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、２−ブタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メチルエチルケトン、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、酢酸メチル、アセト酢酸メチル、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルフォキシド、エチレングリコール、１，３ブタンジオール、１，４ブタンジオール、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール等及びそれらの混合物を挙げられる。これらの中でも、食品への用途に限定した場合、エタノール、プロピレングリコール、又はアセトンが好ましく、エタノールが特に好ましい。）、ＨＰＭＣを溶解させた水溶液（貧溶媒）を、上記の高圧晶析装置を用いて高圧下、好ましくは５００〜１０００ＭＰａの圧力で処理し、シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上と、ＨＰＭＣを含む組成物をナノメートルサイズの粒子として晶析させる。かくして得られたスラリー状の組成物から有機溶媒を除去したのち、DFAIIIを添加し、噴霧乾燥あるいは凍結乾燥など各種手段を用いて乾燥すると本発明の組成物を得ることができる。
この組成物は、水への分散性がよく、分散したときの分散粒子は１マイクロメートル未満のいわゆるナノサイズとなる。また、シリマリンと異なり、水に分散しても凝集して沈殿しないという特性を有している。

本発明の組成物は、シリマリン類の安定等の観点から、公知の酸化防止剤（ラジカル捕捉剤）を含んでいてもよい。
ラジカル捕捉剤は、ラジカルの発生を抑えるとともに、生成したラジカルをできる限り速やかに捕捉し、連鎖反応を断つ役割を担う添加剤である（出典：「油化学便覧第４版」、日本油化学会編２００１）。
本発明に好適な酸化防止剤（ラジカル捕捉剤）としては、シリマリンの変色を防止する観点から、例えば、アスコルビン酸とその誘導体、を挙げることができる。

アスコルビン酸とその誘導体、及びそれらの塩としては、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸Ｎａ、Ｌ−アスコルビン酸Ｋ、Ｌ−アスコルビン酸Ｃａ、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルのマグネシウム塩、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩、Ｌ−アスコルビン酸ステアリン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、Ｌ−アスコルビル酸パルミチン酸エステル、テトライソパルミチン酸Ｌ−アスコルビル等が挙げられる。これらのうち、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸Ｎａ、Ｌ−アスコルビン酸ステアリン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、Ｌ−アスコルビル酸パルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルのマグネシウム塩、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム塩、テトライソパルミチン酸Ｌ−アスコルビルが特に好ましい。
また、本発明の分散組成物には、本発明の効果を損なわない限りにおいて、本発明の分散組成物の用途に応じて、例えば、種々の薬効成分、防腐剤、着色剤など、通常、その用途で使用される他の添加物を併用することができる。

本発明の組成物は、上記の乾燥した粉末でも良いし、取り扱いの利便性を考慮して、造粒することもできる。
本発明の組成物は、水における分散粒子は、その体積平均粒径が１μｍ以下であり、好ましくは４００ｎｍ以下である。分散粒子の平均粒径とは、水相に分散するシリマリン類を含む組成物の分散粒子全体の平均粒径を意味する。
分散粒子の粒径は、市販の粒度分布計等で計測して確認することができる。
粒度分布測定法としては、光学顕微鏡法、共焦点レーザー顕微鏡法、電子顕微鏡法、原子間力顕微鏡法、静的光散乱法、レーザー回折法、動的光散乱法、遠心沈降法、電気パルス計測法、クロマトグラフィー法、超音波減衰法等が知られており、それぞれの原理に対応した装置が市販されている。
本発明の組成物は、シリマリンの吸収性が良いため、従来のシリマリン含有組成物に比して、飲食品や医薬品、化粧品、健康食品への配合量を減らすことができる。

以下、本発明を実施例、比較例、試験例により更に具体的に説明する。
実施例1：シリマリン含有組成物の調製
シリマリンとして市販のシリマリン原末であるシリマリンＥＴ（インディナジャパン社）を用いた。
（１）製造方法
発明の組成物を製造するに当たって、上記した高圧晶析装置ＰｕｒｅＮａｎｏ（パウレック社）を用い、シリマリンの溶媒としてエタノールを、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）の溶媒は、水（蒸留水）を用いた。なおＨＰＭＣは信越化学株式会社製メトロース６０ＳＨ５０を用いた。
ＰｕｒｅＮａｎｏの運転条件は、装置の使用説明書の条件に準じて次の条件とした。
エタノール液２０ｍＬ（シリマリン１ｇ溶解液）
水溶液２００ｍＬ（ＨＰＭＣ１ｇ溶解液）
Ｒｅｔｒａｃｔｔｉｍｅ：３００ｍｓ
通過回数：１ｐａｓｓ
圧力：１００ＭＰａ
回収した懸濁液は、水とエタノールをロータリーエバポレーターで蒸発させて液量が１／５になるまで濃縮した。得られたスラリー状の回収液にＤＦＡIII の粉末を１ｇ添加し、３時間予備凍結した後、凍結乾燥し、乾燥物を粉砕して粉末状の発明組成物（晶析ＤＦＡIII）を得た。
製造工程の概略を図２にフロー図で示す。
同様の操作で、ＤＦＡIIIに代えて、エリスリトール０．５ｇを用いて調製した粉末（比較例１）を調製した。
凍結乾燥直後粒子の形状は走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した。本発明品、比較例１の粒子形状は非晶性の形状が観察された。

（２）組成物粉末を水に分散させたときの分散粒子の粒子径測定
実施例１の組成物を水に分散させたときの粒子径を、動的光散乱法により測定した。また比較例１の組成物についても同様に測定した。測定方法は、粒子径測定装置（Ｆ−ＰＡＲ１０００大塚電子製）を用い、凍結乾燥粉末１０ｍｇを１０ｍＬの蒸留水に溶解させ、2分間の超音波処理により再分散後、粒子径を測定した。
実施例１の組成物は２５６．４ｎｍ、比較例１の組成物は２７４．２ｎｍであった。いずれの分散液も、室温に長時間放置しても凝集や沈殿は発生しなかった。

（３）シリマリン含有組成物の吸収性試験
シリマリン及び実施例１の経口投与による吸収性を、シリマリン原末（シリマリンＥＴ）、比較例１の組成物とで比較試験した。また生体内利用性が高いことが知られている特許文献１に記載されたシリマリンの脂質錯体（シリマリンフィトソーム：インディナ社製）を陽性対照として試験に用いた。
なお測定に当たっては、シリビンの濃度を指標としている。

１）試験方法
＜試験動物＞
ラット：Ｃｒｌ：ＳＤ雄6週齢を納入後、1週間馴化飼育後、7週齢で1群６匹（ｎ＝６）にて実験に供した。飼育方法は１匹／１ケージにて、オリエンタル酵母製ＣＲＦ−１固型の餌を自由摂取とした。
＜投与方法＞
投与試験前日の夕刻より絶食し、シリマリン原末換算で２００ｍｇ/ｋｇ/１０ｍＬとなるように試験薬液を調製し、ゾンデを用いて強制経口投与した。
＜群分け＞
投与前日の体重に基づいて群間均一に群分けした。
＜採血方法＞
投与後０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間にて採血を実施した。
頸静脈からヘパリン処理をした注射筒で０．２ｍＬ程度採血し、血漿を遠心分離後、凍結し分析サンプルとした。得られた血液サンプルは実施例１と同様にしてＨＰＬＣを用いて、血中シリビン濃度を測定し、これをシリマリン濃度とした。

＜ＨＰＬＣ試験方法＞
Ａ．使用機器および分析条件
ＨＰＬＣシステム：高速液体クロマトグラフシステム；株式会社島津製作所製
分析カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ（登録商標）Ｃ１８ＰａｒｔＮｏ.００Ｇ−４６０１ −Ｅ０
Ｓｉｚｅ直径２５０ｍｍ×内径４．６ｍｍ粒子径５μｍＳｅｒｉａｌＮｏ.６９１０１１−６
ガードカラム：ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄＵＬＴＲＡＣａｒｔｒｉｄｇｅｓＣａｔｌｏｇＮｏ. ＡＪＯ−８７６８
ＵＨＰＬＣＣ１８ｆｏｒ４．６ｍｍＩＤＣｏｌｕｍｎｓ
カラム温度：４０℃
移動相Ａ：１０ｍｍｏｌ/Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ５．４５）
移動相Ｂ：アセトニトリル
移動相：（Ａ：Ｂ , ６０：４０）
洗浄液：水 / アセトニトリル (１：１ , ｖ/ｖ)
流量：１．０ｍＬ/ｍｉｎ
注入量：２０ μＬ
サンプラー温度：１０℃
検出波長：２８８ｎｍ
Ｒｕｎｔｉｍｅ：１０ｍｉｎ

２）分析方法
Ｂ．試料溶液の調製
各ヘパリン血漿１５μＬをマイクロチューブに取り、アセトニトリル１５μＬを加え、次いでβ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ溶液４５μＬを加える。ボルテックスでよく混合し、低速遠心機にて遠心した後、３７℃の恒温漕で1時間反応させる。その後、９２００Ｇで５分間遠心する。その溶液の上層３０μＬをマイクロチューブに分取し、内部標準溶液６０μＬを加えボルテックスで１０秒間撹拌後、９２００Ｇで2分間遠心する。上層を分取し、４５μｍメンブランフィルターにてろ過し試料溶液とし、分析に供する。

Ｃ．標準溶液の調製
シリビン（東京化成工業株式会社製）１０ｍｇを精密にメスフラスコに量り取り、アセトニトリルで正確に１００ｍＬとする。その溶液をホールピペットで５ｍＬ正確にメスフラスコに量り取り、アセトニトリルで正確に２０ｍＬとし、シリビン２５μｇ/ｍＬ溶液とする。
シリビン２５μｇ/ｍＬ溶液１８０μＬをマイクロチューブに取り、１８０μＬのアセトニトリルを加え、ボルテックスで撹拌し、シリビン１２．５μｇ/ｍＬ溶液とする。前述と同様にシリビン６．２５、３．１２５、１．５６２５、０．７８１２５、０．３９０６２５μｇ／ｍＬ溶液を調製する。
次にシリビンを含まないヘパリン血漿１５μＬをマイクロチューブにそれぞれ取り、各濃度のシリビン溶液をそれぞれ１５μＬ加える。試料溶液と同様に操作し、各濃度の標準溶液とし、分析に供する。

Ｄ．含有量計算
試料溶液および標準溶液２０μＬについて、分析条件に基づき液体クロマトグラフィーにより試験を行い、それぞれの液の内標準物質のピーク高さに対するシリビンのピーク高さの比ＱＴ及びＱＳを求める。
標準溶液の濃度をＹ、標準溶液の内標準物質のピーク高さに対するシリビンのピーク高さの比ＱＴをＸとして検量線を作成し、試料溶液の内標準物質のピーク高さに対するシリビンのピーク高さの比ＱＳからシリビン濃度を求める。

（４）結果
血中のシリマリン濃度（シリビン濃度）の経時変化を図３に示す。
また血中濃度のＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ値を表１に示す。

図３、及び表１のＡＵＣの値から、本発明の組成物は、経口投与時の吸収性と持続性に優れていることが確認できた。

（５）シリマリン含有組成物の腸管由来細胞Ｃａｃｏ2細胞膜透過試験
実施例１の組成物の腸管組織の透過性（腸吸収性）を確認するため、シリマリン原末と比較試験した。また動物試験と同様シリマリンの脂質錯体（シリマリンフィトソーム）を陽性対照として試験に用いた。
試験は、次のように行った。
トランスウエルパーミアブルサポート（コーニング社製）細胞培養装置にコンフルエントになるまでＣａｃｏ２細胞培養した後、この管腔側に動物試験で調製したものと同様の試料を、シリマリン１２５μｇ/ｍＬとなるように添加し、添加1時間後基底膜側から回収した透過液を、動物試験と同様にして、ＨＰＬＣによりシリビンを定量した。定量結果は、シリマリン原末の透過量を１とした相対量で表した。結果を図４に示す。なお、実施例１の組成物は図４中「ＤＦＡIII」、シリマリンの脂質錯体は「フィトソーム」として表示している。
図４のとおり、本発明の組成物は、シリマリンの約２．５倍の吸収性を有していることが確認された。図４から明らかなように、動物試験での本発明の組成物吸収性、腸管からの吸収性（透過性）改善に基づくことが明らかとなった。

Claims

シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、ダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）を含有する水分散性組成物。
シリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンがマリアアザミ由来であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
組成物中のシリマリン、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンからなる群から選択される１種又は２種以上とヒドロキシプロピルメチルセルロースとの混合物の非晶性物と、ダイフラクトースアンハイドライド（ＤＦＡIII）の含有比率が１：０．７〜１：０．５〜１である請求項１又は２に記載の組成物。
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物を分散させた水溶液。
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物を配合した飲食品または健康食品。
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物を配合した経口用医薬品。