JP2015536951A - 黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性疾患を治療する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体を用いて、免疫無防備状態の患者における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性菌血症及び敗血症を予防及び／又は治療する方法、並びに黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防及び／又は治療する方法を提供する。また、哺乳動物対象の血流又は心臓における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌負荷を低減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含む方法も提供される。さらに、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌凝集及び／又は血栓塞栓性病変形成を低減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含む方法も提供される。さらにまた、免疫無防備状態の哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防する、又はその重症度を軽減する方法も提供される。【選択図】図１

Description

本発明は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体を用いて、免疫無防備状態の患者における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性菌血症及び敗血症を予防及び／又は治療する方法、並びに黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防及び／又は治療する方法を提供する。

黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、軽度の皮膚及び軟組織感染症から、心内膜炎、骨髄炎、及び壊死性肺炎などの重度の浸潤性疾患までの多種多様な感染を引き起こす、世界的な死亡及び病的状態の主要な原因である（Ｌｏｗｙ ＦＤ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３３９（８）：５２０−３２（１９９８）；Ｋｌｅｖｅｎｓ ｅｔ ａｌ，ＪＡＭＡ ２９８（１５）：１７６３−７１（２００７）。黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、一般に、メチシリン耐性（ＭＲＳＡ）又はメチシリン感受性（ＭＳＳＡ）のいずれかとして分類される。複数の報告書から、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染は、耐性状態とは関係なく重度の結果を招くことが明らかにされている（Ｆｏｗｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．１６３（１７）：２０６６−７２（２００３）；ｄｅ Ｋｒａｋｅｒ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｍｅｄ．Ｏｃｔ；８（１０）：ｅ１００１１０４（２０１１）。

抗生物質は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）疾患を治療するための標準的医療手段である。黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対する新規の抗生物質の導入にもかかわらず、新しい耐性機構の出現により、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）疾患を予防又は治療するための新規のアプローチが必要とされる。抗生物質時代以前は、細菌感染を治療するために、感染患者への免疫血清の受動的投与が臨床的に用いられていた（Ｋｅｌｌｅｒ及びＳｔｉｅｈｍ，Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １３（４）：６０２−１４（２０００））。今日、いくつかの毒素媒介性細菌病（例えば、ボツリヌス中毒、ジフテリア、破傷風）を治療するのに同様の方法が用いられている（Ｋｅｌｌｅｒ及びＳｔｉｅｈｍ，Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １３（４）：６０２−１４（２０００）；Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５４：４６２−４７１（２００６）。同質遺伝子野生型親株と、ＡＴ発現が欠失した黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）を比較することにより、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）毒素（ＡＴ）は、複数の黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）疾患モデル（例えば、皮膚壊死、肺炎、敗血症、心内膜炎、乳腺炎）において重要な病原性決定基（多数の他の細胞外因子の中で）であることが判明している（Ｂｒａｍｌｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．５７（８）：２４８９−９４（１９８９）；Ｂａｙｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５：４６５２−４６６０（１９９７）；Ｋｅｒｎｏｄｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５：１７９−１８４（１９９７）；Ｂｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．７５（２）：１０４０−４（２００７）；Ｂｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０５（２）：２８７−９４（２００８）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０４（６）：９３７−４１（２０１１））。

ＡＴは、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）株の９０％により産生される細胞溶解性の３３ｋＤａの膜孔形成性毒素であるため、主要ビルレンス因子であると考えられる。これは、モノマーとして分泌され、標的細胞膜上の特定の受容体ＡＤＡＭ−１０に結合する（Ｗｉｌｋｅ及びＢｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，ＰＮＡＳ １０７（３０）：１３４７３−８（２０１０）；Ｉｎｏｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１３１０−４（２０１１）。ＡＴは、ヘプタマーの膜孔中間体（ｐｒｅｐｏｒｅ）中にオリゴマー形成し、立体構造変化を受けることによって、貫膜βバレル形成、続いて細胞溶解が起こる（Ｂｈａｋｄｉ及びＴｒａｎｕｍ−Ｊｅｎｓｅｎ，１９９１；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ，１９９６）。血小板は、上皮細胞、内皮細胞、及び免疫細胞（例えば、リンパ球及びマクロファージ）と共に、ＡＴ−溶解を被りやすく、これは、この毒素が、組織損傷及び免疫回避に直接影響をもたらすことを示唆している（Ｂｈａｋｄｉ及びＴｒａｎｕｍ−Ｊｅｎｓｅｎ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ．５５（４）：７３３−５１（１９９１）；Ｒａｇｌｅ及びＢｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．７７（７）：２７１２−８（２００９）；Ｔｋａｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９（３）：３７７−８５（２０１２））。非溶解濃度で、ＡＴは、有意な細胞傷害作用を及ぼすことも立証されている（Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９（４）：１９０９−１６（１９９７）；Ｗｉｌｋｅ ａｎｄ Ｂｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，ＰＮＡＳ １０７（３０）：１３４７３−８（２０１０）；Ｉｎｏｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１３１０−４(２０１１)）。ＡＴがマクロファージ膜上に結合して、オリゴマー形成すると、ＮＬＲＰ３インフラマソームを活性化し、これが、他のブドウ球菌病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と一緒に、ＩＬ−１β分泌を誘導し、細胞死を促進する（Ｃｒａｖｅｎ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ４（１０）（２００９）；Ｋｅｂａｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２０５（５）：８０７−１７（２０１２））。炎症誘発性サイトカイン発現（例えば、ＩＬ−１β）の増大は、急性肺傷害の顕著な特徴である（Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１４（６）：５２３−３５（２００３））。

ＡＴはまた、非溶解濃度で細胞間接着に存在するＥ−カドヘリンの、ＡＤＡＭ−１０媒介性タンパク質分解も活性化するが、これは、上皮完全性の破壊を招き、肺炎並びに皮膚及び軟組織感染に見られる上皮損傷に寄与する（Ｉｎｏｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１３１０−４（２０１１）；Ｍａｒｅｔｚｋｙ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ １０２（２６）：９１８２−７（２００５）；Ｉｎｏｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３２（５）：１５１３−６（２０１２）。ＡＴは、直接及び間接的活性により細胞毒性作用を及ぼして、細菌増殖及び浸潤性疾患に資する環境を作り出す。従って、ＡＴの標的化阻害により、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性疾患を予防又は制限することができる。この仮定は、ＡＴに対して指令した能動又は受動免疫後のマウス感染モデルにおける黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）疾患の重症度の軽減を立証する他の研究により支持される（Ｍｅｎｚｉｅｓ及びＫｅｒｎｏｄｌｅ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ６４（５）：１８３９−４１（１９９６）；Ｂｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０５（２）：２８７−９４（２００８）；Ｒａｇｌｅ及びＢｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．７７（７）：２７１２−８（２００９）；Ｋｅｎｎｅｄｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０２（７）：１０５０−８（２０１０）；Ｔｋａｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９（３）：３７７−８５（２０１２））。

Ｆｃ変異領域及びその親抗体ＬＣ１０を有する抗ＡＴ抗体は、ヒト、高親和性、抗ＡＴｍＡｂである（以前、米国仮特許出願第６１／４４０，５８１号明細書及び国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４２０１号明細書（国際公開第２０１２／１０９２０５号パンフレットとして公開）、各々の内容は、参照により本明細書に組み込む） 並びにＴｋａｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９（３）：３７７（２０１２）に開示されている。

菌血症及び敗血症性ショックが、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）浸潤性疾患の大部分を占める（Ｋｌｅｖｅｎｓ，ｅｔ ａｌ，ＪＡＭＡ，２９８（１５）：１７６３−７１（２００７）。ＡＴは、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）敗血症の際の重要なビルレンス因子であり、敗血症の際の上皮損傷の原因であると提示されている（Ｐｏｗｅｒｓ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０６（３）：３５２−６（２０１２）。ＡＴと上皮細胞上のその受容体との相互作用により、前記毒素は、直接細胞溶解による血管損傷、又は上皮密着結合のＡＤＡＭ−１０媒介性タンパク質溶解の活性化を媒介することが可能になる（同上）。両方の機構が血管透過性を増大することになり、これが、細菌性敗血症の顕著な特徴である。

抗ＡＴモノクローナル抗体による受動免疫は、米国仮特許出願第６１／４４０，５８１号明細書及び国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４２０１号明細書に記載されているように、ブドウ球菌性肺炎のマウスモデルにおいて生存率の有意な増大をもたらすことが判明しているが、抗ＡＴ抗体が、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性疾患を有する免疫無防備状態の哺乳動物における生存率増加に有効であるかどうかはわかっていない。このことは、免疫無防備状態の個体、特に好中球減少症に罹患している者は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染に対する危険性が高いため、理解すべき重要な要素である（Ａｎｄｒｅｗｓ及びＳｕｌｌｉｖａｎ，Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ．１６（４）：５９７−６２１（２００３）；Ｂｏｕｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５１（４）：３１２−２６（２０１０））。

本発明は、抗ＡＴ抗体が、敗血症及び免疫無防備状態の肺炎の予防に有効であるという証明を初めて提供する。

本明細書には、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を予防する、又はその重症度を軽減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含む方法が提供される。また、哺乳動物対象の血流又は心臓における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌負荷を低減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含む方法も提供される。さらに、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集及び／又は血栓塞栓性病変形成を低減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含む方法も提供される。さらにまた、免疫無防備状態の哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防する、又はその重症度を軽減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含む方法も提供される。

本明細書に記載する様々な方法では、対象の血流又は心臓における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）負荷が好適に低減され、また別の実施形態では、対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集及び／又は血栓塞栓性病変形成が低減される。

好適には、本明細書に記載する様々な方法における哺乳動物対象は、ヒトである。

様々な方法において、単離抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２からなる群から選択される。他の実施形態において、抗体は、全長抗体である。さらに別の実施形態において、抗体は、Ｆｃ変異領域を含む。

本明細書に記載する様々な方法の実施形態において、単離抗抗体又はその抗原結合断片は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合し、且つ
（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１又は４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２、５、７３又は７７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号３、６、６４、６８又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。

実施形態において、本明細書に記載する様々な方法で用いるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号７、８、９、１、２及び３；配列番号１０、１１、１２、１、２及び３；配列番号１３、１４、１５、４、５及び６；配列番号７、１７、１８、１、２及び３；配列番号７、８、１６、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６４；配列番号７、８、６６、１、２及び６４；配列番号７、８、６７、１、２及び６８；配列番号７、８、６７、１、２及び６４；配列番号７、８、７８、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６８；配列番号６９、７０、７１、１、２及び６８；配列番号７、８、７２、１、７３及び７４；配列番号６９、７５、７１、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、７７及び７４；配列番号６９、７０、７１、１、７７及び７４のアミノ酸配列に対応する。

別の実施形態において、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメインを含み、及び（ｉｉｉ）配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。好適には、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２の重鎖可変ドメインと、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３の軽鎖可変ドメインとを含む。

本明細書に記載する様々な方法の別の実施形態において、ＶＨ及びＶＬは、配列番号２０及び１９；配列番号２２及び２１；配列番号２４及び２３；配列番号２６及び２５；配列番号２８及び２７；配列番号４１及び４２；配列番号４３及び４４；配列番号４５及び４６；配列番号４７及び４８；配列番号４７及び４８；配列番号４９及び５０；配列番号５１及び５２；配列番号５１及び５２；配列番号５３及び５４；配列番号５５及び５６；配列番号５７及び５８；配列番号５９及び６０；配列番号６１及び５８；配列番号６２及び５８；配列番号６２及び６３；配列番号７９及び６３のアミノ酸配列に対応する。

様々な方法のさらに別の実施形態において、単離抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ変異ドメインを有する抗ＡＴ抗体を含み、ここで、前記抗体は、配列番号８０に対応するＶＨ−ＩｇＧ１−ＹＴＥ及び／又は配列番号８１に対応するＶＬ−κを含む。

ＬＣ１０予防は、ＩＶ致死攻撃モデルにおける生存を改善する。マウス（群当たり１０匹）は、ＬＣ１０（４５及び１５ｍｇ／ｋｇ）、又はアイソタイプ対照（Ｒ３４７、４５ｍｇ／ｋｇ）で受動免疫し、２４時間後にＳＦ８３００（３×１０⁸ｃｆｕ）によるＩＶ攻撃を実施した。１４日にわたり生存をモニターした。データは、４つの独立した実験の代表的なものである。統計的有意性をログランク（Ｍａｒｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定により評価した：^*ｐ値＝０．０００５、^**ｐ値＝０．００４３）。 ＬＣ１０予防は、心臓の細菌負荷を改善する。マウスは、ＬＣ１０（４５及び１５ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照（Ｒ３４７、４５ｍｇ／ｋｇ）で受動免疫し、２４時間後にＩＶ攻撃ＳＦ８３００（２．９８ｅ８ｃｆｕ）を実施した。感染から１４時間後、マウスから心臓を採取し、ＣＦＵ計数のために処理した。独立両側スチューデントｔ検定を用いて統計分析を実施した：^*ｐ値＝０．００２８；^**ｐ値＝０．００８２）。 ＬＣ１０予防は、ブドウ球菌性菌血症を軽減する。マウスは、ＬＣ１０（４５及び１５ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照（Ｒ３４７、４５ｍｇ／ｋｇ）で受動免疫し、２４時間後にＩＶ攻撃ＳＦ８３００（３×１０⁸ｃｆｕ）を実施した。感染後の様々な時点で、心臓穿孔により血液を採取し、ＣＦＵ計数のためにプレートに塗布した。スチューデントｔ検定を用いて統計分析を実施した。データは、^*ｐ値＜０．０５であれば、Ｒ３４７に対して統計的に相違するとみなした。 全白血球数及び白血球百分率。Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスに６つの異なる用量（ｍｇ／ｋｇ）のＣＰＭを第０及び３日に投与した。第０、１、４及び６日に、群毎に各時点で５匹のマウスの血液試料を採取した。Ｓｙｓｍｅｘ自動化血液分析器を用いて、全白血球数及び白血球百分率（好中球、リンパ球）を分析した。 細菌用量滴定。５匹の免疫無防備状態のマウスを、２回目のＣＰＭの投与から２４時間後に、５０μＬの対数期細菌懸濁液（用量１×１０⁷〜２×１０⁸ＣＦＵ）で攻撃した（第４日）。７日間にわたり、マウスの生存を観察した。 ＬＣ１０は、免疫無防備状態の肺炎マウスにおける生存を増加する。ＣＰＭを注射したマウスに、５０μＬの細菌懸濁液ＳＦ８３００（５×１０⁷ＣＦＵ）によるＩＮ攻撃の２４時間前に、ＬＣ１０（４５若しくは１５ｍｇ／ｋｇ）又はＲ３４７（４５ｍｇ／ｋｇ）を投与し、５日間にわたりマウスの生存を観察した。ログランク検定を用いて、統計的有意性を決定したが、ここで、^*は、Ｒ３４７で処理したマウスに対する統計的差異を示す（ｐ＜０．０００１）。 全白血球数及び白血球百分率。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに２つの用量（１５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇ）のＣＰＭを第−４及び−１日にそれぞれ投与した。第−４、−３、−１、０、２、及び３日に、５匹のマウスから血液試料を採取した。Ｓｙｓｍｅｘ自動化血液分析器を用いて、全白血球数及び白血球百分率（好中球、リンパ球）を決定した。

「ポリペプチド」、「ペプチド」、「タンパク質」及び「タンパク質断片」という用語は本明細書において置換え可能に用いられ、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ又は複数のアミノ酸残基が、対応する天然のアミノ酸の人工的化学模倣物である、アミノ酸ポリマー、並びに天然のアミノ酸ポリマー及び非天然のアミノ酸ポリマーを指す。

「アミノ酸」という用語は、天然及び合成アミノ酸、並びに天然のアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。

本明細書で使用するとき、「組換え体」は、自然の状態では、タンパク質を発現することができるＤＮＡの内在性コピーがない細胞を用いて産生されるタンパク質に関するものを含む。細胞は、適切な単離核酸配列の導入により遺伝子的に改変されているため、組換えタンパク質を産生する。

本明細書で使用するとき、「抗体」及び「免疫グロブリン」は、最も広義には置き換え可能に用いられ、本明細書に記載するように、モノクローナル抗体（例えば、全長又はインタクトなモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、要望される生体活性を発揮する限りにおいて、二重特異性抗体）及び抗原結合断片を含む。自然抗体及び免疫グロブリンは、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖とから構成される。各軽鎖は、１つの共有結合性のジスルフィド結合によって重鎖に連結しているが、ジスルフィド結合の数は、それぞれの免疫グロブリンアイソタイプの重鎖で異なる。また、重鎖及び軽鎖の各々は、規則的な間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_H）を有し、これにいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_L）を有し、その他端に定常ドメインを有する。「定常」及び「可変」という用語は、機能に関して用いられる。

軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１定常ドメインとアラインメントし、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインとアラインメントする。特定のアミノ酸残基は、軽鎖及び重鎖可変ドメインの間に界面を形成すると考えられる（Ｃｌｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６，６５１−６６（１９８５）；Ｎｏｖｏｔｎｙ及びＨａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２，４５９２−４５９６（１９８５））。５つのヒト免疫グロブリンクラスが、その重鎖組成に基づいて区別され、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＤと称される。ＩｇＧクラス及びＩｇＡクラスの抗体は、サブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに区分される。ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ抗体の重鎖は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３と称する３つの定常領域ドメインを有し、また、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体の重鎖は、４つの定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を有する。従って、重鎖は、１つの可変領域と、３つ又は４つの定常領域を有する。免疫グロブリン構造及び機能については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｈａｐｔｅｒ １４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（１９８８）を参照されたい。

「Ｖ_H」又は「ＶＨ」と言うとき、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ又はＦａｂなどの免疫グロブリンの可変領域を指す。

「Ｖ_L」又は「ＶＬ」と言うとき、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ又はＦａｂなどの免疫グロブリンの可変領域を指す。

「抗原結合断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を指し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗原決定断片の例として、限定するものではないが、抗原結合断片から形成される、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体、及び多重特異性抗体が挙げられる。

「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」という用語は、伝統的な二本鎖抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインが連結して、１本の鎖を形成する抗体を指す。これらの用語には、１つの軽鎖可変ドメイン（Ｖ_L）又はその部分と、１つの重鎖可変ドメイン（Ｖ_H）又はその部分からなる結合分子が含まれ、ここで、各可変ドメイン（又はその部分）は、同じか、又は異なる抗体に由来する。ｓｃＦｖ分子は、典型的に、Ｖ_HドメインとＶ_Lドメインとの間に位置するｓｃＦｖリンカーを含む。ｓｃＦｖ分子は当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号明細書、Ｈｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ７７：５１−５９（１９８９）；Ｂｉｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６（１９８８）；Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１０１１７−１０１２５（１９９１）；Ｍｉｌｅｎｉｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５１：６３６３−６３７１（１９９１）；Ｔａｋｋｉｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：８３７−８４１（１９９１）に記載されている。尚、これら文献の全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素抗体及び抗原結合断片
抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＡＴ又は抗ＡＴとも呼ばれる）抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で用いられる場合、α毒素タンパク質、ペプチド、サブユニット、断片、部分、オリゴマー又はそれらの任意の組み合わせに特異的な１つ又は複数のエピトープに免疫特異的に結合し、概して他のポリペプチドには特異的に結合しない。用語「オリゴマー」又は「α毒素オリゴマー」は、機能的な膜孔（例えば、７個のα毒素モノマー）を形成するα毒素モノマーの会合体（例えば、２個のモノマー、３個のモノマー、４個のモノマー、５個のモノマー、６個のモノマー又は７個のモノマー）を指す。エピトープは、α毒素タンパク質の少なくとも一部分を含む少なくとも１つの抗体結合領域を含み得る。用語「エピトープ」は、本明細書で使用されるとき、抗体との結合能を有するタンパク質決定基を指す。エピトープは、概してアミノ酸及び／又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基を含み、概して特定の三次元構造特徴、並びに特定の化学的特徴（例えば、電荷、極性、塩基性、酸性、疎水性など）を有する。立体構造エピトープと非立体構造エピトープとは、変性溶媒の存在下で前者との結合が失われるのに対し、後者との結合は失われない点で区別される。一部の実施形態では、認識されたエピトープが活性なヘプタマーの形成を妨げる（例えば、α毒素モノマーのオリゴマー形成による活性なヘプタマーへの複合体化を阻害する）。

特定の実施形態では、エピトープはα毒素タンパク質の少なくとも一部分を含み、この一部分はα毒素ヘプタマー複合体の形成に関与する。特定のエピトープは、α毒素タンパク質の連続するアミノ酸の特定の部分全体に対して少なくとも３個のアミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸配列の任意の組み合わせを含むことができる。一部の実施形態では、エピトープは、α毒素タンパク質の連続するアミノ酸の特定の部分全体に対する少なくとも４個のアミノ酸残基、少なくとも５個のアミノ酸残基、少なくとも６個のアミノ酸残基、少なくとも７個のアミノ酸残基、少なくとも８個のアミノ酸残基、少なくとも９個のアミノ酸残基、少なくとも１０個のアミノ酸残基、少なくとも１１個のアミノ酸残基、少なくとも１２個のアミノ酸残基、少なくとも１３個のアミノ酸残基、少なくとも１４個のアミノ酸残基、又は少なくとも１５個のアミノ酸残基である。特定の他の実施形態において、エピトープは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個の連続又は非連続アミノ酸残基を含む。さらなる実施形態では、エピトープ内に含まれるアミノ酸残基は、α毒素ヘプタマー複合体形成に関わる。

従って、具体的な実施形態において、単離／精製抗α毒素抗体及び抗原結合断片は、配列番号３９に係るアミノ酸配列を含む分子、及び／又は配列番号４０に係るアミノ酸配列を含む分子に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、抗α毒素抗体及び抗原結合断片はまた、異なる種由来のα毒素ホモログ若しくはオルソログ、又は配列番号３９のアミノ酸配列の変異体であって、３５位のヒスチジンがロイシンに置換され、又は当業者に公知のＨ３５突然変異に対応する他のアミノ酸に置換されている変異体にも結合する。

可変領域
特定の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は親抗体から調製される。一部の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は親抗体の範囲内に包含される。本明細書で使用されるとき、用語「親抗体」は、本明細書において定義される変異体又は誘導体の調製に用いられるアミノ酸配列によりコードされる抗体を指す。親ポリペプチドは、自然抗体配列（すなわち、天然に存在する対立遺伝子変異体を含め、天然に存在するもの）又は天然に存在する配列の既存のアミノ酸配列修飾（他の挿入、欠失及び／又は置換など）を有する抗体配列を含み得る。親抗体はヒト化抗体又はヒト抗体であってもよい。具体的な実施形態において、抗α毒素抗体及び抗原結合断片は親抗体の変異体である。本明細書で使用されるとき、用語「変異体」は、親抗体配列における１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失及び／又は置換によって「親」抗α毒素抗体又は抗原結合断片アミノ酸配列とアミノ酸配列が異なる抗α毒素抗体又は抗原結合断片を指す。

抗体の抗原結合部分は、抗原（例えばα毒素）に特異的に結合する能力を保持する１つ以上の抗体断片を含む。抗体の抗原結合機能は全長抗体の断片（例えば抗原結合断片）により果たされ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」の範囲内に包含される「抗原結合断片」の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）単一の抗体アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨは、多くの場合に別個の遺伝子によりコードされるが、これらのＶＬ及びＶＨは組換え方法を用いて、それらを単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによりつなぎ合わせることができ、このタンパク質鎖では、ＶＬ領域とＶＨ領域とが対になって一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）を形成する。かかる一本鎖抗体もまた、用語「抗体」及び抗体の「抗原結合断片」の範囲内に包含される。これらの抗原結合断片は公知の技術を用いて得ることができ、断片は、インタクトな抗体と同様にして結合活性をスクリーニングすることができる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技法によるか、又はインタクトな免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的切断により産生することができる。

本抗α毒素抗体及び抗原結合断片は、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。さらに別の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。本明細書に提供されるとおりのＶＨ配列及びＶＬ配列の代表例については、表７を参照されたく、これらの代表例は任意の組み合わせで存在して抗α毒素抗体又は抗原結合断片を形成することができ、又は組み合わせで存在して本発明のｍＡｂを形成することができる。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２から選択される。様々な実施形態において、ＶＬは、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３から選択される。特定のＶＨ及びＶＬヌクレオチド配列を表８に提供する。

一部の実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片はＶＨとＶＬとを含み、ここでＶＨ及びＶＬは、配列番号２０及び１９；配列番号２２及び２１；配列番号２４及び２３；配列番号２６及び２５；配列番号２８及び２７；配列番号４１及び４２；配列番号４３及び４４；配列番号４５及び４６；配列番号４７及び４８；配列番号４７及び４８；配列番号４９及び５０；配列番号５１及び５２；配列番号５１及び５２；配列番号５３及び５４；配列番号５５及び５６；配列番号５７及び５８；配列番号５９及び６０；配列番号６１及び５８；配列番号６２及び５８；配列番号６２及び６３；配列番号７９及び６３により表されるアミノ酸配列を有する。

表１〜７は、本明細書に提示される抗体及び抗原結合断片の特定の実施形態の重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を提供する。特定の実施形態では、抗α毒素抗体及び抗原結合断片は、表７に開示されるＶＨ配列及び／又はＶＬ配列の少なくとも１つに対して所与のパーセント同一性（ｐｅｒｃｅｎｔ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するＶＨ及び／又はＶＬを含む。本明細書で使用されるとき、用語「パーセント（％）配列同一性」は、同様に「相同性」を含め、候補配列において、配列のアラインメント及び必要であれば最大のパーセント配列同一性を達成するためのギャップの導入後に、且つ任意の保存的置換は配列同一性の一環としては考慮することなく、親抗体配列などの参照配列のアミノ酸残基又はヌクレオチドと同一であるアミノ酸残基又はヌクレオチドの百分率として定義される。比較のための配列の最適アラインメントは、手作業で行う他、当該技術分野において公知の局所的相同性アルゴリズムを用いるか、又はそのようなアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（ウィスコンシン・ジェネティクス・ソフトウェア・パッケージ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷｉｓｃｏｎｓｉｎにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ Ｎ及びＴＦＡＳＴＡ）を用いることにより生成され得る。

具体的な実施形態において、抗体又は抗原結合断片はα毒素と免疫特異的に結合し、且つ配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を含む重鎖可変ドメインを含み、且つ配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を含む軽鎖可変ドメインを含み、ここで抗体は、１つ以上のα毒素モノマーが互いに結合するのを阻害する活性を有する（例えば、オリゴマー形成を阻害する）。

相補性決定領域
可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）は抗原結合領域を含むが、その変異性は抗体の可変ドメインにわたり均等に分布するわけではない。変異性は、軽鎖（ＶＬ又はＶＫ）及び重鎖（ＶＨ）のいずれの可変ドメインにもある相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるセグメントに集中している。可変ドメインのなかでより高度に保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々４つのＦＲを含み、ＦＲは概してβシート構造をとり、３つのＣＤＲにより接続される。ＣＤＲはループを形成し、これらのループがβシート構造を接続し、及びある場合にはβシート構造の一部を形成する。各鎖のＣＤＲはＦＲによって近接して一体に保持され、他方の鎖のＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，前掲を参照のこと）。重鎖の３つのＣＤＲはＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ−ＣＤＲ−３と命名され、軽鎖の３つのＣＤＲはＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、及びＶｌ−ＣＤＲ３と命名される。本明細書ではカバット付番方式を使用している。従って、ＶＨ−ＣＤＲ１はおよそアミノ酸３１から始まり（すなわち、最初のシステイン残基後の約９残基）、約５〜７アミノ酸を含み、及び次のセリン残基で終わる。ＶＨ−ＣＤＲ２はＣＤＲ−Ｈ１の終わりから１５番目の残基から始まり、約１６〜１９アミノ酸を含み、及び次のグリシン残基で終わる。ＶＨ−ＣＤＲ３はＶＨ−ＣＤＲ２の終わりから約３０番目のアミノ酸残基から始まり；約１３〜１５アミノ酸を含み；及び配列Ｍ−Ｄ−Ｖで終わる。ＶＬ−ＣＤＲ１はおよそ残基２４から始まり（すなわち、システイン残基に続く）；約１０〜１５残基を含み；及び配列Ｙ−Ｖ−Ｓで終わる。ＶＬ−ＣＤＲ２はＶＬ−ＣＤＲ１の終わりから約１６番目の残基から始まり、及び約７残基を含む。ＶＬ−ＣＤＲ３はＶＨ−ＣＤＲ２の終わりから約３３番目の残基から始まり；約７〜１１残基を含み、及び配列Ｔ−Ｉ−Ｌで終わる。ＣＤＲは抗体毎に著しく異なる（及び定義上、カバットのコンセンサス配列との相同性は示さない）ことに留意されたい。

本抗α毒素抗体及び抗原結合断片は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２又はＣＤＲ−Ｈ３）を含むＶＨを含む。特定の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２又はＣＤＲ−Ｌ３）を含むＶＬを含む。

一部の実施形態では、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９と同一の、又はそれと比べて１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５と同一の、又はそれと比べて１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８と同一の、又はそれと比べて１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。

詳細な実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７、８及び９；配列番号１０、１１及び１２；配列番号１３、１４及び１５；配列番号７、１７及び１８；配列番号７、８及び１６；配列番号７、８及び６５；配列番号７、８及び６６；配列番号７、８、及び６７；配列番号７、８及び７８；配列番号６９、７０及び７１；配列番号７、８及び７２；配列番号６９、７５及び７１；配列番号６９、７５及び７６；又は配列番号６９、７０及び７１と同一の、又はそれと比べて各ＣＤＲに１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１又は４と同一の、又はそれと比べて１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２、５、７３又は７７と同一の、又はそれと比べて１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号３、６、６４、６８又は７４と同一の、又はそれと比べて１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。

詳細な実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１、２及び３；配列番号４、５及び６；配列番号１、２及び６４；配列番号１、２及び６８；配列番号１、７３及び７４；又は配列番号１、７７及び７４と同一の、又はそれと比べて各ＣＤＲに１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１又は４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２、５、７３、又は７７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号３、６、６４、６８又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３と同一の、又はそれと比べて各ＣＤＲに１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。

詳細な実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７、８、９、１、２及び３；配列番号１０、１１、１２、１、２及び３；配列番号１３、１４、１５、４、５及び６；配列番号７、１７、１８、１、２及び３；配列番号７、８、１６、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６４；配列番号７、８、６６、１、２及び６４；配列番号７、８、６７、１、２及び６８；配列番号７、８、６７、１、２及び６４；配列番号７、８、７８、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６８；配列番号６９、７０、７１、１、２及び６８；配列番号７、８、７２、１、７３及び７４；配列番号６９、７５、７１、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、７７及び７４；配列番号６９、７０、７１、１、７７及び７４と同一の、又はそれと比べて各ＣＤＲに１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、（ｉ）３つのＣＤＲを含むＶＨ鎖ドメインと３つのＣＤＲを含むＶＬ鎖ドメインとを含み；及び（ｉｉ）黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片を含む組成物が提供され、ここでＶＨ鎖ドメインの３つのＣＤＲは、（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。詳細な実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号７、８及び９；配列番号１０、１１及び１２；配列番号１３、１４及び１５；配列番号７、１７及び１８；配列番号７、８及び１６；配列番号７、８及び６５；配列番号７、８及び６６；配列番号７、８、及び６７；配列番号７、８及び７８；配列番号６９、７０及び７１；配列番号７、８及び７２；配列番号６９、７５及び７１；配列番号６９、７５及び７６；又は配列番号６９、７０及び７１に対応する。

また、特定の実施形態では、（ｉ）３つのＣＤＲを含むＶＨ鎖ドメインと３つのＣＤＲを含むＶＬ鎖ドメインとを含み；及び（ｉｉ）黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片を含む組成物も提供され、ここでＶＬ鎖ドメインの３つのＣＤＲは、（ａ）配列番号１又は４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２、５、７３、又は７７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号３、６、６４、６８又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。詳細な実施形態では、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号１、２及び３；配列番号４、５及び６；配列番号１、２及び６４；配列番号１、２及び６８；配列番号１、７３及び７４；又は配列番号１、７７及び７４に対応する。

一部の実施形態では、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドと免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片は、（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１又は４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２、５、７３、又は７７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号３、６、６４、６８又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３と同一の、又はそれと比べて各ＣＤＲに１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。

詳細な実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７、８、９、１、２及び３；配列番号１０、１１、１２、１、２及び３；配列番号１３、１４、１５、４、５及び６；配列番号７、１７、１８、１、２及び３；配列番号７、８、１６、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６４；配列番号７、８、６６、１、２及び６４；配列番号７、８、６７、１、２及び６８；配列番号７、８、６７、１、２及び６４；配列番号７、８、７８、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６８；配列番号６９、７０、７１、１、２及び６８；配列番号７、８、７２、１、７３及び７４；配列番号６９、７５、７１、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、７７及び７４；配列番号６９、７０、７１、１、７７及び７４と同一の、又はそれと比べて各ＣＤＲに１、２、又は３個のアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。

一部の実施形態では、（ｉ）３つのＣＤＲを含むＶＨ鎖ドメインと３つのＣＤＲを含むＶＬ鎖ドメインとを含み；及び（ｉｉ）黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドと免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片を含む組成物が提供され、ここでＶＨ鎖ドメインの３つのＣＤＲは、（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。詳細な実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号７、８及び９；配列番号１０、１１及び１２；配列番号１３、１４及び１５；配列番号７、１７及び１８；配列番号７、８及び１６；配列番号７、８及び６５；配列番号７、８及び６６；配列番号７、８、及び６７；配列番号７、８及び７８；配列番号６９、７０及び７１；配列番号７、８及び７２；配列番号６９、７５及び７１；配列番号６９、７５及び７６；又は配列番号６９、７０及び７１に対応する。

さらに、（ｉ）黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合し、（ｉｉ）配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメインを含み、（ｉｉｉ）配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む、単離抗体又はその抗原結合断片を含む組成物も提供される。

一部の実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２の重鎖可変ドメインと、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３の軽鎖可変ドメインを含む。

詳細な実施形態では、単離抗体又はその抗原結合断片は、ＶＨ及びＶＬを含み、ここでＶＨ及びＶＬは、それぞれ配列番号２０及び１９；配列番号２２及び２１；配列番号２４及び２３；配列番号２６及び２５；配列番号２８及び２７；配列番号４１及び４２；配列番号４３及び４４；配列番号４５及び４６；配列番号４７及び４８；配列番号４７及び４８；配列番号４９及び５０；配列番号５１及び５２；配列番号５１及び５２；配列番号５３及び５４、配列番号５５及び５６；配列番号５７及び５８；配列番号５９及び６０；配列番号６１及び５８；配列番号６２及び５８；配列番号６２及び６３；配列番号７９及び６３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列と同一であるか、又はそれぞれ、これらのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％又は９８％の同一性を有する。

変異Ｆｃ領域
本発明はまた、修飾ＩｇＧ定常ドメインを有する本発明の結合メンバー、特に本発明の抗体も含む。長い血清中半減期及び様々なエフェクター機能を媒介する能力などの機能的特性を有するヒトＩｇＧクラスの抗体が、本発明の特定の実施形態で使用される（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １（１９９５））。ヒトＩｇＧクラス抗体は、さらに以下の４つのサブクラスに分類される：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４。ＩｇＧクラス抗体のエフェクター機能としてのＡＤＣＣ及びＣＤＣについて、これまで数多くの研究が行われており、ヒトＩｇＧクラスの抗体のなかでもＩｇＧ１サブクラスは、ヒトにおいて最大のＡＤＣＣ活性及びＣＤＣ活性を有することが報告されている（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））。

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」は、非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。一実施形態において、かかる細胞はヒト細胞である。いかなる特定の作用機序にも限定されることは望まないが、ＡＤＣＣを媒介するこのような細胞傷害性細胞は、概してＦｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩを発現する一方、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及び／又はＦｃγＲＩＶを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）に要約されている。分子のＡＤＣＣ活性の評価には、米国特許第５，５００，３６２号明細書又は同第５，８２１，３３７号明細書に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施されてもよい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。或いは、又は加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性をインビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価してもよい。

「補体依存性細胞傷害性」又は「ＣＤＣ」は、分子が補体活性化を惹起して補体の存在下で標的を溶解する能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が、同種抗原と複合体を形成する分子（例えば抗体）に結合することにより惹起される。補体活性化の評価には、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されるとおりの、ＣＤＣアッセイが実施されてもよい。

ヒトＩｇＧ１サブクラス抗体のＡＤＣＣ活性及びＣＤＣ活性の発現には、概して、抗体のＦｃ領域が、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞又は活性化マクロファージなどのエフェクター細胞の表面上に存在する抗体に対する受容体（以下、「ＦｃγＲ」と称する）に結合することが関わる。様々な補体成分が結合し得る。結合に関して、抗体のヒンジ領域のいくつかのアミノ酸残基及びＣ領域の第２ドメイン（以下、「Ｃγ２ドメイン」と称する）が重要であること（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３，１０９８（１９９３），Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８６，３１９（１９９５）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））、及びＣγ２ドメインにおける糖鎖（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））もまた重要であることが示唆されている。

「エフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、且つエフェクター機能を果たす白血球である。この細胞は、少なくともＦｃγＲＩ、ＦＣγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及び／又はＦｃγＲＩＶを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が挙げられる。

用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するために用いられる。一実施形態において、ＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、特定の実施形態では、ＦｃＲはＩｇＧ抗体と結合するもの（γ受容体）であり、対立遺伝子変異体及び選択的スプライシングを受けた形態のこうした受容体を含め、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、及びＦｃγＲＩＶサブクラスの受容体が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは同様のアミノ酸配列を有し、主な違いはその細胞質ドメインである。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲについては、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１（１９９５）でレビューされている。今後同定されるものを含め、他のＦｃＲが、本明細書における用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語にはまた新生児受容体ＦｃＲｎも含まれ、これは、母性ＩｇＧの胎児への移行に関与する（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９（１９９４））。

特定の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、抗体の機能的及び／又は薬物動態学的特性を変化させるためＦｃ領域に１つ以上の改変が加えられている改変Ｆｃ領域（本明細書では「変異Ｆｃ領域」とも称される）を含む。かかる改変により、ＩｇＧに対するＣｌｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の、又はＦｃγＲ結合の低下又は増加がもたらされ得る。本技術は、変化を加えて所望の効果を提供するようエフェクター機能が改変されている変異Ｆｃ領域を有する本明細書に記載される抗体を包含する。従って、一部の実施形態では、抗α毒素抗体又は抗原結合断片は、変異Ｆｃ領域（すなわち、以下で考察するとおり改変されているＦｃ領域）を含む。変異Ｆｃ領域を含む本明細書の抗α毒素抗体及び抗原結合断片はまた、ここでは「Ｆｃ変異抗体」とも称される。本明細書で使用されるとき、天然とは非修飾親配列を指し、天然のＦｃ領域を含む抗体は、本明細書では「天然Ｆｃ抗体」と称される。一部の実施形態では、変異Ｆｃ領域は、天然のＦｃ領域と比較して同程度のエフェクター機能の誘導を示す。特定の実施形態では、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較してより高いエフェクター機能の誘導を示す。特定の実施形態では、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較してより低いエフェクター機能の誘導を示す。変異Ｆｃ領域のいくつかの具体的な実施形態を本明細書に詳述する。エフェクター機能の計測方法は、当該技術分野において公知である。

抗体のエフェクター機能は、限定はされないが、アミノ酸置換、アミノ酸付加、アミノ酸欠失及びＦｃアミノ酸に対する翻訳後修飾（例えばグリコシル化）の変化を含め、Ｆｃ領域を変化させることによって修飾することができる。以下に記載される方法を用いて、本明細書に記載されるとおりの単離抗体又は抗原結合断片のエフェクター機能を改変し、特定の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ａｕｒｅｕｓ）関連疾患又は病態の予防又は治療に有利な特定の特性を有する抗体又は抗原結合断片を生じさせてもよい。

一部の実施形態では、Ｆｃリガンド（例えば、Ｆｃ受容体、Ｃ１ｑ）に対し、天然Ｆｃ抗体と比べて改変された結合特性を有するＦｃ変異抗体が調製される。結合特性の例としては、限定はされないが、結合特異性、平衡解離定数（Ｋ_d）、解離速度及び会合速度（それぞれｋｏｆｆ及びｋｏｎ）、結合親和性及び／又はアビディティが挙げられる。当該技術分野においては、平衡解離定数（Ｋ_d）はｋｏｆｆ／ｋｏｎとして定義されることが公知である。特定の態様では、高いＫ_dを有する抗体に対して低いＫ_dのＦｃ変異領域を含む抗体がより望ましいこともある。しかしながら、ある場合にはｋｏｎ又はｋｏｆｆの値のほうが、Ｋ_dの値より関連性が高いこともある。所与の抗体適用についてどの動態学的パラメータがより重要であるかは、決定することができる。

一部の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、限定はされないが、ＦｃＲｎ、アイソフォームＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＢ、及びＦｃγＲＩＣを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２、アイソフォームＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、及びＦｃγＲＩＩＣを含む）；及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６、アイソフォームＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＢを含む）を含む１つ以上のＦｃ受容体に対し、天然Ｆｃ抗体と比較したとき改変された結合親和性を示す。

特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、１つ以上のＦｃリガンドとの結合性が天然Ｆｃ抗体と比べて向上している。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍、又は２倍〜１０倍、又は５倍〜５０倍、又は２５倍〜１００倍、又は７５倍〜２００倍、又は１００〜２００倍高い又は低いＦｃリガンドに対する親和性の増加又は低下を示す。様々な実施形態において、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％高い又は低いＦｃリガンドに対する親和性を示す。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、Ｆｃリガンドに対する親和性が増加している。Ｆｃ変異抗体は、ときに、Ｆｃリガンドに対する親和性が低下していてもよい。

一部の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡとの結合が増強されている。一部の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢとの結合が増強されている。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＢの双方との結合が増強されている。特定の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡとの結合が増強されたＦｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比較したとき、ＦｃγＲＩＩＢ受容体との結合が同時には増加しない。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡとの結合が低減されている。Ｆｃ変異抗体は、ときに、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢとの結合が低減されていてもよい。様々な実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＢに対して改変された親和性を示すＦｃ変異抗体は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎとの結合が増強されている。一部の実施形態では、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＢに対して改変された親和性を示すＦｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べてＣ１ｑとの結合が改変されている。

特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍、又は２倍〜１０倍、又は５倍〜５０倍、又は２５倍〜１００倍、又は７５倍〜２００倍、又は１００〜２００倍高い又は低いＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する親和性を示す。様々な実施形態において、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％高い又は低いＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性を示す。

特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍、又は２倍〜１０倍、又は５倍〜５０倍、又は２５倍〜１００倍、又は７５倍〜２００倍、又は１００〜２００倍高い又は低いＦｃγＲＩＩＢ受容体に対する親和性を示す。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％高い又は低いＦｃγＲＩＩＢに対する親和性を示す。

一部の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べてＣ１ｑに対する親和性の増加又は低下を示す。一部の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍、又は２倍〜１０倍、又は５倍〜５０倍、又は２５倍〜１００倍、又は７５倍〜２００倍、又は１００〜２００倍高い又は低いＣ１ｑ受容体に対する親和性を示す。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べて少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％高い又は低いＣ１ｑに対する親和性を示す。様々な実施形態において、Ｃｉｑに対して改変された親和性を示すＦｃ変異抗体は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎとの結合が増強されている。さらに別の具体的な実施形態において、Ｃ１ｑに対して改変された親和性を示すＦｃ変異抗体は、天然Ｆｃ抗体と比べてＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＢとの結合が改変されている。

Ｆｃ変異抗体は、１つ以上のＦｃγＲ媒介性エフェクター細胞機能を決定するインビトロ機能アッセイによって特徴付けられることが企図される。特定の実施形態では、Ｆｃ変異抗体は、インビボモデル（本明細書に記載及び開示されるものなど）において、インビトロベースのアッセイにおけるものと同様の結合特性及びエフェクター細胞機能を有する。本技術では、インビトロベースのアッセイで所望の表現型を示さないがインビボでは所望の表現型を確かに示すＦｃ変異抗体を除外しない。

Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清中半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増加させることにより増加させてもよい。用語「抗体半減期」は、本明細書で使用されるとき、抗体分子の投与後の平均生存時間の尺度である抗体の薬物動態学的特性を意味する。抗体半減期は、例えば、血清中で計測するとき（すなわち循環半減期）、又は他の組織で計測するとき、既知量の免疫グロブリンの５０パーセントを患者（又は他の哺乳動物）の体内又はその特定のコンパートメントから排除するのに必要な時間として表すことができる。半減期は、免疫グロブリン又は免疫グロブリンクラスによって異なり得る。一般に、抗体半減期が増加すると、投与された抗体の循環中平均滞留時間（ＭＲＴ）が増加する。

半減期が増加すると、患者に投与する薬物の量を減らすとともに、投与頻度を低下させることができる。半減期の増加はまた、例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ａｕｒｅｕｓ）関連疾患又は病態の予防に、また多くの場合に患者が一度退院した後に起こり得る感染の再発の予防にも、有益であり得る。抗体の血清中半減期を増加させるため、当該技術分野において公知のとおり、抗体（特に抗原結合断片）にサルベージ受容体結合エピトープを組み込み得る。本明細書で使用されるとき、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清中半減期の増加に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。半減期が増加した抗体はまた、ＦｃとＦｃＲｎ受容体との間の相互作用に関与するものとして同定されるアミノ酸残基を修飾することによっても生成し得る。加えて、抗α毒素抗体又は抗原結合断片の半減期は、当該技術分野で広く利用されている技術によってＰＥＧ又はアルブミンとコンジュゲートすることにより増加させてもよい。一部の実施形態では、抗α毒素抗体のＦｃ変異領域を含む抗体は、天然のＦｃ領域を含む抗体と比較して半減期が約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％以上増加している。一部の実施形態では、Ｆｃ変異領域を含む抗体は、天然のＦｃ領域を含む抗体と比較して半減期が約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍以上、又は２倍〜１０倍、又は５倍〜２５倍、又は１５倍〜５０倍増加している。

一部の実施形態では、本明細書に提示される技術はＦｃ変異体を提供し、ここでＦｃ領域は、カバットに定められるとおりのＥＵインデックスにより付番するとき２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７９、２８０、２８４、２９２、２９６、２９７、２９８、２９９、３０５、３１３、３１６、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３９、３４１、３４３、３７０、３７３、３７８、３９２、４１６、４１９、４２１、４４０及び４４３からなる群から選択される１つ以上の位置に修飾（例えば、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失）を含む。場合により、Ｆｃ領域は、当該技術分野において公知の追加的及び／又は代替的な位置に天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る。

特定の実施形態において、本明細書にはＦｃ変異体が提供され、ここでＦｃ領域は、カバットに定められるとおりのＥＵインデックスにより付番するとき２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４Ｉ、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５Ｉ、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０Ｉ、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ、２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｌ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５１Ｆ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５５Ｌ、２５６Ｅ、２５６Ｍ、２６２Ｉ、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３Ｉ、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４Ｉ、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５Ｉ、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６Ｉ、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６８Ｅ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２７０Ｅ、２８０Ａ、２８４Ｍ、２９２Ｐ、２９２Ｌ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６Ｉ、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８Ｉ、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９Ｉ、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３０５Ｉ、３１３Ｆ、３１６Ｄ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５Ｉ、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０Ｉ、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３１Ｇ、３３１Ａ、３３１Ｌ、３３１Ｍ、３３１Ｆ、３３１Ｗ、３３１Ｋ、３３１Ｑ、３３１Ｅ、３３１Ｓ、３３１Ｖ、３３１Ｉ、３３１Ｃ、３３１Ｙ、３３１Ｈ、３３１Ｒ、３３１Ｎ、３３１Ｄ、３３１Ｔ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙ、３３２Ａ、３３９Ｔ、３７０Ｅ、３７０Ｎ、３７８Ｄ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、４１６Ｇ、４１９Ｈ、４２１Ｋ、４４０Ｙ及び４３４Ｗからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含む。場合により、Ｆｃ領域は、当該技術分野において公知の追加的及び／又は代替的な天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る。

様々な実施形態において、本明細書にはＦｃ変異抗体が提供され、ここでＦｃ領域は、２３４、２３５及び３３１からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの修飾（例えば、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失）を含む。一部の実施形態では、天然に存在しないアミノ酸は、２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、及び３３１Ｓからなる群から選択される。本明細書にはＦｃ変異体が提供され、ここでＦｃ領域は、２３９、３３０及び３３２からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む。一部の実施形態で、天然に存在しないアミノ酸は、２３９Ｄ、３３０Ｌ及び３３２Ｅからなる群から選択される。

一部の実施形態において、本明細書にはＦｃ変異抗体が提供され、ここでＦｃ領域は、２５２、２５４、及び２５６からなる群から選択される１つ以上の位置に少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む。特定の実施形態では、天然に存在しないアミノ酸は、米国特許第７，０８３，７８４号明細書（この内容は全体として参照により本明細書に援用される）に記載される２５２Ｙ、２５４Ｔ及び２５６Ｅからなる群から選択される。

特定の実施形態では、ＩｇＧ抗体により誘発されるエフェクター機能は、タンパク質のＦｃ領域に連結している炭水化物部分に強く依存する。従って、Ｆｃ領域のグリコシル化を修飾すると、エフェクター機能を増加又は低下させることができる。従って、一部の実施形態では、本明細書に提供される抗α毒素抗体及び抗原結合断片のＦｃ領域は、アミノ酸残基のグリコシル化の改変を含む。特定の実施形態では、アミノ酸残基のグリコシル化の改変はエフェクター機能の低下をもたらす。特定の実施形態では、アミノ酸残基のグリコシル化の改変はエフェクター機能の増加をもたらす。一部の実施形態では、Ｆｃ領域のフコシル化が低下している。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は非フコシル化型である。

一部の実施形態では、本明細書におけるＦｃ変異体は、当該技術分野において公知のとおりの他の公知のＦｃ変異体と組み合わされてもよい。Ｆｃドメインの他の修飾及び／又は置換及び／又は付加及び／又は欠失を導入することができる。詳細な実施形態では、Ｆｃ変異ドメインを有する本発明の抗ＡＴ抗体は、配列番号８０に対応するＶＨ−ＩｇＧ１−ＹＴＥ及び／又は配列番号８１に対応するＶＬ−κを含む。

抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ＡＵＲＥＵＳ）ＡＴ抗体の代表的配列

抗ＡＴ抗体及びその抗原結合断片を含む医薬製剤
また、本明細書に記載する抗α毒素抗体又はその抗原結合断片と担体を含む医薬製剤も提供される。かかる製剤は、全体を通して記載する様々な方法で、容易に投与することができる。一部の実施形態では、製剤は、薬学的に許容可能な担体を含む。

本明細書で用いる場合、抗α毒素抗体又はその抗原結合断片を含む医薬製剤は、本技術の製剤と称される。用語「薬学的に許容可能な担体」は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨害しない１つ以上の無毒性の材料を意味する。かかる製剤は、塩、緩衝剤、防腐剤、適合担体、及び任意選択で他の治療剤をルーチンに含有し得る。かかる薬学的に許容可能な製剤はまた、ヒトへの投与に好適な、適合する固形又は液状充填剤、希釈剤又は封入物質もルーチンに含有し得る。用語「担体」は、適用を促進するよう活性成分と組み合わされる有機又は無機成分（天然若しくは合成）を指す。本医薬組成物の構成成分はまた、所望の薬学的効力を実質的に損ない得る相互作用がないようにして本明細書に記載の抗体及び抗原結合断片と、及び互いに、混ぜ合わせることも可能である。

本明細書に記載する医薬組成物は、特定の投薬量に製剤化されてもよい。投薬レジメンは、最適な所望の反応を提供するように調整され得る。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量が時間をかけて投与されてもよく、又は治療状況の急迫性の指標に応じて用量を比例的に減少又は増加させてもよい。特に、投与し易く、且つ投薬量が均一になるため、非経口組成物を投薬単位形態で製剤化することが有利である。投薬単位形態は、本明細書で使用されるとき、単位投薬量として治療対象に適した物理的に個別の単位を指す；各単位は、必要な医薬担体との関連において所望の治療効果を生じるように計算された所定の活性化合物（すなわち、抗体又は抗原結合断片）分量を含有する。投薬単位形態の詳細は、（ａ）抗α毒素抗体又は抗原結合断片の固有の特性及び実現しようとする特定の治療効果、及び（ｂ）個体における感受性の治療のためにこうした抗α毒素抗体又は抗原結合断片を配合する技術に固有の制約によって左右され、且つそれに直接依存する。

本技術の治療組成物は、特定の投与経路、例えば、経口、経鼻、肺内、局所（頬側及び舌下を含む）、直腸、腟内及び／又は非経口投与用に製剤化することができる。製剤は、好都合には単位剤形で提供されてもよく、及び薬学の技術分野において公知の任意の方法により調製されてもよい。単一の剤形を作製するため担体材料と組み合わせ得る活性成分（すなわち、抗体又は抗原結合断片）の量は、治療対象、及び特定の投与方式に応じて異なり得る。単一の剤形を作製するため担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、概して、治療効果を生み出す組成物の量であり得る。

黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連疾患の治療
本発明はまた、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体及びその抗原結合断片を用いて、菌血症及び敗血症などの黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性疾患及び病態を予防及び／又は治療する方法も提供する。また、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体及びその抗原結合断片を用いて、免疫無防備患者における肺炎などの黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性疾患及び病態を予防及び／又は治療する方法も提供する。

全体を通して記載する抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片、並びにかかる抗体の突然変異体、変異体及び誘導体のいずれかを本明細書に記載する様々な方法に使用してもよい。例示的抗ＡＴ抗体及びその抗原結合断片を、様々な方法及び提供する実施例で使用するために本明細書に記載するが、当技術分野において公知の任意の抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片、及び特に本明細書に記載され、公開国際特許出願第２０１２／１０９２８５号パンフレット（その開示内容は、全体が参照により、本明細書に組み込まれる）に開示されたものを様々な方法に使用してよいことは、理解すべきである。

敗血症としても知られる菌血症は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）が、ヒトなどの哺乳動物の血流内に侵入すると起こる。持続性発熱は、菌血症の１つの徴候である。細菌は、身体内深部の位置まで移動することができ、これにより、脳、心臓、肺、骨及び筋肉などの内臓、又は人工関節若しくは心臓ペースメーカなどの手術により移植したデバイスが被る感染を発生させる。黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）敗血症の１つの顕著な特徴は、細菌凝集及び血栓塞栓性病変形成であり、これは、心臓における細菌コロニー形成単位（ＣＦＵ）として測定される（ＭｃＡｄｏｗ ｅｔ ａｌ，２０１１）。

いくつかの実施形態において、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を予防する、又は、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症の重症度を軽減する方法が提供される。かかる方法は、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を上記対象に投与することを含み、上記の抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片、あるいは当技術分野において公知のものを含む。

哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を予防する方法は、好適には、感染事象の前に有効量の単離抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。本明細書で用いる場合、「感染事象」は、対象が、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染に暴露されるか、又は暴露され得る事象を指す。例示的感染事象として、限定するものではないが、頭部、口、手、腕、脚、胴、内臓（例えば、心臓、脳、腸、腎臓、胃、肺、肝臓、脾臓、膵臓など）、骨、皮膚などの身体のいずれかの部分に対する手術が挙げられる。手術によって、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に容易に感染し得る開放手術創及び臓器などの状態が発生する。別の感染事象としては、身体のいずれかの部分への外傷があり、これにより、開放創、又は他の場合、血流への進入路がもたらされ、これを介して黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）が身体に侵入し得る。それ以外の感染事象として、輸血、医薬品又は非合法若しくは合法薬物の注射、刺し傷、タトゥーニードル、静脈（ＩＶ）ラインの挿入及び維持、外科的ドレーンの挿入及び維持、並びに例えば褥瘡（褥瘡性潰瘍）などの皮膚の損傷の部位が挙げられる。

本方法が黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症の治療を提供する実施形態では、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片は、感染事象の少なくとも１時間前に投与するのが好適である。例えば、手術（感染事象）の少なくとも１時間前。好適には、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片は、感染事象の少なくとも６時間前、少なくとも１２時間前、少なくとも１８時間前、少なくとも２４時間前、少なくとも３０時間前、少なくとも３６時間前、少なくとも４２時間前、少なくとも４８時間前、又は４８時間以上前に投与する。実施形態では、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片は、感染事象の約６時間〜約３６時間前、約６時間〜約３６時間前、約１２時間〜約３６時間前、約１２時間〜約２４時間前、約２４時間〜約３６時間前、約２０時間〜約３０時間前、約２０時間〜約２８時間前、約２２時間〜約２６時間前、又は約１２時間前、約１３時間前、約１４時間前、約１５時間前、約１６時間前、約１７時間前、約１８時間前、約１９時間前、約２０時間前、約２１時間前、約２２時間前、約２３時間前、約２４時間前、約２５時間前、約２６時間前、約２７時間前、約２８時間前、約２９時間前、約３０時間前、又は約３１時間前、又は約３２時間前、又は約３３時間前、又は約３４時間前、又は約３５時間前、又は約３６時間前に投与するのが好適である。

本明細書で使用されるとき、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症の「予防」は、感染事象の時点で黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を獲得する対象の危険性を低減することを指す。好適には、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を獲得する対象の危険性は、感染事象の前に抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも３０％低減する。より好適には、この危険性は、感染事象の前に抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％低減するか、又は前記危険性は完全に排除される。

哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を軽減する方法において、かかる方法は、好適には、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）敗血症の症状を呈示する対象に、有効量の抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。こうした症状として、例えば、寒気、混乱若しくは精神錯乱、発熱若しくは低体温（低体温症）、低血圧による軽度の頭痛、頻拍、震え、皮膚発疹及び皮膚のほてりを挙げることができる。

本明細書で使用されるとき、「重症度を軽減する」は、これが敗血症に関して用いられる場合、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を獲得した対象が呈示する症状を軽減することを指す。好適には、これらの症状は、やはり黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を獲得しているが、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象が呈示する症状と比較して、少なくとも３０％軽減される。より好適には、上記の症状は、感染事象の前に抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％低減するか、又は前記症状は完全に排除される（すなわち、対象は、感染及び敗血症から治癒する）。

本明細書で使用されるとき、「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段を指し得るが、その目的は、疾患の進行などの望ましくない身体的変化又は障害を予防する、又は遅らせる（軽減する）ことである。有益又は所望の臨床結果としては、限定するものではないが、症状の改善、疾患の程度の低減、病態の安定化（すなわち、悪化させない）、疾患の進行の遅延又は緩徐化、病態の改善又は好転が挙げられる。「治療」はまた、治療を受けない場合に予測される生存と比較した生存の延長を意味し得る。治療が必要な者には、病状若しくは障害を既に有する者、並びに病状若しくは障害に罹患しやすい者、又は病状若しくは障害を予防しようとする者が含まれる。

好適には、本明細書に記載する様々な方法において、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与することができる対象は、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、霊長類、家畜、ヒツジ、ウマ、ブタなどの哺乳動物である。

本明細書に記載する抗体又はその抗原結合断片は、好適な投薬量及び投薬レジメンで投与することができ、かかる投薬量及び投薬レジメンは、疾患又は病状に応じて変わり得る。「有効な投薬量」は、投薬量及び投薬レジメンが治療効果又は治療エンドポイント（例えば、予防）を生じるかどうかを決定することにより特定することができる。抗体又はその抗原結合断片の用量は、単一回の投与、又は所望の効果及び他の臨床上の考慮事項に応じて間隔をあけた複数回の投与で提供することができる。

抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を対象に投与する例示的方法としては、限定するものではないが、静脈内（ＩＶ）、腫瘍内（ＩＴ）、病変内（ＩＬ）、エーロゾル、経皮、内視鏡、局所、筋肉内（ＩＭ）、皮内（ＩＤ）、眼内（ＩＯ）、腹腔内（ＩＰ）、経皮（ＴＤ）、鼻腔内（ＩＮ）、脳内（ＩＣ）、臓器内（例えば、肝臓内）、徐放性インプラント、又は皮下投与、あるいは、浸透圧若しくは機械ポンプを用いた投与によるものが挙げられる。

別の実施形態において、哺乳動物対象の血流又は心臓における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌負荷を低減する方法が提供される。かかる方法は、好適には、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む。

哺乳動物対象の血流又は心臓における細菌負荷は、好適には、血流又は心臓中の細菌、好適には黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）コロニーの量を決定するための当技術分野で公知の方法により測定する。例えば、細菌負荷は、生物からの試料を寒天プレート上に平板培養し、プレートをインキュベートした後、プレート上のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を定量することにより、好適に測定される。かかる方法は、当技術分野では公知である。細菌負荷を決定する別の好適な方法を使用することもできる。回収される試料は、好適には、生物から一般的に採取するか、又は具体的に特定の臓器から採取した血液試料由来のものである。

好適には、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に感染した対象の細菌負荷（すなわち、コロニー形成単位により測定される細菌の量）は、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片で治療した対象において、やはり黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に感染しているが、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも３０％低減する。より好適には、細菌の量は、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％低減するか、又は細菌負荷は完全に排除される。

好適には、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による感染の診断後可能な限り早期に、例えば、数時間又は数日以内に、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与する。投与すべき抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片の期間又は量は、当業者によって容易に決定される。

また、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌凝集及び／又は血栓塞栓性病変形成を低減する方法も提供される。かかる方法は、好適には、前記対象に、有効量の抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片（本明細書に記載する、あるいは、当技術分野で公知の抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片など）を投与することを含む。

本明細書に記載する場合、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌凝集を低減する方法は、血液との接触時及び／又は臓器中で、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）同士が凝集する量を低減することを指す。細菌凝集を測定する例示的方法は、当技術分野において公知であり、例えば、ＭｃＡｄｏｗ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏｓ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ７：ｅ１００２３０７（２０１１）（その開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているものなどがある。好適には、対象の血流及び／又は臓器における血栓塞栓性病変形成を低減する方法も提供される。血栓塞栓性病変形成を測定する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）若しくはコンピュータ体軸断層撮影法（ＣＡＴ）スキャン、又はその他の好適な画像方法が挙げられる。

哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌凝集及び／又は血栓塞栓性形成を低減する方法により、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片で治療した対象において、やはり黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に感染しているが、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較し、細菌凝集及び／又は血栓塞栓性形成が少なくとも３０％低減する。より好適には、細菌凝集及び／若しくは血栓塞栓性形成は、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％低減するか、又は細菌凝集及び／若しくは血栓塞栓性形成は完全に排除される。

好適には、哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を予防する方法、又は哺乳動物対象において黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症の重症度を軽減する方法は、対象の血流又は心臓における細菌負荷の低減ももたらす。他の実施形態では、哺乳動物対象において黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を予防する方法、又は哺乳動物対象において黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症の重症度を軽減する方法は、対象における細菌凝集及び／又は血栓塞栓性形成の低減ももたらす。

別の実施形態では、免疫無防備状態の哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防する方法又はその重症度を軽減する方法が提供される。かかる方法は、好適には、前記対象に、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。

本明細書に記載するように、驚くことに、免疫無防備状態の哺乳動物対象に抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を投与することにより、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防するか、又は黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎の重症度を軽減できることが判明した。

本明細書に記載するとき、「免疫無防備状態の」は、正常な免疫応答を形成することができない哺乳動物対象を指し、一般に、こうした対象は、好中球減少症に罹患しており、これは、好中球数が異常に低いことを意味する。好中球減少症の重症度は、血液マイクロリットル当たりの細胞において測定される好中球絶対数（ＡＮＣ）により決定する。軽度好中球減少症（１０００≦ＡＮＣ＜１５００）；中等度好中球減少症（５００≦ＡＮＣ＜１０００）；及び重度好中球減少症（ＡＮＣ＜５００）が、当業者により決定される一般的レベルである。

本明細書に記載するとき、免疫無防備状態の哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎の「予防」は、感染事象の時点で、免疫無防備状態の対象が、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を獲得する危険性を低減することを指す。好適には、免疫無防備状態の対象が、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を獲得する危険性は、感染事象の前に抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも３０％低減する。より好適には、上記危険性は、感染事象の前に抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％低減するか、又は危険性は完全に排除される。

哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎の重症度を軽減する方法において、かかる方法は、好適には、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎の症状を呈する対象に、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。こうした症状として、例えば、咳、胸の痛み、発熱、及び呼吸困難が挙げられる。

本明細書で使用するとき、「重症度を軽減する」は、肺炎に関して用いられる場合、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を獲得した対象（好適には、免疫無防備状態の対象）が呈示する症状を軽減することを指す。好適には、上記症状は、やはり黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を獲得しているが、抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない対象が呈示する症状と比較して、少なくとも３０％軽減される。より好適には、上記症状は、感染事象の前に抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片を投与されていない免疫無防備状態の対象と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％低減するか、又は症状は完全に排除される（すなわち、対象は、感染、従って肺炎から治癒する）。

本明細書に記載するように、好適には、あらゆる年齢の成人及び小児を含むヒトである哺乳動物対象に対して、様々な哺乳動物が実施される。

好適には、本明細書に記載する方法では、投与される抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２抗原結合断片である。別の実施形態では、抗体は、本明細書に記載するように、全長抗体である。好適には、抗体は、全体を通して詳細に説明するようなＦｃ変異領域を含む。

全体を通して説明する本方法は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合する単離抗体又はその抗原結合断片を好適に使用する。かかる抗体又はその抗原結合断片は、好適には、以下：
（ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１又は４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２、５、７３、又は７７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号３、６、６４、６８又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。さらに、こうした抗体又はその抗原結合断片の突然変異体及び誘導体、並びに前述したアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を示す抗体又はその抗原結合断片も使用することができる。

別の実施形態において、本明細書に記載する様々な方法は、例えば、以下：配列番号７、８、９、１、２及び３；配列番号１０、１１、１２、１、２及び３；配列番号１３、１４、１５、４、５及び６；配列番号７、１７、１８、１、２及び３；配列番号７、８、１６、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６４；配列番号７、８、６６、１、２及び６４；配列番号７、８、６７、１、２及び６８；配列番号７、８、６７、１、２及び６４；配列番号７、８、７８、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６８；配列番号６９、７０、７１、１、２及び６８；配列番号７、８、７２、１、７３及び７４；配列番号６９、７５、７１、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、７７及び７４；配列番号６９、７０、７１、１、７７及び７４のアミノ酸配列に対応するＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３などのＣＤＲを含む抗体又はその抗原結合断片を使用する。

実施形態において、本明細書に記載する様々な方法で使用される単離抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメインを含むと共に、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む。

本明細書に記載する方法の別の実施形態において、使用される単離抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２の重鎖可変ドメインと、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３の軽鎖可変ドメインとを含む。

別の実施形態において、本明細書に記載する方法は、以下：配列番号２０及び１９；配列番号２２及び２１；配列番号２４及び２３；配列番号２６及び２５；配列番号２８及び２７；配列番号４１及び４２；配列番号４３及び４４；配列番号４５及び４６；配列番号４７及び４８；配列番号４７及び４８；配列番号４９及び５０；配列番号５１及び５２；配列番号５１及び５２；配列番号５３及び５４；配列番号５５及び５６；配列番号５７及び５８；配列番号５９及び６０；配列番号６１及び５８；配列番号６２及び５８；配列番号６２及び６３；配列番号７９及び６３のアミノ酸配列に対応するＶＨ及びＶＬを有する。

好適な実施形態において、単離抗ＡＴ抗体は、Ｆｃ変異ドメインを有する抗ＡＴ抗体を含み、ここで、前記抗体は、配列番号８０に対応するＶＨ−ＩｇＧ１−ＹＴＥ及び／又は配列番号８１に対応するＶＬ−κを含む。

実施例１：敗血症の作製
細菌攻撃用量の調製
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＳＦ８３００（ＵＳＡ３００）は、Ｂｉｎｈ Ｄｉｅｐ（カリフォルニア大学サンフランシスコ校（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）により提供された。５０ｍＬのトリプチックソイブロス（ＴＳＢ）において細菌を２５０ｒｐｍで振盪しながら、３７℃で一晩培養した。一晩の培養物から１０ｍＬを１Ｌの新鮮なＴＳＢに添加し、６００ｎｍでの光学密度（ＯＤ６００）０．８まで、細菌を３７℃で振盪しながら増殖させた。４℃で１５分間の８０００ｒｐｍの遠心分離により細菌を回収し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。遠心分離により細菌を回収し、最終細菌株約２ｘ１０¹⁰ｃｆｕ／ｍＬまで、１０％グリセロールを含むＰＢＳ中に再懸濁させた。

マウス攻撃及び生存
８〜９週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス１０匹のマウス群に、指定濃度のＬＣ１０又は５００μＬＰＢＳ中のＲ３４７（４５ｍｇ／ｋｇ）ｍＡｂを腹腔内注射した。それから２４時間後に、２００μＬの細菌懸濁液（凍結株から、ｐＨ７．２のＰＢＳで希釈した５ｘ１０⁷ｃｆｕ）で、マウスを尾静脈において静脈内（ＩＶ）攻撃した。攻撃後１４日にわたり生存についてマウスをモニターした。ログランク検定：Ｒ３４７（対照）対ＬＣ１０（抗ＡＴ抗体）免疫マウスを用いて、統計的分析を評価した。

心臓中の細菌負荷
感染したマウスを、感染から１４時間後にＣＯ₂で安楽死させた。心臓を摘出し、溶解マトリックスＡ（ｌｙｓｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ Ａ）チューブにおいて、１ｍＬの低温ＰＢＳ中で均質化し、細菌計数のためにＴＳＡプレートに塗布した。独立両側スチューデントｔ検定を用いて、心臓組織中の細胞負荷をＲ３４７とＬＣ１０ｍＡｂとの対比較で分析した。ｐ＜０．０５であれば、データは有意であるとみなした。

血液中の細菌負荷
感染から８、２４、４８、７２、及び１４４時間後にＣＯ₂でマウスを安楽死させた。心臓穿孔により血液を回収し、その直後に１００μＬをｃｆｕ計数のためにＴＳＢプレートに塗布した。独立スチューデントｔ検定を用いて、データを分析した。ｐ＜０．０５であれば、ＬＣ１０とＲ３４７との間で、値が統計的に相違するとみなした。

実施例２：敗血症における抗ＡＴ抗体の予防効果
抗ＡＴ抗体媒介によるＡＴの阻害が敗血症の進行に作用するかどうかを決定するために、マウス１０匹のマウス群を、ＬＣ１０（４５及び１５ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照（Ｒ３４７、４５ｍｇ／ｋｇ）で受動免疫し、２４時間後に黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＳＦ８３００（ＵＳＡ３００）によるＩＶ攻撃を実施し、１４日にわたり生存をモニターした。ＬＣ１０予防は、生存を有意に増加させたが、これは、ＡＴが、全身性黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）疾患に重要な役割を果たしており、ＬＣ１０によるその阻害が、マウスを死亡から防御することを示している（図１）。

黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）敗血症の１つの顕著な特徴は、細菌凝集及び血栓塞栓性病変形成であり、これは、心臓中の細菌ＣＦＵとして測定される（ＭｃＡｄｏｗ ｅｔ ａｌ，２０１１）。ＬＣ１０予防が心臓中の細菌負荷を低減するかどうかを決定するために、マウスをＬＣ１０（１５及び４５ｍｇ／ｋｇ）又はＲ３４７（４５ｍｇ／ｋｇ）で受動免疫し、２４時間後にＳＦ８３００でＩＶ感染させた。感染から１４時間後にマウスを安楽死させ、その心臓をＣＦＵ計数のために処理した。ＬＣ１０で受動免疫したマウスは、Ｒ３４７対照を受けたマウスと比較して、心臓ＣＦＵの有意な減少を示した（図２）。

ＩＶ感染から２４〜７２時間後に、血液中の細菌数に対するＬＣ１０予防の作用も評価した。感染マウスの血流中の細菌数は、７２時間後、Ｒ３４７処置マウスでは約１０³ｃｆｕのままであった。しかし、ＬＣ１０予防は、試験した全ての時点で細菌負荷を減少させ、最大の減少は、７２時間の時点で２桁分の減少であった（図３）。これらの結果は、ＡＴが、敗血症の進行に重要であり、ＬＣ１０によるＡＴの阻害は、血流及び心臓における細菌ｃｆｕを低減し、致死量の黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）によるＩＶ攻撃後の生存を促進することを示している。

実施例３．免疫無防備状態の肺炎モデルの作製
免疫無防備状態の個体、特に好中球減少症に罹患している個体は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）感染の危険性が増大する（Ａｎｄｒｅｗｓ及びＳｕｌｌｉｖａｎ，２００３；Ｂｏｕｍａ ｅｔ．ａｌ．，２０１０）。免疫無防備状態の個体における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）肺炎の予防に使用する抗ＡＴ抗体の有効性を調べるために、免疫無防備状態のマウス肺炎モデルを作製し、使用した。免疫無防備状態の個体の集団において感染を模倣するために、マウスの白血球（好中球、リンパ球及び血小板を含む）を枯渇させることがわかっているアルキル化剤であるシクロホスファミドの投与により、マウスを好中球減少症にした（Ｚｕｌｕａｇａ，ｅｔ．ａｌ．，２００６）。

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける循環免疫細胞を＞９０％減少させるのに必要な最適シクロホスファミド（ＣＰＭ）を決定するために、実験を実施した。ＣＰＭ粉末を最終濃度２０ｍｇ／ｍＬまで滅菌注射用蒸留水に溶解させた。２０匹のマウス群を、様々なＣＰＭ用量レジメンで腹腔内注射により第０及び３日に処置した。５匹のマウス群を第０、１、４及び６日に死なせ、心臓穿孔により血液をＶａｃｕｔａｉｎｅｒ ＥＤＴＡ採血管に採取した。次に、Ｓｙｓｍｅｘ自動化血液分析器を用いて、白血球百分率（ＷＢＣ）（好中球、リンパ球）を取得した。

マウス肺炎モデル
細菌攻撃用量の調製
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＳＦ８３００を、５０ｍＬのトリプチックソイブロス（ＴＳＢ）中で、２５０ｒｐｍにて振盪しながら、３７℃で一晩培養した。１０ｍＬの一晩の培養物を１Ｌの新鮮なＴＳＢに添加し、３７℃で振盪しながら、６００ｎｍでの光学密度（ＯＤ６００）０．８まで細菌を増殖させた。４℃で１５分間８０００ｒｐｍの遠心分離により細菌を回収し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄した。遠心分離により細菌を再度回収し、最終細菌株約２×１０¹⁰ｃｆｕ／ｍＬまで、１０％グリセロールを含むＰＢＳ中に再懸濁させた。

免疫無防備状態のマウス肺炎モデル
初めに、免疫無防備状態のマウスにおける最小致死黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）用量を攻撃用量滴定実験で特定した。２回目のＣＰＭ投与から２４時間後に、免疫無防備状態のマウスをイソフルオランで麻酔した後、左右の鼻孔に５０μＬの黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）（１×１０⁷〜２×１０⁸ＣＦＵ）を接種した。回復のためにマウスを仰臥位で檻に配置し、７日間にわたり致死性について観察した。

実施例４．好中球減少性肺炎における抗ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈ）ＡＴ抗体の予防効果
免疫無防備状態の肺炎モデルにおける抗ＡＴｍＡｂの効能
この実験で用いるマウスは３０匹で、これらをランダムに３つの群に分けた。感染の４日及び１日前に、マウスにＣＰＭを投与した。各群にＬＣ１０（４５若しくは１５ｍｇ／ｋｇ）又はＲ３４７（４５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを投与し（第−１日）、２４時間後に黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＳＦ８３００（５×１０⁷）による鼻腔内（ＩＮ）攻撃を実施し、生存を最大７日間観察した。ログランク検定を用いて、統計的有意性を決定した。

免疫不全の確認
好中球などの全ＷＢＣ数を９０％減少する最適ＣＰＭ用量レジメンを決定するために実験を実施した。２０匹のマウス群を、６つの異なるＣＰＭ用量レジメンで第０及び３日に処置した。第０、１、４、及び６日に、用量群毎に５匹からの血液試料を採取し、Ｓｙｓｍｅｘ自動化血液分析器を用いて、全ＷＢＣ数及び百分率を実施した。第４及び６日に、群６のマウス（１回目ＣＰＭ用量１５０ｍｇ／ｋｇ；２回目ＣＰＭ用量１００ｍｇ／ｋｇ［ＣＰＭ１５０／１００］は、非処置のマウスと比較して、全ＷＢＣの９０％減少を示した。この群では、第４及び６日に、好中球及びリンパ球の９０％減少が見られた（図４）。第７日に白血球が回復し始めた。これらの結果は、以前報告されたもの（Ｚｕｌｕａｇａ ｅｔ．ａｌ．，２００６）と一致する。従って、免疫無防備状態のマウスにおけるＬＣ１０予防を評価するために、ＣＰＭ１５０／１００用量を選択した。

免疫無防備状態の肺炎モデルにおける細菌攻撃用量の決定
免疫無防備状態のマウスにおける最小致死攻撃用量を決定するために、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）ＳＦ８３００を、５匹のマウス群に対するＩＮ攻撃により滴定した（１×１０⁷〜２×１０⁸ＣＦＵ）。７日間にわたり致死性を観察した。最も低い致死用量は、５×１０⁷ＣＦＵであったため、これを、ＬＣ１０予防を評価するための用量として選択した。

ＬＣ１０は、免疫無防備状態の肺炎マウスにおける生存を増加する
免疫無防備状態のマウスにおけるＬＣ１０予防の効果を理解するために、ＣＰＭを注射したマウスに、ＬＣ１０（４５又は１５ｍｇ／ｋｇ）又は４５ｍｇ／ｋｇのＲ３４７を投与し、２４時間後に５０μＬの細菌懸濁液（５×１０⁷ＣＦＵのＳＦ８３００）によるＩＮ攻撃を実施し、前述のように致死性を観察した。

４５又は１５ｍｇ／ｋｇのＬＣ１０による受動免疫は、Ｒ３４７対照と比較して生存率の有意な増加をもたらした（Ｐ＜０．０００１）（図６）。この試験で、マウスが免疫無防備状態であることを確認するために、第−４、−３、１、０、２、及び３日に、５匹の非感染マウス群から、血液試料を採取した。全ＷＢＣ数及びＷＢＣ百分率を取得したが、これらのマウスについて、第−４〜−２日の間に全ＷＢＣ、並びに好中球及びリンパ球の９０％減少が認められた。マウスは、第０〜２日に重度の好中球減少（≦１０好中球／μＬ血液）を示した（図７）。ゆえに、ＬＣ１０による予防は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）好中球減少マウス肺炎モデルにおける重症度を軽減することができる。

結論
好中球及びリンパ球を含む循環白血球の＞９０％減少を引き起こすシクロホスファミドを用いて、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による免疫無防備状態マウス肺炎モデルを作製した。マウスは、重度の好中球減少（≦１０好中球／μＬ血液）を示した。ＬＣ１０による予防は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）好中球減少マウス肺炎モデルにおける生存率を有意に改善した。これらの結果は、シクロホスファミドの投与により好中球減少症にしたマウスの黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の２４時間前に、ＬＣ１０による受動免疫が、生存を有意に改善することを示している。従って、以上のことから、抗ＡＴ抗体は、免疫無防備状態の患者において疾患を予防することができることが明らかである。

本出願に引用した全ての文献、特許、雑誌論文及びその他の試料は、参照により本明細書に組み込むものとする。

添付の図面を参照にしながら、いくつかの実施例と一緒に本発明を十分に説明してきたが、様々な変更及び改変が当業者には明らかとなり得ることは理解すべきである。かかる変更及び改変は、添付の特許請求の範囲によって定められる本発明の範囲に、そこから逸脱しない限り、含まれるものとする。

Claims (16)

1. 哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性敗血症を予防する、又はその重症度を軽減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む方法。
2. 哺乳動物対象の血流又は心臓における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌負荷を低減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む方法。
3. 哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）凝集及び／又は血栓塞栓性病変形成を低減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む方法。
4. 前記対象の血流又は心臓における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌負荷が低減される、請求項１に記載の方法。
5. 前記対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細菌凝集及び／又は血栓塞栓性病変形成が低減される、請求項１に記載の方法。
6. 免疫無防備状態の哺乳動物対象における黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）関連性肺炎を予防する、又はその重症度を軽減する方法であって、有効量の単離抗黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）α毒素（抗ＡＴ）抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む方法。
7. 前記哺乳動物対象が、ヒトである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記単離抗ＡＴ抗体又はその抗原結合断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記抗体が、全長抗体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記抗体が、Ｆｃ変異領域を含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記単離抗体又はその抗原結合断片が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）α毒素ポリペプチドに免疫特異的に結合し、且つ
    （ａ）配列番号７、１０、１３又は６９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号８、１１、１４、１７、７０又は７５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号９、１２、１５、１８、１６、６５、６６、６７、７１、７２、７６又は７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号１又は４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号２、５、７３又は７７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び
    （ｆ）配列番号３、６、６４、６８又は７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
    を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７、８、９、１、２及び３；配列番号１０、１１、１２、１、２及び３；配列番号１３、１４、１５、４、５及び６；配列番号７、１７、１８、１、２及び３；配列番号７、８、１６、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６４；配列番号７、８、６６、１、２及び６４；配列番号７、８、６７、１、２及び６８；配列番号７、８、６７、１、２及び６４；配列番号７、８、７８、１、２及び６４；配列番号７、８、６５、１、２及び６８；配列番号６９、７０、７１、１、２及び６８；配列番号７、８、７２、１、７３及び７４；配列番号６９、７５、７１、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、２及び６８；配列番号６９、７５、７６、１、７７及び７４；配列番号６９、７０、７１、１、７７及び７４のアミノ酸配列に対応する、請求項１１に記載の方法。
13. 前記単離抗体又はその抗原結合断片が、（ｉ）配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメインを含み、及び（ｉｉ）配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む、請求項１１又は１２に記載の方法。
14. 前記単離抗体又はその抗原結合断片が、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、７９、５９、６１、又は６２の重鎖可変ドメインと、配列番号１９、２１、２３、２５、２７、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０又は６３の軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記ＶＨ及びＶＬが、配列番号２０及び１９；配列番号２２及び２１；配列番号２４及び２３；配列番号２６及び２５；配列番号２８及び２７；配列番号４１及び４２；配列番号４３及び４４；配列番号４５及び４６；配列番号４７及び４８；配列番号４７及び４８；配列番号４９及び５０；配列番号５１及び５２；配列番号５１及び５２；配列番号５３及び５４；配列番号５５及び５６；配列番号５７及び５８；配列番号５９及び６０；配列番号６１及び５８；配列番号６２及び５８；配列番号６２及び６３；配列番号７９及び６３のアミノ酸配列に対応する、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記単離抗体がさらにＦｃ変異ドメインを含み、ここで、前記抗体は、配列番号８０に対応するＶＨ−ＩｇＧ１−ＹＴＥ及び／又は配列番号８１に対応するＶＬ−κを含む、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の方法。

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