JP2015526398A - 新たな水酸基ベニバナ黄色素ナトリウム - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は新たな水酸基ベニバナ黄色素ナトリウムに関して、具体的に、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムおよびその調製方法、凍結乾燥粉末注射薬及び医薬用途にかかわっている。当該発明は薬物化学の分野に認められる。
漢方薬ベニバナはキク科植物Carthamus tinctouiusL.の乾燥花で、一般的な鬱血を放散して血液の循環を活性化させる漢方薬として、冠状動脈性心臓病、狭心症などの諸血液循環障害疾患の治療に用いる。水酸基ベニバナ黄色素A(hydroxysafflor yellow A)はシングルカルコン配糖体構造を有する化合物であり、ベニバナ薬理効能の最効果的な水溶性部位として、血小板活性化因子に誘発される血小板凝集と解放を抑制することでき、血小板活性化因子と血小板受容体との結合を競合に抑制することができ、それに、ベニバナ黄色素の鬱血を放散して血液の循環を活性化させる効果的な成分である。研究によって、多面の心血管薬理作用を有し、抗凝固、線溶促進、抗血栓形成、微小循環を改善することなどができる。
本発明は、既有技術の欠点を解決するために、新たな水酸基ベニバナ黄色素A化合物を提供する。この新規化合物は、純度が98%以上になり、不純物の数が5以下に抑えられて、冠状動脈心臓病、狭心症、脳卒中等の諸血液循環障害疾患の治療への応用において、水酸基ベニバナ黄色素Aよりもっと安全で、有効で制御可能なモノマー化合物になる。
本発明は式(I)に示す水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを提供することを目的とする:
(1)ベニバナの抽出:ベニバナを原料とし、水の抽出によって水酸基ベニバナ黄色素Aのある抽出液が得られた;
(2)強酸性陽イオン交換樹脂(H形)への転化:前記(1)により得られた抽出液を強酸性陽イオン交換樹脂(H形)カラムに入れて溶離液を回収し、あとは、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アルキルアミン或いはアルキルアンモニウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム或いは炭酸カルシウムを添加して、水酸基ベニバナ黄色素Aを水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムになるよう形成して水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を得られる;
(3) マクロ孔質樹脂の分離:前記(2)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液がマクロ孔質樹脂カラムを通して分離され、水を溶離剤として溶離液を回収し、減圧濃縮によって水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム粗製品を得られた;
(4)デキストランゲルカラムクロマトグラフィーによる分離:前記(3)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム粗製品はデキストランゲルクロマトグラフィーによって分離され、水を溶離剤として、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を回収する;
(5)限外ろ過:前記(4)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を濃縮し、かつろか、或いは遠心をした後、分画分子量8000-10000ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過を行い、乾燥後、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムになることを特徴とする。
(1)ベニバナの抽出:ベニバナを原料として、水によりベニバナ黄色素が含まれる抽出液を得られる;
(2) マクロ孔質樹脂による分離:前記(1)により得られたベニバナ黄色素が含まれる抽出液はマクロ孔質樹脂カラムによって分離され、水を溶離剤として、溶離液を回収し、減圧濃縮によって粗製品となるベニバナ黄色素を得られる;
(3)デキストランゲルカラムクロマトグラフィーによる分離:前記(2)により得られたベニバナ黄色素の粗製品がデキストランゲルクロマトグラフィーによって分離され、水を溶離剤として、ベニバナ黄色素が含まれる溶離液を回収する;
(4)限外ろ過:前記(3)により得られたベニバナ黄色素含有溶離液を濃縮し、かつろか、或いは遠心をした後、分画分子量8000-10000ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過を行い、乾燥後、ベニバナ黄色素粉末になる。
(1)ベニバナを原料とし、抽出は水温度50〜100℃で行い、水による抽出2〜3回、1回あたり0.5〜24時間になり、抽出ための水の使用量はベニバナ生薬重量の10〜30倍で、抽出後、薬のかすを除去し、抽出液を5〜30℃まで冷却してから、2〜24時間放置される;
(2)前記(1)により得られた抽出液を流速1〜30ml/minとして強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に通して、あとは、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アルキルアミン或いはアルキルアンモニウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム或いは炭酸カルシウムを添加し、水酸基ベニバナ黄色素Aを水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムに形成して、請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの溶離液を回収する;
(3)前記(2)により得られた溶離液がマクロ孔質樹脂カラムによって分離され、精製水を溶離剤として、溶離流速10〜30ml/min下で溶離液を回収し、減圧濃縮を行い、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの濃縮液粗製品を得られる;
(4)前記(3)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム濃縮液粗製品にろか、或いは遠心をしてから、デキストランゲルクロマトグラフィーで分離され、精製水を溶離剤として、溶離流速を1〜10cm/hまで抑えて、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を回収し、その後、減圧濃縮をして濃縮液を得られる;
(5)前記(4)により得られた濃縮液にろか、或いは遠心をしてから、分画分子量8000-10000ダルトンの限外濾過膜で限外ろ過をして限外ろ過液を得られる;
(6)前記(5)により得られた限外ろ過液を凍結乾燥させると、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム精製品を得られる;
(7)前記(6)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム精製品を注射用水に溶解させて、0.22μmのリポアフィルター或いは分画分子量8000-10000ダルトンの限外ろ過膜でろかをしてから、バイアルに分注され、それが凍結乾燥されると、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの凍結乾燥粉末注射薬になる。
薬力学的研究試験一:
水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムのラット急性心筋梗塞に対する保護作用
被験薬物
注射用ベニバナ黄色素(50mg/バイアル)、出所:浙江永寧薬業股
水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム(実施例1による);
水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム(実施例5による)。
動物:雄性SDラット32匹、体重250〜350g.
試験組分け及び投与量の設定:
群別 動物数 投与量
1.生理食塩水群 8 1ml/kg
2.注射用ベニバナ黄色素群 8 40mg/kg
3.水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム 8 40mg/kg
4.水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム 8 40mg/kg
試験方法
1.ラット急性心筋梗塞モードの調製:3%のペントバルビタールナトリウム45mg/kgを投与し、腹腔注射によって麻酔させる。右側がぴくぴく動いて、静脈にチューブを挿入し、機械的通気を行い、呼吸数は60回/minで、換気量は約10ml/kgである。針状電極を四肢及び胸の皮下に挿入して心電図を監視する。胸骨の左外側から0.5cmところに皮膚を縦向き切開して、順次に皮下組織に鈍的切開を行い、結紮し、かつ大胸筋、小胸筋、肋間筋を切断し、左胸骨の4番目の肋間の心臓先端には脈搏がいちばん強いところで開胸し、心膜を切り、心膜のハンモックを作って、左心室の表面の血管を露出させる。6-0糸を左心耳の下部まで約2mmにある浅筋膜層(即ち冠状動脈前下行枝)に通すように巻き付けている。そのまま15min保持される。万一、不整脈或いは70mmHg(9.31KPa)以下の動脈収縮血圧がそのまま5min以上になった場合、当該動物を廃棄する。糸を15min通してから静脈投与を行い、投与10min後、冠状動脈を結紮し、結紮時間は4時間である。
2.不整脈の評点:冠状動脈を結紮した後の30min内に、不整脈の厳重程度について評点を行う。
3.心筋酵素に対する検査:試験終了後、静脈血を約2mlとり、4°C、4000/minで5min遠心を行った上、脱離液を心筋酵素的検査に回収する。測定項目:LDH、AKP、CK。
4.心筋梗塞区域の面積への測定:冠状動脈を結紮した後、4hにわたって、左心室の前壁に穿刺し、そして炭素インクを注射した上、動物を殺して心臓をとり、生理食塩水で洗浄され、血のついた汚れを除去し、血管、脂肪等の心筋組織以外のものを取り除いて、吸収紙で水分を吸収し、重量を量る。心臓の尖端から心根部まで心室を約2mmのスライスになるよう平行に切って、注入領域(インク注入領域)や虚血領域(インクなし注入領域)を分離させて、虚血領域に重量を量り、0.05%のNBT溶液に入れ、37℃の恒温水槽に15min染色される。NBTは、活性組織内の基質、補酵素及びデヒドロゲナーゼ等を青紫色に染色することができるが、壊死組織の中の基質、酵素等がなくなったので、着色できない。そのため、非梗塞心筋領域はNBTによりダークブルーに染色されたが、梗塞心筋領域は着色されていないことをよく見える。各々の心筋において、染色された非梗塞心筋を取り除いた心筋に重量を量り、危険区における梗塞心筋領域の重量百分比(梗塞区の重量/危険区の重量*100%)を計算する。
統計学的処理:
試験データは平均値±標準許容差で表示され、分散分析により統計的検査を実施し、P<0.05の場合は顕著な統計学的違いがあることを表す。
一、ラット急性心筋虚血による不整脈に対する影響
ラット冠状動脈を結紮した後の5min内に現れた不整脈は30min続いて、そのうち10minはピークになる。試験結果によると、ベニバナ黄色素、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムや水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの静脈投与は不整脈の軽減に働きをしたが、それより、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの投与による効果はもっと明らかであることが分かる。
本試験結果によると、注射用ベニバナ黄色素、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムや水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの静脈投与は、ラット血清LDH、CKの上昇を抑えるが、それより、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの投与による効果はもっと明らかであることが分かる。
1.注射用ベニバナ黄色素、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムや水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムはラット冠状動脈結紮後の不整脈厳重程度を著しく降下することができるが、それより、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの投与による効果はもっと明らかであると認められる;
2.ラット心筋梗塞領域の減少では、注射用ベニバナ黄色素より、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの投与による効果はもっと明らかであると認められる;
3.ラット血清LDH、CKの抑えでは、注射用ベニバナ黄色素より、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの投与による効果はもっと明らかであると認められる;
4.効果では、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムと水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムとは著しい差別がないと認められる。
水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムと水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム静脈注射の急性脳虚血に対する予防・治療作用。
注射用ベニバナ黄色素(50mg/バイアル)、出所:浙江永寧薬業股
水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム(実施例1による);
水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム(実施例5による)。
試験の詳細な説明:
1.犬の生体外心臓や脳血管に対する選択性: この試験はBeagle 犬の脳底動脈リングと冠状動脈リングを体外血管測定装置に固定させて、調整テンションセンサを調整し、かつバースカップ液にフェニルエピネフリン10-6 mol /L を添加し、血管に適当な張力を維持するように行われていて、そのままバースカップ液に5minおきに、1mlあたり10mgの分量通り注射用水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム或いは水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムを血管リングの反応がとても弱くなり、或いは反応しなくなったまで(一般、投与回数は4-5回)添加する。血管収縮や拡張変化値を計算した結果によると、注射用水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムの心臓の血管リングに対する拡張作用は31.6%、脳血管リングに対する拡張作用は73.1%になる;注射用水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムの心臓の血管リングに対する拡張作用は37.1%,脳血管リングに対する拡張作用は69.7%になる。注射用水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムと水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムとは脳血管に対して立派な選択性と拡張作用を有する。両者は著しい差異がないことが分かる。
(一)水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムと水酸基ベニバナ黄色素Aの安定性に対する観察
被験薬物
水酸基ベニバナ黄色素A CN102675379A方法による 純度89.9%
水酸基ベニバナ黄色素A 本特許に基づく酸性化による純度99.2%
水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム 自社製(実施例3による) 純度99.3%
水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム 自社製(実施例1による) 純度98.5%
水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム 自社製(実施例5による) 純度98.8%
水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム 自社製(実施例8による) 純度99.0%
水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン 自社製(実施例10による) 純度99.0%
水酸基ベニバナ黄色素Aテトラメチルアンモニウム 自社製(実施例11による) 純度99.0%
図1:式(IV)の水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム核磁気共鳴1H-NMR
図2:式(IV)の水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム核磁気共鳴13C-NMR
図3:式(V)の水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム核磁気共鳴1H-NMR
図4:式(V)の水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム核磁気共鳴13C-NMR
〔具体的実施形態〕
実施例1:水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム(本発明の式IIの化合物)
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整った001*7強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルの水酸化カリウムを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムの粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムの粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム精製粉末を得られる。純度が98.5%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.55%左右になる。
1.赤外スペクトル
装置型番:Bruker VECTOR-22型赤外スペクトル装置
装置型番:アメリカFINNIGAN社液質併用多段イオンイオントラップ質量分析器(LCQ-DECAXP)
試験条件:ESI
質量スペクトルMS
+c ESI 651.06 (M)+
-c ESI 611.24(M-K)-
3.核磁気共鳴水素スペクトルと炭素スペクトル
装置型番:BRUCKER AVANCE III 500型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件:溶剤:DMSO,内部標準:TMS
実施例2:水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム(本発明の式IIの化合物)
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整ったHB-8強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルの水酸化カリウムを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aカリウム精製粉末を得られる。純度が98.6%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.50%左右になる。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整った001*7強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルの水酸化アンモニウムを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム精製粉末を得られる。純度が99.3%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.45%左右になる。
1.赤外スペクトル
装置型番:Bruker VECTOR-22型赤外スペクトル装置
装置型番:アメリカFINNIGAN社液質併用多段イオンイオントラップ質量分析器(LCQ-DECAXP)
試験条件:ESI
質量スペクトルMS
+c ESI 613.17 (M)+
-c ESI 611.22(M-H)-
3.核磁気共鳴水素スペクトルと炭素スペクトル
装置型番:BRUCKER AVANCE III 500型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件:溶剤:DMSO,内部標準:TMS
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整ったHB-8強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルの水酸化アンモニウムを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aアンモニウム精製粉末を得られる。純度が99.4%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.50%左右になる。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整った001*7強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより半分モルのCa(OH)2を添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム精製粉末を得られる。純度が98.8%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.50%左右になる。
装置型番:アメリカFINNIGAN社液質併用多段イオンイオントラップ質量スペクトル系(LCQ-DECAXP)
試験条件:ESI
質量スペクトルMS
+c ESI 1263.08 (M)+
-c ESI 611.29 (M)-
2.核磁気共鳴水素スペクトルと炭素スペクトル
装置型番:BRUCKER AVANCE III 500型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件:溶剤:DMSO、内部標準:TMS
結果は図1や2に示す。
化学シフトδ(ppm) 3.01〜4.15 は糖部分水素G1〜G6 とG'1〜G'6に区分される。4.29〜4.88は糖水酸基の水素に区分される。7.33(1H)7.38(1H)は 8と9に区分される。6.77〜7.47(4H)は11〜15に区分される。18.74(1H)は3-OHに区分される。4.72(1H)は 4-OHに区分される;9.82(1H)は13-OHに区分される。
化学シフトδ(ppm) 60.32(1C)、61.83(1C)(二級炭素)は糖部分炭素G6、G’6に区分される; 68.92、69.28、69.38、71.04、73.71、78.33、79.36、79.81、80.95、85.67(10C)( 三級炭素)は糖部分炭素G1〜G5和G’1〜G’5に区分される; 115.71(2C)( 三級炭素) は12と14に区分される;129.58(2C)( 三級炭素)は11と15に区分される;122.81(1C)136.56(1C)( 三級炭素)は8と9に区分される;
化学シフトδ(ppm)189.21、105.74、85.59、183.92、99.72(5C)はそれぞれ1〜2、4〜6に区分される;
179.88(1C)、127.17(1C)、158.66(1C)はそれぞれ7、10、13に区分される。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整ったHB-8強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより半分モルのCa(OH)2を添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム精製粉末を得られる。純度が98.6%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.50%左右になる。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。マクロ孔質樹脂分離カラムに前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、ベニバナ黄色素粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。ベニバナ黄色素Aカルシウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、ベニバナ黄色素を含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色のベニバナ黄色素粉末を得られる。純度が90%である。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解させてからHClで酸化させて、冷所に2〜24時間放置した後、水酸基ベニバナ黄色素A固体を析出した。固体をろ過した後、水を入れて溶解させてから水酸基ベニバナ黄色素Aにより半分モルに相当する水酸化カルシウムを添加し、凍結乾燥した後、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aカルシウム精製品を得られ、純度は99.2%で、ベニバナで計算すると、収率は、0.7%前後である。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整った001*7強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより半分モルの水酸化マグネシウムを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム粉末を得られる。純度が99.0%である。ベニバナ別計算をすると、回収率は0.5%左右になる。
装置型番:アメリカFINNIGAN社液質併用多段イオンイオントラップ質量スペクトル系(LCQ-DECAXP)
試験条件:ESI
質量スペクトルMS
+c ESI 1247.01 (M)+
-c ESI 611.35(M-H)-
2.核磁気共鳴水素スペクトルと炭素スペクトル
装置型番:BRUCKER AVANCE III 500型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件:溶剤:DMSO,内部標準:TMS
結果は図3と4に示す。
化学シフトδ(ppm) 2.85〜4.11は糖部分水素G1〜G6とG’1〜G’6に区分される;4.38〜4.81は糖水酸基の水素に区分される;7.30(1H)7.38(1H)は8と9に区分される;6.74〜7.41(4H)は11〜15に区分される;18.68(1H)は3-OHに区分される;4.72(1H)は4-OHに区分される;9.80(1H)は13-OHに区分される。 水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウムの13C-NMRデータ区分
化学シフトδ(ppm) 61.26(1C)、62.26(1C)(二級炭素)は糖部分炭素G6、G’6に区分される; 69.24、70.03、71.51、74.13、79.70、80.54、81.33、85.91(8C)(三級炭素)は糖部分炭素G1〜G5とG’1〜G’5部分に区分される; 116.09(2C)(三級炭素)は12と14に区分される;129.90(2C)(三級炭素)は11と15に区分される;122.81(1C)136.56(1C)(三級炭素)は8と9に区分される;
化学シフトδ(ppm)195.38(1C)は3に区分される;179.83(1C)、127.62(1C)、159.01(1C)はそれぞれ7、10、13に区分される。
実施例9:水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム(即ち本発明の式Vの化合物)
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。マクロ孔質樹脂分離カラムに前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、ベニバナ黄色素粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。ベニバナ黄色素粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、ベニバナ黄色素を含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色のベニバナ黄色素粉末を得られる。純度が90%である。ベニバナ黄色素粉末に水を入れて溶解させてからHClで酸化させて、冷所に2〜24時間放置した後、水酸基ベニバナ黄色素A固体を析出した。固体をろ過した後、水を入れて溶解させてから水酸基ベニバナ黄色素Aにより半分モルに相当する水酸化マグネシウムを添加し、凍結乾燥した後、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aマグネシウム精製品を得られ、純度は99.2%で、ベニバナで計算すると、収率は、0.7%前後である。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整った001*7強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルのトリエチルアミンを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミンを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン精製粉末を得られる。純度が99.0%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.45%左右になる。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整ったHB-8強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルのトリエチルアミンを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミンを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aトリエチルアミン精製粉末を得られる。純度が99.0%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.47%左右になる。
秤量されたベニバナに12.5倍薬材重量の脱イオン水を入れて、100℃で20-25分間抽出し、ろ過し、あとは、濾滓に10倍薬材重量の脱イオン水を入れて前記の手順を1回繰り返す。二回の抽出液を混合し、室温まで冷却され、遠心機で分離した上、遠心分離液を取る。バランスの整った001*7強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に前記の分離液を徐々に加えて、カラムの高さ直径比1:10、カラム容量500ml、流速3ml/min、流出液を回収し、水酸基ベニバナ黄色素Aにより等モルのテトラメチルアンモニウムを添加し、あとは、マクロ孔質樹脂分離カラムに徐々に加えて、カラムの高さ直径比は1:12で、ローディング流速は1分あたり10mlである。ローディング終了後、常温の脱イオン水を使わって20ml/分の流速で溶離させる。溶離液を60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aテトラメチルアンモニウム粗製品濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液100mlを得られる。水酸基ベニバナ黄色素Aテトラメチルアンモニウム粗製品濃縮液をセファデックスLH-20カラムに加えて、カラムの高さ直径比は1:5で、ローディング量はカラム床の体積の10%で、溶離流速は5ml/分で、水酸基ベニバナ黄色素Aテトラメチルアンモニウムを含有する部分を回収する。回収液が60℃で減圧濃縮されると、水酸基ベニバナ黄色素Aテトラメチルアンモニウム精製濃縮液を得られる。ベニバナ別計算をすると、1kgのベニバナから濃縮液35〜50mlを得られた。それを凍結乾燥すると、薄黄色の水酸基ベニバナ黄色素Aテトラメチルアンモニウム精製粉末を得られる。純度が99.0%で、ベニバナ別計算をすると、回収率は0.45%左右になる。
1.質量スペクトル
装置型番:アメリカFINNIGAN社液質併用多段イオンイオントラップ質量分析器(LCQ-DECAXP)
試験条件:ESI
質量スペクトルMS
-c ESI 611.22(M-H)-
2.核磁気共鳴水素スペクトルと
装置型番:BRUCKER AVANCE III 500型超伝導核磁気共鳴装置
試験条件:溶剤:DMSO,内部標準:TMS
Claims (10)
- 請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの調製方法は、ベニバナの抽出、強酸性陽イオン交換樹脂(H形)への転化、マクロ孔質樹脂による分離、デキストランゲルクロマトグラフィーによる分離と限外ろ過がある。それは、
(1)ベニバナの抽出:ベニバナを原料とし、水の抽出によって水酸基ベニバナ黄色素Aのある抽出液が得られた;
(2)強酸性陽イオン交換樹脂(H形)への転化:前記(1)により得られた抽出液を強酸性陽イオン交換樹脂(H形)カラムに入れて溶離液を回収し、あとは、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アルキルアミン或いはアルキルアンモニウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム或いは炭酸カルシウムを添加して、水酸基ベニバナ黄色素Aを水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムになるよう形成して水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を得られる;
(3)マクロ孔質樹脂の分離:前記(2)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液がマクロ孔質樹脂カラムを通して分離され、水を溶離剤として溶離液を回収し、減圧濃縮によって水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム粗製品を得られた;
(4)デキストランゲルカラムクロマトグラフィーによる分離:前記(3)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム粗製品はデキストランゲルクロマトグラフィーによって分離され、水を溶離剤として、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を回収する;
(5)限外ろ過:前記(4)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を濃縮し、かつろか、或いは遠心をした後、分画分子量8000-10000ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過を行い、乾燥後、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムになることを特徴とする。 - 請求項3に記載される方法において、前記(2)に記載される陽イオン交換樹脂は強酸性陽イオン交換樹脂(H形)で、それは001*7イオン交換樹脂或いはマクロ孔質樹脂HB-8から選出されたものである。
- 請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの調製方法であり、それはベニバナの抽出、マクロ孔質樹脂の分離、デキストランゲルクロマトグラフィーによる分離、限外ろ過、酸性化、ナトリウム塩への転化がある。それは、
(1)ベニバナの抽出:ベニバナを原料として、水によりベニバナ黄色素が含まれる抽出液を得られる;
(2) マクロ孔質樹脂による分離:前記(1)により得られたベニバナ黄色素が含まれる抽出液はマクロ孔質樹脂カラムによって分離され、水を溶離剤として、溶離液を回収し、減圧濃縮によって粗製品となるベニバナ黄色素を得られる;
(3)デキストランゲルカラムクロマトグラフィーによる分離:前記(2)により得られたベニバナ黄色素の粗製品がデキストランゲルクロマトグラフィーによって分離され、水を溶離剤として、ベニバナ黄色素が含まれる溶離液を回収する;
(4)限外ろ過:前記(3)により得られたベニバナ黄色素含有溶離液を濃縮し、かつろか、或いは遠心をした後、分画分子量8000-10000ダルトンの限外ろ過膜による限外濾過を行い、乾燥後、ベニバナ黄色素粉末になる。
(5)酸性化:前記(4)により得られたベニバナ黄色素粉末に水や酸を加え、2〜24時間放置されると、薄黄色固態水酸基ベニバナ黄色素Aが析出できて、上層部の液体をろかして除去させる。
(6)ナトリウム塩への転化:前記(5)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aに水を加えた上、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アルキルアミン或いはアルキルアンモニウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム或いは炭酸カルシウムを添加して、水酸基ベニバナ黄色素Aを水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムに形成した後、限外ろ過膜による限外濾過し、ろ液を凍結乾燥すると、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを得られることを特徴とする。 - 医薬組成物であり、それは請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムを含め活性成分及び薬学的に許容され得る担体を補助的な材料とする。
- 請求項6に記載される医薬組成物においては、凍結乾燥粉末注射薬或いは注射剤である。
- 請求項7に記載される医薬組成物においては、凍結乾燥粉末注射薬であり、それは下記の手順によって調製される:
(1)ベニバナを原料とし、抽出は水温度50〜100℃で行い、水による抽出2〜3回、1回あたり0.5〜24時間になり、抽出ための水の使用量はベニバナ生薬重量の10〜30倍で、抽出後、薬のかすを除去し、抽出液を5〜30℃まで冷却してから、2〜24時間放置される;
(2)前記(1)により得られた抽出液を流速1〜30ml/minとして強酸性陽イオン交換樹脂(H形)に通して、あとは、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、アルキルアミン或いはアルキルアンモニウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム或いは炭酸カルシウムを添加し、水酸基ベニバナ黄色素Aを水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムに形成して、請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの溶離液を回収する;
(3)前記(2)により得られた溶離液がマクロ孔質樹脂カラムによって分離され、精製水を溶離剤として、溶離流速10〜30ml/min下で溶離液を回収し、減圧濃縮を行い、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの濃縮液粗製品を得られる;
(4)前記(3)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム濃縮液粗製品にろか、或いは遠心をしてから、デキストランゲルクロマトグラフィーで分離され、精製水を溶離剤として、溶離流速を1〜10cm/hまで抑えて、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム含有溶離液を回収し、その後、減圧濃縮をして濃縮液を得られる;
(5)前記(4)により得られた濃縮液にろか、或いは遠心をしてから、分画分子量8000-10000ダルトンの限外濾過膜で限外ろ過をして限外ろ過液を得られる;
(6)前記(5)により得られた限外ろ過液を凍結乾燥させると、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム精製品を得られる;
(7)前記(6)により得られた水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム精製品を注射用水に溶解させて、0.22μmのリポアフィルター或いは分画分子量8000-10000ダルトンの限外ろ過膜でろかをしてから、バイアルに分注され、それが凍結乾燥されると、水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウムの凍結乾燥粉末注射薬になる;
そのうち:
前記の強酸性陽イオン交換樹脂(H形)は001*7イオン交換樹脂或いはマクロ孔質樹脂HB-8を利用する;
前記のマクロ孔質樹脂はマクロ孔質樹脂HZ801を利用する;
前記のデキストランゲルクロマトグラフィーはデキストランゲルカラムクロマトグラフィーLH-20を利用する。 - 請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム、或いは請求項6〜8のいずれかに記載される医薬組成物の薬調製における実用において、前記薬物は抗PAF又はADPにより誘発された血小板凝集作用を有する。
- 請求項1、2に記載される水酸基ベニバナ黄色素Aナトリウム、或いは請求項6〜8のいずれかに記載される医薬組成物の薬調製における実用において、前記薬物は心筋虚血、脳虚血或いは血栓症により誘発される病気に関する治療、予防に用いられる。
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