JP2015524672A5

JP2015524672A5 -

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Publication number: JP2015524672A5
Application number: JP2015527493A
Authority: JP
Filing date: 2013-08-08
Publication date: 2017-07-13

Description

１つの態様において、異種プロモーターと、配列番号１〜配列番号３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される核酸配列に対する８０％の同一性を有する１つ又はそれ以上の制御配列とに機能的に連結された、目的とする少なくとも１つの構造遺伝子を含む核酸構築物が提供される。

本発明の１つの好ましい実施形態において、目的とする１つ又はそれ以上の構造的核酸には、特定の作物品種において互いに関連して「組まれた」本発明の１つ又はそれ以上のＵｂｉ１ＵＴＲ／制御配列が隣接する。表現「組まれた」又は表現「組む」の使用によって、目的とする多数の構造遺伝子（目的とするそれぞれの構造遺伝子が、好ましくは商業的に望ましい形質を付与する）がただ１つだけの作物品種（同系交配又は雑種）に遺伝子組換えにより導入されていることが本明細書中では意味される。例えば、組まれた遺伝子を有するトウモロコシ雑種は、除草剤抵抗性遺伝子（例えば、グリホサート抵抗性遺伝子）だけでなく昆虫抵抗性のための遺伝子（例えば、Ｃｒｙ１ＦＢ．ｔ．遺伝子）を含有する場合がある。

いくつかの実施形態において、本発明のＵｂｉ１ＵＴＲ／制御配列の１つ又はそれ以上が、ホトラブダスから得られるＴｏｘｉｎＡ遺伝子に機能的に連結され、この場合、この遺伝子はその後、ただ１つだけの作物品種において１つ又はそれ以上の殺虫剤遺伝子及び／又は除草剤抵抗性遺伝子と一緒に組まれる。いくつかの実施形態において、殺虫剤遺伝子がバチルス・チューリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）又はゼノラブダス種（Xenorhabdus spp.）から得られるであろうし、除草剤遺伝子が、グルホシナート抵抗性遺伝子、グリホサート抵抗性遺伝子、イミダゾリノン抵抗性遺伝子又は２，４−Ｄ抵抗性遺伝子或いはスルホニルウレア抵抗性遺伝子の１つ又はそれ以上であろう。当然のことながら、これらの「組まれた」殺虫剤遺伝子又は除草剤遺伝子のどれもが、本発明のＵｂｉ１ＵＴＲに機能的に連結される場合がある。

安定な遺伝子組換え植物のタンパク質分析：安定な遺伝子組換えＴ０植物（１コピー〜２コピーの導入遺伝子）を成熟植物の作製のために温室に移す。それぞれの構築物について、８個〜１２個のＴ０植物をＣｒｙ３４タンパク質及びＡＡＤ−１タンパク質の葉での発現について調べる。Ｔ１分析のために、事象あたり８個〜１０個の植物をタンパク質分析のために植える。データを得て、ＺｍＵｂｉ１３’ＵＴＲを有する構築物と、ＳｔＰｉｎＩＩ３’ＵＴＲを有する構築物との間で比較する。結果は、Ｃｒｙ３４タンパク質産生における一貫した２．５倍超の増大が、ＳｔＰｉｎＩＩ３’ＵＴＲ（例えば、ｐＤＡＢ１０８７４６）と比較して、ＺｍＵｂｉ１３’ＵＴＲ（例えば、ｐＤＡＢ１０８７４４）を使用する場合、トウモロコシ植物のＶ４及びＶ１２の両方の葉段階において認められることを示す。したがって、提供されるＺｍＵｂｉ１３’ＵＴＲは、遺伝子組換え形質を作製することにおいて有用である。加えて、ＺＭＥＸＰ９３９６．１及びＺＭＥＸＰ９７０７．１の３’ＵＴＲ（例えば、ｐＤＡＢ１１２３９６及びｐＤＡＢ１１２３９７）からのデータは、Ｃｒｙ３４タンパク質の発現が堅固であることを示す。

上記の開示によって提供される本発明の態様として、以下のものが挙げられる。
[１] 異種プロモーターと、配列番号１〜３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される核酸配列に対する８０％の同一性を有する１つ以上の制御配列とに機能的に連結された、目的の少なくとも１つの構造遺伝子を含む核酸構築物。
[２] 前記目的の少なくとも１つの構造遺伝子は、非生来的な表現型を植物において付与する遺伝子を含む、[１]に記載の核酸構築物。
[３] 前記目的の少なくとも１つの構造遺伝子は、昆虫抵抗性又は除草剤抵抗性／耐性を植物において付与する遺伝子を含む、[１]に記載の核酸構築物。
[４] 前記１つ又はそれ以上の制御配列は、配列番号１〜配列番号３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される、[１]に記載の核酸構築物。
[５] 前記１つ又はそれ以上の制御配列は、配列番号４〜配列番号１５からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である、[１]に記載の核酸構築物。
[６] アグロバクテリウム媒介形質転換のためのバイナリーベクターを含む[１]に記載の核酸構築物。
[７] 安定的に形質転換されて遺伝子組換え植物に導入される[１]に記載の核酸構築物。
[８] 前記植物は単子葉植物である、[６]に記載の核酸構築物。
[９] 前記植物は双子葉植物である、[６]に記載の核酸構築物。
[１０] 選択マーカーを含む[１]に記載の核酸構築物。
[１１] 前記選択マーカーはアリールオキシアルカノアートジオキシゲナーゼを含む、[１０]に記載の核酸構築物。
[１２] 前記アリールオキシアルカノアートジオキシゲナーゼはＡＡＤ−１又はＡＡＤ−１２である、[１１]に記載の核酸構築物。
[１３] [１]に記載される核酸構築物を含むベクター。
[１４] [１]に記載される核酸構築物により形質転換された植物又は植物細胞。
[１５] 前記少なくとも１つの目的遺伝子と重ねられたさらなる目的の構造遺伝子をさらに含む[１４]に記載の植物又は植物細胞。
[１６] 異種プロモーターと、配列番号１〜配列番号３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される核酸配列に対する８０％の同一性を有する１つ又はそれ以上の制御配列とを機能的に連結することを含む、ペプチド又はタンパク質を組換え産生させるための方法。
[１７] 前記１つ又はそれ以上の制御配列は、配列番号４〜配列番号１５からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である、[１６]に記載の方法。
[１８] 異種プロモーターと、配列番号１〜配列番号３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される核酸配列に対する８０％の同一性を有する１つ又はそれ以上の制御配列とを機能的に連結することを含む、遺伝子の発現を植物又は植物細胞において増大させるための方法。
[１９] 前記１つ又はそれ以上の制御配列は、配列番号１〜配列番号３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される、[１８]に記載の方法。
[２０] 前記１つ又はそれ以上の制御配列は、配列番号４〜配列番号１５からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である、[１８]に記載の方法。
[２１] 導入遺伝子を植物において発現させるための、配列番号１〜配列番号３、それらの相補体及びそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの制御配列の使用。
[２２] 導入遺伝子を植物において発現させるための、配列番号４〜配列番号１５からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である１つ又はそれ以上の制御配列の使用。

Claims

目的の少なくとも１つの構造遺伝子と、植物または植物ウイルスのプロモーターと、１つ以上の制御配列からなる遺伝子とを含む核酸構築物であって、
前記目的の少なくとも１つの構造遺伝子は、前記プロモーターおよび前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子と機能的に連結されたものであり、
前記１つ以上の制御配列は、配列番号１の核酸配列およびその相補体の配列から選択される核酸配列に対して９０％、９５％、９８％または１００％の同一性を有し、
前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子は目的の少なくとも１つの構造遺伝子の発現を増強する、核酸構築物。
前記目的の少なくとも１つの構造遺伝子は、昆虫抵抗性又は除草剤抵抗性／耐性を植物において付与する遺伝子を含む、請求項１に記載の核酸構築物。
前記１つ以上の制御配列は、配列番号１の核酸配列およびその相補体の配列から選択される、請求項１に記載の核酸構築物。
前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子は、配列番号４〜７からなる群から選択される配列からなるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である、請求項１に記載の核酸構築物。
アグロバクテリウム媒介形質転換のためのバイナリーベクターを含む請求項１に記載の核酸構築物。
安定的に形質転換されて遺伝子組換え植物に導入される請求項１に記載の核酸構築物。
前記植物は単子葉植物である、請求項５に記載の核酸構築物。
前記植物は双子葉植物である、請求項５に記載の核酸構築物。
選択マーカーを含む請求項１に記載の核酸構築物。
前記選択マーカーはアリールオキシアルカノアートジオキシゲナーゼを含む、請求項９に記載の核酸構築物。
前記アリールオキシアルカノアートジオキシゲナーゼはＡＡＤ−１又はＡＡＤ−１２である、請求項１０に記載の核酸構築物。
請求項１に記載される核酸構築物を含むベクター。
請求項１に記載される核酸構築物により形質転換された植物又は植物細胞。
目的とする前記少なくとも１つの遺伝子と一緒に組まれた目的のさらなる構造遺伝子をさらに含む、請求項１３に記載の植物又は植物細胞。
ペプチド又はタンパク質を組換え産生させるための方法であって、
植物または植物ウイルスのプロモーターと１つ以上の制御配列からなる遺伝子とを、前記ペプチド又はタンパク質をコードする目的の構造遺伝子に機能的に連結することを含み、
前記１つ以上の制御配列は配列番号１の核酸配列およびその相補配列から選択される核酸配列に対して９０％、９５％、９８％または１００％の同一性を有し、
前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子は目的の構造遺伝子の発現を増大させる、方法。
前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子は、配列番号４〜７からなる群から選択される配列からなるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である、請求項１５に記載の方法。
目的の遺伝子の発現を植物又は植物細胞において増大させるための方法であって、
植物または植物ウイルスのプロモーターと１つ又はそれ以上の制御配列とを、目的の遺伝子に機能的に連結することを含み、
前記１つ以上の制御配列は配列番号１の核酸配列およびその相補配列から選択される配列に対して９０％、９５％、９８％または１００％の同一性を有し、
前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子は目的の遺伝子の発現を増大させる、方法。
前記１つ以上の制御配列は、配列番号１の核酸配列およびその相補配列から選択される配列を有する、請求項１７に記載の方法。
前記１つ以上の制御配列からなる遺伝子は、配列番号４〜７からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを使用して増幅可能である、請求項１７に記載の方法。
前記目的の少なくとも１つの構造遺伝子は、非生来的な表現型を前記植物又は植物細胞に付与する遺伝子を含む、請求項１７に記載の核酸構築物。
導入遺伝子を植物において発現させるための、配列番号１の核酸配列およびその相補配列からなる群から選択される少なくとも１つの制御配列からなる遺伝子の使用。