JP2015522598A - 肝細胞癌を処置するためのｖｅｇｆｒ−３阻害剤の使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、肝細胞癌を処置するための血管内皮細胞増殖因子受容体３阻害剤の使用に関する。

Description

本発明は、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＨＣＣ）を処置するための血管内皮細胞増殖因子受容体３阻害剤の使用に関する。

肝細胞癌（ＨＣＣ）は、世界で５番目に多い固形腫瘍であり、その発生率は２５年にわたり着実に増加している（非特許文献１）。ＨＣＣは、致死的な疾患であり、世界での年間死亡者数は６００，０００人を超える。特にアジア−太平洋領域において、極めて高い要求が未だ満たされていない（非特許文献２）。中国では、毎年約４００，０００件の新たな症例が診断されている。その大多数は進行した段階で診断され、処置の選択肢は限られている。２０％しか手術に適格でなく、再発率は非常に高い。今日まで、多標的キナーゼ阻害剤（ｍｕｌｔｉ−ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）であるソラフェニブのみがＨＣＣ治療のために承認されている。ソラフェニブは、プラセボよりもＯＳ（ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ、全生存期間）を２〜３カ月向上させるが、毒性との関連が強いために５％未満の患者にしか適さない（非特許文献３）。

血管内皮細胞増殖因子受容体３（Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３、ＶＥＧＦＲ−３）は、ＶＥＧＦＣおよびＶＥＧＦＤの２つのリガンドを認識するチロシンキナーゼ受容体である。ＨＣＣにおける腫瘍関連リンパ脈管新生は、予後不良および患者の生存率の低さと関係する（非特許文献４；非特許文献５）。正常な肝臓の検体とは対照的に、ほとんどのＨＣＣ組織の検体は、ＶＥＧＦ−Ｄに対して強い免疫反応性を示した（非特許文献６）。さらに臨床試験データにより、開始時のＶＥＧＦ−Ｃのレベルが高いことがスニチニブ（全ＶＥＧＦＲ阻害剤）による処置後の延長されたＯＳと有意に関係したことが示唆される（非特許文献７）。さらに、ＶＥＧＦＲ−３の発現は、Ｂ型肝炎Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）陽性ＨＣＣ小結節を＞７５％上方調節することが記述され、ＨＣＣ患者の生存率とは反比例した（非特許文献８）。さらに、ＶＥＧＦＲ−３を発現し得るマクロファージの浸潤は、肝臓内転移、腫瘍再発、および患者の生存率の低さと関連している（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１）。しかしながら今日までに、ＨＣＣを処置するための臨床段階において報告された特定のＶＥＧＦＲ−３阻害剤はない。

２０１２年５月１６日に出願された特許文献１（「‘１４５出願」）には、式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒはメトキシ基またはヒドロキシル基である）が、ＶＥＧＦＲ−３阻害剤として開示されている。

国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５９１４５号

Ｔｈｏｍａｓら、「Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ Ｐｌａｎｎｉｎｇ Ｍｅｅｔｉｎｇ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１０；２８（２５）：３９９４〜４００５頁 Ｋｕｄｏら、「Ａｓｉａｎ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｒｅｐｏｒｔ： ｅｘｐｅｒｔ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ａｎｄ ａｄｖａｎｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ Ａｓｉａ」、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１１．８１：１５８〜６４頁 Ｓｏｎｇら、「Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｎｔｅｒ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｏｆ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１１（１２）：１２３３〜８頁 Ｔｈｅｌｅｎら、「Ｔｕｍｏｒ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ Ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ」、Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．（２００９）１６：１２２２〜１２３０頁 Ｔｈｅｌｅｎら、「Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ」、Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０５（５）：１１２３〜３２頁、２０１０ Ｔｈｅｌｅｎら、「ＶＥＧＦ−Ｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｓｐｒｅａｄ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ：１２２、２４７１〜２４８１頁２００８ Ｈａｒｍｏｎら、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ−ｒｅｌａｔｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｓ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ」、Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１１年７月２５日；９：１２０ Ｌｉａｎら、「Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｘ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３ ｉｎ Ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」、ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ、Ｖｏｌ．４５、Ｎｏ．６、２００７ Ｌｉｎら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｈｅｒｅｎｓ ｊｕｎｃｔｉｏｎ」、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８０（２００６）３０４２〜３０５０頁 Ｚｈｕら、「Ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｆｔｅｒ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８年６月１日；２６（１６）：２７０７〜１６頁 Ｊｕら、「Ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌｓ ｐｒｅｄｉｃｔ ｐｏｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｆｔｅｒ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ」、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．２００９年４月；１３１（４）：４９８〜５１０頁

今般、式（Ｉ）
の化合物が、ＨＣＣの処置のためにも有用であることが見出されている。

本発明は、薬学的有効量の式（Ｉ）
（式中、Ｒはメトキシ基またはヒドロキシル基である）
の化合物またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、肝細胞癌の処置方法に関する。

また本発明は、肝細胞癌の処置に使用するための、上記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象とする。

また本発明は、肝細胞癌の処置に使用する薬物の調製のための、上記式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を対象とする。

本発明の上述および他の態様、特徴および利点は、添付の図面も参酌しながら以下の詳細な説明からより良く理解することができるが、これらは全て例示のために示されているにすぎず、本発明を限定するものではない。

マウス肝細胞癌異種移植モデルにおける実施例１の化合物のインビボ評価の結果を示す図である。 化学的に誘発した肝細胞癌に対する実施例１の化合物のインビボ評価の結果を示す図である。

上記で使用するときおよび本発明の説明を通じて、次の用語は、別途指示がない限り、以下の意味を有すると理解される：

「本発明の化合物」は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を意味する。

「肝細胞癌」は、肝細胞から発生する肝がんの１つの型である。肝硬変（瘢痕化）に起因して現れる肝障害は、肝がんの主要な危険因子である。しかし、ＨＣＣには肝硬変が存在しない肝固形癌も含まれる。

「患者」にはヒトと他の哺乳動物との両方が含まれる。

「薬学的に許容される塩」とは、式Ｉの化合物の相対的に無毒な無機および有機の酸付加塩ならびに塩基付加塩を指す。これらの塩類は、式Ｉの化合物の最終的な単離および精製の間にｉｎ ｓｉｔｕで調製され得る。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１〜１９頁（１９７７）を参照されたい。

「薬学的に有効な量」は、所望の治療効果を生じさせるために有効な本発明による化合物または組成物の量を意味する。

「処置すること」または「処置」は、症状を緩和すること、症状の原因を一時的にもしくは永久的に除去すること、または指定された障害もしくは状態の症状の発現を遅延させることを意味する。

本発明の特定の一実施形態は、薬学的有効量の２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、肝細胞癌の処置方法に関する。

本発明の別の実施形態は、肝細胞癌の処置に使用するための、化合物２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の特定の一実施形態は、薬学的有効量の２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オンを、それを必要とする患者に投与することを含む、肝細胞癌の処置方法に関する。

本発明の別の実施形態は、肝細胞癌の処置に使用するための、化合物２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オンに関する。

本発明の別の特定の実施形態は、肝細胞癌を処置するための医薬の調製に使用するための、式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒはメトキシ基またはヒドロキシル基である）、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の特定の実施形態は、肝細胞癌を処置するための医薬の調製に使用するための、２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン、またはその薬学的に許容される塩に関する。

本発明の別の特定の実施形態は、肝細胞癌を処置するための医薬の調製に使用するための、２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オンに関する。

本発明の特定の態様は、医薬組成物の形態で投与される本発明の化合物を提供する。本発明による医薬組成物は、本発明の化合物および薬学的に許容される担体を含む。

実際上、本発明の化合物は、ヒトおよび他の動物に、経口または静脈内投与により、単位投薬形態で、慣用の薬学的添加剤との混合物として、投与することができる。

経口投与に適した本発明の医薬組成物は、例えば、所定の量の活性成分をそれぞれ含有するカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤、または散剤もしくは顆粒剤のような固体投薬形態；、水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液、または水中油型エマルジョンもしくは油中水型エマルジョンのような液体投薬形態として、別々の単位で提供され得る。

静脈内投与に適した本発明の医薬組成物は、液体溶液、特に生理学的に適合する緩衝液、例えば、ハンクス溶液またリンゲル溶液で製剤化し得る。さらに組成物は、固体形態に製剤化し、使用直前に再溶解または懸濁することもできる。凍結乾燥形態も含まれる。製剤は、滅菌されており、エマルジョン、懸濁液、水性および非水性注射液を含み、これらは懸濁化剤、および増粘剤、および酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、ならびに製剤を等張にする溶質を含有していてもよく、対象となるレシピエントの血液に応じて適切に調整されたｐＨを有する。

本発明の組成物における活性成分（複数可）の実際の投与量レベルは、患者に対する特定の組成物および投与方法に応じた所望の治療応答を得るために有効な活性成分（複数可）の量が得られるように変更してもよい。したがって、任意の特定の患者に対して選択される投与量レベルは、所望の治療効果、投与経路、所望の治療期間、疾患の病因および重症度、患者の状態、体重、性別、食事および年齢、各活性成分の種類および効能、吸収、代謝および／または排泄の速度ならびに他の要因を含む種々の要因によって決まる。

単回用量または分割用量で患者に投与される本発明の化合物の合計の１日用量は、例えば、１日当たり約０．００１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重、特に０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ／日であり得る。組成物における活性成分の割合（％）は変更が可能であるが、適切な投薬量が得られるように比率を構成すべきである。投薬単位組成物は、合計すると１日用量になるように使用できるようなその分割量を含有してもよい。いくつかの単位投薬形態をほぼ同時に投与してもよいことは明らかである。投薬量は、所望の治療効果を得るために必要な頻度で投与され得る。一部の患者はより高用量またはより低用量に迅速に応答する場合があり、より少ない維持用量で十分な場合もある。他の患者については、個々の特定の患者の生理学的要件に従って、１日当たり１〜４用量の割合で長期処置を行うことが必要な場合もある。言うまでもないが、他の患者については、１日当たり最大１または２用量を処方することが必要であろう。

本発明は、本発明を例証する以下の非限定的な実施例を参照することによって、より良く理解し得る。しかし、それらの実施例はいかなる意味でも本発明の広い範囲を制限するものと解釈されるべきではない。

〔実施例１〕
２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン
工程１：６−クロロ−２−エチルアミノ−ニコチン酸
エチルアミン溶液（７０％水溶液）１８０ｍｌ中２，６−ジクロロニコチン酸１８．０ｇ（８４．４ｍｍｏｌ）の溶液を周囲温度で７２時間、撹拌した。次いで、過剰のアミンを減圧下で蒸発させ、生成物が沈殿するまで、１０％酢酸水溶液を添加した。ベージュ色の固体をスピンフィルタ乾燥し、冷水で濯ぎ、オーブンで乾燥させた。予想した生成物１０．５ｇを得た。
融点＝１５８〜１６０℃
収率＝６２％。

工程２：６−クロロ−２−エチルアミノ−ニコチノイルフルオリド
ピリジン２ｍｌ（２４．８ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリフルオロトリアジン４．２ｍｌ（４９．８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１２５ｍｌ中６−クロロ−２−エチルアミノ−ニコチン酸５．０ｇ（２４．８ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を周囲温度で３時間撹拌し、次いで濾過した。固形物をジクロロメタン５０ｍｌで濯ぎ、濾液を氷冷水６０ｍｌで２度洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。生成物５．０１ｇがオレンジ色油の形態で得られ、これをさらに精製することなく使用した。
収率＝９９％。

工程３：１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボアルデヒド
鉱油（５０％、０．５２ｍｏｌ）中の水素化ナトリウム２０．８ｇの油性懸濁液を、鉱油が含まれなくなるように撹拌しながらヘキサンで３回洗浄し、ＤＭＦ４００ｍｌに懸濁した。周囲温度で撹拌しながらイミダゾール−２−カルボアルデヒド５０．０ｇ（０．５２０ｍｏｌ）を懸濁液に添加した。１．５時間後、２−（トリメチルシラニル）エトキシメチルクロリド１０１ｍｌ（０．５７２ｍｏｌ）を添加し、反応物をさらに１時間撹拌した。次いで過剰の水を懸濁液に添加し、反応混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。次いで原料をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）で精製し、ＳＥＭ保護イミダゾール−２−カルボアルデヒド８５．０ｇ（０．３７６ｍｏｌ）を得た。
収率＝７２％
ＭＨ＋＝２２７．１（Ｃ_１０Ｈ_１８Ｎ_２Ｏ_２Ｓｉ、Ｍｒ＝２２６．３５）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ ９．８３（ｓ，１Ｈ）；７．８６（ｓ，１Ｈ）；７．３９（ｓ，１Ｈ）；５．７５（ｓ，２Ｈ）；３．５８（ｔ，２Ｈ）；０．９５（ｔ，２Ｈ）；０．０２（ｓ，９Ｈ）

工程４：［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−アセトニトリル
トシルメチルイソシアニド１．７３ｇ（８．８４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＥ１０ｍｌに溶解させ、−６０℃に冷却した。この温度で最初にカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド１．９８ｇを添加し、次いでゆっくりとＤＭＥ５ｍｌ中１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボアルデヒド２．００ｇ（８．８４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。−６０℃で２時間撹拌後、反応物を０℃に到達させ、メタノール（１２３．６０ｍｍｏｌ）５ｍｌを溶液に添加した。反応物を、周囲温度でさらに２４時間撹拌し、４０℃で２時間撹拌した。過剰の水を添加し、溶液をジクロロメタンで３回抽出した。有機相を、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒を蒸発後、原料を逆相カラムクロマトグラフィー（水０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、ＳＥＭ保護イミダゾール−アセトニトリル０．８７ｇ（０．３６７ｍｏｌ）を得た。
収率＝４１％
ＭＨ＋＝２３８．１（Ｃ_１１Ｈ_１９Ｎ_３ＯＳｉ、Ｍｒ＝２３７．３８）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ７．６６（ｓ，１Ｈ）；７．３９（ｓ，１Ｈ）；５．５３（ｓ，２Ｈ）；４．５２（ｓ，２Ｈ）；３．５５（ｔ，２Ｈ）；０．９２（ｔ，２Ｈ）；０．０２（ｓ，９Ｈ）

工程５：３−（６−クロロ−２−エチルアミノ−ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシ−２−［１−（２−（トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−アクリロニトリル
カリウムｔｅｒｔ−ブチレート０．２８３ｇ（２．５３ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ１０ｍｌ中［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−アセトニトリル０．６００ｇ（２．５３ｍｍｏｌ）の０℃溶液に少量ずつ添加した。混合物を周囲温度で４５分間撹拌し、次いで０℃に再度冷却した。次いでＴＨＦ１０ｍｌ中６−クロロ−２−エチルアミノ−ニコチノイルフルオリド０．５１２ｇ（２．５３ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、媒体を周囲温度で一晩撹拌し、再度０℃に冷却し、第２の等量のカリウムｔｅｒｔ−ブチレート（０．２８３ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で２時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液５０ｍｌを添加し、ｐＨを２Ｎ ＨＣｌで７に調整し、次いで酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。原料をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝９０：１０）でさらに精製し、標題化合物４１８ｍｇ（収率＝３８％）を得た。
ＭＨ＋＝４２１（Ｃ_１９Ｈ_２６ＣｌＮ_５Ｏ_２Ｓｉ、Ｍｒ＝４１９．９９）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ１３．３５（ｓ，１Ｈ）；７．７０（ｄ，１Ｈ）；７．４６（ｓ，１Ｈ）；７．２３（ｓ，１Ｈ）；７．０８（ｔ，１Ｈ）；６．５８（ｄ，１Ｈ）；５．５９（ｓ，２Ｈ）；３．５８（ｔ，２Ｈ）；３．３４（ｄｑ，２Ｈ）；１．１３（ｔ，３Ｈ）；−０．０３（３ｓ，９Ｈ）。

工程６：２−アミノ−７−クロロ−１−エチル−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン
カリウムｔｅｒｔ−ブチレート０．１１２ｇ（１ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ５ｍｌ中の１．５３−（６−クロロ−２−エチルアミノ−ピリジン−３−イル）−３−ヒドロキシ−２−［１−（２−（トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−アクリロニトリル下で調製した中間体４１８ｍｇ（１ｍｍｏｌ）の０℃の冷溶液に少量ずつ添加した。混合物を周囲温度で４８時間撹拌し、その後、飽和塩化アンモニウム水溶液５０ｍｌを添加し、ｐＨを２Ｎ ＨＣｌで７に調整し、反応混合物を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させ、標題化合物４００ｍｇを得た。
収率＝３８％
ＭＨ＋＝４２１（Ｃ_１９Ｈ_２６ＣｌＮ_５Ｏ_２Ｓｉ、Ｍｒ＝４１９．９９）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ８．５０（ｄ，１Ｈ）；８．０３（ｓ，１Ｈ）；７．９８（ｓ，１Ｈ）；７．７８（ｓ，２Ｈ）；７．６０（ｓ，１Ｈ）；５．４９（ｓ，２Ｈ）；４．５８（ｑ，２Ｈ）；３．５７（ｔ，２Ｈ）；１．４２（ｔ，３Ｈ）；０．８５（ｔ，２Ｈ）；−０．０３（３ｓ，９Ｈ）。

工程７：（±）−２−メチル−ブタ−３−イン−１，２−ジオール
市販のテトラヒドロフラン中塩化エチニルマグネシウムの０．５Ｍ溶液をテトラヒドロフラン２００ｍｌで希釈し、０℃に冷却した。次いで、テトラヒドロフラン２００ｍｌ中ヒドロキシアセトンの溶液を添加し、混合物を周囲温度で３時間撹拌した。反応混合物を冷却し、ＮＨ_４Ｃｌ水溶液を添加した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空（およそ２００ミリバール）下で濃縮した。最後に、予想した生成物２０ｇを茶色油の形態で得て、これをさらに精製することなく（定量的粗収率）ラセミ形態で使用するか、または分取ＨＰＬＣによりキラルＨＰＬＣカラムで純粋な鏡像体を分離することもできた。光学的に純粋な鏡像体を得るために、対応するラセミ混合物を、キラル固定相（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈカラム、２５０×２１ｍｍ、５ｍｍ）上で移動相として：ＣＯ_２／２−プロパノール（７０％／３０％）を流量６０ｍｌ／分、圧力１００バール、またはイソヘキサン／エタノール（７０／３０）と０．３％ＴＦＡとの混合物を流量１２０ｍｌ／分のいずれかを用いて、分取クロマトグラフィーにより処理した。

溶離および蒸発の後、各鏡像体を単離し、それぞれの化学的純度および鏡像体純度を当業者に公知の分析方法で決定した。

工程８：２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン
アルゴン充填マイクロ波反応フラスコに、２−アミノ−７−クロロ−１−エチル−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン５００ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）、（３Ｒ）−１−メトキシ−２−メチル−ブタ−３−イン−２−オール２０４ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）二塩化物８４ｍｇ（０．１２０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）３０ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（脱気済み）２ｍｌ、トリエチルアミン（脱気済み）２ｍｌを入れ、反応混合物が１２０℃で２４時間維持されるようにマイクロ波照射した。溶媒を蒸発させ、固形物をＤＭＦ３ｍｌ中に再懸濁し、濾過した。次いで、濾液をＨＰＬＣによって精製し、標題化合物のＴＦＡ塩を４３０ｍｇ（０．７０２ｍｍｏｌ）得た。
収率＝５９％。
ＭＨ＋＝４９８．２（Ｃ_２５Ｈ_３５Ｎ_５Ｏ_４Ｓｉ、Ｍｒ＝４９７．６７）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ８．３９（ｄ，１Ｈ）；７．９５（ｓ，１Ｈ）；７．８８（ｓ，１Ｈ）；７．６０（ｓ，２Ｈ）；７．４８（ｄ，１Ｈ）；５．２５（ｓ，２Ｈ）；４．５０（広幅シグナル，２Ｈ）；３．５２〜３．４０（広幅シグナル，水のピーク＋４Ｈ）；１．４８（ｓ，３Ｈ）；１．２５（ｔ，３Ｈ）；−０．１２（３ｓ，９Ｈ）。

工程９：２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オン
ＳＥＭ保護ナフチリジノン１．８、２４０ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ１．２ｍｌおよびＤＣＭ１．２ｍｌに０℃で溶解させた。溶液を、分析用ＨＰＬＣによりナフチリジノンの完全な脱保護が示されるまで３〜５℃で一晩維持した。溶液を、過剰なＮａＨＣＯ_３水溶液を添加することによって中和した。次いで混合物を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。そのように得た原料を、シリカゲル（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝４：１）で精製し、保護されていない標題化合物１４３ｍｇ（定量的収率）を得た。
ＭＨ＋＝３６８．２（Ｃ_１９Ｈ_２１Ｎ_５Ｏ_３、Ｍｒ＝３６７．４１）
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，５００ＭＨｚ）：δ１３．１５（ｓ，１Ｈ）；１１．５５（ｂ ｓ，１Ｈ）；８．５９（ｄ，１Ｈ）；８．１０（ｂ ｓ，１Ｈ）；７．４７（ｄ，１Ｈ）；７．２５（ｓ，１Ｈ）；７．０２（ｓ，１Ｈ）；５．８５（ｓ，１Ｈ）；４．
５８（広幅シグナル，２Ｈ）；３．５１〜３．３７０（広幅シグナル，水のピーク＋４Ｈ）；１．４８（ｓ，３Ｈ）；１．２５（ｔ，３Ｈ）
Ｒｔ（分析用ＨＰＬＣ）：４．８０６分

〔実施例２〕
２−アミノ−７−（（３Ｒ）３，４−ジヒドロキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−１−エチル−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン
工程１：２−アミノ−１−エチル−７−（３，４−ジヒドロキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−１−エチル−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン
実施例１の工程８による手順に従って、実施例１の工程６に記載した中間体（２−アミノ−７−クロロ−１−エチル−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン）および実施例１の工程７に記載した中間体（（±）−２−メチル−ブタ−３−イン−１，２−ジオール）を使用して、標題化合物を得た。
ＭＨ＋＝３５４．１６（Ｃ_１８Ｈ_１９Ｎ_５Ｏ_３、Ｍｒ＝３５３．３８）
Ｒｔ（分析用ＨＰＬＣ）：４．４８分

工程２：２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）３，４−ジヒドロキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−１−エチル−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン
工程１で得られたラセミ化合物に、Ｂｅｒｇｅｒ分取ＳＦＣ、ＵＶ検出２３０ｎｍ、固定相Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ２０×２５０ｎｍ ５μｍ、移動相６５％／３５％ＣＯ２／（ＭｅＯＨ＋０．５％イソプロピルアミン）、５０ｍｌ／分、１００バールの方法を使用して分取Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣ精製を行い、Ｒ鏡像体とＳ鏡像体に分離した。

キラル純度は、Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣ法、Ｂｅｒｇｅｒ ＳＦＣ、ＵＶ検出２１０ｎｍ、固定相Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（２５０ｍｍ×４．６）５μｍ、移動相６５／３５％ＣＯ２／（イソプロパノール＋０．５％イソプロピルアミン）、２．４ｍｌ／分、１００バールを使用して制御した。
Ｒ鏡像体（Ｒｔ＝６．９分、鏡像体純度＝９７．９％）

工程３：２−アミノ−７−（（３Ｒ）３，４−ジヒドロキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−１−エチル−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オン
実施例１の工程９による手順に従って、実施例２の化合物を黄色粉末として単離した。ＭＨ＋＝３５４．１６（Ｃ_１８Ｈ_１９Ｎ_５Ｏ_３、Ｍｒ＝３５３．３８）
Ｒｔ＝０．７７分
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ１３．１５（ｓ，１Ｈ）；１１．５５（ｂｓ，１Ｈ）；８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）；８．１０（ｂｓ，１Ｈ）；７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）；７．１５（ｓ，１Ｈ）；７．０２（ｓ，１Ｈ）；５．６（ｓ，１Ｈ）；５．１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）４．５３（ｂｄ，２Ｈ）；３．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４；１０．４Ｈｚ）；３．４１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４；１０．４Ｈｚ）１．４８（ｓ，３Ｈ）；１．２７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。

キラル純度は、Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣ法、Ｂｅｒｇｅｒ ＳＦＣ、ＵＶ検出２３０ｎｍ、固定相Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ（２５０ｍｍ×４．６）５μｍ、移動相６０／４０％ＣＯ２／（イソプロパノール＋０．５％イソプロピルアミン）、２．４ｍｌ／分、１００バールを使用して制御した。
Ｒ鏡像体（Ｒｔ＝８．３７分、鏡像体純度＝９９．２％）

分析法ＬＣ／ＵＶ／ＭＳ保持時間（Ｒｔ）検出
カラム：Ｍｅｒｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ＲＰ１８ｅ、１００×４．６ｍｍ、３．５μｍ
溶媒Ａ：Ｈ_２Ｏ／ＴＦＡ（９９．９／０．１）
溶媒Ｂ：ＡＣＮ／ＴＦＡ（９９．９／０．１）
流量：２ｍｌ／分
勾配（Ａ／Ｂ）：９８／２（０分）から０／１００（８分）から９８／２（１０分）
検出：２５４．１６ｎＭ

ＮＭＲ
１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ＮＭＲ分光計Ｂｒｕｋｅｒ２５０、３００、４００、または６００ＭＨｚを、ＤＭＳＯ−ｄ６で使用して、ＤＭＳＯ−ｄ５のピークを内部標準に用いて得た。

化学シフトδは、パート・パー・ミリオン（ｐａｒｔｓ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ、ｐｐｍ）で表した。

観察されたシグナルは以下のように表す：ｓ＝一重項；ｄ＝二重項；ｔ＝三重項；ｑ＝四重項；ｍ＝多重項または大きな一重項；ｂｒ＝幅広；Ｈ＝プロトン。

融点
融点はコフラーベンチで測定した。

薬理学的試験
Ｉ．実施例１の化合物のインビトロ評価
‘１４５出願は、実施例１および２の化合物が、組換えＶＥＧＦＲ−３ＴＫ活性とＨＥＫ細胞の自己リン酸化とをそれぞれ約２５ｎＭおよび４７ｎＭのＩＣ５０で阻害することを開示している。同じ分析法において、実施例１の化合物は、ＶＥＧＦＲ−２（９０ｎＭ〜１４０ｎＭ）およびＶＥＧＦＲ−１（＞１μＭ）に対するより低い活性を示した。初代リンパ細胞を用いた場合、ＶＥＧＦＣおよびＶＥＧＦＤ誘発増殖が約１０〜１５ｎＭのＩＣ５０で阻害されることから、本発明者らは、ＶＥＧＦＲ−３に対する活性が高いことを確認した。さらに本発明者らは、実施例１の化合物が、他の全ての試験したキナーゼ（８５種のキナーゼ）ならびに１０７種の受容体、酵素およびイオンチャネルと比較して、ＶＥＧＦＲ−３に対する選択性が高いことを実証した。

ＩＩ．マウス肝細胞癌異種移植モデルにおける実施例１の化合物のインビボ評価
ＨｅｐＧ２細胞株の同所性異種移植モデルにおける実施例１の化合物のインビボ抗腫瘍効果を評価した。ＨｅｐＧ２細胞をＳＣＩＤマウス（ＡＴＣＣから入手）の肝臓に注入し、細胞注入後１４日目に、マウスを２つの群：ビヒクルで処置する対照群および実施例１の化合物による処置群に無作為に分けた。処置は、メチルセルロース、トゥイーンをビヒクルとして１００ｍｇ／ｋｇで１日１回実施した。

腫瘍の大きさは、腫瘍を有する左葉の重さを２８日目に量ることにより測定した。実施例１の化合物による処置により、細胞注入後２８日目には、腫瘍担持肝臓葉の平均重量が顕著に３４％減少した（ｐ＝０．００１、スチューデントｔ検定）。正常な肝臓葉についても測定し、腫瘍担持マウスの葉から推定した。この事例において、実施例１の化合物は、腫瘍重量を６２％減少させた（図１参照）。

ＩＩＩ．マウスにおける化学的に誘発した肝細胞癌に対する実施例１の化合物のインビボ評価
ＤＥＮ（Ｎ−ジエチルニトロソアミン（Ｎ−ｄｉｅｔｈｙｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ））誘発マウスモデルをヒトＨＣＣについての代表的モデルとして検証した（Ｗｕら、Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２００９）１３５．９６９〜９８１頁；Ｃｈｕａｎｇら、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ（２０００）２１；３３１〜３３５頁）。

腫瘍開始は、Ｎ−ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）１０ｍｇ／ｋｇを５週齢の雄Ｃ３Ｈマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ ｒｉｖｅｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｆｒａｎｃｅ）に１回、腹腔内注射することにより達成した。

マウスはＤＥＮ投与後７カ月目から肝臓に腫瘍を発生させ始め、１２カ月後に発生率は１００％に達した。実施例１の化合物を、ＤＥＮ投与後１０カ月から１２カ月の間毎日、メチルセルロース、トゥイーンに懸濁後Ｐ．Ｏ．（経口）投与した。

体重は、処置の間の各週および１２カ月目に評価した。ナトリウムペントバルビタールの過剰投与によってマウスを殺し、肝臓を取り出して、重さを量った。肝臓当たりの腫瘍の数を数え、腫瘍体積をカリパスで測定した。腫瘍体積Ｖは、式Ｖ＝０．５２×ａ^２×ｂ（式中、「ａ」は最小腫瘍直径であり、「ｂ」は最大腫瘍直径である）を使用して計算した。

実施例１の化合物を用いた後処置により、１０カ月目の同じパラメーターと比較した場合、新たな位置での形成が抑制され腫瘍の成長が完全に阻止された。ビヒクル群と比較して、実施例１の化合物は、肝臓当たりの腫瘍の数を５０％、総腫瘍体積を８５％減少させた。さらに肝臓総重量も減少させ、ほぼ正常化した（図２参照）。

Claims (10)

1. 肝細胞癌の処置のための薬物の調製のための、式（Ｉ）：
   （式中、Ｒはメトキシ基またはヒドロキシル基である）
   の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
2. Ｒはメトキシ基である、請求項１に記載の使用。
3. Ｒはヒドロキシル基である、請求項１に記載の使用。
4. 化合物が、２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オンである、請求項１または２に記載の使用。
5. ２−アミノ−７−（（３Ｒ）３，４−ジヒドロキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−１−エチル−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オンである、請求項１または３に記載の使用のための化合物。
6. 肝細胞癌の処置に使用するための、式（Ｉ）：
   （式中、Ｒはメトキシ基またはヒドロキシル基である）
   の化合物またはその薬学的に許容される塩。
7. Ｒはメトキシ基である、請求項６に記載の使用のための化合物。
8. Ｒはヒドロキシル基である、請求項６に記載の使用のための化合物。
9. ２−アミノ−１−エチル−７−（（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メトキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−［１，８］−ナフチリジン−４−オンである、請求項６または７に記載の使用のための化合物。
10. ２−アミノ−７−（（３Ｒ）３，４−ジヒドロキシ−３−メチル−ブタ−１−イニル）−１−エチル−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−１，８−ナフチリジン−４（１Ｈ）−オンである、請求項６または８に記載の使用のための化合物。