EA027982B1 - Применение ингибиторов vegfr-3 для лечения гепатоклеточной карциномы - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к применению ингибиторов рецептора 3 фактора роста эпителия сосудов для лечения гепатоклеточной карциномы.

Description

Настоящее изобретение относится к применению ингибиторов рецептора 3 фактора роста эндотелия сосудов для лечения гепатоклеточной карциномы (НСС).

Гепатоклеточная карцинома является пятой наиболее распространенной солидной опухолью во всем мире, и ее сфера распространения стабильно увеличивается в течение 25 лет (ТНошаз е1 а1. Нера(осе11и1аг сагстоша: сопзепзиз гесошшепйайопз о£ (Не ΝαΙϊοηαΙ Сапсег 1пз(1(и(е Сйтса1 Тпа1з Р1аптпд Меейпд. I. С1т. Опсо1. 2010, 28(25):3994-4005). НСС является смертельным заболеванием с мировой ежегодной смертностью более чем 600000 чел. Неудовлетворенная потребность является крайне высокой в Азиатско-Тихоокеанском регионе (Кийо е1 а1. Аз1ап сопзепзиз ^огкзйор герог!: ехрег! сопзепзиз дшйеИпе £ог (Не шападешеп! о£ ш1егтеШа1е апй айуапсей Нера(осе11и1аг сагстоша т Аз1а. Опсо1оду 2011, 81:15864). В Китае каждый год диагностируется около 400000 новых случаев. Множество из них диагностируется на запущенных стадиях с ограниченными возможностями лечения. Только 20% подходят для хирургического лечения с очень высокой частотой рецидивов. До настоящего времени только Сорафениб, мультикиназный ингибитор, одобрен для лечения НСС. Он дает увеличение ОПЖ (О8) (общей продолжительности жизни) на 2-3 месяца > плацебо, и менее чем 5% пациентов являются подходящими из-за его высокой токсичности (8опд е1 а1. А зтд1е сеШет ехрепепсе о£ зогаГешЪ т айуапсей Нера(осе11и1аг сагстоша райеп(з: еуа1иайоп о£ ргодпозйс £ас(огз. Еиг. I. Саз(гоеп1его1 Нера(о1. 2011, (12):1233-8).

Рецептор-3 фактора роста эпителия сосудов (ΥΕΟΕΚ-3) представляет собой рецептор тирозинкиназы, который распознает два лиганда: УЕОЕС и ΥΕΟΕΌ. Ассоциированный с опухолью лимфангиогенез при НСС коррелирует с плохим прогнозом и выживаемостью пациентов (ТНе1еп е1 а1. Тишог-Аззос1а(ей Бушрйапдюдепезхз Согге1а(ез νίΐΐι Ргодпоз1з айег Кезесйоп о£ Нишап Нера(осе11и1аг Сагстоша. Апп. 8игд. Опсо1. (2009), 16:1222-1230; ТНе1еп е( а1. Тишог-аззос1а(ей апдюдепез1з апй 1ушрйапдюдепез1з согге1а(е νΐΐΕ ргодгеззюп о£ тйайерайс сЬо1апдюсагстоша. Аш. I. Саз(гоеп1его1. 105(5): 1 123-32, 2010). В отличие от образцов нормальной печени, большинство образцов ткани НСС выявили сильную иммунореактивность в отношении ΥΕΟΕ-Ό (ТНе1еп е( а1. ΥΕΟΕ-Ό ргошо(ез (ишог дго\\Й1 апй 1ушрйайс зргеай ш а шоизе шойе1 о£ Нера(осе11и1аг сагстоша 1п(. I. Сапсег. 122, 2471-2481, 2008). Кроме того, данные клинических исследований предполагают, что высокий уровень ΥΕΟΕ-С исходно был в значительной степени ассоциирован с продлением ОПЖ после лечения сунитинибом (пан-ΥΕΟΕΚ ингибитором) (Нагшоп е1 а1. МесЬашзш-ге1а(ей снси1айпд рго(етз аз Ъюшагкегз £ог сйтса1 оШсоше т райеп!з νίΐΐι ипгезес(аЪ1е йера(осе11и1аг сагстоша гесе1утд зитйтЪ, I. Тгапз1. Мей. 2011 1и1 25; 9:120). Более того, экспрессия ΥΕΟΕΚ-3 была описана как повышенная на >75% узлов НСС, положительных по X антигену гепатита В (НЪхАд), и, в свою очередь, связана с выживаемостью пациентов с НСС (Гшп е1 а1. Нераййз В х Апйдеп ир-геди1а(ез Υазси1а^ ΕпйοΐЬе1^а1 ΟϊΌνΐΙι Еас(ог РесерЮг 3 ш Нера(осагстодепез1з. НИРЛТОкОСУ, Υο1. 45, Ж. 6, 2007). Кроме того, инфильтрация макрофагами, которые могут экспрессировать ΥΕΟΕΚ-3, ассоциирована с внутрипеченочными метастазами, рецидивом опухоли и плохой выживаемостью пациентов. (Бт е1 а1. Масгорйаде асйуайоп тсгеазез (Не туаз1уе ргорегйез о£ йера(оша се11з Ъу йез(аЪШ/а(1оп о£ (Не аййегепз щпсйоп ΕΕΒ8 Бейегз 580 (2006), 3042-3050; ΖΗυ е1 а1. Н1дй ехргеззюп о£ шасгорйаде со1опу-зйши1айпд £ас(ог ш регйишога1 Нуег 11'ззие ΐδ аззос1а(ей νι'ΐΗ роог зигу1уа1 айег сигайуе гезесйоп о£ Нера(осе11и1аг сагстоша. I. С1т. Опсо1. 2008 1ип 1; 26 (16):2707-16; 1и е1 а1. Регйишога1 асйуа(ей йерайс з(е11а(е се11з ргейЮ роог сйтса1 оШсоше ш Нера(осе11и1аг сагстоша айег сигайуе гезесйоп. Аш. I. Сйп Ра(йо1. 2009 Арг; 131(4):498-510). Однако до настоящего времени не существует специфического ингибитора ΥΕΟΕΚ-3, который был представлен в клинических фазах для лечения НСС.

В Международной заявке РСТ/ΕР2012/059145 ('145 заявка), поданной 16 мая 2012 г., в качестве ингибитора ΥΕΟΕΚ-3 описано соединение формулы (I), где Κ представляет собой метокси или гидроксильную группу. В настоящее время было обнаружено, что соединение формулы (I) также является применимым для лечения НСС:

Настоящее изобретение относится к способу лечения гепатоклеточной карциномы, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества соединения формулы (I)

где Κ представляет собой метокси или гидроксильную группу, или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, используемой для лечения гепатоклеточной карциномы.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения в лечении гепатокле- 1 027982 точной карциномы.

Вышеуказанный и другие аспекты, характеристики и преимущества настоящего изобретения будут более понятны из следующего подробного описания, принимаемого в сочетании с сопутствующими чертежами, все из которых даны только в качестве иллюстрации и не являются ограничивающими настоящее изобретение.

На фиг. 1 показаны результаты ίη νίνο оценки соединения примера 1 в модели ксенотрансплантата мышиной гепатокарциномы.

На фиг. 2 показаны результаты ίη νίνο оценки соединения примера 1 в отношении гепатокарциномы, индуцированной химически.

Как используется выше и на всем протяжении описания изобретения, следующие термины, если не указано иначе, необходимо понимать как имеющие следующие значения.

Соединение по изобретению обозначает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

Гепатоклеточная карцинома представляет собой один тип рака печени, происходящего из клеток печени. Повреждение печени, проявляющееся циррозом (рубцевание), является основным фактором риска рака печени. НСС, однако также включает солидную карциному печени в отсутствие цирроза печени.

Пациент включает и человека и других млекопитающих.

Фармацевтически приемлемые соли относятся к относительно нетоксичным аддитивным солям неорганических и органических кислот и аддитивным солям оснований соединения формулы (I). Указанные соли могут быть получены на месте во время окончательного выделения и очистки соединения формулы (I). См., например, 8.М. Вегде, е1 а1., РЬагтасеи1тса1 8аЬв, 1. РЬатт. 8с1., 66, 1-19 (1977).

Фармацевтически эффективное количество обозначает количество соединения или композиции по настоящему изобретению, эффективное в получении желаемого терапевтического эффекта.

Терапия или лечение обозначают облегчение симптомов, устранение причины симптомов или на временной, или на постоянной основе или замедление развития симптомов обозначенного расстройства или состояния.

Один частный вариант осуществления изобретения относится к способу лечения гепатоклеточной карциномы, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества 2-амино-1-этил-7-((3К)-3-гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н[1.8] -нафтиридин-4-она или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой вариант осуществления изобретения относится к соединению 2-амино-1-этил-7-((3К)-3гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н-[1,8]-нафтиридин-4-ону или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении гепатоклеточной карциномы.

Один частный вариант осуществления изобретения относится к способу лечения гепатоклеточной карциномы, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества 2-амино-1-этил-7-((3К)-3-гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н[1.8] -нафтиридин-4-она.

Другой вариант осуществления изобретения относится к соединению 2-амино-1-этил-7-((3К)-3гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н-[1,8]-нафтиридин-4-она для применения в лечении гепатоклеточной карциномы.

Другой частный вариант осуществления изобретения относится к соединению формулы (I), где К представляет собой метокси или гидроксильную группу, или его фармацевтически приемлемой соли для применения для получения лекарственного препарата для лечения гепатоклеточной карциномы.

Другой частный вариант осуществления изобретения относится к 2-амино-1-этил-7-((3К)-3гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н-[1,8]-нафтиридин-4-ону или его фармацевтически приемлемой соли для применения для получения лекарственного препарата для лечения гепатоклеточной карциномы.

Другой частный вариант осуществления изобретения относится к 2-амино-1-этил-7-((3К)-3гидрокси-4-метокси-3 -метилбут-1 -инил)-3 -(1Н-имидазол-2-ил)-1Н-[1,8] -нафтиридин-4-ону для применения для получения лекарственного препарата для лечения гепатоклеточной карциномы.

Специфический аспект изобретения обеспечивает соединение по настоящему изобретению, предназначенное для введения в форме фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит соединение по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

На практике соединение по изобретению можно вводить людям и другим животным посредством перорального или внутривенного введения в стандартной лекарственной форме, в виде смеси с традиционными фармацевтическими вспомогательными веществами.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены как отдельные формы, такие как твердые лекарственные формы, такие как капсулы, саше или таблетки, каждая содержащая заранее определенное количество активного ингредиента, или в виде порошка или гранул; в виде жидкой лекарственной формы, такой как раствор или суспензия в водной жидкости или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа масло-в-воде или

- 2 027982 жидкой эмульсии типа вода-в-масле.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, подходящие для внутривенного введения, могут быть приготовлены в жидких растворах, в частности в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнка или раствор Рингера. Кроме того, композиции могут быть приготовлены в твердой форме и повторно растворены или суспендированы непосредственно перед применением. Также включают лиофилизированные формы. Композиции являются стерильными и включают эмульсии, суспензии, водные и неводные инъекционные растворы, которые могут содержать суспендирующие средства и загустители и антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, которые делают композицию изотоничной и имеющей соответственно установленный рН, с кровью предназначенного реципиента.

Точные уровни дозировки активного ингредиента(ов) в композициях по изобретению могут варьироваться для получения количества активного ингредиента(ов), которое является эффективным для получения желаемого терапевтического ответа для определенной композиции и способа введения для пациента.

Выбранный уровень дозировки для любого определенного пациента, следовательно, зависит от множества факторов, включая желаемый терапевтический эффект, путь введения, желаемую продолжительность лечения, этиологию и тяжесть заболевания, состояние пациента, массу, пол, диету и возраст, тип и эффективности каждого активного ингредиента, скорость абсорбции, метаболизма и/или экскреции и другие факторы.

Общая суточная доза соединения по изобретению, вводимая пациенту в одной или отдельных дозах, может составлять, например, от около 0,001 до около 100 мг/кг массы тела ежедневно и, в частности, 0,01-10 мг/кг/сутки. Процент активного ингредиента в композиции может варьироваться, пока он составляет долю, такую, что может быть получена подходящая дозировка. Композиции лекарственных форм могут содержать такие количества таких их дольных единиц, которые могут использоваться для получения суточной дозы. Очевидно, несколько стандартных лекарственных форм можно вводить примерно в одно и то же время. Дозировку можно вводить настолько часто, насколько необходимо с целью получения желаемого терапевтического эффекта. Некоторые пациенты могут быстро отвечать на более высокую или более низкую дозу и могут обнаруживать существенно более легкое поддержание адекватной дозы. Для других пациентов может быть необходимо проводить длительное лечение с частотой 1-4 дозы в сутки в соответствии с физиологическими требованиями каждого определенного пациента. Само собой разумеется, для других пациентов будет необходимо назначать не более чем одну или две дозы в сутки.

Настоящее изобретение может быть более понятно со ссылками на следующие неограничивающие примеры, которые являются примерами изобретения. Они не должны расцениваться, однако, как ограничивающие широкий спектр изобретения.

Пример 1.

2-Амино-1-этил-7-((3К)-3-гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н-[1,8]нафтиридин-4-он.

Стадия 1. 6-Хлор-2-этиламиноникотиновая кислота.

Раствор 18,0 г (84,4 ммоль) 2,6-дихлорникотиновой кислоты в 180 мл раствора этиламина (70% в воде) перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Затем избыток амина выпаривали при пониженном давлении и добавляли водный раствор уксусной кислоты 10% до осаждения продукта. Бежевое твердое вещество фильтровали в центробежном фильтре, промывали холодной водой и сушили в печи. Получали 10,5 г ожидаемого продукта.

Температура плавления=158-160°С.

Выход=62%.

Стадия 2. 6-Хлор-2-этиламиноникотиноилфторид.

мл (24,8 ммоль) пиридина и 4,2 мл (49,8 ммоль) 2,4,6-трифтортриазина добавляли к суспензии 5,0 г (24,8 ммоль) 6-хлор-2-этиламиноникотиновой кислоты в 125 мл дихлорметана. Смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре и затем фильтровали. Твердое вещество промывали 50 мл дихлорметана и фильтрат промывали дважды 60 мл ледяной воды. Органическую фазу сушили над Ыа₂8О₄ и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Получали 5,01 г продукта в форме оранжевого масла, которое использовали без последующей очистки.

Выход=99%.

Стадия 3. 1-(2-Триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-карбальдегид.

Масляную суспензию 20,8 г гидрида натрия в минеральном масле (50%, 0,52 моль) свободно промывали минеральным маслом путем перемешивания с гексаном 3 раза и суспендировали в 400 мл ΌΜΡ. При перемешивании при комнатной температуре 50,0 г (0,520 моль) имидазол-2-карбальдегида добавляли к суспензии. Через 1,5 ч добавляли 101 мл (0,572 моль) хлорида 2-(триметилсиланил)этоксиметила и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительного часа. Затем к суспензии добавляли избыток воды и реакционную смесь экстрагировали три раза этилацетатом. Органическую фазу сушили над Ыа₂8О₄ и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Сырой материал затем очищали колоночной хроматографией (БСМ) для получения 85,0 г (0,376 моль) δΕΜ-защищенного имидазол-2- 3 027982 карбальдегида.

Выход=72%.

МН+=227,1 (С₁₀Н₁₈Ы₂О₂§1, Мг=226,35).

'Н ЯМР (ДМСО-а₆, 500 МГц): δ 9,83 (с, 1Н), 7,86 (с, 1Н), 7,39 (с, 1Н), 5,75 (с, 2Н), 3,58 (т, 1Н), 0,95 (с, 2Н), 0,02 (с, 9Н).

Стадия 4. [1-(2-Триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил]ацетонитрил.

1,7 3 г (8,84 ммоль) тозилметилизоцианида растворяли в 10 мл ΌΜΕ и охлаждали до -60°С. При указанной температуре сначала добавляли 1,98 г трет-бутоксида калия, затем медленно раствор 2,00 г (8,84 ммоль) 1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-карбальдегида в 5 мл ΌΜΕ. Через 2 ч перемешивания при -60°С реакционной смеси позволяли достичь 0°С и к раствору добавляли 5 мл метанола (123,60 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 24 ч при комнатной температуре и в течение 2 ч при 40°С. Добавляли избыток воды и раствор экстрагировали 3 раза с помощью дихлорметана. Органическую фазу сушили над Ыа₂8О₄, после выпаривания растворителя при пониженном давлении сырой материал очищали колоночной хроматографией с обращенной фазой (вода 0,1 %ТРА/ацетонитрил=80/20 до выхода 0,87 г (0,367 моль) δΕΜ-защищенного имидазолацетонитрила.

Выход=41%.

МН+=238,1 (С₁₁Н₁₉Ы₃О81, Мг=237,38).

'Н ЯМР (ДМСО-а₆, 500 МГц): δ 7,66 (с, 1Н), 7,39 (с, 1Н), 5,53 (с, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 3,55 (т, 2Н), 0,92 (т, 2Н), 0,02 (с, 9Н).

Стадия 5. 3 -(6-Хлор-2-этиламинопиридин-3 -ил)-3 -гидрокси-2-[1 -(2-(триметилсиланилэтоксиметил)1Н-имидазол-2-ил]акрилонитрил.

Добавляли 0,283 г (2,53 ммоль) трет-бутилата калия в небольших количествах к раствору 0°С 0,600 г (2,53 ммоль) [1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил]ацетонитрила в 10 мл безводном ТНР. Смесь перемешивали в течение 45 мин при комнатной температуре и затем снова охлаждали до 0°С. Затем добавляли раствор 0,512 г (2,53 ммоль) 6-хлор-2-этиламиноникотиноилфторида в 10 мл ТНР и среду перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, снова охлаждали до 0°С и добавляли второй эквивалент трет-бутилата калия (0,283 г, 2,53 ммоль). После 2 ч перемешивания при комнатной температуре добавляли 50 мл насыщенного раствора хлорида аммония, рН доводили до 7 с помощью 2н. НС1, затем экстрагировали три раза этилацетатом. Комбинированные органические фазы сушили над Мд§О₄ и растворители выпаривали при пониженном давлении. Сырой материал дополнительно очищали колоночной хроматографией (ЭСМ/метанол=90:10), получая 418 мг (выход=38%) указанного в заголовке соединения.

МН+=421 (С₁₉Н₂₆С1Ы₅О₂81, Мг=419,99).

'Н ЯМР (ДМСО-а₆, 500 МГц): δ 13,35 (с, 1Н), 7,70 (д, 1Н), 7,46 (с, 1Н), 7,23 (с, 1Н), 7,08 (т, 1Н), 6,58 (д, 1Н), 5,59 (с, 2Н), 3,58 (т, 2Н), 3,34 (дкв., 2Н), 1,13 (т, 3Н), -0,03 (3с, 9Н).

Стадия 6. 2-Амино-7-хлор-1-этил-3-[1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил]-1Н[1,8]нафтиридин-4-он.

Добавляли 0,112 г (1 ммоль) трет-бутилата калия в небольших количествах к холодному раствору 0°С 418 мг (1 ммоль) промежуточного продукта, полученного под 1,53-(6-хлор-2-этиламинопиридин-3ил)-3-гидрокси-2-[1-(2-(триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил]акрилонитрила в 5 мл безводного ТНР. Смесь перемешивали в течение 48 ч при комнатной температуре, после чего добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония, рН доводили до 7 с помощью 2н. НС1 и реакционную смесь экстрагировали три раза этилацетатом. Комбинированные органические фазы сушили над Мд§О₄ и растворители выпаривали при пониженном давлении, получая 400 мг указанного в заголовке соединения.

Выход=38%.

МН+=421 (С₁₉Н₂₆С1Ы₅О₂81, Мг=419,99).

'Н ЯМР (ДМСО-а₆, 500 МГц): δ 8,50 (д, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 7,78 (с, 2Н), 7,60 (с, 1Н), 5,49 (с, 2Н), 4,58 (кв., 2Н), 3,57 (т, 2Н), 1,42 (т, 3Н), 0,85 (т, 2Н), -0,03 (3с, 9Н).

Стадия 7. (±)-2-Метилбут-3-ин-1,2-диол.

Коммерчески доступный 0,5 М раствор хлорида этинилмагния в тетрагидрофуране разводили с помощью 200 мл тетрагидрофурана и охлаждали до 0°С. Затем добавляли раствор гидроксиацетона в 200 мл тетрагидрофурана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали и добавляли водный раствор ΝΠ·|Ο. Смесь экстрагировали 3 раза этилацетатом и органические фазы комбинировали, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме (приблизительно 200 мбар). Наконец, 20 г ожидаемого продукта получали в форме коричневого масла, которое использовали без последующей очистки (количественный сырой выход) в рацемической смеси или разделяли на чистые энантиомеры препаративной ВЭЖХ на хиральных колонках ВЭЖХ. С целью получения оптически чистых энантиомеров, соответствующую рацемическую смесь подвергали препаративной хроматографии на хиральной стационарной фазе (колонка СШга1рак АЭ-Н, 250x21 мм, 5 мм) с использованием в качестве подвижной фазы: или СО₂/2-пропанола (70%/30%) со скоростью тока 60 мл/мин при давлении 100 бар или смесью изогексана/этанола (70/30) с 0,3% ТРА и скоростью тока

- 4 027982

120 мл/мин.

После элюции и выпаривания выделяли каждый энантиомер и химическую чистоту и энантиомерную чистоту каждого определяли аналитическими методами, известными специалисту в данной области.

Стадия 8. 2-Амино-1 -этил-7 -((3Κ)-3 -гидрокси-4-метокси-3 -метилбут-1-инил)-3-[1 -(2триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил] -1Н-[ 1,8]нафтиридин-4-он.

В наполненной аргоном микроволновой реакционной колбе получали 500 мг (1,2 ммоль) 2-амино-7хлор-1 -этил-3-[1 -(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил] -1Н-[1,8]нафтиридин-4-она, 204 мг (1,8 ммоль) (3К)-1-метокси-2-метилбут-3-ин-2-ол, 84 мг (0,120 ммоль) дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия(П), 30 мг (0,16 ммоль) йодида меди(1), 2 мл ΌΜΡ (дегазированного), 2 мл триэтиламина (дегазированного) и облучали в микроволнах таким образом, что реакционную смесь выдерживали при 120°С в течение 24 ч. Растворители выпаривали и твердое вещество ресуспендировали в 3 мл ΌΜΡ и фильтровали. Затем фильтрат очищали ВЭЖХ, получая 430 мг (0,702 ммоль) ТРА соли указанного в заголовке соединения.

Выход=59%.

МН+=498,2 (С₂₅Н₃₅Ы₅О₄§1, Мг=497,67).

'Н ЯМР (ДМСО-а₆, 500 МГц): δ 8,39 (д, 1Н), 7,95 (с, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 7,60 (с, 2Н), 7,48 (д, 1Н), 5,25 (с, 2Н), 4,50 (широкий сигнал, 2Н), 3,52-3,40 (широкий сигнал, водный пик + 4Н), 1,48 (с, 3Н), 1,25 (т, 3Н), -0,12 (3с, 9Н).

Стадия 9. 2-Амино-1 -этил-7 -((3Κ)-3 -гидрокси-4-метокси-3 -метилбут-1-инил)-3 -(1Н-имидазол-2-ил)1Н-[1,8]нафтиридин-4-он.

240 мг (0,4 ммоль) 8ЕМ защищенного нафтиридинона 1,8 растворяли при 0°С в 1,2 мл ТРА и 1,2 мл ЭСМ. Раствор выдерживали при 3-5°С в течение ночи, пока аналитическая ВЭЖХ не показывала полное депротектирование нафтиридинона. Раствор нейтрализовывали путем добавления избытка водного раствора ЫаНСО₃. Затем смесь три раза экстрагировали этилацетатом. Комбинированные органические фазы сушили над Мд8О₄ и растворители выпаривали при пониженном давлении. Полученный таким образом сырой материал очищали на силикагеле (ЭСМ:МеОН=4:1), получая 143 мг (количественный выход) незащищенного указанного в заголовке соединения.

МН+=368,2 (С₁₉Н₂₁Ы₅О₃, Мг=367,41) 'II ЯМР (ДМСО-а₆, 500 МГц): δ 13,15 (с, 1Н), 11,55 (шир.с, 1Н), 8,59 (д, 1Н), 8,10 (шир.с, 1Н), 7,47 (д, 1Н), 7,25 (с, 1Н), 7,02 (с, 1Н), 5,85 (с, 1Н), 4,58 (широкий сигнал, 2Н), 3,51-3,370 (широкий сигнал, водный пик + 4Н), 1,48 (с, 3Н), 1,25 (т, 3Н).

Κΐ (аналитическая ВЭЖХ): 4,806 мин.

Пример 2.

2-Амино-7-((3К)3,4-дигидрокси-3 -метилбут-1-инил)-1-этил-3 -(1Н-имидазол-2-ил)-1,8-нафтиридин4(1Н)-он.

Стадия 1. 2-Амино-1-этил-7 -(3,4-дигидрокси-3 -метилбут-1 -инил)-1 -этил-3-[1 -(2триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил] - 1,8-нафтиридин-4(1Н)-он.

Следуя методике в соответствии со стадией 8 примера 1, с использованием промежуточного продукта, описанного на стадии 6 примера 1 (2-амино-7-хлор-1-этил-3-[1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)1Н-имидазол-2-ил-1,8-нафтиридин-4(1Н)-он) и стадии 7 примера 1 ((±)-2-метилбут-3-ин-1,2-диол), получали указанное в заголовке соединение.

МН+=354,16 (С₁₈Н₁₉Ы₅О₃, Мг=353,38).

Κΐ (аналитическая ВЭЖХ): 4,48 мин.

Стадия 2. 2-Амино-1-этил-7-((3К)3,4-дигидрокси-3 -метилбут-1-инил)-1 -этил-3-[1 -(2триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-имидазол-2-ил] - 1,8-нафтиридин-4(1Н)-он.

Рацемическое соединение, полученное на стадии 1, подвергали препаративной хиральной 8РС очистке с использованием методов, Вегдег ргер 8РС, УФ-детекции при 230 нм, стационарной фазы СПта1рак 1С 20x250 нм 5 мкм, подвижной фазы 65%/35% СО₂/(МеОН+а.5% изопропиламин), 50 мл/мин, 100 бар), приводящей к разделению энантиомеров Κ и 8.

Хиральную чистоту контролировали с использованием хиральных 8РС методов, Вегдег 8РС, УФ детекции при 210 нм, стационарной фазы СЫта1рак АЭ-Н (250 ммх4,6) 5 мкм, подвижной фазы 65/35% СО₂/(изопропанол+0,5% изопропиламин), 2,4 мл/мин, 100 бар. Κ энантиомер (Κΐ=6,9 мин, энантиомерная чистота=97,9%).

Стадия 3. 2-Амино-7 -((3К)3,4-дигидрокси-3 -метилбут-1-инил)-1 -этил-3 -(1Н-имидазол-2-ил)-1,8нафтиридин-4(1Н)-он.

Следуя методике по стадии 9 примера 1, соединение примера 2 выделяли в виде желтого порошка.

МН+=354,16 (С₁₈Н₁₉М₅О₃, Мг=353,38).

Κΐ=0,77 мин.

'II ЯМР (ДМСО-а₆, 400 МГц): δ 13,15 (с, 1Н), 11,55 (шир.с, 1Н), 8,55 (д, 1Н, 1=6,4 Гц), 8,10 (шир.с, 1Н), 7,47 (д, 1Н, 1=6,4Гц), 7,15 (с, 1Н), 7,02 (с, 1Н), 5,6 (с, 1Н), 5,1 (т, 1Н, 1=6,4Гц) 4,53 (шир.д, 2Н), 3,49 (дд, 1Н, 1=6,4; 10,4 Гц), 3,41 (дд, 1Н, 1=6,4; 10,4 Гц), 1,48 (с, 3Н), 1,27 (т, 3Н, 1=7,2 Гц).

- 5 027982

Хиральную чистоту контролировали с использованием хиральных 8РС методов, Вегдег 8РС, УФдетекции при 230 нм, стационарной фазы СЫта1рак ΛΌ-Η (250x4,6 мм) 5 мкм, подвижной фазы 60/40% СО₂/(изопропанол+0,5% изопропиламин), 2,4 мл/мин, 100 бар. К энантиомер (Κΐ=8,37 мин, энантиомерная чистота=99,2%).

Аналитический метод ЖХ/УФ/МС определения времени удержания (Κΐ) (ВУ).

Колонка: Мегк СЬтотоШЬ регГогтаисе КР18е, 100x4,6 мм, 3,5 мкм.

Растворитель А: Н₂О/ТРА (99,9/0,1).

Растворитель В: АСЫ/ТРА (99,9/0,1).

Скорость тока: 2 мл/мин.

Градиент (А/В): 98/2 (0 мин) до 0/100 (8 мин) до 98/2 (10 мин).

Определение: 254,16 нМ.

ЯМР.

'Н ЯМР спектры получали с использованием ЯМР спектрометров Вгикег 250, 300, 400 или 600 МГ ц в ДМСО-й₆, с использованием пика ДМСО-й₅ в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги δ выражали в частях на миллион (ч./млн).

Наблюдаемые сигналы выражали, как указано далее: с=синглет; д=дублет; т=триплет; кв=квадриплет; м=мультиплет или большой синглет; шир=широкий; Н=протон.

Температуры плавления.

Температуру плавления измеряли с помощью стенда Кофлера.

Фармакологические тесты.

I. Оценка соединения примера 1 ίη νίίτο.

В заявке '145 описано, что соединения примеров 1 и 2 ингибируют ТК активность рекомбинантного ΥΕΟΡΚ-3 и аутофосфорилирование в НЕК клетках с ИК₅₀ около 25 и 47 нМ соответственно. В тех же анализах соединение примера 1 проявляет меньше активности в отношении УЕОРК-2 (90-140 нМ) и УЕОРК-1 (>1 мкМ). С использованием первичных лимфоидных клеток авторы подтвердили высокую активность в отношении УЕОРК-3, так как он ингибирует УЕОРС- и νΕΟΡΌ-индуцированную пролиферацию с ИК₅₀ около 10-15 нМ. Более того, авторы продемонстрировали, что соединение примера 1 является высокоселективным в отношении УЕОРК-3 по сравнению со всеми другими тестируемыми киназами (85 различных киназ) и с 107 рецепторами, ферментами и ионными каналами.

II. Оценка соединения примера 1 ίη νίνο в модели ксенотрансплантата мышиной гепатокарциномы.

Оценивали ίη νίνο противоопухолевую эффективность соединения примера 1 в модели ортотопического ксенотрансплантата клеточной линии НерО2. Клетки НерО2 вводили в печень мышей 8СГО (полученных от АТСС) и мышей рандомизировали на 2 группы через 14 дней после инъекции клеток: контрольная группа, которая получала носитель, и группа, получающая соединение примера 1. Лечение проводили один раз в день в количестве 100 мг/кг в метилцеллюлозе 1\уеен в качестве носителя.

Размер опухоли измеряли посредством взвешивания левой доли с опухолью в день 28. Лечение соединением примера 1 достоверно снижало среднюю массу доли печени, несущей опухоль, в день 28 после инъекции клеток на 34% (р=0,001, ΐ-критерий Стьюдента). Нормальную долю печени также измеряли и вычитали из доли мыши с опухолью. В таком случае соединение примера 1 снижало массу опухоли на 62% (см. фиг. 1).

III. Оценка эффекта соединения примера 1 ίη νίνο в отношении химически индуцированной гепатокарциномы у мышей.

ΌΕΝ (Х-диэтинитрозамин)-индуцированная модель на мышах была утверждена в качестве характерной модели человеческой НСС Аи еΐ а1. Т Сансе!· Кек. С1ш. Опсо1. (2009), 135, 969-981; С4шанд еΐ а1. Са^с^ηοдеηе5^5 (2000), 21; 331-335).

Начало развития опухоли достигали посредством разовой интраперитонеальной инъекции 10 мг/кг Ν-диэтилнитрозамина (ΌΕΝ) у самцов мышей С3Н (СЬат1ек пмег 1аЬога!опе5 Ргапсе) в возрасте 5 недель.

У мышей развивались опухоли в печени начиная с 7-го месяца после введения ΌΕΝ, но частота достигала 100% на 12-м месяце. Соединение примера 1 ежедневно вводили Р.О. (перорально) после суспендирования в метилцеллюлозе дважды, между 10- и 12-м месяцами после введения ΌΕΝ.

Массу тела оценивали каждую неделю во время лечения и через 12 месяцев. Мышей умерщвляли посредством большой дозы пентобарбитала натрия и печени удаляли и взвешивали. Количество опухолей на печень подсчитывали и объем опухоли измеряли циркулем. Объем опухоли ν рассчитывали с использованием формулы ν=0.52χ;Γχδ. где а представляет собой наименьший диаметр опухоли и Ъ наибольший диаметр опухоли.

Позднее лечение соединением примера 1 предотвращало образование новых локусов и полностью блокировало развитие опухоли при сравнении с теми же параметрами на 10-й месяц. В сравнении с группой носителя, соединение примера 1 снижало на 50% количество опухолей/печень и на 85% общий объем опухоли. Оно также снижало и почти нормализовало общую массу печени, (см. фиг. 2).

Claims (10)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение соединения формулы (I) где К представляет собой метокси или гидроксильную группу, или его фармацевтической соли для получения лекарственного средства для лечения гепатоклеточной карциномы.
2. 2. Применение по п.1, где К представляет собой метоксигруппу.
3. 3. Применение по п.1, где К представляет собой гидроксильную группу.
4. 4. Применение по любому из пп.1 или 2, где соединение представляет собой 2-амино-1-этил-7((3К)-3-гидрокси-4-метокси-3-метилбут-1-инил)-3-(1Н-имидазол-2-ил)-1Н-[1,8]-нафтиридин-4-он.
5. 5. Применение соединения по любому из пп.1 или 3, где соединение представляет собой 2-амино-7((3К)-3,4-дигидрокси-3 -метилбут-1 -инил)-1 -этил-3 -(1 Н-имидазол-2-ил)-1,8-нафтиридин-4( 1 Н)-он.
6. 6. Применение соединения формулы (I) где К представляет собой метокси или гидроксильную группу, или его фармацевтически приемлемая соль для лечения гепатоклеточной карциномы.
7. 7. Применение соединения по п.6, где К представляет собой метоксигруппу.
8. 8. Применение соединения по п.6, где К представляет собой гидроксильную группу.
9. 9. Применение соединения по любому из пп.6 или 7, где соединение представляет собой 2-амино-1этил-7-((3К)-3 -гидрокси-4-метокси-3 -метилбут-1 -инил)-3 -(1 Н-имидазол-2-ил)- 1Н-[1,8]-нафтиридин-4-он.
10. 10. Применение соединения по любому из пп.6 или 8, где соединение представляет собой 2-амино7-((3К)-3,4-дигидрокси-3 -метилбут-1 -инил)-1 -этил-3 -(1 Н-имидазол-2-ил)- 1,8-нафтиридин-4(1Н)-он.

    Масса опухоли+доли печени (мг)